治疗脉管炎的纳米乳剂及其制备方法

专利名称：：治疗脉管炎的纳米乳剂及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药纳米乳剂，具体而言，是一种治疗脉管炎的纳米乳剂及其制备方法。
背景技术：
：脉络宁注射液是在著名医方"四妙勇安汤"的基础上研制而成的中药复方注射剂，由牛膝、玄参、石斛、金银花四味中药组成，广泛应用于血栓闭塞性脉管炎、动脉硬化性闭塞症、脑血栓形成及后遗症、多发性大动脉炎、四肢急性动脉栓塞症、糖尿病坏疽、静脉血栓形成及血栓性静脉炎等。中国专利CN1557398A公开了其还具有预防和治疗心绞痛的作用。但是现有的脉络宁注射液的制备工艺采用水提醇沉法将四种药材同时提取，然后再用乙酸乙酯萃取得有效成分(见"脉络宁注射液的工艺方法"，公开号CN1078148A)，然而方中含有绿原酸等对光照和空气不稳定性成分，在贮存过程中容易出现注射液色泽变化、有效成分含量降低等现象，方中存有有机酸与生物碱等成分，在水针状态下这些成分极易发生絮凝沉淀，同时此种方法对鞣质去除不彻底，严重影响到脉络宁注射液临床应用的安全性和有效性。因此，将其制备成更加安全、有效、稳定且制备工艺简洁、实用的脉络宁纳米乳剂具有重要的现实意义。
发明内容本发明的目的之一是针对现有技术的不足，提供一种安全、有效、稳定的治疗脉管炎的纳米乳剂。本发明的另一目的是提供该纳米乳剂的制备方法。本发明是通过下面的技术方案实现的本发明的治疗脉管炎的纳米乳剂含有由牛膝、玄参、石斛和金银花制备的有效成分，油，水，表面活性剂，等渗调节剂，其中有效成分油表面活性剂等渗调节剂的重量比为I:1-20:1-10:1-10。优选地，有效成分油表面活性剂等渗调节剂的重量比为l:卜1():卜1():卜1()。最佳地，有效成分油表面活性剂等渗调节剂的重量比为l:卜10:卜5:卜5。在本发明的治疗脉管炎的纳米乳剂中，所述的油选自植物油或动物油，其中植物油选自大豆油、玉米油、花生油、橄榄油、蓖麻油、椰子油、菜籽油、棉籽油；所述的动物油选自油酸、三甘油酯、海狗油。优选大豆油。所述的表面活性剂选自大豆磷脂，蛋黄卵磷脂，氢化卵磷脂；优选蛋黄卵磷脂。所述的等滲调节剂选自甘油，山梨醇，甘露醇，葡萄糖；优选甘油。本发明的治疗脉管炎的纳米乳剂中的有效成分以包括下述步骤的方法制备而成，其原料药重量配比为石斛14份金银花1~4份牛膝14份玄参1~4份(1)牛膝、玄参、石斛药材水提，两次醇沉，再水沉，过滤，得滤液A;(2)金银花药材水提醇沉，滤液浓縮，离心，调pH值至l4，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相酸洗后调节pH值至58，得水溶液B;(3)合并A和B，过滤，滤液浓縮，即得。优选地，所述步骤(l)中水提为水加热回流，第一次醇沉使溶液中含乙醇量达到4065。/。，第二次醇沉使溶液中含乙醇量达到70~90%;更优选地，所述步骤(l)中的水提为加热回流提取1~3次，每次加水量为药材重量的610倍；第一次醇沉使溶液中含乙醇量达到50~65%，第二次醇沉使溶液中含乙醇量达到70~85%。优选地，所述步骤(2)中水提为水加热回流，醇沉使溶液中含乙醇量达到6080%;更优选地，所述步骤(2)中水提为加热回流提取1~3次，每次加水量为药材重量的610倍，乙酸乙酯萃取前调节pH值至13，萃取后调节pH值至5.57，所述酸为2~10%盐酸。最佳地，本发明的治疗脉管炎的纳米乳剂中的有效成分以包括下述歩骤的方法制备而成，其原料药重量配比为石斛1~4份金银花1~4份牛膝14份玄参14份(1)牛膝、玄参、石斛药材粗粉混合物，加水浸泡，加热回流提取2次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次2h，过滤，合并提取液，并减压浓縮至相对密度为1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量达到60%，冷藏，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮到相对密度为1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量达到80%，冷藏，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮至无醇味，加水稀释，冷藏过夜，过滤得滤液A;(2)金银花粗粉用水回流提取2次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次2h，过滤，合并提取液，减压浓縮至相对密度为U5(5(TC)，加乙醇使含醇量达到70%，冷藏过夜，过滤，滤液减压浓縮至相对密度为U5(5(TC)，离心去除沉淀，调节PH值为1.02.0，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用5。/。盐酸洗2次后用5。/。NaOH水溶液调节PH值为6.57.0，分层，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B,过滤，滤液浓縮，即得。本发明的纳米乳剂的制备方法包括以下步骤a)牛膝、玄参、石斛药材水提，两次醇沉，再水沉，过滤，得滤液A;(2)金银花药材水提醇沉，滤液浓縮，离心，调pH值至14，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相酸洗后调节pH值至58，得水溶液B;(3)合并A和B，过滤，滤液浓縮，得有效成分；(4)将有效成分、表面活性剂溶于醇溶液中，将该溶液加到油中并搅拌至澄明，除去醉，得油相，将溶于水的表面活性剂和等渗调节剂溶于水中，得水相，将油相加入水相得初乳，再经进一步乳化，即得。优选地，所述步骤(l)中水提为水加热回流，第一次醇沉使溶液中含乙醇量达到4065%，第二次醇沉使溶液中含乙醇量达到70~90%;更优选地，所述步骤a)中的水提为加热回流提取13次，每次加水量为药材重量的610倍；第一次醇沉使溶液中含乙醇量达到5065%，第二次醇沉使溶液中含乙醇量达到7085%。优选地，所述步骤(2)中水提为水加热回流，醇沉使溶液中含乙醇量达到60~80%;更优选地，所述步骤(2)中水提为加热回流提取13次，每次加水量为药材重量的610倍，乙酸乙酯萃取前调节pH值至13,萃取后调节pH值至5.57，所述酸为2~10%盐酸。最佳地，本发明的治疗脉管炎的纳米乳剂的制备方法包括以下步骤(1)牛膝、玄参、石斛药材粗粉混合物，加水浸泡，加热回流提取2次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次2h，过滤，合并提取液，并减压浓縮至相对密度为1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量达到60%，冷藏，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮到相对密度为1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量达到80%，冷藏，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮至无醇味，加水稀释，冷藏过夜，过滤得滤液A;(2)金银花粗粉用水回流提取2次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次2h，过滤，合并提取液，减压浓縮至相对密度为U5(5(TC)，加乙醇使含醇量达到70%，冷藏过夜，过滤，滤液减压浓縮至相对密度为1.15(5(TC)，离心去除沉淀，调节PH值为1.02.0，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用5%盐酸洗2次后用5%NaOH水溶液调节PH值为6.5~7.0，分层，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B,过滤，滤液浓缩，得有效成分；(4)将有效成分、表面活性剂溶于醇溶液中，将该溶液加到油中并搅拌至澄明，除去醇，得油相，将溶于水的表面活性剂和等渗调节剂溶于水中，得水相，将油相加入水相用剪切乳化器乳化得初乳，再经高压匀质机均化，调pH,即得。本发明的治疗脉管炎的纳米乳剂采用简洁、实用的生产工艺解决了现有脉络宁注射液在贮存过程中容易出现色泽变化、有效成分含量降低，发生絮凝沉淀，对鞣质去除不彻底等问题，有效地提高了产品的安全性和有效性。为了更好的理解本发明，以下通过实验例来进一步阐述本发明药物(以下称脉络宁纳米乳剂)的有益效果，实验例为本发明药物的药效学动物试验。下面试验旨在进一步说明本发明药物的作用，而非对本发明的限制。本实验例采用的发明药物是按实施例IO制备而成。药效学试验1.实验材料1.1药品受试药物本发明药物，由天津天士力制药股份有限公司提供，规格10g生药/ml，生产批号041203。阳性对照药脉络宁注射液，金陵药业股份有限公司南京金陵制药厂产品，生产批号200312072,国家准字Z32021102。阴性对照氯化钠注射液，由江西制药有限责任公司产品，批号030710-1。1.2动物清洁级昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半，合格证号2001A030;清洁级SD大鼠，雄性体重240-280g，合格证号2001A029;新西兰大白兔，体重1.5-2.5kg，雌雄不限，合格证号2001A033;以上均由中山大学实验动物中心产品。1.3剂量设置通过本发明药物对小鼠全脑缺血缺氧(小鼠断头呼吸时间和次数)以及凝血时间的影响预试得出14.6g生药/kg为较佳有效剂量，取其l/2为低剂量，2倍为高剂量，低、中、高剂量分别为7.3、14.6、29.2g生药/kg。通过体表面积折算得，大鼠低、中、高剂量分别为5.0、10.0、20.0g生药/kg。脉络宁注射液，人用量为15ml沃，通过体表面积换算，小鼠约为1.95ml/kg,大鼠约为1.35ml/kg。药物稀释方法、给药途径及体积取同一批号的各实验所用药品，用生理盐水配制，每日现配制现用。给药途径静脉注射或腹腔注射。各种单位给药容积分别为小鼠为0.15ml/l()g体重；大鼠为0.4ml/100g体重。1.4数据处理所有实验数据以^士s表示。计量数据由SPSS11.0统计软件进行方差分析及组间检验。2.方法与结果2.1脉络宁纳米乳剂对小鼠急性脑缺氧的影响昆明种小鼠70只，体重18-22g，随机分成7组，每组10只。受试药组分别为脉络宁纳米乳剂7.3g/kg、14.6g/kg、29.2g/kg，58.4g/kg组；阳性对照药脉络宁注射液1.95ml/kg;阴性对照组(给予等容量的生理盐水)。腹腔注射给药，共3次，每天1次，末次给药后15mh将小鼠逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间及张口次数作为耐缺氧指标。结果表明，脉络宁纳米乳剂M.6g/kg、29.2g/kg、58.4g/kg组和脉络宁注射液静脉给药后均能明显延长小鼠断头张口次数及喘息时间，与对照组比较呈显著差异(PO.05或P4).01)。详见表1。表1脉络宁纳米乳剂对小鼠急性脑缺氧的影响(^土S,t^10)<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>与生理盐水组比较，'P<0.05，2.2脉络宁纳米乳剂对凝血时间、血小板聚集和血栓形成的影响2.2.1对小鼠凝血时间的影响昆明种小鼠84只，体重18-22g,雌雄兼用，按体重和性别随机分成12组，给药容积为0.15ml/10g体重。分别给予静脉注射生理盐水溶液，脉络宁纳米乳剂7.3g/kg、M.6g/kg、29.2g/kg、58.4g/kg，脉络宁注射液1.95ml/kg。给药后15min，眼球取血，玻片法测定凝血时间。由表2可见，脉络宁纳米乳剂14.6g/kg、29.2g/kg、58.4g/kg均有明显的延长小鼠凝血时间的作用(pO.05或PO.01)。脉络宁注射液组凝血时间明显延长(p<0.05)。表2脉络宁纳米乳剂对小鼠凝血时间的影响(；±*，n=10)<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2.2.2对体外血小板聚集的影响家兔颈总动脉放血，用硅化试管取血，以3.8%枸橼酸钠(1/10血量)抗凝，800r/min离心IO分钟，吸出上层富血小板血浆(PRP)，再以3000r/min离心，取出贫血小板血桨(l)PP)。用PPP将透光度调到100，然后以PRP调零，加搅拌棒、加生理盐水或脉络宁纳米乳剂(0.1g、0.2g、0.4g/ml)及脉络宁注射液(0.02ml/ml)，37。C温育。将PRP移至测定孔，加入ADP(终浓度为35pmol/L)，观察5min最大聚集程度，仪器为TYXN—91型智能血小板聚集仪。计算血小板聚集百分率(Plateletaggregation,PAG))与抑制聚集百分率。由下表3可见，脉络宁纳米乳剂对ADP诱导的家兔血小板聚集有明显的抑制作用，随着剂量的增大抑制作用逐渐增强，即其对ADP诱导的家兔血小板聚集的抑制作用有明显的剂量依赖性。表3脉络宁纳米乳剂对ADP诱导的体外家兔血小板聚集的影响(x土.s，n=10)<table>complextableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>与缓冲液对照组比较，*为卩<0.05，"为PO.OI2.2.3对大鼠动-静脉旁路血栓形成的影响SD大鼠50只，随机分为5组，每组10只，10。/。水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射Op)麻醉固定，分别从舌下静脉给予脉络宁纳米乳剂5.0g/kg、10.0g/kg、20.0g/kg和脉络宁注射液1.95ml/kg组；对照组给予等容积的生理盐水。于给药后20min，分离右侧颈总动脉和左侧颈外静脉。在聚乙烯管中段放入一根长6cm4号丝线，用肝素生理盐水溶液(50ul/ml)充满聚乙烯管。当聚乙烯管的一端插入左颈外静脉后，另一端塑料管注入肝素(50yl/m)0.2ml抗凝，然后再将此端插入右侧颈总动脉。打开动脉夹，让血液从右侧颈总动脉流入管内，返回左侧颈外静脉，开放血液15min后，中断血流，迅速取出聚乙烯管中的血栓在分析天平上称重，求出血栓抑制率。血栓抑制率=[(对照组血栓湿重-给药组血栓湿重)XI00。/。]/对照组血栓湿重由下表4可见，脉络宁纳米乳剂10.0g/kg、20.0g/kg组与模型组比较均能明显抑制大鼠血栓形成(PO.05或P〈0.01),脉络宁纳米乳剂5.0g/kg组有一定抑制作用，但没有显著差异。考4整^宁辨生孚L剂对大鼠颈总动、静脉搭桥形成血辁寧响(S±a，n=l0)<table>complextableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>与模型组比较*尸<0.05,**尸<0.01结论脉络宁纳米乳剂可有效延长小鼠断头呼吸的时间,增加呼吸的次数；抑制血小板聚集，延长凝血时间，对大鼠血栓形成具有明显的抑制作用.表明脉络宁纳米乳剂对脑中风具有明显的防治作用。稳定性试验1.方法三批脉络宁纳米乳剂样品(批号分别为050212、050215、050218)以临床试验用包装(在包装材料质地与结构上相当于上市药品的包装)室温放置，连续考察12个月，观察其变异情况，取其平均值。2.结果结果见表5。表5三批样品稳定性研究结果<table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>下面通过具体实施例来解释本发明，旨在进一歩说明本发明，不以任何形式对本发明构成限制。具体实施例方式实施例1提取物的制备及含量测定提取物的制备(1)取5000g石斛、5000g玄参、5000g牛膝粉碎成粗粉，加水浸泡，加热回流提取两次，第一次加8倍量水，第二次加6倍量水，每次2h，过滤，合并滤液，减压浓縮至相对密度为U5(50°C)，加乙醇使含醇量达到60%，冷藏，过滤，滤液减压浓縮至相对密度为1.15(5()。C)，加乙醇使含醇量达到80%，冷藏，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮至无醇味，加水稀释，冷藏过夜，过滤得滤液A;(2)5000g金银花粗粉用水回流提取2次，第一次加8倍量水，第二次加6倍量水，每次2h，过滤，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.15(50°C)，加乙醇使含醇量达到70%，冷藏过夜，过滤，滤液减压浓縮至相对密度为U5(5(TC)，离心去除沉淀，调节PH值为UK2.()，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用5%盐酸洗2次后用5%NaOH水溶液调节PH值为6.57.(>，分层，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B，过滤，滤液浓縮干燥，得提取物365g。含量测定照《中国药典》2000年版一部高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。供试品溶液制备精密称取提取物0.1g，加甲醇超声溶解两次，滤过，滤液转移至100ml容量瓶中，补充甲醇至刻度作为供试品溶液。绿原酸含量測定色谱条件DiamonsilCl8，5nm，250x4.6mm;流动相乙腈-0.1。/。H3PO4水溶液(l1:89);柱温3(TC;流速lml/min;检测波长327nm。理论板数按绿原酸对照品峰计大于3000。绿原酸对照品溶液的配制精确称取绿原酸对照品4.56mg，加甲醇定容到100ml，精密吸取lml至10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度即得。澜定法分别精密取对照品与供试品溶液各10ul注入高效液相色谱仪测定，提取物中绿原酸含量为15.2%。肉桂酸含量測定色谱条件DiamonsilCl8，5拜，250x4.6mm;流动相乙腈-0.1%14*04水溶液(28:72>:柱温30'C;流速lml/min;检测波长276nm。，理论板数按肉桂酸对照品峰计大于3000。肉桂酸对照品溶液的配制精密称取肉桂酸对照品4.49mg，用甲醇定容到50ml，精密吸取lm侄10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度即得。渊定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul注入高效液相色谱仪依法测定，提取物中肉桂酸的含量为0.05%。滨蒿内醮含量渕定色谱条件DiamonsilCl8，5pm，250x4.6mm(迪马公司产)；流动相:乙腈-水(30:70);柱温30'C;流速lml/min;检测波长290nm。理论板数按滨蒿内酯对照品峰计大于3000。滨蒿内酯对照品溶液的配制精密称取滨蒿内酯对照品2.79mg，加甲醇定容到100ml即得。瀰定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul注入高效液相色谱仪依法测定，提取物中滨蒿内酯的含量为0.05%。实施例2提取物的制备(1)取6000g石斛、5000g玄参、4000g牛膝粉碎成粗粉，加水浸泡，加热回流提取两次，第一次加10倍量水，第二次加6倍量水，每次2h，过滤，合并滤液，减压浓縮至相对密度为1.15(50°C)，加乙醉使含醇量达到50%，冷藏，过滤，滤液减压浓縮至相对密度为U5(50°C)，加乙醇使含醇量达到70%，冷藏，过滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至无醇味，加水稀释，冷藏过夜，过滤得滤液A;(2)5000g金银花粗粉用水回流提取2次，第一次加10倍量水，第二次加8倍量水，每次2h，过滤，合并提取液，减压浓縮至相对密度为1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量达到80%，冷藏过夜，过滤，滤液减压浓縮至相对密度为1.15(5(TC)，离心去除沉淀，调节PH值为2.03.(>，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用8%盐酸洗2次后用5%NaOH水溶液调节PH值为5.56.5,分层，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B，过滤，滤液浓縮干燥得提取物332g。以实施例1的测定方法测定，其中绿原酸含量为12.3%，肉桂酸含量为0.10%，滨蒿内酯含量为0.08%。实施例3提取物的制备(1)取8000g石斛、2000g玄参、5000g牛膝粉碎成粗粉，加水浸泡，加热回流提取两次，第一次加8倍量水，第二次加6倍量水，每次2h，过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.15(50°C)，加乙醇使含醇量达到50%，冷藏，过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.15(5()°C)，加乙醇使含醇量达到75%,冷藏，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮至无醇味，加水稀释，冷藏过夜，过滤得滤液A;(2)5000g金银花粗粉用水回流提取2次，第一次加8倍量水，第二次加6倍量水，每次2h,过滤，合并提取液，减压浓縮至相对密度为U5(5(TC)，加乙醇使含醇量达到70%，冷藏过夜，过滤，滤液减压浓縮至相对密度为1.15(5(TC)，离心去除沉淀，调节PH值为1.02.0，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用4%盐酸洗2次后用5%NaOH水溶液调节PH值为6.0、6.5，分层，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B，过滤，干燥得提取物360g。以实施例1的测定方法测定，其中绿原酸含量为10.8%,肉桂酸含量为0.14%，滨蒿内酯含量为0.07%。实施例4提取物的制备(1)取2500g石斛、6000g玄参、4500g牛膝粉碎成粗粉，加水浸泡，加8倍量水加热回流提取2h，过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量达到60%，冷藏，过滤，滤液减压浓縮至相对密度为1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量达到70%，冷藏，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮至无醇味，加水稀释，冷藏过夜，过滤得滤液A;(2)4500g金银花粗粉加8倍量水回流提取2h，过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.15(50°C)，加乙醇使含醇量达到75%，冷藏过夜，过滤，滤液减压浓縮至相对密度为1.15f5(>°C),离心去除沉淀，调节PH值为1.02.0，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用5%盐酸洗2次后用5n/。NaOH水溶液调节PH值为6.57.0，分层，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B，过滤，干燥得提取物342g。以实施例1的测定方法测定，其中绿原酸含量为18.6%，肉桂酸含量为0.18%，滨蒿内酯含量为0.08%。实施例5提取物的制备(1)取3500g石斛、5000g玄参、5500g牛膝粉碎成粗粉，加水浸泡，加6倍量水加热回流提取2h，过滤，滤液减压浓縮至相对密度为1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量达到65%，冷藏，过滤，滤液减压浓縮至相对密度为1.15(50°C)，加乙醇使含醇量达到80%，冷藏，过滤，滤液减压回收乙醇并浓縮至无醇味，加水稀释，冷藏过夜，过滤得滤液A;(2)2500g金银花粗粉加8倍量水回流提取2h，过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.15(50'C)，加乙醇使含醇量达到75%，冷藏过夜，过滤，滤液减压浓縮至相对密度为1.15G()。C)，离心去除沉淀，调节PH值为1.02.0，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用5%盐酸洗2次后用5。/。NaOH水溶液调节PH值为6.57.0，分层，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B，过滤，干燥得提取物345g。以实施例1的测定方法测定，其中绿原酸含量为19.1%，肉桂酸含量为0.08%，滨蒿内酯含量为0.10%。实施例6纳米乳剂的制备将实施例1的提取物100g，大豆磷脂1000g加入乙醇溶解，然后加入到1900g大豆油中，搅拌混合至澄明，旋转蒸发除去乙醇，得油相；将1000g甘油分散在注射用水中，得水相，将油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分钟(转速2600转/分)，得初乳，将初乳用高压均质机均化(压力10000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节其pH为6.9，注射用水定容至1000ml，分装，充氮，115。C灭菌30分钟，分装，得纳米乳剂1000支。实施例7纳米乳剂的制备将实施例1的提取物100g，蛋黄卵磷脂1000g加入乙醇溶解，然后加入到100()g大豆油中，搅拌混合至澄明，旋转蒸发除去乙醇，得油相；将1000g甘油分散在注射用水中，得水相，将油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分钟(转速2600转/分)，得初乳，将初乳用高压均质机均化(压力10000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节其pH为6.9，注射用水定容至1000ml，分装，充氮，115。C灭菌30分钟，分装，得纳米乳剂1000支。实施例8纳米乳剂的制备将实施例2的提取物100g，蛋黄卵磷脂1000g加入乙醇溶解，然后加入到1500g花生油中，搅拌混合至澄明，旋转蒸发除去乙醇，得油相；将700g甘露醇分散在注射用水中，得水相，将油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分钟(转速2600转/分)，得初乳，将初乳用高压均质机均化(压力10000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节其pH为7.0，注射用水定容至1000ml，分装，充氮，115。C灭菌30分钟，分装，得纳米乳剂1000支。实施例9纳米乳剂的制备将实施例1的提取物100g，蛋黄卵磷脂500g加入乙醇溶解，然后加入到1200g菜籽油中，搅拌混合至澄明，旋转蒸发除去乙醇，得油相；将1000g甘油分散在注射用水中，得水相，将油相和水相混合，用剪切乳化器乳化5分钟(转速2600转/分)，得初乳，将初乳用高压均质机均化(压力10000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节其pH为6.9，注射用水定容至1000ml，分装，充氮，115。C灭菌30分钟，分装，得纳米乳剂1000支。实施例IO纳米乳剂的制备将实施例1的提取物100g，大豆磷脂550g加入乙醇溶解，然后加入到1000g大豆油中，搅拌混合至澄明，旋转蒸发除去乙醇，得油相；将500g甘油分散在注射用水中，得水相，将油相和水相混合，用剪切乳化器乳化5分钟(转速2600转/分)，得初乳，将初乳用高压均质机均化(压力10000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节其pH为7.0，注射用水定容至1000ml，分装，充氮，115。C灭菌30分钟，分装，得纳米乳剂1000支。实施例ll纳米乳剂的制备将实施例3的提取物100g，氢化卵磷脂700g加入乙醇溶解，然后加入到1600g玉米油中，搅拌混合至澄明，旋转蒸发除去乙醇，得油相；将500g甘油分散在注射用水中，得水相，将油相和水相混合，用剪切乳化器乳化5分钟(转速2600转/分)，得初乳，将初乳用高压均质机均化(压力10000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节其pH为6.9，注射用水定容至1000ml，分装，充氮，115匸灭菌30分钟，分装，得纳米乳剂1000支。实施例12纳米乳剂的制备将实施例5的提取物100g,氢化卵磷脂500g加入乙醇溶解，然后加入到1000g油酸中，搅拌混合至澄明，旋转蒸发除去乙醇，得油相；将500g山梨醇分散在注射用水中，得水相，将油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分钟(转速2600转/分)，得初乳，将初乳用高压均质机均化(压力10000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节其pH为6.9，注射用水定容至1000ml，分装，充氮，115t灭菌30分钟，分装，得纳米乳剂1000支。实施例13纳米乳剂的制备将实施例4的提取物100g，蛋黄卵磷脂700g加入乙醇溶解，然后加入到1000g大豆油中，搅拌混合至澄明，旋转蒸发除去乙醇，得油相；将500g甘露醇分散在注射用水中，得水相，将油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分钟(转速2600转/分)，得初乳，将初乳用高压均质机均化(压力10000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节其pH为7.0，注射用水定容至1000ml，分装，充氮，115。C灭菌30分钟，分装，得纳米乳剂1000支。实施例14纳米乳剂的制备将实施例1的提取物100g，蛋黄卵磷脂800g加入乙醇溶解，然后加入到1000g海狗油中，搅拌混合至澄明，旋转蒸发除去乙醇，得油相；将500g甘露醇分散在注射用水中，得水相，将油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分钟(转速2600转/分)，得初乳，将初乳用高压均质机均化(压力10000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节其pH为6"，注射用水定容至1000ml，分装，充氮，115"灭菌30分钟，分装，得纳米乳剂1000支。实施例15纳米乳剂的制备将实施例1的提取物100g，蛋黄卵磷脂800g加入乙醇溶解，然后加入到1500g大豆油中，搅拌混合至澄明，旋转蒸发除去乙醇，得油相；将600g甘油分散在注射用水中，得水相，将油相和水相混合，用剪切乳化器乳化5分钟(转速2600转/分)，得初乳，将初乳用高压均质机均化(压力10000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节其pH为6.9，注射用水定容至1000ml,分装，充氮，115。C灭菌30分钟，分装，得纳米乳剂1000支。实施例16纳米乳剂的制备将实施例1的提取物100g，蛋黄卵磷脂500g加入乙醇溶解，然后加入到1S00g大豆油中，搅拌混合至澄明，旋转蒸发除去乙醇，得油相；将500g葡萄糖分散在注射用水中，得水相，将油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分钟(转速2600转/分)，得初乳，将初乳用高压均质机均化(压力10000psi)三次，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节其pH为7.0，注射用水定容至1000ml，分装，充氮，U5'C灭菌30分钟，分装，得纳米乳剂1000支。以上实施例并非穷举，本领域普通技术人员可以理解，对本发明进行的任何同等的替代或改变，如工艺中常规参数的变化，根据需要将制剂的规格变化等均在本发明的保护范围内。权利要求1.一种治疗脉管炎的纳米乳剂，其特征在于，含有由牛膝、玄参、石斛和金银花制备的有效成分，油，水，表面活性剂，等渗调节剂，其中有效成分∶油∶表面活性剂∶等渗调节剂的重量比为1∶1-20∶1-10∶1-10。2.如权利要求1所述的纳米乳剂，其特征在于，有效成分油表面活性剂等渗调节剂的重量比为1:1-10:1-10:1-10。3.如权利要求1所述的纳米乳剂，其特征在于，有效成分油表面活性剂等渗调节剂的重量比为1:1-10:1-5:1-5。4.如权利要求l或2所述的纳米乳剂，其特征在于，所述的油选自植物油，动物油；或/和所述的表面活性剂选自大豆磷脂，蛋黄卵磷脂，氢化卵磷脂；或/和所述的等渗调节剂选自甘油，山梨醇，甘露醇，葡萄糖。5.如权利要求4所述的纳米乳剂，其特征在于，所述的油为大豆油；或/和所述的表面活性剂为蛋黄卵磷脂；或/和所述的等渗调节剂为甘油。6.如权利要求1或2所述的纳米乳剂，其特征在于，所述的有效成分由包括下述步骤的方法制备而成，其中原料药配比为石斛1~4份金银花14份牛膝14份玄参14份(1)牛膝、玄参、石斛药材水提，两次醇沉，再水沉，过滤，得滤液A;(2)金银花药材水提醇沉，滤液浓縮，离心，调pH值至l-4，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相酸洗后调节pH值至58，得水溶液B;(3)合并A和B，过滤，滤液浓縮，即得。7.如权利要求6所述的纳米乳剂，其特征在于，所述步骤(l)中水提为水加热回流提取13次，每次加水量为药材重量的610倍；第一次醇沉使溶液中含乙醇量达到5065%，第二次醇沉使溶液中含乙醇量达到70~85%。8.如权利要求6所述的纳米乳剂，其特征在于，所述步骤(2)中水提为加热回流提取13次，每次加水量为药材重量的6~10倍，乙酸乙酯萃取前调节pH值至13，萃取后调节pH值至5.57，所述酸为2~10%盐酸。9.权利要求1或2所述的纳米乳剂的制备方法，其特征在于，包括以下歩骤(1)牛膝、玄参、石斛药材水提，两次醇沉，再水沉，过滤，得滤液A;(2)金银花药材水提醇沉，滤液浓縮，离心，调pH值至l4，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相酸洗后调节pH值至58，得水溶液B;(3)合并A和B，过滤，滤液浓縮，得有效成分；(4)将有效成分、表面活性剂溶于醇溶液中，将该溶液加到油中并搅拌至澄明，除去醇，得油相，将溶于水的表面活性剂和等渗调节剂溶于水中，得水相，将油相加入水相得初乳，再经进一步乳化，即得。10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)牛膝、玄参、石斛药材加水回流提取13次，每次加水量为药材重量的6~10倍，第一次醇沉使溶液中含醇量达到60%，第二次醇沉使溶液中含醇量达到80%,水沉，过滤，得滤液A;(2)金银花药材加水回流提取13次，每次加水量为药材重量的610倍，加入乙醇使溶液屮含醇量为60~80%，滤液浓縮，离心，调pH值至l3，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相酸洗后调节pH值至5.57，得水溶液B;(3)合并A和B,过滤，滤液浓縮，得有效成分；(4)将有效成分、表面活性剂溶于醇溶液中，将该溶液加到油中并搅拌至澄明，除去醇，得油相，将溶于水的表面活性剂和等渗调节剂溶于水中，得水相，将油相加入水相用剪切乳化器乳化得初乳，再经高压匀质机均化，调pH，即得。全文摘要本发明提供了一种治疗脉管炎的纳米乳剂及其制备方法。包括牛膝、玄参、石斛、金银花提取的有效成分，水，油，等渗调节剂和表面活性剂。其有效成分制备工艺包括(1)牛膝、玄参、石斛药材水提，两次醇沉，再水沉，过滤，得滤液A；(2)金银花药材水提醇沉，滤液浓缩，离心，调pH值，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相酸洗后调节pH值至5～8，得水溶液B；(3)合并A和B，过滤，滤液浓缩，即得。本发明的纳米乳剂无致敏性，副作用小，且有效成分提取工艺简洁、合理、适合工业化大生产，尤其是去除了金银花中容易致敏的鞣质等成分，更加安全、有效。文档编号A61K36/88GK101194999SQ20061012994公开日2008年6月11日申请日期2006年12月8日优先权日2006年12月8日发明者雨白,郑永锋申请人:天津天士力制药股份有限公司