瓜蒌和山楂叶的药用组合物的制作方法

专利名称：：瓜蒌和山楂叶的药用组合物的制作方法瓜蒌和山楂叶的药用组合物
技术领域：
]本发明属于医药
技术领域：
，涉及一种用于心脑血管疾病的药物组合物，原料药的组成为瓜蒌或其提取物和山楂叶或其提取物，并提供其制备方法及制剂。
背景技术：
]心脑血管疾病包括冠心病、心绞痛、心肌梗塞、瘀血型肺心病、缺血性脑病、脑血栓、高血压、高血脂等。这些疾病的主要发病原因是动脉硬化造成管腔狭窄、管道阻塞，从而导致心脑供血不足，引起头沉、头晕、头痛、胸闷等症状，严重者可导致脑中风及心肌梗塞的发生。心脑缺血后影响能量代谢，继发乳酸堆积、钙超载、自由基损伤等多种变化。一直以来心脑血管疾病都是威胁人类健康的大敌，每年夺走1200万人的生命，接近人口总死亡的1/4。随着我国逐渐进入老年社会，且随着经济的发展和生活方式、饮食习惯的改变，心脑血管疾病的患病率和死亡率正逐年上升，根据世界卫生组织预测，至2020年，非传染性疾病将占我国死亡原因的79%，其中心脑血管疾病将占首位。因此，如何有效防治心脑血管疾病也就引起人们的高度重视。目前，心脑血管疾病的诊断和防治是世界性研究热点，也是中医药理论和临床研究的重要内容。瓜蒌为葫芦科植物栝楼7Wc/Kwa"快esWn7ovW/Maxim.或双边栝楼7Wc/icwa"汰esmrf/jor""Harms的干燥成熟果实。性甘、微苦，味寒。归肺、胃、大肠经。化学成分主要有油脂和有机酸类、黄酮类、三萜类、甾体类及甾醇、蛋白质等。现代药理学研究表明全瓜蒌能增加冠脉血流量，增加心肌收縮力，抗血小板聚集，对垂体后叶素引起的大白鼠急性心肌缺血有明显的保护作用，对日本大耳兔血清总胆固醇有降低的作用，能够降低血脂，对心绞痛、冠心病有很好的疗效。临床上为治疗心脑血管疾病比较有前途的药物。山楂叶为蔷薇科植物山里红0加flegiAs/w'朋加y^fl(5ge.va/:mq/o/"N.E.Br或山楂Cmtoeg^/W""加诉t&Bge.的干燥叶。山楂叶中的黄酮类化合物如芦丁、金丝桃苷、槲皮素、牡荆素等，是其主要的有效成分，具有扩张血管、增加冠脉血流量以及心肌缺血和脑缺血保护等多种药理活性，具有降压、降血脂和强心作用，能改善心脏活力和兴奋中枢神经系统等。大量研究表明，山楂叶提取物还具有抗氧化功能，对血管内皮细胞的氧化损伤具有明显的保护作用。研究还表明，黄酮类成分中牡荆素化合物具有良好的抗癌作用，此外，有研究表明该提取物对自由基清除、增强自身免疫、增强耐缺氧能力和利尿方面有一定作用。临床应用于冠心病心绞痛及各种原因引起的早搏有明显疗效，有效的缓解心绞痛及心悸、胸闷等症状，改善心电图，降低血脂，提高HDL，改善微循环和血流变，增加脑血流量，抗脂质过氧化。中国药典2005年版一部575576页，益心酮片项下，有山楂叶提取物的标准。其中规定，山楂叶提取物按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁(C27H30O16)计，不得少于80.0%;含金丝桃苷(C21H20O12),不得少于0.40%。已有益心酮(山楂叶提取物)原料、片、滴丸、软胶囊上市。目前利用瓜蒌或瓜蒌提取物与山楂叶或山楂叶提取物的相互作用，配伍组方，制备治疗心脑血管疾病等方面的药物，尚未见报道。
发明内容本发明提供了一种新的治疗心脑血管疾病的药物组合物、其制备方法及其制剂，制成该药物组合物所含药效组分的原料药的组成为瓜蒌或其提取物和山楂叶或其提取物。本发明人经过大量的试验证明，瓜蒌与山楂叶合用治疗有协同增效的作用，其重量配比为瓜蒌1000-15000份，山楂叶50010000份；优选为瓜蒌2000-7000份，山楂叶10004000份；最佳优选为瓜蒌5000份，山楂叶2000份。本发明还提供了瓜蒌和山楂叶的提取工艺，瓜蒌和山楂叶可以用适宜的溶剂分别或混合经过提取加工得到其提取物，提取物再和药用辅料混合加工制成各种任何一种制剂。所述的溶剂是指药学上常用的溶剂，优选水或醇，提取方法可以用药学上常规的方法进行提取，如浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续提取法等。其中瓜蒌提取物的有效成分为甾体皂苷类化合物，山楂叶提取物的有效成分为山楂叶总黄酮。瓜蒌提取物的优选提取工艺取瓜蒌药材，烘干，粗粉，加水回流提取2次，每次10倍量，各2小时，合并提取液，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.101.15(60'C)，加乙醇至含醇量达到80%，放置过夜，取上清液，回收乙醇至相对密度为1.041.06(60'C)的浓縮液，加等量水稀释后，用等量石油醚振摇提取2次，水液用等量水饱和正丁醇振摇提取3次，合并正丁醇提取液，浓縮至干，残渣加少量水使溶解，上大孔树脂柱，先用l倍柱体积的水洗脱，弃去水洗液，再用2倍体积的15%乙醇洗脱，弃去15%乙醇洗脱液，然后用3倍柱体积的70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓縮至稠膏状，喷雾干燥，即得瓜蒌提取物。通过本工艺制备得瓜蒌提取物的得率为34%，其中的留体皂苷类化合物的含量不低于30%。瓜蒌除采用上述方法提取外，还可以通过下述方法提取制备，但不仅限于下述方法取瓜蒌药材，烘干，粗粉，加水回流提取2次，每次10倍量，各2小时，合并提取液，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.101.15(60'C)，加乙醇至含醇量达到80%，放置过夜，取上清液，回收乙醇并浓縮至相对密度约1.081.12的浓縮液，喷雾干燥，即得瓜蒌提取物。通过本工艺制备的瓜蒌提取物的得率为78%,其中的甾体皂苷类化合物的含量不低于20%。山楂叶提取物的优选提取工艺取山楂叶，烘干，切碎，加60%乙醇回流提取三次，每次l小时，加乙醇8倍量，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至相对密度为1.041.06(60'C)的浓縮液，加等量水稀释后，用l/2倍量的石油醚(6090'C)振摇提取，弃去石油醚液，水层用乙酸乙酯振摇提取，提取液减压回收乙酸乙酯并浓縮至干，再加入适量水溶解，加于巳处理好的聚酰胺柱(3060目，乙醇湿法装柱，乙醇适量预洗，再用水洗至无醇味，备用)上，先用2倍柱体积的水洗脱，弃去水洗液，然后分别用3倍柱体积的60%乙醇、75%乙醇、95%乙醇和无水乙醇洗脱，收集各洗脱液，合并，回收乙醇并浓縮至相对密度约1.081.12的浓縮液，喷雾干燥，得山楂叶提取物。通过本工艺制备的山楂叶提取物的得率为2.0~2.5%，山楂叶总黄酮的含量不低于80.0%，金丝桃苷的含量不低于0.40%。山楂叶除采用上述方法提取外，还可以通过以下方法提取制备，但不仅限于下述方法-方法一取山楂叶，烘干，切碎，加70%乙醇回流提取二次，第一次加12倍量乙醇，第二次加10倍量乙醇，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓縮至相对密度为1.08U2，加3倍药材量的水，静置24小时，抽滤，滤液浓縮至相对密度为1.051.08，加于已处理好的聚酰胺柱G060目，乙醇湿法装柱，乙醇适量预洗，再用水洗至无醇味，备用)上，先用2倍柱体积的水洗脱，弃去水洗液，再用3倍柱体积的75%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至无醇味，真空干燥，得山楂叶提取物。通过本工艺制备的山楂叶提取物得率为2.03.0%，山楂叶总黄酮含量不低于60.0%，金丝桃苷含量不低于0.30%。方法二取山楂叶，烘干，切碎，加水煮沸提取二次，每次2小时，过滤，合并滤液，滤液用高速离心机离心20min,400rpm。过滤上清液，并加热浓縮(加热温度在70'C左右)至相对密度为1.051.08。浓縮液冷却后加入等体积乙醇，放入冰箱内2h后，5000r/min离心30min。过滤，滤液回收乙醇(加热温度为7(TC左右)至无醇味，加于已处理好的大孔树脂柱(D101型，乙醇湿法装柱，乙醇适量预洗，再用水洗至无醇味，备用)上，先用2倍柱体积的水洗脱，弃去水洗液，然后用3倍柱体积的80%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并浓縮至相对密度为1.041.06(60'C)的浓縮液，喷雾干燥，得山楂叶提取物。通过上述工艺制备的山楂叶提取物得率为2.53.5%,总黄酮含量不少于50.0%,金丝桃苷含量不少于0.20%。上述药物组合物中，其中的瓜蒌和山楂叶均可由相应重量份的提取物直接投料制成，按照瓜蒌提取物相对于药材的得率为34%,山楂叶提取物相对于药材的得率为2.02.5%分别计算，其相应提取物的重量配比份数为瓜蒌提取物50600份，山楂叶提取物5300份;优选为瓜蒌提取物100300份，山楂叶提取物15120份；最优为瓜蒌提取物150200份，山楂叶提取物3060份。上述药物组合物中，瓜蒌提取物中甾体皂苷类化合物的含量不低于20%、最好不低于30%;山楂叶提取物中总黄酮的含量不低于50%、最好不低于80%,金丝桃苷的含量不低于0.2%、最好不低于0.4%。以上组成，若以克为单位，可以制成1010000次用量的制剂，如作为注射剂，可制成100~10000支，每次用量110支。如作为片剂，可制成1010000片，每次服用110片。以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为原料，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间重量配比的比例不变。以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100%。本发明药物组合物可以口服或肠胃外给药等方式施用于需要这种治疗的患者，优选注射剂或口服制剂。用于肠胃外给药时，可将其制成注射剂，注射剂系指药物制成的供注入体内的溶液、乳液或混悬液及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂，包括注射液、注射用无菌粉末和注射用浓溶液。注射液系指药物制成的供注射入体内用的无菌溶液型注射液、乳液型注射液或混悬型注射液，其标示装量可以为0.5ml、lml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、lOOml、200ml、250ml、500ml等，一般不小于100ml的供静脉滴注用的大体积注射液也称静脉输液。注射用无菌粉末系指药物制成的供临用前用适宜的无菌溶液配制成澄清溶液或均匀混悬液的无菌粉末或无菌块状物，无菌粉末可以用溶媒结晶法、喷雾干燥法或冷冻干燥法等制得。注射用浓溶液系指药物制成的供临用前稀释供静脉滴注用的无菌浓溶液。用于口服给药时，可将其制成常规的固体制剂，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂和口服溶液剂等。片剂系指药物与适宜的辅料混匀压制而成的圆片状或异形片状的固体制剂；片剂以口服普通片为主，另有含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片与肠溶片等。胶囊剂系指药物或加有辅料充填于空心胶囊或密封于软貭囊材中的固体制剂；胶囊剂依据其溶解与释放特性，可分为硬胶囊(通称为胶囊)、软胶囊(胶丸)、缓释胶囊、控释胶囊和肠溶胶囊。颗粒剂系指药物与适宜的辅料制成具有一定粒度的千燥颗粒状制剂；颗粒剂可分为可溶颗粒(通称为颗粒)、混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒和控释颗粒等。丸剂系指药物与适宜的辅料均匀混合，以适当方法制成的球状或类球状固体制剂；丸剂包括滴丸、糖丸、小丸等。口服溶液剂系指药物溶解于适宜溶剂中制成供口服的澄清液体制剂。本发明药物组合物的制剂可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。本发明药物组合物在制成注射剂时，所用溶剂可以是水性溶剂和非水性溶剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂，如渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂等。水性溶剂最常用的水性溶剂为注射用水，也可用0.9%氯化钠溶液或其他适宜的水溶液；非水性溶剂常用的非水性溶剂为植物油，主要为供注射用大豆油，其他还有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。常用的渗透压调节剂包括氯化钠、葡萄糖、氯化钾、氯化镁、氯化钙、山梨醇等，优选氯化钠或葡萄糖；常用的pH值调节剂包括醋酸+醋酸钠、乳酸、枸橼酸+枸橼酸钠、碳酸氢钠+碳酸钠等；常用的增容剂包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的抗氧剂包括亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等常用抑菌剂包括苯酚、甲酚、三氯叔丁醇、苯甲醇等。本发明药物组合物在制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。填充剂包括淀粉、糖粉、磷酸钙、硫酸钙二水物、糊精、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甘露醇等；粘合剂包括羧甲基纤维素钠、PVP-K30、羟丙基纤维素、淀粉浆、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲纤维素、胶化淀粉等；崩解剂包括干淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等；润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、十二院基硫酸钠、微粉硅胶等。本发明药物组合物的优点在于(1)提供了一种新的用于治疗心脑血管疾病的药物组合物，满足了临床急需。(2)对本发明药物组合物各配比进行了药效学研究，得出了本发明药物组合物的最优配比。(3)本发明经过药理学研究和药效动物实验研究表明，由瓜蒌或瓜蒌提取物和山楂叶或山楂叶提取物制成的药物可以显著减小心肌梗塞面积；对抗垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血心电图变化；显著抗血小板聚集；增加冠脉血流量，增加心肌供血，降低左室舒张末期压，降低心脏前负荷等，明显改善犬血液流动力学；改善脑血管循环，减小脑缺血面积；对家脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。上述实验结果表明，瓜蒌或瓜蒌提取物与山楂叶或山楂叶提取物合并用药有协同作用，药效明显增强，其结果是本
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的普通人员所意想不到的。(4)可以瓜蒌提取物和山楂叶提取物为原料直接投料，制备工艺简单，避免了提取时造成的药物损失和由于原药材质量差异造成的不同产品质量差异较大的缺点，使药品纯度更高，杂质少，安全性高，且不同批次药品间质量差异小，药品质量更均匀稳定。(5)稳定性实验表明本发明药物组合物注射液各项指标均比较稳定，保证了临床用药的安全性。(6)对瓜蒌或瓜蒌提取物和山楂叶或山楂叶提取物的相互作用、配伍组方进行研究，本发明药物组合物的药效优于单独使用瓜蒌或瓜蒌提取物、山楂叶或山楂叶提取物的药效，合并用药呈协同作用，可相对减小用药剂量，具有广泛的应用前景。以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些实验例包括本发明药物组合物的药效学实验，瓜蒌或瓜蒌提取物和山楂叶或山楂叶提取物以下简称GS组合物。实验例所用的山楂叶提取物均取自于实施例l，瓜蒌提取物均取自实施例2。GS组合物药效学研究受试动物Wistar大鼠，雄性，体重200220g，290只。供试品空白对照组生理盐水，市购；模型组；瓜蒌提取物组瓜蒌提取物注射剂，自制；山楂叶提取物组山楂叶提取物注射液，自制；GS组合物组GS组合物颗粒剂(瓜蒌提取物+山楂叶提取物)，自制。实验方法将大鼠随机分为29个组，每组10只空白对照组、模型组、瓜蒌提取物组、山楂叶提取物组、GS组合物组瓜蒌提取物+山楂叶提取物，25个不同配比组(制备方法参见实施例9),相当于原药材瓜蒌+山楂叶(1000mg+500mg、1000mg+1000mg、1000mg十2000mg、1000mg+4000mg、1000mg+10000mg、2000mg+500mg、2000mg+1000mg、2000mg+2000mg、2000mg+4000mg、2000mg+10000mg、5000mg+500mg、5000mg+1000mg、5000mg+2000mg、5000mg+4000mg、5000mg+10000mg、7000mg+500mg、7000mg十1000mg、7000mg+2000mg、7000mg+4000mg、7000mg+10000mg、15000mg+500mg、15000mg+1000mg、15000mg+2000mg、15000mg+4000mg、15000mg+10000mg)。各给药组均为用生理盐水配制成混悬液后灌胃给药。大鼠实验性心肌梗死模型动物戊巴比妥腹腔注射麻醉(45mg/kg)仰位固定。气管插管，在胸骨左侧作2cm的纵切口，近胸骨侧剪断第3、第4肋软骨，打开胸腔后，连接人工呼吸机(通气量2ml/100g,50次/min)。剪开心包膜，暴露心脏，冠状动脉左前降支根部穿线以备结扎，记录标准II导联心电图，稳定10分钟，结扎冠状动脉左前降支，关闭胸腔。用针筒吸出动物喉部分泌物，使动物恢复自主呼吸。结扎冠状动脉15min后，灌胃给药。结扎冠状动脉4小时后，摘取心脏，在结扎线以下横切5片，进行氯化硝基四氮唑蓝(N-BT)染色，计算心肌梗死塞区面积占心室及心脏面积的百分比，并进行统计学处理(t检验)。表lGS组合物对大鼠实验性心肌梗塞范围的影响(x土s)组别重量份数配比给药剂量(mg/kg)梗死区/心室(%)梗死区/心脏(％)空白对照组-2029.11±5.1323.59±4.79模型组-4533.19±6.37x26.66±4.48x瓜蒌提取物组-8028.32土6.U'23.17土5.66'山楂叶提取物组-8025.26士6.59'22.14±6.37'1000mg+500mg8014.63±5.57"#&12.26±5.63"*&1000mg+1000mg8013.24±4.34"#&11.28±3.63"#&1000mg+2000mg8012.96±5.49"#&11.05±5.56**#&1000mg+4000mg8013.34±5.311.32±4.39"#&1000mg+10000mg8014.77±3.18"#&12.11±4.22"#&2000mg+500mg8013.99±5.62"#&11.57±5.88"#&2000mg+1000mg8013.11±4.87"#&11.52土3.55"錄2000mg+2000mg8012.56±5.62"#&11.05±5.27"#&2000mg+4000mg8012.24±5.47"#&10.36±4.78"#&2000mg+10000mg8013.26±3.55"#&10.94±4.17"*&5000mg+500mg8012.11±4.63"#&9.54±3.26"#&GS组合物组(瓜5000mg+1000mg8011.74±4.33"#&9.32±3.15"#&蒌提取物+山楂5000mg+2000mg8011.27±4.08"#&9.15±3.02"#&叶提取物)5000mg+4000mg8011.55±5.64"#&10.32±4.54"#&5000mg+10000mg8011.89±3.21"#&9.33±4.19"#&7000mg+500mg8014.32±5.23"#&12.67±5.28"#&7000mg+1000mg8012.89±4.26"#&11.74±3.99"#&7000mg+2000mg8012.28±5.63"#&11.25±5.32"#&7000mg+4000mg8012.11±5.67"#&10.38±4.79"*&7000mg+10000mg8013.56±3.58"#&9.97±4.82"#&15000mg+500mg8012.11±5.45"#&11.33±5.52"#&15000mg+画mg8011.68±4.29"#&11.56±3.74"#&15000mg+2000mg8011.55±5.55**#&11.07±5.39"*&15000mg+4000mg8011.79±5.20"#&10.23±4.815000mg+10000mg8012.69±3.66,&9.87±4.56"#&注、<0.05,*'pO.Ol，与模型组相比;V0.05,与山楂叶提取物组相比；&p<0.05,瓜蒌提取物组相比；xp<0.05，模型组与空白对照组。实验结果及结论实验结果见表l。(1)与空白对照组相比，模型组的心肌梗塞面积显著增加(p<0.05)，说明造模成功。(2)与模型组相比，山楂叶提取物组心肌梗塞面积显著减小(p<0.05)，瓜蒌提取物组心肌梗塞面积显著减小(p<0.05)，各GS组合物组心肌梗塞面积均极显著减小(p<0.01)。(3)与单用山楂叶提取物组、瓜蒌提取物组相比，各组合物配比组的抗心肌梗塞作用均优于单用山楂叶提取物(p<0.05)和瓜蒌提取物组(p<0.05)。表明，与单用山楂叶提取物和瓜蒌提取物相比，GS组合物组均可显著减小心肌梗塞面积，说明两药配伍有协同增效作用，且作用效果与配比相关，在各重量份数中，瓜蒌20007000，山楂叶10004000配比时，效果优于较大范围内的，且在配比为瓜蒌+山楂叶(5000+2000)时，效果最好，提示其可能为最佳配比。实验例2GS组合物对实验性大鼠急性心肌缺血保护作用的研究实验动物Wistar大鼠，170只，体重在200土30g,雌雄各半。供试品空白对照组生理盐水，市购；硝酸甘油组硝酸甘油片，规格0.5mg，北京益民药业有限公司；瓜蒌提取物组自制；山楂叶提取物组自制；GS组合物组GS组合物片剂(瓜蒌提取物+山楂叶提取物)，自制。仪器六道生理记录仪，上海医用仪器厂。实验方法取Wistar大鼠170只，随机分为17组，每组10只，分别为空白对照组，模型组，硝酸甘油组，瓜蒌提取物组，山楂叶提取物组，GS组合物组13组(制备方法参见实施例7)，瓜蒌提取物+山楂叶提取物(100mg+30mg、100mg+60mg、150mg+30mg、150mg十60mg、160mg+30mg、160mg+60mg、180mg+30mg、180mg+60mg、200mg+30mg、200mg十60mg、250mg+30mg、300mg+30mg、300mg+60mg)。各给药组均为用生理盐水配制成混悬液后灌胃给药，各组动物每天灌胃给予GS组合物1次，连续7天(硝酸甘油组于给垂体后叶素前舌下静脉注射1次)。末次给药后60min，用氨基甲酸乙酯(lg/kg)腹腔注射麻醉于六道生理记录仪(上海医用仪器厂)，连接肢体导联和胸前导联，于示波器观测并记录心电图。舌下静脉注射垂体后叶素5ul/kg后，立即记录V3心电图，并于15s、30s、lmin、2min、5min各描记1次，比较各组静脉注入垂体后叶素后心电图ST段上移及T波升高的幅度，并观察各组出现心律失常的动物数。结果见表2。表2GS组合物对抗垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血心电图变化<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注与空白对照组相比，*p<0.05，**p<0.01;与瓜蒌提取物组相比，#p<0.05;与山楂叶提取物组相比，&p<0.05。结论给予垂体后叶素后各组心电图ST段上移及T波升高的幅度以及出现心率失常的动物数见表2，注射垂体后叶素后，空白对照组多数动物即刻出现ST段上移，2min内达到最髙峰，5min基本恢复。T波即刻2min出现升高，随之逐渐恢复，但5min未恢复至正常。硝酸甘油组和GS组合物组ST段上移及T波升高出现的时间与对照组一致，但幅度明显小于对照组，且恢复较快。与单用山楂叶提取物组、瓜蒌提取物组相比，各组合物配比组的抗心电图变化均优于单用山楂叶提取物和瓜蒌提取物组，有显著性差异(p<0.05)。其中瓜蒌提取物(150~200)+山楂叶提取物(30~60)的效果较好，有极显著性差异(pO.Ol)，且心率失常数少，表明瓜蒌提取物150200份，山楂叶提取物3060份的重量份数范围内时效果较优，提示其可能为最佳配比范围。实验例3GS组合物抗血小板聚集作用受试动物Wistar大鼠，雄性，体重200220g，60只，随机分为6组，每组10只。供试品空白对照组生理盐水，市购；瓜蒌提取物组自制；山楂叶提取物组自制；GS组合物组GS组合物胶囊剂(瓜蒌提取物+山楂叶提取物)，相当于原药材瓜蒌+山楂叶^5000mg+2000mg，自制(制备方法参见实施例8),分为高、中、低三个剂量组。实验方法将大鼠随机分为6组，每组10只，分别为空白对照组，瓜蒌提取物组，山楂叶提取物组，GS组合物组高、中、低剂量组。各给药组均为用生理盐水配制成混悬液后灌胃给药，每日一次，连续给药7天，末次给药后l小时，动物麻醉后自腹主动脉取血，抗凝剂采用3.28%枸櫞酸钠，与血液以1:9比例混合。将抗凝全血在20'C条件下1500r/min离心5min获得富血小板血浆(PPR)。留取定量PPR后，将剩余PPR再次以3000r/min离心10min，获得自身对照贫血小板血浆(PPP)。以PPP调节PPR浓度，使各PPR浓度相同。将PPR在37。C的恒温孔中预热后，加入ADP(终浓度为3nmol/L)引起血小板聚集，记录最大聚集率。结果见表3。表3抗血小板聚集作用(X土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注'p<0.05，"pO.Ol，与空白对照组相比；#p<0.05，与山楂叶提取物组相比；&p<0.05，与瓜蒌提取物组相比。实验结果及结论实验结果见表3。(1)与空白对照组相比，瓜蒌提取物组和山楂叶提取物组血小板最大聚集率均显著降低(p<0.05)，组合物各剂量组血小板最大聚集率极显著降低(pO.Ol)。(2)与单用瓜蒌提取物组、山楂叶提取物组相比，GS组合物各剂量组的血小板最大聚集率显著降低(p<0.05，p<0.05)。表明，与单用瓜蒌提取物组或山楂叶提取物相比，GS组合物各剂量组均都能明显抑制血小板聚集，表明山楂叶提取物与瓜蒌提取物配伍有很好的协同作用，且作用效果与给药剂量有关，高剂量时效果最好。实验例4GS组合物注射液静脉给药对麻醉开胸犬血流动力学的影响受试动物杂种犬，25只，体重在11.013.0公斤，每组5只。供试品空白对照组生理盐水，市购；瓜蒌提取物组瓜蒌提取物注射液，自制；山楂叶提取物组山楂叶提取物注射液，自制；GS组合物组GS组合物水针剂(瓜蒌提取物+山楂叶提取物)，相当于原药材瓜蒌+山楂叶(5000mg+2000mg)，自制(制备方法参见实施例3)，分为高、中、低三个剂量组。实验方法空白对照组、山楂叶提取物组80mg/kg、瓜蒌提取物组80mg/kg、GS组合物高剂量组为80mg/kg，GS组合物中剂量组为50mg/kg，GS组合物低剂量组为20mg/kg。各给药组在给药前用0.9%生理盐水配制所需浓度药液。犬用3%戊巴比妥钠lml/kg前肢静脉注射麻醉，仰卧位固定于手术台上，剪去颈部、胸部和右后肢内侧的毛。75%乙醇消毒剪毛区。分离气管，并插入气管插管，备人工呼吸用；分离颈外静脉，并从颈外静脉插管经上腔静脉进入右心房并达到心房窦处，用于抽取冠状静脉的血液；分离股静脉，插入静脉插管，整个实验过程中缓慢恒速注入10%葡萄糖。分离股动脉，插入动脉插管(管内充满25U/ml的肝素钠生理盐水)，接通TP-400T型压力换能器，由AP-641G型血压放大器记录血压(收缩压SAP,舒张压DAP,平均动脉压MAP)。人工呼吸下，于第4肋间开胸，剪开心包膜，分离升主动脉根部和左冠状动脉前降支，分别放置适宜内径的电磁血流量计探头(13，2mm)测量心输出量(CO)和冠状动脉血流量(CBF)。将左心室插管(管内充满25U/ml的肝素生理盐水)经左心室心尖部插入左心室内，通过TP-400T型压力换能器，由AP-641G型血压放大器记录左室内压(LVP)，通过AD-601G型放大器记录左室舒张末期压(LVEDP):将针状电极插入犬四肢皮下，描记标准II导联心电图(ECG)。上述测量信号均输入RM-6000型八道生理记录仪记录，描记。同时将心输出量、心电、血压及心室内压的电信号输入微机的生物医学生理信号处理系统进行处理，并由微机读出心室内压峰值(LVSP)、舒张末期压(LVEDP)、心室收縮参数(+dp/dtmax)、心室舒张参数(-dp/dtmax)。最后，计算心指数(CI)、每搏输出量(SV)、心搏指数(SI)、每搏功指数(SWI)、血管总外周阻力等参数(TPVR)。手术完成后稳定20min，将药物溶于100ml生理盐水中，15min内经股静脉恒速滴入。在给药前、给药后lh、2h分别抽取左心室及冠状静脉血，肝素抗凝，注射于i-STATG3+Cartridges(i-STAT公司G3+型测试片)中，通过血气分析仪测量动、静脉血氧分压。心肌耗氧量由Kanter公式计算而来，其公式是MV02-3.25X10XCF(PaO2-PvO2)/Wt。MV02是指每100g左室心肌的耗氧量，CF为冠脉流量，Pa02、Pv02分别表示动、静脉血氧分压，Wt是左心室肌重。所有数据均以平均值土标准偏差表示，根据用药前后各组中各个指标的变化，采用配对t-检验来判断用药前后各种指标改变的统计学意义。实验结果(1)对麻醉犬总外周血管阻力的影响与空白对照组比较，各剂量GS组合物注射液组均能极显著降低麻醉犬总外周血管阻力(p<0.01)，山楂叶提取物组和瓜蒌提取物的作用较GS组合物注射液组低；与单用山楂叶提取物和瓜蒌提取物相比，各剂量GS组合物注射液组均能显著降低麻醉犬总外周血管阻力(p<0.05)。(2)对麻醉犬左室舒张末期压的影响与空白对照组比较，各剂量GS组合物注射液组均能极显著降低麻醉犬左室舒张末期压(p<0.01)，山楂叶提取物组和瓜蒌提取物能显著降低麻醉犬左室舒张末期压(p<0.05);与单用山楂叶提取物和瓜蒌提取物相比，各剂量GS组合物注射液组均能显著降低麻醉犬左室舒张末期压(p<0.05)。(3)对麻醉犬冠状动脉血流量的影响与空白对照组比较，各剂量GS组合物注射液组均能极显著增加麻醉犬冠状动脉血流量(p<0.01)，山楂叶提取物组和瓜蒌提取物能显著增加麻醉犬冠状动脉血流量(pO.05);与单用山楂叶提取物和瓜蒌提取物相比，各剂量GS组合物注射液组均能显著增加麻醉犬冠状动脉血流量(p<0.05)。(4)对麻醉犬心室收縮参数的影响与空白对照组比较，各剂量GS组合物注射液组均能极显著增加麻醉犬心室收缩参数(p<0.01)，山楂叶提取物组和瓜蒌提取物能显著增加麻醉犬心室收缩参数(p<0.05);与单用山楂叶提取物和瓜蒌提取物相比，各剂量GS组合物注射液组均能显著增加麻醉犬心室收縮参数(p<0.05)。(5)对麻醉犬心室舒张参数的影响与空白对照组比较，各剂量GS组合物注射液组均能极显著增加麻醉犬心室舒张参数(pO.Ol)，山楂叶提取物组和瓜蒌提取物能显著增加麻醉犬心室舒张参数(p<0.05);与单用山楂叶提取物和瓜蒌提取物相比，各剂量GS组合物注射液组均能显著增加麻醉犬心室舒张参数(p<0.05)。(6)对麻醉犬心输出量、每搏输出量、心指数以及心搏指数的影响与空白对照组比较，各剂量GS组合物注射液组均能极显著增加麻醉犬的心输出量、每搏输出量、心指数、心搏指数(pO.Ol)，山楂叶提取物组和瓜蒌提取物能显著增加麻醉犬的心输出量、每搏输出量、心指数、心搏指数(pO.05);与单用山楂叶提取物和瓜蒌提取物相比，各剂量GS组合物注射液组均能显著增加麻醉犬的心输出量、每搏输出量、心指数、心搏指数(p<0.05)。结论GS组合物用药可通过增加冠状动脉血流量，使心肌的供血增加，降低左室舒张末期压，使血液易于从心外膜向心内膜下区域流动，对冠状动脉血流量进行重新分配；能明显降低心脏前负荷，对后负荷无明显影响；能显著改善心脏的泵血功能；能明显改善心脏的收縮和舒张功能。GS组合物用药的效果优于单用山楂叶提取物和瓜蒌提取物，提示两药有协同增效作用，且高剂量者效果优。实验例5GS组合物对家兔脑缺血灌注损伤的保护作用受试动物与分组家兔，78只，雌雄兼用，体重2.42.8&8,随机分为缺血再灌注组(18只)、GS组合物治疗组(18只)、山楂叶提取物治疗组(18只)、瓜蒌提取物治疗组(18只)和假手术对照组(6只)。供试品生理盐水生理盐水，市购；瓜蒌提取物组瓜蒌提取物粉针剂，自制；山楂叶提取物组山楂叶提取物粉针剂，自制；GS组合物组GS组合物粉针剂(瓜蒌提取物+山楂叶提取物)，相当于原药材瓜蒌+山楂-5000mg+1000mg(A组)，5000mg+2000mg(B组)，5000mg+4000mg(C组)，自制，(制备方法参见实施例4)。供试液的配制所有供试品均配成20mg/ml的供试液。给药剂量空白对照组20mg/kg，瓜蒌提取物组80mg/kg,山楂叶提取物组80mg/kg，GS组合物A组为80mg/kg，GS组合物B组为80mg/kg，GS组合物C组为80mg/kg。实验方法(l)缺血再灌注组18只，用25。/。的氨基甲酸乙脂溶液lg/kg耳缘静脉麻醉，颈部正中切口分离气管插入气管套管，暴露两侧颈总动脉，夹闭两侧动脉20min,造成脑缺血，分别再灌注l、6和12h,3个时间点各6只。松夹10min后，耳缘静脉推注生理盐水5ml/kg。(2)GS组合物治疗组每一GS组合物粉针剂剂量组18只，手术方法同缺血再灌注组，3个时间点各6只。松夹10min后，耳缘静脉推注GS组合物粉针剂20mg/kg。(3)山楂叶提取物治疗组18只，手术方法同缺血再灌注组，3个时间点各6只。松夹10min后，耳缘静脉推注山楂叶提取物粉针剂20mg/kg。(4)瓜蒌提取物治疗组18只，手术方法同缺血再灌注组，3个时间点各6只。松夹10min后，耳缘静脉推注瓜蒌提取物粉针剂20mg/kg。(5)假手术对照组6只，仅行麻醉和动脉分离术而不夹闭，lh后处死。上述各组实验结束后即断头，在冰浴中剥出大脑，冰盘上解剖出双侧海马区组织，用锡纸包裹放在4。C冰箱中储存，备测磷脂酶A2(PLA2);切取皮层组织测脑梗死面积、脑含水量，选取大脑中动脉供血区的额顶区组织标本进行病理学观察。所有计量资料数据均釆用平均值土标准偏差表示，组间比较采用t检验。实验结果(1)对海马组织PLA2活性的影响缺血再灌注组再灌注lh、6h和12h后，PLA2活性较假手术对照组极显著增高(pO.Ol),且随灌注时间延长，PLA2活性呈递减趋势，但各时间点间比较差异不显著(p>0.05);GS组合物治疗组(lh、6h、12h)PLA2活性明显降低，与假手术对照组和缺血再灌注组各相应时间点比较具有显著性差异(p<0.01),且随再灌时间延长，PLA2活性逐渐恢复正常水平；山楂叶提取物治疗组和瓜蒌提取物治疗组(lh、6h、12h)PLA2活性降低，与假手术对照组和缺血再灌注组各相应时间点比较具有显著差异(p<0.05),GS组合物的作用优于单用山楂叶提取物和瓜蒌提取物。(2)对皮层组织含水量(％)和梗死面积(％)的影响缺血再灌注组各时间点脑含水量均增高；GS组合物治疗组各时间点脑水含量与缺血再灌注组相比极显著减轻(pO.Ol)，脑梗死面积与缺血再灌注组相比极显著縮小(p<0.01);山楂叶提取物治疗组和瓜蒌提取物治疗组各时间点脑水含量与缺血再灌注组相比显著降低(p<0.05)，脑梗死面积与缺血再灌注组相比显著縮小(p<0.05)。(3)脑组织病理改变假手术对照组无梗死状，神经元结构形态正常，无间质水肿；缺血再灌注组有梗死状，梗死状周神经元肿胀，细胞轮廓不清，间质水肿明显；GS组合物治疗组、山楂叶提取物治疗组、瓜蒌提取物治疗组梗死状面积均縮小，梗死状周神经元肿胀不明显，间质水肿明显减轻；GS组合物治疗组作用更明显。结论上述实验结果表明，脑缺血再灌注后，GS组合物、山楂叶提取物、瓜蒌提取物均可降低海马组织PLA2活性，改善脑缺血所致内环境紊乱，减轻脑水肿，减小脑梗死面积；说明GS组合物、山楂叶提取物、瓜蒌提取物均具有清除自由基，快速切断自由基连锁反应，抑制脂质过氧化，减轻迟发性脑损伤等脑组织保护作用。GS组合物在各项指标中效果均优于山楂叶提取物和瓜蒌提取物单独用药的效果，提示，两药具有协同增效作用，当重量份数配比为瓜蒌+山楂叶-5000mg+2000mg组效果最优，提示其可能为最佳配比。实验例6GS组合物用药对小鼠常压耐缺氧能力的影响受试动物小鼠，280只，体重2025g，雌雄各半。供试品空白对照组生理盐水，市购；瓜蒌提取物组；山楂叶提取物组；GS组合物组GS组合物胶囊剂(瓜蒌提取物+山楂叶提取物)，自制。实验方法将大鼠随机分为28个组，每组10只空白对照组、模型组、瓜蒌提取物组、山楂叶提取物组、GS组合物组25个不同配比组(制备方法参见实施例8)，提取物配比相当于原药材瓜蒌+山楂叶(1000mg+500mg、1000mg+1000mg、1000mg+2000mg、1000mg+4000mg、1000mg+10000mg、2000mg+500mg、2000mg+1000mg、2000mg+2000mg、2000mg+4000mg、2000mg+画0mg、5000mg+500mg、5000mg+1000mg、5000mg+2000mg、5000mg+4000mg、5000mg+10000mg、7000mg+500mg、7000mg+1000mg、7000mg+2000mg、7000mg+4000mg、7000mg+10000mg、15000mg+500mg、15000mg+1000mg、15000mg+2000mg、15000mg+4000mg、15000mg+10000mg)。各给药组均为用生理盐水配制成混悬液后灌胃给药，空白对照组灌胃给予同体积的生理盐水，每天1次，连续5天，给药剂量见表4。末次给药lh后，分别置于经容量标定125ml的广口瓶中，瓶内置10g钠石灰以吸收C02和水份，瓶盖涂以凡士林密封，记录小鼠的死亡时间。表4GS组合物用药对小鼠常压耐缺氧能力的影响(X±SD，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>注p<0.05,pO.Ol,与对照组相比；#p<0.05，与山楂叶提取物组相比；xp<0.05，与瓜蒌提取物组相比。实验结果及结论实验结果见表4。与对照组相比较，在常压缺氧情况下，GS组合物组可显著延长小鼠的存活时间(p<0.01);山楂叶提取物组可明显延长小鼠存活时间(p<0.05);瓜蒌提取物组在延长小鼠存活时间上有也效果，但是无显著性差异。GS组合物组各剂量配比组与山楂叶提取物组相比，可明显延长小鼠存活时间，且差异显著(p<0.05),与瓜蒌提取物组相比，可延长小鼠存活时间，差异性显著(p<0.05)。由此可见，GS组合物各剂量配比组中小鼠的存活时间均长于山楂叶提取物组和瓜蒌提取物组，提示山楂叶提取物和瓜蒌提取物合并用药有协同增效作用，可明显延长小鼠在常压缺氧状态下的生存时间，在治疗缺氧性心脑血管疾病及其它缺氧性疾病方面将有显著疗效。其中瓜蒌5000份、山楂叶2000份的合并用药效果最好，提示其可能为最佳配比。$關7GS^fel舰液特棘她魏1、过敏性实验实验动物豚鼠，18只，体重280310g，雌雄兼用，随机分为供试药组、阴性对照和阳性对照三组，每大组6只。供试品GS组合物水针剂组自制(处方和制备方法参见实施例3，2ml含叶总黄酮43.13mg、含甾体皂苷类化合物63.56mg);阴性对照生理盐水，市购；阳性对照药5%卵白蛋白生理盐水溶液(自制)。给药剂量致敏剂量0.51111/只；致敏次数隔日腹腔注射l次，连续3次；攻击剂量lml/只，静脉注射。实验方法按上述分组分别给豚鼠隔日腹腔注射上述药液0.5ml，共注射三次。然后将每大组豚鼠再分成两小组，每小组3只。第一小组豚鼠于第一次致敏后14天，第二小组于第一次致敏后21天进行抗原攻击，每只豚鼠均静脉注射上述药液lml。观察并记录攻击后15min内豚鼠的表现。实验结果及结论供试药组和阴性对照药组豚鼠均未发现过敏反应，而卵白蛋白组产生过敏反应并死亡。表明，GS组合物水针剂无致敏作用。2、溶血性实验实验动物雄性家兔，l只，体重2,4kg。供试品GS组合物水针剂组自制(处方和制备方法参见实施例3,2ml含山楂叶总黄酮43.13mg、含甾体皂苷类化合物63.56mg)。实验方法制备2%红细胞生理盐水混悬液备用。取洁净试管7支，编号并排列在试管架上，按下表顺序操作，混匀后置37'C水浴中温育，观察记录0.5、1、2、3、4h的结果。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>实验结果及结论供试品0.10.5ml各管在0.5、1、2、3、4h均未出现溶血和红细胞凝集现象。结果表明，GS组合物水针剂无溶血性。3、血管刺激性实验实验动物家兔，体重2,l2.3kg，雌雄兼用。供试品GS组合物水针剂组自制(处方和制备方法参见实施例3，2ml含山楂叶总黄酮43.13mg、含甾体皂苷类化合物63.56mg);对照药氯化钠注射液，山东华信制药有限公司。给药剂量家兔静滴给药剂量为50ml/kg。实验方法取健康家兔6只，随机分为供试药组和0.9%氯化钠注射液对照组，每组3只，剂量均为20ml/kg。给药前将兔置固定箱中，于耳缘静脉按上述分组分别滴注供试药和0.9%氯化钠注射液，滴速为lml/min(20滴/min)，观察给药后24h注射局部有无充血、水肿、出血、坏死。连续给药3天，于末次给药后24h在远离注射部位lcm的向心端取兔耳，用10%福尔马林固定，做病理学检査。实验结果及结论肉眼观察及病理检査表明，给药组与对照组无明显差别，用药部位的血管及周围组织均未见充血、水肿、出血、坏死，病理检査无异常。表明，GS组合物水针剂静脉静滴对血管无刺激性。实验例8GS组合物注射液稳定性实验样品样品GS组合物水针剂(处方和制备方法参见实施例3)。考察项目性状、PH值、澄明度、含量、有关物质。长期实验置温度25土2t:、相对湿度60±10%的条件下放置12个月，各项指标均无明显变化；长期实验12个月末，热原、无菌检査均符合规定。结论上述考察结果表明，GS组合物水针剂的各项指标均比较稳定，适应于工业大生产。具体实施例方式以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料代替，或者减少、增加。实施例l山格叶提取物的制备1、山楂叶提取物的制备方法取山楂叶，烘干粉碎，加60%乙醇回流提取三次，每次l小时，加乙醇8倍量，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至相对密度为1.041.06(6(TC)的浓縮液，加等量水稀释后，用l/2倍量的石油醚(6090°C)振摇提取，弃去石油醚液，水层用乙酸乙酯振摇提取，提取液减压回收乙酸乙酯并浓縮至干，再加入适量水溶解，加于己处理好的聚酰胺柱(3060目，乙醇湿法装柱，乙醇适量预洗，再用水洗至无醇味，备用)上，先用2倍柱体积的水洗脱，弃去水洗液，然后分别用3倍柱体积的60%乙醇、75%乙醇、95%乙醇和无水乙醇洗脱，收集各洗脱液，合并，回收乙醇并浓縮至相对密度约1.081.12的浓縮液，喷雾干燥，得山楂叶提取物。2、山楂叶提取物的鉴别实验取山楂叶提取物研细，取0.1g，加乙醇5ml，摇匀，超声处理5分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取芦丁对照品、金丝桃苷对照品，分别加乙醇制成每lml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法实验，吸取上述三种溶液各lnl,分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-丙醇-水(7:5:6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，吹干，放置l小时后，置紫外光灯下(365nm)下，检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。3、山楂叶提取物的含量測定标准溶液的制备精密称取芦丁对照品200mg，置于100ml容量瓶中，加入乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取此溶液10ml置100ml容量瓶中，加乙醇定容至刻度，摇匀即得(每lml含无水芦丁0.2mg)。标准曲线的制备精密吸取标准溶液O.Ol、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml分别置25ml容量瓶中，各加乙醇至6ml，加10^亚硝酸钠溶液1.0ml，混匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液l.Oml，放置6min，加氢氧化钠试液10.0ml，最后用乙醇稀释至刻度。摇匀，以第l瓶为空白，照紫外分光光度法，在510nm处测定吸收度。供试品的制备精密称定提取物1.0g，置索氏提取器中，加乙醇回流至无色，提取液于蒸发皿中，水浴浓縮至干，用50ml热水溶解并转移至分液漏斗中，加入水饱和正丁醇液萃取3次，每次10ml，合并萃取液于蒸发皿中，水浴蒸干，再加乙醇使溶解，并滤入50ml容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀。精密吸取5ml于25ml容量瓶中。加乙醇至刻度，摇匀，即得。测定法按标准曲线的制备操作测定供试品溶液的吸收度，带入回归方程，计算，即得。4、山楂叶提取物中金丝桃苷的含量测定色谱条件及系统适应性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-四氢呋喃-水-甲酸(55:45:400:1.5)为流动相；检测波长为255nm;柱温为25'C;流速为lml/min。对照品溶液的制备精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h的金丝桃苷对照品适量，加甲醇制成每lml中含2(Vg的溶液，即得。供试品溶液的制备取山楂叶提取物约0.4g，精密称定，加入70%丙酮溶液超声提取，共3次，每次使用溶液30ml，超声10min，滤过，最后使用少量70%丙酮溶液反复洗涤34次，合并滤液，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，并稀释成50ml，摇匀，过微孔滤膜，得供试品。测定法分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各20^1，注入液相色谱仪，测定，即得。按照上述方法制备三批山楂叶提取物，总黄酮的含量和得率见表5。从结果可以看出，通过本工艺得到的山楂叶提取物的得率为2.02.5%，总黄酮含量不低于80%，金丝桃苷含量不低于0.4%。表5山楂叶提取物的含量測定结果和得率<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>平均87.310.522.47实滩例2瓜菜提:1、瓜蒌提取物的制备方法取瓜蒌药材，烘干，粗粉，加水回流提取2次，每次10倍量，各2小时，合并提取液，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.10~1.15(60'C),加乙醇至含醇量达到80%,放置过夜，取上清液，回收乙醇至相对密度为1.041.06(60°C)的浓缩液，加等量水稀释后，用等量石油醚振摇提取2次，水液用等量水饱和正丁醇振摇提取3次，合并正丁醇提取液，浓縮至干，残渣加少量水使溶解，上大孔树脂柱，先用l倍柱体积的水洗脱，弃去水洗液，再用2倍体积的15%乙醇洗脱，弃去15%乙醇洗脱液，然后用3倍柱体积的70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓縮至稠膏状，喷雾干燥，即得瓜蒌提取物。2.瓜蒌提取物含量渊定实验甾体皂苷类化合物的含量测定香草醛一冰乙酸试液的配制准确称取4g香草醛，加50ml冰乙酸，置于棕色瓶中，混合摇匀至完全溶解，置于冰箱中(现配现用)。甾体皂苷提取方法将瓜蒌提取物0.28溶于251111水中，加入石油醚20ml脱脂，重复2次，再用水饱和正丁醇萃取4次(20ml、20mL、10ml、10mE),合并正丁醇萃取液，真空浓縮至干，用甲醇溶解，定容至25ml，待用。标准曲线的制备分别精确移取人参皂苷标准品Rgl(浓度为2.2mg/ml)5、10、30、50、70、90、110lU于10ml具塞试管中制成系列标准溶液，水浴挥千甲醇，加0.7ml8X的香草醛冰乙酸溶液，再加人5ml高氯酸，摇匀，于60'C水浴15min,取出立刻用自来水冲至室温，以不加样品的平行样作空白，于560nm测定吸光度，以吸光度(A)对人参皂苷含量(M，单位ug)作回归曲线，得回归方程M=223.13A+4.7876，R=0.998。甾体皂苷提取液的含量测定准确移取样品溶液30yl，置于10ml具塞试管中，水浴挥干甲醇，加O.5ml8X的香草醛冰乙酸溶液，再加人5ml高氯酸，摇匀，于60'C水浴15min,取出立刻用流动自来水迅速冷至室温，以不加样品的平行样作空白，于560nm测定吸光度A。结果按照上述方法制备三批瓜蒌提取物，总甾体皂苷类化合物的含量和得率见表6。从结果可以看出，通过本工艺得到的瓜蒌提取物的得率为34%，甾体皂苷类化合物含量不低于30%。表6瓜蒌提取物的含量渊定结果和得率<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>原料中的山楂叶和瓜蒌参照实施例1、2中的制备方法制成提取物。(1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。(2)将乙醇与等量的水混合，加入山楂叶提取物和瓜蒌提取物使溶解；将聚乙二醇400楂蒌乙醇射帝山瓜聚乙注共共制备1000支制备工艺原料中的山楂叶和瓜蒌参照实施例1、2中的制备方法制成提取物。(1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。23用50%的水溶解。(3)合并上述两溶液，补加注射用水至全量。(4)加入配液量0.1%的针用活性炭，加热搅拌15分钟。(5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。(6)经0.45pm的微孔滤膜精滤。(7)检查溶液的澄明度，半成品化验。(8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。(9)100'C流通蒸汽灭菌30分钟。(10)趁热将样品放入0.01%的亚甲蓝溶液中检漏。(11)灯检，成品全检，包装入库。实滩例4GS缉合物粉针剂的制备处方一叶2000g2000g梨酯8080g醇300g醇50g注射用水加至3000ml画支2000g5000g80g300g50g加至3000ml1000支2000g7000g80g300g50g加至3000ml楂蒌山露梨菌山瓜聚甘山无希共o水^用叶梨醇醇i:楂蒌山露梨菌方处瓜聚甘山无共希三处8用酯射叶梨醇醇注楂蒌山露梨菌山瓜聚甘山无(2)按照处方量称取原辅料。(3)将山楂叶提取物和瓜蒌提取物加入配液量30%无菌注射用水中加热溶解完全。甘露醇、山梨醇加配液量30%的无菌注射用水加热搅拌溶解完全，聚山梨酯80加20%的无菌注射用水后制成水溶液，合并上述溶液，补加无菌注射用水至全量。(4)加入配液量0.1%的针用活性炭，加热搅拌15分钟。(5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。(6)经0.45nm的微孔滤膜精滤。(7)检査溶液的澄明度，半成品化验。(8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45"C5小时，低温真空干燥-45'C0'C20小时，然后升温至25'C真空干燥3小时。(9)冻干结束，压塞，轧盖。(10)成品全检，包装入库。处方一:<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>制备工艺原料中的山楂叶和瓜蒌参照实施例1、2中的制备方法制成提取物。(1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。(2)将山楂叶提取物加入配液量20%注射用水加热搅拌溶解完全，将氯化钠用配液量20%的注射用水溶解完全。聚山梨酯80加20%的无菌注射用水后制成水溶液加入瓜蒌提取物加热溶解。(3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。(4)加入配液量0.1%的针用活性炭，加热搅拌15分钟。(5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。(6)经0.45pm的微孔滤膜精滤。(7)检査溶液的澄明度，半成品化验。(8)灌装于100ml的输液瓶中。(9)115。C热压灭菌30分钟。(10)灯检，成品全检，包装入库。^翻6GS監糊繊髓,《处方一-处方处方山楂叶画g瓜蒌2000g聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水加至100000ml共制备1000瓶山楂叶1000g瓜蒌5000g聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水加至100000ml共制备1000瓶山楂叶1000g瓜蒌7000g聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水加至100000ml共制备1000瓶制备工艺-原料中的山楂叶和瓜蒌参照实施例1、2中的制备方法制成提取物。(1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。(2)将山楂叶提取物加入配液量20%注射用水中加热搅拌溶解完全，将葡萄糖用配液量20%的注射用水溶解完全，加热煮沸15分钟。聚山梨酯80加20%的无菌注射用水后制成水溶液加入瓜蒌提取物加热溶解。(3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。(4)加入配液量0.1%的针用活性炭，加热搅拌15分钟。(5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。(6)经0.45nm的微孔滤膜精滤。(7)检査溶液的澄明度，半成品化验。(8)灌装于100ml的输液瓶中。(9)115'C热压灭菌30分钟。(10)灯检，成品全检，包装入库。实施例7GS组合物片剂的制备处方山楂叶2000g瓜蒌5000g预胶化淀粉120g微晶纤维素40g低取代羟丙纤维素40g2%HPMC水溶液适量硬脂酸镁6g羧甲淀粉钠__共制备1000片制备工艺-原料中的山楂叶和瓜蒌参照实施例1、2中的制备方法制成提取物。(1)将瓜蒌提取物和山楂叶提取物粉碎过100目筛备用。(2)按照处方量称取原辅料。(3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2%的水溶液备用。(4)将山楂叶提取物、瓜蒌提取物、预胶化淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙纤维素混合均匀，加入2。/。HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。(5)过20目筛制颗粒。(6)颗粒在60t:的条件下烘干。(7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。(8)取样，半成品化验。(9)按照化验确定的片重压片。(10)成品全检，包装入库。实埤例8GS组合物胶襄剂的制备处方山楂叶2000g瓜蒌5000g预胶化淀粉120.0g微晶纤维素50.0g低取代羟丙纤维素30g2%HPMC水溶液适量硬脂酸镁_§:￡1_共制备1000粒制备工艺原料中的山楂叶和瓜蒌参照实施例1、2中的制备方法制成提取物。(1)将瓜蒌提取物和山楂叶提取物粉碎过IOO目筛备用。(2)按照处方量称取原辅料。(3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2%的水溶液备用。(4)将山楂叶提取物、瓜蒌提取物、预胶化淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙纤维素混合均匀，加入2Q/nHPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。(5)过20目筛制颗粒。(6)颗粒在60'C的条件下烘干。(7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。(8)取样，半成品化验。(9)按照化验确定的装量装入胶囊。(10)成品全检，包装入库。实施例9GS组合物颞粒剂的制备处方山楂叶2000g瓜蒌5000g糖粉2000.0g甜菊素15g柠檬香精适量2。/oHPMC50。/o乙醇溶液适量_共制备蘭包制备工艺原料中的山楂叶和瓜蒌参照实施例1、2中的制备方法制成提取物。(1)将蔗糖粉碎过80目筛备用；将瓜蒌提取物和山楂叶提取物粉碎过100目筛备用。(2)按照处方量称取原辅料。(3)将瓜蒌提取物、山楂叶提取物与糖粉、甜菊素以等量递加的方法混合均匀，加入20/oHPMC50。/。乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材，(4)过20目筛制颗粒。(5)颗粒在60'C的条件下烘干。(6)干颗粒过18目筛整粒，喷入适量柠檬香精。(7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。(8)包装，成品全检，包装入库。实施例IOGS组合物口服液的制备处方2000g5000g1000ml钠15g10g_加至10000ml_画支制备工艺原料中的山楂叶和瓜蒌参照实施例1、2中的制备方法制成提取物。(1)将山楂叶提取物和瓜蒌提取物加入配液量50%的纯化水中加热搅拌溶解完全；再加入丙二醇搅拌溶解完全。(2)将苯甲酸钠和甜菊甙用配液量20%的水溶解完全。(3)合并上述溶液，补加纯化水至全量。(4)过0.8nm的微孔滤膜过滤。(5)半成品化验。(6)灌装。成品全检，包装入库。叶醇酸甙水楂蒌二甲菊化山瓜丙苯甜纯第共权利要求1、一种用于心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于，制成它所含药效组分的原料药的组成为瓜萎和山楂叶，其重量份数为瓜萎1000-15000份，山楂叶500～10000份。2、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，瓜蒌和山楂叶的重量份数为瓜蒌2000-7000份，山楂叶1000~4000份。3、根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，瓜蒌和山楂叶的重量份数为瓜蒌5000份，山楂叶2000份。4、根据权利要求13所述的任一药物组合物的制备方法，其特征在于，所述的瓜蒌和山楂叶可以用适宜的溶剂分别或混合经过提取加工得到其提取物，总提取物再和药用辅料混合加工制成制剂，所得总提取物的主要有效成分为甾体皂苷类化合物和山楂叶总黄酮。5、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物还可以由瓜蒌提取物和山楂叶提取物制成，其重量份数为瓜蒌提取物50600份，山楂叶提取物5300份。6、根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，其重量份数为瓜蒌提取物100300份，山楂叶提取物15120份。7、根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，其重量份数为瓜蒌提取物150200份，山楂叶提取物3060份。8、根据权利要求57所述的任一药物组合物，其特征在于，其中的瓜蒌提取物的主要成分为留体皂苷类化合物，其含量不低于20%;山楂叶提取物的主要成分为黄酮类化合物，其含量不低于50%,金丝桃苷的含量不低于0.2%。9、根据权利要求13、57所述的任一药物组合物，其特征在于，该药物组合物可以与任一药学上可接受的辅料结合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。10、根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述的临床上或药学上可接受的剂型为口服制剂或注射剂。全文摘要本发明属于医药
技术领域：
，公开了一种用于心脑血管疾病的药物组合物，制成它所含药效组分的原料药的组成为瓜蒌或瓜蒌提取物和山楂叶或山楂叶提取物，以及含有该药物组合物的制剂及其制备方法。该药物组合物可制成临床或药学上可接受的剂型，优选注射剂或口服制剂。主要用于治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、淤血型肺心病、缺血性脑病、脑血栓、高血压、高血脂等心脑血管疾病。该发明药物组合物具有协同增效作用，比单用瓜蒌或瓜蒌提取物和山楂叶或山楂叶提取物的效果大大提高，且低毒，安全性高，稳定性好。文档编号A61K36/734GK101152285SQ20061015948公开日2008年4月2日申请日期2006年9月25日优先权日2006年9月25日发明者黄振华申请人:黄振华