专利名称：一种含埃坡霉素的抗癌缓释剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种含埃坡霉素的抗癌缓释剂，属于药物技术领域。具体而言，本发明提供一种含埃坡霉素及其增效剂的缓释注射剂和缓释植入剂。
背景技术：
癌症的治疗主要包括手术、放疗及化疗等方法。其中手术治疗不能清除散在的瘤细胞，因此常复发或导致肿瘤细胞因手术刺激而扩散转移；放疗和传统的化疗不具选择性，难于肿瘤局部形成有效药物浓度或治疗剂量，效果差，毒性大，单纯提高药物或放射剂量又受到全身毒性反应的限制。参见孔等“瘤内放置顺铂加系统卡莫司汀治疗大鼠脑肿瘤”《外科肿瘤杂志》69期76-82页，1998年(Kong Q et al.，J Surg Oncol.1998 Oct；69(2)76-82)。
低剂量的抗癌药物治疗不仅能够增加癌细胞的药物耐受性，而且还可促进其浸润性生长”，参见梁等“抗癌药物脉冲筛选后增加了人肺癌细胞的药物耐受性及体外浸润能力并伴有基因表达的改变”《国际癌症杂志》111期484-93页，2004年(Liang Y，et al.，Int JCancer.2004；111(4)484-93)。
实体肿瘤由肿瘤细胞和肿瘤间质组成，其中肿瘤间质中的血管不仅为肿瘤细胞的生长提供了支架及必不可少的营养物质，还影响了化疗药物在肿瘤周围及肿瘤组织内的渗透和扩散，参见尼提等“细胞外间质的状况对实体肿瘤内药物运转的影响”《癌症研究》60期2497-503页，2000年(Netti PA，Cancer Res.2000，60(9)2497-503)。
肿瘤间质中的血管及结缔组织中的纤维蛋白及胶原蛋白等成分与过度增生的肿瘤细胞导致实体肿瘤的间质压力(interstitial pressure)高、间质粘性(interstitialviscosity)大、组织张力系数(tissue tensile modulus)大、间质液导率(hydraulicconductance)低。以上诸因素大大限制了药物进入实体肿瘤以及在肿瘤内的有效扩散，因此构成肿瘤化疗的主要障碍。
抗肿瘤药物局部注射或放置能够较好地克服以上缺陷，不仅能够明显提高肿瘤局部的药物浓度，而且可以显著降低全身毒性反应。大量体内外试验已显示出对实体肿瘤的治疗效果，参见孔庆忠等“瘤内放置顺铂加系统卡莫司汀治疗大鼠脑肿瘤”《外科肿瘤杂志》69期76-82页，1998年(Kong Q et al.，J Surg Oncol.1998 Oct；69(2)76-82)和孔庆忠等“瘤内放置顺铂治愈大鼠原发脑肿瘤”《外科肿瘤杂志》64期268-273页(1997年)(Kong Q etal.，J Surg Oncol.1997 Oct；64268-273)。还可参见中国专利ZL00111093.4；ZL96115937.5；申请号001111264，001111272及美国发明专利专利号6,376,525B1；5,651,986；5,626,862。
然而，单药化疗常导致肿瘤细胞对抗癌药物的耐受性增加，其结果是治疗失败。
发明内容本发明针对现有技术的不足，提供一种新的药物组合物，含埃坡霉素衍生物，与抗癌药物合用可使其增效。更具体而言，该药物组合物是抗实体肿瘤的缓释剂，主要为缓释植入剂和缓释注射剂。除能抑制肿瘤生长外，还能增加肿瘤细胞对抗癌药物的敏感性。
除此之外，将埃坡霉素和或抗癌药物制成缓释剂(主要为缓释注射剂和缓释植入剂)不仅能够极大地提高肿瘤局部的药物浓度、降低药物在循环系统中的药物浓度、降低药物对正常组织的毒性，还能够极大方便药物注射、减少手术操作的并发症、降低病人的费用。抗癌药物除能抑制肿瘤生长外，还能增加肿瘤细胞对埃坡霉素及其衍生物的敏感性。
本发明抗实体肿瘤缓释剂包括抗癌有效成分和药用辅料，抗癌有效成分为埃坡霉素与磷酸肌醇3-激酶(P13K)抑制剂、嘧啶类似物和/或DNA修复酶抑制剂的组合。
埃坡霉素衍生物选自下列之一或组合埃坡霉素(Epothilone)或埃坡霉素衍生物，埃坡霉素衍生物选自埃坡霉素A、埃坡霉素B(Patupilone，EPO-906)、埃坡霉素C(去氧埃坡霉素，desoxyepothilone)、埃坡霉素D(epothilone D(EpoD)，12，13-desoxyepothilone B，去氧埃坡霉素B，dEpoB，KOS-862或NSC-703147)、埃坡霉素E、埃坡霉素F等以及它们的衍生物。
其中，埃坡霉素C的衍生物如，但不限于，4-去甲基-9-酮-埃坡霉素C、12，13-二氢-13-氧埃坡霉素C(12，13-dihydro-13-oxoepothilone C)；埃坡霉素B的衍生物如，但不限于，21和26位分别或同时被氨基取代的埃坡霉素B、9，10位去氢埃坡霉素B、10，11位去氢埃坡霉素B、26，27位被卤素取代的埃坡霉素B、9位，10位，11位，14位，21位，26位分别被羟基取代的埃坡霉素B、21，26-二羟基埃坡霉素B、21-羟基-10，11去氢埃坡霉素B、4-去甲基-9-酮-埃坡霉素B、4-去甲基-9，10-二去氢埃坡霉素B、4-去甲基-10，11-二去氢埃坡霉素B、6-去甲基-10，11-二去氢埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素B、21-羟基埃坡霉素B、26-羟基埃坡霉素B、26-氟埃坡霉素B、26-氨基埃坡霉素B、12，13位环丙基埃坡霉素B、12，13位环丁基埃坡霉素B、ixabepilone(BMS-247550)、氮杂埃坡霉素B(Azaepothilone B，内脂环中的氧被氮取代)、26-三氟-(E)-9，10-去氢-12，13-去氧埃坡霉素B(26-Trifluoro-(E)-9，10-dehydro-12，13-desoxyepothilone B[Fludelone(Flu)])；埃坡霉素D的衍生物如，但不限于，21和26位分别或同时被氨基取代的埃坡霉素D、9和10位去氢埃坡霉素D、10，11位去氢埃坡霉素D、26，27位被卤素取代的埃坡霉素D、9位，10位，11位，14位，21位，26位分别被羟基取代的埃坡霉素D、21，26-二羟基埃坡霉素D、21-羟基-10，11去氢埃坡霉素D、4-去甲基-9-酮-埃坡霉素D、4-去甲基-9，10-二去氢埃坡霉素D、4-去甲基-10，11-二去氢埃坡霉素D、6-去甲基-10，11-二去氢埃坡霉素D、21-羟基埃坡霉素D、21-氨基埃坡霉素D、26-羟基埃坡霉素D、26-氨基埃坡霉素D、26-氟埃坡霉素D、6-乙基，16-氟，17-吡啶埃坡霉素(或异埃坡霉素)、异埃坡霉素D、9，10去氢埃坡霉素D、10，11去氢埃坡霉素D、呋喃埃坡霉素D(furano-epothilone D)，(E)-9，10-去氢-12，13-去氧埃坡霉素D(E)-9，10-dehydro-12，13-desoxyepothiloneD)，BMS-310705，6-乙基，16-氟，17-吡啶埃坡霉素(ZK-EPO)，11，12-去氢-12，13-去氢-13-去氧埃坡霉素D 11，12-dehydro-12，13-dihydro13-oxoepothilone D、12，13-去氢-13-去氧埃坡霉素D(12，13-dihydro13-oxoepothilone D)、9-氧基埃坡霉素D(9-oxoepothilone D)、8-表-9-氧基埃坡霉素D(8-epi-9-oxoepothilone D)。
上述埃坡霉素及埃坡霉素衍生物优选埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone(BMS-247550)、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D、BMS-310705中的一种或其组合。
埃坡霉素及埃坡霉素衍生物在组合物中所占的比例因具体情况而定，可为0.1％-50％，以1％-30％为佳，5％-20％为最佳。
磷酸肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase，简称P13K)抑制剂选自下列之一或组合7-氢氧基-星状孢子素、7-O-烷基星状孢子素、β-甲氧星状孢子素、烷基磷酸胆碱、六癸基磷酸胆碱、十八基-(1，1-二甲基-4-哌啶)磷酸盐、1-O-六癸基-2-O-甲基-rac-丙三基-3-磷酸胆碱、1-O-十八基-2-O-甲基-rac-丙三基-3-磷酸胆碱、1-O-十八基-2-O-甲基-sn-丙三基-3-磷酸胆碱、肌醇聚磷酸盐、十四(烷)基磷酸胆碱、六葵基磷酸(N-N-N-三甲基)己醇胺、十八基磷酸胆碱或十八基-[2-(N-甲基哌啶)乙基]-磷酸盐。其中以7-氢氧基-星状孢子素、7-O-烷基-星状孢子素、β-甲氧星状孢子素、烷基磷酸胆碱、六癸基磷酸胆碱为优选。
嘧啶类似物主要选自O4-苄基叶酸、2，4，5-三氨基-6-苄氧基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-亚硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-溴基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-5-硝基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-6-甲基-5-硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-s-三嗪、2氨基-O4-苄基喋啶的一种或多种。
DNA修复酶抑制剂可为任何一种DNA依赖的蛋白激酶抑制剂和/或聚(ADP-核糖)聚合酶抑制剂，但以咪唑并哌嗪、咪唑并吡啶、渥曼青霉素、苯并吡喃、6-芳香基-2-吗啡酚-4-基-吡喃-4-基、2-(4-吗琳基)-8-苯基色酮、7-乙基-10-羟基喜树碱、3-氰基-6-亚肼基甲基-5-(4-吡啶基)吡啶-[1H]-2-1、苯基丁酸、甲氧胺、羟基胺、肌醇聚磷酸盐、十四(烷)基磷酸胆碱、六葵基磷酸(N-N-N-三甲基)己醇胺、十八基磷酸胆碱、十八基-[2-(N-甲基哌啶)乙基]-磷酸盐、氨基三唑(AT)和丁基硫堇硫肟为优选。
缓释辅料粘度范围IV(dl/g)为0.1～0.8，选自外消旋聚乳酸(D，L-PLA)、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物(D，L-PLGA)、单甲基聚乙二醇/聚乳酸(MPEG-PLA)、单甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物(MPEG-PLGA)、聚乙二醇/聚乳酸(PLA-PEG-PLA)、聚乙二醇/聚乳酸共聚物(PLGA-PEG-PLGA)、端羧基聚乳酸(PLA-COOH)、端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物(PLGA-COOH)、聚苯丙生、双脂肪酸与癸二酸共聚物(PFAD-SA)、聚(芥酸二聚体-癸二酸)[P(EAD-SA)]、聚(富马酸癸二酸)[P(FA-SA)]、乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)、聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物(PLGA)、聚对二氧环己酮(PDO)、聚三亚甲基碳酸酯(PTMC)、木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、壳聚糖、透明质酸、胶原蛋白、明胶、泊洛沙姆、蛋白胶之一或其组合；助悬剂选自羧甲基纤维素钠、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、土温20、土温40和土温80之一或其组合。
药用辅料有数百种以上，具有缓释作用的药用辅料，特别是能将本发明中所选的有效成份在人体或动物体内于一定的时间内缓慢释放并非显而易见，特定的缓释辅料与可缓释药物组合的选择需要经过大量的创造性劳动才能确定。相关数据，特别是动物体内释放特性的数据需要经过体内外大量创造性的实验才能获得，并非经过有限的实验就能确定，具有非显而易见性。
本发明的组合物可按已知的方法制备药物，例如，通过常规的混合、溶解、制拉、制糖衣丸、磨细、乳化、制胶囊、包埋、或冷冻干燥的方法。其中的载体包括各种赋形剂和辅助剂。可根据所选择的给药途径制成合适的制剂。如制备注射、口服、吸入、栓、贴、植入等剂型。对于经粘膜的和经皮的给药，在制剂中使用适合于渗透屏障的渗透剂是本领域通常已知的。
用于口服制剂可成片剂、丸剂、崩解剂、糖锭剂、胶囊、推合胶囊、封闭软胶囊、液体、凝胶、糖浆剂、泥浆剂、悬浮液等。
在各种制剂中，以长效性制剂为优选，以局部应用长效制剂为最优选。后者可通过植入法(直肠的、经粘膜的、经皮的、肠内的、肌内的、皮下的、髓内的注射，以及鞘内的、直接心室内的、静脉内的、腹膜内的、鼻内的、或眼内的注射)应用于肿瘤局部，在有效获得并维持局部药物浓度的同时明显降的其全身毒性。
局部方式给药，例如，通过直接注射至特定组织，通常以储存或持续释放制剂的形式。
本发明的主要形式为缓释剂，包括缓释植入剂和缓释注射剂。
本发明的一种主要形式为缓释注射剂，由缓释微球和溶媒组成。具体而言，该抗癌缓释注射剂由以下成分组成(A)缓释微球，包括抗癌有效成分 0.5-60％缓释辅料 40-99％助悬剂0.0-30％以上为重量百分比和(B)溶媒，为普通溶媒或含助悬剂的特殊溶媒。
其中，抗癌有效成分为P13K抑制剂、嘧啶类似物和/或DNA修复酶抑制剂与埃坡霉素衍生物的组合；缓释辅料选自下列之一或其组合a)聚乳酸(PLA)；b)聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物(PLGA)；c)聚苯丙生；d)聚苯丙生与PLA或PLGA的组合；e)双脂肪酸与癸二酸共聚物；f)聚(芥酸二聚体癸二酸)共聚物；g)聚(富马酸癸二酸)共聚物。
助悬剂选自羧甲基纤维素钠、碘甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、土温20、土温40和土温80之一或其组合，助悬剂的黏度为100cp-3000cp(20℃-30℃时)。
缓释注射剂微球中的抗癌有效成分优选如下，均为重量百分比本发明抗癌缓释注射剂微球中的抗癌有效成分优选为
(1)1-40％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone(BMS-247550)、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D、BMS-310705与1-40％的7-氢氧基-星状孢子素、7-O-烷基-星状孢子素、β-甲氧星状孢子素、烷基磷酸胆碱或六癸基磷酸胆碱的组合；(2)1-40％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone(BMS-247550)、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D、BMS-310705与1-40％的O4-苄基叶酸、2，4，5-三氨基-6-苄氧基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-亚硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-溴基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-5-硝基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-6-甲基-5-硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-s-三嗪或2-氨基-O4-苄基喋啶的组合；或(3)1-40％的1-40％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone(BMS-247550)、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D、BMS-310705与1-40％的咪唑并哌嗪、咪唑并吡啶、渥曼青霉素、苯并吡喃、6-芳香基-2-吗啡酚-4-基吡喃-4-基、2-(4-吗琳基)-8-苯基色酮、7-乙基-10-羟基喜树碱、3-氰基-6-亚肼基甲基-5-(4-吡啶基)吡啶-[1H]-2-1、苯基丁酸、甲氧胺、羟基胺、肌醇聚磷酸盐、十四(烷)基磷酸胆碱、六葵基磷酸(N-N-N-三甲基)己醇胺、十八基磷酸胆碱、十八基-[2-(N-甲基哌啶)乙基]-磷酸盐、氨基三唑或丁基硫堇硫肟的组合；或(4)1-40％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、BMS-247550、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D或BMS-310705。
本发明缓释微球中缓释辅料及其重量百分比最优选如下(1)55-90％的PLA；(2)50-90％的PLGA；(3)50-85％的聚苯丙生；(4)55-90％的双脂肪酸与癸二酸共聚物；(5)25-60％的聚苯丙生与25-60％的PLA或25-60％的PLGA的组合；(6)40-95％的木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、壳聚糖、透明质酸、胶原蛋白、明胶、泊洛沙姆或白蛋胶；或(7)40-95％的外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、单甲基聚乙二醇/聚乳酸、单甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸或端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物。
以上组合中，各种辅料的总量不超过制剂重的98％。
除上述辅料外，还可选用其他物质见美国专利(专利号4757128；4857311；4888176；4789724)及《药用辅料大全》(第123页，四川科学技术出版社1993年出版，罗明生和高天惠主编)中已有详细描述。另外，中国专利(申请号96115937.5；91109723.6；9710703.3；01803562.0)及美国发明专利(专利号5,651,986)也列举了某些药用辅料，包括充填剂、增溶剂、吸收促进剂、成膜剂、胶凝剂、制(或致)孔剂、赋型剂或阻滞剂等。
为调节药物释放速度或改变本发明的其它特性，可以改变聚合物的单体成分或分子量、添加或调节药用辅料的组成及配比，添加水溶性低分子化合物，如，但不限于，各种糖或盐等。其中糖可为，但不限于，木糖醇、低聚糖、(硫酸)软骨素及甲壳素等，其中盐可为，但不限于，钾盐和钠盐等。
缓释注射剂中，药物缓释系统可制成微球、亚微球、微乳、纳米球、颗粒或球形小丸，然后与注射溶媒混合后制成注射剂使用。在各种缓释注射剂中以混悬型缓释注射剂为优选，混悬型缓释注射剂是将含抗癌成分的药物缓释系统悬浮于注射液中所得的制剂，所用的辅料为上述缓释辅料中的一种或其组合，所用溶媒为普通溶媒或含助悬剂的特殊溶媒。普通溶媒为，但不限于，蒸馏水、注射用水、生理冲液、无水乙醇或各种盐配制的缓冲液。助悬剂的目的在于有效悬浮含药微球，从而利于注射之用。
助悬剂选自羧甲基纤维素钠、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、土温20、土温40和土温80之一或其组合。
助悬剂在普通溶媒中的含量因其的特性而定，可为0.1-30％因具体情况而定。优选助悬剂的组成为A)0.5-5％羧甲基纤维素钠+0.1-0.5％土温80；或B)5-20％甘露醇+0.1-0.5％土温80；或。
C)0.5-5％羧甲基纤维素钠+5-20％山梨醇+0.1-0.5％土温80。
溶媒的制备则取决于溶媒的种类，普通溶媒有市售，也可以自制，如蒸馏水、注射用水、生理冲液、无水乙醇或各种盐配制的缓冲液，但必需严格按照有关标准。特殊溶媒需考虑到助悬剂的种类及其组成、溶媒所悬浮的药物、缓释微球(或微囊)的组成、性质及其需要量及注射剂的制备方法，如将羧甲基纤维素钠(1.5％)+甘露醇和/或山梨醇(15％)和/或土温80(0.1％)溶于生理盐水中得相应的溶媒，黏度在10ep-650cp(20℃-30℃时)。
本发明发现影响药物和/或缓释微球悬浮和/或注射的关键因素是溶媒的黏度，黏度越大，悬浮效果越好，可注射性越强。这种意外发现构成了本发明的主要指数特征之一。溶媒的黏度取决于助悬剂的黏度，助悬剂的黏度为100cp-3000cp(20℃-30℃时)，优选1000cp-3000cp(20℃-30℃时)，最优选1500cp-3000cp(20℃-30℃时)。按照此条件所制得的溶媒的黏度为10cp-650cp(20℃-30℃时)，优选20cp-650cp(20℃-30℃时)，最优选60cp-650cp(20℃-30℃时)。
注射剂的制备有多种方法，一种是将助悬剂为“0”的缓释微粒(A)直接混于特殊溶媒中，得到相应的缓释微粒注射剂；另一种是将助悬剂不为“0”的缓释微粒(A)混于特殊溶媒或普通溶媒中，得到相应的缓释微粒注射剂；再一种是将缓释微粒(A)混于普通溶媒中，然后加入助悬剂混匀，得到相应的缓释微粒注射剂。除外，还可先将缓释微粒(A)混于特殊溶媒中制得相应的混悬液，然后用真空干燥等办法去除混悬液中的水分，之后再用特殊溶媒或普通溶媒混悬，得到相应的缓释微粒注射剂。以上方法只是用于说明而非限制本发明。值得注意的是，悬浮药物或缓释微球(或微囊)在注射剂中的浓度因具体需要而定，可为，但不限于，10-400mg/ml，但以30-300mg/ml为优选，以50-200mg/ml最优选。注射剂的黏度为50cp-1000cp(20℃-30℃时)，优选100cp-1000cp(20℃-30℃时)，最优选200cp-650cp(20℃-30℃时)。如此黏度适用于18-22号注射针头和特制的内径更大的(至3毫米)注射针头。
缓释注射剂的制备方法是任意的，可用若干种方法制备如，但不限于，混合法、熔融法、溶解法、喷雾干燥法制备微球、溶解法结合冷冻(干燥)粉碎法制成微粉、脂质体包药法及乳化法等。其中以溶解法(即溶剂挥发法)、干燥法、喷雾干燥法和乳化法为优选。微球则可用于制备上述各种缓释注射剂，其方法是任意的。所用微球的粒径范围可在5-400um之间，以10-300um之间为优选，以20-200um之间为最优选。
微球还可用于制备其他缓释注射剂，如凝胶注射剂、嵌段共聚物胶束注射剂。其中，嵌段共聚物胶束由疏水-亲水嵌段共聚物在水溶液中形成，具有球形内核-外壳结构，疏水嵌段形成内核，亲水嵌段形成外壳。载药胶束注射进入体内达到控制药物释放或靶向治疗的目的。所用药物载体为上述任意一种或其组合。其中优选分子量为1000-15000的聚乙二醇(PEG)作为胶束共聚物的亲水嵌段，优选生物降解聚合物(如PLA、聚丙交酯、聚己内酯及其共聚物(分子量1500-25000))作为胶束共聚物的疏水嵌段。嵌段共聚物胶束的粒径范围可在10-300um之间，以20-200um之间的为优选。凝胶注射剂系将生物降解聚合物(如PLA、PLGA或DL-LA和ε-己内酯共聚物)溶于某些两亲性溶媒，再加入药物与之混溶(或混悬)后形成流动性较好的凝胶，可经瘤周或瘤内注射。一旦注入，两亲性溶媒很快扩散至体液，而体液中的水分则渗入凝胶，使聚合物固化，缓慢释放药物。
缓释微球还可用于制备缓释植入剂，所用的药用辅料可为上述药用辅料中的任何一种或多种物质，但以水溶性高分子聚合物为主选，在各种高分子聚合物中，以聚乳酸、葵二酸、含聚乳酸或葵二酸的高分子多聚物的混合物或共聚物为首选，混合物和共聚物可选自，但不限于，PLA、PLGA、PLA与PLGA的混合物、葵二酸与芳香聚酐或脂肪族聚酐的混合物或共聚物。聚乳酸(PLA)与聚乙醇酸的共混比例是10/90-90/10(重量)，最好是25/75-75/25(重量)。共混的方法是任意的。乙醇酸和乳酸共聚时的含量分别为重量百分比10-90％和90-10％。芳香聚酐的代表物是对羧苯基丙烷(p-CPP)，对羧苯基丙烷(p-CPP)与葵二酸共聚时的含量分别为重量百分比10-60％和20-90％，共混重量比是10-40∶50-90，最好是重量比15-30∶65-85。
本发明抗癌药物缓释剂的又一种形式是抗癌药物缓释剂为缓释植入剂。抗癌植入剂的有效成分可均匀地包装于整个药用辅料中，也可包装于载体支持物中心或其表面；可通过直接扩散和/或经多聚物降解的方式将有效成分释放。
缓释植入剂的特点在于所用的缓释辅料除高分子聚合物外，还含有上述任意一种或多种其它辅料。添加的药用辅料统称为添加剂。添加剂可根据其功能分为充填剂、致孔剂、赋型剂、分散剂、等渗剂、保存剂、阻滞剂、增溶剂、吸收促进剂、成膜剂、胶凝剂等。
缓释植入剂的主要成份可制成多种剂型。如，但不限于，胶囊、缓释剂、植入剂、缓释剂植入剂等；呈多种形状，如，但不限于，颗粒剂、丸剂、片剂、散剂、球形、块状、针状、棒状、柱状及膜状。在各种剂型中，以体内缓慢释放植入剂为优选。体积大小取决于病灶的部位、大小等因素。可为0.1-5mm(粗)×1-10mm(长)的棒状，也可为片状等其它形状。
缓释植入剂的最佳剂型为生物相容性、可降解吸收的缓释剂植入，可因不同临床需要而制成各种形状及各种剂型。其主要成份的包装方法和步骤在美国专利中(US5651986)已有详细描述，包括若干种制备缓释制剂的方法如，但不限于，(i)把载体支持物粉末与药物混合然后压制成植入剂，即所谓的混合法；(ii)把载体支持物熔化，与待包装的药物相混合，然后固体冷却，即所谓的熔融法；(iii)把载体支持物溶解于溶剂中，把待包装的药物溶解或分散于聚合物溶液中，然后蒸发溶剂，干燥，即所谓的溶解法；(iv)喷雾干燥法；及(v)冷冻干燥法等。
缓释植入剂中的抗癌有效成分及重量百分比可参照其缓释注射剂，但优选如下(1)1-40％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone(BMS-247550)、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D、BMS-310705与1-40％的7-氢氧基-星状孢子素、7-O-烷基-星状孢子素、β-甲氧星状孢子素、烷基磷酸胆碱或六癸基磷酸胆碱的组合；
(2)1-40％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone(BMS-247550)、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D、BMS-310705与1-40％的O4-苄基叶酸、2，4，5-三氨基-6-苄氧基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-亚硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-溴基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-5-硝基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-6-甲基-5-硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-s-三嗪或2-氨基-O4-苄基喋啶的组合；或(3)1-40％的1-40％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone(BMS-247550)、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D、BMS-310705与1-40％的咪唑并哌嗪、咪唑并吡啶、渥曼青霉素、苯并吡喃、6-芳香基-2-吗啡酚-4-基-吡喃-4-基、2-(4-吗琳基)-8-苯基色酮、7-乙基-10-羟基喜树碱、3-氰基-6-亚肼基甲基-5-(4-吡啶基)吡啶-[1H]-2-1、苯基丁酸、甲氧胺、羟基胺、肌醇聚磷酸盐、十四(烷)基磷酸胆碱、六葵基磷酸(N-N-N-三甲基)己醇胺、十八基磷酸胆碱、十八基[2-(N-甲基哌啶)乙基]-磷酸盐、氨基三唑或丁基硫堇硫肟的组合；或(4)1-40％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、BMS-247550、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D或BMS-310705。
本发明缓释植入剂中缓释辅料及其重量百分比最优选如下(1)55-90％的PLA；(2)50-90％的PLGA；(3)50-85％的聚苯丙生；(4)55-90％的双脂肪酸与癸二酸共聚物；(5)25-60％的聚苯丙生与25-60％的PLA或25-60％的PLGA的组合；(6)40-95％的木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、壳聚糖、透明质酸、胶原蛋白、明胶、泊洛沙姆或白蛋白胶；或(7)40-95％的外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、单甲基聚乙二醇/聚乳酸、单甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸或端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物。
以上组合中，各种辅料的总量不超过制剂重的98％。
给药途径取决于多种因素，为于原发或转移肿瘤所在部位获得有效浓度，药物可经多种途径给予，如皮下、腔内(如腹腔、胸腔及椎管内)、瘤内、瘤周注射或放置、选择性动脉注射、淋巴结内及骨髓内注射。以选择性动脉注射、腔内、瘤内、瘤周注射或放置为优选。
本发明可以用于制备治疗人及动物的各种肿瘤的药物制剂，主要为缓释注射剂或缓释植入剂，所指肿瘤包括起源于大脑、中枢神经系统、肾脏、肝、胆囊、头颈部、口腔、甲状腺、皮肤、黏膜、腺体、血管、骨组织、淋巴结、肺脏、食管、胃、乳腺、胰腺、眼睛、鼻咽部、子宫、卵巢、子宫内膜、子宫颈、前列腺、膀胱、结肠、直肠的原发或转移的癌或肉瘤或癌肉瘤。
临床应用的抗癌剂量取决于病人的具体情况，可从0.1到3000mg/kg体重，0.5到2000mg/kg为优选，0.8到1000mg/kg为最有选。
本发明所制的缓释注射剂或缓释植入剂中还可加入其它药用成分，如，但不限于，抗菌素、止疼药、抗凝药、止血药等。
通过如下试验和实施例对本发明的技术方法作进一步的描述试验1、不同方式应用埃坡霉素后的局部药物浓度比较以大白鼠为试验对象，将2×105个前列腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长至1厘米直径后将其分组。每组均为2.5mg/kg埃坡霉素B。测定不同时间肿瘤内药物含量(％)，结果表明，埃坡霉素B经不同方式应用后的局部药物浓度差异显著，局部给药能够明显提高并有效维持肿瘤所在部位的有效药物浓度，其中以瘤内放置缓释植入剂和瘤内注射缓释注射剂的效果最好。然而，瘤内注射缓释注射剂操作最方便、容易。这一发现构成本发明的重要特征。以下的相关抑瘤试验进一步证实了这一点。
试验2、不同方式应用埃坡霉素D后的体内抑瘤作用比较以大白鼠为试验对象，将2×105个乳腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长至0.5厘米直径后将其分组。每组剂量均为5mg/kg埃坡霉素D。治疗后第20天测量肿瘤体积大小，比较治疗效果。结果表明，埃坡霉素D经不同方式应用后的抑瘤作用差异显著，局部给药能够明显提高并有效维持肿瘤所在部位的有效药物浓度，其中以瘤内放置缓释植入剂和瘤内注射缓释注射剂的效果最好。然而，瘤内注射缓释注射剂操作最方便、容易。不仅疗效好，毒副作用也小。
试验3、含埃坡霉素和抗癌药物(缓释注射剂)的体内抑瘤作用以大白鼠为试验对象，将2×105个胰腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为以下10组(见表1)。第一组为对照，第2到10组为治疗组，药物均经瘤内注射。埃坡霉素B为2.5mg/kg，抗癌药物为10mg/kg。治疗后第21天测量肿瘤体积大小，比较治疗效果(见表1)。
表1
以上结果表明，埃坡霉素B及所用抗癌药物-磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂(其中UCN-017-氢氧基-星状孢子素；UCN-027-O-烷基星状孢子素；MILMiltefosine；D-21266十八基-(1，1-二甲基-4-哌啶)磷酸盐或perifosine)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验4、埃坡霉素B和抗癌药物(缓释注射剂)的抑瘤作用所用的肿瘤细胞包括CNS-1、C6、胃腺上皮癌(SA)、骨肿瘤(BC)、乳腺癌(BA)、肺癌(LH)、甲状腺乳头状腺癌(PAT)等。药物经瘤内注射。治疗效果(见表2)。埃坡霉素B为7.5mg/kg，抗癌药物均为2.5mg/kg。治疗后第20天测量肿瘤体积大小，用肿瘤生长抑制率(％)作指标比较治疗效果(见表2)。
表2
以上结果表明，所用埃坡霉素D及抗癌药物(O4-BAO4-苄基尿酸；UCN-017-氢氧基星状孢子素；UCN-027-O-烷基-星状孢子素)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验5、异埃坡霉素D及抗癌药物(缓释注射剂)的抑瘤作用以大白鼠为试验对象，将2×105个肝肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为以下10组(见表3)。第一组为对照，第2到10组为治疗组，缓释植入剂经瘤内放置。异埃坡霉素D为2.5mg/kg，抗癌药物为15mg/kg。治疗后第20天测量肿瘤体积大小，用肿瘤生长抑制率(％)作指标比较治疗效果治疗(见表3)。
表3
以上结果表明，所用埃坡霉素(透明质酸酶)及抗癌药物-PI3K抑制剂(其中，AMG-PC1-O-六癸基-2-O-甲基-rac-丙三基-3-磷酸胆碱；edelfosine1-O-十八基-2-O-甲基-rac-丙三基-3-磷酸胆碱；ilmofosine1-O-十八基-2-O-甲基-sn-丙三基-3-磷酸胆碱；IDOU5-碘-2’-脱氧鸟苷)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验6、埃坡霉素D和抗癌药物(缓释注射剂)的抑瘤作用以大白鼠为试验对象，将2×105个前列腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为阴性对照(空白)、单药治疗组(埃坡霉素D或抗癌药物)和联合治疗组(埃坡霉素D和抗癌药物)。埃坡霉素D(2mg/kg)经瘤内注射，抗癌药物(18mg/kg)经腹腔注射。治疗后第20天测量肿瘤体积大小，用肿瘤生长抑制率作指标比较治疗效果(见表4)表4
以上结果表明，所用埃坡霉素D及抗癌药物-DNA-依赖的蛋白激酶抑制剂(其中，咪唑并哌嗪、咪唑并吡啶、渥曼青霉素、苯并吡喃)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验7、埃坡霉素B及抗癌药物(缓释注射剂)的抑瘤作用以大白鼠为试验对象，将2×105个乳腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为阴性对照(空白)、单药治疗组、联合治疗组。埃坡霉素B(18mg/kg)经腹腔注射，抗癌药物(2mg/kg)经瘤周注射。治疗后第21天测量肿瘤体积大小，用肿瘤生长抑制率作指标比较治疗效果(见表5)。
表5
以上结果表明，所用埃坡霉素B及抗癌药物-DNA-依赖的蛋白激酶抑制剂(其中，LY2940022-(4-吗琳基)-8-苯基色酮；SU11752激酶抑制剂；SN-387-乙基-10-羟基喜树碱；OK-10353-氰基-6-亚肼基甲基-5-(4-吡啶基)吡啶-[1H]-2-1)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验8、埃坡霉素C和抗癌药物(缓释植入剂)的抑瘤作用以大白鼠为试验对象，将2×105个乳腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为阴性对照(空白)、单药治疗组、联合治疗组。缓释植入剂均经瘤内放置。埃坡霉素C(5mg/kg)经腹腔注射，抗癌药物(10mg/kg)经瘤周注射。治疗后第21天测量肿瘤体积大小，用肿瘤生长抑制率作指标比较治疗效果(见表6)。
表6
以上结果表明，所用埃坡霉素C及抗癌药物-DNA-依赖的蛋白激酶抑制剂在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验9、埃坡霉素和抗癌药物(缓释植入剂)的抑瘤作用按试验8所述方法测定埃坡霉素及抗癌药物(缓释植入剂)的抑瘤作用，其肿瘤生长抑制率见表7。
表7
以上结果表明，所用埃坡霉素及抗癌药物-聚(ADP-核糖)聚合酶抑制剂(其中，3-AB3-氨基苯甲酰胺；苯甲酰胺；PD 1287633，4-二氢甲氧异喹啉-1(2H)-苯甲酰胺；AG14361聚合酶抑制剂)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验10、埃坡霉素E及抗癌药物(缓释注射剂)的抑瘤作用按试验8所述方法测定埃坡霉素及抗癌药物(缓释植入剂)的抑瘤作用，其肿瘤生长抑制率见表8。
表8
以上结果表明，所用埃坡霉素E及抗癌药物-聚(ADP-核糖)聚合酶抑制剂(其中，BZ1-6苯并咪唑-4-羧酰胺；TI1-5三环内酰胺硫化氢；TBC三环苯并咪唑羧酰胺、苯并咪唑)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验11、氮杂埃坡霉素B和/或抗癌药物(缓释植入剂)的抑瘤作用按试验8所述方法测定埃坡霉素和/或抗癌药物(缓释植入剂)的抑瘤作用，其肿瘤生长抑制率见表9。
表9
以上结果表明，所用氮杂埃坡霉素B及抗癌药物-聚(ADP-核糖)聚合酶抑制剂(其中，PBC2-苯基-1H-苯并咪唑-4-羧酰胺；MPBC2-(3-甲氧苯基)-1H-苯并咪唑-4-羧酰胺(2-(3-methoxyphenyl)-1H-benzimidazole -4-carboxamide)；NU10258-羟基-2-甲基喹唑啉酮；NU10852-(4-羟苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验12、Ixabepilone和/或抗癌药物(缓释植入剂)的抑瘤作用按试验6所述方法测定Ixabepi lone和/或抗癌药物(缓释植入剂)的抑瘤作用，其肿瘤生长抑制率见表10。
表10
以上结果表明，所用Ixabepilone及抗癌药物聚(ADP-核糖)聚合酶抑制剂(其中，BSO为丁基硫堇硫肟)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验13、不同分子量聚乳酸制成的呋喃埃坡霉素D缓释植入剂的体内释放比较以大白鼠为试验对象，分组(3只/组)并于皮下给予含不同分子量(MW)的聚乳酸(PLA)承载的等量呋喃埃坡霉素D缓释植入剂。然后分别于1、3、7、14、21、28和35天测药物于植入剂内的剩余量，进而得出其体内释放速度(％)。结果表明，分子量为20000的释放为1天(12％)、3(26％)、7(56％)、14(80％)、21(86％)、28(92％)和35(94％)。比较不同分子量聚乳酸制成的缓释植入剂的体内释放发现，随分子量增加而变慢，以第7天为例，与全身给药组相比，肿瘤抑制率随聚乳酸分子量增加而提高，依次为68％(MW5000)、62％(MW15000)、54％(MW25000)、52％(MW40000)和46(MW60000)。
同样的结果还见于用聚乳酸为辅料制成的含BMS-310705和抗癌药的缓释剂。
特别注意的是，本发明的缓释剂，特别是缓释注射剂操作简单方便、重复性好。不仅疗效好，毒副作用小。
不同的药物包装与不同的生物降解高分子的释药特性不同。进一步的研究发现，最适宜于本发明药物缓释的缓释辅料为外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、单甲基聚乙二醇/聚乳酸、单甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸、端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物、聚苯丙生、双脂肪酸与癸二酸共聚物、聚(芥酸二聚体-癸二酸)、聚(富马酸-癸二酸)、乙烯乙酸乙烯酯共聚物、聚乳酸、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物、木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、壳聚糖、透明质酸、胶原蛋白、明胶、泊洛沙姆、白蛋白胶之一或其组合；最适宜的助悬剂为甲基纤维素、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、土温20、土温40、土温80之一或其组合。
总之，所用埃坡霉素衍生物及各种抗癌药物单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。因此，本发明所述的有效成分为埃坡霉素衍生物与任意一种(或一种以上)抗癌药物的组合。含有以上有效成分的药物可制成缓释微球，进而制成缓释注射剂和植入剂，其中以与含助悬剂的特殊溶媒组合形成的混悬注射剂为优选。
缓释注射剂或缓释植入剂还可通过以下实施方式得以进一步说明。上述实施例及以下实施例只是对本发明作进一步说明，并非对其内容和使用作任何限制。
具体实施方式
实施例1.
将80mg聚苯丙生(对羧苯基丙烷(p-CPP)∶葵二酸(SA)为20∶80)共聚物放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入10mg埃坡霉素B和10mg7-氢氧基-星状孢子素，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含10％埃坡霉素B和10％7-氢氧基-星状孢子素的注射用微球。然后将微球悬浮于含15％甘露醇的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂。注射剂的黏度为200cp-400cp(20℃-30℃时)，该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为18-25天，在小鼠皮下的释药时间为20-30天左右。
实施例2.
加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例1相同，但所不同的是聚苯丙生为50∶50，所含抗癌有效成分及其重量百分比为5％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone(BMS-247550)、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D或BMS-310705与15％的7-氢氧基-星状孢子素、7-O-烷基-星状孢子素、β-甲氧星状孢子素、烷基磷酸胆碱或六癸基磷酸胆碱的组合，注射剂的黏度为200cp-400cp(20℃-30℃时)。
实施例3.
将70mg分子量峰值为10000-20000的聚乳酸(PLA)放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入20mg埃坡霉素D和10mg7-乙基-10-羟基喜树碱，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的含药固体组合物冷冻粉碎制成含20％埃坡霉素D和10％7-乙基-10-羟基喜树碱的微粉，然后悬浮于含1.5％羧甲基纤维素钠的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂。注射剂的黏度为240cp-420ep(20℃-30℃时)，该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为20-35天，在小鼠皮下的释药时间为35-50天左右。
实施例4加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例3相同，但所不同的是分子量峰值为40000-60000的聚乳酸(PLA)，所含抗癌有效成分及其重量百分比为15％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone(BMS-247550)、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D或BMS-310705与20％的咪唑并哌嗪、咪唑并吡啶、渥曼青霉素、苯并吡喃、6-芳香基-2-吗啡酚-4-基-吡喃-4-基、2-(4-吗琳基)-8-苯基色酮、7-乙基-10-羟基喜树碱、3-氰基-6-亚肼基甲基-5-(4-吡啶基)吡啶-[1H]-2-1、苯基丁酸、甲氧胺、羟基胺、肌醇聚磷酸盐、十四(烷)基磷酸胆碱、六葵基磷酸(N-N-N-三甲基)己醇胺、十八基磷酸胆碱、十八基-[2-(N-甲基哌啶)乙基]-磷酸盐、氨基三唑或丁基硫堇硫肟的组合。
实施例5.
将70mg分子量峰值为10000-20000的聚乳酸(PLGA，50∶50)放入容器中，加入100毫升二氯甲烷溶解混匀后，加入20毫克异埃坡霉素D和10毫克苯并咪唑，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含20％异埃坡霉素D和10％苯并咪唑的注射用微球。然后将微球悬浮于含5-15％山梨醇的注射液中，制得相应的混悬型缓释注射剂。注射剂的黏度为260cp-480cp(20℃-30℃时)，该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为10-15天，在小鼠皮下的释药时间为20-30天左右。
实施例6.
加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例5相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为10％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D或BMS-310705与10％的O4-苄基叶酸、2，4，5-三氨基-6-苄氧基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-亚硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-溴基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-5-硝基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-6-甲基-5-硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-s-三嗪或2-氨基-O4-苄基喋啶的组合。
实施例7.
将70mg分子量峰值为20000-40000的聚乳酸(PLGA，50∶50)放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入20mg BMS-247550和10mg丁基硫堇硫肟，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含20％BMS-247550与10％丁基硫堇硫肟的注射用微球。然后将微球悬浮于含1.5％羧甲基纤维素钠和0.5％吐温80的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂。注射剂的黏度为300cp-480cp(20℃-30℃时)，该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为18-25天，在小鼠皮下的释药时间为25-35天左右。
实施例8.
加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例7相同，但所不同的是分子量峰值为40000-60000的聚乳酸(PLGA，75∶25)所不同的是所含抗癌有效成分为10％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D或BMS-310705与15％的O4-苄基叶酸的组合。
实施例9将40mg聚苯丙生(对羧苯基丙烷(p-CPP)∶葵二酸(SA)为50∶50)共聚物和30mg分子量峰值为10000-20000的聚乳酸(PLA)放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入20mg氮杂埃坡霉素B和10mgO4-苄基叶酸，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含20％氮杂埃坡霉素B和10％O4-苄基叶酸的注射用微球。然后将微球悬浮于含1.5％羧甲基纤维素钠和15％山梨醇和0.2％吐温80的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为24-35天，在小鼠皮下的释药时间为28-40天左右。
实施例10加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例9相同，但所不同的是所用缓释辅料为40mg聚苯丙生(50∶50)共聚物和30mg分子量峰值为20000-40000的PLGA(50∶50)，所含抗癌有效成分为10-30％的埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D或BMS-310705与10-40％的O4-苄基叶酸、2，4，5三氨基-6-苄氧基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-亚硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-溴基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-5-硝基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-6-甲基-5-硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-s-三嗪或2-氨基-O4-苄基喋啶的组合。
实施例11将70mg聚苯丙生(对羧苯基丙烷(p-CPP)∶葵二酸(SA)为30∶70)共聚物放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入10mg7-氢氧基-星状孢子素和20mg呋喃埃坡霉素D，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含10％7-氢氧基-星状孢子素和20％呋喃埃坡霉素D的注射用微球。然后将微球经压片法制得相应的缓释植入剂。该缓释植入剂在体外生理盐水中的释药时间为21-25天，在小鼠皮下的释药时间为30-40天左右。
实施例12加工成缓释植入剂的方法步骤与实施例11相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为20％的BMS-310705与10％的7-氢氧基-星状孢子素、7-O-烷基-星状孢子素、β-甲氧星状孢子素、烷基磷酸胆碱或六癸基磷酸胆碱的组合。
实施例13将70mg分子量峰值为60000-80000的PLGA(50∶50)放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入10mg BMS-310705和20mg新鬼臼霉素，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含10％BMS-310705和20％新鬼臼霉素的注射用微球。然后将微球经压片法制得相应的缓释植入剂。该缓释植入剂在体外生理盐水中的释药时间为25-30天，在小鼠皮下的释药时间为35-50天左右。
实施例14加工成缓释植入剂的方法步骤与实施例11、13相同，但所不同的是分子量峰值为40000的PLGA(70∶25)，所含抗癌有效成分为10％的BMS-310705与20％的氨基三唑、丁基硫堇硫肟、马勃菌酸、S-己基谷胱甘肽、新鬼臼霉素、六环核喜树碱或四并苯羧酰胺的组合。
实施例15加工成缓释剂的方法步骤与实施例1-14相同，但所不同的是所用的缓释辅料为下列之一或其组合a)分子量峰值为5000-10000、10000-30000、30000-60000、60000-100000或100000-150000的聚乳酸(PLA)；b)分子量峰值为5000-10000、10000-30000、30000-60000、60000-100000或100000-150000的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物(PLGA)，其中，聚乙醇酸和羟基乙酸的比例为50-95∶50-50；c)乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)；d)10∶90、20∶80、30∶70、40∶60、50∶50或60∶40的对羧苯基丙烷(p-CPP)∶葵二酸(SA)共聚物(聚苯丙生)；e)双脂肪酸与癸二酸共聚物；
f)聚(芥酸二聚体癸二酸)共聚物；g)聚(富马酸癸二酸)共聚物；h)木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、壳聚糖、钾盐、钠盐、透明质酸、胶原蛋白、明胶、泊洛沙姆或白蛋白胶；i)外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、单甲基聚乙二醇/聚乳酸、单甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸或端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物。
实施例16加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例1-15相同，但所不同的是所用的助悬剂分别为下列之一或其组合a)0.5-3.0％羧甲基纤维素(钠)；b)5-15％甘露醇；c)5-15％山梨醇；d)0.1-1.5％表面活性物质；e)0.1-0.5％吐温20。
实施例17加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例11-15相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为(1)5-30％的埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D或BMS-310705与5-30％的7-氢氧基-星状孢子素、7-O-烷基-星状孢子素、β-甲氧星状孢子素、烷基磷酸胆碱或六癸基磷酸胆碱的组合；(2)5-30％的埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D或BMS-310705与5-30％的O4-苄基叶酸、2，4，5-三氨基-6-苄氧基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-亚硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-溴基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-5-硝基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-6-甲基-5-硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-s-三嗪或2-氨基-O4-苄基喋啶的组合；或(3)5-30％的埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D或BMS-310705与5-30％的咪唑并哌嗪、咪唑并吡啶、渥曼青霉素、苯并吡喃、6-芳香基-2-吗啡酚-4-基-吡喃-4-基、2-(4-吗琳基)-8-苯基色酮、7-乙基-10-羟基喜树碱、3-氰基-6-亚肼基甲基-5-(4-吡啶基)吡啶-[1H]-2-1、苯基丁酸、甲氧胺、羟基胺、肌醇聚磷酸盐、十四(烷)基磷酸胆碱、六葵基磷酸(N-N-N-三甲基)己醇胺、十八基磷酸胆碱、十八基-[2-(N-甲基哌啶)乙基]-磷酸盐、氨基三唑或丁基硫堇硫肟的组合。
本发明并不限定于所举例的实施方式范围内，该实施方式旨在作为本发明个别的举例说明。实际上，除本文所示和所述之外的本发明的各种改变，对于本领域熟练技术人员来说都可从说明书和图表中显而易见。当然这些改变应在所附的权利要求的范围内。因此，应该认识到前面的说明书着重公开了本发明的某些特定实施方式及对其所做的等同改变或替换都是在所附权利要求书所述的构思和范围内。
以上实施例仅用于说明，而并非局限本发明的应用。本发明所公开和保护的内容见权利要求。
权利要求
1.一种含埃坡霉素的抗癌缓释剂，其特征是抗癌缓释剂为缓释注射剂，由以下成分组成(A)缓释微球，包括抗癌有效成分0.5-60％缓释辅料40-99％助悬剂 0.0-30％以上为重量百分比和(B)溶媒，为普通溶媒或含助悬剂的特殊溶媒。其中，抗癌有效成分为埃坡霉素衍生物或埃坡霉素衍生物与选自磷酸肌醇3-激酶抑制剂、嘧啶类似物和/或DNA修复酶抑制剂的抗癌药物；助悬剂选自羧甲基纤维素钠、碘甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、土温20、土温40和土温80之一或其组合；缓释辅料粘度范围IV(dl/g)为0.1～0.8，选自下列之一或其组合a)聚乳酸；b)聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物；c)聚苯丙生；d)聚苯丙生与聚乳酸或聚乙醇酸和羟基乙酸共聚物的组合；e)双脂肪酸与癸二酸共聚物；f)聚(芥酸二聚体-癸二酸)共聚物；g)聚(富马酸-癸二酸)共聚物；h)木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、壳聚糖、透明质酸、胶原蛋白、明胶、泊洛沙姆或蛋白胶；i)外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、单甲基聚乙二醇/聚乳酸、单甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸或端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物。助悬剂的黏度为100cp-3000cp(20℃-30℃时)，选自羧甲基纤维素钠、羟甲基纤维素、碘甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、土温20、土温40和土温80之一或其组合。
2.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于磷酸肌醇3-激酶抑制剂选自7-氢氧基星状孢子素、7-O-烷基星状孢子素、β-甲氧星状孢子素、烷基磷酸胆碱、六癸基磷酸胆碱、十八基-(1，1-二甲基-4-哌啶)磷酸盐、1-O-六癸基-2-O-甲基-rac-丙三基-3-磷酸胆碱、1-O-十八基-2-O-甲基-rac-丙三基-3-磷酸胆碱、1-O-十八基-2-O-甲基-sn-丙三基-3-磷酸胆碱、肌醇聚磷酸盐、环孢菌素A、十四(烷)基磷酸胆碱、六葵基磷酸(N-N-N-三甲基)己醇胺、十八基磷酸胆碱、十八基-[2-(N甲基哌啶)乙基]-磷酸盐之一或其组合。
3.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于嘧啶类似物选自O4-苄基叶酸、2，4，5-三氨基-6-苄氧基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-亚硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-溴基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-5-硝基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-6-甲基-5-硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-s-三嗪、2-氨基-O4-苄基喋啶之一或其组合。
4.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于DNA修复酶抑制剂选自2-(吗啡酚-4-基)-苯并吡喃-4-基、2-(4-吗琳基)-8-苯基色酮、1-(2-羟基-4-吗啡酚-4-基苯基)-桥亚乙基、激酶抑制剂、2-氨基嘌呤、7-乙基-10-羟基喜树碱、苯基丁酸盐、甲胺、甲氧胺、羟基胺、二甲胺四环素、O-羟基胺、O-甲基羟基胺、O-δ-氨氧丁基羟基胺、3-氨基苯甲酰胺、苯甲酰胺、3，4-二氢甲氧异喹啉-1(2H)-苯甲酰胺、聚合酶抑制剂、多聚合酶抑制剂、氨基取代的2-芳香基苯并咪唑-4-羧酰胺、苯并咪唑-4-羧酰胺、三环内酰胺硫化氢、三环苯并咪唑羧酰胺、苯并咪唑、1H-三环苯并咪唑羧酰胺、2-芳香基-1H-苯并咪唑-4-羧酰胺、2-苯基-1H-苯并咪唑-4-羧酰胺、2-(4-羟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-4-羧酰胺、2-(3-甲氧苯基)-1H-苯并咪唑-4-羧酰胺、8-羟基-2-甲基喹唑啉酮、2-(4-羟苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺、氨基三唑、丁基硫堇硫肟、马勃菌酸、S-己基谷胱甘肽、新鬼臼霉素、六环核喜树碱或四并苯羧酰胺。
5.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于埃坡霉素选自埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、4-去甲基-9-酮埃坡霉素C、12，13-二氢-13-氧埃坡霉素C、21-氨基埃坡霉素B、26-氨基埃坡霉素B、21，26柖被F旅顾谺、9，10-去氢埃坡霉素B、10，11-氢埃坡霉素B、26，27-卤基埃坡霉素B、9位，10位，11位，14位，21位，26位分别被羟基取代的埃坡霉素B、21，26-二羟基埃坡霉素B、21-羟基-10，11去氢埃坡霉素B、4-去甲基-9-酮-埃坡霉素B、4-去甲基-9，10-二去氢埃坡霉素B、4-去甲基-10，11-二去氢埃坡霉素B、6-去甲基-10，11-二去氢埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素B、21-羟基埃坡霉素B、26-羟基埃坡霉素B、26-氟埃坡霉素B、26-氨基埃坡霉素B、12，13位环丙基埃坡霉素B、12，13位环丁基埃坡霉素B、ixabepilone、氮杂埃坡霉素B、26-三氟-(E)-9，10-去氢-12，13-去氧埃坡霉素B、21和26位分别或同时被氨基取代的埃坡霉素D、9和10位去氢埃坡霉素D、10，11位去氢埃坡霉素D、26，27位被卤素取代的埃坡霉素D、9位，10位，11位，14位，21位，26位分别被羟基取代的埃坡霉素D、21，26-二羟基埃坡霉素D、21-羟基-10，11去氢埃坡霉素D、4-去甲基-9-酮埃坡霉素D、4-去甲基-9，10-二去氢埃坡霉素D、4-去甲基-10，11-二去氢埃坡霉素D、6-去甲基-10，11-二去氢埃坡霉素D、21-羟基埃坡霉素D、21-氨基埃坡霉素D、26-羟基埃坡霉素D、26-氨基埃坡霉素D、26-氟埃坡霉素D、异埃坡霉素、异埃坡霉素D、9，10去氢埃坡霉素D、10，11去氢埃坡霉素D、呋喃埃坡霉素D、(E)-9，10-去氢-12，13-去氧埃坡霉素D、BMS-310705，6-乙基，16-氟，17-吡啶埃坡霉素，11，12-去氢-12，13-去氢-13-去氧埃坡霉素D、12，13-去氢-13-去氧埃坡霉素D、9-氧基埃坡霉素D或8-表-9-氧基埃坡霉素D中的一种或其组合。
6.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于抗癌缓释注射剂的抗癌有效成分及重量百分比为(1)1-40％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone(BMS-247550)、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D、BMS-310705与1-40％的7氢氧基星状孢子素、7-O-烷基星状孢子素、β-甲氧星状孢子素、烷基磷酸胆碱或六癸基磷酸胆碱的组合；(2)1-40％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、ixabepilone(BMS-247550)、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D、BMS-310705与1-40％的O4-苄基叶酸、2，4，5-三氨基-6-苄氧基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-亚硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-5-溴基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-5-硝基嘧啶、2-氨基-4-苄氧基-6-甲基-5-硝基嘧啶、2，4-二氨基-6-苄氧基-s-三嗪或2-氨基-O4-苄基喋啶的组合；或(3)1-40％的1-40％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、BMS-247550、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D、BMS-310705与1-40％的咪唑并哌嗪、咪唑并吡啶、渥曼青霉素、苯并吡喃、6-芳香基-2-吗啡酚-4-基吡喃-4-基、2-(4-吗琳基)-8-苯基色酮、7-乙基-10-羟基喜树碱、3-氰基-6-亚肼基甲基-5-(4-吡啶基)吡啶-[1H]-2-1、苯基丁酸、甲氧胺、羟基胺、肌醇聚磷酸盐、十四(烷)基磷酸胆碱、六葵基磷酸(N-N-N-三甲基)己醇胺、十八基磷酸胆碱、十八基-[2-(N-甲基哌啶)乙基]-磷酸盐、氨基三唑或丁基硫堇硫肟的组合；(4)1-40％的埃坡霉素、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、异埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、BMS-247550、氮杂埃坡霉素B、呋喃埃坡霉素D或BMS-310705
7.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于所选缓释辅料中，(1)聚乳酸的分子量峰值选自5000-10000、10000-30000、300000-60000、60000-100000或100000-150000；(2)聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物中，聚乙醇酸和羟基乙酸的比例为50-95∶50-50，分子量峰值为5000-10000、10000-30000、300000-60000、60000-100000或100000-150000；(3)聚苯丙生中，对羧苯基丙烷∶葵二酸为10∶90、20∶80、30∶70、40∶60、50∶50或60∶40。
8.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于所用的助悬剂分别为下列之一或其组合a)0.5-3.0％羧甲基纤维素(钠)；b)5-15％甘露醇；c)5-15％山梨醇；d)0.1-1.5％表面活性物质；e)0.1-0.5％吐温20；f)碘甘油、二甲硅油、丙二醇或卡波姆；g)0.5-5％羧甲基纤维素钠+0.1-0.5％土温80；h)5-20％甘露醇+0.1-0.5％土温80；或i)0.5-5％羧甲基纤维素钠+5-20％山梨醇+0.1-0.5％土温80。
9.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于抗癌有效成分用于制备治疗起源于人及动物大脑、中枢神经系统、肾脏、肝、胆囊、头颈部、口腔、甲状腺、皮肤、粘膜、腺体、血管、骨组织、淋巴结、肺脏、食管、胃、乳腺、胰腺、眼睛、鼻咽部、子宫、卵巢、子宫内膜、子宫颈、前列腺、膀胱、结肠或直肠的原发或继发的癌、肉瘤或癌肉瘤缓释植入剂。
10.根据权利要求9所述之抗癌缓释剂，其特征在于所述抗癌缓释植入剂的抗癌有效成分中埃坡霉素衍生物和抗癌药物的重量比为1-9∶1到1∶1-9。缓释辅料为下列之一或其组合a)聚乳酸，分子量峰值为10000-30000、300000-60000、60000-100000或100000-150000；b)聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物，其中，聚乙醇酸和羟基乙酸的比例为50-95∶50-50，分子量峰值为10000-30000、300000-60000、60000-100000或100000-150000；c)乙烯乙酸乙烯酯共聚物；d)聚苯丙生，对羧苯基丙烷∶葵二酸为10∶90、20∶80、30∶70、40∶60、50∶50或60∶40；e)双脂肪酸与癸二酸共聚物；f)聚(芥酸二聚体-癸二酸)；g)聚(富马酸-癸二酸)；h)木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、壳聚糖、透明质酸、胶原蛋白、明胶、泊洛沙姆或白蛋胶；i)外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、单甲基聚乙二醇/聚乳酸、单甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸或端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物。
全文摘要
一种含埃坡霉素的抗癌药物缓释剂由缓释微球和溶媒组成。其中缓释微球包括抗癌有效成分和缓释辅料，溶媒为含助悬剂的特殊溶媒。抗癌有效成分为埃坡霉素、埃坡霉素衍生物、埃坡霉素B、埃坡霉素D及其与选自磷酸肌醇3－激酶抑制剂、嘧啶类似物和/或DNA修复酶抑制剂等抗癌药的组合；缓释辅料为聚乳酸及其共聚物、聚乙二醇、端羧基聚乳酸共聚物、双脂肪酸与癸二酸共聚物、聚(芥酸二聚体－癸二酸)、聚(富马酸－癸二酸)、聚苯丙生、聚乳酸等生物相容性高分子；助悬剂黏度为100cp－3000cp(20℃－30℃时)，选自羧甲基纤维素钠等。抗癌有效成分及缓释微球还可制成缓释植入剂，经瘤内或瘤周注射或放置除能有效抑制肿瘤生长还可显著增强放化疗等非手术疗法的疗效。
文档编号A61K45/00GK1969816SQ200610201270
公开日2007年5月30日 申请日期2006年12月12日 优先权日2006年12月12日
发明者孙娟, 张婕, 邹会凤 申请人:济南帅华医药科技有限公司