专利名称：虎眼万年青皂甙osw－1在制备抗癌症药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，具体的说，涉及虎眼虎眼万年青皂甙OSW-1在制备抗癌症药物中的应用。
背景技术：
恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康的疾病，肿瘤化疗与外科手术、放射治疗构成肿瘤综合治疗的的三大重要组成部分。尽管抗肿瘤药物的研究与应用已经取得长足进步，但目前对多数肿瘤的治疗效果仍难以令人满意，因此，发现和研制新型抗肿瘤药物仍然是生物医药领域的重大课题和任务。
1992年，日本东京药学和生命科学大学化学家Yutaka Sashida教授从一种原产于南非斯威士兰(Swaziland)，德兰士瓦(Transvaal)，纳塔尔(Natal)等省的常绿观赏植物虎眼万年青(OrnithogalumSaundersiae)的地下球茎中分离提取出一系列具有胆固醇骨架的皂甙，其主成分是虎眼万年青皂甙OSW-1，其结构式如下 本发明对虎眼万年青皂甙OSW-1进行了长期的研究，发现了虎眼万年青皂甙OSW-1具有强大的抗肿瘤活性。
发明内容
本发明的目的是提供一种虎眼万年青皂甙OSW-1在制备抗癌症药物中的应用。
其中所述的癌症首选为乳腺癌、宫颈癌、皮肤癌、白血病、肺癌、肾癌、鼻咽癌或胃癌。
虎眼万年青皂甙OSW-1可以与药学上可接收的载体，例如填充剂如淀粉、微晶纤维素等；粘合剂如维生素衍生物、淀粉等；崩解剂如羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素等，通过片剂、胶囊剂、颗粒剂等口服给药的方式服用。
药理实验结果表明，虎眼万年青皂甙OSW-1对MCF-7人乳腺癌细胞株、Hela人宫颈癌细胞株、A431人皮肤癌细胞株、HL-60人白血病细胞株、A549人肺癌细胞株的生长显示有较强的抑制效果，对786-0人肾癌细胞株、CNE人鼻咽癌细胞株、SGC-7901人胃癌细胞株的生长亦有一定的抑制作用。
具体实施例方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1 虎眼万年青的制备按照文献“《J.Org.Chem》1999，64，202-208”的制备方法，制备虎眼万年青皂甙OSW-1。
该化合物的理化数据如下核磁共振氢谱1H NMR(600MHz，C5D5N)8.31(2H，d)，7.07(2H，d)，5.67(1H，dd，J＝8.0，9.2)，5.55(1H，t，J＝6.3，7.5)，5.37(1H，d，J＝3.6)，5.11(1H，d，J＝8.0)，4.79(1H，s)，4.57(1H，d，J＝6.0)，4.39(1H，brs)，4.31(1H，dd，J＝5.2，11.1)，4.26-4.20(2H，m)，4.20-4.12(3H，m)，3.81(1H，brs)，3.73(3H，s)，3.18(1H，q，J＝7.4)，1.96(3H，s)，1.27(3H，d，J＝7.5)，1.06(3H，s)，0.98(3H，s)，0.87(3H，d，J＝6.4)，0.84(3H，d，J＝6.4)。
核磁共振碳谱13C NMR(75MHz，C5D5N)218.96，169.27，165.47，163.91，141.95，132.45，121.13，114.15，103.68，100.86，88.36，85.72，80.99，76.35，75.15，72.05，71.31，70.75，67.85，67.06，65.59，55.52，50.20，48.58，46.57，46.33，43.55，39.29，37.80，36.90，34.64，32.73，32.28，32.08，27.76，22.85，22.51，20.93，19.64，13.64，11.91。
红外光谱数据IR(KBr)3467，2957，2934，1726，1695，1607，1513，1465，1373，1258，1232，1170，1044，988，972。
质谱数据FABMS m/z896(M+1+Na)。
实施例2将实施例1中得到的化合物加蔗糖适量，混匀，以70％乙醇为黏合剂，制粒，干燥，即得颗粒剂。
实施例3将实施例1中得到的化合物加维晶纤维素、可压性淀粉适量混合均匀，95％乙醇湿法制粒，干燥，加入低取代羟丙基纤维素、适量滑石粉，压片，即得片剂。
实施例4将实施例1中得到的化合物加入融化得蜂蜡中，以胶体磨混合，混合物以自动旋转轧囊计制成软胶囊，在温度20℃、相对湿度52％的条件下干燥24小时，取出，用乙醇洗涤，在上述条件下干燥48小时，即得软胶囊剂。
实施例5将实施例1中得到的化合物加蔗糖适量，混匀，以70％乙醇为黏合剂，制粒，装入囊壳，即得胶囊剂。
实验例实验目的测定虎眼万年青皂甙OSW-1对A549人肺癌细胞株、MCF-7人乳腺癌细胞株、SMMC-7721人肝癌细胞株、Hela人宫颈癌细胞株、SGC-7901人胃癌细胞株、CNE人鼻咽癌细胞株、786-0人肾癌细胞株、A431人皮肤癌细胞株、HL-60人白血病细胞株、WI38人正常细胞株增殖的抑制作用。
材料1.仪器洁净工作台(上海淀山湖净化设备厂)，恒温CO2培养箱(美国Forma)，酶联免疫检测仪(美国BIO-RAD)，倒置生物显微镜(重庆光学仪器厂)2.试剂RPMI1640培养基(GIBCO公司Lot NO.1304895)。
MEM培养基(GIBCO公司Lot NO.1201167)。
DMEM培养基(GIBCO公司Lot NO.1201167)。
F12培养基(GIBCO公司Lot NO.1279320)。
胰蛋白酶(GIBCO公司Lot NO.1106338)。
小牛血清(GIBCO公司Lot NO.56546750)。
胎牛血清(PAA公司Lot NO.A01005-0983)。
MTT(噻唑蓝)(Genebase公司Lot NO.0731)。
二甲亚枫(DMSO，中国医药上海化学试剂公司LotNO.T200411020)。
3.细胞株细胞株由中科院细胞所提供。
A549人肺癌细胞株、Hela人宫颈癌细胞株、SGC-7901人胃癌细胞株、CNE人鼻咽癌细胞株、786-0人肾癌细胞株、HL-60人白血病细胞株分别培养于RPMI1640培养基中，含10％小牛血清，37℃，5％CO2浓度下培养。
MCF-7人乳腺癌细胞株培养于MEM培养基中，含10％胎牛血清，37℃，5％CO2浓度下培养。
A431人皮肤癌细胞株培养于F12培养基中，含10％胎牛血清，37℃，5％CO2浓度下培养。
WI38人正常细胞株培养于DMEM培养基中，含15％胎牛血清，37℃，5％CO2浓度下培养。
方法
1.取处于指数生长期状态良好的细胞一瓶，制成细胞悬液。
2.细胞计数，并将细胞密度稀释至3.5×104个/ml。
3.取细胞悬液接种于96孔板上，90μl/孔，置恒温CO2培养箱中培养24小时。
4.24小时后吸去培养液，加入受试药物(虎眼万年青皂甙OSW-1)，药物终浓度分别为10ug/ml，1ug/ml，1×10-1ug/ml，1×10-2ug/ml，1×10-3ug/ml，1×10-4ug/ml，1×10-5ug/ml，1×10-6ug/ml，每孔100μl，培养90小时。
5.A431人皮肤癌细胞株、HL-60人白血病细胞株、WI38人正常细胞株及Hela人宫颈癌细胞株在加药后68小时取出加MTT，其余细胞株均在90小时后取出平板，MTT用PBS溶液配成5mg/ml溶液。将MTT加入96孔板中，10μl/孔，培养箱中反应4小时后吸去上清，加入DMSO，150μl/孔，摇晃15分钟，使沉淀完全溶解，用酶联免疫检测仪在波长为570nm处测定每孔的吸光度值，并计算细胞抑制率。
实验结果虎眼万年青皂甙OSW-1体外筛选结果见表1、2、3。
表1各浓度时药敏组OD均值
表2不同浓度下的细胞抑制率(％)
表3不同浓度下的细胞抑制率(％)
结论以上实验结果显示，虎眼万年青皂甙OSW-1对MCF-7人乳腺癌细胞株、Hela人宫颈癌细胞株、A431人皮肤癌细胞株、HL-60人白血病细胞株、A549人肺癌细胞株的生长显示有较强的抑制效果，对786-0人肾癌细胞株、CNE人鼻咽癌细胞株、SGC-7901人胃癌细胞株的生长亦有一定的抑制作用。
权利要求
1.虎眼万年青皂甙OSW-1在制备抗癌症药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其中所述的癌症为乳腺癌、宫颈癌、皮肤癌、白血病、肺癌、肾癌、鼻咽癌或胃癌。
3.如权利要求1或2所述的应用，其中所述的抗癌症药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂或软胶囊。
全文摘要
本发明涉及虎眼万年青皂甙OSW－1在制备抗癌症药物中的应用。虎眼万年青皂甙OSW－1对MCF－7人乳腺癌细胞株、Hela人宫颈癌细胞株、A431人皮肤癌细胞株、HL－60人白血病细胞株、A549人肺癌细胞株的生长显示有较强的抑制效果，对786－0人肾癌细胞株、CNE人鼻咽癌细胞株、SGC－7901人胃癌细胞株的生长亦有一定的抑制作用。
文档编号A61K9/48GK1951394SQ200610116980
公开日2007年4月25日 申请日期2006年10月10日 优先权日2006年10月10日
发明者惠永正, 杨志奇, 俞春莺, 葛强, 包丽华 申请人:上海中药创新研究中心