槐定胺类衍生物及其制备方法和用途与流程

本发明涉及医药领域，具体涉及槐定胺类衍生物及其制备方法和用途。

背景技术：

槐定碱(sophoridine)是从豆科槐属植物苦豆子中提取的生物碱单体，其具有广泛的药理学作用，例如抗肿瘤、抗病毒、抗炎等。2005年盐酸槐定碱注射液被批准上市，用于治疗滋养细胞癌。槐定碱结构(结构如下所示)与现有抗癌化疗药结构不同，是一类新型的抗癌新药，目前对槐定碱结构改造及其构效关系研究较少，并且本领域对结构新颖且具有较高活性的抗肿瘤药物仍有巨大需求。

技术实现要素：

本发明的发明人以槐定碱为先导化合物，通过对槐定碱的结构进行改造和修饰，得到了一类结构新颖的具有优异抗肿瘤活性的槐定胺类衍生物，本发明即是基于以上发现而完成。

本发明第一方面提供式i化合物、其光学异构体、其溶剂合物或其药学上可接受的盐，

其中，

r1和r2各自独立地代表氢、c1-6烷基、c1-6烷氧基、芳基(例如6-20元芳基)、杂芳基(例如6-20元杂芳基)、环烷基(例如3-20元环烷基)或脂杂环基(3-20元脂杂环基)，任选地，其中所述c1-6烷基、c1-6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基和脂杂环基被一个或多个(例如2、3、4、5或6个)选自下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、3-8元环烷基、3-8元脂杂环基、6-15元芳基和5-15元杂芳基，其中，所述3-8元环烷基、3-8元脂杂环基、6-15元芳基和5-15元杂芳基任选地被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)选自卤素、羟基、氨基、氰基、c1-6烷基、卤代c1-6烷基和c1-6烷氧基的取代基取代；或者，

r1和r2与相连的n原子一起形成脂杂环基(例如3-20元脂杂环基)，其中所述脂杂环基任选地被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)选自卤素、羟基、氨基、氰基、c1-6烷基、卤代c1-6烷基和c1-6烷氧基的取代基取代；

r3代表氢、卤素、羟基、氨基、氰基、c1-6烷基、卤代c1-6烷基和c1-6烷氧基；

n1代表0-10的整数(例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)；

a代表-ch2-、-co-或-s(o)n2-，其中n2为0、1或2；

环x代表芳环(例如6-20元芳环)或杂芳环(5-20元杂芳环)；

代表碳氮单键或碳氮双键，当代表碳氮双键时，r1不存在。

在本发明的一个实施方案中，r1和r2各自独立地代表氢、c1-6烷基、6-15元芳基(例如苯基、萘基)、苯并3-6元杂环基、3-8元脂杂环基，任选地，其中所述c1-6烷基、6-15元芳基、苯并3-6元杂环基、3-8元脂杂环基被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)选自下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、氰基、c1-4烷基、卤代c1-4烷基、c1-4烷氧基和苯基，其中，所述c1-4烷基、c1-4烷氧基和苯基任选地被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)选自卤素、羟基、氨基、三氟甲基、氰基、甲基和甲氧 基的取代基取代；或者，

r1和r2与相连的n原子一起形成3-8元脂杂环基，优选5-6元脂杂环基，例如吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或硫吗啉基，其中所述3-8元脂杂环基任选地被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)选自卤素、羟基、氨基、三氟甲基、氰基、甲基和甲氧基的取代基取代；

代表碳氮单键或碳氮双键，当代表碳氮双键时，r1不存在。

在本发明的优选实施方案中，r1为氢，r2代表氢、c1-6烷基、6-15元芳基(例如苯基、萘基)、苯并3-6元杂环基、3-8元脂杂环基，任选地，其中所述c1-6烷基、6-15元芳基、苯并3-6元杂环基、3-8元脂杂环基被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)选自下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、氰基、c1-4烷基、卤代c1-4烷基、c1-4烷氧基和苯基，其中，所述c1-4烷基、c1-4烷氧基和苯基任选地被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)选自卤素、羟基、氨基、三氟甲基、氰基、甲基和甲氧基的取代基取代；或者，

r1和r2与相连的n原子一起形成3-8元脂杂环基，优选5-6元脂杂环基，例如吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或硫吗啉基，其中所述3-8元脂杂环基任选地被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)选自卤素、羟基、氨基、三氟甲基、氰基、甲基和甲氧基的取代基取代；

代表碳氮单键。

在本发明的优选实施方案中，r1为氢，r2代表氢、c1-6烷基(优选甲基和乙基)、苯基、1,3-苯并二噁茂基或吗啉基，任选地，其中所述c1-6烷基、苯基、1,3-苯并二噁茂基和吗啉基被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)选自下述的取代基取代：卤素、三氟甲基、甲氧基、1,3-苯并二噁茂基以及任选地被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)选自卤素、三氟甲基、甲基和甲氧基的取代基取代的苯基；或者，

r1和r2与相连的n原子一起形成哌嗪环，其中所述哌嗪环任选地被 一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)选自卤素、三氟甲基、甲基和甲氧基的取代基取代；

代表碳氮单键。

在本发明的优选实施方案中，r1为氢，r2选自4-氯-3-三氟甲基苯基、3,4,5-三甲氧基苯基、3,4,5-三甲氧基苄基、4-吗啉基、1,3-苯并二噁茂基、1,3-苯并二噁茂-4-甲基和1,3-苯并二噁茂-4-乙基；或者，

r1和r2与相连的n原子一起形成4-甲基-哌嗪基；

代表碳氮单键。

在本发明的一个实施方案中，r3代表氢、卤素(例如氟、氯、溴或碘)、羟基、氨基、氰基、c1-4烷基(例如甲基或以乙基)、卤代c1-4烷基或c1-4烷氧基(例如甲氧基或乙氧基)，优选地，r3代表卤素，更优选地，r3为氯。

在本发明的一个实施方案中，环x为6-15元芳环或5-15元杂芳环，例如苯、萘、芴、吡咯、呋喃、噻吩、吡啶、吡嗪、嘧啶、吲哚或嘌呤，优选地，环x为苯。

在本发明的优选实施方案中，式i中为4-氯苯基。

在本发明的优选实施方案中，n1代表0-3的整数，更优选地，n1为3。

在本发明的优选实施方案中，a代表-ch2-、-co-或-so2-。

在本发明的一个实施方案中，所述式i化合物选自以下化合物，

12-n-对氯苄基-4’-(3,4,5-三甲氧基苯基)槐定胺；

12-n-对氯苄基-4’-(n-吗啉基)槐定亚胺；

12-n-对氯苄基-4’-(2,3-亚甲二氧基苄基)槐定胺；

12-n-对氯苄基-4’-(3,4,5-三甲氧基苄基)槐定胺；

12-n-对氯苄基-4’-(4-氯-3-三氟甲基苯基)槐定胺；

12-n-对氯苄基-4’-(2,3-亚甲二氧基苯乙基)槐定胺；

12-n-对氯苄基-4’-(2,3-亚甲二氧基苯基)槐定胺；

12-n-对氯苄基-4’-(n-甲基哌嗪基)槐定胺；

12-n-对氯苯甲酰基-4’-(2,3-亚甲二氧基苄基)槐定胺；

12-n-对氯苯甲酰基-4’-(3,4,5-三甲氧基苄基)槐定胺；

12-n-对氯苯甲酰基-4’-(2,3-亚甲二氧基苯乙基)槐定胺；

12-n-对氯苯磺酰基-4’-(2,3-亚甲二氧基苄基)槐定胺；

12-n-对氯苯磺酰基-4’-(3,4,5-三甲氧基苄基)槐定胺；和

12-n-对氯苯磺酰基-4’-(2,3-亚甲二氧基苯乙基)槐定胺。

本发明式i化合物可通过以下方法制备得到：

方法一：

步骤一，槐定碱经开环和酯化反应得到槐定酸甲酯z0a；

步骤二，z0a经n-烷基化得到z08；

步骤三，z08的酯基还原后得到c08；

步骤四，c08的羟基氧化后得到q08；

步骤五，q08的醛基与r1r2nh缩合(或经还原胺化反应)得到目标化合物target1；

方法二：

步骤1，化合物z0a的氨基经boc保护得到12-n-boc-槐定酸甲酯；

步骤2，12-n-boc-槐定酸甲酯还原后得到12-n-boc-槐定醇；

步骤3，12-n-boc-槐定醇氧化后得到12-n-boc-槐定醛；

步骤4，12-n-boc-槐定醛与r1r2nh经还原胺化反应得到12-n-boc-槐定胺衍生物；

步骤5，12-n-boc-槐定胺衍生物经脱保护反应得到目标化合物target2；

优选地，当r1r2nh中r1为氢时，在步骤5前还包括对12-n-boc-槐定胺衍生物中r2所连氨基进行选择性保护的步骤，例如，选择性保护基可以为fmoc；

方法三：

步骤a，z0a经n-磺酰化反应得到磺酰胺hxz08；

步骤b，hxz08的酯基经还原后得到hdc08；

步骤c，hdc08的醇经氧化后得到hxq08；

步骤d，hxq08与r1r2nh经还原胺化反应得到目标化合物target3。

本领域技术人员可通过教科书的教导制备得到上述各化合物，对于具体的反应条件本发明不作具体限定。

本发明的第二方面提供药物组合物，其包含本发明第一方面任一项所述的式i化合物、其光学异构体、其溶剂合物或其药学上可接受的盐，以及任选地一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明的第三方面提供本发明第一方面任一项所述的式i化合物、其光学异构体、其溶剂合物或其药学上可接受的盐在制备治疗受试者所患癌症的药物中的用途。

在本发明的一个实施方案中，所述癌症选自肝癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、宫颈癌、卵巢癌、淋巴瘤神经胶质瘤、脑胶质瘤和黑色素瘤。

在本发明的一个实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。

本发明的另一方面提供一种治疗癌症的方法，其包含向有需要的受试者施用有效量的本发明第一方面任一项所述的式i化合物、其光学异构体、其溶剂合物或其药学上可接受的盐。

在本发明的一个实施方案中，所述癌症选自肝癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、宫颈癌、卵巢癌、淋巴瘤神经胶质瘤、脑胶质瘤和黑色素瘤。

在本发明的一个实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。

本发明的再一方面提供本发明第一方面任一项所述的式i化合物、其光学异构体、其溶剂合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗受试者所患的癌症。

在本发明的一个实施方案中，所述癌症选自肝癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、宫颈癌、卵巢癌、淋巴瘤神经胶质瘤、脑胶质瘤和黑色素瘤。

在本发明的一个实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。

以下对本发明的术语进行解释，对于特定的术语，如果本发明中的含义与本领域技术人员通常理解的含义不一致，以本发明中的含义为准；如果在本发明中没有定义，则其具有本领域技术人员通常理解的含义。除非有相反陈述，本发明中使用的术语具有下述含义：

本发明所用术语“c1-6烷基”是指具有1-6(例如1、2、3、4、5或6)个碳原子的直链或支链烷基，例如c1-4烷基。所述c1-6烷基可被卤素取代得到所述卤代c1-6烷基，例如三氟甲基、三氟乙基等。具体的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、戊基和己基等。

本发明所用术语“c1-6烷氧基”是指具有“c1-6烷基-o-”结构的基团，例如c1-4烷氧基，其中c1-6烷基具有与前文所述“c1-6烷基”相同的含义。具体的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、异丁氧基、戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、异戊氧基、新戊氧基、仲戊氧基、己氧基、2-己氧基和3-己氧基等。

本发明中所用术语“环烷基”是指饱和或部分饱和的碳环，包括单环或多环，例如3-20元环烷基、3-15元环烷基、3-10元环烷基、3-8元环烷基、3-6元环烷基等。所述环烷基可任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氨基、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、3-8元环烷基、3-8元 脂杂环基、6-15元芳基和5-15元杂芳基的取代基取代。环烷基具体的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基等。

本发明所用术语“芳基”是指具有单环(如苯基)、多环(如萘基)或其中至少一个环是芳香性的稠合环(例如苯并3-6元杂环，如1,3-苯并二噁茂)的芳族碳环基，例如6-20元芳基、6-15元芳基等。所述芳基可任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氨基、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、3-8元环烷基、3-8元脂杂环基、6-15元芳基和5-15元杂芳基的取代基取代。芳基或取代芳基的具实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基、菲基、芴基、茚基、苊基、1,3-苯并二噁茂、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、3，4，5-三甲氧基苯基、4-氯-3-三氟甲基苯基等。

本发明中所用术语“杂环基”是指含有至少一个、至多四个选自n、o或s的杂原子的单环或多环，可分为脂杂环基和芳杂环基，其中所述脂杂环基包括例如3-20元脂杂环基、3-15元脂杂环基、3-10元脂杂环基、3-8(例如3、4、5、6、7或8)元脂杂环基、3-6元脂杂环基等，其中所述芳杂环基(也称作杂芳基)包括例如5-20元杂芳基，5-15元杂芳基、5-10元杂芳基或5-8元杂芳基等。所述杂环基可任选地被一个或多个选自卤素、羟基、氨基、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、3-8元环烷基、3-8元脂杂环基、6-15元芳基和5-15元杂芳基的取代基取代。具体的实例包括但不限于环氧乙烷基、氧代环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、哌啶基、四氢吡喃基、吗啉基、硫吗啉基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、吡啶基、吡喃基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、吲哚基或嘌呤基等。

本发明所用术语“卤素”是指氟、氯、溴以及碘。

本发明所用术语“一个或多个”是指一个或两个以上，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。

本发明所用术语“光学异构体”包括本发明式1化合物的所有可能的光学异构体形式(例如对映异构体、非对映异构体等)。

本发明式1化合物或其药学可接受的盐还可以形成溶剂化物，例如水合 物、醇合物等，一般来说，与药学可接受的溶剂如水、乙醇等形成的溶剂合物形式与非溶剂合物形式相当。

本发明式i化合物还可以是前药或可在体内代谢变化后释放出所述活性成分的形式。选择和制备适当的前药衍生物是本领域技术人员公知技术。

本文所用术语“有效量”是指足以实现所需治疗效果的量，例如，实现减轻与待治疗疾病相关的症状的量。

本文所用的术语“治疗”目的是减轻或消除所针对的疾病状态或病症。如果受试者按照本文所述方法接受了治疗量的化合物、其光学异构体或其药学上可接受的盐或其药物组合物，该受试者一种或多种指征和症状表现出可观察到的和/或可检测出的降低或改善，则受试者被成功地“治疗”了。还应当理解，所述的疾病状态或病症的治疗的不仅包括完全地治疗，还包括未达到完全地治疗，但实现了一些生物学或医学相关的结果。

本文所用术语“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物、其光学异构体或其药学上可接受的盐，以及药学可接受的载体或赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。这里所述的载体包括但不限于：离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白如人血白蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘油，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶态氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜂蜡，羊毛脂。所述赋形剂是指在药物制剂中除主药以外的附加物。其性质稳定，与主药无配伍禁忌，不产生副作用，不影响疗效，在常温下不易变形、干裂、霉变、虫蛀、对人体无害、无生理作用，不与主药产生化学或物理作用，不影响主药的含量测定等。如片剂中的黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂；中药丸剂中的酒、醋、药汁等；半固体制剂软膏剂、霜剂中的基质部分；液体制剂中的防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂等均可称为赋形剂。

本发明的化合物、其光学异构体、其溶剂合物或其药学上可接受的盐可以通过以下途径给药：胃肠外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、真 皮内、经皮、直肠、颅内、腹膜内、鼻内、肌内途径或作为吸入剂。所述组合物可以任选地与在治疗各种疾病中至少有一定效果的其它试剂联合给药。

本发明的化合物、其光学异构体或其药学上可接受的盐可根据给药途径配成各种适宜的剂型。

当口服用药时，本发明化合物可制成任意口服可接受的制剂形式，包括但不限于片剂、胶囊、水溶液或水悬浮液。其中，片剂使用的载体一般包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入润滑剂如硬脂酸镁。胶囊制剂使用的稀释剂一般包括乳糖和干燥玉米淀粉。水悬浮液制剂则通常是将活性成分与适宜的乳化剂和悬浮剂混合使用。任选地，以上口服制剂形式中还可加入一些甜味剂、芳香剂或着色剂。

当皮肤局部施用时，本发明化合物可制成适当的软膏、洗剂或霜剂制剂形式，其中将活性成分悬浮或溶解于一种或多种载体中。软膏制剂可使用的载体包括但不限于：矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧化乙烯、聚氧化丙烯、乳化蜡和水；洗剂或霜剂可使用的载体包括但不限于：矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、吐温60、十六烷酯蜡、十六碳烯芳醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。

本发明化合物还可以无菌注射制剂形式用药，包括无菌注射水或油悬浮液或无菌注射溶液。其中，可使用的载体和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌的非挥发油也可用作溶剂或悬浮介质，如单甘油酯或二甘油酯。

本发明的药物制剂包括药学上可实施的任何制剂，例如口服制剂、肠胃外给药制剂等。

在本发明的实施方案中，进行合适的体外或体内测定来确定本发明药物组合物的效果以及给药是否适用于治疗个体所患疾病或医学疾病状态。这些测定的实例在下文非限制性实施例结合具体疾病或医学治疗进行了描述。通常，足以实现预防或治疗效果的本发明组合物的有效量为约0.001mg/千克体重/天至约10,000mg/千克体重/天。合适的情况下，剂量为约0.01mg/千克体重/天至约1000mg/千克体重/天。剂量范围可以为每天、每两天或每三天约0.01至1000mg/kg宿主体重，更通常为0.1至500mg/kg宿主体重。示例性 的治疗方案为每两天一次或每周一次或每月一次给药。通常多次给予所述试剂，单次剂量之间的间隔可以是每天、每周、每月或每年。或者，可以以缓释制剂的形式给予所述试剂，在这种情况下，需要较少的给药频率。剂量和频率根据试剂在受试者中的半衰期而不同。也可以根据是预防性处理还是治疗性处理而不同。在预防性应用中，以相对低频率的间隔长期给予相对低的剂量。在治疗性应用中，有时需要以相对短的间隔给予相对高的剂量，直至疾病的进展被延缓或停止，并优选地直至个体表现出疾病症状的部分或完全改善，在此之后，可以给予患者预防方案。

发明的有益效果

本发明通过对槐定碱11位和12位进行改造修饰得到一类结构新颖的具有优异抗肿瘤活性的化合物，例如对肝癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、宫颈癌、卵巢癌、淋巴瘤、神经胶质瘤、脑胶质瘤和黑色素瘤具有较好的活性。在本发明的一个实施方案中，本发明的化合物对肝癌具有与一线抗肿瘤药物(例如拓扑替康或紫杉醇)相当甚至更好的治疗效果。

附图说明

图1为腹腔给药后，溶剂对照组、多柔比星组和待测化合物组中裸鼠瘤体积变化曲线；

图2为腹腔给药后，溶剂对照组、多柔比星组和待测化合物组中裸鼠瘤体重变化曲线。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

一、本发明化合物的合成

实施例112-n-对氯苄基槐定醛(q08)的合成

步骤一：将槐定碱(4.96g,20mmol)均匀分散于50ml6nhcl水溶液中，回流反应4小时，tlc检测原料消失后，停止反应，减压蒸干溶剂得黄色油状物，加入50ml无水甲醇，室温搅拌两小时，tlc检测反应完全，减压蒸干溶剂，得白色固体，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得到白色固体z0a。

步骤二：将上述白色固体z0a(2.81g,10.0mmol)悬浮于50ml1,2-二氯乙烷中，加入三乙胺(2.8ml,20.0mmol)，搅拌至溶解，加入对氯苯甲醛(2.1g,15.0mmol)，回流2小时后，缓慢加入三乙酰基硼氢化钠(3.16g,15.0mmol)，继续回流至tlc检测反应完全，冷至室温后，依次用20ml水，20ml饱和食盐水洗涤，有机层蒸干后，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得白色固体z08。

步骤三：取四氢铝锂(0.5g,12.0mmol)悬浮于50ml无水四氢呋喃中，将z08(1.60g，4.0mmol)的四氢呋喃溶液15ml，缓慢加入上述体系中，室温反应至tlc检测原料消失，冰浴条件下依次缓慢加入0.5ml水，0.5ml15％naoh水溶液1.5ml淬灭反应体系，室温搅拌0.5小时后过滤，减压蒸干滤液后，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得黄色油状物，加入10ml3n盐酸乙醚溶液酸化过滤得黄色固体c08。

步骤四：氮气保护下，向干燥250ml三颈瓶中加入100ml无水二氯甲烷，冷至-78℃，依次缓慢滴加草酰氯(1.0ml,12mmol)和二甲基亚砜(1.5ml,20mmol)，低温搅拌5分钟后，将c08(3.7g,10mmol)的二氯甲烷溶液 20ml，缓慢注射到上述反应体系中，继续在-78℃反应半小时后，加入三乙胺(5.6ml,40mmol)，室温搅拌半小时后，依次用50ml水，50ml饱和食盐水洗涤，减压蒸干有机相，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得黄色粘稠固体12-n-对氯苄基槐定醛q08。

实施例212-n-对氯苄基-4’-(3,4,5-三甲氧基苯基)槐定胺(a08a)的合成

将q08(1.1g,3.0mmol)溶于50ml无水甲醇中，加入3,4,5-三甲氧基苯胺(0.8g,4.5mmol)，回流4小时后，缓慢加入氰基硼氢化钠(0.9g,4.5mmol)后，继续回流4小时，冷至室温后，减压蒸干反应体系，加入50ml二氯甲烷后，依次用30ml水，30ml饱和氯化铵溶液洗涤，减压蒸干有机相，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得白色固体(1.1g,67％)。熔点：77-79℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ7.43–7.25(m,4h),5.86(s,2h),3.70(s,6h),3.62–3.54(m,1h),3.53(s,3h),3.50–3.44(m,1h),3.09–2.63(m,6h),2.50–2.37(m,3h),2.30–2.12(m,1h),2.13–1.84(m,3h),1.81–1.60(m,3h),1.61–1.43(m,6h),1.44–1.34(m,1h),1.30–1.11(m,3h),1.11–0.88(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ153.9,146.3(2),139.7(2),131.5,130.4,130.2,128.9(2),128.5(2),90.3,64.1,60.6,58.6(2),57.7,56.0,54.2,51.1,45.4,43.6,37.8,30.2,29.5,26.9,25.5,23.1,23.1,19.1；hrms:calcdforc31h44n3o3cl[m+h]⁺,542.3144,found,542.3147.

实施例312-n-对氯苄基-4’-(n-吗啉基)槐定亚胺(a08b)的合成

将q08(1.1g,3.0mmol)溶于50ml无水甲醇中，加入4-氨基吗啉(0.43ml,4.5mmol)，回流4小时后，冷至室温，减压蒸干反应体系，加入50ml二氯甲烷后，依次用30ml水，30ml饱和氯化铵溶液洗涤，减压蒸干有机相，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得白色固体(1.0g, 74％)。熔点：59-61℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ7.38–7.30(m,4h),6.93(t,j＝5.2hz,1h),3.73–3.65(m,4h),3.61–3.44(m,2h),3.01–2.89(m,1h),2.88–2.75(m,6h),2.71–2.60(m,1h),2.50–2.35(m,2h),2.25–1.87(m,6h),1.82–1.62(m,3h),1.58–1.37(m,5h),1.31–1.21(m,2h),1.17–1.10(m,1h),1.01(dd,j＝20.5,11.7hz,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ140.4,139.7,131.4,130.2(2),128.5(2),66.1(2),63.9,58.5,57.7,54.4,52.5(2),52.4,51.6,45.4,38.0,32.9,29.8,26.8,26.1,25.5,22.6,19.2；hrms:calcdforc26h39n4ocl[m+h]⁺,459.2885；found,459.2885.

实施例412-n-对氯苄基-4’-(2,3-亚甲二氧基苄基)槐定胺(a08c)的合成

参考实施例3中方法，将q08与2,3,-亚甲二氧基苄胺按该条件反应，并做相应的后处理，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得黄色油状物，加入10ml3n盐酸乙醚溶液酸化过滤得白色固体(收率：66％)。熔点：62-64℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.55(s,1h),11.14(s,1h),9.36(s,1h),9.25(s,1h),8.17–7.87(m,2h),7.70–7.47(m,2h),6.97–6.79(m,2h),6.78–6.62(m,1h),5.99(s,2h),4.51–4.34(m,1h),4.34–4.04(m,1h),3.92–3.71(m,1h),3.59(s,2h),3.41–3.11(m,5h),3.11–2.75(m,6h),2.76–2.55(m,2h),2.04–1.59(m,7h),1.56–1.17(m,4h),1.01–0.76(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ147.8,146.4,133.1,131.5,129.4(2),129.2(2),122.1,109.5,108.8,101.3,61.0,56.4,55.5,55.0,52.0,48.4,46.7,44.6,33.9,31.5,26.0,25.3,23.1,22.3,22.0,21.7,19.0,17.6；hrms:calcdforc30h40n3o2cl[m+h]⁺,510.2881,found,510.2883.

实施例512-n-对氯苄基-4’-(3,4,5-三甲氧基苄基)槐定胺盐酸盐(a08d)的合成

参考实施例3中方法，将q08与3,4,5-三甲氧基苄胺按该条件反应，并做相应的后处理，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得黄色油状物，加入10ml3n盐酸乙醚溶液酸化过滤得白色固体(收率：71％)。熔点：65-67℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.59(s,1h),11.17(s,1h),9.68(s,1h),9.57(s,1h),7.97(d,j＝8.2hz,2h),7.53(d,j＝8.3hz,2h),7.08(s,2h),4.50–4.19(m,2h),4.12–3.89(m,5h),3.80(s,6h),3.67(s,3h),3.32–2.93(m,6h),2.93–2.79(m,2h),2.79–2.54(m,2h),2.03–1.55(m,9h),1.60–1.19(m,3h),1.00–0.74(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ153.2(2),138.2,134.7(2),133.1(2),129.4,129.2,127.9,108.3(2),65.3,61.1,60.4,56.6,55.5,55.0,52.0,50.6,46.3,44.6,33.9,26.0,25.3,25.2,23.2,22.3,22.1,21.7,17.6,15.6；hrms:calcdforc32h46n3o3cl.3hcl[m-3hcl+h]⁺,556.3300；found,556.3306.

实施例612-n-对氯苄基-4’-(4-氯-3-三氟甲基苯基)槐定胺(a08e)的合成

参考实施例3中方法，将q08与4-氯-3-三氟甲基苯胺按该条件反应，并做相应的后处理，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得黄色油状物，加入10ml3n盐酸乙醚溶液酸化过滤得白色固体(收率：68％)。熔点：71-73℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.55(s,1h),11.12(s,1h),10.93(s,1h),8.12–7.77(m,2h),7.01(d,j＝8.7hz,3h),6.91–6.74(m,2h),4.52–4.34(m,1h),4.34–4.12(m,1h),3.88–3.69(m,1h),3.65–3.25(m,4h),3.24–2.76(m,3h),2.76–2.55(m,3h),2.43–1.98(m,2h),1.99–1.29(m,8h),1.29–1.14(m,2h),1.03–0.79(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ153.9,146.3,139.7,131.5,130.4,130.2,128.9(2),128.5(2),90.3,64.1,60.6,58.6,57.7,56.0,54.2,51.5,45.4,43.6,37.8,30.2,29.5,26.9,25.5,25.4,23.1,23.1,19.1；hrms:calcdforc29h36n3cl2f3[m+h]⁺,554.2311,found,554.2313.

实施例712-n-对氯苄基-4’-(2,3-亚甲二氧基苯乙基)槐定胺盐酸盐(a08f)的合成

参考实施例3中方法，将q08与2,3-亚甲二氧基苯乙胺按该条件反应，并做相应的后处理，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得黄色油状物，加入10ml3n盐酸乙醚溶液酸化过滤得白色固体(收率：68％)。熔点：71-73℃；¹hnmr(500mhz,dmso)δ11.56(s,1h),11.15(s,1h),9.56(s,1h),9.47(s,1h),7.97(d,j＝8.2hz,2h),7.53(d,j＝8.4hz,2h),7.29(d,j＝1.3hz,1h),7.08(dd,j＝8.0,1.4hz,1h),6.96(d,j＝7.9hz,1h),6.06(s,2h),4.48–4.12(m,5h),4.10–3.91(m,2h),3.87–3.69(m,1h),3.33–2.92(m,6h),2.92–2.77(m,2h),2.76–2.55(m,3h),2.01–1.56(m,9h),1.54–1.20(m,3h),0.95–0.77(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ148.1,147.7,133.1,129.4,129.2,125.9(2),124.6(2),110.9,108.6,101.7,65.3,63.3,61.1,55.5,55.0,52.0,50.0,49.0,46.0,44.6,33.8,26.0,25.2,23.2,22.3,22.1,21.7,17.6,15.6；hrms:calcdforc31h42n3o2cl.3hcl[m-3hcl+h]⁺,524.3038；found,524.3032.

实施例812-n-对氯苄基-4’-(2,3-亚甲二氧基苯基)槐定胺盐酸盐(a08g)的合成

参考实施例3中方法，将q08与2,3-亚甲二氧基苯胺按该条件反应，并做相应的后处理，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得黄色油状物，加入10ml3n盐酸乙醚溶液酸化过滤得白色固体(收率：71％)。熔点：72-74℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.47(s,1h),11.46(s,1h),11.31(s,1h),11.06(s,1h),7.95(d,j＝8.0hz,2h),7.52(d,j＝8.3hz,2h),7.31–7.22(m,1h),7.14(d,j＝8.2hz,1h),7.06(d,j＝8.3hz,1h),6.09(s,2h),4.38(d,j＝11.3hz,1h),4.31–4.22(m,1h),3.78(d,j＝11.1hz,1h),3.34–3.02(m,7h),3.01–2.77(m,2h),2.74–2.66(m,1h),2.64–2.53(m,1h),2.50–2.35(m,1h),2.03–1.56(m,9h),1.54–1.23(m,3h),1.00–0.75(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ148.3,147.7,134.7,133.1,129.4(2),129.2(2),116.9,109.0,104.6,102.5,65.3,63.3,61.2,55.5,55.0,52.05,50.8,49.0,44.6,33.9,26.1,25.1,23.0,22.3,22.1,21.7,17.6；hrms:calcdforc29h38n3o2cl.3hcl[m-3hcl+h]⁺,496.2725,found,496.2723.

实施例912-n-对氯苄基-4’-(n-甲基哌嗪基)槐定胺盐酸盐(a08h)的合成

参考实施例3中方法，将q08与n-甲基哌嗪按该条件反应，并做相应的后处理，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得黄色油状物，加入10ml3n盐酸乙醚溶液酸化过滤得白色固体(收率：65％)。熔点：73-75℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ12.25(s,1h),12.15(s,1h),11.61(s,1h),11.16(s,1h),7.99(d,j＝7.9hz,2h),7.57(d,j＝7.9hz,2h),5.07(s,3h),4.50–4.16(m,1h),3.92–3.68(m,3h),3.66–3.35(m,5h),3.34–2.75(m,11h),2.73–2.53(m,2h),2.21–1.58(m,9h),1.60–1.23(m,3h),1.16–0.99(m,1h),1.01–0.80(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ134.7,133.1,129.5(2),129.2(2),65.3,60.9,55.5,55.0,52.1(2),51.9(2),49.9,48.5,44.6,42.5,26.1,25.1,23.0,22.8,22.3,21.9,21.7,17.6,15.6；hrms:calcdforc27h43n4cl.4hcl[m-4hcl+h]⁺,459.3249；found,459.3249.

实施例1012-n-对氯苯甲酰基-4’-(2,3-亚甲二氧基苄基)槐定胺盐酸盐(xa08c)的合成

可参考如下合成路线：

步骤1：将z0a(2.81g,10.0mmol)悬浮于50ml二氯甲烷中，加入碳酸钾粉末(1.4ml,10.0mmol)，搅拌至溶解，加入二碳酸二叔丁酯(2.3ml,15.0mmol)，室温反应至tlc检测反应完全，依次用50ml水、50ml饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥后过滤，减压蒸干，得12-n-boc-槐定酸甲酯粗品(2.53g)。

步骤2：将12-n-boc-槐定酸甲酯溶于100ml无水thf中，冰浴下缓慢加入lialh4(0.50g,12.5mmol)，室温反应至tlc检测原料消失，冰浴下依次缓慢加入0.5ml水，0.5ml15％naoh水溶液1.5ml淬灭反应体系，室温搅拌0.5小时后过滤，减压蒸干后加二氯甲烷溶解，依次用50ml水、50ml饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤，减压蒸干，得12-n-boc-槐定醇粗品(2.17g)。

步骤3：氮气保护下，向干燥250ml三颈瓶中加入100ml无水二氯甲烷，冷至-78℃，依次缓慢滴加草酰氯(1.0ml,12mmol)和二甲基亚砜(1.5ml,20mmol)，低温搅拌5分钟后，将12-n-boc-槐定醇(3.5g,10mmol)的二氯甲烷溶液20ml缓慢注射到上述反应体系中，继续在-78℃反应半小时后，加入三乙胺(5.6ml,40mmol)，室温搅拌半小时后，依次用50ml水，50ml饱和食盐水洗涤，减压蒸干有机相，得12-n-boc-槐定醛粗品3.3g。

步骤4：将12-n-boc-槐定醛(0.35g,1.0mmol)溶于50ml无水甲醇中， 加入2,3-亚甲二氧基苄胺(0.2ml,1.5mmol)，回流4小时后，缓慢加入氰基硼氢化钠(03g,1.5mmol)后，继续回流4小时，冷至室温后，减压蒸干反应体系，加入50ml二氯甲烷后，依次用20ml水，20ml饱和氯化铵溶液洗涤，减压蒸干有机相，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得12-n-boc-槐定胺(0.15g，43％)。

步骤5：将10ml12-n-boc-槐定胺(0.15g，0.43mmol)的二氧六环溶液加到20ml10％naco3水溶液中，冰浴下缓慢加入氯甲酸-9-芴基甲酯，室温反应至tlc检测原料消失，50ml二氯甲烷提取两次后，减压蒸干得黄色粘稠状固体。

步骤6：将步骤三中所得的固体溶于30ml二氯甲烷中，加入10ml三氟乙酸，室温反应至tlc检测原料消失，ph调至7-8，水洗后，无水硫酸钠干燥，过滤后，加入对氯苯甲酰氯(170ul,1.5mmol)，室温反应至tlc检测原料消失，依次用10ml水，10ml饱和食盐水洗涤，减压蒸干后，加入10ml哌啶，室温搅拌1h，减压蒸干，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得黄色油状物，加入10ml3n盐酸乙醚溶液酸化过滤得白色固体(123mg,23％)。熔点：87-89℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.26(s,1h),9.39(s,1h),9.33(s,1h),7.53–7.44(m,3h),7.42–7.31(m,1h),7.29–7.18(m,1h),7.08–7.00(m,1h),7.01–6.89(m,1h),6.05(s,2h),4.09–3.96(m,2h),3.68–3.20(m,8h),3.23–3.03(m,2h),3.01–2.73(m,2h),2.45–2.31(m,1h),1.88–1.51(m,8h),1.43–1.34(m,1h),1.38–1.08(m,4h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ169.4,148.1,131.6,129.2,129.1,129.0,125.9(2),124.6(2),110.8,108.7,101.7,63.6,58.4,58.3,53.6,50.0,46.3,44.4,43.0,40.9,36.6,29.1,28.1,25.6,25.5,23.0,22.6,22.5,22.2,17.8；hrms:calcdforc30h38n3o3cl.3hcl[m-3hcl+h]⁺,524.2674；found,524.2674.

实施例1112-n-对氯苯甲酰基-4’-(3,4,5-三甲氧基苄基)槐定胺(xa08d)的合成

参考实施例10的方法，将步骤4中的2,3-亚甲二氧基苄胺替换为3,4,5- 三甲氧基苄胺，并做相应的后处理，终产品以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得白色固体(收率：71％)。熔点：72-74℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ7.65–7.17(m,4h),7.05–6.76(m,2h),5.77(s,1h),3.67(s,6h),3.57–3.38(m,4h),3.37–3.20(m,3h),3.17(s,3h),3.14–2.78(m,5h),2.44–2.06(m,3h),1.98–1.50(m,7h),1.47–1.29(m,3h),1.27–1.07(m,3h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ169.3(2),153.7(2),135.5,135.4,134.5,134.3,129.2,129.1(2),129.0(2),60.5,58.4,56.6,53.7,52.2,49.0,46.5,44.4,40.8,36.6,30.0,29.2,28.1,27.3,25.6,23.39,23.0,22.2,17.8.

实施例1212-n-对氯苯甲酰基-4’-(2,3-亚甲二氧基苯乙基)槐定胺(xa08f)的合成

参考实施例10的方法，将步骤4中的2,3-亚甲二氧基苄胺替换为2,3-亚甲二氧基苯乙胺按该条件反应，并做相应的后处理，终产品以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得白色固体(收率：71％)。熔点：72-74℃；¹hnmr(500mhz,dmso)δ7.58–7.25(m,4h),6.96–6.80(m,2h),6.77–6.59(m,1h),5.99(s,2h),3.77–3.56(m,2h),3.54–3.32(m,6h),3.21–2.77(m,11h),2.44–2.07(m,1h),2.03–1.48(m,7h),1.47–1.04(m,4h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ169.4,147.8,146.4,135.4,134.5,131.5(2),129.2(2),122.1,109.4,108.8,101.3,72.6,66.8,60.5,58.4,53.6,49.03,48.3,46.9,39.0,36.6,31.5,29.4,28.17,25.1,25.8,23.6,22.4,17.8；hrms:calcdforc31h40n3o3cl[m+h]⁺,538.2831；found,538.2830.

实施例1312-n-对氯苯磺酰基槐定醛(hxq08)的合成

步骤a：将z0a(2.81g,10.0mmol)悬浮于50ml二氯甲烷中，加入碳酸钾粉末(1.4ml,10.0mmol)，搅拌至溶解，加入对氯苯磺酰氯(2.6g,15.0mmol)，室温反应8小时，tlc检测原料消失，依次用20ml水，20ml饱和食盐水洗涤，有机层蒸干后，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得白色固体hxz08。

步骤b：取四氢铝锂(0.5g,12.0mmol)悬浮于50ml无水四氢呋喃中，将hdz08(1.82g，4.0mmol)的四氢呋喃溶液15ml，缓慢加入上述体系中，室温反应至tlc检测原料消失，冰浴条件下依次缓慢加入0.5ml水，0.5ml15％naoh水溶液1.5ml淬灭反应体系，室温搅拌0.5小时后过滤，减压蒸干滤液后，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得黄色油状物hdc08。

步骤c：氮气保护下，向干燥250ml三颈瓶中加入100ml无水二氯甲烷，冷至-78℃，依次缓慢滴加草酰氯(1.0ml,12mmol)和二甲基亚砜(1.5ml,20mmol)，低温搅拌5分钟后，将hdc08(4.2g,10mmol)的二氯甲烷溶液20ml，缓慢注射到上述反应体系中，继续在-78℃反应半小时后，加入三乙胺(5.6ml,40mmol)，室温搅拌半小时后，依次用50ml水，50ml饱和食盐水洗涤，减压蒸干有机相，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得黄色粘稠固体12-n-对氯苯磺酰基槐定醛hxq08。

实施例1412-n-对氯苯磺酰基-4’-(2,3-亚甲二氧基苄基)槐定胺(hxa08c)的合成

将hxq08(1.2g,3.0mmol)溶于50ml无水甲醇中，加入2,3-亚甲二氧基苄胺(0.6ml,4.5mmol)，回流4小时后，缓慢加入氰基硼氢化钠(0.9g,4.5mmol)后，继续回流4小时，冷至室温后，减压蒸干反应体系，加入50ml二氯甲烷后，依次用30ml水，30ml饱和氯化铵溶液洗涤，减压蒸干有机相，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得白色固体(1.0g,61％)。熔点：87-89℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ7.87–7.74(m,2h),7.71–7.60(m,2h),7.11–7.01(m,1h),6.96–6.84(m,2h),6.02(s,2h),3.89–3.73(m,2h),3.73–3.62(m,1h),3.53–3.45(m,1h),2.97–2.71(m,4h),2.60–2.51(m,2h),2.47–2.33(m,1h),2.03–1.91(m,1h),1.79–1.67(m,2h),1.66–1.34(m,6h),1.33–0.98(m,8h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ147.7,147.2,140.4,137.7,129.9(2),128.9(2),123.1,109.8,108.5,101.4,59.3,57.6,53.9,51.4,47.3,45.1,45.0,37.6,29.3,28.4,27.3,26.6,25.3,24.4,24.2,18.7,15.6；hrms:calcdforc29h38n3o4cls[m+h]⁺,560.2344；found,560.2372.

实施例1512-n-对氯苯磺酰基-4’-(3,4,5-三甲氧基苄基)槐定胺(hxa08d)的合成

参考实施例14的方法，将hxq08与3,4,5-三甲氧基苄胺按该条件反应，并做相应的后处理，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得白色固体(收率：65％)。熔点：83-85℃；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.88–7.68(m,2h),7.69–7.53(m,2h),6.68(s,2h),3.76(s,6h),3.69–3.64(m,3h),3.63(s,3h),3.52–3.27(m,2h),2.84–2.62(m,4h),2.32(d,j＝10.5hz,1h),2.05–1.83(m,1h),1.81–1.48(m,5h),1.48–0.97(m,12h)；¹³cnmr(100mhz,dmso-d6)δ153.1(2),140.5,137.7,136.6,135.8,129.8(2),128.9(2),105.7(2),60.4,59.5,57.6,56.2(2),54.2,53.2,48.62,45.3,45.1,38.0,29.6,29.0,28.9,26.4,25.8,24.8,24.6,18.9；hrms:calcdforc31h44n3o5cls[m+h]⁺, 606.2763；found,606.2786.

实施例1612-n-对氯苯磺酰基-4’-(2,3-亚甲二氧基苯乙基)槐定胺(hxa08f)的合成

参考实施例14的方法，将hxq08与2,3-亚甲二氧基苯乙胺按该条件反应，并做相应的后处理，以二氯甲烷/甲醇为流动相，经硅胶柱层析分离纯化，得白色固体(收率：67％)。熔点：82-84℃；¹hnmr(500mhz,dmso)δ7.81(d,j＝8.6hz,2h),7.67(d,j＝8.6hz,2h),6.91–6.79(m,2h),6.74–6.61(m,1h),5.98(s,2h),3.66(t,j＝7.2hz,1h),3.53–3.44(m,1h),2.96–2.86(m,2h),2.86–2.70(m,6h),2.63(t,j＝7.4hz,2h),2.39–2.25(m,1h),2.03–1.82(m,1h),1.80–1.51(m,5h),1.51–1.37(m,3h),1.33–1.14(m,6h),1.12–0.95(m,3h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ147.7,146.1,140.5,137.7,129.9(2),128.9(2),122.0,109.4,108.6,101.2,65.4,59.4,57.6,54.1,49.6,47.9,45.2,45.0,37.8,33.2,29.3,27.1,26.5,25.6,24.7,24.2,18.8,15.6；hrms:calcdforc30h40n3o4cls[m+h]⁺,574.2500；found,574.2526.

实验例1本发明化合物对体外细胞的抑制活性测定(ic50)

待测化合物：本申请实施例化合物；

拓扑替康：购于中国药品食品检定院；

紫杉醇：购于中国药品食品检定院；

用dmso将待测化合物配置成30mg/ml溶液，加入pbs配置成所需的五个梯度浓度，在96孔板上以4﹡10³的密度接种处于对数生长期的hepg2细胞(购于中国科学院上海生命科学研究院)，贴壁生长24h后加药，每个化合物设3个复孔，并设dmso溶媒对照孔和无细胞调零孔。于37℃、5％co2条件下培养48h，每孔加入20μl5mg/mlmtt溶液，继续培养4h，吸出孔内培养液后，每孔加入dmso液150μl，将培养板置于微孔板振荡器上振荡10分钟，酶标仪测定各孔光吸收，测定波长为492nm。根据各孔od值计算药物对细胞增殖抑制率。计算公式为抑制率(％)＝(1-化合物od492/对 照od492)×100。将各浓度梯度的抑制率数据导入sigmaplot软件，计算ic50值。

表1槐定胺类衍生物抗肝癌hepg2细胞活性结果

实验例2本发明化合物的体内药效评价

实验用雌性balb/c小鼠(购于中国医学科学院实验动物研究所)，将1×10⁷人肝癌细胞hepg2细胞(购于中国科学院上海生命科学研究院)用pbs配置成0.2ml细胞悬液，无菌条件下在动物右侧腋窝皮下接种肿瘤。接种后三周脱颈处死，剥离肿瘤表层组织，剪碎成2mm×2mm瘤块，接种于18-22g实验用balb/c裸鼠右侧腋窝皮下，每组8只共3组：阳性药物对照组(dox，多柔比星(购于中国药品食品检定院))、溶剂对照组(生理盐水)和待测化合物组(化合物a08c)。接种肿瘤后72小时，a08c与多柔比星用0.9％生理盐水溶解，分别配置成0.25mg/ml和0.1mg/ml的溶液，腹腔给药量为 0.2ml/20g，对照组注射生理盐水，每四天称量体重，测量瘤块直径并计算瘤体积(瘤体积＝1/2×长径×短径²)。接种后18天结束实验，称体重，处死动物，剥取肿瘤并称重。实验结果见图1和图2。

尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员应当理解，根据已经公开的所有教导，可以对本发明的细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。