抗肿瘤化合物的制作方法

专利名称：抗肿瘤化合物的制作方法
专利说明抗肿瘤化合物
背景技术：
癌症治疗可以通过多种治疗方式实现，包括外科手术、放射疗法、化学疗法或上述疗法的任意组合。其中，化学疗法对于不宜手术或转移性的癌症是不可或缺的。
真核细胞的微管系统对开发抗癌剂而言是重要的靶点。更明确地说，微管蛋白聚合/解聚对于新的化疗剂来说是常用的靶点。多种临床使用的化合物(例如紫杉醇，埃坡霉素A，长春碱，A-4磷酸酯，海兔毒素10，秋水仙碱)以微管蛋白聚合/解聚为靶向，分裂细胞微管结构，导致有丝分裂停滞并抑制新的血管上皮细胞的生成。参见Jordan et al.(1998)Med.Res.Rev.18259-296。因此，上述化合物可以抑制血管过度生成，其出现在例如癌症(实体瘤和血液瘤)、心血管病(例如动脉硬化)、慢性炎症(例如类风湿关节炎或克罗恩(Crohn)病)、糖尿病(例如糖尿病性视网膜病变)、黄斑变性、牛皮癣、子宫内膜异位以及眼科疾病(例如角膜或视网膜的新血管的生成)。参见e.g.，Griggs et al.(2002)Am.J.Pathol。
以A-4磷酸酯(combretastatin A-4，以下简称CA-4)为例，其由帕提(Pettit)和他的同事在1982年分离(Can.J. Chem.601374-1376)，是最从南美灌木柳(Combretum caffrum)的树干中获得的重要抗有丝分裂剂之一。这种药剂对多种人类癌细胞表现出很强的细胞霉性，包括多药耐药癌细胞。参见Pettit et al.(1995)J.Med.Chem.381666-1672；Lin et al.(1989)Biochemistry 286984-6991；Lin et al.(1989)Biochemistry 286984-6991；以及Lin et al.(1988)Mol.Pharmacol.34200-208。结构与秋水仙碱类似的CA-4对微管蛋白上的秋水仙碱结合部位具有比秋水仙碱自身更高的亲和力。参见Pettit et al.(1989)Experientia 45209-211。其还表现出抗血管生成的活性。参见平尼(Pinney)等人的公开号为WO01/68654A2的专利。CA-4的低水溶性限制了其体内功效。参见Chaplin et al.(1999)Anticancer Research 19189-195；以及Grosios et al.(1999)Br.J. Cancer 811318-1327。
对同样以微管系统为靶点的化合物的鉴别(例如微管蛋白聚合/解聚)可以导向对治疗或预防癌症或癌症相关症状有用的新疗法。


发明内容
本发明基于一个令人惊奇的发现，即一组稠合双芳杂环(fused bicyclicheteroaryl)化合物有效地抑制某些癌细胞的生长。
一方面，本发明的特征在于稠合双芳杂环化合物。
该稠合双芳杂环化合物的一个子集具有如下化学式
其中每个----都是一个单键或双键；A是C(＝O)，CRR’，O，NR，S，SO，或SO2；D是芳基或杂芳基；R1从氢、烷基、芳基、烷氧基、羟基、盐、氨基或烷胺基中选择；每个Q，U，V和Y都分别是CR或N；X是N，CR或NR’；Z是C；每个T和W都是C或N，至少一个T和W是C；假设T是C且W是N，则T和W之间的键为单键，T和Z之间的键为双键，Y和Z之间的键为单键，X和Y之间的键为双键，W和X之间的键为单键，X为N或CR；T为N且W为C时，则T和W之间的键为单键，T和Z之间的键为单键，Y和Z之间的键为双键，X和Y之间的键为单键，W和X之间的键为双键，X为N或CR；当T为C且W为C时，则T和W之间的键为双键，T和Z之间的键为单键，Y和Z之间的键为双键，X和Y之间的键为单键，W和X之间的键为单键，X为NR且Y为N，或X为NR，Y为CR，Q、U和V中的至少一个为N。每个R和R’分别为H、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环基、SO3Ra、SO2Ra、SO2NRaRb、CORa、COORa或CONRaRb；每个Ra和Rb分别为H、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环基。
参照该化学式，该化合物可以有以下特征每个T和X都是N，W是C，每个Q、U和V都是CH，Y是CR；每个T和W都是C，X是NH，Y是N，每个Q、U和V都是CH；每个T和W都是C，每个Q和U都是CH，V是N，X是NH，Y是CR；T是C，W是N，每个Q、U、V和X都是CH，Y是CR；T是N，W是C，每个Q、U、V和X都是CH，Y是CR；T是C，W是N，每个Q、U、V都是CH，X是N，Y是CR；每个T和W都是C，每个Q、U和V都是CH，X是O，Y是N；每个T和W都是C，Q是CH，或每个U和V都是N，X是NH，Y是CR；或T是C，每个W、V和X都是N，每个Q和U都是CH，Y是CR。此外，该化合物可以具有一个或多个以下特征D是取代的苯基，例如3，4，5-三甲氧基苯基；A是C(O)；A是CH2，NH，O，S，或SO2。
该稠合双芳杂环化合物的另一个子集具有如下化学式
其中每个----都是一个单键或双键；A是C(＝O)，CRR’，O，NR，S，SO，或SO2；D是芳基或杂芳基；R1从烷基、芳基、烷氧基、羟基、盐、氨基或烷胺基中选择；每个Q，U或V都分别是CR或N；X是O或S；Y为CR”或N；每个T、W和Z都是C；T和W之间的键为双键；T和Z之间的键为单键；Y和Z之间的键为双键；X和Y之间的键为单键；W和X之间的键为单键。每个R和R’都分别是H、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环基、SO3Ra、SO2Ra、SO2NRaRb、CORa、COORa或CONRaRb，R”是H、烷基、烯基、炔基、杂芳基、环烷基、杂环基、SO3Ra、SO2Ra、SO2NRaRb、CORa、COORa或CONRaRb；每个Ra和Rb分别是H、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环基。
参照上述化学式，该化合物可以有以下一个或多个特征每个Q，U或V都是CH，Y是CR；D是取代的苯基，例如3，4，5-三甲氧基苯基；A是C(O)；Y是CH，CNH2，CCH3，or CCH2CH3。
这里术语“烷基”指含有1-10个碳原子的直或支链烃。烷基的例子包括但不限于甲基，乙烷基，n-丙烷基，i-丙烷基，n-丁基，i-丁基，t-丁基。术语“烯基”指包括1-10个碳原子和一个或多个双键的直或支链烃。术语“炔基”指包括1-10个碳原子和一个或多个三键的直或支链烃。术语“烷氧基”指-O-烷基。术语“氨基”指结合两个氢、或一个氢及一个烷基或两个烷基的氮基。
术语“芳基”指6碳单环，10碳双环，14碳三环的芳环系统，其中每个环都可以有1到4个取代基。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基和蒽基。术语“芳氧基”指由芳基群组取代的-O-烷基。
术语“环烷基”指饱和和部分未饱和的具有3到12个碳的环状烃基。环烷基的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基和环辛基。
术语“杂芳基”指具有一个或多个杂原子(例如O，N或S)的芳香5-8元单环，8-12元双环或11-14元三环系统。杂芳基的例子包括吡啶基，呋喃基，咪唑基，苯并咪唑基，嘧啶基，噻吩基，喹啉基，吲哚基，噻唑基。术语“杂芳烷基”指杂芳基取代的烷基。
术语“杂环基”指具有一个或多个杂原子(例如O，N或S)的非芳香5-8元单环，8-12元双环或11-14元三环系统。杂环基的例子包括但不限于哌嗪基，吡咯烷基，二恶烷基，吗啉基和四氢呋喃基。
在此提及的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基和烷氧基包括取代的和未被取代的部分。取代基的例子包括但不限于盐、烃基、氨基、氰基、硝基、氢硫基、烷氧羰基、氨基、酰氨基、羧基、链烷磺酰基、烷羰基、脲基、氨基甲酰基、羧基、硫脲基、氰硫基、磺酰胺、烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环基，其中烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环基可以进一步随意取代。
下面表示本发明的双芳杂环化合物的一些例子
下面表示本发明的化合物的其他一些例子
上述双芳杂环化合物抑制癌症细胞生长。因此，在另一方面，本发明的特征还在于治疗癌症的方法。该方法包括给予需要其的接受治疗者有效量的上述化合物之一。
另一方面，本发明的特征在于一种抑制微管蛋白聚合或治疗血管生成相关异常的方法。该方法包括给予需要其的接受治疗者有效量的一种或更多种上述化合物。
在本发明的范围内还有一种含有一种或多种用于治疗癌症或血管生成相关异常的上述化合物的组合物，以及用于制造治疗癌症或血管生成相关异常的药物的上述组合物的用途。
在以下说明中列出本发明许多实施例的细节。从说明和权利要求中，本发明的其他的特征、目的和优点将会变得显而易见。

具体实施例方式 上述稠合双芳杂环化合物可以通过现有技术中公知方法制备。例如，现有文件对合成吲唑，咪唑[1，2-a]吡啶，1-氢-吡咯[2，3-b]吡啶、吲嗪、吡唑[1，5-a]嘧啶、苯基[d]异恶唑和7氢吡咯[2，3-d]嘧啶的说明。参见1967年由Interscience出版社在纽约出版的Richard H.Wiley编著的《杂环化合物化学》第22卷(Chemistry of Heterocyclic Compounds，Vol.22，Edited by Richard H.Wiley，Published by Interscience Publishers，New York，1967)。所属技术领域的技术人员可以修改这些方法，用于制造本发明的稠合双芳杂环化合物。图解1-4分别表示化合物1，2，3，和7的合成途径。
图解1
图解2
图解3
图解4
为了合成本发明的化合物，可以利用合适的合成化学转化利基团保护方法(保护和脱保护)。上述转化和方法为公知技术，包括例如1989年由VCH出版社出版的R·勒罗克的《综合有机转化》(R.Larock，Comprehensive OrganicTransformations，VCH Publishers(1989))、1999年由约翰威立父子出版公司出版的T·W·格林尼和P·G·M·伍茨的《有机合成中的保护基团》第3版(T.WGreene and P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3rdEd.，John Wileyand Sons(1999))、1994年由约翰威立父子出版公司出版的T·W·格林尼和P·G·M·伍茨的《费舍尔和有机合成的费舍尔试剂》(L.Fieser and M.Fieser，Fieser and Fieser’Reagents for Organic Synthesis，John Wiley and Sons(1994))、以及1995年由约翰威立父子出版公司出版的帕奎特编辑的《有机合成试剂百科全书》(L.Paquette，ed.，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis，John Wileyand Sons(1995))等之后的出版物中说明。
合成的稠合双杂环化合物可以通过快速柱层析、高效液相色谱法或结晶进一步纯化。
在本发明的范围内，还有一种包括本发明至少一种有效剂量的稠合双杂环化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。此外，本发明包括抑制微管蛋白聚合或治疗癌症或血管生成相关异常的方法。本方法包括向接受治疗者提供“发明内容”部分说明的有效剂量的稠合双杂环化合物。
此处应用的术语“治疗”指以治疗、治愈、减轻、缓解、改变、补救、改进、改善或影响患者、患者的症状或患者的体质为目的，向患有例如癌症和血管生成相关异常的疾病、或具有这种疾病的症状、或具有这种疾病的体质的接受治疗者提供熔融双芳杂环化合物。术语“有效剂量”指要带给接受治疗者有益的治疗效果的活性成分的量。如所属技术领域的技术人员所知，有效剂量可以根据给药途径、赋型剂使用以及与其他药剂共同使用的可能性而改变。
这里使用的术语“癌症”指能够自主性生长的细胞，也就是以快速地增生扩散细胞生长为特征的异常状态和条件。此外，癌症可以是耐药表型，其中癌症细胞表达P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白、肺癌耐药相关蛋白、乳腺癌耐药蛋白或其他耐抗癌药相关的蛋白。癌症的例子包括但不限于癌(carcinoma)和肉瘤(sarcoma)，例如白血病，肉瘤，骨肉瘤，淋巴瘤，黑色素瘤，卵巢癌，皮肤癌，睾丸癌，胃癌，胰腺癌，肾癌，乳腺癌，前列腺癌，结肠直肠癌，头颈癌，脑癌，食道癌，膀胱癌，肾上腺皮质癌，肺癌，支气管癌，子宫内膜癌，鼻咽癌，宫颈或肝癌，或者不明原发灶癌。
术语“血管生成”指新血管的生长-体内发生的一个重要自然过程。在许多严重疾病的情况中，身体丧失了对血管生成的控制。新的血管过分生长时产生血管生成依赖性疾病。血管生成相关异常的实例包括心血管病(例如动脉硬化)、慢性炎症(例如类风湿关节炎或克罗恩病)、糖尿病(例如糖尿病性视网膜病变)、黄斑变性、牛皮癣、子宫内膜异位以及眼科疾病(例如角膜或视网膜的新血管的生成)。
为实现本发明的方法，可以口服、肠道外、通过吸入型喷雾、局部、直肠、经鼻、口腔、阴道或通过植入型药盒给予上述药物组合物。此处使用的术语“肠道外”包括皮下、皮内、静脉、肌肉、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅骨内注射或灌注技术。
可注射组合物，例如消毒的可注射水性或油性混悬剂，可以根据公知技术利用合适的分散剂或润湿剂(例如吐温80)和悬浮剂组成处方。消毒可注射制剂还可以是无毒肠道外可接受的溶液或稀释液，例如1，3-丁二醇溶液中的消毒可注射溶液或混悬液。可以使用的可接受的介质或溶剂有甘露醇、水、林格式溶液(Ringer’s solution)和等渗氯化钠溶液。此外，传统上将消毒的或不易挥发的油用作溶剂或混悬介质(例如合成的单酸甘油脂或甘油二脂)。脂肪酸、例如油酸，及其甘油酯衍生物，由于是天然的药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，特别是其聚氧乙烯酯应用于注射剂的制备。上述油溶液或混悬液还可以含有长链醇稀释液或分散剂、或羧甲基纤维素、或类似的分散剂。以配方为目的，可以使用普遍用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型的其他普遍应用的表面活性剂，例如吐温(Tweens)或司盘(Spans)或其他类似的乳化剂或生物利用度增强剂。
用于口服的组合物可以是任意口服可接受的剂型，包括但不限于胶囊、片剂、乳剂和水性混悬液、分散液和溶液。口服片剂的情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。典型地添加例如硬脂酸镁的润滑剂。对于口服胶囊剂，可用的稀释剂包括乳糖和干燥玉米淀粉。口服水性混悬液或乳剂时，活性成分可以悬浮或溶解在结合有乳化或悬浮剂的油相中。如果需要的话，可以增加某些甜味剂、香精或着色剂。可以通过药物制剂的公知技术制备鼻用气雾剂或吸入剂组合物，使用苯甲醇或其他合适的防腐剂、提高生物利用度的促吸剂、碳氟化合物和/或其他本领域公知的溶解或分散剂，制备成盐溶液。含稠合双杂环化合物的组合物也可以以直肠栓剂的剂型给予。
药物组合物中的载体与处方的活性成分的兼容必须是“可接受”的(并且最好可以使其稳定)，且对治疗对象来说是无毒的。举例来说，增溶剂，如环糊精、其与稠合双杂环化合物形成特殊的溶解性更强的复合体，或一种或多种溶解剂，可以用作传输稠合双杂环化合物的药物赋型剂。其他载体的例子包括胶态二氧化硅、硬脂酸镁、纤维素、十二烷基硫酸钠和10号D&C黄(D&C Yellow#10)。
合适的体外测定可以用于初步评价一种或多种稠合双杂环化合物在抑制癌症细胞系生长中的功效。可以通过体内测定进一步检验上述化合物治疗癌症的功效。例如，可以给予有癌症的动物(例如小鼠模型)上述化合物，而后评定其治疗效果。基于上述结果，还可以确定合适的剂量范围和给药途径。
可以通过以下特定实施例描述的方法，筛选上述稠合双杂环化合物，以有效抑制微管蛋白聚合且组合血管新生。
相信不需要更详细的细节，上述说明已经可以充分地实现本发明。因此，以下具体实施例仅为说明性解释，不作为对任何方式公开的其余部分的限制。在此引用的所有出版物都以其全部内容作为参考。
实施例 实施例1(7-甲氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-甲酮((7-methoxy-imidazo[1，2-a]pyridin-3-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)(化合物1)的合成 根据罗波等人在《生物有机医药化学学报》1999，9(1)，97-102页(Loeber，S.，et al.，Bioorg Med Chem Lett 1999，9(1)，97-102)所述的方法制备7-甲氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶(7-Methoxyimidazo[1，2-a]pyridine)。
在二甲基甲酰胺(4mL)中混合7-甲氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶(621mg，4.2mmol)与POCl3(16.8mmol)。将反应混合物在90℃加热24小时，而后冷却至室温。真空除去溶剂获得一油状物。油状物在硅胶柱上以EtOAc/己烷(1∶1)洗脱进行纯化，以提供7-甲氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-羧酸吲哚(7-methoxyimidazo[1，2-a]pyridine-3-carbaldehyde)(508mg，69％)。
向装有冷凝器、加料漏斗和磁力搅拌器的干燥烧瓶中加入镁屑(2.5mmol)，0.5mL的无水四氢呋喃(THF)和少量碘。通过加料漏斗加入1.3mL溶于THF的3，4，5-三甲氧基溴苯(2.5mmol)的大约1/3。溶液变为无色(可能需要加热)时，温和回流下将剩余的3，4，5-三甲氧基溴苯逐滴加入溶液中。反应混合物在室温下搅拌1小时，而后在0℃下缓慢加入7-甲氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-羧酸吲哚(7-methoxyimidazo[1，2-a]pyridine-3-carbaldehyde)(0.094g，0.53mmol)的THF(3mL)溶液中。添加之后，可以将溶液在室温下再搅拌20分钟。而后在0℃缓慢添加饱和NH4Cl溶液(5mL)，将混合物搅拌10分钟。将水层分离并利用Et2O(3×10mL)萃取。利用盐水洗涤结合的有机层，利用MgSO4干燥，并过滤。在真空中浓缩滤液，通过柱层析纯化残留物，提供二苯基甲醇(benzhydrol)(0.119g)。
搅拌下在0℃将MnO2(0.444g，5.1mmol)加入5mL二苯基甲醇(0.115g，0.33mmol)的无水CH2Cl2溶液中。添加之后，在室温下将混合物搅拌8小时。利用无水乙醚(50mL)稀释混合物并通过硅藻土(Celite)垫过滤。在真空中浓缩滤液，残留物通过快速层析进行纯化，得到化合物1(0.087g，76％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.92(s，9H，-OCH3)，3.94(s，3H，-OCH3)，6.83(dd，1H，J＝7.5，1.5Hz)，7.11(s，2H)，7.12(d，1H，J＝1.5Hz)，8.16(s，1H)，9.49(d，J＝1H，7.5Hz) 实施例2(7-甲氧基-2-甲基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基 )- 甲 酮 ( 化 合 物 2)((7-methoxy-2-methyl-imidazo[1，2-a]pyridin-3-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)的合成 将EtOH(50mL)中的4-甲氧基-2-氨基吡啶(4-methoxy-2-aminopyridine)(1.07g，8.6mmol)与2-氯代乙酰乙酸乙酯(ethyl 2-chloroacetoacetate)(5.4g)的混合物回流24小时。而后将反应混合物浓缩到其一半体积，利用CH2Cl2萃取，先利用盐水之后用水洗涤，通过无水MgSO4干燥。将溶剂在真空中除去，残留物在硅胶柱中先用乙酸乙酯(EtOAc)，而后用MeOH/CH2Cl2(1∶9)洗脱进行纯化，以提供7-甲氧基-2-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-羧酸酯(7-methoxy-2-methylimidazo[1，2-a]pyridine-3-carboxylate)(2.71g，90％)。
THF(15mL)中作为产物的混合物(0.340g，1.04mmol)在0℃N2下中搅拌10分钟。添加氢化锂铝(LAH)，在室温下N2下将混合物搅拌过夜。添加NH4Cl水溶液(5mL)。而后将反应混合物浓缩到其一半体积，用乙酸乙酯(EtOAc)萃取。利用盐水和水洗涤结合的有机层，利用无水MgSO4干燥，使残留物脱水。在0℃搅拌下将MnO2(0.783g，9mmol)添加到无水CH2Cl2(15mL)中的残留物中。添加之后，在室温下将混合物搅拌8小时，利用无水乙醚(50mL)稀释混合物并通过硅藻土(Celite)垫过滤。在真空中浓缩滤液，残留物通过快速层析进行纯化，得到7-甲氧基-2-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-羧酸酯(7-methoxy-2-methylimidazo[1，2-a]pyridine-3-carbaldehyde)(0.070g，53％)。
将产物与3，4，5-三甲氧基溴苯(2.5mmol)反应，并通过MnO2以类似于实施例1所述的方式氧化，以55％的收率得到化合物2。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.22(s，3H，-CH3)，3.89(s，6H，-OCH3)，3.92(s，3H，-OCH3)，3.93(s，3H，-OCH3)，6.71(dd，1H，J＝7.8，2.4Hz)，6.92(s，3H)，9.24(d，1H，J＝7.8Hz). 实施例3(6-甲氧基-3a，7a-二氢-1H-吲唑-3-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-甲酮((6-methoxy-3a，7a-dihydro-1H-indazol-3-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)(化合物3)的合成 THF(15mL)中6-甲氧基-1H-吲唑-3-羧酸(6-methoxy-1H-indazole-3-carboxylic acid)的混合物(0.200g，1.04mmol)在0℃N2下搅拌10分钟。加入氢化锂铝(LAH)，在N2下将混合物室温搅拌过夜。然后，加入NH4Cl水溶液(5mL)，将反应混合物浓缩到其一半体积，用乙酸乙酯(EtOAc)萃取。利用盐水和水洗涤有机层，利用无水MgSO4干燥，在真空中除去溶剂，产生残留物。在0℃搅拌下将MnO2(0.680g，7.8mmol)加入到无水CH2C12(15mL)中的残留物中。添加之后，在室温下将混合物搅拌8小时，利用无水乙醚(50mL)稀释混合物或通过硅藻土(Celite)垫过滤。在真空中浓缩滤液，通过快速层析纯化残留物，得到6-甲氧基-1H-吲唑-3-羧酸酯(6-methoxy-1H-indazole-3-carbaldehyde)(0.100g，56％)。
将产物与3，4，5-三甲氧基溴苯结合，随后用MnO2以类似于实施例1所述的方式氧化，以54％的收率得到化合物3。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.89(s，3H，-OCH3)，3.93(s，6H，-OCH3)，3.94(s，3H，-OCH3)，6.90(d，1H，J＝2.1Hz)，7.01(dd，1H，J＝9，2.1Hz)，7.665(s，2H)，8.27(d，1H，J＝9Hz)，10.44(s，1H). 实施例4(6-甲氧基-吲嗪-1-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-甲酮((6-methoxy-indolizin-1-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)(化合物4)的合成 0℃下将叔丁醇钾(5.4g，48mmol)加入3-甲基-吡啶-3-ol(3-methyl-pyridin-3-ol)(5g，45.87mmol)的THF(200mL)溶液中。混合物在室温下搅拌30分钟。0℃下逐滴添加甲基碘(3.2mL，48mmol，在室温下持续搅拌8小时。加入水并将混合物浓缩到其一半体积，用乙酸乙酯(EtOAc)萃取。利用盐水和水洗涤结合的有机层，利用无水MgSO4干燥，并过滤。在真空中浓缩滤液，通过快速层析纯化残留物，得到5-甲氧基-2-甲基吡啶(5-methoxy-2-methyl-pyridine)(4.8g，85％)。
在-60到-70℃N2下将己烷中的正丁锂(1.6M，7.6mL，11.9mmol)逐滴加入二异丙胺(1.089g，10.9mmol)的THF(25mL)溶液中。将混合物搅拌10分钟。将5-甲氧基-2-甲基吡啶(5-methoxy-2-methyl-pyridine)(1.274g，10.35mmol)的THF(5mL)溶液逐滴加入上述混合物。再持续搅拌10分钟，在-70℃下添加THF(5mL)中的3，4，5-三甲氧基氰苯(1.88g，9.74mmol)。混合物在-78℃搅拌1小时而后加热到室温。再搅拌2小时，将反应混合物倒入冰冷的NH4Cl水溶液中。分离有机层并用乙醚萃取水相。结合的有机层用稀HCl溶液萃取。利用乙醚洗涤水层，利用10％的NaOH水溶液中和，并用乙醚萃取。利用水洗涤有机层，而后干燥。用层析法以CH2Cl2洗脱来纯化残留物，得到2-(5甲氧基吡啶-2-yl)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙酮(2-(5-methoxypyridin-2-yl)-1-(3，4，5-trimethoxyphenyl)ethanone)(2.31g，75.0％)。
将丙酮(5mL)中得到的嘧啶衍生物(0.200g，0.631mmol)、氯乙醛(0.099g，1.3mmol)和NaHCO3(0.212g，2.6mmol)的混合物回流20小时。通过过滤除去沉淀物。浓缩滤液得到残留物，在硅胶柱上利用CH2Cl2洗脱纯化残留物得到化合物4(0.184g，95％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.86(s，3H，-OCH3)，3.91(s，6H，-OCH3)，3.93(s，3H，-OCH3)，7.00(dd，1H，J＝9.6，1.5Hz)，7.08(d，1H，J＝3Hz)，7.10(s，2H)，7.62(d，1H，J＝1.5Hz)，8.37(d，J＝1H，9.6Hz). 实施例5(6-甲氧基-2-甲基-吲嗪-1-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-甲酮((6-methoxy-2-methyl-indolizin-1-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)(化合物5)的合成 将丙酮(5mL)中的2-(5-甲氧基吡啶-2-yl)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙酮(2-(5-methoxypyridin-2-yl)-1-(3，4，5-trimethoxyphenyl)ethanone)(0.200g，0.631mmol)、1-溴-2-丙酮(1-bromo-2-propanone)(0.171g，1.3mmol)和NaHCO3(0.212g，2.6mmol)的混合物回流20小时。通过过滤除去沉淀物。浓缩滤液得到残留物，在硅胶柱上利用CH2Cl2洗脱纯化残留物，得到化合物5(0.213g，95％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.29(s，3H，-CH3)，3.81(s，3H，-OCH3)，3.85(s，6H，-OCH3)，3.92(s，3H，-OCH3)，6.74(dd，1H，J＝9.6，2.1Hz)，6.97(s，2H)，7.08(s，1H)，7.40(d，1H，J＝9.6Hz)，7.50(d，1H，J＝2.1Hz). 实施例6(2-乙烷基-6-甲氧基-吲嗪-1-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-甲酮((2-ethyl-6-methoxy-indolizin-1-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)(化合物6)的合成 将丙酮(5mL)中的2-(5-甲氧基吡啶-2-yl)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙酮(2-(5-methoxypyridin-2-yl)-1-(3，4，5-trimethoxyphenyl)ethanone)(0.200g，0.631mmol)、1-溴基-2-丁酮(1-bromo-2-butanone)(0.190g，1.3mmol)和NaHCO3(0.212g，2.6mmol)的混合物回流20小时。通过过滤除去沉淀物。浓缩滤液得到残留物，在硅胶柱上利用CH2Cl2洗脱纯化残留物，得到化合物6(0.213g，95％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.23(t，3H，-CH2CH3，J＝7.5Hz)，2.79(q，2H，-CH2CH3，J＝7.5Hz)，3.81(s，3H，-OCH3)，3.84(s，6H，-OCH3)，3.92(s，3H，-OCH3)，6.71(dd，1H，J＝9.9，2.1Hz)，6.97(s，2H)，7.13(s，1H)，7.31(d，1H，J＝9.9Hz)，7.52(d，1H，J＝2.1Hz). 实施例7(6-甲氧基-2-甲基-吲嗪-3-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-甲酮((7-methoxy-2-methyl-indolizin-3-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)(化合物7)的合成 将THF中的甲基锌氯化物(Methylzinc chloride)(2M，10.489mL，21mmol)加入2-氯-4-甲氧基吡啶(2-chloro-4-methoxypyridine)(0.500g，3.48mmol)和Pd(PPh3)4(0.161g，0.14mmol)的THF(200mL)溶液中。将混合物回流40分钟并倒入含有乙二胺四乙酸(1.5g)的水溶液中(10mL)。将得到的混合物用K2CO3中和并用Et2O萃取。浓缩有机层得到残留物，在硅胶柱上利用MeOH∶EtOAc(1∶10)洗脱、纯化残留物，得到4-甲氧基-2-甲基嘧啶(4-methoxy-2-methylpyridine)(0.213g，50.0％)。
将4-甲氧基-2-甲基嘧啶(4-Methoxy-2-methylpyridine)(0.213g，1mmol)和溴丙酮(bromoacetone)(0.16mL，1mmol)在95℃ N2下加热2小时。加入1，8-二氮杂双环-[5.4.0]-十一碳烯-7-ene(1，8-Diazabicyclo-[5.4.0]-undec-7-ene)(0.34mL，2.2mmol)的苯(10mL)溶液。混合物在N2下回流1小时，倒入冰水中，用EtOAc萃取。结合的有机层用水洗涤，并干燥。在真空中除去溶剂后，在硅胶柱上利用乙酸乙酯∶己烷(EtOAc∶Hexane)(1∶9)和EtOAc洗脱、纯化残留物，得到7-甲氧基-2-甲基中氮茚(7-methoxy-2-methylindolizine)(0.050g，31％)。
将中氮茚7-甲氧基-2-甲基中氮茚(indolizine 7-methoxy-2-methylindolizine)(0.040g，0.25mmol，1eq.)、取代苯酰氯化物(substituted benzoyl chloride)(2.0eq.)和Et3N(5.0eq.)的混合物90℃加热(水浴温度)2-8小时。在室温下冷却反应混合物，添加EtOAc。分离有机层，利用稀HCl和水洗涤，并干燥。除去溶剂后，在硅胶柱上用EtOAc∶己烷(1∶9)洗脱、纯化残留物，得到化合物7(0.065 g，74％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.97(s，3H，-CH3)，3.91(s，3H，-OCH3)，3.88(s，9H，-OCH3)，6.15(s，1H)，6.54(dd，1H，J＝7.8，2.7Hz)，6.69(d，1H，J＝2.7Hz)，6.85(s，2H)，9.62(s，1H) 实施例8(6-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-甲 酮((6-methyl-1H-pyrrolo[2，3-b]pyridin-3-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)(化合物8)的合成 根据塞缪尔等人在《杂环》1990，30(1)，627-633页(Samuel C.et al.，Heterocycles，1990，30(1)，627-633)所述的方法制备6-氯代-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(6-Chloro-1-(phenylsulfonyl)-1H-pyrrolo[2，3-b]pyridine)。
将甲基锌氯化物的THF(2M)(9mL，12mmol)溶液加入6-氯-1-(苯磺酰)-1H-吡咯[2，3-b]嘧啶(0.600g，2.05mmol)和Pd(PPh3)4(0.095g，0.08mmol)的THF(30mL)溶液中。将混合物回流40小时，冷却到0℃，水淬并利用Et2O萃取。浓缩有机层得到残留物，在硅胶柱上利用EtOAc/己烷(1∶5)纯化残留物得到N-保护6-甲基-7-吖吲哚(N-protected 6-methyl-7-azaindole)(0.495g，88％)。
将50％的NaOH(0.573g)溶液加入N-保护6-甲基-7-吖吲哚(0.390g，1.43mmol)的乙醇(10mL)溶液中。回流8小时后，浓缩混合物，利用CHCl3萃取。用水洗涤并干燥有机层。在真空中除去溶剂后，在硅胶柱上利用EtOAc/己烷(1∶3)纯化，得到6-甲基-1H-[2，3-b]吡咯(6-methyl-1H-pyrrolo[2，3-b]pyridine)(0.148g，78％)。
室温下将溴化乙基镁(Ethylmagnesium bromide)(3.0M二乙基乙醚溶液，0.43mL)加入无水CH2Cl2(20mL)中的6-甲基-1H-吡咯并(0.127g，0.969mmol)和无水氯化锌(0.263g，1.94mmol)的混合物中超过10分钟。将悬浮液搅拌1小时，然后逐滴加入三甲氧基苯甲酰肼氯化物(3，4，5-trimethoxybenzoyl chloride)(0.335g，1.45mmol)的无水CH2Cl2(10mL)溶液超过5分钟。1小时后，添加氯化铝(0.129g，0.969mmol)。剧烈搅拌得到的粘稠混合物5个小时。反应水淬(10mL)并用CH2Cl2(20mL)萃取。利用无水MgSO4干燥有机层并浓缩得到棕色油，其进一步在硅胶柱(MeOH∶CH2Cl2＝1∶25)纯化，得到白色固体的化合物8(0.150g，48％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.76(s，3H，-CH3)，3.92(s，6H，-OCH3)，3.96(s，3H，-OCH3)，7.17(s，2H)，7.21(d，1H，J＝8.1Hz)，7.90(s，1H)，8.59(d，1H，J＝8.1Hz)，13.29(s，1H) 实施例9(6-甲氧基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基)- 甲 酮((6-methoxy-1H-pyrrolo[2，3-b]pyridin-3-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)(化合物9)的合成 根据米纳卡塔等人在《合成》1992，7，661-663页(Minakata et al.，Synthesis，1992，7，661-663)所述的方法制备7-吖吲哚N-氧化物(7-Azaindole N-oxide)。
将Ac2O(30mL)中的7-吖吲哚N-氧化物(5.55g，8.6mmol)混合物回流12小时。反应混合物浓缩到其一半体积，用CH2Cl2萃取，用水洗涤，用无水MgSO4干燥，脱水得到残留物，在硅胶柱中利用EtOAc/己烷(1∶6)洗脱纯化，得到1-乙酰-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-yl醋酸盐(1-acetyl-1H-pyrrolo[2，3-b]pyridin-6-ylacetate)(4.55g，70％)。
将MeOH/H2O(20mL/20mL)中的1-乙酰-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-yl醋酸盐(0.635g，2.9mmol)与K2CO3(1.6g，12mmol)的混合物在室温下搅拌12小时。将反应混合物浓缩到其一半体积并利用CHCl3萃取。利用无水MgSO4干燥有机层，脱水得到残留物，在硅胶柱中进一步纯化，得到1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-ol(1H-pyrrolo[2，3-b]pyridin-6-ol)(0.233g，60％)。
将丙酮(30mL)中的1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-ol(0.200g，1.49mmol)与K2CO3(1g，7.45mmol)的混合物在室温N2下搅拌1小时。添加甲基碘(0.166g，1.192mmol)。在50℃N2下将反应混合物搅拌12小时而后过滤。将滤液浓缩到其体积的一半，用水稀释并用CH2Cl2萃取。利用无水MgSO4干燥有机层，脱水得到残留物，在硅胶柱中利用EtOAc/己烷(1∶4)洗脱纯化，得到6-甲氧基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(6-methoxy-1H-pyrrolo[2，3-b]pyridine)(159mg，89％)。
室温下将溴化乙基镁(3.0M二乙基乙醚溶液，0.33mL)加入无水CH2Cl2(20mL)中的6-甲氧基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(0.108g，0.73mmol)和无水氯化锌(0.201g，1.46mmol)的混合物中超过10分钟。将悬浮液搅拌1小时，然后逐滴加入三甲氧基苯甲酰肼氯化物(0.252g，1.09mmol)的无水CH2Cl2(10mL)溶液超过5分钟。搅拌混合物1小时后，添加氯化铝(0.097g，0.73mmol)。得到的稠厚混合物剧烈搅拌5小时。反应水淬(10mL)并用CH2Cl2(20mL)萃取。利用无水MgSO4干燥结合的有机层并浓缩得到棕色油，其进一步在硅胶柱上利用EtOAc/己烷(1∶1)洗脱纯化，得到化合物9(0.189g，76％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.91(s，6H，-OCH3)，3.94(s，3H，-OCH3)，3.99(s，3H，-OCH3)，6.78(d，1H，J＝8.7Hz)，7.12(s，2H)，7.64(d，1H，J＝3Hz)，8.49(d，1H，J＝8.7Hz)，9.09(s，1H) 实施例10(6-乙氧基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-甲 酮((6-ethoxy-1H-pyrrolo[2，3-b]pyridin-3-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)(化合物10)的合成 化合物10以与实施例9相同的方法制备，只是以EtI取代MeI。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.45(t，1H，-OCH2CH3，J＝6.9Hz)，3.91(s，3H，-OCH3)，3.93(s，3H，-OCH3)，3.94(s，3H，-OCH3)，4.39(q，2H，-OCH2CH3，J＝6.9Hz)，6.76(d，1H，J＝9Hz)，7.12(s，2H)，7.62(d，1H，J＝3Hz)，8.48(d，1H，J＝9Hz)，8.93(s，1H) 实施例11(6-甲氧基-3a，7a-二氢-苯并呋喃-3-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基)- 甲 酮((6-methoxy-3a，7a-dihydro-benzofuran-3-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)(化合物11)的合成 将(6-甲氧基-苯并呋喃-3-yl)-醋酸((6-methoxy-benzofuran-3-yl)-acetic acid)(2g，9.7mmol)与甲醇(40mL)中H2SO4(0.3mL)的混合物回流8小时而后浓缩。添加NaHCO3水溶液，而后用CH2Cl2萃取。用无水MgSO4干燥结合的有机层，浓缩得到棕色油，在硅胶柱上利用EtOAc/己烷(1∶10)洗脱纯化，得到甲基2-(甲氧基苯并呋-3-yl)醋酸盐(methyl 2-(6-methoxybenzofuran-3-yl)acetate)(2.1g，98％)。
将甲基2-(甲氧基苯并呋-3-yl)醋酸盐(0.500g，2.27mmol)与1，4-二氧杂环乙烷(10mL)中的SeO2(0.303g，2.73mmol)回流2天，而后过滤。真空浓缩过滤液，残留物在硅胶柱上纯化，得到甲基2-(甲氧基苯并呋-3-yl)-2-乙酰酯(methyl2-(6-methoxybenzofuran-3-yl)-2-oxoacetate)(0.452g，85％)。
0℃N2下将LAH(0.093g，2.39mmol)加入THF(10mL)的甲基2-(甲氧基苯并呋-3-yl)-2-乙酰酯(0.280g，1.196mmol)中，室温下在N2下搅拌混合物过夜。加入NH4Cl水溶液(5mL)，将反应混合物浓缩到其体积的一半，用EtOAc萃取。利用盐水和水洗涤有机层，用无水MgSO4干燥，脱水得到1-(6-甲氧基-苯并呋喃-3-yl)-乙烷-1，2-二醇(1-(6-methoxy-benzofuran-3-yl)-ethane-1，2-diol)。
将NaIO4(0.204g，1.12mmol)在搅拌下加入THF(50mL)中的1-(6-甲氧基-苯并呋喃-3-yl)-乙烷-1，2-二醇(0.180g，1.196mmol)和水(1mL)。室温下在N2下搅拌混合物过夜。添加水(10mL)，将反应混合物浓缩到其体积的一半，用EtOAc萃取。利用盐水和水洗涤有机层，用无水MgSO4干燥，脱水得到残留物，其在硅胶柱中利用EtOAc/己烷(1∶10)洗脱纯化，得到6-甲氧基苯并呋喃-3-羧酸吲哚(6-methoxybenzofuran-3-carbaldehyde)(0.110g，73％)。
向装有冷凝器、加料漏斗和磁性搅拌器的干燥烧瓶中加入镁屑(2.5mmol)、0.5mL的无水四氢呋喃(THF)和少量碘。通过加料漏斗加入到1.3mL的3，4，5-三甲氧基溴苯(2.5mmol)的THF溶液大约1/3。溶液变为无色(可能需要加热)时，温和回流下将剩余的3，4，5-三甲氧基溴苯逐滴加入溶液中。反应混合物在室温下搅拌1小时。而后在0℃下将所得溶液缓慢加入6-甲氧基苯并呋喃-3-羧酸吲哚(6-methoxybenzofuran-3-carbaldehyde)(0.100g，0.176mmol)的无水THF(5mL)溶液中。添加之后，将溶液在室温下再搅拌20分钟。而后在0℃下缓慢加入饱和NH4Cl溶液(5mL)，将混合物搅拌10分钟。将水层分离并利用Et2O(3×10mL)萃取。利用盐水洗涤结合的有机层，利用MgSO4干燥并过滤。真空浓缩滤液，通过柱层析纯化残留物，得到二苯基甲醇(benzhydrol)(0.097g，50％)。
在0℃下将MnO2(0.193g，1.88mmol)在搅拌下加入二苯基甲醇(0.050g，0.145mmol)的5mL无水CH2Cl2溶液中。添加之后，将混合物在室温下搅拌8小时。利用无水乙醚(50mL)稀释混合物或通过硅藻土(Celite)垫过滤。真空浓缩滤液，通过快速层析法纯化残留物，得到化合物11(0.043g，87％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.89(s，3H，-OCH3)，3.92(s，6H，-OCH3)，3.95(s，3H，-OCH3)，7.03(dd，1H，J＝8.4，2.1Hz)，7.08(d，1H，J＝2.1Hz)，7.16(s，2H)，8.03(s，1H)，8.05(d，1H，J＝9.3Hz). 实施例12(6-甲氧基-2-甲基-3a，7a-二氢-苯并呋喃-3-yl)-(3，4，5-三甲氧基- 苯 基) - 甲酮((6-methoxy-2-methyl-3a，7a-dihydro-benzofuran-3-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)(化合物12)的合成 利用Dean-Stark水分离器将6-甲氧基-3-羧酸吲哚(6-methoxybenzofuran-3-carbaldehyde)(0.600g，3.41mmol)、HOCH2CH2OH(3.17g，51mmol)与苯(20mL)中的对甲苯磺酸(0.001g)的混合物回流8小时。混合物减压浓缩，而后用EtOAc稀释。用水洗涤有机层，利用MgSO4干燥并过滤，浓缩得到3-(1，3-二氧合-2-yl)-6-甲氧基苯并呋喃(3-(1，3-dioxolan-2-yl)-6-methoxybenzofuran)(0.711g，95％)。
-30到-20℃下将3-(1，3-二氧合-2-yl)-6-甲氧基苯并呋喃(0.144g，0.65mmol)溶于THF(5mL)中。将上述溶液逐滴加入叔丁基锂(15％戊烷溶液，0.56mL，1.31mmol)。反应混合物在-30℃下搅拌30分钟，而后加热到0℃下再搅拌20分钟。再将反应混合物冷却到-30℃逐滴加入碘甲烷(0.138g，0.98mmol)。在-30℃下再搅拌1小时，加热到室温过夜。减压除去溶剂后，残留物在EtOAc中溶解，利用饱和NaHCO3洗涤。利用EtOAc(3×20mL)萃取水层。利用无水MgSO4干燥结合的有机层，减压浓缩，得到3-[1，3]二氧合-2-yl-6-甲氧基-2-甲基-苯并呋喃(3-[1，3]dioxolan-2-yl-6-methoxy-2-methyl-benzofuran)。
0℃下将2N HCl(5mL)加入THF(5mL)中的3-[1，3]二氧合-2-yl-6-甲氧基-2-甲基-苯并呋喃中。在室温下搅拌1小时后，减压除去溶剂。将残留物在EtOAc中溶解，利用饱和NaHCO3洗涤。利用EtOAc(3×20mL)萃取水层。利用无水MgSO4干燥结合的有机层。除去溶剂后，残留物在硅胶柱上利用EtOAc/己烷(1∶9)洗脱纯化，得到6-甲氧基-甲基苯并呋喃-3-羧酸吲哚(6-methoxy-2-methylbenzofuran-3-carbaldehyde)(0.090g，81％)。
将6-甲氧基-甲基苯并呋喃-3-羧酸吲哚与3，4，5-三甲氧基-苯基结合，而后用MnO2以类似于实施例11的方式氧化，得到化合物12。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.55(s，3H，-CH3)，3.85(s，6H，-OCH3)，3.86(s，3H，-OCH3)，3.95(s，3H，-OCH3)，6.85(dd，1H，J＝9，2.4Hz)，7.01(d，1H，J＝2.4Hz)，7.12(s，2H)，7.34(d，1H，J＝9Hz). 实施例13(6-甲氧基-3a，7a-二氢-苯并[b]噻吩-3-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基) - 甲 酮( 化 合物 13)((6-methoxy-3a，7a-dihydro-benzo[b]thiophen-3-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)的合成 根据坎姆培恩等人在《杂环化学期刊》1970，7，695页(Campaigne et al.，JHeterocycl Chem，1970，7，695)所述的方法制备6-甲氧基-3-甲基苯并噻吩(6-Methoxy-3-methylbenzo[b]thiophene)。
将6-甲氧基-3-甲基苯并噻吩(6-methoxy-3-methylbenzo[b]thiophene)(2.753g，15.5mmol)与1，4-二氧杂环乙烷(30mL)中的SeO2(2.06g，18.55mmol)的混合物回流2天，而后过滤。在真空中浓缩滤液，在硅胶柱中利用EtOAc/己烷(1∶10)洗脱纯化残留物，得到6-甲氧基-3-羧酸吲哚(6-methoxybenzo[b]thiophene-3-carbaldehyde)(2.3g，80％)。
.将得到的产物与3，4，5-三甲氧基-苯基结合，而后用MnO2以类似于实施例11的方式氧化，得到化合物13，收率为54％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.89(s，6H，-OCH3)，3.91(s，3H，-OCH3)，3.95(s，3H，-OCH3)，7.13(dd，1H，J＝9，2.4Hz)，7.14(s，2H)，7.36(d，1H，J＝2.4Hz)，7.85(s，1H)，8.37(d，1H，J＝9Hz). 实施例14(6-甲氧基-2-甲基-3a，7a-二氢-苯并[b]噻吩-3-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯 基 ) - 甲酮((6-methoxy-2-methyl-3a，7a-dihydro-benzo[b]thiophen-3-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)(化合物14)的合成 根据实施例12说明的方法将6-甲氧基苯并[b]噻吩-3-羧酸吲哚转换为3-(1，3-二氧杂环乙烷-2-yl)-6-甲氧基苯并[b]噻吩。
将得到的产物与3，4，5-三甲氧基-苯基结合，而后用MnO2以类似于实施例11的方式氧化，得到化合物14，收率为79％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.49(s，3H，-CH3)，3.82(s，6H，-OCH3)，3.87(s，3H，-OCH3)，3.95(s，3H，-OCH3)，6.92(dd，1H，J＝9，2.4Hz)，7.12(s，2H)，7.26(d，1H，J＝2.4Hz)，7.44(d，1H，J＝9Hz). 实施例115(6-甲氧基-吡唑[1，5-b]吡啶-3-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-甲酮(化合物15)的合成 0℃下搅拌3，4，5-三甲氧基苯甲醛(3，4，5-trimethoxybenzaldehyde)的THF(50mL)溶液。通过注射器添加乙炔钠(18％w.t.二甲苯浆，1.63g，6.1mmol)。室温下搅拌反应混合物过夜并水淬。然后利用EtOAc(30mL×3)萃取。用盐水洗涤结合的有机层，用无水MgSO4进行干燥，过滤，浓缩，得到粗产物，通过快速柱层析利用EtOAc/己烷(1∶2)洗脱进行纯化，得到白色固体1-(3，4，5-三甲氧基苯基)炔丙醇-2-yn-1-ol(1-(3，4，5-trimethoxyphenyl)prop-2-yn-1-ol)(815mg，72％)。
搅拌丙酮(10mL)中的1-(3，4，5-三甲氧基苯基)炔丙醇-2-yn-l-ol(100mg，0.44mmol)，0℃下逐滴添加水性琼斯试剂直到得到持续的红色。用二丙醇使反应混合物骤冷，通过硅藻土(Celite)垫过滤除去沉淀物。利用EtOAc稀释滤液，用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤数次，用无水MgSO4进行干燥，浓缩得到粗产物，通过快速柱层析利用EtOAc/正己烷(1∶4)洗脱进行纯化，得到无色油状的1-(3，4，5-三甲氧基苯基)炔丙醇-2-yn-1-one(1-(3，4，5-trimethoxyphenyl)prop-2-yn-1-one)(74mg，75％)。
将甲醇(50mL)中的3-氯-6-甲氧基哒嗪(3-chloro-6-methoxypyridazine)(1.0g，6.9mmol)与33％的钯碳(100mg)的混合物在45psi下氢化过夜。通过硅藻土(Celite)垫过滤除去催化剂。浓缩滤液并在EtOAc中溶解。将溶液用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤数次，用MgSO4干燥，浓缩得到粗产物，在硅胶柱上利用EtOAc/正己烷(1∶2)洗脱纯化，得到淡黄色固体3-甲氧基哒嗪(3-methoxypyridazine)(662mg，87％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.14(s，3H)，6.98(dd，J＝1.2，9.0Hz，1H)，7.36(dd，J＝4.5，8.7Hz，1H)，8.84(dd，J＝1.2，4.5Hz，1H). 将碳酸氢钾(2.5M)加入羟胺-O-磺酸(hydroxylamine-O-sulfonic acid)(64.7mg，0.57mmol)直到pH值变为5。而后在70℃下添加3-甲氧基哒嗪(42mg，0.38mmol)超过10分钟。在70℃将混合物搅拌2小时后冷却到室温。通过添加2.5M的碳酸氢钾将混合物的pH值调整为8。添加CH2Cl2(10mL)中的1-(3，4，5-三甲氧基苯基)炔丙醇-2-yn-1-one(42mg，0.19mmol)和碳酸氢钾(40mg，0.71mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，而后利用CH2Cl2萃取，利用盐水洗涤结合的有机层，用MgSO4干燥，浓缩得到粗产物，在硅胶柱上利用CH2Cl2/MeOH(20∶1)洗脱纯化，得到白色固体化合物15(31mg，48％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.93(s，6H)，3.95(s，3H)，4.11(s，3H)，7.00(d，J＝9.3Hz，1H)，7.15(s，2H)，8.23(s，1H)，8.56(d，J＝9.6Hz，1H). 实施例16(2-甲基-7H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-yl)-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-甲酮((2-methoxy-7H-pyrrolo[2，3-d]pyrimidin-5-yl)-(3，4，5-trimethoxy-phenyl)-methanone)(化合物16)的合成 室温下在H2下将10％的Pd/C(1.000g，11.6mmol)加入4-氯-2-甲氧基-7H-吡咯[2，3-b]嘧啶(4-chloro-2-methoxy-7H-pyrrolo[2，3-d]pyrimidine)(0.200g，1.09mmol)的20mL无水MEOH中。将混合物搅拌8小时，通过硅藻土(Celite)垫过滤。将滤液在真空中浓缩，得到作为主产物的2-甲氧基-6，7-双氢-5H-吡咯[2，3-b]嘧啶(2-methoxy-6，7-dihydro-5H-pyrrolo[2，3-d]pyrimidine)。
室温下将MnO2(1.720g，20mmol)加入20mL无水CH2Cl2中的2-甲氧基-6，7-双氢-5H-吡咯[2，3-b]嘧啶中。将混合物搅拌8小时，利用无水乙醚(50mL)稀释，通过硅藻土(Celite)垫过滤。将滤液在真空中浓缩，在硅胶柱上利用MeOH/CH2Cl2(1∶9)洗脱纯化，得到作为主产物的2-甲氧基-7H-吡咯[2，3-b]嘧啶(2-methoxy-7H-pyrrolo[2，3-d]pyrimidine)(0.149g，90％)。
室温下向无水CH2Cl2(20mL)中的2-甲氧基-7H-吡咯[2，3-b]嘧啶(0.220g，1.476mmol)和无水氯化锌(0.407g，2.953mmol)的混合物中加入溴化乙基镁(0.65mL，3.0M的二乙基乙醚溶液)超过10分钟。再将悬浮液搅拌1小时，然后逐滴加入三甲氧基苯甲酰肼氯化物(0.510g，2.2mmol)的无水CH2Cl2(10mL)溶液超过5分钟。将反应混合物再搅拌1小时，然后添加氯化铝(0.196mg，1.476mmol)。剧烈搅拌得到的粘稠混合物5个小时。水淬(10mL)反应并利用CH2Cl2(20mL)萃取。利用无水MgSO4干燥结合的有机层并浓缩得到棕色油，在硅胶柱(EtOAc∶己烷＝1∶1到MeOH∶CH2Cl2＝1∶20)纯化，得到化合物16(0.081g，20％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.93(s，6H，-OCH3)，3.95(s，3H，-OCH3)，4.09(s，3H，-OCH3)，7.13(s，2H)，7.71(d，1H，J＝2.4Hz)，9.38(s，1H)，9.79(s，1H). 实施例17细胞生长抑制的测定 将KB细胞(从人类鼻咽癌中得到的细胞系)与MKN-45细胞(胃癌细胞系)保存在充满5％胎牛血清的RPMI1640介质中的的塑料器皿中。在96孔板中接种最终细胞密度为7,000个细胞/mL的KB细胞。在96孔板中接种最终细胞密度为20,000个细胞/mL的MKN-45细胞。利用试验化合物处理细胞(至少五个不同的试验化合物浓度)，在37℃的CO2培养箱中培养72小时。利用MTS测定法(或亚甲蓝测定法)估计活细胞的数目，测定490nm的吸光度。根据IC50的值表示试验化合物的细胞毒性。上述值表示三个利用复制的样品的独立实验的平均值。
在上述测定中试验化合物1-14。所有的化合物都有效地抑制KB细胞和MKN-45细胞的生长。出乎意料的是，它们中大多数都表示出的IC50值小于1mM，一些甚至小于100nM。
实施例18微管蛋白聚合测定 根据有些修改的劳匹斯(Lopes)等人(在1997年的癌症化疗药理4137-47(1997，Cancer Chemother.Pharmacol.4137-47))所述的程序进行微管蛋白的混浊度测定。添加1mM GTP前，4℃下在聚合缓冲液(0.1M PIPES，pH6.9，1mMMgCl2)中用试验化合物预培养富含MAP的微管蛋白(2mg/ml)2分钟。在96孔板中将样品迅速加热到37℃，用温控分光光度计在350nm处测定其随时间的改变。
实施例19对多抗药人类癌症细胞系中的细胞生长抑制测定 测试本发明的一些稠合双芳杂环化合物对抗抗药细胞系的一些试验组。公知的是一些有丝分裂抑制剂，包括长春花碱(例如长春新碱或长春碱)和泰素，已经用于治疗多种人类癌症。长春碱耐药已归因于多种多药耐药(MDR)有关显型的机制，包括过度表达p醣蛋白和多药耐药相关蛋白(MRP)。造成泰素耐药的机制包括过度表达p醣蛋白和微管蛋白突变。为比较，还对5种有丝分裂抑制剂，也就是长春新碱、VP-16、顺氯氨铂、喜树碱和泰素进行一些抗药细胞系试验组例如KB-Vin10(抗长春新碱的细胞系)，KB100(一种camptotnecin的耐药细胞系)，和CPT30(一种camptotnecin的耐药细胞系)的耐受性的测定。
实施例20血管生成抑制作用的CAM测定 每个测试化合物都溶解在2.5％的琼脂糖水溶液(最终浓度1-20mg/mL)中。将10μL溶液逐滴滴入直径为3mm的圆形特氟纶托盘，而后冷却到室温。在相对湿度为80％温度37℃下培养65-70小时，将受精的鸡蛋至于水平位置并旋转几次。在打开弧度较缓的一端前，将10mL的白蛋白从较尖的一端抽出。在高度的三分之二处(从较尖的一端)，用解剖刀划开鸡蛋，用镊子出去壳。将孔(洞)用保鲜膜覆盖后，将蛋在相对湿度为80％温度37℃下孵化75小时。绒毛尿囊膜的直径大概为2cm时，将一个小球(1球/蛋)置于其上。将蛋培养1天，而后在立体显微镜下评定。
其他实施例 上述说明中公开的所有特征可以以任意的组合方式组合。说明书中公开的每个特征都可以用其他有相同、相等和类似目的的方式替换。因此，除非另外详细说明，每个公开的特征都仅是有相同或类似特征的一大类的举例。
从上述实施例中，所属技术领域的技术人员可以容易地确定本发明的基本特征，对本发明进行多种不脱离其精神和范围的改变和修改，以适应多种应用和条件。例如，也可以制作结构上与本发明的稠合双芳杂环化合物类似的化合物，根据对抗癌症细胞生长的抑制能力进行筛选，用于实现本发明。因此，其他实施方式也包含在权利要求中。
权利要求
1.具有以下化学式的一种化合物
其特征在于
每个
都为单键或双键；
A是C(＝O)、CRR’、O、NR、S、SO或SO2；
D是芳基或杂芳基；
R1从氢、烷基、芳基、烷氧基、羟基、盐、氨基或烷胺基中选出；
每个Q，U，V和Y都分别是CR或N；
X是N，CR或NR’；
Z是C；以及
每个T和W都是C或N，至少一个T和W是C；
条件是
当T是C且W是N，T和W之间的键为单键，T和Z之间的键为双键，Y和Z之间的键为单键，X和Y之间的键为双键，W和X之间的键为单键，X为N或CR；
当T为N且W为C，T和W之间的键为单键，T和Z之间的键为单键，Y和Z之间的键为双键，X和Y之间的键为单键，W和X之间的键为双键，X为N或CR；以及
当T为C且W为C，T和W之间的键为双键，T和Z之间的键为单键，Y和Z之间的键为双键，X和Y之间的键为单键，W和X之间的键为单键，X为NR且Y为N，或X为NR，Y为CR，Q、U和V中的至少一个为N；
其中每个R和R’分别为氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环基、SO3Ra、SO2Ra、SO2NRaRb、CORa、COORa或CONRaRb；每个Ra和Rb分别为氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于每个T和X都是N，W是C，每个Q、U和V都是CH，Y是CR。
3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于每个T和W都是C，X是NH，Y是N，每个Q、U和V都是CH。
4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于每个T和W都是C，每个Q和U都是CH，V是N，X是NH，Y是CR。
5.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于T是C，W是N，每个Q、U、V和X都是CH，Y是CR。
6.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于T是N，W是C，每个Q、U、V和X都是CH，Y是CR。
7.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于T是C，W是N，每个Q、U和V者都是CH，X是N，Y是CR。
8.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于每个T和W都是C，每个Q、U和V都是CH，X是O，Y是N。
9.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于每个T和W都是C，Q是CH，或每个U和V都是N，X是NH，Y是CR。
10.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于T是C，每个W、V和X都是N，每个Q和U都是CH，Y是CR。
11.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于D是取代苯基。
12.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于D是取代苯基，A是C(O)，R1是OCH3、OCH2CH3、O-n-Pr、O-i-Pr、CH3、N(CH3)2。
13.根据权利要求12所述的化合物，其特征在于D是3，4，5-三甲氧基苯基。
14.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于D是取代苯基，A是CH2、NH、O、S、或SO2；R1是OCH3、OCH2CH3、O-n-Pr、O-i-Pr、CH3、N(CH3)2。
15.具有以下化学式的一种化合物
其特征在于
每个
都为单键或双键；
A是C(＝O)、CRR’、O、NR、S、SO或SO2；
D是芳基或杂芳基；
R1从烷基、芳基、烷氧基、羟基、盐、氨基或烷胺基中选出；
每个Q、U和V都分别是CR或N；
X是O或S；
Y为CR”或N；
每个T、W和Z都是C；
T和W之间的键为双键；
T和Z之间的键为单键；
Y和Z之间的键为双键；
X和Y之间的键为单键；以及
W和X之间的键为单键；
其中每个R和R’都分别是，氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环基、SO3Ra、SO2Ra、SO2NRaRb、CORa、COORa或CONRaRb，R”是氢、烷基、烯基、炔基、杂芳基、环烷基、杂环基、SO3Ra、SO2Ra、SO2NRaRb、CORa、COORa或CONRaRb；每个Ra和Rb分别是氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环基。
16.根据权利要求15所述的化合物，其特征在于每个Q、U和V都是CH，Y是CR。
17.根据权利要求16所述的化合物，其特征在于D是取代苯基，A是C(O)。
18.根据权利要求17所述的化合物，其特征在于D是3，4，5-三甲氧基苯基。
19.根据权利要求18所述的化合物，其特征在于Y是CH、CNH2、CCH3或CCH2CH3。
20.一种治疗癌症的方法，其特征在于包含给予需要的接受治疗者有效量的权利要求1所述的化合物。
21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于T和X中的每一个都是N，W是C，Q、U和V中的每一个都是CH，Y是CR。
22.根据权利要求20所述的方法，其特征在于T和W中的每一个都是C，X是NH，Y是N，Q、U和V中的每一个都是CH。
23.根据权利要求20所述的方法，其特征在于T和W中的每一个都是C，Q和U中的每一个都是CH，V是N，X是NH，Y是CR。
24.根据权利要求20所述的方法，其特征在于T是C，W是N，Q、U、V和X中的每一个都是CH，Y是CR。
25.根据权利要求20所述的方法，其特征在于T是N，W是C，Q、U、V和X中的每一个都是CH，Y是CR。
26.一种治疗癌症的方法，其特征在于包含给予需要的接受治疗者有效量的权利要求15所述的化合物。
27.根据权利要求26所述的方法，其特征在于Q、U和V中的每一个都是CH，X是O，Y是CR。
28.根据权利要求26所述的方法，其特征在于Q、U和V中的每一个都是CH，X是S，Y是CR。
29.一种药物组合物，其特征在于包含药学上可接受的载体和权利要求1所述的化合物。
30.一种药物组合物，其特征在于包含药学上可接受的载体和权利要求15所述的化合物。
全文摘要
化学式如下的化合物其中，A、D、Q、T、U、V、W、X、Y、Z、R1和由本发明定义。本发明还涉及利用上述化合物中的一个抑制微管蛋白聚合，或治疗癌症或血管生成相关异常的方法。
文档编号C07D487/00GK101133056SQ200580045509
公开日2008年2月27日 申请日期2005年12月28日 优先权日2004年12月31日
发明者谢兴邦, 赵宇生, 刘景平, 张俊彦, 董彦士 申请人:国家卫生研究院, 赵宇生