专利名称：一种中药提取物及其制备工艺和在制药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药制药领域，涉及一种中药提取物及其制备工艺，本发明还涉及该提取物在制备镇痛、抗炎、活血药物中的应用。
背景技术：
土鳖虫为鳖蠊科昆虫地鳖Eupolyphaga sinensis Walker.或冀地鳖Steleophagaplancyi(Boeny).的雌虫干燥体。主要成分为蛋白质、挥发油(约20种)、脂肪酸、氨基酸(17种)、甾醇及多种微量元素等。现已从土鳖虫中分离出的单体有胆甾醇，棕榈酸和5，4二羟基-7-甲氧基黄酮，二十八烷醇，β-谷甾醇，十八烷基甘油醚(鲨肝醇)，尿嘧啶和尿囊素。其中尿囊素具有镇静、促进组织修复等作用。另外、大量文献报道，土鳖虫水提液具有抗凝血、抗血栓、镇痛作用。本文药效学预实验结果证明，土鳖虫生药粉和水提浸膏对化学刺激和物理刺激均具有显著的镇痛作用(P＜0.01)；二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用实验中土鳖虫及其水提取物也具有显著的抗炎作用(P＜0.01)。土鳖虫水提浸膏可以明显延长毛细管法实验的小鼠凝血时间(P＜0.01)，对于大鼠动静脉旁路血栓的形成也有明显抑制作用(P＜0.01)。
尿囊素发明内容本发明的目的是提供一种具有活血、镇痛、抗炎的中药提取物。
本发明另一个目的是提供上述提取物的制备工艺。
本发明还有一个目的是提供上述提取物在制备镇痛、抗炎、活血药物中的应用。
本发明的目的是通过下列技术措施实现的一种中药提取物，于该中药提取物是通过下列步骤制备而成按重量份取自然铜粉(煅)8～16份，用布袋包裹，和土鳖虫16～24份，用自然铜粉(煅)和土鳖虫总重量4～8倍量的水提取1～3次，每次1～2小时，合并水提液，静置，取上清液，滤过，滤液减压浓缩至60℃相对密度为1.15～1.25的清膏，真空干燥即可。
所述中药提取物，其剂型是丸剂、片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
所述中药提取物的制备工艺，该制备工艺包括下列步骤按重量份取自然铜粉(煅)8～16份，用布袋包裹，和土鳖虫16～24份，用自然铜粉(煅)和土鳖虫总重量4～8倍量的水提取1～3次，每次1～2小时，合并水提液，静置，取上清液，滤过，滤液减压浓缩至60℃相对密度为1.15～1.25的清膏，真空干燥即可。
所述的中药提取物在制备镇痛、抗炎、活血药物中的应用。
本发明的有益效果本发明提供的中药提取物具有镇痛、抗炎、活血的作用，可用于制备镇痛、抗炎、活血药物，本发明提供的方法操作简单，生产成本低，提取效果好。
(一)制备工艺筛选1、正交试验设计 影响水提工艺的主要因素有加水倍量、提取时间和提取次数。上述3个因素各取3个水平进行L9(34)正交试验，因素水平见表1选用干膏得率(％)、铅含量(ppm)、尿囊素含量(％)、砷含量(ppm)和铁含量(％)为评价指标进行评价，筛选最佳提取工艺。
表1因素水平表
2、方差分析此实验是多指标的优化实验，其中有些指标欲求其最大值，而有些指标则越小越好，因此在优化过程中需对各个指标进行综合考虑和权衡，因此我们设计了一个综合指标，将各个指标统一综合考察，以综合指标进行直观分析和方差分析。
首先将各指标进行规格化。对于欲达到最大化的指标，如尿囊素含量和铁含量，其规格化方程为di＝(Yi-Ymin)/(Ymax-Ymin)。对于要进行最小化的指标，如得膏率、铅含量和砷含量，其规格化方程为di＝(Ymax-Yi)/(Ymax-Ymin)。
采用综合评分，极差分析结果C＞B＞A，即影响水提效果的因素顺序为提取次数＞提取时间＞溶剂倍量。A3B2C3为最佳因素水平组合，即8倍量水，每次1.5小时，提取3次。经方差分析可知，三个因素对提取结果均无显著差异。
3、验证试验取土鳖虫和煅自然铜粉混合物20g，按照上述最佳工艺条件进行3批验证实验。计算干膏得率、铅含量、尿囊素含量、砷含量和铁含量，表明该工艺稳定可行。
本发明的药效学实验1实验材料1.1实验动物昆明种小鼠(中国人民解放军第二军医大学实验动物中心，雌雄各半)；SD大鼠(中国人民解放军第二军医大学实验动物中心，雌雄各半)。
1.2试验仪器4504型祖迪斯运动数码秒表(香港华兴创业有限公司)；YSD药理生理多用仪(安徽蚌埠医学院无线电二厂生产)；FA1004型电子天平(上海恒平科学仪器有限公司)；501型超级恒温器(上海市实验仪器总厂)；容积测定仪(中国药科大学生理教研室自制)；T6紫外可见光分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司生产)。
1.3试验药物羧甲基纤维素钠中国医药集团上海化学试剂公司，批号F20020928阿司匹林南京白敬宇制药有限责任公司，批号050611芬必得美天津史克制药有限公司，批号05040122土鳖虫自然铜水提取物按照实施例1制得。
2.动物模型的建立与实验方法2.1动物分组各药效实验根据受试药物分组，设定为对照组(0.5％CMC-Na)、阳性药组(芬必得、阿司匹林)、受试药物组(土鳖虫自然铜水提物)2.2小鼠醋酸扭体法镇痛试验取健康昆明小鼠，按体重随机分组，阳性药为芬必得，按小鼠给药体积0.5ml/20g，连续灌胃给药6天，禁食12小时，自由饮水，第7天再给药一次，给药后40min腹腔注射0.6％醋酸溶液0.20ml/只，观察并记录腹腔注射醋酸溶液后15min内动物的扭体反应次数。以次数来表示疼痛程度的指标，各实验组扭体反应次数均值与对照组进行比较并进行t检验。
2.3电刺激小鼠镇痛试验取健康昆明小鼠，按体重随机分组，阳性药为芬必得，采用改良的电刺激小鼠镇痛试验方法，第1天给药前将小鼠固定，用75％酒精擦去尾部皮脂，待酒精挥发后，尾部涂一薄层导电胶。置刺激电极于小鼠尾部，用YSD药理生理多用仪刺激(频率4Hz，波宽20ms)，记录出现甩尾时的电压，作为小鼠痛阈值。第7天给药后1小时再用YSD药理生理多用仪刺激小鼠鼠尾，记录此时出现甩尾时的电压。计算给药前后痛阈变化值，并与对照组进行比较，进行t检验。
2.4二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用试验取昆明小鼠，按体重随机分组，阳性药为芬必得，连续灌胃给药6天，禁食12小时过夜，第7天再给药一次，1小时后，在小鼠右耳的前后两面均匀涂布二甲苯0.05mL，左耳不做任何处理。各组分别于致炎后60分钟脱颈椎处死小鼠，剪下双耳用7mm直径打孔器分别在双耳相同部位打下圆耳片，电子天平称质量。计算肿胀度及肿胀抑制率，比较给药组与对照组差异情况，进行t检验。计算公式为肿胀度(mg)＝右耳片质量(mg)-左耳片质量(mg)肿胀抑制率＝(对照组肿胀度-给药组肿胀度)÷对照组肿胀度×100％。
2.5毛细管法测定小鼠凝血时间试验取昆明小鼠，按体重随机分组，阳性药为阿司匹林，采用毛细玻管法试验，动物连续灌胃给药6天，末次给药前禁食12小时，第7天给药1h后，摘眼球取血至内径为1mm的玻璃毛细管，开始计时，至毛细管血柱达5cm，前1min每隔30s折断毛细管一段，超过1min每隔10s折断毛细管一段，检查有无出现凝血丝。计算毛细管采血到出现血凝丝时间，即为凝血时间，各实验组凝血时间均值与对照组比较并进行t检验。
2.6大鼠动静脉旁路血栓试验根据动物体重的不同，随机分组，阳性药为阿司匹林，连续给药7天，末次给药后40min，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，后分离右颈总动脉和左颈外静脉，以50μg/ml肝素生理盐水液充满聚乙稀管，管中预先放入一段约4cm长的一号手术丝线(每根丝线均于电子天平上称重)，管两端先后插入左颈静脉和右颈总动脉，开放动脉夹，立即开始计时，使血流通15min，后中断血流，取出丝线称血栓湿重。各实验组血栓湿重均值与对照组比较并进行t检验。计算公式如下血栓湿重＝(血栓+丝线重量)-丝线重量血栓抑制率＝(对照组血栓重-给药组血栓重)÷对照组血栓重×1003试验结果及分析3.1土鳖虫自然铜醋酸扭体镇痛试验实验结果试验结果以15min内扭体反应次数表示，统计学检验采用组间t检验，结果见表2表2醋酸扭体镇痛试验实验结果
注**P＜0.01；与对照组比较(t检验)。
实验结果表明，土鳖虫自然铜水提物的小鼠扭体反应数与对照组比较有极显著差异(P＜0.01)，说明土鳖虫自然铜水提物对醋酸致小鼠扭体试验具有明显的镇痛作用。
3.2土鳖虫自然铜水取物电刺激小鼠镇痛试验结果试验结果以痛阈值和痛阈变化值(V)表示，统计学检验采用组间t检验，结果见表3。
表3小鼠电刺激镇痛试验结果
注**P＜0.01；与对照组比较(t检验)。
试验结果表明，土鳖虫自然铜水提物的电刺激小鼠痛阈值与对照组比较有极显著差异(P＜0.01)，痛阈值均较对照组显著提高。说明土鳖虫自然铜水提物对电刺激小鼠镇痛试验具有镇痛作用。
3.3土鳖虫自然铜水提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用试验试验结果以肿胀度表示，统计学检验采用组间t检验，结果见表4。
表4二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用试验结果
注**P＜0.01；与对照组比较(t检验)结果表明，土鳖虫自然铜水提物及芬必得组的耳肿胀度与对照组比较有极显著差异(P＜0.01)。说明其具有抗炎作用。
3.4土鳖虫自然铜水取物毛细管法测定小鼠凝血时间试验结果实验结果以凝血时间表示，结果见表5统计学采用组间t-student检验。
表5毛细管法测定小鼠凝血时间试验结果
注**P＜0.01；与对照组比较(t检验)结果表明，土鳖虫自然铜提取物的凝血时间与对照组比较有极显著差异(P＜0.01)，说明土鳖虫自然铜提取物能明显延长小鼠凝血时间。
3.5土鳖虫自然铜水提物的物大鼠动静脉旁路血栓试验结果实验结果以血栓湿重表示，结果见表6计学采用组间t-student检验。
表6大鼠动静脉旁路血栓试验结果
注**P＜0.01；与对照组比较(t检验)结果表明，土鳖虫自然铜提取物的血栓湿重与对照组比较均有极显著差异(P＜0.01)，说明土鳖虫自然铜提取物能明显减轻大鼠动静脉旁路血栓重量。
具体实施例方式
以下通过实施例对本发明作进一步的阐述。
实施例1a、按重量份数配比称取药材土鳖虫16份，自然铜(煅)8份。
b、水提自然铜粉(煅)用布袋包裹，和土鳖虫，用自然铜粉(煅)和土鳖虫总重量8倍量的水提取3次，每次1.5小时合并水提液，静置，吸取上清液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.20(60℃)的清膏，真空干燥即可。
c、按常规方法制成片剂。
实施例2a、按重量份数配比称取药材土鳖虫20份，自然铜(煅)12份。
b、水提自然铜粉(煅)用布袋包裹，和土鳖虫，用自然铜粉(煅)和土鳖虫总重量4倍量的水提取1次，每次1小时，合并水提液，静置，吸取上清液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15(60℃)的清膏，真空干燥即可。
c、按常规方法制成颗粒剂或散剂。
实施例3a、按重量份数配比称取药材土鳖虫18份，自然铜(煅)10份。
b、水提自然铜粉(煅)用布袋包裹，和土鳖虫，用自然铜粉(煅)和土鳖虫总重量6倍量的水提取2次，每次2小时，合并水提液，静置，吸取上清液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.25(60℃)的清膏，真空干燥即可。
c、按常规方法制成胶囊剂或软胶囊剂。
实施例4a、按重量份数配比称取药材土鳖虫24份，自然铜(煅)16份。
b、水提自然铜粉(煅)用布袋包裹，和土鳖虫，用自然铜粉(煅)和土鳖虫总重量6倍量的水提取1次，每次2小时，合并水提液，静置，吸取上清液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15(60℃)的清膏，真空干燥即可。
c、按常规方法制成丸剂。
实施例5
a、按重量份数配比称取药材土鳖虫22份，自然铜(煅)12份。
b、水提自然铜粉(煅)用布袋包裹，和土鳖虫，用自然铜粉(煅)和土鳖虫总重量8倍量的水提取2次，每次1小时，合并水提液，静置，吸取上清液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.20(60℃)的清膏，真空干燥即可。
c、按常规方法制成滴丸剂。
权利要求
1.一种中药提取物，其特征在于该中药提取物是通过下列步骤制备而成按重量份取自然铜粉(煅)8～16份，用布袋包裹，和土鳖虫16～24份，用自然铜粉(煅)和土鳖虫总重量4～8倍量的水提取1～3次，每次1～2小时，合并水提液，静置，取上清液，滤过，滤液减压浓缩至60℃相对密度为1.15～1.25的清膏，真空干燥即可。
2.根据权利要求1所述中药提取物，其特征在于所说的剂型是丸剂、片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂。
3.权利要求1所述中药提取物的制备工艺，其特征在于该制备工艺包括下列步骤按重量份取自然铜粉(煅)8～16份，用布袋包裹，和土鳖虫16～24份，用自然铜粉(煅)和土鳖虫总重量4～8倍量的水提取1～3次，每次1～2小时，合并水提液，静置，取上清液，滤过，滤液减压浓缩至60℃相对密度为1.15～1.25的清膏，真空干燥即可。
4.权利要求1所述的中药提取物在制备镇痛、抗炎、活血药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种中药提取物及其制备工艺和在制药中的应用。该提取物是通过下列步骤制备而成按重量份取自然铜粉(煅)8～16份，用布袋包裹，和土鳖虫16～24份，用自然铜粉(煅)和土鳖虫总重量4～8倍量的水提取1～3次，每次1～2小时，合并水提液，静置，取上清液，滤过，滤液减压浓缩至60℃相对密度为1.15～1.25的清膏，真空干燥即可。该提取物可用于制备镇痛、抗炎、活血药物。本发明提供的方法操作简单，生产成本低，提取效果好。
文档编号A61K33/34GK1939347SQ200610096419
公开日2007年4月4日 申请日期2006年9月25日 优先权日2006年9月25日
发明者濮存海, 郭宛君, 关志宇, 王波, 尹慧晶 申请人:南京中山制药有限公司