一种复方丹参胶囊及其制备方法

专利名称：一种复方丹参胶囊及其制备方法
技术领域：
本发明属于中药制备技术领域，具体涉及一种复方丹参胶囊及其制备方法。
背景技术：
丹参、黄芪、川芎为中医常用药，以细胞膜色谱法对丹参、川芎和黄芪进行活性筛选并结合离体药理实验所得的结果为指导，得到丹参、川芎和黄芪三味药的有效部位，丹参的有效部位是丹参酮类，有增加冠脉流量，改善微循环和保护缺血心肌的作用，隐丹参酮和丹参酮IIA是其主要有效成分。川芎的有效部位是挥发油，其主要药理作用也是对心血管系统，扩张冠脉，降低心肌耗氧量，改善外周循环，其主要有效成分是藁本内酯。黄芪味甘性平，有补气生阳、调和脾胃、润肺生津、祛痰之功效，能够缓解心衰及心肌缺血，黄芪中主要成分黄芪甲苷。
在目前的丹参的有效成分的提取中，大多数采用传统的水煎后经醇沉或酸，碱处理等方法.但采用传统的水煎法需要对生药进行长时间的加热，而往往会破坏某些有效成分并为进一步的提取分离增添麻烦。丹参中的有效成分丹参酮IIA和隐丹参酮以及其它丹参酮类化合物对光和热不稳定，且丹参酮类化合物脂溶性较大，因而考虑到用超临界流体萃取法提取丹参酮类化合物。超临界流体萃取技术被视为对现代中药高效提取分离的一种全新方法，具有高扩散性、高溶解能力、低粘性、无污染、不易燃、低温操作、无毒无害、成本低廉、不破坏生药的特点，其温度控制在70℃以下，适合对于湿、热、光敏性和芳香性物质提取分离，采用这样的技术能克服原提取煮沸、收膏和干燥工序对丹参酮类化合物的破坏，适合于丹参中有效成分的提取。
川芎中挥发油的提取有传统的水蒸汽蒸馏法和超临界流体萃取法，通过对超临界流体萃取法和水蒸汽蒸馏法的对照实验，结果超临界提取物挥发油的含量过低而且其主要有效成分藁本内酯的含量也较水蒸汽蒸馏法低.采用水蒸汽蒸馏法工艺简单，成本较低，适用于工业化大生产。
目前黄芪总皂苷的提取方法有水提法、醇提法。然而黄芪甲苷在黄芪提取物中含量较低需进一步精制，精制的方法有萃取法精制、树脂吸附法精制和超临界流体萃取法、其中树脂吸附精制法具有操作简便、无污染、成本较低等优点，因此采用醇提加树脂吸附精制法提取分离黄芪总皂苷。

发明内容
本发明的目的在于，提供一种复方丹参胶囊及其制备方法。
为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案一种复方丹参胶囊，其特征在于制得的该丹参复方胶囊由以下活性成分提取物按重量比例组成丹参脂溶性提取物川芎挥发油黄芪总皂苷提取物等于1∶4∶2，余量为常规的药用胶囊辅料。
所述的丹参提取物中至少含有丹参酮IIA和隐丹参酮，且每100克丹参提取物中含有的丹参酮IIA和隐丹参酮以总丹参酮计不少于50克；所述川芎挥发油提取物中至少含有藁本内酯，且每100克川芎提取物中含有挥发油不少于50克；所述黄芪总皂苷提取物中至少含有黄芪甲苷，且每100克黄芪总皂苷提取物中含有的总皂苷不少于50克。
上述复方丹参胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤取处方量丹参药材，粉碎后在萃取釜的萃取压力保持为20Mpa～40MPa，萃取温度为30℃～50℃，加入药材量的5％～20％体积/质量的乙醇作携带剂，分离釜的解析压力和解析温度分别为5MPa～7MPa和30℃～50℃，萃取2～4h后，分取提取物，挥去乙醇，得丹参提取物；取处方量川芎药材饮片，置多功能提取罐中，加药材饮片8倍量水浸泡1h，然后采用水蒸汽蒸馏法蒸馏12h，得到的馏出液静置分层，取上层得川芎挥发油；取处方量黄芪药材饮片，置多功能提取罐中，加黄芪药材饮片8倍量的75％的乙醇提取2次，每次3h，合并提取液，过滤除去沉淀，黄芪醇提液浓缩成水溶液，上大孔吸附树脂洗脱，收集洗脱部位，回收溶剂，蒸干，即得黄芪总皂苷提取物；将上述丹参提取物、川芎挥发油、黄芪总皂苷提取物按处方量配制，和常规的药用胶囊辅料按常规的工艺制备成胶囊即可。
本发明的复方丹参胶囊，其中丹参脂溶性提取物主要作用于心肌，川芎挥发油主要作用于血管，黄芪总皂苷提取物主要是增强免疫力，将其复配得到的中药制剂，成分明确，机理清楚，其副作用小，安全性高，是治疗心肌缺血的良好中药复方。另外在制备过程中根据细胞膜受体色谱模型筛选，结合药理学实验研究结果，证实了丹参中的主要有效部位为丹参脂溶性成分，有效成分为丹参酮IIA和隐丹参酮；川芎中的主要有效部位为川芎挥发油；黄芪中的主要有效部位为黄芪总皂苷，并改进了传统的丹参、川芎、黄芪提取方法，制得的复方胶囊中含有的中药原料中有效成分含量高的有效部位。


图1是黄芪皂苷吸附量曲线图；图2是黄芪皂苷70％乙醇洗脱曲线图；图3是不同浓度的NaOH对黄芪总皂苷得率和含量的影响。
以下结合附图和发明人给出的实施例对本发明作进一步的详细说明。
具体实施例方式
本发明的复方丹参胶囊，由以下活性成分提取物按重量比例组成丹参提取物∶川芎挥发油∶黄芪总皂苷提取物等于1∶4∶2，余量为常规的药用胶囊辅料。
上述复方丹参胶囊的制备方法，包括下列步骤取处方量丹参药材，粉碎过10目筛在萃取釜的萃取压力保持为30MPa，萃取温度为30℃，加入药材量体积/质量20％的乙醇作携带剂，分离釜的解析压力和解析温度分别为5MPa和50℃，萃取3h后，分取提取物，挥去乙醇得丹参提取物。
取处方量川芎药材饮片，置多功能提取罐中，加8倍量水浸泡1h后，蒸馏12h，馏出液静置分层，取上层得川芎挥发油。
取处方量黄芪药材饮片，置多功能提取罐中，用8倍量的75％的乙醇提取2次，每次3h。合并提取液，过滤除去沉淀，1g黄芪醇提液浓缩成2mL的水溶液，上1mL大孔吸附树脂，分别用5倍树脂床体积的水、5倍树脂床体积的0.1％NaOH、8倍树脂床体积的20％乙醇、8倍树脂床体积的70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，回收溶剂，蒸干，即得黄芪总皂苷提取物；将上述丹参提取物、川芎挥发油、黄芪总皂苷提取物按处方量配制，加入常规的药用胶囊辅料，按常规的工艺制备成胶囊即可。
制备的实验方法1.1丹参工艺研究通过改变萃取釜压力(MPa)、萃取温度(℃)、萃取时间(h)、携带剂用量(％)、解析压力(MPa)、解析温度(℃)和药材粉碎度(目)，采用7因素3水平正交试验(L18(37))表进行实验，并以有效部位总丹参酮量、有效成分丹参酮IIA和隐丹参酮之和量为指标选择提取丹参中有效成分的最佳条件，见表1～1。
表1～1因素水平表

*携带剂采用乙醇，携带剂量为与药材之比(体积/重量)。
(1)材料与仪器供含量测定用丹参酮IIA和隐丹参酮对照品(购自中国药品生物制品检定所)；TSP高效液相色谱仪(美国Thermo Finigan公司)，1712型电子天平(德国Sartorius公司)，HA220～50～06超临界萃取装置(江苏南通华安超临界萃取有限公司)。
(2)试验方法及结果分析用L18(37)正交表安排试验，取丹参药材饮片，粉碎，称取药粉2kg，置于5L萃取釜中。待制冷装置与萃取釜和分离釜加温装置正常工作后，打开压缩泵加压到所需压力，调整二氧化碳流速至40kg·h～1循环萃取，按预定的因素水平和试验安排进行实验。结果见表1～2。
表1～2正交试验设计表及结果


注总*表示总丹参酮；隐**表示隐丹参酮和丹参酮IIA含量之和。
将正交试验结果用SAS软件进行方差分析，结果见表1～3，表1～4。
表1～3总丹参酮提取量方差分析表

表1～4隐丹参酮和丹参酮IIA提取量方差分析表

以总丹参酮提取量为考察指标，由表1～2中极差R值大小显示，各因素作用主次为A＞D＞G＞E＞C＞F＞B；方差分析结果表明A因素的影响有显著性意义，以A2B1C2D3E1F2G1组合为佳。以隐丹参酮和丹参酮IIA提取量为考察指标，由表1～2中极差R值大小显示，各因素作用主次为A＞D＞G＞C＞B＞E＞F；方差分析结果表明A因素的影响有显著性意义，以A3B2C3D3E3F1G1组合为佳。
(3)验证试验根据优选工艺结果，对其进行了验证试验。用同一批丹参药材，称取2kg，分别按A2B1C2D3E1F2G1与A3B2C3D3E3F1G1进行对比试验，并测定总丹参酮提取量以及隐丹参酮和丹参酮IIA提取量，结果见表1～5。
表1～5验证试验结果

由表可见，以总丹参酮提取量作为考察指标，工艺A2B1C2D3E1F2G1较优；以隐丹参酮和丹参酮IIA提取量为指标，工艺A3B2C3D3E3F1G1较优，考虑到实际应用中的节时节能，以及丹参酮类化合物的热不稳定性，确定工艺为A2B1C2D3E1F2G1，即药材粉碎过10目筛在萃取釜的萃取压力保持为30MPa，萃取温度为30℃，加入药材量20％(体积/质量)的乙醇作携带剂，萃取3h，分离釜的解析压力和解析温度分别为5MPa和50℃。
1.2川芎工艺研究川芎有效部位为挥发油。根据工艺设计，川芎药材采用多功能提取罐提取。提取条件以挥发油得率为指标进行考察，以浸泡时间(A)、提取时间(B)，加水量(C)作为考察因素，采用L9(34)正交试验表进行试验，见表2～1。
表2～1因素水平表


注提取时间为沸腾后时间(1)含量指标分析方法精密称取川芎约100g，参照《中国药典》2005年版一部附录挥发油测定法提取挥发油，冷却后成半固体状，称重。
得率＝挥发油重量/原生药重量(2)正交试验结果分析试验结果根据表2～1设计实验，对9份样品分别按“含量指标分析方法”测定，结果见表2～2。
表2～2正交试验设计表及结果

方差分析将正交试验结果(表2～2)用SPSS12.0软件进行方差分析，结果见表2～3。
表2～3方差分析表

由表2～2、表2～3可知，B因素的影响有显著性意义，A和C因素的影响无显著性意义。极差RB＞RC＞RA，若以RA做误差估计，RB和RC分别是RC的15.8倍和1.7倍，由此可知提取时间是影响挥发油得率的重要因素，其次是加水量，最后是浸泡时间。再结合各因素的K值进行分析，结果表明最佳条件是A1B3C2。即浸泡1h，提取12h，加水8倍。
(3)验证实验由于优选的工艺未包括在正交设计表的9次试验中，故对其进行了验证试验。用同一批药材，称取100g，按A1B3C2进行试验，按正交试验方法，测定挥发油的含量(见表2～4)。
表2～4验证试验结果(n＝3)

由验证试验结果看出，工艺稳定性良好。
(4)最佳提取条件的确定蒸馏12h后川芎挥发油基本不再被蒸出，总得率约为0.5％，故确定川芎挥发油蒸馏时间为12h。
由以上试验，精密称取川芎约100g，加水约8倍，浸泡1h，提取12h，重复3次，结果为0.50±0.03g。说明此提取条件稳定可行。
综上所述，川芎挥发油的最佳提取条件是加8倍量的水，浸泡1h，提取12h。工业上多采用多功能提取罐提取，则馏出液静置分层，取上层得川芎挥发油。
1.3黄芪工艺研究黄芪有效部位的制备可分为两个步骤，即醇提工艺和大孔吸附树脂处理工艺。醇提工艺中先对提取次数进行考察，再以乙醇浓度、提取时间、溶剂倍数为因素进行正交实验，以干浸膏得率及总皂苷的含量为考察指标，对工艺进行优化。用大孔吸附树脂法不仅能除去醇提物中的杂质，提高有效成分总皂苷的含量以达到新药要求，而且制备工艺简单，只采用醇—水系统操作，避免有机溶剂的介入，可以放大到大工业生产。
黄芪主要成分为总皂苷，在预实验中，以浸膏和总皂苷的得率为考察指标，对适宜的乙醇浓度进行了考察，选取乙醇浓度为50％、60％、70％、80％、和90％进行试验，结果以80％乙醇浓度总皂苷提取率较高，从而将正交实验中乙醇浓度水平设为75％、80％和85％；然后对提取次数进行考查，结果显示提取2次时，黄芪总皂苷的提取量已达到90％％以上，所以提取次数定为2次。以乙醇浓度、乙醇倍数、提取时间为因素，采用L9(34)正交试验表进行试验，见表3～1。
表3～1因素水平表

(1)材料与仪器黄芪甲苷对照品(购自中国药品生物制品检定所)，752紫外光栅分光光度计，香草醛，高氯酸，冰醋酸，甲醇(西安试剂厂)。
(2)测定方法
①样品制备精密称取提取物0.2g，用10mL水加热溶解，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇萃取3次(20mL/次)，合并正丁醇液，用氨水洗2次(20mL/次)，蒸干正丁醇部分。用5mL水微热溶解，过D101型大孔吸附树脂(1.0cm，长12cm)，分别用50mL水、30mL40％乙醇和50mL70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，用10mL甲醇溶解并定容。
②标准曲线精密称取2.5mg黄芪甲苷于5mL容量瓶中甲醇溶解并定容。分别从中吸取0.1mL，0.2mL，0.3mL，0.4mL，0.5mL和0.6mL于6个干净的离心管中，常温下挥干溶剂，加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，摇匀，置于70℃水浴中加热15min，冷却，精密加入5mL冰醋酸，摇匀，用分光光度计测定其吸收值，波长578nm。结果见表3～2。
表3～2黄芪皂苷标准曲线

C＝0.0113+0.318A r＝0.9998③样品测定取提取物约0.2g，照“样品制备”项下进行操作，测定。
(3)试验方法及结果用L9(34)正交表安排试验，取黄芪药材饮片，粉碎，过20目筛，称取药粉约20g，9份，分别置于500mL烧瓶中，进行实验，结果见表3～3。
表3～3正交试验设计表及结果


(4)方差分析将正交试验结果进行方差分析，结果见表3～4。
表3～4总皂苷方差分析表

由以上表可知，以总皂苷得率为指标，因素对指标影响大小的次序为C＞B＞A，即乙醇用量对得率影响最大，其次是回流时间。
(5)验证试验根据优选的工艺，对其进行验证试验。用同一批药材，称取约20g，分别按A2B1C2、A2B2C3与A2B2C2进行对比试验，按正交试验方法，测定浸膏量及总皂苷量，结果见表3～5。
表3～5验证试验结果

由表3～5可见，以总皂苷为指标，A3B3C2提取量最大，故确定A3B3C2为最佳工艺，即药材用8倍量75％乙醇提取2次，每次3h。大孔吸附树脂纯化工艺优化①大孔树脂的预处理将大孔树脂用乙醇浸泡24h，湿法装柱后，先用乙醇清洗至流出液加水不浑浊为止，再用蒸馏水洗至水液澄清。用过的大孔树脂柱，自顶端加入30g.L～1NaOH溶液清洗至流出液呈强碱性，浸泡12h，再以蒸馏水洗至水液呈中性。
②大孔树脂吸附性能的考察以黄芪皂苷为指标考察大孔吸附树脂对皂苷的动态吸附性能。取50mL预处理过的D101大孔吸附树脂。将黄芪浸膏用蒸馏水溶解，作为上柱样品。等体积收集流出液，50mL/瓶，测定流出液中黄芪皂苷浓度。规定当流出液中黄芪皂苷浓度超过0.1mg.mL～1时为泄露，结果50mL大孔吸附树脂可处理28倍量树脂床体积的黄芪溶液(黄芪皂苷浓度为1.0mg/mL)而不发生泄露(图1)，可吸附1.4g黄芪皂苷，达到饱和时可处理58倍树脂床体积的提取液，吸附量可达58mg/mL。为避免损失，规定上样量为泄露点的一半，即每1mL树脂上样14mg黄芪皂苷量，转换成药材提取物为50g黄芪药材经提取后，提取液稀释成100mL，上50mL经处理过的D101型大孔吸附树脂。
③洗脱剂的选择取50mL已处理的树脂，按吸附量曲线所得结果上样，分别用水、20％乙醇、40％乙醇、70％乙醇和乙醇各250mL洗脱(先后洗脱)，蒸干，测定黄芪提取物的皂苷含量，结果见表3～6。
表3～6黄芪总皂苷洗脱剂的选择


从表3～6可以看出，40％乙醇、70％乙醇对黄芪皂苷的洗脱率最大，选择70％乙醇作为皂苷的洗脱溶剂。
④大孔树脂对黄芪皂苷的脱附性能的考察大孔树脂主要是通过表面的范得华力进行物理吸附，用极性有机溶剂做脱附剂，被吸附的黄芪皂苷很容易脱附下来，这种过程也是吸附树脂再生的过程。从经济、效率、节能的角度考虑，选择乙醇作为脱附剂最佳。如图2所示，以70％乙醇液为脱附剂，等体积接收流出液，并以流出液累积体积为横坐标，流出液中黄芪皂苷浓度为纵坐标作图，得解吸曲线。由图2可知，以黄芪皂苷为检测指标，用8倍量树脂床体积的70％乙醇液为脱附剂，即可基本上将黄芪皂苷完全从树脂上解吸下来。
⑤洗脱剂体积的考察黄芪提取物中大部分水溶性杂质为糖类，经实验发现，大约用5倍量树脂床体积的水可洗去大部分水溶性杂质，流出液molish反应为阴性，然后用8倍量树脂床体积20％乙醇又可洗去黄酮类杂质，最后用8倍量树脂床体积70％乙醇即可将皂苷完全洗脱下来，见表3～7。
表3～7洗脱体积的选择

⑥工艺重复性考察按选定的工艺制备黄芪有效部位3批，对黄芪提取物进行皂苷含量的测定，结果见表3～8。
表3～8不同批样品中皂苷类化合物含量测定结果

根据以上结果可以看出，经过该工艺处理后的黄芪总皂苷含量可以达到有效部位的要求，但是放大到工业生产上含量将会有所降低，因此在该工艺基础上仍需要继续精制处理。继续增加乙醇体积分数虽然可以达到精制目的，但黄芪总皂苷损失亦相应增大，故考虑其他方法。由于树脂所吸附的杂质主要为黄酮类等酸性有色物质，而黄芪总皂苷为中性，所以考虑以稀碱溶液洗脱杂质，对黄芪总皂苷影响较小。因此分别取50g黄芪粗粉，在以上工艺基础上，水洗后以不同浓度的氢氧化钠溶液进行洗脱，结果见图3。
可以看出，随着NaOH溶液浓度的升高，黄芪总皂苷含量逐渐升高，但黄芪总皂苷的得率呈下降趋势，综合考虑以0.1％NaOH溶液较为合适，既可以保证黄芪总皂苷的质量分数在50％以上，又不至于使黄芪总皂苷损失过多。
⑦小结综上所述，黄芪总皂苷的大孔吸附树脂洗脱工艺确定为1g黄芪醇提液浓缩成2mL的水溶液，上1mL大孔吸附树脂，分别用5倍树脂床体积的水、5倍树脂床体积0.1％NaOH、8倍树脂床体积的20％乙醇、8倍树脂床体积的70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，回收溶剂，蒸干，即得黄芪总皂苷。
权利要求
1.一种复方丹参胶囊，其特征在于制得的该丹参复方胶囊由以下活性成分提取物按重量比例组成丹参提取物∶川芎挥发油∶黄芪总皂苷提取物等于1∶4∶2，余量为常规的药用胶囊辅料。
2.如权利要求1所述的复方丹参胶囊，其特征在于，所述的丹参提取物中至少含有丹参酮IIA和隐丹参酮，且每100克丹参提取物中含有的丹参酮IIA和隐丹参酮以总丹参酮计不少于50克；所述川芎提取物中至少含有藁本内酯，且每100克川芎提取物中含有挥发油不少于50克；所述黄芪总皂苷提取物中至少含有黄芪甲苷，且每100克黄芪总皂苷提取物中含有的总皂苷不少于50克。
3.权利要求1所述的复方丹参胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤取处方量丹参药材，粉碎后在萃取釜的萃取压力保持为20Mpa～40MPa，萃取温度为30℃～50℃，加入药材量的5％～20％体积/质量的乙醇作携带剂，分离釜的解析压力和解析温度分别为5MPa～7MPa和30℃～50℃，萃取2～4h后，分取提取物，挥去乙醇，得丹参提取物；取处方量川芎药材饮片，置多功能提取罐中，加药材饮片8倍量水浸泡1h，然后采用水蒸汽蒸馏法蒸馏12h，得到的馏出液静分层，取上层得川芎挥发油；取处方量黄芪药材饮片，置多功能提取罐中，加黄芪药材饮片8倍量的75％的乙醇提取2次，每次3h，合并提取液，过滤除去沉淀，黄芪醇提液浓缩成水溶液，上大孔吸附树脂洗脱，收集洗脱部位，回收溶剂，蒸干，即得黄芪总皂苷提取物；将上述丹参提取物、川芎挥发油、黄芪总皂苷提取物按处方量配制，和常规的药用胶囊辅料按常规的工艺制备成胶囊即可。
4.如权利3要求所述的制备方法，其特征在于，所述的丹参提取物的制备方法中的药材粉碎后过10目筛，萃取压力为30Mpa，萃取温度为30℃，解析压力和解析温度为5MPa和50℃，萃取时间为3h。
5.如权利3要求所述的制备方法，其特征在于，所述的丹参提取物的制备方法中的携带剂为药材量的20％体积/质量的乙醇。
6.如权利3要求所述的制备方法，其特征在于，所述的黄芪醇提液浓缩过程是，将1g黄芪醇提液浓缩成2mL的水溶液，上1mL的大孔吸附树脂洗脱。
7.如权利6要求所述的制备方法，其特征在于，所述的大孔吸附树脂洗脱过程是分别用5倍树脂床体积的水、5倍树脂床体积0.1％NaOH、8倍树脂床体积的20％乙醇、8倍树脂床体的70％乙醇洗脱。
8.如权利3要求所述的制备方法，其特征在于，所述的收集洗脱部位是收集70％乙醇洗脱液的洗脱部位。
全文摘要
本发明公开了一种复方丹参胶囊及其制备方法，制得的该丹参复方胶囊由以下活性成分提取物按重量比例组成丹参提取物川芎挥发油黄芪总皂苷提取物等于1∶4∶2，余量为常规的药用胶囊辅料。丹参脂溶性提取物主要作用于心肌，川芎挥发油主要作用于血管，黄芪总皂苷提取物主要是增强免疫力，将其复配得到的中药制剂，成分明确，机理清楚，其副作用小，安全性高，是治疗心肌缺血的良好中药复方。其制备方法改进了传统的丹参、川芎、黄芪提取方法，制得的复方胶囊中含有中药原料中有效成分含量高的有效部位。
文档编号A61P9/04GK1965898SQ20061010484
公开日2007年5月23日 申请日期2006年11月2日 优先权日2006年11月2日
发明者贺浪冲, 郭立安, 潘欣萍, 王嗣岑, 窦建卫, 李西玲, 王嫦鹤, 王佩香, 陈熙恒, 王红英, 李汉文, 李永茂 申请人:西安交大保赛生物技术股份有限公司, 西安交通大学