抗微生物药的制作方法

专利名称：：抗微生物药的制作方法抗微生物药相关申请本申请要求澳大利亚临时申请第2005900247号的优先权，该申请内容在此引作参考。领域本发明涉及抗,鼓生物药。具体而言，本发明涉及广镨抗微生物药。背景抵抗抗微生物药的微生物正成为全世界的越来越大的问题。例如，金黄色葡萄玉求菌(Stap/^/ococcwsawret^)的耐曱氧西林菌才朱(MRSA，也称作"金葡菌(goldenstaph)")现在抗多种抗生素，最近的分离抹对诸如庆大霉素、氯霉素、夫西地酸和利福平等抗生素表现出日益增加的抗性。目前用于经验治疗只有万古霉素可依靠。非常担忧万古霉素使用的日益增加将选择出MRSA的抗万古霉素菌抹，以致在不久的将来可能不再有任何抗医院葡萄球菌的有效抗生素治疗。因此，鉴别可供选择的抗微生物药尤其是广谱抗微生物药的研究正在进行中。医院是获得性MRSA感染为严重问题的环境的实例。这些感染使患者处于危险之中，增加护理费用，减少了可用的床位数。在其它环境例如牙科工作室、实验室、食物制备区、学校等等中，防止或尽可能减少这样的细菌连同其它微生物包括真菌和病毒的生长也很重要。医院和要求高水平卫生的这些其它环境有很多减少这些微生物扩散的策略。在进入手术室之前，用消毒液例如氯己定或聚维酮碘局部处理患者。用这些局部抗菌剂处理MRSA携带者，或在严重情况下，用抗生素例如万古霉素处理。给予万古霉素花费大，因此，花费较少而又有效的可口服递送代替方法将受欢迎。不能依赖已知的局部抗菌剂来提供足够的防止这样的细菌的保护，尤其是当更具抗性的菌株出现时。它们也不能以其它表现形式例如口服片剂来施用。这样的局部抗菌剂也不能有效防止或抑制医院和其它这样的环境中存在的其它微生物种类的生长。尽管这些环境表面可用灭菌剂和消毒剂(包括呈次氯酸/次氯酸根离子形式的含氯漂白剂)洗涤，但这些药物腐蚀性很强，所以需要其它可选择的方法。因此，需要适用于这些和相似应用的新型抗微生物药和/或抗菌药。为了能够全面理解本发明，本说明书所引用的所有参考文献，包括任何专利或专利申请，在此引入本文作为参考。然而，这样的参考文献不应被理解为承认任何这些文献构成本领域、澳大利亚或任何其它国家的常识的部分。参考文献中的讨论陈述了其作者的主张，本申请人保留质疑所引用文献的正确度和相关性的权利。概述在第一方面，本发明提供防止或抑制细菌生长的方法，该方法包括让包含C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯和薛品烯-4-醇或其衍生物的组合物与表面接触的步骤。本申请人业已发现，属于C8-C24多不饱和脂肪酸的a-亚麻酸，能有效防止或抑制细菌生长。这种纯a-亚麻酸的活性与和a-亚麻酸紧密相关的多不饱和脂肪酸相似，如下面进一步所阐述。业已发现a-亚麻酸有效防止或抑制革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的生长，已知其具有这种抗各种各样微生物的活性，则其为有效广谱抗微生物药。本申请人业已发现，当脂肪酸或酯与碎品烯-4-醇或其衍生物(即另一种碎品烯衍生物)联合使用时，达到协同抗微生物活性。此外，这样的组合物具有抗更广范围的微生物包括真菌的活性。事实上，试验结果表明，含有这两种组分的组合物的活性大约10倍于仅含有其中一种组分的组合物。在一定时间范围内，所述表面在与C8-C24多不饱和脂肪酸或酯组合物接触之前或之后，适当地与包含碎品烯-4-醇或其衍生物的组合物接触，以获得协同效应。优选表面与包含C8-C24多不饱和脂肪酸或酯和辟品烯-4-醇或其衍生物二者的组合物接触，以便接触时间同步。尽管不希望受理论的束缚，但相信C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯通过破坏脂肪酸代谢而在微生物内部发挥其抗微生物作用，而目测观察提示萜品烯-4-醇和其衍生物攻击微生物的细胞壁。因此，这些活性药物通过不同机制起作用，因此降低特定微生物对两种药物都产生抗性的机会。此外，C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯和路品烯-4-醇(或衍生物)两者都为挥发性药物，因此，不太可能在长时间内与微生物保持接触，藉此进一步降低微生物对该等药物产生抗性的机会。根据第二方面，本发明也4是供包含C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯和辟品烯-4-醇或其衍生物的组合物。优选C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯为a-亚麻酸，最优选a-亚麻酸呈基本纯形式(如下所定义)。优选该组合物包含辟品烯-4-醇。优选辟品烯-4-醇呈基本纯形式(如下所定义)。组合物可呈各种各样的表现形式，包括沐浴露、表面喷雾剂、纸巾、局部用软膏或鼻用软膏、片剂或其它形式。第三方面，本发明提供防止或抑制革兰氏阳性和革兰氏阴性两种细菌在表面生长的方法，该方法包括让包含C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯和薛品燁-4-醇或其衍生物的组合物与表面接触的步骤。第四方面，本发明提供C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯和碎品烯-4-醇或其衍生物在制造用于防止或抑制细菌生长的组合物中的用途。优选该组合物为用于防止或抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌生长的组合物。第五方面，本发明提供预防或治疗由细菌引起的疾病或病症的方法，该方法包括将包含C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯、辟品烯-4-醇或其衍生物和载体的组合物给予需要治疗的受治疗者。给药方式优选局部给药。本发明组合物可进一步包含一种或多种其它活性药物。然而，在某些实施方案中，存在的仅有的活性药物为C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯和辟品烯-4-醇或其衍生物。简要说明图1为与a-亚麻酸接触30分钟之后微生物数量的生物体计数的对数减少的图。图2图示与一个本发明实施方案的组合物接触的微生物数量的生物体计数减少％。图3为表示抑制多种微生物生长所需的a-亚麻酸最小浓度的图。详述在本说明书中，除了由于表达语言或必要的暗示上下文要求另有所指外，"包含，，或"包括，，以包括在内的(inclusive)含义来使用，即在本发明各种实施方案中，指定所述特征存在但并不排除另外的特征的存在或增加。除非上下文明确表明另有所指，否则本文所用单数形式"a"、"an"和"所述"包括相应提及物的复数。因此，举例而言，提及"一种病毒，，时包括多种病毒。同样，提及"碎品烯-4-醇(aperpinene-4-o1)或其衍生物"时包括在该类别范围内的超过一种化合物的混合物。本发明人业已发现，包含C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯和薛品烯-4-醇或其衍生物的组合物具有广谙抗微生物活性，包括抗革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌(包括需氧菌、厌氧菌和兼性需氧菌)活性。这种广谱活性为该组合物提供广阔的应用。也业已发现该组合物可以不同形式使用，其进一步增强了该组合物的应用。业已出乎意料地发现，当C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯与碎品烯-4-醇或其衍生物一起给予时，提供协同活性。另外，该联合组合物具有抗更广范围微生物(包括上述革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌和真菌)的活性。C8-C24多不饱和脂肪酸上面说明了C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯的优选形式为a-亚麻酸。a-亚麻酸在亚麻籽和其它油类中以相应的甘油酯形式存在，通常作为几种C8-C24多不饱和脂肪酸组分之一存在于此类油中。a-亚麻酸为在9、12和15位含有三个双键(C18:3)的C18脂肪酸。尽管所述组合物在其最主要方面可包含C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯的混合物，^f旦其优选不以亚麻籽油或水解亚麻籽油的组分存在。优选其在组合物中以纯化形式或萃取形式使用。因此，本发明申请使用的组合物优选包含以基本上不含其它C8-C24多不饱和脂肪酸水平的单C8-C24多不饱和脂肪酸。该组合物最优选包含a-亚麻酸，其基本上不含任何其它C8-C24单不饱和或多不饱和脂肪酸或其酯。所谓基本上不含，意指这样的组分(組合物中基本上不含的组分)不以高于存在的单脂肪酸例如a-亚麻酸的20%(基于重量对重量)的水平存在。C8-C24多不饱和脂肪酸，指含有不饱和度至少为2和8-24个碳原子的烃链的直链或支链烯基羧酸。优选该脂肪酸为C18脂肪酸，更优选其不饱和度为3。优选脂肪酸为顺式脂肪酸。这样的脂肪酸的酯包括能由这样的脂肪酸与任何脂肪族或芳香族有机醇反应而产生的化合物类别。要注意这样的产物不必是这种反应的直接产物，其可从不同的原料形成或衍生。醇例如可为多元醇，例如二元醇或三元醇，并可含有任何其它官能团。烷基酯最为典型。路品烯-4-醇和其书f生物C8-C24多不饱和脂肪酸与碎品烯-4-醇或其衍生物联合使用。碎品烯_4-醇为茶树油的组分。已知商业上可得到的一种来自茶树;由的辟品烯-4-醇混合物，其商标为Melaleucol。萜品烯-4-醇的一种主要异构体的结构如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>术语碎品烯-4-醇包括单一异构体(例如上面阐明的异构体)或任何其它单独的异构体和异构体混合物，包括外消旋混合物。从茶树油得到的碎品烯-4-醇提取物通常呈比例为1.8-2.4:1的(+)和(-)对映异构体混合物形式。辟品烯_4-醇为含有3-氬4-羟基的碎品烯衍生物。本申请中包括的辟品烯-4-醇衍生物为其它碎品烯衍生物，其中一个或两个双键被饱和，该化合物被一个或多个选自以下的取代基取代氢、烷基、烯基、炔基、芳基、卣代、卣代烷基、卣代烯基、卣代炔基、卣代芳基、幾基、烷氧基、烯氧基、芳氧基、千氧基、卣代烷氧基、卣代烯氧基、卣代芳氧基、硝基、硝基烷基、硝基烯基、硝基炔基、硝基芳基、硝基杂环基、氨基、烷氨基、二烷基氨基、烯基氨基、炔基氨基、芳氨基、二芳基氨基、苄基氨基、二苄基氨基、酰基、烯基酰基、炔基酰基、芳酰基、酰氨基、二酰基氨基、酰氧基、烷基磺酰氧基、芳基磺酰氧基、杂环基、杂环氧基、杂环氨基、卣代杂环基、烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、烷氧羰基、芳氧羰基、巯基、烷硫基、苯曱基硫基、酰基硫基和含磷基团。碎品烯-4-醇为从碎品烯饱和C3-4双键的一端至另一端含有氢和羟基取代基的衍生物。然而，优选使用基本纯形式的辟品烯-4-醇(包括其异构体混合物)。措辞"基本纯形式"意即，萜品烯-4-醇或其衍生物以基本上不含茶树油的其它主要组分的形式使用。在本文中基本上意即组合物中使用的薛品烯-4-醇含有不超过20%(重量比重量)的茶树油的非碎品烯-4-醇组分。因此，该水平包括纯碎品烯-4-醇提取物和保留小量茶树油杂质的提取物。当然，可合成产生碎品烯-4-醇或其衍生物，在这种情况下预期不会存在茶树油的任何非薛品烯-4-醇组分。组合物的组分本发明使用的含有C8-C24多不饱和脂肪酸的组合物优选包含0.1%-50%重量的C8-C24多不々包和脂肪酸。更优选该组合物包含O.l-20%w/w的浓度或以该浓度应用，其视组合物的形式和其给药途径而定。在低于0.1%水平时，对于商业可接受产品而言，组合物的效力不如所期需的高。当水平高于50%C8-C24多不饱和脂肪酸(例如a-亚麻酸)时，可能产生皮肤刺激，或很难处理。通常对于适于直接应用于皮肤的形式而言，C8-C24多不饱和脂肪酸的水平将低于该水平--通常为不超过10%。对于包含0.1%-5%的C8-C24多不饱和脂肪酸，尤其是a-亚麻酸的组合物，可达到抗微生物特性、使用容易程度和花费之间的良好平衡。组合物优选包含0.1%和5%之间的碎品烯-4-醇或其衍生物，更优选0.25%和5%之间的辟品烯-4-醇或其衍生物。优选碎品烯-4-醇本身呈基本纯形式以所给水平存在于组合物中。对于包含C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯(优选a-亚麻酸以基本纯形式)连同碎品烯-4-醇或其衍生物(优选碎品烯-4-醇以基本纯形式)二者的组合物，组合物中这两种组分的比例为1:5和5:1之间有利，更优选在1:2和2:1之间。本发明组合物通常进一步包含载体。载体可视表现形式为药用'载体，或其可为更普通的载体。用于制备药物组合物的药用载体为本领域所熟知，其如教科书例》口Remington'sPharmaceuticalSciences,20thEdition,Williams&Wilkins,Pennsylvania,USA所陈述。载体将根据给药途径而定，而且本领域技术人员将易于决定各种具体情况的最适配方。不同表现形式的实例为洗剂、混悬剂、溶液剂、喷雾剂、乳剂、糊剂、泡沫、洗眼水、软膏剂、液体肥皂、霜剂、固体肥皂、漱口剂、软锭剂或糖锭剂、凝胶剂、纸巾、生发油、洗发精或胶冻。在本发明组合物呈表面喷雾剂形式情况下，载体宜为水，组合物可进一步包含防腐剂例如苯曱醇(例如以0.1-5wt。/。的量)、助溶剂例如丙二醇(例如以l-20wt。/。的量)和表面活性剂例如CremophorRh40(例如以l-20wt。/o的量)。在本发明组合物呈洗剂或沐浴露形式情况下，在合适的乳化剂存在下，其可包含存于水的C8-C24多不饱和脂肪酸或酯和任选的萜品烯_4-醇的乳剂。合适的乳化剂实例为十六醇十八醇混合物、Emulgade、SLEX(Texapon)、甜菜碱衍生物例如表面活性剂的EmpigenB—range和Tween(例如Tween80ICIChemicals)。Tween80为包括聚氧乙烯20山梨坦单油酸酯的表面活性剂。组合物可进一步包含软化剂和芳香齐'K包括油例如甜杏仁油)、防腐剂(例如以例如0.1-10%水平的苯甲醇)和湿润剂和/或软化剂和/或赋形剂(例如以例如0.5-10%水平的丙三醇和以0.1-20%水平的环甲硅油)。当本发明组合物呈湿纸巾形式时，其可包含上述载体、防腐剂、乳化剂、软化剂和/或芳香剂。当本发明组合物呈软膏剂形式时，其可包含向其中加入活性成分的常规软膏基质。软膏基质可为石蜡，例如软石蜡，或软石蜡和液体石蜡组合。也可使用其它软膏基质，例如聚亚烷基二醇(例如聚乙二醇或聚丙二醇)基质。软膏组合物的其它可能组分包括乳化蜡(例如以1-40%的量，优选5-40%)和防腐剂。当本发明组合物呈液体肥皂形式时，可用任何已知液体肥皂。优选的液体肥鬼为基于椰子油的液体肥急。可将液体肥急基质的pH调整为适于局部使用的pH。当本发明组合物呈霜剂形式时，可使用任何合适的霜剂基质。优选的霜剂基质为sorbolene霜。也可使用其它霜剂基质。当组合物呈固体肥皂形式时，优选使用合成的肥^基质。优选合成的肥皂基质是因为其性质更适于衰弱皮肤的持续施用，并且其pH更易于控制。适于本发明组合物使用的合成肥皂基质实例包括可自Witco(USA)得到的SynbaseA和SynbaseBW、来自Dove(USA)的SynbaseCommercialBar、来自Dermactif(比利时)的Tensia和来自Zetesap(德国)的pH6-7的SyndetBase。作为这样的肥皂基质的成分实例，SyndbaseBW包含肉豆蔻酰氨基MEA磺基琥讀酸二钠(disodiummyristanidoMEAsulphosuccinate)、石更月旨酸、椰油基幾基乙石黄酸钠(sodiumcocylisethianate)、石蜡、PEG75、硬脂酸锌和水。当组合物呈糖锭剂形式时，其可包含矫味基质，例如蔗糖和阿拉伯树胶或西黄蓍胶。当组合物呈洗眼水形式时，其可包含合适的无菌水性或非水性溶媒。添加剂例如緩冲剂、防腐剂(包括杀细菌剂和杀真菌剂，例如乙酸苯汞或硝酸苯汞、苯扎氯胺或氯己定)和增稠剂(例如羟丙曱纤维素)也可包括在内。除了上列任一种成分外，组合物可进一步包含其它作用剂。举例而言，例如粘合剂、甜味剂、稠化剂、矫味剂、崩解剂、包衣剂、防腐剂、润滑剂和/或延迟剂等作用剂。这些合适的实例为本领域熟知。已知C18-C24多不饱和脂肪酸易于被空气氧化。本发明人通过经验业已发现本发明组合物具有至少2年的有效期。其可通过将抗氧化剂加入到组合物中来延长。本发明组合物可包括或与例如治疗剂、抗菌剂和/或抗细菌剂等作用剂共同使用。"治疗剂"为用于治疗疾病或病症的作用剂。合适的治疗剂为抗生素，例如万古霉素、青霉素和相关抗生素、曱氧西林、庆大霉素、氯霉素、夫西地酸、利福平等等。其它治疗剂包括外科移植物、假体和导管。合适的抗菌剂或抗细菌剂包括Triclosan、Sapoderm、氯己定、聚维酮碘、溴化十六烷基三曱铵、六氯酚、基于次氯酸盐的抗菌剂或其混合物。其它作用剂可以高达组合物总量的20%重量的量存在于组合物中，更优选达至15%重量。所述其它作用剂的量将视该作用剂的活性而定；然而，本领i或技术人员将易于决定合适的量。本发明组合物优选具有4.8-7.5范围内的pH。更优选pH在5.8-7.0范围内。在这些pH范围内，可施用到皮肤的组合物形式在施用后对受治疗者的皮肤或粘膜几乎不产生刺激。方法本发明提供防止或抑制微生物生长的方法。本文所用"防止"意即杀死微生物。相比之下，"抑制"意即降低或限制微生物生长。举例而言，抑菌剂抑制细菌生长但不杀死细菌，而杀菌剂杀死细菌。本发明组合物可被描述为抗菌药。当调配用于施用于表面或用于于水性溶剂中稀释时，该组合物可被描述为消毒剂。当调配用于施用于受治疗者包括人类或非人类动物时，该组合物可被描述为抗菌剂。"生长"意即微生物的大小和/或数目增加。可通过本领域已知任何方法测定孩i生物生长，包括直接法和间接法两种。举例而言，直接法包括例如通过系列稀释和平板计数来测量微生物数目。间接法包括从培养物的浊度或代谢活性来估测微生物的数目。或者，可用培养物的干重来测定微生物生长。"樣i生物"(microorganism或microbe)为大小在显孩t4竟下方可见的任何生物体。微生物包括细菌、病毒、真菌(例如酵母和霉菌)、藻类等等。"细菌"为单细胞生物体，其为细胞壁包围，其遗传物质并不由核膜包围。细菌可为革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌、需氧菌、厌氧菌或兼性厌氧菌，可为几种形状之一，例如棒状(杆菌)、球形或椭园形(球菌)、螺旋形(螺菌)、星形或方形。各种细菌可形成对、成链、成串或其它群。根据本发明其生长可被防止或抑制的细菌实例包括大肠杆菌(E^c/2eWc/n'aco//)、肺炎克雷"f白氏菌(A7e6w'e〃a/"ewwo"/ae)、单斗亥纟田月包增生李斯特氏菌(丄&ten'awo"ocytoge"&s)、曱氧西林耐药菌、浅黄奈瑟氏菌(iVe/5^en'"yZavesce"力、4同纟录#1单月包菌(尸化wcfomo"as1aen/g7'"os1(3)、索尔-畐对命沙门氏菌(》Sa/wo"￡〃aja^/br力、霍沙门氏菌(5^/附o"e〃ac/zo/erae)、粘质沙雷氏菌(5ferra""marcaycms)、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌(&<3//2>"/ococcz^ep/dem^)、粪链球菌(iSVeptococcus々eca叫、尿链球菌(》，ococcwsy^ec/謂)和粘膜炎莫拉氏菌(Moraxe〃acata^r/^//"。表1提供了这些细菌的某些特性。表1.<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>"病毒，，非常小，需要电子显微镜来观察，其为非细胞性。病毒粒子含有由仅一种类型核酸(DNA或RNA)组成的核心，核心由蛋白质衣壳包围。衣壳可为脂类嚢膜围绕。病毒仅能在其它生物体细胞内繁殖。"真菌"为其细胞具有含细胞遗传物质并由核膜围绕的明显核的微生物。真菌可为单细胞或多细胞。单细胞形式的真菌为酵母。当提及真菌时，酵母为真菌的优选形式。酵母为大于细菌的椭圓形微生物。最典型的真菌为霉菌。霉菌形成菌丝体，其为缠绕在一起的长长的分枝细丝。适用于本发明的真菌实例包括黑曲霉(Am'ger)和白色念玉朱菌(C.cf/Z)/cara)。通过让包含与碎品烯-4-醇或其衍生物联合的C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯的组合物，与微生物或微生物可与其接触的表面接触，或通过将该组合物给予受治疗者，可防止或抑制微生物生长。该接触可以任何合适的方式，可对微生物具有直接或间接影响。举例而言，组合物本身可影响微生物生长。或者，组合物可降低微生物对表面的附着，或影响微生物培养物的另外组分，藉此影响微生物生长。表面可为4壬<可合适的表面，例如人体或动物体，或无生命的物体。通过将组合物局部和/或口服给予需要治疗的对象，可合适地让微生物与该组合物接触。或者，可将组合物施用于包含微生物或怀疑或有包含该微生物的风险的无生命表面。术语"表面，，以其最广泛的意义来使用，不应理解为暗示任何具体的物理尺度。可以任何合适途径给予组合物，本领域技术人员会易于决定用于待治疗病症的最适途径和剂量。剂量将由主治医生或兽医来判断，其应视待治疗的病症的特性和状态、待治疗对象的年龄和一般健康状况、给药途径和可能业已给予的早先的治疗而定。该组合物可周期性或重复给予有需要的受治疗者，可给予至实际或可能的感染部位。举例而言，若外科伤口业已发生感染或希望防止其感染，则可在伤口上给予组合物，或将组合物给予至伤口和伤口周围。若鼻道可能发生或业已发生感染，或期望防止其感染，则将组合物给予至鼻道可能是合适的，该组合物可呈鼻用软膏或鼻喷雾剂形式。若咽喉业已发生感染，或期望防止其感染，则组合物可呈漱喉剂、糖锭剂或喷雾剂形式。合适的预防性治疗方案包括用组合物洗涤患者，任选在单独的抗菌剂治疗之后(视组合物的組分而定)。这可在定期或重复基础上进行。本发明组合物可呈沐浴露形式，或可在应用洗剂后敷上纱布。让组合物干燥。一天可重复多次该程序，一天3次为宜。也可应用鼻用软膏或喷雾剂。"疾病"是用于指任何偏离健康的通用术语，其由受治疗者所患。"病症"指机体机能或部分的机能异常。可由包含C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯的组合物预防或治疗的疾病或病症实例包括蜂窝织炎、坏死性皮下感染(例如坏死性筋膜炎)、脓肿、细菌感染、搔痒症、皮炎、湿渗、牛皮癣、痤疮、邦、褥瘙、痱子、皮力夫瑕疵、鱼鳞癣、癣和溃疡、真菌病、疱渗(即感冒疮、水痘和带状疱渗)和寄生虫感染。本发明方法也可用于改进干燥、易脱落、起皱、老化或光照损伤的皮肤的外观。其也可用于緩和或减轻疾病或病症的相关作用，例如疼痛、发痒、肿胀等等。"受治疗者"可为哺乳动物。哺乳动物可为人类，或可为家养动物或陪伴动物。尽管尤其设想本发明化合物适用于人类，但其也可应用于兽医用途，包括治疗陪伴动物(例如狗和猫)和家养动物(例如马、牛和羊)或动物园动物(例如非人类灵长类、猫科动物、犬科动物、牛科动物和有蹄类动物)。除非另外指出，否则本发明采用本领域技术人员能力范围内的常规化学和微生物学技术。这样的技术为技术人员所熟知，其在文献中有充分的解释。无疑应该理解，本发明并不限于本文所述具体的材料和方法，因为它们可改变。也应该理解，本文所用术语仅为了阐述具体实施方案，并非意欲限制本发明范围，本发明范围将仅由后附权利要求来限制。当表述数值范围时，无疑应该理解该范围包括范围的上限和下限，和介于这些上限和下限之间的所有数值。尽管与本文所述相似或等同的任何材料和方法可用于实施或测试本发明，但现在通过仅参考下面的非限制性实施例和附图来详细阐述优选的材料和方法。实施例1.a-亚麻酸的最小抑制浓度测定进行以下试验测定抑制三种细菌菌株(其为期需用抗微生物组合物抑制的代表性微生物)生长所需的最小a-亚麻酸浓度。试马全结果表明，相应组合物具有低至0.1%的低水平。按以下方案稀释90%的a-亚麻酸样品，以测试抗细菌的最小有效浓度。用SigmaAldrich的大豆胰蛋白胨肉汤将a-亚麻酸稀释为表2A-2F中所示的稀释度。用大约106个该类试验微生物接种各个稀释样品，在37。C温育48小时。试验微生物为金黄色葡萄球菌、霍乱沙门氏菌、MRSA、大肠杆菌、化脓性链球菌(S."ogwes)和粘膜炎莫拉氏菌。包括作为对照的未接种的肉汤。温育期后检查各个肉汤的细菌生长，通过肉汤的浊度来表示。将各肉汤样品进行继代培养以确证试验孩i生物的存在。达到抑制试验微生物的最高系列稀释度被认为是最小抑制浓度(MIC)。每一试验微生物的各个系列稀释液的浊度示于表2A、2B、2C、2D、2E和2F中。表2A试验微生物金黄色葡萄球菌ATCC6538<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>2%溶液<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>实施例3.包含a-亚麻酸的组合物的抗微生物活性对实施例2的1%溶液进行试验以说明这样的溶液可有效防止革兰氏阳性和革兰氏阴性两种细菌的生长。用悬浮试验测试了1%a-亚麻酸溶液对MRSA(革兰氏阳性，兼性厌氧菌)、霍乱沙门氏菌(革兰氏阴性，需氧菌)和铜绿假单胞菌(革兰氏阴性，厌氧菌)的杀菌效果。按以下程序实施悬浮试验1.用标准平板计数技术测定包含1%a-亚麻酸和对照微生物培养物的各试验微生物培养物的起始微生物浓度。各个培养物的微生物浓度以cfb/mLi己录。2.在所期需的时间点，取出各培养物样品，用标准平板计数技术测定各培养物的微生物浓度。浓度以cfli/mL记录。3.通过将试验微生物随时间的cfli/mL差异和对照孩么生物培养物在同样时间内的cfii/mL差异进行比较，计算a-亚麻酸引起的杀菌。/。。每一试验使用新鲜细菌培养物和溶液，结果以二次重复试验的几何平均值来表示，如表3所示。表3a-亚麻酸的杀菌效果<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>注释:结果为二次重复试验的几何平均值。也对化脓性链球菌进行了试验。对该微生物的结果表明在30分钟内杀菌％为87.7%。进一步对大肠杆菌(革兰氏阴性)和粘膜炎莫拉氏菌(革兰氏阴性)进行了试验。这些结果和本实施例所试验的所有微生物的结果示于图1和2(用两种衡量标准一生物体计数对数减少和%减少)。实施例4.包含a-亚麻酸和碎品烯-4-醇的组合物将含有1%a-亚麻酸和1%薛品烯-4-醇的组合物制备为沐浴露、表面喷雾剂、外用软膏和鼻用软膏形式。组合物的组分概述于表4A、4B、4C和4D中。Melaleucol为商业上可得到的最少为99%纯度的碎品烯-4-醇，其具有1.8:1-2.4:1的手性+/-对映体比例。表4A沐浴露<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表4B表面喷雾剂<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表4C外用软膏<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表4D鼻用软膏<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>实施例5.包含a-亚麻酸和路品烯-4-醇的组合物的抗微生物活性对实施例4的组合物的抗微生物活性进行了试验。下面所示的结果表明，该组合物在防止革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌和真菌生长方面极为有效。在室温用实施例3所述悬浮试验测试所述组合物对以下生物体的抗微生物活性金黄色葡萄球菌大肠杆菌铜绿假单胞菌白色念珠菌黑曲霉浅黄奈瑟氏菌MRSA沐浴露的结果示于表5A和5B中。表5A不同接触时间的存活结果(cfu/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>表6A不同接触时间的存活结果(cfii/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>鼻用软膏结果示于表^7A和7B中。表7A不同接触时间的存活结果(cfii/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表8A不同接触时间的存活结果(cfli/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表8B不同接触时间的对数减少(Log1Q)<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>实施例6.a-亚麻酸和萜品烯-4-醇的协同活性用上面实施例3所概述的悬浮试验，测定单独的和联合的a-亚麻酸和碎品烯-4-醇的抗孩i生物活性。制备存于水的1%a-亚麻酸溶液，以测定该单独药物的活性。该溶液以溶液A表示。在与溶液A接触给定4妄触时间后的微生物回收率估测结果示于以下表9A中。制备存于水的1%萜品烯_4-醇(具体为Melaleucol),以测定该单独药物的活性。该溶液以溶液B表示。在与溶液B接触给定接触时间后的^t生物回收率估测结果示于以下表9B中。制备存于水的含P/。a-亚麻酸和1%萜品烯-4-醇(具体为Melaleucol)的组合溶液，以测定该组合的活性。该溶液以溶液c表示。在与溶液C接触给定接触时间后的微生物回收率估测结果示于以下表9C中(就存活的微生物回收率水平而言)和Log1Q减少。表9A与包含单独的P/。a-亚麻酸的溶液A组合物接触不同时间的回收率结果<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>CFU-菌落形成单位<=小于表9B与溶液B接触不同时间的回收率结果<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>CFU-菌落形成单位<=小于表9C与溶液C接触不同时间的回收率结果<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><=小于>=大于可观察到，a-亚麻酸和萜品烯4-醇二者为有效抗微生物药。此外，可观察到在01-亚麻酸和萜品烯-4_醇之间有协同抗微生物效果，因为在30分钟后观察到存活的铜绿假单胞菌减少2xlog1Q，相比之下，单用a-亚麻酸或萜品烯4-醇减少1xLog1Q。与各组分单用比较，这相当于抗微生物效果增加至10倍，大于从使用这两个组分的相加效应得到的2倍效果。对于本领域技术人员显而易见的是，尽管为了清楚和理解的目的，本发明业已以若干细节来阐明，但在不偏离本说明书所揭示的发明概念的范围的情况下，可对本文所述实施方案和方法进行各种^修改和改进。权利要求1.组合物，其包含C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯和辟品烯-4-醇或其衍生物。2.权利要求1的组合物，其中所述C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯为a-亚麻酸。3.权利要求2的组合物，其中所述a-亚麻酸呈基本纯形式。4.权利要求1到3中任一项的组合物，其中所述萜品烯-4-醇或其衍生物由萜品烯-4-醇构成。5.权利要求4的组合物，其中所述萜品烯-4-醇呈基本纯形式。6.权利要求1-5中任一项的组合物，其中所述组合物包含0.1%-50%重量的C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯。7.权利要求6的组合物，其中所述组合物包含浓度为0.1-20%w/w的C8-C24多不饱和脂肪酸。8.权利要求1-7中任一项的组合物，其中所述组合物包含0.1。/。-5%的所述辟品烯-4-醇或其衍生物。9.权利要求7的组合物，其中所述组合物包含0.25%-5%的所述碎品烯-4-醇或其衍生物。10.前述权利要求中任一项的组合物，其中所述C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯与萜品烯-4-醇或其衍生物的比例为1:5-5:1。11.权利要求10的组合物，其中所述比例为l:2-2:1。12.权利要求1-11中任一项的組合物，其中所述组合物呈洗剂、混悬剂、溶液剂、喷雾剂、乳剂、糊剂、泡沫、洗眼水、软膏剂、液体肥皂、霜剂、固体肥皂、漱口剂、软锭剂或糖锭剂、凝胶剂、纸巾、生发油、洗发剂或胶冻形式。13.权利要求12的组合物，其中所述组合物呈沐浴露、表面喷雾剂、纸巾、外用软膏或鼻用软膏形式。14.权利要求13的组合物，其中所述组合物包含0.1°/。-5%的C8-C24多不饱和脂肪酸和0.1%-5%的碎品烯-4-醇。15.前述权利要求中任一项的组合物，其中所述pH在4.8-7.5范围内。16.前述权利要求中任一项的组合物，其中所述组合物为消毒剂组合物。17.防止或抑制细菌生长的方法，所述方法包^"让包含C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯和碎品烯-4-醇或其衍生物的组合物与表面接触的步骤。18.权利要求17的方法，其中所述组合物如权利要求2-16中任一项所定义。19.权利要求17或18的方法，其中所述方法防止或抑制革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的生长。20.权利要求17-19中任一项的方法，其中所述方法防止或抑制耐曱氧西林金黄色葡萄球菌(&ap/^/ococcws的生长。21.C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯和碎品烯-4-醇或其衍生物在制备用于防止或抑制细菌生长的组合物中的用途。22.权利要求21的用途，其中所述组合物为用于防止或抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长的组合物。23.权利要求21或22的用途，其中所述C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯为a-亚麻酸。24.权利要求23的用途，其中所述a-亚麻酸呈基本纯形式。25.权利要求21-24中任一项的用途，其中所述碎品烯-4-醇或其衍生物由碎品烯-4-醇构成。26.权利要求25的用途，其中所述萜品烯-4-醇呈基本纯形式。27.权利要求21-26中任一项的用途，其中所述细菌为耐曱氧西林金黄色葡萄球菌。28.预防或治疗由细菌引起的疾病或病症的方法，所述方法包括将包含C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯、萜品烯-4-醇或其^^生物和载体的组合物给予有需要的受治疗者这一步骤。29.权利要求28的方法，其中所述组合物如权利要求2-16中任一项所述。30.权利要求28或29的方法，其中所述组合物局部给予。31.权利要求28-30中任一项的方法，其中所述方法预防或治疗由耐曱氧西林金黄色葡萄球菌引起的疾病或病症。全文摘要本发明提供包含诸如α-亚麻酸的C8-C24多不饱和脂肪酸或其酯和萜品烯-4-醇或其衍生物的组合物。所述组合物具有广谱抗菌组合物活性。文档编号A61K31/202GK101146526SQ200680008935公开日2008年3月19日申请日期2006年1月20日优先权日2005年1月20日发明者A·沃特斯基,D·E·伯德,F·帕勒莫,P·A·帕勒莫,R·哈丁,T·摩冈申请人:凯班股份有限公司