一种脉络宁注射用粉针剂及其制备方法

专利名称：：一种脉络宁注射用粉针剂及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种以中药复方提取物为有效成分的注射制剂，具体而言，是一种脉络宁注射用粉针剂及其制备方法。
背景技术：
：脉络宁注射液是在著名医方“四妙勇安汤”的基础上研制而成的中药复方注射剂，由牛膝、玄参、石斛、金银花四味中药组成，广泛应用于血栓闭塞性脉管炎、动脉硬化性闭塞症、脑血栓形成及后遗症、多发性大动脉炎、四肢急性动脉栓塞症、糖尿病坏疽、静脉血栓形成及血栓性静脉炎等。中国专利CN1557398A公开了其还具有预防和治疗心绞痛的作用。但是现有的脉络宁注射液的制备工艺采用水提醇沉法将四种药材同时提取，然后再用乙酸乙酯萃取得有效成分(见“脉络宁注射液的工艺方法”，公开号CN1078148A)，然而方中含有绿原酸等对光照和空气不稳定性成分，在贮存过程中容易出现注射液色泽变化、有效成分含量降低等现象，同时方中存有有机酸与生物碱等成分，在水针状态下这些成分极易发生絮凝沉淀，严重影响到脉络宁注射液临床应用的安全性和有效性。中国专利CN1682928A公开了一种制备脉络宁注射液的新方法，该方法将牛膝和玄参醇提，石斛用醇浸泡，回流提取，二者提取物合并后上大孔吸附树脂，得提取物X；金银花水超声提取后上D101大孔吸附树脂，水洗液离心后超滤膜超滤，得提取物Y；或者水超声提取后尚NKA-II型大孔吸附树脂，收集醇洗脱液，得提取物Y；将X和Y合并，制成制剂。尽管该工艺对有效成分的提取比较充分，但是非常繁琐，其中的超声处理在工业生产很难应用，大孔吸附树脂处理则存在处理周期长等不足。因此，开发出更加安全、有效、稳定且制备工艺简洁、实用的脉络宁注射制剂是广大医药工作者一直渴望解决的问题。
发明内容本发明的目的之一是针对现有技术的不足，提供一种安全、有效、稳定、工艺简洁实用的脉络宁注射用粉针剂。本发明的另一目的是提供该脉络宁注射用粉针剂的制备方法。本发明是通过下面的技术方案实现的本发明的脉络宁注射制剂包括由牛膝、玄参、石斛、金银花为原料制得的提取物和注射制剂中可接受的赋形剂，其中牛膝、玄参、石斛和金银花的重量配比为1～4∶1～4∶1～4∶1～4；优选配比为1～2∶1～2∶1～2∶1～2；最佳配比为1∶1∶1∶1。本发明的脉络宁注射用冻干粉针剂，其中原料药和赋形剂具有以下重量份配比牛膝2000～8000玄参2000～8000石斛2000～8000金银花2000～8000甘露醇200～500PVP3～8。优选地，其原料药和赋形剂具有以下重量份配比牛膝5000玄参5000石斛5000金银花5000甘露醇330PVP6。本发明的脉络宁注射用粉针剂，由包括下述步骤的方法制备而成(1)按照下述重量配比称取原料药备用石斛1～4份金银花1～4份牛膝1～4份玄参1～4份；(2)取处方量的上述药材，乙醇渗漉提取，渗漉液浓缩成浸膏，离心，加水，静置，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，过滤，滤液调节pH值，乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯后干燥得提取物；(3)加水溶解提取物，冷藏，过滤，滤液超滤，收集超滤液，加入赋形剂，制成粉针剂。优选地，本发明的脉络宁注射用粉针剂，由包括下述步骤的方法制备而成(1)按照下述重量配比称取原料药备用石斛14份金银花1～4份牛膝1～4份玄参1～4份；(2)取处方量的上述药材粉碎，用50～90％乙醇渗漉提取，收集8～16倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩成浸膏，离心去除不溶性杂质，加2～8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，过滤，调节pH值至1～6，乙酸乙酯萃取2～8次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后真空干燥得提取物；(3)在提取物中加注射用水加热煮沸使溶解，自然放冷，冷藏，过滤，滤液超滤，收集超滤液，滤液中加入赋形剂，补加注射用水至处方量，调pH值，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂。最佳地，本发明的脉络宁注射用粉针剂，由包括下述步骤的方法制备而成(1)按照下述重量配比称取原料药备用石斛1～4份金银花1～4份牛膝1～4份玄参1～4份；(2)取处方量的上述药材粉碎成粗粉，用50～90％乙醇以100～300ml/min速度渗漉提取，收集10～14倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩至50℃下相对密度为1.0～1.3的浸膏，离心去除不溶性杂质，加4～8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.0～1.3的浸膏，过滤，去除沉淀，调节pH值至1～4，等体积乙酸乙酯萃取4～8次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，50～80℃真空干燥得提取物；(2)在提取物中加注射用水加热煮沸8～15分钟，自然放冷，冷藏，过滤，滤液以截留分子量为3000～8000的超滤膜超滤，收集超滤液，滤液中加入赋形剂，补加注射用水至处方量，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂。其中，以上步骤(3)中所述的赋形剂选自甘露醇、PVP、葡聚糖、乳糖、右旋糖苷、蔗糖一种或多种；优选自甘露醇、PVP、右旋糖苷、乳糖中的一种或多种；更优选自甘露醇、PVP、右旋糖苷中的一种或多种。其中所述提取物中绿原酸含量为不低于5％，优选为8～20％，更优选为8～18％，进一步优选为10～15％。其中所述提取物中肉桂酸含量为不低于0.05％，优选为0.05～0.20％，更优选为0.06～0.12％.进一步优选为0.07～0.10％。其中所述提取物中滨蒿内酯含量为不低于0.05％，优选为0.05～0.15％，更优选为0.05～0.10％，进一步优选为0.05～0.08％。本发明的脉络宁注射用粉针剂的制备方法，包括以下步骤(1)按照下述重量配比称取原料药备用石斛1～4份金银花1～4份牛膝1～4份玄参1～4份；(2)取处方量的上述药材，乙醇渗漉提取，渗漉液浓缩成浸膏，离心，加水，静置，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，过滤，滤液调节pH值，乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯后干燥得提取物；(3)加水溶解提取物，冷藏，过滤，滤液超滤，收集超滤液，加入赋形剂，制成粉针剂。优选地，本发明的脉络宁注射用粉针剂的制备方法包括以下步骤(1)按照下述重量配比称取原料药备用石斛1～4份金银花1～4份牛膝1～4份玄参1～4份；(2)取处方量的上述药材粉碎，用50～90％乙醇渗漉提取，收集8～16倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩成浸膏，离心去除不溶性杂质，加2～8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，过滤，调节pH值至1～6，乙酸乙酯萃取2～8次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后真空干燥得提取物；(3)在提取物中加注射用水加热煮沸使溶解，自然放冷，冷藏，过滤，滤液超滤，收集超滤液，滤液中加入赋形剂，补加注射用水至处方量，调pH值，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂。最佳地，本发明的脉络宁注射用粉针剂的制备方法包括以下步骤(1)按照下述重量配比称取原料药备用石斛1～4份金银花14份牛膝1～4份玄参14份；(2)取处方量的上述药材粉碎成粗粉，用50～90％乙醇以100～300ml/min速度渗漉提取，收集10～14倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩至50℃下相对密度为1.0～1.3的浸膏，离心去除不溶性杂质，加4～8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.0～1.3的浸膏，过滤，去除沉淀，调节pH值至1～4，等体积乙酸乙酯萃取4～8次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，50～80℃真空干燥得提取物；(3)在提取物中加注射用水加热煮沸8～15分钟，自然放冷，冷藏，过滤，滤液以截留分子量为3000～8000的超滤膜超滤，收集超滤液，滤液中加入赋形剂，补加注射用水至处方量，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂。其中，以上步骤(3)中所述的赋形剂选自甘露醇、PVP、葡聚糖、乳糖、右旋糖苷、蔗糖一种或多种；优选自甘露醇、PVP、右旋糖苷、乳糖中的一种或多种；更优选自甘露醇、PVP、右旋糖苷中的一种或多种。本发明的脉络宁注射用粉针剂是大量科学实验的结果，提取方法每个步骤都经过反复地实验和验证。下面通过典型的具体试验说明本发明制备方法的科学性。脉络宁注射制剂制备工艺的研究1.提取工艺研究1.1提取工艺的比较研究四味药主要活性成分水溶性与醇溶性均较好，既可用水提取也可用醇提取。然而各种成分在不同溶媒中不同提取方式下其提取效果并不一致，须对其进行对比研究。工艺研究中应以金银花中的绿原酸、玄参中的肉桂酸、石斛中的滨蒿内酯三个主要活性成分作为评价指标，然而，本方遣方复杂，评价指标较多，单指标评价存在片面性，因此其提取效果优劣应以众指标综合评价判定。纵观本方理法方药，方中玄参清热凉血兼滋阴，加用金银花宣散清热，使邪热自气分而解，共为臣药，较之石斛其权重系数分别设为0.4；石斛养阴清热，为治疗虚热不退、津伤口渴之要药，既可固护胃气，又可养阴生脉、利血行，方中以为佐使之用，较之玄参银花二味权重系数可定为0.2，因此综合指标评分可用下式计算综合指标评分＝绿原酸转移率×0.4+肉桂酸转移率×0.4+滨蒿内酯转移率×0.21.1.1药材的前处理取金银花(批号021202)、牛膝(批号021205)、玄参(批号021203)、石斛(批号021204)各约25kg，分别净制，低温干燥，粉碎机中打成粗粉(过二号筛)，备用。1.1.2操作方法分别准确称取上述四味药材粗粉各100g，混合均匀，作为供试药材，同样操作准备供试药材共三份，作下述试验。第一份以70％乙醇渗漉提取，流速4ml/min，接收渗漉液4800ml，HPLC法测定样品中绿原酸、肉桂酸、滨蒿内酯的含量。第二份以70％乙醇回流提取二次。第一次用7倍量70％乙醇在搅拌下回流提取3小时，第二次加入5倍量70％乙醇在搅拌下回流提取2小时。合并二次乙醇提取液，同浓度乙醇定容，同上测定样品中绿原酸、肉桂酸、滨蒿内酯的含量。第三份以水煎煮提取二次。第一次以7倍量水在搅拌下煎煮提取3小时，第二次加入5倍量水在搅拌下煎煮提取2小时。合并二次水提取液，以蒸馏水定容后同上测定样品中绿原酸、肉桂酸、滨蒿内酯的含量。1.1.3结果三组实验提取液测定体积和绿原酸、肉桂酸、滨蒿内酯的含量，计算提取率及各活性成分的综合提取率。结果如表1所示。表1三种提取方法的对比注综合提取率＝绿原酸提取率×0.4+肉桂酸提取率×0.4+滨蒿内酯提取率×0.2由表1可见，以70％乙醇渗漉提取，各指标成分转移率及各成分综合提取率均高于其它两种提取方式，而固形物的收率较低，因此乙醇渗漉法同现有技术常用的乙醇回流或者水煎煮法相比具有明显的优势，采取乙醇渗漉法为宜。1.2萃取工艺研究1.2.1正交实验设计方中活性成分大多偏酸性，中等极性，可调节其水溶液至偏酸性，使各成分在游离状态下用乙酸乙酯萃取纯化。影响萃取效果的主要因素有三个萃取的次数、溶液pH值及溶液相对密度。就此三个因素，各设立3个水平，萃取液回收乙酸乙酯至净，定容，测定样品中绿原酸、肉桂酸、滨蒿内酯及固形物含量，每个因素各取三个水平以正交表L9(34)进行三因素三水平的正交试验。表2因素水平表1.2.2样品的制备将水沉溶液样品1分别准确量取1000ml，九份。按表2因素水平表进行试验，以溶液等量的乙酸乙酯进行萃取，收集萃取液，减压回收乙酸乙酯至净，定容，备用。1.2.3指标成分转移率和固形物收率的测定取上述各样品，HPLC法测定绿原酸、肉桂酸、滨蒿内酯及固形物的转移率，结果见表3。表3正交试验表及结果注综合评分＝绿原酸转移率×0.4+肉桂酸转移率×0.4+滨蒿内酯转移率×0.21.2.4结果分析由表3直观法分析R值可知，影响萃取转移率的因素从大到小依次为A＞B＞C，A因素中水平的重要性依次为A3＞A2＞A1；B因素中各水平的重要性依次为B3＞B2＞B1；C因素中水平的重要性依次为C2＞C3＞C1，最佳条件应为A3B3C2；影响萃取的固形物收率的因素从大到小依次为C＞B＞A，A因素中水平的重要性依次为A3＞A2＞A1；B因素中各水平的重要性依次为B1＞B2＞B3；C因素中水平的重要性依次为C3＞C1＞C2，最佳条件应为A3B1C3。对实验数据进行方差分析，结果见表4和表5表4综合评分方差分析表F1-0.05(2，2)＝19.00F1-0.01(2，2)＝99.00表5固形物方差分析表F1-0.05(2，2)＝19.00F1-0.01(2，2)＝99.00由方差分析可知，因素A，B，C水平间差异均有显著性意义，A3＞A2＞A1，B3＞B2＞B1，C2＞C3＞C1，优选条件A3B3C2；影响固形物收率的因素A，B，C有显著性，A因素中水平的重要性依次为A3＞A2＞A1；B因素中各水平的重要性依次为B1＞B2＞B3；C因素中水平的重要性依次为C3＞C1＞C2，最佳条件应为A3B1C3。由结果可以看出固形物收率影响较小，活性成分转移率应是考虑的主要因素。因此综合考虑成分转移率和纯度两个指标，最优选A3B3C2，即取水沉液浓缩至相对密度1.15(50℃)，过滤后20％盐酸调节pH值至1～2，等倍量乙酸乙酯萃取6次。2.制剂工艺研究2.1超滤工艺研究本品提取物水溶解后颜色呈深棕色，且含有微量树脂、鞣质类杂质，可利用活性成分与这些杂质成分分子量的不同，选用超滤法除去色素类大分子物质及相关杂质，选择截留分子量5000的超滤膜进行试验。取本品提取物三份，每份50g，加注射用水300ml，加热使溶解，并继续煮沸10分钟，溶液自然放冷，冷藏24h后微孔滤膜滤过，滤液以截留分子量为5000的超滤膜超滤，当回流浓缩液至约50ml，滤过通量明显下降时，加入回流浓缩液等量注射用水继续超滤，如此重复两次，收集超滤液并以注射用水定容至400ml。HPLC法测定超滤液中绿原酸、肉桂酸、滨蒿内酯及总固形物的含量，结果见表6。表6超滤前后指标成分的转移率和固形物收率超滤前后的溶液分别按《中国药典》方法检测树脂、鞣制、蛋白质项，结果见表15所示。表7超滤前后检测项目结果的对比结果表明本品经超滤后所检测的相关物质均能达到中药注射剂的要求，溶液色泽、澄明度得到明显改善，而活性成分转移率均能达到90％以上，工艺可行。2.2冻干支架剂的选择及其用量的确定本品溶液中总固体含量较低，在冻干过程中，容易出现药物与水蒸气飞散的现象，从而在冻干过程中使药物呈结构松散的绒毛状，药物移出冻干箱后又很快消散而萎缩，药物外观质量差。因此，必须加入一定量的支架剂以改善其外观品质。根据本品活性成分及其作用特点，选择加入甘露醇为支架剂，并对此进行研究。取前述超滤液150ml，分成三等份，分别加入甘露醇4g、5.5g、7g搅拌使溶解，滤过，滤液灌注于7ml西林瓶中，每瓶3ml，置冻干机里试冻干，结果如表8所示。表8冻干支架剂用量选择表结果表明，本品支架剂用量在11％以上时，冻干品成形良好，色泽均匀，因此冻干支架剂用量选择为溶液总量的11％。本发明的脉络宁注射用粉针剂采用简洁、适合工业化生产的制备工艺提高了有效成分的提取率，节省了药材用量，最大程度去除杂质，且粉针制剂更加稳定，克服了液体制剂中不稳定的有效成分降解、絮凝等问题的出现，从而保证了制剂更加安全、有效。为了更好的理解本发明，以下通过实验例来进一步阐述本发明药物的有益效果，实验例包括本发明药物的药效学动物试验与稳定性试验。下面试验旨在进一步说明本发明药物的作用，而非对本发明的限制。本实验例采用的发明药物是按实施例15制备而成。药效学试验1.实验材料1.1药品受试药物脉络宁冻干粉，由贵阳懋源医药科技有限公司提供，规格8.2g生药/ml，生产批号031028。阳性对照药脉络宁注射液，金陵药业股份有限公司南京金陵制药厂产品，生产批号200312072，国家准字Z32021102；香丹注射液，江苏康怡制药有限公司产品，生产批号0307101，国家准字Z32020159。阴性对照氯化钠注射液，由江西制药有限责任公司产品，批号030710-1。1.2试剂氯代三苯基四氮唑(红四氮唑或TTC)，由Fluka产品，瑞士分装，规格10g/瓶；白色粉末，用生理盐水配置成2％溶液备用。多聚甲醛，天津市化学试剂研究所，批号20020308，规格10g/瓶；水合氯醛，五联化工厂(中国上海)，批号w20021122，规格250g/瓶；磷酸氢二钠，广州新成化工厂产品，批号20020308，规格500g/瓶；磷酸二氢钠，北京益利精细化学品有限公司，批号20020308，规格500g/瓶。ADP，Sigma公司产品，终浓度为35μmol/L。SOD、MDA试剂盒，均有南京建成生物生物工程公司产品。1.3仪器DH-150人工动物呼吸机，浙江大学仪器厂产品；电热恒温干燥箱，长沙医疗器械厂；B12000医学图象系统，四川省成都泰盟科技有限公司；TYXN-91型智能血小板聚集仪(上海伯奥生物科技有限公司)；LDZ5-2离心机，北京医用离心机厂；SystemCA-530血凝仪(日本)。尼龙线，活力牌，直径为0.205或0.235mm，由台湾产；微型动脉夹等。1.4动物清洁级昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半，合格证号2001A030；清洁级SD大鼠，雄性体重240-280g，合格证号2001A029；新西兰大白兔，体重1.5-2.5kg，雌雄不限，合格证号2001A033；以上均由中山大学实验动物中心产品。1.5剂量设置通过本发明药物对小鼠全脑缺血缺氧(小鼠断头呼吸时间和次数)以及凝血时间的影响预试得出14.6g生药/kg为较佳有效剂量，取其1/2为低剂量，2倍为高剂量，低、中、高剂量分别为7.3、14.6、29.2g生药/kg。通过体表面积折算得，大鼠低、中、高剂量分别为5.0、10.0、20.0g生药/kg。脉络宁注射液，人用量为15ml/天，通过体表面积换算，小鼠约为1.95ml/kg，大鼠约为1.35ml/kg；香丹注射液香丹注射液，人用量为20ml/天，通过体表面积换算，小鼠约为2.6ml/kg，大鼠约为1.8ml/kg。药物稀释方法、给药途径及体积取同一批号的各实验所用药品，用生理盐水配制，每日现配制现用。给药途径静脉注射或腹腔注射。各种单位给药容积分别为小鼠为0.15ml/10g体重；大鼠为0.4mV100g体重。1.6数据处理所有实验数据以表示。计量数据由SPSS11.0统计软件进行方差分析及组间检验。2.方法与结果2.1对大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血(MCAO)再灌注损伤模型的治疗作用2.1.1分组及给药取雄性SD大鼠，按随机分组原则分成7组，分别为假手术组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、脉络宁冻干粉低(5.0g生药/kg)、中(10.0g生药/kg)、高(20.0g生药/kg)剂量组、脉络宁注射液(1.35mg/kg)组和香丹注射液(1.8ml/kg)组。药物用生理盐水配制成相应的浓度，使给药体积均为0.4ml/100g大鼠。预先腹腔注射(ip)给药两次，分两天，一天各一次。造模前0.5h先静脉注射(iv)给药1次；造模后6h和12h分别进行第2、3次给药(ip)，即总共给药5次。模型组和假手术组大鼠给予生理盐水，给药时间及体积同上。2.1.2造模方法将大鼠用10％水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射麻醉，颈正中切口，分离、结扎右侧颈总动脉、颈外动脉及其分支动脉。在颈内动脉近端备线、远端放置动脉夹，颈总动脉分叉处切口，插入4-0尼龙线，其深度为17～20mm，栓线进入颈内动脉，入颅至大脑前动脉，阻断大脑中动脉所有血流来源。撤掉动脉夹，扎紧备线，剪去多余线头，伤口以碘伏消毒，最后缝合皮肤，手术完毕回笼饲养。假手术组除不插线外，其余步骤同上。其余各组大鼠按上述手术方法造模。造模成功的标准动物手术后有明显手术侧(即左侧)Horner症(左侧眼睑下垂，眼球凹陷)及手术侧(即左侧)偏瘫体症(不能完全伸展左前肢，行走时向左侧倾倒或转圈)。依上述标准将能够存活24h的大鼠确定为最后的实验对象，并进行行为学评分及快速断头取脑。2.1.3观察指标2.1.3.1行为学评分存活24h大鼠，观察大鼠行为学变化，进行神经病学评分。参考ZeaLonga的5分制评分标准0分，无神经损伤症状；1分，不能完全伸展对侧前爪；2分，向外侧转圈；3分，向对侧倾倒；4分，不能自发行走，意识丧失。2.1.3.2脑含水量测定神经病学评分后，快速断头取鼠大脑。取左侧半脑后半部分分别称湿重，置120℃烤箱烘干至恒重，按以下公式计算脑组织含水量，脑组织含水量(％)＝(湿重-干重)/湿重×100％。2.1.3.3脑组织匀浆测定生化指标脑组织匀浆液的制备迅速断头取脑，取左侧半脑前半部分放于液氮中保存待测。从液氮中取出半脑同一部位称取100mg，后置于9倍的生理盐水中，用研磨器于冰块上研磨，制成100％(W/V)脑匀浆液，3500转/min，离心10min。检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平或含量。检测方法MDA测定采用硫代巴比妥酸法，SOD活力检测采用黄嘌呤氧化法。2.1.3.4脑梗塞范围的测定造模后24h每组取8只大鼠，快速取全脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冰冻25分钟。然后冠状切四刀，将全脑切成五片。第一刀位于脑前极与视交叉连线中点处，第二刀位于视交叉，第三刀在漏斗部，第四刀在漏斗柄与叶尾极之间。接着迅速将脑片置2％红四氮唑(TTC)中，避光，37℃温孵30分钟，其间每隔7～8min翻动一次，染色后以4％多聚甲醛固定。染色结果正常组织呈红色，梗塞组织呈白色。拍照并用BI2000医学图象分析系统计算脑梗塞面积百分比。2.1.3.5病理检查造模后24h每组取8只大鼠脑，于视交叉处行冠状切面取左侧脑中间一部分放入4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液保存超过48h。每个组织块均酒精梯度脱水，石蜡包埋，切片厚约4μm，进行HE染色。光镜下观察脑组织病理学变化。2.1.4结果2.1.4.1行为学评分结果MCAO大鼠麻醉清醒后出现中风体征，表现为不同程度的手术对侧前肢内收，肩内旋，肌张力降低，推右肩向对侧移动，抵抗阻力降低，还出现不停地向一侧转圈，甚至有些动物出现向对侧倾倒或不能自主活动现象。下表1可见模型组神经行为学评分明显高于假手术组，10.0、20.0g/kg脉络宁冻干粉组、1.35mg/kg脉络宁注射液组和1.8mg/kg香丹注射液组术后24h的行为评分明显低于模型组大鼠(P＜0.05或P＜0.01)。表1对MCAO大鼠神经行为学的影响()与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.012.1.4.2对脑组织含水量的影响下表2可见模型组脑含水量显著高于假手术组；脉络宁冻干粉10.0g/kg、20.0g/kg组、脉络宁注射液组与香丹注射液组脑含水量显著低于模型对照组(P＜0.05或P＜0.01)，脉络宁冻干粉5.0g/kg组的脑含水量有降低作用，但无统计学意义。表2对MCAO大鼠脑含水量的影响()与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.012.1.4.3对脑组织中SOD和MDA含量的影响下表3可见模型组脑组织SOD活性明显降低，MDA含量明显提高，与假手术相比较均有显著性差异(P＜0.01)。脉络宁冻干粉各剂量组与模型对照组比较，SOD活性明显升高，MDA含量显著下降(P＜0.05或P＜0.01)；两个阳性对照组也使损伤脑组织中SOD明显升高，MDA显著下降。表3对MCAO大鼠脑组织中SOD和MDA含量的影响(n＝8)<tablesid="table12"num="012"><tablewidth="682">组别剂量(g/kg)MDA含量(％)SOD含量假手术组模型对照组脉络宁冻干粉组脉络宁注射液组香丹注射液组--5.010.020.01.35ml1.8ml27.08±6.98**44.30±6.9137.40±5.36*33.76±5.58**30.76±6.06**32.07±5.51**34.26±4.55*P＜0.05；146.00±15.75**85.55±20.02100.34±19.80114.20±17.46**126.82±19.35**119.43±18.65**112.04±24.49*</table></tables>与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.012.1.4.4对大鼠脑梗塞范围的影响本实验是脑梗塞后24h利用TTC染色技术检查脑梗塞程度，染色结果显示造模组大鼠呈不同程度的梗死。由表4可见模型组大鼠脑缺血24h后脑组织梗塞程度明显，脉络宁冻干粉5.0、10.0、20.0g/kg组，脉络宁注射液和香丹注射液给药后，使脑梗塞面积百分比明显下降(P＜0.05或P＜0.01)。假手术组动物未见脑梗塞发生。表4对MCAO大鼠脑梗死面积的影响()<tablesid="table13"num="013"><tablewidth="688">组别剂量(g/kg)动物数脑梗死面积(％)假手术组模型对照组脉络宁冻干粉组脉络宁注射液组香丹注射液组--5.010.020.01.35ml1.8ml88888880.50±0.53**35.51±8.5629.83±9.4425.59±6.49*23.16±5.15**26.28±6.21*24.36±6.26*</table></tables>与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.012.1.4.5组织形态学变化及脉络宁冻干粉的影响大鼠经脑栓塞术后24h，病灶侧脑呈表面苍白、无光等缺血异常改变，假手术组则无异常改变。镜下各组大鼠脑组织病理学改变如下假手术组神经元细胞形态结构基本正常，无明显水肿。神经细胞的胞浆丰富，核膜清楚，核仁清晰，可见尼氏小体。神经胶质细胞核仁清晰，脑浆透亮或淡染，小血管、毛细血管周围间隙极小；有2例脑细胞呈轻度肿胀变性。模型对照组脑组织病变区域较多，间质疏松，水肿明显，水肿区域的神经细胞、神经胶质细胞、小血管及毛细血管周围间隙明显变宽，多数细胞肿胀变形、着色加深，尼氏小体消失，胞浆、胞核界线明显不清，部分细胞胞核呈不规则形，核膜模糊，核仁不清或消失。脑组织毛细血管充血，有少量红细胞外漏至脑组织，可见炎性细胞浸润。脉络宁低剂量5.0g(生药)/kg组比模型组病变略有改善，脑组织神经细胞、神经胶质细胞、小血管及毛细血管周围间隙变宽，细胞明显肿胀，染色加深，尼氏小体消失，部分细胞核固缩，核膜模糊，核仁不清。脑组织毛细血管充血，有少量红细胞外漏至脑组织，可见炎性细胞浸润。可见炎症细胞浸润。脉络宁中剂量10.0g(生药)/kg组比模型组病变有较明显的改善，脑组织神经细胞、神经胶质细胞、小血管及毛细血管周围间隙轻、中度变宽，部分细胞轻度或中度肿胀，胞核和胞浆有些不清，核仁比较模糊。脉络宁高剂量20.0g(生药)/kg组比模型组病变有明显的改善，脑组织神经细胞、神经胶质细胞、小血管及毛细血管周围间隙略变宽，多数神经细胞结构接近正常，部分细胞呈轻度或中度肿胀，胞核和胞浆有些不清，核仁比较模糊，偶见尼氏小体。脉络宁注射液1.35ml/kg组脑组织病理形态改善，其神经细胞、神经胶质细胞、小血管及毛细血管周围间隙轻度增宽，神经细胞肿胀较模型组明显减轻。香丹注射液(1.8ml/kg)组比模型组病变有明显的改善，脑组织神经细胞、神经胶质细胞、小血管及毛细血管周围间隙变宽，部分细胞呈轻度或中度肿胀，胞核和胞浆有些不清，核仁比较模糊。结论同模型组比较，脉络宁低、中、高剂量组对MCAO大鼠脑组织和神经细胞的病理损伤有良好的改善作用，以中、高剂量较为明显。2.2脉络宁冻干粉对小鼠急性脑缺氧的影响昆明种小鼠70只，体重18-22g，随机分成7组，每组10只。受试药组分别为脉络宁冻干粉7.3g/kg、14.6g/kg、29.2g/kg，58.4g/kg组；阳性对照药香丹注射液2.6ml/kg和脉络宁注射液1.95ml/kg；阴性对照组(给予等容量的生理盐水)。腹腔注射给药，共3次，每天1次，末次给药后15min将小鼠逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间及张口次数作为耐缺氧指标。结果表明，脉络宁冻干粉14.6g/kg、29.2g/kg、58.4g/kg组和香丹注射液、脉络宁注射液静脉给药后均能明显延长小鼠断头张口次数及喘息时间，与对照组比较呈显著差异(P＜0.05或P＜0.01)。详见表5。表5脉络宁冻干粉对小鼠急性脑缺氧的影响(与生理盐水组比较，*P＜0.05，2.3脉络宁冻干粉对凝血时间、血小板聚集和血栓形成的影响2.3.1对小鼠凝血时间的影响昆明种小鼠84只，体重18-22g，雌雄兼用，按体重和性别随机分成12组，给药容积为0.15ml/10g体重。分别给予静脉注射生理盐水溶液，脉络宁冻干粉7.3g/kg、14.6g/kg、29.2g/kg、58.4g/kg，香丹注射液(2.6ml/kg)，脉络宁注射液1.95ml/kg。给药后15min，眼球取血，玻片法测定凝血时间。由表6可见，脉络宁冻干粉、14.6g/kg、29.2g/kg、58.4g/kg均有明显的延长小鼠凝血时间的作用(p＜0.05或P＜0.01)。香丹注射液与脉络宁注射液组凝血时间明显延长(p＜0.05)。表6脉络宁冻干粉对小鼠凝血时间的影响(n＝10)2.3.2对体外血小板聚集的影响家兔颈总动脉放血，用硅化试管取血，以3.8％枸橼酸钠(1/10血量)抗凝，800r/min离心10分钟，吸出上层富血小板血浆(PRP)，再以3000r/min离心，取出贫血小板血浆(PPP)。用PPP将透光度调到100，然后以PRP调零，加搅拌棒、加生理盐水或脉络宁冻干粉(0.1g、0.2g、0.4g/ml)及阳性对照药香丹注射液(0.05ml/ml)和脉络宁注射液(0.02ml/ml)，37℃温育。将PRP移至测定孔，加入ADP(终浓度为35μmol/L)，观察5min最大聚集程度，仪器为TYXN-91型智能血小板聚集仪。计算血小板聚集百分率(Plateletaggregation，PAG))与抑制聚集百分率。由下表7可见，脉络宁冻干粉对ADP诱导的家兔血小板聚集有明显的抑制作用，随着剂量的增大抑制作用逐渐增强，即其对ADP诱导的家兔血小板聚集的抑制作用有明显的剂量依赖性。表7对ADP诱导的体外家兔血小板聚集的影响(n＝10)与缓冲液对照组比较，*为P＜0.05，**为P＜0.012.3.3对大鼠动-静脉旁路血栓形成的影响SD大鼠50只，随机分为5组，每组10只，10％水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射(ip)麻醉固定，分别从舌下静脉给予脉络宁冻干粉5.0g/kg、10.0g/kg、20.0g/kg，药香丹注射液2.6ml/kg和脉络宁注射液1.95ml/kg组；对照组给予等容积的生理盐水。于给药后20min，分离右侧颈总动脉和左侧颈外静脉。在聚乙烯管中段放入一根长6cm4号丝线，用肝素生理盐水溶液(50μl/ml)充满聚乙烯管。当聚乙烯管的一端插入左颈外静脉后，另一端塑料管注入肝素(50μl/m)0.2ml抗凝，然后再将此端插入右侧颈总动脉。打开动脉夹，让血液从右侧颈总动脉流入管内，返回左侧颈外静脉，开放血液15min后，中断血流，迅速取出聚乙烯管中的血栓在分析天平上称重，求出血栓抑制率。血栓抑制率＝[(对照组血栓湿重-给药组血栓湿重)×100％]/对照组血栓湿重由下表8可见，脉络宁冻干粉10.0g/kg、20.0g/kg组、香丹注射液组与模型组比较均能明显抑制大鼠血栓形成(P＜0.05或P＜0.01)，脉络宁注射液与5.0g/kg组有一定抑制作用，但没有显著差异。表8对大鼠颈总动、静脉搭桥形成血栓影响(n＝10)与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01结论脉络宁冻干粉对大鼠脑栓塞具有良好的治疗作用，改善脑栓塞所致大鼠的偏瘫体证，缩小脑内梗死面积，减轻脑水肿和神经细胞的继发性损害；有效延长小鼠断头呼吸的时间，增加呼吸的次数；抑制血小板聚集，延长凝血时间，对大鼠血栓形成具有明显的抑制作用；表明脉络宁冻干粉对脑中风具有明显的防治作用。稳定性试验1.方法三批脉络宁冻干粉样品(批号分别为030515、030521、030526)以临床试验用包装(在包装材料质地与结构上相当于上市药品的包装)室温放置，连续考察12个月，观察其变异情况，取其平均值。2.结果结果见表9。表9三批样品稳定性研究结果下面通过具体实施例来解释本发明，旨在进一步说明本发明，不以任何形式对本发明构成限制。具体实施例方式实施例1提取物的制备及含量测定提取物的制备取2500g石斛、5000g玄参、7500g牛膝、5000g金银花粉碎成粗粉，用60％乙醇以250ml/min速度渗漉提取，收集8倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩至50℃下相对密度为1.10的浸膏，离心去除不溶性杂质，加8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.05的浸膏，过滤，去除沉淀，调节pH值至3～4，等体积乙酸乙酯萃取8次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，60℃真空干燥得提取物365g。含量测定照《中国药典》2000年版一部高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。供试品溶液制备精密称取提取物0.1g，加甲醇超声溶解两次，滤过，滤液转移至100ml容量瓶中，补充甲醇至刻度作为供试品溶液。绿原酸含量测定色谱条件DiamonsilC18，5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈-0.1％H3PO4水溶液(11∶89)；柱温30C；流速1ml/min；检测波长327nm。理论板数按绿原酸对照品峰计大于3000。绿原酸对照品溶液的配制精确称取绿原酸对照品4.56mg，加甲醇定容到100ml，精密吸取1ml至10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度即得。测定法分别精密取对照品与供试品溶液各10ul注入高效液相色谱仪测定，提取物中绿原酸含量为15.2％。肉桂酸含量测定色谱条件DiamonsilC18，5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈-0.1％H3PO4水溶液(28∶72)；柱温30℃；流速1ml/min；检测波长276nm。，理论板数按肉桂酸对照品峰计大于3000。肉桂酸对照品溶液的配制精密称取肉桂酸对照品4.49mg，用甲醇定容到50ml，精密吸取1ml至10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul注入高效液相色谱仪依法测定，提取物中肉桂酸的含量为0.05％。滨蒿内酯含量测定色谱条件DiamonsilC18，5μm，250×4.6mm(迪马公司产)；流动相∶乙腈-水(30∶70)；柱温30℃；流速1ml/min；检测波长290nm。理论板数按滨蒿内酯对照品峰计大于3000。滨蒿内酯对照品溶液的配制精密称取滨蒿内酯对照品2.79mg，加甲醇定容到100ml即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul注入高效液相色谱仪依法测定，提取物中滨蒿内酯的含量为0.05％。实施例2提取物的制备取5000g石斛、5000g玄参、5000g牛膝、5000g金银花粉碎成粗粉，用70％乙醇以300ml/min速度渗漉提取，收集10倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩至50℃下相对密度为1.15的浸膏，离心去除不溶性杂质，加8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.15的浸膏，过滤，去除沉淀，调节pH值至5～6，等体积乙酸乙酯萃取8次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，50℃真空干燥得提取物320g。以实施例1的测定方法测定，其中绿原酸含量为11.3％，肉桂酸含量为0.10％，滨蒿内酯含量为0.06％。实施例3提取物的制备取8000g石斛、2000g玄参、4000g牛膝、6000g金银花粉碎成粗粉，用80乙醇以200ml/min速度渗漉提取，收集12倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩至50℃下相对密度为1.20的浸膏，离心去除不溶性杂质，加8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.15的浸膏，过滤，去除沉淀，调节pH值至1～2，等体积乙酸乙酯萃取10次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，50℃真空干燥得提取物352g。以实施例1的测定方法测定，其中绿原酸含量为9.8％，肉桂酸含量为0.11％，滨蒿内酯含量为0.06％。实施例4提取物的制备取2500g石斛、6000g玄参、5500g牛膝、6000g金银花粉碎成粗粉，用90％乙醇以200ml/min速度渗漉提取，收集12倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩至50℃下相对密度为1.20的浸膏，离心去除不溶性杂质，加8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.20的浸膏，过滤，去除沉淀，调节pH值至3～4，等体积乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，50℃真空干燥得提取物343g。以实施例1的测定方法测定，其中绿原酸含量为16.6％，肉桂酸含量为0.15％，滨蒿内酯含量为0.07％。实施例5提取物的制备取5000g石斛、5000g玄参、5000g牛膝、5000g金银花粉碎成粗粉，用70％乙醇以100ml/min速度渗漉提取，收集12倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩至50℃下相对密度为1.20的浸膏，离心去除不溶性杂质，加6倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.20的浸膏，过滤，去除沉淀，调节pH值至1～2，等体积乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，60℃真空干燥得提取物345g。以实施例1的测定方法测定，其中绿原酸含量为18.1％，肉桂酸含量为0.08％，滨蒿内酯含量为0.12％。实施例6提取物的制备取3500g石斛、4000g玄参、6500g牛膝、6000g金银花粉碎成粗粉，用80％乙醇以250ml/min速度渗漉提取，收集16倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩至50℃下相对密度为1.30的浸膏，离心去除不溶性杂质，加6倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.20的浸膏，过滤，去除沉淀，调节pH值至1～2，等体积乙酸乙酯萃取8次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，50℃真空干燥得提取物367g。以实施例1的测定方法测定，其中绿原酸含量为15.3％，肉桂酸含量为0.10％，滨蒿内酯含量为0.08％。实施例7提取物的制备取4500g石斛、5500g玄参、8000g牛膝、2000g金银花粉碎成粗粉，用55％乙醇以200ml/min速度渗漉提取，收集14倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩至50℃下相对密度为1.35的浸膏，离心去除不溶性杂质，加4倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.20的浸膏，过滤，去除沉淀，调节pH值至1～2，等体积乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，70℃真空干燥得提取物333g。以实施例1的测定方法测定，其中绿原酸含量为17.8％，肉桂酸含量为0.07％，滨蒿内酯含量为0.06％。实施例8提取物的制备取4000g石斛、8000g玄参、3000g牛膝、5000g金银花粉碎成粗粉，用60％乙醇以200ml/min速度渗漉提取，收集12倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩至50℃下相对密度为1.35的浸膏，离心去除不溶性杂质，加8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.05的浸膏，过滤，去除沉淀，调节pH值至1～2，等体积乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，60℃真空干燥得提取物365g。以实施例1的测定方法测定，其中绿原酸含量为14.4％，肉桂酸含量为0.09％，滨蒿内酯含量为0.07％。实施例9提取物的制备取3000g石斛、6000g玄参、6000g牛膝、5000g金银花粉碎成粗粉，用70％乙醇以300ml/min速度渗漉提取，收集12倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩至50℃下相对密度为1.20的浸膏，离心去除不溶性杂质，加8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.15的浸膏，过滤，去除沉淀，调节pH值至1～2，等体积乙酸乙酯萃取8次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，50℃真空干燥得提取物338g。以实施例1的测定方法测定，其中绿原酸含量为12.4％，肉桂酸含量为0.08％，滨蒿内酯含量为0.06％。实施例10提取物的制备取3000g石斛、8000g玄参、4500g牛膝、4500g金银花粉碎成粗粉，用70％乙醇以150ml/min速度渗漉提取，收集16倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩至50℃下相对密度为1.25的浸膏，离心去除不溶性杂质，加8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.05的浸膏，过滤，去除沉淀，调节pH值至1～2，等体积乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，50℃真空干燥得提取物355g。以实施例1的测定方法测定，其中绿原酸含量为10.4％，肉桂酸含量为0.05％，滨蒿内酯含量为0.05％。实施例11脉络宁冻干粉的制备实施例1的提取物中加注射用水2000ml加热煮沸8分钟，自然放冷，冷藏，过滤，滤液以截留分子量为5000的超滤膜超滤，收集超滤液，滤液中加入甘露醇200g，PVP2g，补加注射用水至3000ml，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂1000支。实施例12脉络宁冻干粉的制备实施例1的提取物中加注射用水2000ml加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏，过滤，滤液以截留分子量为6000的超滤膜超滤，收集超滤液，滤液中加入甘露醇280g，PVP3g，补加注射用水至3000ml，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂1000支。实施例13脉络宁冻干粉的制备实施例5的提取物中加注射用水2000ml加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏，过滤，滤液以截留分子量为7000的超滤膜超滤，收集超滤液，滤液中加入甘露醇300g，乳糖30g，补加注射用水至3000ml，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂1000支。实施例14脉络宁冻干粉的制备实施例6的提取物中加注射用水2000ml加热煮沸12分钟，自然放冷，冷藏，过滤，滤液以截留分子量为5000的超滤膜超滤，收集超滤液，滤液中加入右旋糖苷300g，PVP8g，补加注射用水至3000ml，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂1000支。实施例15脉络宁冻干粉的制备实施例5的提取物中加注射用水2000ml加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏，过滤，滤液以截留分子量为5000的超滤膜超滤，收集超滤液，滤液中加入甘露醇330g，PVP6g，补加注射用水至3000ml，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂1000支。实施例16脉络宁冻干粉的制备实施例8的提取物中加注射用水2000ml加热煮沸15分钟，自然放冷，冷藏，过滤，滤液以截留分子量为7000的超滤膜超滤，收集超滤液，滤液中加入甘露醇260g，葡萄糖50g，补加注射用水至3000ml，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂1000支。实施例17脉络宁冻干粉的制备实施例2的提取物中加注射用水2000ml加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏，过滤，滤液以截留分子量为5000的超滤膜超滤，收集超滤液，滤液中加入乳糖150g，右旋糖苷150g，PVP8g，补加注射用水至3000ml，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂1000支。实施例18脉络宁冻干粉的制备实施例3的提取物中加注射用水2000ml加热煮沸12分钟，自然放冷，冷藏，过滤，滤液以截留分子量为5500的超滤膜超滤，收集超滤液，滤液中加入右旋糖苷350g，补加注射用水至3000ml，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂1000支。实施例19脉络宁冻干粉的制备实施例5的提取物中加注射用水2000ml加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏，过滤，滤液以截留分子量为6500的超滤膜超滤，收集超滤液，滤液中加入葡聚糖280g，补加注射用水至3000ml，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂1000支。实施例20脉络宁冻干粉的制备实施例9的提取物中加注射用水2000ml加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏，过滤，滤液以截留分子量为5000的超滤膜超滤，收集超滤液，冷藏滤液中加入右旋糖苷280g，蔗糖10g，补加注射用水至3000ml，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂1000支。以上实施例并非穷举，本领域普通技术人员可以理解，对本发明进行的任何同等的替代或改变，如工艺中常规参数的变化，根据需要将制剂的规格变化等均在本发明的保护范围之内。权利要求1.一种脉络宁注射用粉针剂，其原料药重量配比为石斛1～4份金银花1～4份牛膝1～4份玄参1～4份，其特征在于，它以包括下述步骤的方法制备而成(1)取处方量的上述药材，乙醇渗漉提取，渗漉液浓缩成浸膏，离心，加水，静置，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，过滤，滤液调节pH值，乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯后干燥得提取物；(2)加水溶解提取物，冷藏，过滤，滤液超滤，收集超滤液，加入赋形剂，制成粉针剂。2.如权利要求1所述的脉络宁注射用粉针剂，其特征在于，它以包括下述步骤的方法制备而成(1)取处方量的上述药材粉碎，用50～90％乙醇渗漉提取，收集8～16倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩成浸膏，离心去除不溶性杂质，加2～8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，过滤，调节pH值至1～6，乙酸乙酯萃取2～8次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后真空干燥得提取物；(2)在提取物中加注射用水加热煮沸使溶解，自然放冷，冷藏，过滤，滤液超滤，收集超滤液，滤液中加入赋形剂，补加注射用水至处方量，调pH值，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂。3.如权利要求1所述的脉络宁注射用粉针剂，其特征在于，它以包括下述步骤的方法制备而成(1)取处方量的上述药材粉碎成粗粉，用50～90％乙醇以100～300ml/min速度渗漉提取，收集10.14倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩至50℃下相对密度为1.0～1.3的浸膏，离心去除不溶性杂质，加4～8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.0～1.3的浸膏，过滤，去除沉淀，调节pH值至1～4，等体积乙酸乙酯萃取4～8次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，50.80℃真空干燥得提取物；(2)在提取物中加注射用水加热煮沸8～15分钟，自然放冷，冷藏，过滤，滤液以截留分子量为3000～8000的超滤膜超滤，收集超滤液，滤液中加入赋形剂，补加注射用水至处方量，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂。4.如权利要求1～3任一权利要求所述的脉络宁注射用粉针剂，其特征在于，步骤(3)中所述的赋形剂选自甘露醇、PVP、葡聚糖、乳糖、右旋糖苷、蔗糖中的一种或多种。5.如权利要求1～3任一权利要求所述的脉络宁注射用粉针剂，其特征在于，所述提取物中绿原酸含量为8～20％，肉桂酸含量为0.05～0.20％，滨蒿内酯含量为0.05～0.15％。6.如权利要求5所述的脉络宁注射用粉针剂，其特征在于，所述提取物中绿原酸含量为8～18％，肉桂酸含量为0.06～0.12％，滨蒿内酯含量为0.05～0.10％。7.如权利要求6所述的脉络宁注射用粉针剂，其特征在于，所述提取物中绿原酸含量为10～15％，肉桂酸含量为0.07～0.10％，滨蒿内酯含量为0.05～0.08％。8.权利要求1～3任一权利要求所述的脉络宁注射用粉针剂，其特征在于，其原料药和赋形剂具有以下重量份配比牛膝2000～8000玄参2000～8000石斛2000～8000金银花2000～8000甘露醇200～500PVP3～8。9.如权利要求8所述的脉络宁注射用粉针剂，其特征在于，原料药和赋形剂具有以下重量份配比牛膝5000玄参5000石斛5000金银花5000甘露醇330PVP6。10.权利要求1～3任一所述的脉络宁注射用粉针剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)取处方量的上述药材粉碎，用50～90％乙醇渗漉提取，收集8～16倍生药量的渗漉液，低温减压回收乙醇，减压浓缩成浸膏，离心去除不溶性杂质，加2～8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，过滤，调节pH值至1～6，乙酸乙酯萃取2～8次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后真空干燥得提取物；(2)在提取物中加注射用水加热煮沸使溶解，自然放冷，冷藏，过滤，滤液超滤，收集超滤液，滤液中加入赋形剂，补加注射用水至处方量，调pH值，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂。其中，步骤(3)中所述的赋形剂选自甘露醇、PVP、葡聚糖、乳糖、右旋糖苷、蔗糖中的一种或多种。全文摘要本发明属于中药制药
技术领域：
，具体公开了一种脉络宁注射制剂及其制备方法。本发明由石斛、牛膝、玄参、金银花四种药材按一定重量份配比提取有效成分后加入相应辅料，经超滤、调pH值，除菌过滤，加塞，冷冻干燥得冻干粉针剂；或灭菌后封盖，得注射液。有效成分制备过程为四味药材加入乙醇渗漉提取后，水沉，以乙酸乙酯纯化。本发明的脉络宁注射制剂有效成分含量高，制备工艺简洁，适合工业生产，且最大限度地去除了杂质，从而保证了其安全、有效、稳定。文档编号A61P9/14GK101085226SQ200610014279公开日2007年12月12日申请日期2006年6月8日优先权日2006年6月8日发明者叶正良,郑永锋,宋兆辉,白雨申请人:天津天士力之骄药业有限公司