含有米糠多酚的抗肺癌保健品的制作方法

本发明属于保健品领域，具体的涉及一种具有抗肺癌功能的含有米糠多酚的保健品。

背景技术：

肺癌是我国乃至世界发病率最高的恶性肿瘤,已成为人类癌症主要死亡原因之一。肺癌的治疗有外科治疗、放射治疗、化学疗法和免疫疗法等。大多数化疗药物,无论单独还是联合,对肺癌疗效均不佳，且存在较大的副作用，因此,寻求新的且副作用小的化疗药物备受关注。从植物中开发抗肿瘤药物,是国内外抗肿瘤新药开发的一个热点。现代医学研究发现多酚类化合物具有较强的抗肿瘤生物活性,体内外实验研究均表明多酚类化合物对肺癌不同阶段都具有明显的抑制作用。中药是祖国医学用来防治疾病的有力武器，与化学合成药物相比，中药除了具有取材方便、价格低廉和毒副作用小等优点外，更重要的是，在减轻临床症状，提高生存质量，防止复发转移，延长生存期，预防肿瘤，提高患者免疫力，增强放、化疗敏感性，减轻放、化疗不良反应等很多方面发挥着重要作用。因此随着社会的进步，生产力的发展，现代人越来越把注意力从化合成药转向天然药，希望从天然药物中开发出更为安全有效的新药以替代前者，从而减少药源疾病的发生。

技术实现要素：

本发明目的是以我国广泛种植的禾本科粮食作物水稻的加工副产物米糠出发，制备米糠多酚和其他中药提取物混合，提供一种抗肺癌的天然保健品。

本发明采用的技术方案是：

含有米糠多酚的抗肺癌保健品，由以下原料按重量百分比组成：

米糠多酚50-70％，黄精提取物5-10％，夏枯草提取物5-10％，

青蒿提取物5-10％，桑白皮提取物5-10％，白花蛇舌草提取物5-10％。

所述含有米糠多酚的抗肺癌保健品，所述米糠多酚的制备方法如下：

1)纤维素酶酶解提取：料液比按质量比1:10-1:30，将米糠粉末溶于水，纤维素酶加入量为120-180u/g，进行热水浸提，控制温度为50-60℃，ph范围值5.0-6.0，酶解时间为1-2h，离心，过滤，得纤维素酶酶解提取液备用，沉淀物a继续进行乙醇辅助提取；

2)乙醇辅助提取：料液比按质量比1:10-1:30，将沉淀物a溶于乙醇，乙醇体积分数为50-70％，提取时间为2-3h，离心，过滤，得乙醇辅助提取液备用，沉淀物b继续进行超声浸提；

3)超声浸提：料液比按质量比1:10-1:30，将沉淀物b溶于乙醇，乙醇体积分数为50-70％，超声波功率为160-200w，超声时间为20-30min，抽滤，得超声浸提提取液备用；

4)合并纤维素酶酶解提取液、乙醇辅助提取液和超声浸提提取液，将总提取液旋转蒸发浓缩，滤纸初过滤后，用滤膜进行超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得到粗米糠多酚干粉。

所述含有米糠多酚的抗肺癌保健品，所述黄精提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的黄精固体粉末；分别按质量比1:10比例称取黄精固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得黄精提取物。

所述含有米糠多酚的抗肺癌保健品，所述夏枯草提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的夏枯草固体粉末；分别按质量比1:10比例称取夏枯草固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得夏枯草提取物。

所述的含有米糠多酚的抗肺癌保健品，所述青蒿提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的青蒿固体粉末；分别按质量比1:10比例称取青蒿固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得青蒿提取物。

所述的含有米糠多酚的抗肺癌保健品，所述的桑白皮提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的桑白皮固体粉末；分别按质量比1:10比例称取桑白皮固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得桑白皮提取物。

所述的含有米糠多酚的抗肺癌保健品，所述的白花蛇舌草提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的白花蛇舌草固体粉末；分别按质量比1:10比例称取白花蛇舌草固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得白花蛇舌草提取物。

本发明的有益效果是：采用水稻加工副产物米糠粉末提取的多酚作为活性物质，制备抗肺癌保健品或药品，来源广泛，安全性高，生产成本低，而且服用和携带十分的方便，吸收快速且效果好，因此拥有十分广阔市场前景。

本发明原料丰富，组方科学，易生产制备，成本低，效果好，创新之处是将米糠多酚作为抗肺癌的核心功能性原料，提出的用于治疗肺癌的中药组合物，配伍合理，形成具有抗肺癌的多酚、中草药混合保健品。本发明通过对人体外肺癌细胞的实验研究，发现米糠多酚的组合物对体外肿瘤细胞具有较好的抑制作用，对于肺癌的防治有着非常显著的效果，不仅可以避免过多的化学合成药物造成的毒副作用，也使得米糠多酚组合物具有更广阔的发展前景。

附图说明

图1是米糠多酚组合物对人肺癌细胞株973细胞生长影响。

图2是米糠多酚组合物抑制973细胞集落形成的集落试验结果。

图3是米糠多酚组合物抑制973细胞迁移试验结果。

具体实施方式

实施例1含有米糠多酚的抗肺癌保健品

(一)米糠多酚的制备

采用纤维素酶酶解—乙醇浸提—超声波分步法的工艺组合提取米糠多酚，步骤如下：

1)纤维素酶酶解：将米糠去除杂质，干燥，经粉碎机粉碎，过60目筛，制成米糠粉末。料液比按质量比1:20，将米糠粉末溶于水，纤维素酶加入量为150u/g，进行热水浸提，控制温度为50℃，ph5.0，酶解时间为2h，4000r/min进行离心10min，过滤，得纤维素酶酶解提取液备用，沉淀物a继续进行乙醇浸提；

2)乙醇辅助提取：料液比按质量比1：20，将沉淀物a溶于乙醇，乙醇体积分数为60％，提取时间为2h，离心，过滤，得乙醇辅助提取液备用，沉淀物b继续进行超声提取；

3)超声浸提：料液比按质量比1:20，将沉淀物b溶于乙醇，乙醇体积分数为60％，超声波功率为160w，超声时间为30min，抽滤，得超声浸提提取液备用；

4)合并纤维素酶酶解提取液、乙醇辅助提取液和超声浸提提取液，提取液旋转蒸发浓缩，滤纸初过滤后，用滤膜进行超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得到粗米糠多酚干粉。

(二)黄精提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的黄精固体粉末；按质量比1:10比例称取黄精固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得黄精提取物。

(三)夏枯草提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的夏枯草固体粉末；按质量比1:10比例称取夏枯草固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得夏枯草提取物。

(四)青蒿提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的青蒿固体粉末；按质量比1:10比例称取青蒿固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得青蒿提取物。

(五)桑白皮提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的桑白皮固体粉末；按质量比1:10比例称取桑白皮固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得桑白皮提取物。

(六)白花蛇舌草提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的白花蛇舌草固体粉末；按质量比1:10比例称取白花蛇舌草固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得白花蛇舌草提取物。

(七)含有米糠多酚的抗肺癌保健品组合物(简称米糠多酚组合物)

由以下原料按重量百分比组成：

米糠多酚60％,黄精提取物5％,夏枯草提取物10％，

青蒿提取物5％，桑白皮提取物10％，白花蛇舌草提取物10％。

(八)mtt实验

本实施例使用人肺癌细胞株973细胞，采用mtt法检测米糠多酚组合物体外抗癌活性，实验步骤如下：

1)取对数生长期的肺癌细胞系(973)细胞接种于96孔板，过夜培养使其贴壁；

2)米糠多酚组合物的浓度(6.25、12.5和25mg/ml)；

3)在24h后加入mtt(5mg/ml)；

4)然后将96孔板放在37℃恒温培养箱中继续培养4h；

5)处理结束后，将mtt吸出，加入150μl的dmso，使甲瓒晶体完全溶解；

6)通过测量每个孔在490nm处的吸光度值来评估973细胞的增值；结果如图1所示。

如图1所示，不同浓度的米糠多酚组合物(6.25、12.5和25mg/ml)分别孵育973细胞24h，然后利用mtt比色法检测。结果显示，处理肺癌细胞一段时间后，浓度为12.5、25mg/ml的米糠多酚组合物均表现出显著的抑制作用，浓度为25mg/ml组抑制率在24h后达到了79.5％，结果表明，米糠多酚组合物在体外可抑制人肺癌细胞生长。

(九)集落形成实验

不同的处理组的肺癌细胞以每孔1000个细胞的密度接种于孔板上，培养过夜使其贴壁。分别加入12.5和25mg/ml的米糠多酚组合物培养10d，吸出培养基，每孔用pbs仔细洗两次。使用甲醇将集落固定20min，然后用0.5％结晶紫染色15min，用清水冲洗并拍照，结果如图2所示。

如图2所示，米糠多酚组合物抑制肺癌细胞集落形成的集落试验结果。米糠多酚组合物孵育973细胞一段时间后，集落数量与对照组相比明显降低。24h后浓度为12.5mg/ml时能够减少肺癌细胞形成的集落，浓度为25mg/ml时集落的减少极显著。

(十)transwell实验

肿瘤细胞迁移实验采用直径为6.5mm的transwell小室，其中内孔大小为8.0μm。将肺癌细胞血清饥饿24h，然后使用胰蛋白酶消化，计数，并用无血清1640培养基重悬。大约1×10⁵细胞被接种到上层小室，下层小室加入含有10％胎牛血清的1640培养基。细胞放在37℃培养24h。培养后，上层小室内表面的细胞被迁移。将穿过小室的细胞固定和染色并在显微镜下统计。每个实验组做三个平行取其平均值，结果如图3所示。

由图3可见，肿瘤细胞的一个重要特点是他们具有入侵和迁移到远端器官的能力，这是几乎所有癌症死亡的主要原因，利用transwell实验分析米糠多酚组合物对973细胞的迁移影响。如图3所示，与对照组相比，米糠多酚组合物处理组973细胞跨膜迁移的数量大幅下降，结果显示米糠多酚组合物可以显著抑制973细胞迁移。

实施例2含有米糠多酚的抗肺癌保健品

含有米糠多酚的抗肺癌保健品，由以下原料按重量百分比组成：

米糠多酚70％，黄精提取物10％，夏枯草提取物5％，

青蒿提取物5％，桑白皮提取物5％,白花蛇舌草提取物5％。

实施例3含有米糠多酚的抗肺癌保健品

含有米糠多酚的抗肺癌保健品，由以下原料按重量百分比组成：

米糠多酚50％,黄精提取物10％，夏枯草提取物10％，

青蒿提取物10％，桑白皮提取物10％,白花蛇舌草提取物10％。