专利名称：化学方法和新结晶形式的制作方法
技术领域：
本发明涉及以结晶盐形式存在的β2肾上腺素能激动剂的制备。具体地说，本发明涉及以下定义的化合物(I)结晶盐的制备。更具体地讲，本发明涉及用于制备以下定义的化合物(Ia)结晶单盐酸盐的方法。本发明也涉及化合物(Ia)单盐酸盐的新结晶形式(多晶型)。
β2肾上腺素能受体激动剂被认为是治疗肺部疾病例如气喘和慢性阻塞性肺疾病(包括慢性支气管炎和肺气肿)的有效药物。β2肾上腺素能受体激动剂也被认为用于治疗早产，并且潜在地用于治疗神经系统疾病和心血管疾病。
国际专利申请WO01/42193和相应的美国专利6576793公开了式(I)的新化合物 其中*C和**C的立体化学尤其可为(R)和(R)。该化合物可以更具体地由式(Ia)表示 化合物(Ia)可以变化地指化学名N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺、N-[3-[(1R)-1-羟基-2-[[2-[4-[((2R)-2-羟基-2-苯基乙基)氨基]苯基]乙基]氨基]乙基-6-羟基苯基]-甲酰胺和(α-R)-3-甲酰氨基-4-羟基-(α-[[[p-(N-((2R)-羟基-苯乙基))-氨基-苯乙基]氨基]甲基苄基醇。在CAS格式中化合物(Ia)命名为N-[2-羟基-5-[(1R)-1-羟基-2-[[2-4-[[(2R)-2-羟基-2-苯基乙基]氨基]苯基]乙基]氨基]乙基]苯基]-甲酰胺。
WO01/42193和美国专利6576793公开了化合物(Ia)为有效β2肾上腺素能受体激动剂。
WO01/42193和美国专利6576793描述了按照以下反应方案作为立体异构体混合物的化合物(Ia)的制备，即其中*C上的立体化学为(RS)，**C上的立体化学为(RS)方案1
其中Bn表示苄基保护基团。
美国专利申请10/627555和相应的国际公开申请WO04/011416描述了化合物(Ia)的结晶二盐酸盐和用于制备所述盐的方法。在所述申请中，按照以下反应方案2制备化合物(Ia)
方案2 在方案2中所采用的缩写具有以下含义NaHMDS六甲基二硅氮烷钠THF四氢呋喃
DMPU1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)嘧啶酮TBDMSCI叔丁基二甲基甲硅烷基氯DMF二甲基甲酰胺DMSO二甲基亚砜TREAT HF三乙胺三氢氟酸盐方案2中化合物的编号依据WO 04/011416，但是应意识到方案2中的化合物1相当于在此的化合物(Ia)。
按照WO04/011416，通过使化合物1溶解于极性溶剂中以形成第一溶液并且加入盐酸以形成第二溶液，从中通过结晶形成二盐酸盐，制备化合物1的二盐酸盐。
WO2004/106279(要求美国专利申请系列号60/473423的优先权)描述了N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺单盐酸盐的结晶形式。
WO2004/106279尤其描述了以下用于制备化合物1结晶单盐酸盐的方法。
i)向溶解于极性溶剂例如异丙醇或水中的活性化合物1加入约0.9-约1摩尔当量的盐酸水溶液；ii)将pH约5-约6的摩尔过量的无机氯化物水溶液加入溶于极性水溶性溶剂中的活性化合物1中。氯离子的合适来源为氯化铵，合适的极性溶剂为异丙醇。例如通过使化合物1溶于异丙醇，加入氯化铵水溶液并使溶液室温下放置过夜，可形成结晶单HCl盐。通过过滤和干燥可分离结晶产物。
iii)自相应二盐酸盐的水淤浆(该淤浆可以通过加入水形成)加入到化合物1的二HCl盐中。
iv)重结晶化合物1的盐酸盐，每摩尔化合物1具有1-2当量氯。
我们现已发现用于制备化合物(I)的单盐酸盐尤其是化合物(Ia)的单盐酸盐，最优选化合物(Ia)的结晶单盐酸盐的改进方法。
从以上应意识到式(I)化合物包括两个不对称中心，即在式(I)中指定为*C和**C的碳原子上。此处所指的式(I)化合物包括以实质上纯形式或以任何比例混合物存在的在*C和**C两者的(S)和(R)对映体两者。因此，在*C和**C的立体化学可为(RS)和(RS)、(R)和(R)、(R)和(S)、(S)和(R)或(S)和(S)。
下文所指的化合物(I)应理解为包括具体化合物(Ia)，除非另外指明。
因此，在本发明的第一个方面提供用于制备化合物(I)单盐酸盐的方法(A)，所述方法包括以下步骤Aa)使化合物(I)或化合物(Ia)的保护形式(下文分别为化合物(II)和(IIa))与弱酸接触以实现选择性质子化 其中P1表示羟基保护基团，P2和P3每一个独立表示氢或羟基保护基团；Ab)使(a)的产物与氯离子源接触以实现阴离子交换；Ac)使(b)的产物脱保护以除去P1，并且必要时除去P2和P3；Ad)分离作为单盐酸盐的化合物(I)或(Ia)；并且任选地Ae)化合物(I)或(Ia)结晶或重结晶。
在本发明的优选实施方案中提供了用于制备化合物(Ia)单盐酸盐，尤其是用于制备化合物(Ia)结晶单盐酸盐的所述方法。
羟基保护基团P1、P2和P3可以采用本领域熟知的原理选自广泛范围的已知保护基团。羟基保护基团P1的实例包括芳基烷基例如苄基。当P2和P3中任何一个或两者表示保护基团时，这些可以为可在也不除去P1的条件下被选择性除去的基团。因此，P2和P3每一个可以为例如甲硅烷基如三烷基甲硅烷基例如叔丁基二甲基甲硅烷基。在本发明的一个实施方案中，P1表示保护基团，P2和P3两者表示氢。是否采用保护基团和如果这样的话保护基团的选择处于技术人员的指示范围内并且不需过度实验就可以达到。
本领域技术人员应意识到化合物(I)和(Ia)包含两个碱性氮原子，因此具有在两者形成盐的潜力。为直接得到单盐酸盐，即通过化合物(II)或(IIa)与盐酸反应，所述反应必须小心控制以得到正确的化学计量并避免形成例如二盐酸盐。
我们已经发现用弱酸例如乙酸实现初始质子化导致仅有一个氮原子(更加碱性的氮原子)的选择性质子化，在阴离子交换后，形成化学计量准确的单盐酸盐。本发明方法也具有不使用强酸可制备盐酸盐的有利条件。合乎需要的是避免使用强酸，因为这可导致本专利化合物的脱甲酰基反应。
在本方法的步骤(Aa)中，式(II)或(IIa)化合物可以与弱酸接触。这个步骤可以便利地在有机溶剂例如酮如2-丁酮(甲基乙基酮)或二乙基酮或者与水不混溶的醇例如1-戊醇中实现。可采用的弱酸包括例如乙酸、2-甲氧基苯甲酸或4-甲氧基苯甲酸，优选乙酸。所述弱酸可以例如具有4-5的pKa。这个步骤可以便利地在略微升高的温度下，例如在约25℃-约50℃的温度下实现。
步骤(Ab)可以便利地实现而不需分离来自步骤(Aa)的产物。因此，例如得自步骤(Aa)的溶液可以与氯离子源接触，例如采用氯化钠水溶液。这个步骤也可以便利地在约25℃-约50℃的温度下实现。在这个阶段，中间体产物可采用常规方法分离以提供化合物(II)或(IIa)的单盐酸盐。这个产物可以结晶形式得到。如果必要，结晶可通过标准方法例如搅拌、冷却、刮擦或引晶促进。
步骤(Ac)的(II)或(IIa)的脱保护可通过常规方法实现。因此，当P2和P3中的一个或两者表示甲硅烷基时，这个基团可例如在有机溶剂例如甲醇中，任选地在与另外的溶剂例如二乙基酮、甲基乙基酮或乙酸正丁酯或者在溶剂例如四氢呋喃中的三乙胺三氟化物的混合物中采用氟化铯除去。例如通过采用钯或铂催化剂如Pd/C氢化，便利地在有机溶剂例如N-甲基吡咯烷酮中可以除去保护基团P1。
按照本发明制备的化合物(I)或(Ia)单盐酸盐可通过常规方法分离。有利地化合物(Ia)的所述单盐酸盐可通过自有机物水溶液中沉淀以晶体形式得到。在具体的实施方案中，结晶(Ia)单盐酸盐可自含有N-甲基吡咯烷酮和异丙醇(优选1∶1)混合物的有机物溶液，通过加热所述溶液至约60℃-约80℃的温度，加入水，然后使生成的水溶液与另外的异丙醇接触得到。在加入另外的异丙醇期间，温度被冷却，开始为约15℃-约25℃，随后为约0℃-约10℃。
化合物(Ia)单盐酸盐的重结晶可通过使所述化合物悬浮或溶解于合适的溶剂例如工业用甲醇变性酒精或甲醇与水的混合物中实现。如果必要，生成的悬浮液或溶液可加热至例如约60℃-约80℃的温度。结晶可以常规方法启动，例如冷却和/或引晶。
在最初实验中我们发现结晶化合物(Ia)单盐酸盐不仅以在WO2004/106279(下文为形式1)中描述和表征的相同结晶形式，而且以在此称作形式2的新结晶形式得到。我们进一步发现形式2结晶是比形式1结晶更加热力学稳定的形式。
另外，我们已发现通过淤浆化，例如通过使形式1和形式2结晶的混合物悬浮于溶剂例如含水工业用甲醇变性酒精或甲醇中并在约10℃-约50℃的温度下搅拌延长的时间例如多达10天，或者通过包括伴随温度循环的重结晶方法，可将化合物(Ia)单盐酸盐的形式1和形式2结晶混合物转变为实质上纯的形式2结晶。这样的方法可用于提供形式2材料的晶种。
因此，在方法A的具体实施方案中，所得到单盐酸盐的重结晶可通过使(Ia)单盐酸盐的悬浮液受到重复的加热和冷却循环实现。在约50℃-约60℃的温度下可以实现加热，在约15℃-25℃的温度下可以实现冷却。所述溶液或悬浮液可在每阶段加热和/或冷却后老化。加热和冷却步骤可以重复几个循环，例如2-5个循环。
结晶(Ia)单盐酸盐的形式1和形式2可以采用在下文描述的差示扫描量热分析、X-射线粉末衍射和/或红外光谱法区别。已发现结晶(Ia)单盐酸盐的形式2比形式1更加热力学稳定。
因此本发明也提供以(形式2)形式存在的结晶(Ia)单盐酸盐(即结晶N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺单盐酸盐)，其通过差示扫描量热痕量法表征，它显示低于约125℃不存在可辨别的吸热特征，在约130℃-约180℃显示两个或更多个微小吸热事件并且在约229℃显示明显吸热热流开始。例如，所述微小吸热事件可发生在约133℃和约151℃下；另外，另一个微小吸热事件可发生在约170℃下。
形式2结晶(Ia)单盐酸盐也可通过红外光谱表征。因此，当采用配备有PerkinElmer Universal ATR(衰减全反射)取样辅助设备的PerkinElmer Spectrum One FT-IR光谱仪在4000-650cm-1的波长范围记录红外吸收光谱时，形式2结晶(Ia)单盐酸盐在约663，698，747，764，788，809，827，875，969，995，1024，1056，1081，1101，1212，1294，1371，1440，1520，1543，1596，1659，3371和3552cm-1给出具有明显吸收谱带的红外吸收光谱。
形式2结晶(Ia)单盐酸盐也可例如如在下文
图1和2中那样通过X-射线粉末衍射表征。
在仍然另一个实施方案中，本发明提供以实质上纯的形式存在的形式2结晶(Ia)单盐酸盐。在此使用的术语“实质上纯的”意指其中多于50％重量以形式2存在，适当地至少75％重量以形式2存在，例如至少80％，适当地至少85％，优选地至少90％重量的结晶(Ia)单盐酸盐。
形式2结晶(Ia)单盐酸盐可通过例如在本发明方法的步骤(e)中控制(Ia)单盐酸盐的结晶或重结晶以实质上纯的形式得到。通常合乎需要的是采用上述温度循环实现结晶。
因此在本发明另一方面也提供用于得到形式2结晶(Ia)单盐酸盐(如在此定义)的方法(B)，所述方法包括Ba)通过使所述单盐酸盐与所述溶剂接触并在约60℃-约70℃例如约65℃下加热，在含水有机溶剂中形成N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺单盐酸盐的混合物；Bb)调整所述混合物的温度为约52℃-约58℃，例如约55℃；Bc)将所述混合物用形式2结晶引晶；Bd)使所述混合物冷却至约15℃-25℃的温度；Be)将所述混合物加热至约47℃-约52℃，例如约50℃；Bf)重复步骤Bd)和Be)以得到要求的形式2。
在以上方法的步骤Ba)中，含水有机溶剂可以为例如醇水溶液如甲醇水溶液或工业用甲醇变性酒精水溶液。在具体温度范围加热时，所述混合物应在有机溶剂中形成溶液。如果在这个步骤必要或者要求，可以使溶液澄明，例如通过过滤除去杂质。
在步骤Bc)中，所述引晶可用如以上描述的那样制备的结晶材料实现。引晶后形成悬浮液。在每一阶段加热和/或冷却后混合物可以老化。老化时间可以例如为约0.25小时-约3.00小时。加热和冷却步骤Bd)和Be)可以重复几个循环，例如2-5个循环。因此，例如(Ia)单盐酸盐的溶液或悬浮液开始可加热至约60℃-约70℃例如65±2℃，冷却至50℃-60℃例如55±2℃，引晶，老化约30分钟，然后经约2小时冷却至约20℃。在随后的循环中所述溶液或悬浮液可加热至约50℃并冷却至约10℃。
作为用于制备形式2的原料的N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺单盐酸盐可例如通过以上方法A的方法或者如在WO04/011416中描述的那样制备。
其中P2和P3两者表示氢的式(II)或(IIa)化合物可自相应的式(III)化合物得到。
其中P1和P3如对化合物(II)那样定义，P2’为羟基保护基团。P3’可以选自本领域已知的羟基保护基团，例如甲硅烷基如叔丁基二甲基甲硅烷基。应该意识到P1、P2’和P3应经选择以至于P2’和P3可在也不除去P1的条件下除去。
当P2’表示叔丁基二甲基甲硅烷基时，这个基团可便利地在有机溶剂例如甲醇、任选地与另外的溶剂例如二乙基酮、甲基乙基酮或乙酸正丁基酯的混合物中采用氟化铯除去。
应该理解当要求得到化合物(Ia)时，要求在这个阶段和下文描述的阶段中采用合适的手性中间体。因此结构(III)、(IV)和(V)应理解为描述各手性形式及其混合物。
通过使化合物(IV)(其中Hal为卤素离去基团例如溴，P2’为如对式(III)定义)与化合物(V)(其中P3为如对式(III)定义)或其盐例如氢溴酸盐反应，可以得到化合物(III) (IV)和(V)的反应可以便利地在碱例如碳酸钾存在下和在溶剂例如N，N-二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷酮中实现。
化合物(IV)和(V)可以在溶剂例如N，N-二甲基乙酰胺或二甲基亚砜中，通过加入碳酸钾和氢氧化钠或碘化钠并加热至约90℃-约140℃的温度偶合以形成化合物(III)，该化合物可以进一步反应而不须分离。
通过2-(4-氨基苯基)乙胺与氧化苯乙烯偶合，可以得到化合物(V)。
应该意识到为制备化合物(Ia)，应采用正确手性形式的化合物(V)。这可通过在以上反应中使用(R)-氧化苯乙烯制备。
任选地作为盐提供的胺可以首先与约1-约1.2当量的具有大于约18的pKa值的碱反应，以使4-氨基和加入到胺反应产物的(R)-氧化苯乙烯实质上去质子化。有用的碱性化合物包括双(三甲基甲硅烷基)氨基钠，或者称作六甲基二硅氮烷钠(NaHMDS)、二异丙基氨基锂和正丁基锂。反应优选在包括极性非质子溶剂例如1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)嘧啶酮(DMPU)的溶剂系统中进行。非质子极性溶剂的另外实例包括二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、N，N-二甲基乙酰胺、四甲基乙二胺和六甲基磷酰胺。水提取后，通过加入盐酸水溶液或氢溴酸水溶液，偶合反应的产物可以自溶剂例如异丙醇中作为盐例如盐酸盐或氢溴酸盐结晶。结晶方法有效地将要求的产物与反应期间形成的副产物分离开来。可以用10N氢氧化钠水溶液重新溶解所述盐酸盐以提供2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙胺(化合物(V))。然而所述氢溴酸盐可直接用于下一步。
在以上用于合成化合物(V)的方法中，通过(S)-氧化苯乙烯替代(R)-氧化苯乙烯，可制备相应的(S)立体异构体2-[4-((S)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙胺。
通过本领域已知方法可制备式(IV)化合物。因此，如在美国专利6268533B1和在R.Hett等，Organic Process Research and Development，1998，2，96-99描述的那样，或者采用与Hong等，Tetrahedron Ltt.，1994，35，6631描述的类似方法，或者类似于在美国专利5495054中描述的那些方法，可以制备例如其中P2为氢的式(IV)化合物。通过标准方法，例如通过加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(TBDMS-C1)并且溶于合适的溶剂例如二氯甲烷中，可以引入保护基团P2。
另一方面，本发明提供用于预防或治疗β2肾上腺素受体激动剂指征的哺乳动物例如人的临床症状的方法，所述方法包括给予治疗有效量的形式2结晶(Ia)单盐酸盐。具体地讲，本发明提供这样的方法用于预防或治疗与可逆性气道阻塞有关的疾病例如气喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、呼吸道感染或上呼吸道疾病。
或者，也提供用于医学治疗，具体地讲用于预防或治疗β2肾上腺素受体激动剂指征的哺乳动物例如人的临床症状的形式2结晶(Ia)单盐酸盐。具体地讲，提供用于预防或治疗与可逆气道阻塞有关的疾病例如气喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、呼吸道感染或上呼吸道疾病的形式2结晶(Ia)单盐酸盐。
本发明也提供形式2结晶(Ia)单盐酸盐在制备用于预防或治疗β2-肾上腺素受体激动剂指征的临床症状，例如与可逆性气道阻塞有关的疾病如气喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、呼吸道感染或上呼吸道疾病的药物中的用途。
达到治疗效果需要的形式2结晶(Ia)单盐酸盐的量当然会随给药途径、所治疗的患者和受治疗的具体病症或疾病而变化。本发明化合物可以通过吸入给予0.0005mg-1mg的剂量，优选0.001mg-0.1mg，例如0.005mg-0.05mg。成年人剂量范围一般为每天0.0005mg-0.5mg，例如每天0.0005-0.1mg，便利地每天0.001mg-0.05mg，例如0.005mg-0.05mg。
尽管能够单独给予形式2结晶(Ia)单盐酸盐，优选地它作为药用制剂呈现。
因此，本发明另外提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和药学上可接受的载体或赋形剂及任选一种或更多种其它治疗成分的药用制剂。
在下文，术语“活性成分”意指形式2结晶(Ia)单盐酸盐或衍生于所述结晶形式的化合物(Ia)形式。
所述制剂包括那些适合于口服、非肠道(包括皮下、皮内，肌内、静脉内和关节内)、吸入(包括可通过各种类型计量剂量的加压气雾剂、喷雾器或吹入器产生的细小颗粒粉尘或雾)、直肠和局部(包括皮、颊、舌下和眼内)给药的那些制剂，尽管最合适的途径可以依例如接受者的症状和病症而定。所述制剂可以便利地以单位剂型呈现并且可通过药学领域熟知的任何方法制备。所有方法包括使所述活性成分与构成一种或更多种辅助成分的载体结合。通常，所述制剂通过使所述活性成分与液体载体或细碎固体载体或两者均匀和紧密地结合，然后如果必要，将所述产物成形为要求的制剂制备。
用于通过吸入局部传递至肺的干燥粉末组合物可例如以如明胶胶囊和药筒，或如用于吸入器或吹入器的层压铝箔泡罩呈现。粉末混合物制剂通常包含用于吸入本发明化合物的粉末混合物和合适的粉末基质(载体/稀释剂/赋形剂物质)例如单糖、二糖或多糖(例如乳糖或淀粉)。使用乳糖为优选。粉末混合物制剂也可以包含三元剂例如糖酯如纤维素二糖八乙酸酯、或者硬脂酸盐例如硬脂酸镁或硬脂酸钙。
每一个胶囊或药筒通常可包含任选地与另一种治疗活性成分组合的20μg-10mg的所述活性成分。或者，本发明化合物可不含赋形剂呈现。制剂的包装可以适用于单位剂量或多剂量传递。在多剂量传递情况中，所述制剂可预先计量(例如在Diskus，参见GB 2242134，美国专利6632666、5860419、5873360和5590645或Diskhaler，参见GB2178965、2129691和2169265，美国专利4778054、4811731、5035237)或在使用中计量(例如在Turbuhaler，参见EP 69715或在美国专利6321747中描述的装置)。单位剂量装置的实例为Rotahaler(参见GB2064336和美国专利4353656)。所述Diskus吸入装置含自沿着其长度具有大量彼此隔开凹处的基底片材形成的长条和密封地但可剥离地封接到上面以限定多个容器的盖片材，每一个容器其中具有含有优选地与乳糖结合的活性成分的可吸入制剂。优选地，所述条足够柔软以卷绕到辊上。所述盖片材和基底片材优选地具有彼此不封接的铅制末端部分并且至少一个所述铅制末端部分被制成连接于卷绕装置。而且，优选地所述基底与盖片材之间的密封在其整个宽度延伸。所述盖片材可优选地在长度方向自所述基底片材的第一个末端剥离。或者，如果要求，所述制剂可与一种或更多种其他治疗药物一起呈现于吸入装置中，其中各治疗药物可同时给予但分开贮存(对三组分组合或者全部或者部分分开贮存)，例如在分开的药用组合物中，例如在WO03/061743中描述的那样。
用于通过吸入局部传递至肺的喷雾组合物可例如配制成水溶液或悬浮液或自加压容器例如采用合适的液化抛射剂的计量剂量吸入器传递的气溶胶。适用于吸入的气溶胶组合物可为悬浮液或溶液中任何一种并且通常包含任选地与另一种治疗活性成分和以下合适的抛射剂组合的活性成分，例如氟碳化合物或含氢氯氟烃或它们的混合物，具体地为氢氟烷，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷，尤其是1，1，1，2-四氟乙烷、1，1，1，2，3，3，3-七氟正丙烷或它们的混合物。二氧化碳或其它合适的气体也可以用作抛射剂。气溶胶组合物可以不含赋形剂或者可以任选地含另外的本领域熟知的制剂赋形剂例如表面活性剂如油酸或卵磷脂和共溶剂例如醇类。加压制剂一般应保留在用阀门(例如计量阀)密封并固定到提供有接口管的致动器的罐(例如铝罐)中。
用于通过吸入给予的药物合乎需要地具有受控制的粒度。吸入到支气管系统中的最佳粒度通常为1-10μm，优选2-5μm。当吸入达到小气道时具有高于20μm粒度的颗粒通常太大。为达到这些粒度，可通过常规方法例如通过微粉化减小产生的活性成分颗粒大小。可通过空气分粒或者筛分分离要求的部分。优选地所述颗粒为结晶。当采用赋形剂例如乳糖时，所述赋形剂的粒度通常应比所吸入的本发明药物大得多。当所述赋形剂为乳糖时，它一般地应作为磨碎的乳糖呈现，其中不多于85％的乳糖颗粒应具有60-90μm的MMD并且不少于15％应具有小于15μm的MMD。
鼻内喷雾可以用含水或非水媒介物配制，伴随加入试剂例如增稠剂、缓冲盐或酸或碱以调节pH、等渗性调节剂或抗氧化剂。用于通过喷雾(nebulation)吸入的溶液剂可以用含水媒介物配制，伴随加入试剂例如酸或碱、缓冲盐、等渗性调节剂或抗微生物剂。它们可以通过过滤或者在高压釜中加热灭菌，或者作为非灭菌产物呈现。
优选的单位剂型制剂为包含如在上文详述的有效剂量或其合适部分的活性成分的那些。
应能理解除以上具体提及的成分以外，本发明制剂可以包含具有研究中的制剂类型的本领域常用其它试剂，例如那些适用于口服给药的制剂可以包含矫味剂。
本发明的化合物和药用制剂可联合或包含一种或更多种其它治疗药物使用，例如选自抗炎药、抗胆碱能药(具体地为M1、M2、M1/M2或M3受体拮抗剂)、其它β2-肾上腺素受体激动剂、抗感染药物(例如抗生素、抗病毒药)或抗组胺药。因此本发明另一方面提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐与一种或更多种其他治疗活性药物的组合，所述治疗活性药物例如选自抗炎药(例如皮质类固醇或NSAID)、抗胆碱能药物、另一种β2-肾上腺素受体激动剂、抗感染药物(例如抗生素或抗病毒药物)或抗组胺药物。优选的组合包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和皮质类固醇和/或抗胆碱能药物和/或PDE-4抑制剂。优选的组合为包含一种或两种其它治疗药物的那些组合。
本领域技术人员应清楚，当合适时，其它治疗成分可以盐(例如作为碱金属或胺盐或作为酸加成盐)、或前药、或作为酯(例如低级烷基酯)、或作为溶剂合物(例如水合物)形式使用，以使所述治疗成分的活性和/或稳定性和/或物理性质(例如溶解性)最佳化。也应该清楚当合适时，所述治疗成分可以光学纯形式使用。
抗炎药包括皮质类固醇。优选的皮质类固醇包括丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯和6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯，更优选6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯。
抗炎药也包括非甾体抗炎药(NSAID′s)。NSAID′s包括色甘酸钠、奈多罗米钠、磷酸二酯酶(PDE)抑制剂(例如茶碱、PDE4抑制剂或混合PDE3/PDE4抑制剂)、白三烯拮抗剂、白三烯合成抑制剂(例如孟鲁司特)、iNOS抑制剂、类胰蛋白酶和弹性蛋白酶抑制剂、β-2整联蛋白拮抗剂和腺苷受体激动剂或拮抗剂(例如腺苷2a激动剂)、细胞因子拮抗剂(例如趋化因子拮抗剂如CCR3拮抗剂)或细胞因子合成抑制剂或5-脂氧合酶抑制剂。
PDE4特异性抑制剂可为已知抑制PDE4酶或者发现作为PDE4抑制剂的任何化合物，并且其仅为PDE4抑制剂，不是抑制PDE家族其它成员例如PDE3和PDE5以及PDE4的化合物。
重要的化合物包括顺式-4-氰基-4-(3-环戊基氧基-4-甲氧基苯基)环己烷-1-甲酸、2-甲氧甲酰-4-氰基-4-(3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)环己烷-1-酮和顺式-[4-氰基-4-(3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)环己烷-1-醇]。另一种重要的化合物为顺式-4-氰基-4-[3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯基]环己烷-1-甲酸(也称作西洛司特(cilomilast))及其盐、酯、前药或物理形式，其在美国专利5552438中描述。其他重要的化合物在公布的国际专利申请WO04/024728(Glaxo GroupLtd)、PCT/EP2003/014867(Glaxo Group Ltd)和PCT/EP2004/005494(Glaxo Group Ltd)中公开。
重要的抗胆碱能药为那些作为毒蕈碱受体拮抗剂起作用的化合物，具体地讲为M1或M3受体拮抗剂、M1/M3或M2/M3受体双重拮抗剂或M1/M2/M3受体全拮抗剂的那些化合物。通过吸入给药的例证性化合物包括ipratropium(例如作为溴化物，CAS 22254-24-6，在Atrovent名称下销售)、oxitropium(例如作为溴化物，CAS 30286-75-0)和tiotropium(例如作为溴化物，CAS136310-93-5，在Spiriva名称下销售)。
重要的抗组胺药(也称作H1-受体拮抗剂)包括已知抑制H1-受体并且对人用是安全的多种拮抗剂中的任何一种或更多种。第一代拮抗剂包括乙醇胺类、乙二胺类和烷基胺类的衍生物，例如苯海拉明(diphenylhydramine)、美吡拉敏、氯马斯汀、氯苯那敏。第二代拮抗剂，其为非镇静性的，包括氯雷他定(loratidine)、地氯雷他定(desloratidine)、特非那定、阿司咪唑、阿伐斯汀、氮斯汀、左西替利嗪、非索非那定和西替利嗪。
本发明另一方面因此提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和PDE4抑制剂的组合。优选地，本发明提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和如上文描述的优选PDE4抑制剂例如顺式-4-氰基-4-[3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯基]环己烷-1-甲酸的组合。
本发明另一方面因此提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和皮质类固醇的组合。优选地，本发明提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和如上文描述的优选皮质类固醇例如丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯和6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯的组合。
本发明另一方面因此提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和抗胆碱能药物的组合。优选地，本发明提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和如上文描述的优选抗胆碱能药例如ipratropium、oxitropium或tiotropium的组合。
本发明另一方面因此提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和抗组胺药物的组合。优选地，本发明提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和如上文描述的优选抗组胺药物的组合。
本发明另一方面因此提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和PDE4抑制剂和皮质类固醇的组合。优选地，本发明提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和如上文描述的优选抗组胺药物和优选皮质类固醇的组合。
本发明另一方面因此提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和抗胆碱能药和PDE-4抑制剂的组合。优选地，本发明提供包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和如上文描述的优选PDE4抑制剂和优选抗胆碱能药的组合。
以上所指的组合可便利地以用于药用制剂的形式呈现，因此包含如上定义的组合和生理学上可接受的稀释剂或载体的药用制剂表示本发明的另一个方面。
这种组合的各化合物可以分开或联合的药用制剂顺序或同时给药。本领域技术人员将易于意识到已知治疗药物的合适剂量。
附图简述图1显示对应实施例1(iv)的形式2结晶M{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺单盐酸盐(化合物(Ia)单盐酸盐)的x-射线粉末衍射图。
图2显示对应实施例3的形式2结晶N-(2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺单盐酸盐的x-射线粉末衍射图。
图3显示对应实施例3的形式2结晶N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺单盐酸盐的DSC图。高于约125℃观察到一系列微小的吸热事件。吸热在135.7℃(事件1)、149.3℃(事件2)和170.3℃(事件3)发生。随后在227.2℃发生更大的吸热。
为更好地理解本发明，给出以下实施例作为举例说明。
分析方法在图1中显示的XRPD分析在BrukerX-射线粉末衍射仪，ModelD8 Advance，序列号ROE 2357上实施。所述方法运行2-40°2θ，伴随0.0145°2θ步长，在每一步1秒收集时间。
实施例3的X-射线粉末衍射(XRPD)分析(显示在图2中)在采用X′Celerator检测器的PANalytical X′Pert Pro粉末衍射仪，型号PW3040/60，序列号DY1850上进行。探测条件为辐射Cu Ka，发生器电压40kV，发生器电流45mA，开始角度3.0°2θ，步长0.017°2θ，每步时间9205秒。所述样品采用0.5mm外径玻璃毛细管制备。特征XRPD角和d-间距(d-spacing)记录在表1中。
采用配备有PerkinElmer Universal ATR(衰减全反射)取样辅助设备的PerkinElmer Spectrum One FT-IR光谱仪，在4000-650cm-1的波数范围记录红外吸收光谱。
在400MHz Bruker DPX400光谱仪上于300K得到1H NMR光谱。样品溶于CDCl3或dmso-d6中，化学位移以ppm相对于0ppm的TMS信号报道。
用型号Pyris1的Perkin Elmer仪器得到实施例1(iv)的差示扫描量热分析。将样品称重入50微升铝盘，将铝盖放置在所述样品的顶部并且用黄铜棒压制。将铝罩放置在所述盘的顶部并且采用通用压机密封。空盘、盖和罩用作参比物。样品在30℃下平衡并且以每分钟10℃加热至300℃的温度。采用铟、锡和铅标准物校准仪器。
实施例3产物的DSC图显示在图3中并采用TA InstrumentsQ1000量热仪得到。将样品称重入铝盘中，将盘盖放置在顶部并且稍微卷曲而不密封盘。采用10℃min-1的加热速率进行实验。
缩写TBDMS-Cl叔丁基二甲基甲硅烷基氯DCM二氯甲烷DMAN，N-二甲基乙酰胺MEK2-丁酮(甲基乙基酮)NMPN-甲基吡咯烷酮IPA异丙醇IMS工业用甲醇变性酒精(在以下实施例中IMS组成为乙醇96％，甲醇4％)参照实施例(按照WO 2004/106279制备结晶(Ia)单盐酸盐)a)合成2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙胺(2)向1000mL三颈瓶中加入10g(74mmol)的2-(4-氨基苯基)乙胺和15mL的1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)嘧啶酮(DMPU)。反应瓶配备悬臂式搅拌器、125mL加料漏斗和温度计。反应瓶用氮气吹扫并且放入冷水浴中。加料漏斗中加入在四氢呋喃中的83mL(83mmol)1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨基钠。伴随剧烈搅拌下于30分钟内滴加双(三甲基甲硅烷基)氨基钠溶液。移开加料漏斗并用橡胶隔片替换。于10分钟内通过注射器滴加(R)-氧化苯乙烯(8.4mL，74mmol)。控制加料速度以维持温度低于35℃。1小时后，通过滴加88mL水猝灭反应。将反应混合物转移至分液漏斗中，用56mL乙酸异丙酯稀释并用84mL饱和氯化钠水溶液洗涤。用84mL水和84mL饱和氯化钠水溶液的混合物第二次洗涤有机层并且最后用84mL饱和氯化钠水溶液洗涤。真空浓缩有机层。残余物自异丙醇(55mL份)再浓缩两次，然后重新溶解于异丙醇(235mL)中，伴随搅拌下加热至70℃。经2分钟内加入浓盐酸(13.2mL，160mmol)。使混合物冷却至室温并且搅拌14小时。经过滤分离沉淀的产物并用异丙醇和乙酸异丙酯洗涤。真空下干燥产物3小时，然后溶于56mL水中，转移至分液漏斗中。加入乙酸异丙酯(56mL)和10N氢氧化钠水溶液(19mL，190mmol)。振摇分液漏斗，各相分离。经硫酸钠干燥有机层并浓缩，得到为橙棕色油的产物(2)(11g，44mmol，59％)。m/zC16H20N2O的[M+H+]理论值257.2；实测值257.2。
b)合成2-溴-(R)-1-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-(3-甲酰氨基-4-苄基氧基苯基)乙烷(4)使(R)-2-溴-1-(3-甲酰氨基-4-苄基氧基苯基)乙醇(中间体3)(9.9g，28mmol)溶于36mL二甲基甲酰胺中。加入咪唑(2.3g，34mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(4.7g，31mmol)。氮气氛下搅拌溶液72小时。加入另外的咪唑(0.39g，5.7mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(0.64g，4.3mmol)，反应搅拌另外20小时。用乙酸异丙酯(53mL)和己烷(27mL)的混合物稀释反应物并转移至分液漏斗中。用水(27mL)和饱和氯化钠水溶液(27mL)的混合物洗涤有机层两次，最后用饱和氯化钠水溶液(27mL)洗涤。经硫酸钠干燥有机层。加入硅胶(23.6g)和己烷(27mL)，搅拌悬浮液10分钟。经过滤除去固体并在真空下浓缩滤液。自己烷(45mL)结晶残余物，得到8.85g(19mmol，68％)为白色固体的中间体4。m/ZC22H30NO3SiBr的[M+H+]理论值464.1、466.1；实测值464.2、466.4。
c)合成N-{2-[4((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}(R)-2-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2-(3-甲酰氨基-4-苄基氧基苯基)乙胺(5)在100mL圆底烧瓶中混合中间体4(5.0g，11mmol)、中间体2(3.5g，14mmol)和二甲基亚砜(10mL)并搅拌以形成均匀溶液。加入碳酸钾(6.0g，43mmol)和碘化钠(1.7g，11mmol)并将反应混合物加热至140℃。在140℃下维持反应混合物10分钟，然后冷却至室温并用水(24mL)和乙酸异丙酯(28mL)稀释。搅拌反应直到所有固体溶解，然后转移至分液漏斗中。用水(17mL)洗涤有机层，随后依次用乙酸盐缓冲液(5％v/v乙酸，12％w/v乙酸钠三水合物水溶液，18ml)、碳酸氢钠溶液(5％w/v水溶液，17mL)、饱和氯化钠水溶液(17mL)洗涤。经硫酸钠干燥有机层并浓缩，得到为棕色凝胶状固体的中间体5(7.0g，11mmol，＞99％)。m/zC38H49N3O4Si的[M+H+]理论值640.4；实测值640.6。
d)合成N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R))-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-苄基氧基苯基)乙胺(6)使中间体5(5.2g，8.1mmol)溶于四氢呋喃(26mL)中并加入三乙胺三氢氟酸盐(1.4mL，8.6mmol)。搅拌溶液20小时。通过先后加入水(7.6mL)和10.0N氢氧化钠(3.8mL，38mmol)猝灭反应。3分钟后，用乙酸异丙酯(20mL)稀释反应物并转移至分液漏斗中。振摇混合物并通过celite过滤两相混合物以除去未溶解固体。将滤液返回至分液漏斗中并分离各相。先后用9mL水和9mL饱和氯化钠水溶液的混合物以及15mL饱和氯化钠水溶液洗涤有机层。经硫酸钠干燥有机层并浓缩，提供为棕色凝胶状固体的产物6(4.2g，8.0mmol，99％)。m/zC32H35N3O4的[M+H+]理论值526.3；实测值526.4。
e)合成N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺(1)使中间体6(2.5g，4.8mmol)溶于8.0mL乙醇中并用活性炭DarcoG-60(1.25g)处理。在50℃下搅拌悬浮液20分钟，然后过滤以除去Darco。向滤液中加入10％钯活性炭(250mg)并将悬浮液置于Parr振摇器上。在30psi氢气下振摇反应液10小时。通过celite过滤反应液并真空浓缩，得到为棕色凝胶状固体的化合物1(1.9g，4.3mmol，91％)。
1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.40-2.68(m，6H)，2.92-3.18(m，2H)，4.35-4.45(m，1H)，4.60-4.69(m，1H)，5.22-5.30(m，1H)，6.82(s，1H)， 6.85(s，1H)，6.68-6.86(m，4H)，7.12-7.36(m，5H)，7.95(d，1H，J＝1.4Hz)，8.19(s，1H)，9.49(br s，1H).
m/zC25H29N3O4的[M+H+]理论值436.2；实测值436.4。
f)N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺单盐酸盐的结晶在500mL圆底烧瓶中，于40℃伴随搅拌下使化合物1(5.2g,11.9mmol)溶于187.9mL异丙醇中。10分钟内达到完全溶解。然后将烧瓶加入含有1.0N HCl(11.3mL，11.3mmol，0.95eq.)和H2O(29.6mL)的溶液。搅拌溶液，产物经几小时结晶。6小时后，经过滤分离结晶并且先后用15mL冰冷的15％水的异丙醇溶液和15mL异丙醇洗涤。在室内真空下干燥结晶12-16小时，得到为白色结晶固体的化合物1单盐酸盐(3.92g，8.3mmol，70％产率，98.89％纯度经HPLC)。水含量为0.2％，1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.13(s，1H)，9.62(m，1H)，8.93(brs，1H)，8.66(brs，1H)，8.27(d，1H，J＝1.92)，8.13(d，1H，J＝1.65)，7.21-7.40(m，5H)，6.86-6.94(m，4H)，6.57(d，2H，J＝8.52)，6.05(d，1H，J＝3.57)，5.45-5.55(m，2H)，4.80(m.1H)，4.70(m，1H)，2.70-3.24(m，8H).
C25H29N3O4·HCl的元素分析(％重量)理论值C，63.62；H，6.41；N，8.90；C1，7.51。实侧值C，63.47；H，6.54；N，8.81；C1，7.78。
实施例1i)2-溴-(R)-1-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-(3-甲酰氨基-4-苄基氧基苯基)乙烷于8分钟内向咪唑(21.86g，0.32mol)和(R)-2-溴-1-(3-甲酰氨基-4-苄基氧基苯基)乙醇(74.54g，0.21mol)在DCM(260mL)中的淤浆中加入TBDMS-C1(40.1g，0.26mol)在DCM(37.5mL)中的溶液。搅拌混合物22小时。用水(190mL)猝灭反应并用DCM(37.5mL)萃取水层。大气压下蒸馏合并的DCM层至约110mL体积。冷却时，发生自发性结晶。于20分钟内滴加异辛烷(750mL)。使淤浆冷却至0℃并经过滤收集固体，然后用91v/v异辛烷∶DCM(3×75mL)洗涤并真空干燥，得到为无色固体的标题化合物(89.65g，90％th)。按照结构1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)-0.06(3H)s；0.11(3H)s；*0.12(3H)s；*0.89(9H)s；0.90(9H)s；*3.38-3.49(2H)m；4.78-4.87(1H)m；*5.09(2H)s；5.10(2H)s；6.96(1H)d，J＝8.6Hz；*7.06(1H)d of d，J＝8.3，2.0Hz；7.11(1H)d of d，J＝8.3Hz，2.0Hz；7.25-7.27(1H)m；7.36-7.45(5H)m；*7.70(1H)d，J＝11.0Hz；7.79(1H)s；8.38(1H)d，J＝2.0Hz；8.42(1H)d，J＝1.5Hz；*8.76(1H)d，J＝11.8Hz.
*峰是由于约25M％的少量旋转异构体。
ii)N-{2-[4-(R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-苄基氧基苯基)乙胺单盐酸盐使2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙胺(19.8g，60mmol)溶于水(80mL)中。伴随搅拌下加入乙酸异丙酯(100mL)。伴随搅拌下于8分钟内加入32％w/v氢氧化钠水溶液(17.2mL)。用水(100mL)洗涤有机层，然后在大气压下蒸馏至约70mL体积。
向这个溶液中先后加入DMA(50mL)、2-溴-(R)-1-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-(3-甲酰氨基-4-苄基氧基苯基)乙烷(20g，43mmol)和碳酸钾(7.44g，54mmol)。在90℃(油浴温度)下加热混合物17小时，然后冷却至50℃。加入水(150mL)并进一步冷却混合物至室温。加入MEK(150mL)并分离各层。先后用17∶40∶340v/w/v乙酸∶乙酸钠∶水(100mL)、29％w/v氯化钠水溶液(100mL)洗涤有机层。用MEK(50mL)稀释有机层，然后于大气压下蒸馏至约150mL体积，随后加入另外的MEK(50mL)。加热混合物至37℃并加入氟化铯(8.1g，51.6mmol)在甲醇(100mL)中的溶液。在37℃下继续加热7.5小时，然后冷却混合物至30℃。用44％w/v碳酸钾水溶液(100mL)猝灭反应并加入水(20mL)。用29％w/v氯化钠水溶液(100mL)洗涤有机层，然后用乙酸(3.7mL，64.6mmol)处理。先后用29％w/v氯化钠水溶液(100mL)、6％w/v氯化钠水溶液(3×100mL)洗涤混合物。
用MEK(100mL)稀释溶液，然后蒸馏至约120mL体积。加入MEK(80mL)并用标题化合物将混合物引晶+。再次将混合物蒸馏至约140mL体积。加入另外的MEK(60mL)并使混合物冷却至室温。经过滤收集固体，用MEK(3×20mL)洗涤并真空干燥，得到为无色固体的标题化合物(18.64g，77％th)。按照结构1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)2.70-2.89(2H)m；2.95(1H)m；3.01-3.14(4H)m；3.14-3.23(1H)m；4.71(1H)m；4.81(1H)m；*5.17(1H)s；5.23(1H)s；5.46(1H)d，J＝4.4Hz；5.50(1H)m；6.10(1H)d，J＝3.2Hz；6.59(2H)d，J＝8.3Hz；6.94(2H)d，J＝8.3Hz；7.03(1H)d of d，J＝8.6，2.0Hz；7.12(1H)d，J＝8.6Hz；7.25(1H)m；7.30-7.36(3H)m；7.36-7.42(4H)m；7.50(2H)d，J＝7.3Hz；8.26(1H)d，J＝2.0Hz；8.35(1H)d，J＝1.7Hz；*8.54(1H)d，J＝11.0Hz；8.63(2H)宽峰；*9.64(1H)m；9.67(1H)s.
*峰是由于约11.5M％的少量旋转异构体。
+采用以上描述的方法可以得到晶种iii)N-{2-[4-(R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺单盐酸盐于22±2℃下，在氢气下搅拌N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-苄基氧基苯基)乙胺单盐酸盐(40g)和5％Pd/C催化剂(Englehard 167，50％湿含水)(200mg)在NMP(120ml)中的混合物。当分析时过滤(Whatman GF/F过滤器)混合物，通过反应混合物的hplc(在220nm下检测)显示原料(实施例1ii的产物)＜0.5％(面积)。用NMP和IPA的混合物(1∶1)(80ml)洗涤滤饼。
搅拌合并的滤液并加热至69±3℃。加入水(10ml)。在维持温度为69±3℃的速率下加入IPA(100ml)。加入晶种(0.8g)。15分钟内加入IPA(50ml)。搅拌生成的混合物约0.75小时。然后经约2.5小时加入IPA(250ml)。使生成的淤浆缓慢冷却至20±3℃并在该温度下搅拌约16小时。
将生成的淤浆冷却至3±3℃并在这个温度下搅拌4小时。过滤淤浆并用IPA/水(10∶1)(80ml)和IPA(160ml)连续洗涤收集的固体。于约50℃下真空干燥固体，得到为白色固体的标题化合物(29.7g)。
产率88％th，74％w/wNMR；(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)2.73-2.89(2H)m；2.95(1H)m；3.01-3.14(4H)m；3.15-3.24(1H)m；4.72(1H)m；4.82(1H)m；5.46(1H)d，J＝4.7Hz；5.48(1H)m；6.03(1H)d，J＝3.4Hz；6.59(2H)d，J＝8.6Hz；6.89(1H)d，J＝8.1Hz；6.91-6.98(3H)m；*7.01(1H)d，J＝8.6Hz；*7.14(1H)s；7.25(1H)t，J＝7.3Hz；7.33(2H)t，J＝7.3，7.6Hz；7.39(2H)d，J＝7.6Hz；8.13(1H)d，J＝1.5Hz；8.29(1H)d，J＝1.7Hz；*8.53(1H)d，J＝11.0Hz；8.57-9.08(2H)宽峰；*9.36(1H)d，J＝11.0Hz；9.60(1H)s；*9.92(1H)s；10.10(1H)s.
*峰是由于约11M％的少量旋转异构体。
iv)N-{2-[4-(R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺单盐酸盐的重结晶使标题单盐酸盐(5g)在100ml圆底烧瓶中悬浮于工业用甲醇变性酒精(IMS)水溶液(2∶1 IMS∶水，72.5ml)中。使混合物温热至78℃，得到澄明溶液。将它过滤，用IMS水溶液(2∶1 IMS∶水，2.5ml)洗涤并使液体重新温热至78℃以重新溶解过滤期间沉淀的固体。将温度调节到65℃并用单盐酸盐(10mg)引晶。在60-65℃保持混合物2小时，然后冷却至20-25℃且在该温度下搅拌14小时。使悬浮液冷却至0-5℃并在该温度下保持3小时。经过滤收集产物并先后用IMS水溶液(2∶1IMS∶水，2×7.5ml)和IMS(3×7.5ml)洗涤，得到为白色固体的标题化合物，其在50℃下真空干燥过夜(60.28g)。
期望产率80％th，80％w/w该产物的XRPD图显示在图1中。
该产物的差示扫描量热分析图显示低于约125℃缺乏可辨别的吸热特征，伴随在约133℃、约151℃和约170℃发生微小吸热事件。
实施例2N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-苄基氧基苯基)乙胺单盐酸盐供选制备方法将2-溴-(R)-1-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-(3-甲酰氨基-4-苄基氧基苯基)乙烷(100g，215mmol)、2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙胺双氢溴酸盐(99g，237mmol)和碳酸钾(119g，861mmol)加入到反应器中。加入NMP(500mL)并在110-115℃下加热混合物5小时，然后冷却至50℃。先后加入水(900mL)和1-戊醇(500mL)，当分离各层时使混合物进一步冷却至室温(≤35℃)。先后用水(500mL)、2％w/v氯化钠水溶液(500mL)洗涤有机层。
向有机层中先后加入乙酸(20mL，350mmol)和氟化铯(39g，257mmol)在甲醇(500mL)中的溶液。于55℃下加热混合物4小时。用37％w/v碳酸钾水溶液(500mL)猝灭反应，然后冷却至30℃(≤35℃)。用10％w/v氯化钠水溶液(500mL)洗涤有机层，然后用乙酸(18.5mL，324mmol)处理。用10％w/v氯化钠水溶液(2×500mL)洗涤混合物。
用1-戊醇(1L)稀释溶液，用标题化合物(0.2g)引晶并老化30分钟。真空蒸馏混合物至约1.4L体积并使混合物冷却至室温。经过滤收集固体，先后用1-戊醇(2×300mL)和乙酸乙酯(300mL)洗涤并真空干燥，得到为无色固体的标题化合物(86.09g，71％th)。按照结构1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)2.70-2.89(2H)m；2.95(1H)m；3.01-3.14(4H)m；3.14-3.23(1H)m；4.71(1H)m；4.81(1H)m；*5.17(1H)s；5.23(1H)s；5.48(1H)d，J＝4.4Hz；5.50(1H)m；6.10(1H)d，J＝3.2Hz；6.59(2H)d，J＝8.3Hz；6.94(2H)d，J＝8.3Hz；7.03(1H)d of d，J＝8.6，2.0Hz；7.12(1H)d，J＝8.6Hz；7.25(1H)m；7.30-7.36(3H)m；7.36-7.42(4H)m；7.50(2H)d，J＝7.3Hz；8.26(1H)d，J＝2.0Hz；8.35(1H)d，J＝1.7Hz；*8.54(1H)d，J＝11.0Hz；8.63(2H)宽峰；*9.64(1H)m；9.67(1H)s.
·峰是由于约11.5M％少量旋转异构体。
实施例3N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺单盐酸盐的重结晶使标题单盐酸盐(30g)在1L反应器中悬浮于甲醇水溶液(2∶1甲醇∶水，600ml)中。使混合物温热至64℃，得到澄明溶液。将其过滤并使液体再次温热以重新溶解过滤期间沉淀的固体。将温度调节至56℃并用标题化合物+(0.6g)引晶。于56℃下保持混合物30分钟，然后经2小时冷却至20℃。将悬浮液经1小时加热至50℃并在50℃下保持1小时。使混合物经2.5小时冷却至20℃。将悬浮液经1小时加热至50℃并在50℃下保持1小时。将混合物经2.5小时冷却至10℃并在10℃下保持8小时。经过滤收集产物并先后用甲醇水溶液(2∶1甲醇∶水，60ml)和甲醇(60ml)洗涤，得到为白色固体的标题化合物，其在40℃下真空干燥过夜。
产率76％thIR(如上所述测量)在约663，698，747，764，788，809，827，875，969，995，1024，1056，1081，1101，1212，1294，1371，1440，1520，1543，1596，1659，3371和3552cm-1下给出显著吸收谱带。
所述产物的X-射线粉末衍射(XRPD)分析显示在图2中。特征XRPD角和d-间距记录在表1中。
+采用以上描述的方法可以得到晶种。
表1.特征XRPD峰值角度和d-间距2θ d-间距(deg)*(A)4.0 22.36.0 14.88.0 11.110.08.912.07.416.05.516.85.317.05.217.45.117.75.018.14.918.34.819.04.719.34.619.54.519.84.520.34.420.64.321.04.221.44.221.94.122.63.923.93.724.13.724.43.624.63.624.73.625.13.525.43.525.73.526.23.426.43.426.83.328.23.229.93.0*对铜Kα辐射
权利要求
1.一种用于制备化合物(I)单盐酸盐的方法 其中*C和**C指不对称碳原子，所述方法包括以下步骤a)使式(II)化合物与弱酸接触以实现选择性质子化 其中P1表示羟基保护基团，P2和P3每一个独立表示氢或保护基团；b)使(a)的产物与氯离子源接触以实现阴离子交换；c)脱保护以除去P1，必要时除去P2和P3；d)分离作为单盐酸盐的化合物(I)；并且任选地e)化合物(I)结晶或重结晶。
2.权利要求1的方法，其中式(I)化合物为化合物(Ia) 式(II)化合物为化合物(IIa) 其中P1为如权利要求1中定义。
3.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述弱酸为乙酸。
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述基团P1表示苄基。
5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述氯离子源为氯化钠。
6.权利要求1-5中任一项的方法，所述方法用于制备式(Ia)化合物的结晶单盐酸盐。
7.权利要求6的方法，其中所述方法的产物由x-射线粉末衍射图表征，其中所述峰位置实质上为图1中显示图的峰位置。
8.结晶(Ia)单盐酸盐，所述结晶(Ia)单盐酸盐通过差示扫描量热法图表征，所述差示扫描量热法图显示低于约125℃不存在可辨别的吸热特征。
9.权利要求8的结晶(Ia)单盐酸盐，所述结晶(Ia)单盐酸盐通过差示扫描量热法图表征，所述差示扫描量热法图显示低于约125℃不存在可辨别的吸热特征，在约229℃开始显著的吸热热流。
10.权利要求8或权利要求9的结晶(Ia)单盐酸盐，所述结晶(Ia)单盐酸盐通过差示扫描量热法图表征，所述差示扫描量热法图显示低于约125℃不存在可辨别的吸热特征，在约130℃-约180℃具有两个或更多个微小的吸热事件和在约229℃开始显著的吸热热流。
11.权利要求10的结晶(Ia)单盐酸盐，其中所述微小的吸热事件发生在约133℃、约151℃和约170℃。
12.形式2结晶(Ia)单盐酸盐，所述形式2结晶(Ia)单盐酸盐实质上为纯形式。
13.一种用于得到实质上纯形式的形式2结晶(Ia)单盐酸盐的方法，所述方法包括Ba)通过使所述单盐酸盐与所述溶剂接触，在约60℃-约70℃例如约65℃下加热，在含水有机溶剂中形成N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰氨基-4-羟基苯基)乙胺单盐酸盐的混合物；Bb)调整所述混合物的温度为约52℃-约58℃，例如约55℃；Bc)将所述混合物用形式2结晶引晶；Bd)使所述混合物冷却至约15℃-25℃的温度；Be)将所述混合物加热至约47℃-约52℃的温度，例如约50℃；Bf)重复步骤Bd)和Be)以得到要求的形式2。
14.一种用于预防或治疗选择性β2-肾上腺素受体激动剂指征的哺乳动物例如人的临床症状的方法，所述方法包括给予治疗有效量的形式2结晶(Ia)单盐酸盐。
15.形式2结晶(Ia)单盐酸盐用于医学疗法的用途。
16.形式2结晶(Ia)单盐酸盐在制备用于预防或治疗选择性β2-肾上腺素受体激动剂指征的临床症状的药物中的用途。
17.一种药用制剂，所述药用制剂包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和药学上可接受的载体或赋形剂和任选一种或更多种其它治疗成分。
18.一种组合，所述组合包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和一种或更多种其它治疗成分。
19.权利要求17的组合，其中所述其它治疗成分为PDE4抑制剂或抗胆碱能药物或皮质类固醇。
20.权利要求17或18中任一项的组合，所述组合包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯。
21.权利要求17或18中任一项的组合，所述组合包含形式2结晶(Ia)单盐酸盐和6α，9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯。
全文摘要
本发明涉及结晶盐形式的β
文档编号A61P11/00GK1997623SQ200580017528
公开日2007年7月11日 申请日期2005年3月30日 优先权日2004年4月2日
发明者D·M·凯恩, I·L·帕特诺斯特, P·D·P·沙普兰德 申请人:葛兰素集团有限公司