专利名称：：化疗药、il-2和任选的抗cd20抗体联用治疗淋巴瘤的方法
技术领域：
：本发明总地涉及治疗淋巴瘤的方法。具体说，本发明涉及用化疗药、IL-2和任选的抗CD20抗体联合治疗B细胞淋巴瘤的方法。发明背景白介素-2(IL-2)的天然杀伤细胞(NK)和T-细胞增殖和功能的有效剌激物(Morgan等(l976)Science193:1007-1011)。已证明，这种天然产生的淋巴因子单用或与淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)或肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)联用时对各种恶性肿瘤都有抗肿瘤活性(参见例如，Rosenberg等，TV./MM.(1987)316:889-897;Rosenberg,j朋.S，.(1988)208:121-135;Topalian等，JC//".0腳/.(1988)6:839-853;Rosenberg等，TV./Mo/.(1988)319:1676-1680;和Weber等，J.C//w.(1992),10:33-40)。用ChironCorporation,Emeryville,CA的市售IL-2制剂Proleukin在转移性黑色素瘤和肾细胞癌患者中显示了IL-2的抗肿瘤活性。包括淋巴瘤等其它疾病也似乎对IL-2治疗有反应(Gisselbrecht等，Blood(1994)83:2020-2022)。单克隆抗体逐渐成为选择用于治疗实体瘤如乳腺癌、以及治疗表达CD20细胞表面抗原的B细胞类型的淋巴瘤的方法。体外研究证明，CD20的单克隆抗体通过凋亡引起细胞死亡(Shan等，飾一998)91.:1644-1652)。其它研究报道，B细胞死亡主要由抗体依赖性细胞毒性(ADCC)介导。因为经由NK细胞、单核细胞、巨噬细胞和中性粒细胞介导的ADCC可能是抗CD20抗体的抗肿瘤活性的免疫基础，所以检测了与增强NK细胞功能的其它细胞因子联用。检测了细胞因子如IL-12、IL-15、IL-2KTNF-a、TNF-p、？IFN和IL-2的ADCC(独特的NK功能)增强活性。它们都显示出ADCC增强，但各物质与其特定毒性相关。参见例如，Rosenberg等，Sc/e"ce(1986)233:1318-1321;Gollob等，《/C//"/m^/.(1998)102:561-575。正在进行的与IL-2和单克隆抗体利妥昔单抗(Rituxar^;IDEC-C2B8;IDECPharmaceuticalsCorp.,加州圣地亚哥)联合用药研究显示出用这两种治疗剂改进了非霍奇金B细胞淋巴瘤患者的临床反应(美国专利公开20030185796;Gluck等，C//".C匿er版(2004).10:2253-2264)。利妥昔单抗是含有人IgGl和k恒定区与分离自鼠抗CD20单克隆抗体的鼠可变区IDEC-2B8的嵌合抗CD20单克隆抗体(Reff等，1994)83:435-445)。已证明，利妥昔单抗能有效治疗低-中级和高级非霍奇金淋巴瘤(NHL)(参见例如，Maloney等，5/ooJ(1994)84:2457-2466;McLaughlin等，/C/,k(9"co/.(1998)16:2825-2833;Maloney等，1997)90:2188-2195;Hai雨orth等，3W(2000)95:3052-3056;Colombat等，BW(2001)97:101-106;Coiffier等，BW(1998)92:1927-1932);Foran等，/C"".(9fzco/.(2000)18:317-324;Anderson等，B^c/zem.Soc.Thws.(1997)25:705-708;Vose等，^肌0"co/.(1999)辺:58a)。然而，30%-50%低级NHL患者对这种单克隆抗体没有临床反应(Hainsworth等，5/oot/(2000)95:3052-3056;Colombat等，S/oot/(2001)92:101-106)。虽然该作用的确切机制未知，但有证据表明利妥昔单抗的抗淋巴瘤作用部分由于补体介导的细胞毒作用(CMC)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)、细胞增殖抑制和最后直接诱导凋亡。非霍奇金淋巴瘤是在美国和欧洲的发病率逐年上升的一组淋巴性恶性肿瘤。低级和滤泡性淋巴瘤一般占所有NHL的40%。中级和高级NHL患者对化疗反应良好，而低级和滤泡性淋巴瘤难以治疗，这些患者用现有疗法难以治疗，或者治疗后复发。虽然大多数患者对初始化疗有反应，但疾病进程导致缓解期逐渐縮短，因此，显然需要新的NHL治疗方案(Coiffier等(2004)AnnHematol.83Suppl.l:S73-4;Winteretal.(2004)Hematology(Am.Soc.Hematol.Educ.Prog腿):203-220;Bendandietal.(2004)Ann.Oncol.15:703-ll)(Coiffier等(2004)*"//,to/.83增刊1:S73-4;Winter等(2004)//emcto/ogy04m.Soc.//emafo〖.Eofwc.Program):203陽220;Bendandi等(2004)颠.<9歸/.15:703-11)。因此，仍然需要其它创新方案来提高临床反应的持久性和在B细胞淋巴瘤如NHL中的总体肿瘤效力。发明概述本发明提供了治疗B细胞淋巴瘤，具体是NHL的安全有效方法。该方法利用联合治疗，包括采用一种或多种化疗药、IL-2和任选的抗CD20抗体。如本文实施例所示，这些治疗方案显著抑制了肿瘤生长，并优于采用单个CHOP成分、利妥昔单抗和CHOP以及无IL-2的利妥昔单抗。在一个方面，本发明提供了一种治疗B细胞淋巴瘤的方法，所述方法包括给予需要的对象治疗有效量的(a)—种或多种化疗药；(b)IL-2;和任选的(c)抗CD20抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，所述化疗药选自(a)环磷酰胺，(b)多柔比星，(c)长春新碱，(d)泼尼松和(e)环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松的组合。在一个实施方式中，所述化疗药含有环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松(CHOP)。在某些实施方式中，所述抗体是免疫球蛋白Gl(IgGl)单克隆抗体。在一个实施方式中，所述抗体是利妥昔单抗。在某些实施方式中，IL-2是重组产生的IL-2，该IL-2的氨基酸序列与人IL-2氨基酸序列的序列相同性至少约为70%，优选至少约为80%，更优选至少约为90%，最优选至少约为95%。在一个实施方式中，该IL-2是脱丙氨酰-l、丝氨酸-125人白介素-2(阿地白介素)。在某些实施方式中，将多种治疗有效剂量的IL-2和抗CD20抗体给予对象。在某些实施方式中，将多种治疗有效剂量的化疗药和抗CD20抗体给予对象。在某些实施方式中，给予化疗药和抗CD20抗体后给予多种治疗有效剂量的IL-2和抗CD20抗体。在某些实施方式中，将多种治疗有效剂量的化疗药和IL-2给予对象。在某些实施方式中，给予化疗药后给予多种治疗有效剂量的IL-2。在某些实施方式中，用足够时间将多种治疗有效剂量的IL-2给予对象，以影响免疫重建。在某些实施方式中，将多种治疗有效剂量的化疗药、抗CD20抗体和IL-2给予对象。在某些实施方式中，按照一周两次或一周三次的给药方案给予IL-2。在某些实施方式中，按照一周一次的给药方案给予抗CD20抗体。可皮下给予IL-2，可腹膜内或静脉内给予抗CD20抗体，可静脉内或口服给予化疗药。在某些实施方式中，本发明提供了治疗低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的方法。在一个实施方式中，所述方法包括给予需要的对象治疗有效量的(a)CHOP;(b)脱丙氨酰-1、丝氨酸-125人白介素-2(阿地白介素)；和任选的(c)利妥昔单抗。可将多种治疗有效剂量的CHOP、阿地白介素和/或利妥昔单抗给予对象。在某些实施方式中，按照一周两次或一周三次的给药方案给予阿地白介素。在一个实施方式中，按照一周一次的给药方案给予利妥昔单抗。可皮下给予阿地白介素，可腹膜内或静脉内给予利妥昔单抗，可静脉内或口服给予CHOP。本领域技术人员根据本文公开内容不难理解本发明的这些和其它实施方式。附图简要说明图1A-1D显示了经过所示治疗方案后人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型的平均肿瘤体积(mm3)。图2A-2C显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中各种治疗方案的时间与肿瘤进展(条件存活率)。图3显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中IL-2+利妥昔单抗对利妥昔单抗或IL-2或CHOP治疗对平均肿瘤体积(mm、的影响。图4显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中IL-2+利妥昔单抗对利妥昔单抗或IL-2或CHOP治疗对％条件存活率的影响。图5显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中IL-2+利妥昔单抗对CHOP+利妥昔单抗治疗对平均肿瘤体积(mm^的影响。图6显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中IL-2+利妥昔单抗对CHOP+利妥昔单抗治疗对。/。条件存活率的影响。图7显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中CHOP+利妥昔单抗对利妥昔单抗或CHOP治疗对平均肿瘤体积(mmS)的影响。图8显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中CHOP+利妥昔单抗对利妥昔单抗或CHOP治疗对％条件存活率的影响。图9显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中CHOP+利妥昔单抗(第8天)+IL-2(第15天)对CHOP+IL-2+利妥昔单抗(第8天)或CHOP+利妥昔单抗或IL-2+利妥昔单抗治疗对平均肿瘤体积(mm"的影响。图10显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中CHOP/利妥昔单抗+IL-2/利妥昔单抗对CHOP/IL-2/利妥昔单抗或CHOP/利妥昔单抗或IL-2/利妥昔单抗治疗对％条件存活率的影响。图11显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中在各种治疗方案联合治疗之前用IL-2预处理对平均肿瘤体积(mmS)的影响。图12显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中在各种治疗方案联合治疗之前用IL-2预处理对％条件存活率的影响。图13显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中各种治疗方案对平均体重的影响。图14显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中用IL-2(每周3次)和环磷酰胺(C)(第1天)联合治疗的影响。图15显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中用IL-2(每周3次)和多柔比星(H)(第1天)联合治疗的影响。图16显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中用IL-2(每周3次)和长春新碱(O)(第1天)联合治疗的影响。图17显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中用IL-2(每周3次)和泼尼松(P)(qdx5)联合治疗的影响。图18显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型中用IL-2(每周3次)和CHOP联合治疗的影响。图19显示了在人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型(肿瘤约为300mm3)中CHOP治疗对单核细胞和淋巴细胞群体的影响。在第1天给予CHOP,在第4天进行细胞计数。图20显示了在所示治疗方案后第15天获自人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型的阳性脾细胞的百分数。图21显示了在所示治疗方案后第15天获自人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型全血的NK细胞数量(绝对计数)。图22显示了在所示治疗方案后第15天获自人B细胞淋巴瘤(Daudi)的BALB/c裸小鼠模型全血的活化单核细胞数量(绝对计数)。图23显示CHOP+利妥昔单抗+IL-2治疗诱导运输到肿瘤中的免疫效应细胞增加。在第一天用单独给予或与利妥昔单抗(第1、8、15天10mg/kg)联用的载体(5。/0右旋糖)或CHOP治疗荷有s.c.Daudi肿瘤(300mm"的雌性BALB/c裸小鼠(6-8周龄)。治疗组也包括，CHOP-R后接载体(5。/。右旋糖)或IL-2(第8、10、12、15天1mg/kg);或联用IL-2/R。治疗后第15天，收集肿瘤并评价组织学和免疫组织化学特性。NK和单核细胞运输到肿瘤内图H&E染色(a-d);穿孔蛋白的免疫染色(e-h);F4/80(i-l)。所有附图的放大倍数均为400x，代表性数据，11=每组3-4只小鼠。图24显示了CHOP+利妥昔单抗+IL-2治疗诱导凋亡增加和强大的体内抗增殖肿瘤反应。在第1天用单独给予或与利妥昔单抗(第1、8、15天10mg/kg)联用的载体(5%右旋糖)或CHOP治疗荷有s.c.Daudi肿瘤(3(X)mmS)的雌性BALB/c裸小鼠(6-8周龄)。治疗组也包括CHOP+利妥昔单抗后接载体(5。/。右旋糖)或IL-2(第8、10、12、15天1mg/kg);或联用IL-2和利妥昔单抗。治疗后第15天，收集肿瘤并评价免疫组织化学特性。分别用切割的胱冬酶-3(a-d)和Ki-67(e-h)检测肿瘤细胞凋亡和增殖。所有附图的放大倍数均为400x，代表性数据，11=每组3-4只小鼠。图25描述了所有治疗的给药方案示意图。图26A和26B显示了在人Daudi淋巴瘤异种移植瘤模型中CHOP和IL-2和利妥昔单抗的联合治疗有协同作用。图26八显示了用载体("丄^1(^("國")、010+1-2(-□-)、CHOP+利妥昔单抗(-A-)、CHOP+IL-2+利妥昔单抗(i-)、CHOP+利妥昔单抗+IL陽2对CHOP+利妥昔单抗治疗的小组的肿瘤生长曲线；p<0.05。图26B显示了条件存活率的Kaplan-Meier曲线。条件存活率计算为各肿瘤的肿瘤体积达到1000mm3的时间。CHOP+利妥昔单抗+IL-2与CHOP+利妥昔单抗；p=0.0002。治疗组载体(-");利妥昔单抗(-A-);CHOP("■");CHOP+IL-2(-o);CHOP+利妥昔单抗(-A-);CHOP-利妥昔单抗+IL2(-i)。发明详述除非另有说明，本发明的实施将采用本领域技术人员己知的药理学、化学、生物化学、重组DNA技术和免疫学的常规方法。文献中详细解释了这些技术。参见例如，《癌症研究中的肿瘤模型》(TumorModelsinCancerResearch)(B.Teicher编，HumanaPress);《实验免疫学手册》(HandbookofExperimentalImmunology),第I-IV巻(D.M.Weir禾卩CC.Blackwell编，BlackwellScientificPublications);A丄.Lehninger，《生物化学》(Biochemistry)WorthPublishers,Inc.,当前版本)；Sambrook，等，《分子克隆实验室手册》(MolecularCloning:ALaboratoryManual)(第2版，1989);《酶学方法》(MethodsInEnzymology)(S.Colowick禾卩N.Kaplan编，AcademicPress,Inc.)。将本文引用的所有发表物、专利和专利申请(上述或下述)全文纳入本文作参考。I.定义在描述本发明的过程中，采用以下术语，它们的定义如下所述。必须注意，本说明书和所附权利要求书所用的单数形式"一"、"一个"或"这个"包括复数含义，除非文中明确表明并非如此。因此，例如，提到"化疗药"包括两种或多种药物的混合物等。本文所用术语"IL-2"是从正常外周血淋巴细胞产生并以低浓度存在于体内的淋巴因子衍生出的蛋白质。最初，Morgan等(1976)Science193:1007-1008描述了IL-2，起初称为T细胞生长因子，因为它能够诱导刺激的T淋巴细胞增殖。它是报道分子量范围13,000-17,000的蛋白质(Gillis和Watson(1980)/159:1709)，等电点位于6-8.5的范围。该定义包括全长IL-2蛋白和其生物活性片段。该术语也包括IL-2的表达后修饰，例如糖基化、乙酰化、磷酸化等。而且，出于本发明目的，术语"IL-2"指包括对天然序列的修饰如缺失、加成和取代的蛋白质(性质通常为保守性)，只要该蛋白能保持生物学活性，即与化疗药和任选的抗CD20抗体联用时的抗肿瘤活性。这些修饰可以是有意修饰如定位诱变，也可以是偶然修饰，如由于PCR扩增产生蛋白质或差错的宿主突变。本文所用术语"衍生自"用于鉴定分子的原始来源，但不旨在限制制备该分子的方法，如化学合成或重组方法。术语"变体"、"类似物"和"突变蛋白"指保留所需活性的参比分子的生物活性衍生物。例如，IL-2的变体、类似物或突变蛋白与化疗药和任选的抗CD20抗体联用时保留了生物学活性，如抗肿瘤活性。通常，术语"变体"和"类似物"指具有天然多肽的序列和结构、并与天然分子相比具有一个或多个氨基酸添加、取代(性质通常为保守性)和/或缺失(只要这种修饰不破坏生物学活性)的化合物，它们与参比分子"基本同源"，如下所述。比对两条序列时，这种类似物的氨基酸序列与参比序列具有高度序列同源性，如氨基酸序列同源性大于50%，通常大于60%-70%，甚至更具体说为80%-85%或更大，如至少90%-95%或更大。类似物常常包括同样数量的氨基酸，但可包括取代，如本文所述。术语"突变蛋白"指具有一种或多种肽模拟物("拟肽")的肽，如国际公开号WO91/04282所述。此种类似物或突变蛋白优选至少具有与天然分子相同的生物学活性。制备多肽类似物和突变蛋白的方法是本领域已知的，以下将作进一步描述。该术语也包括对参比分子进行的有意突变。尤其优选的类似物包括性质上保守的取代物，即在侧链相关的氨基酸类型内发生取代。具体说，氨基酸通常分为四类(l)酸性——天冬氨酸和谷氨酸；(2)碱性——赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性一—丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；(4)无电荷极性一一甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。有时将苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸归为芳族氨基酸。例如，有理由预测单独用异亮氨酸或缬氨酸取代亮氨酸、用谷氨酸取代天冬氨酸、用丝氨酸取代苏氨酸，或者用结构上相关的氨基酸对氨基酸进行类似的保守性取代，将不会对其生物活性有显著影响。例如，感兴趣蛋白质可包括多达约5-10个保守或非保守氨基酸取代，或甚至多达约15-25个、50个或75个保守或非保守氨基酸取代，或5-75之间任何整数的取代，只要该分子的所需功能仍保持不变。本领域的熟练技术人员不难确定感兴趣分子中可耐受改变的区域。"衍生物"指感兴趣天然多肽、天然多肽片段或其各自类似物的任何合适修饰，如糖基化，磷酸化，聚合物偶联(如与聚乙二醇偶联)，或加入其它外来部分，只要保持天然多肽的所需生物学活性。通常，可从本领域获得制备多肽片段、类似物和衍生物的方法。"片段"指仅由完整全长序列和结构的一部分组成的抗原。片段可包括天然多肽的C末端缺失和N末端缺失，和/或内部缺失。具体蛋白质的活性片段通常包括全长分子的至少约5-10个连续氨基酸残基，优选全长分子的至少约15-25个连续氨基酸残基，最优选全长分子的至少约20-50个或更多个连续氨基酸残基，或5个氨基酸-全长序列的任意整数，只要所研究的片段保持生物学活性，如本文所述的抗肿瘤活性。"基本纯化的"通常指分离物质(化合物、多核苷酸、蛋白质、多肽、多肽组合物)，以使该物质占其存在的样品中的大部分。一般地，样品中基本纯化的组分占该样品的50%、优选80%-85%、更优选90-95%。纯化感兴趣的多核苷酸和多肽的技术是本领域熟知的，包括(例如)离子交换色谱、亲和色谱和根据密度沉降。提到多肽时，"分离的"指所指的分子与它天然存在于其中的整个生物体相分离和分开，或者基本上不存在同一类型的其它生物大分子。提到多核苷酸时，术语"分离的"指全部或部分没有通常在天然条件下与其结合的序列的核酸分子；或者指一种以其天然形式存在但与异源序列结合的序列；或者指从染色体脱离下来的分子。"同源性"指两条多核苷酸或两个多肽部分之间的相同性百分数。两个核酸序列或两个多肽序列在确定的分子长度上，序列相同性至少约50%，优选至少约75%、更优选至少约80-85%、尤其优选至少约90%、最优选至少约95-98%时，彼此"基本上同源"。如本文所述，基本同源也指与特定序列完全相同的序列。通常，"相同性"指两条多核苷酸或多肽序列上核苷酸和核苷酸或者氨基酸和氨基酸准确相对应。通过排列其序列，可比较两个分子(参比序列和与参比序列的相同性％未知的序列)之间的序列信息，计算两条对比序列之间匹配的准确数量，将其除以参比序列的长度，然后乘以100，即可测定相同性百分数。使用易于获得的计算机程序可有助于分析，如ALIGH、Dayhoff、M.O.OiAw1o/7Vofe/"<am/5Vn/"we、M.O.Dayhoff编车葺，5Suppl.，3:353-358，NationalBiomedicalResearchFoundation,Washington,DC)，它采用了Smith和Waterman分析肽用的局部同源性算法(y^w"CMi"柳/.她仇，2:482-489，1981)。可从WisconsinS叫uenceAnalysisPackage(第8版，从GeneticsComputerGroup,Madison，WI获得)获得测定核苷酸序列相同性的程序，例如，BESTFIT、FASTA和GAP程序，这些程序也依赖于Smith和Waterman算法。采用制造者建议的和参照WisconsinSequenceAnalysisPackage所述的默认参数可容易地使用这些程序。例如，可用Smith和Warerman的同源性算法的默认计分表和6个核苷酸位置的间隔罚分(gappenalty)测定核苷酸序列与参比序列的相同性百分数。本发明建立相同性百分数的另一方法是采用版权属于爱丁堡大学、由JohnF.Collins和ShaneS,Sturrok开发、由IntelliGenetics,Inc.(MountainView,CA)发行的MPSRCH程序包。可采用这套程序包中的Smith-Waterman算法，其中，在计分表中使用默认参数(例如，间隔开放罚分=12，间隔延伸罚分=1，间隔=6)。从这批数据产生的"匹配"值反映出"序列相同性"。计算序列间的相同性百分数或相似性百分数的其它合适的程序通常在本领域中是已知的，例如，另一种排列对比程序是BLAST,也使用默认参数。例如，可使用下述默认参数的BLASTN和BLASTP:基因编码=标准；过滤=无；链=两；截留=60;期望值=10;矩阵二BLOSUM62;描述=50个序列；排序=高分(HIGHSCORE);数据库=无冗余，GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBankCDS翻译+Swiss蛋白+Spupdate+PIR。不难获得这些程序的详细描述。或者，在同源区域之间形成稳定的双链体条件下进行多核苷酸杂交，接着用单链特异性核酸酶消化，然后测定消化片段的大小，从而测出同源性。在如(为具体的系统所定义的)严格条件下进行的Southern杂交实验中，可鉴别基本同源的DNA序列。确定适当的杂交条件在本领域熟练技术人员所掌握的知识之内。例如，参见Sambrook等，同上；ZWJC7o","g，同上；jVwc/e/dW场6〃'(i/她'o"，同上。本文用于描述核酸分子的"重组"指基因组、cDNA、病毒、半合成或合成来源的多核苷酸，由于其来源或操作的缘故，该多核苷酸与与其天然相关的多核苷酸的全部或部分不相关。用于蛋白质或多肽的术语"重组子"指通过重组多核苷酸表达产生的多肽。通常，克隆感兴趣的基因，然后在转化的生物体中表达(如下所述)。宿主生物体在表达条件下表达外源基因，从而产生蛋白。"抗体"指特异性结合于抗原中存在的感兴趣表位的分子。"特异性结合"指抗体以"锁钥"型相互作用识别表位并与其作用，在抗原和抗体间形成复合物，相反，非特异性结合可以在抗体与(例如)抗体与其反应的测试底物之间发生。本文所用术语"抗体"包括获自多克隆和单克隆制剂的抗体以及杂交(嵌合)抗体分子(参见例如，Winter等，Nature(1991)349:293-299和美国专利号4,816,567);F(ab')2和F(ab)片段；Fv分子(非共价异源二聚体，参见例如，Inbar等，iVocAto/爿cadSc/t/&4(1972)塑:2659-2662;和Ehrlich等，Biochem(1980)1^:4091-4096);单链Fv分子(sFv)(参见例如，Huston等，尸racAto/」cad5W(1988)M:5879-5883);二聚和三聚抗体片段构建物；小抗体(参见例如，Pack等，所oc/zem(1992)11:1579-1584;Cumber等，J/wmtmo/ogy(1992)149B:120-126);人源化抗体分子(参见例如，Riechmann等，Nature(1988)332:323-327;Verhoeyan等，&/g"ce(1988)239:1534-1536:和1994年9月21日公开的英国专利公开号GB2，276,169);以及获自这些分子的任何功能片段，其中这些片段保持了母抗体分子的免疫结合特性。本文所用术语"单克隆抗体"指含有均一抗体群体的抗体组合物。该术语不限制抗体的种类或来源，也不限制其制备方式。该术语包括完整的免疫球蛋白和片段如Fab、F(ab')2、Fv和其它片段，以及具有母单克隆抗体分子的免疫结合特性的嵌合和人源化的均一抗体群体。本文所用术语"抗癌抗体"包括经设计耙向癌细胞，具体是感兴趣的具体癌细胞上存在的细胞表面抗原的抗体。优选地，抗癌抗体的性质是单克隆，优选为IgGl单克隆抗体。本文所用术语"抗CD20抗体"包括特异性识别CD20B-细胞表面抗原的任何抗体，包括多克隆抗CD20抗体、单克隆抗CD20抗体、人抗CD20抗体、人源化抗CD20抗体、嵌合抗CD20抗体、异种抗CD20抗体和能特异性识别CD20B-细胞表面抗原的这些抗CD20抗体的片段。"CD20表面抗原"指33-37kD的完整膜磷酸化蛋白，它在早期前B细胞发育期间表达，并持续到成熟B细胞期，但在浆细胞期消失。虽然CD20在正常B细胞上表达，但这种表面抗原通常在癌变的B细胞上表达水平非常高。超过90。/。的B细胞淋巴瘤和慢性淋巴细胞性白血病，以及约50%的前B细胞急性淋巴细胞性白血病表达这种表面抗原。"抗肿瘤活性"指细胞增殖速率降低，从而使现有肿瘤的生长速率下降，或在治疗期间产生的肿瘤减少，和/或破坏现有的肿瘤细胞或新形成的肿瘤细胞，从而在治疗期间降低肿瘤的总体积。可用接受的动物模型，如Namalwa和Daudi人B细胞淋巴瘤异种移植瘤模型来评价这种活性。参见例如，Hudson等，丄ewfem/a(1998)12:2029-2033描述了这些动物模型。"非霍奇金B细胞淋巴瘤"或"NHL"指涉及异常、不可控制的B细胞增殖的任何非霍奇金系淋巴瘤。出于本发明目的，按照恥nb'"g尸or画/油'o"分类方案(参见"非霍奇金淋巴瘤病理分类计划"(TheNonHodgkin，sLymphomaPathologicClassificationProject)Owcer49(1982):2112-2135)提及这种淋巴瘤，即分为低级、中级和高级的B细胞淋巴瘤。低级B-细胞淋巴瘤包括小淋巴细胞、滤泡性小切割细胞和滤泡性混合小切割细胞淋巴瘤；中级淋巴瘤包括滤泡性大细胞、弥散性小切割细胞、弥散性混合小细胞和大细胞以及弥散性大细胞淋巴瘤；高级淋巴瘤包括大细胞免疫母细胞、淋巴母细胞以及伯基特和非伯基特型非切割小细胞淋巴瘤。IL-2或其变体或者抗CD20抗体的"治疗有效剂量或量"指与化疗药联用时，本文所述IL-2和抗CD20抗体能产生阳性治疗反应如抗肿瘤活性的用量。II.实施本发明的方式在详细描述本发明之前，应理解本发明并非局限于特定的制剂或加工参数，显然，它们是可以变化的。还应理解本文所用的术语仅用于说明本发明的具体实施例，而并非对其限制。虽然与本文所述内容相似或等效的许多方法和材料可用于实施本发明，但本文描述了优选的材料和方法。本发明的基础是发现了安全有效地治疗B细胞淋巴瘤，如非霍奇金B细胞淋巴瘤(NHL)的新型治疗方法。该方法利用递送化疗药、IL-2和任选的抗CD20抗体。本发明者发现，采用这些方法提高了总体抗肿瘤作用和效应持续时间。具体说，如实施例所详述，本发明者用科学上可接受的B细胞淋巴瘤动物模型证明，与对照治疗组相比，IL-2与化疗药CHOP,IL-2和CHOP的单个成分，IL-2、CHOP和利妥昔单抗，以及IL-2与CHOP和利妥昔单抗的单个成分联合治疗能显著抑制肿瘤生长。而且，与采用一种药物IL-2和利妥昔单抗相比，延迟了肿瘤进展时间(TTP)。显然，将IL-2加入CHOP/利妥昔单抗方案时，能诱导显著的肿瘤消退并延长TTP，结果优于单独采用CHOP与利妥昔单抗。本发明方法可用于治疗性治疗按照修订的欧洲和美国淋巴瘤分类(REAL)系统分类的B细胞淋巴瘤。这种B细胞淋巴瘤包括但不限于分类为前体B细胞瘤的淋巴瘤，如B-淋巴母细胞白血病/淋巴瘤；外周B细胞瘤，包括B细胞慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤/免疫细胞瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡中心细胞淋巴瘤(滤泡)(包括弥散性小细胞、弥散性混合小细胞和大细胞以及弥散性大细胞淋巴瘤)、边缘层B细胞淋巴瘤(包括淋巴结外、淋巴结和脾类型)、多毛细胞白血病、桨细胞瘤/骨髓瘤、弥散性大细胞B细胞淋巴瘤(原发性纵隔(胸腺)亚型)、伯基特淋巴瘤和伯基特样高级B细胞淋巴瘤；以及不可分类的低级或高级B细胞淋巴瘤。虽然本发明方法涉及治疗现有的淋巴瘤或实体瘤，但应认识到，该方法可用于预防治疗期间新长出肿瘤。本发明方法尤其可用于治疗低级B细胞淋巴瘤患者，具体是在标准化疗后复发的患者。与中级和高级B细胞淋巴瘤相比，低级B细胞淋巴瘤的进展更缓慢，其特征是复发/缓解过程。因此，用本发明复发能改进这些淋巴瘤的治疗，因为可以减少复发发作的次数并降低其严重性。为了进一步理解本发明，下面更详细地讨论了化疗药、抗CD20抗体、IL-2以及递送这些物质的方式。IL-2如上所述，本发明方法包括与化疗药和任选的抗CD20抗体联合给予IL-2。用于本发明方法的IL-2可以是天然IL-2或用重组技术获得的IL-2，可来自任何来源，包括哺乳动物来源，如小鼠、大鼠、兔、灵长动物、猪和人。本领域熟知来自许多物种的IL-2序列，包括但不限于人11^2(智人(//^^0^/^"匀，前体序列，GenBank登录号AAH66254;GenBank登录号AAH66254的残基21-153代表成熟序列)；猕猴IL-2(Macaccimw/a"o;前体序列，GenBank登录号P51498;GenBank登录号P51498序列的残基21-154代表成熟序列)；狒狒IL-2(A^'oflm^&;前体序列，GenBank登录号Q865Y1;GenBank登录号Q865Y1序列的残基21-154代表成熟序列)；乌黑白眉猴IL-2(Cercoce6附to^wa^s前体序列，GenBank登录号P46649;GenBank登录号P46649序列的残基21-154代表成熟序列)；食蟹猕猴IL-2(Mac"ca/w"'cw/aA;前体序列，GenBank登录号Q29615;GenBank登录号Q29615序列的残基21-154代表成熟序列)；普通长臂猿IL-2(/fy/Wato/ar，前体序列，GenBank登录号ICGI2;GenBank登录号ICGI2序列的残基21-153代表成熟序列)；普通松鼠猴IL-2(Sa/m/〃'"/wwm;前体序列，GenBank登录号Q8MKH2;GenBank登录号Q8MKH2序列的残基21-154代表成熟序列)；牛IL-2(^wtowM;前体序列，GenBank登录号P05016;GenBank登录号P05016序列的残基21-155代表成熟序列；也参见GenBank登录号NP-851340报道的变异前体序列；GenBank登录号NP-851340序列的残基24-158代表成熟序列)；水牛IL-2(5w6a/wZm6flfe;前体序列，GenBankQ95KP3;GenBankQ95KP3序列的残基21-155代表成熟序列)；马IL-2(^wz^co^〃^;前体序列，GenBank登录号P37997;GenBank登录号P37997序列的残基21-149代表成熟序列)；山羊IL-2(Co;ra/h>ci;前体序列，GenBank登录号P36835;GenBank登录号P36835序列的残基21-155代表成熟序列)；绵羊IL-2(Ov^前体序列，GenBank登录号P19114;GenBank登录号P19114序列的残基21-155代表成熟序列)；猪IL-2(野猪(Smscw/a);前体序列，GenBank登录号P26891;GenBank登录号P26891的残基21-154代表成熟序列)；马鹿IL-2(Cenwe/fl//w^前体序歹U，GenBank登录号P51747;GenBank登录号P51747序列的残基21-162代表成熟序列)；犬IL-2(家犬(Cam's/am"/an;y);前体序列，GenBank登录号Q29416;GenBank登录号Q29416序列的残基21-155代表成熟序列)；猫IL-2(家猫(Fefccart^);前体序列，GenBank登录号Q07885;GenBank登录号Q07885序列的残基21-154代表成熟序列)；兔IL-2(家兔(C^cto/ag^cwm'cw/w力；前体序列，GenBank登录号077620;GenBank登录号077620序列的残基21-153代表成熟序列)；逆戟鲸IL-2(Oc/mwca;前体序列，GenBank登录号097513;GenBank登录号097513序列的残基21-152代表成熟序列)；北方象海豹IL-2(M/raw"gaa"gw幼'rasWs;前体序列，GenBank登录号062641;GenBank登录号062641序列的残基21-154代表成熟序列)；家鼠IL-2(小鼠(M^m^c^/^);前体序列，GenBank登录号NP—032392;GenBank登录号NP—032392序列的残基21-169代表成熟序列)；西方野生小鼠IL-2(M^^wft^;前体序列，GenBank登录号Q08867;GenBank登录号Q08867序列的残基21-166代表成熟序列)；挪威大鼠IL-2(/^加"orveg/c^;前体序列，GenBank登录号P17108;GenBank登录号P17108的残基21-155代表成熟序列)；蒙古沙鼠IL-2(MeWo"esw"gw/cw/aft^;前体序列，GenBank登录号Q08081;GenBank登录号Q08081的残基21-155代表成熟序列)；上面这些GenBank登录号所述的任何变异IL-2多肽；将这些GenBank报道内容全部纳入本文作参考。虽然任何来源的IL-2均可用于实施本发明，但IL-2优选衍生自人来源，特别是接受治疗的对象是人时。在一些实施方式中，用于本发明方法的IL-2是重组产生的，例如重组人IL-2蛋白，包括但不限于获自微生物宿主的IL-2蛋白。用于本发明方法的组合物可含有IL-2的生物活性变体，包括来自任何物种的IL2变体。这些变体应该保留天然多肽的所需生物学活性，以使含有这种变异多肽的药物组合物与含有天然多肽的药物组合物在给予对象时疗效相同。即，该变异多肽作为药物组合物中的治疗活性成分，其作用方式类似于天然多肽。本领域可获得确定变异多肽是否保留了所需生物学活性，从而可用作药物组合物的治疗活性成分的方法。可采用特别设计用于测定天然多肽或蛋白质的活性的试验，包括本发明所述试验来测定生物学活性。此外，可检测生物活性天然多肽的抗体结合变异多肽的能力，有效结合则表明该多肽的构象类似于天然多肽。天然或天然产生的IL-2的合适的生物学活性变体可以是该多肽的片段、类似物和衍生物，如上所述。例如，可通过在编码感兴趣天然多肽的克隆DNA序列中产生突变制备多肽的氨基酸序列变体。诱变方法和核苷酸序列改变是本领域熟知的。参见例如，Walker和Ga.astra编(1983)《分子生物学技术》(TechniquesinMolecularBiology)(MacMillanPublishingCompany,纽约)；Kunkel(1985)尸rac.Ato/.」cac/.M:488誦492;Kunkel等(1987)MeAo&五"2"j;mo/.154:367-382;Sambrook等(1989)《分子克隆实验室手册》(MolecularCloning:ALaboratoryManual)(ColdSpringHarborLaboratoryPress,Plainview，纽约)；美国专利号4,873,192;和其中引用的参考文献；纳入本文作参考。关于不影响感兴趣多肽的生物学活性的合适氨基酸取代的指南可参见^f/w尸rofe/"Se《we"ceam/5Vra"w"中Dayhoff等(1978)的模型(Nat1.Biomed.Res.Found.,华盛顿特区)，纳入本文作参考。可优选保守取代，如用一种氨基酸交换具有详细特性的另一种氨基酸。保守取代的例子包括但不限于Gly一Ala、Val"Ile"Leu、Asp"Glu。Lys^Arg、Asn"Gln禾口Phe"Trp"Tyr。在本领域中可找到关于可通过残基取代、缺失或插入改变的IL-2蛋白区域的指南。参见例如，Bazan(1992)S".e"ce257:410-412;McKay(1992)肠匿257:412;Theze等(1996)/wmw"o/.7bda;;17:481-486;Buchli和Ciardelli(1993)Jrc/z.历oc/2e肌所o//z^.307:411-415;Collins等(1988)尸rac.Ato/.Jcad85:7709-7713;Kuziel等(1993)乂/mww"o/.150:5731;Eckenberg等(1997)9:488-498中讨论的结构/功能关系和/或结合研究；将这些文献的全部内容纳入本文作参考。在构建感兴趣IL-2多肽的变体的过程中，进行修饰，以使变体仍然具有所需活性。显然，在编码变异多肽的DNA中作出任何突变一定不能使该序列位于阅读框以外，优选不产生可产生二级mRNA结构的互补区域。参见EP专利申请公开号75,444。IL-2的生物活性变体与用作比较基础的参比IL-2多肽分子如天然人IL-2的氨基选序列相同性通常至少约为70%，优选至少约为80%，更优选至少约为卯％-95%或更高，最优选至少约为98%、99%或更高。采用基于仿射(affine)缺口搜索的Smith-Waterman同源性搜索算法测定序列相同性百分数，其中缺口开放罚分为12，缺口延伸罚分为2，BLOSUM矩阵为62。Smith禾卩Waterman,y^v.J/;/.Ma仇(1981)2:482-489中介绍了Sm他-Waterman同源性搜索算法。变体可以有(例如)少至l-15个氨基酸残基，少至1-10个残基如6-10个残基，少至5个残基，少至4、3、2或l个氨基酸残基不同。关于两种氨基酸序列的最优比对，相对于参比氨基酸序列，变异氨基酸序列的毗连节段可含有相同数量的氨基酸、其它氨基酸残基或缺失氨基酸残基。用于与参比氨基酸序列比较的毗连节段包括至少20个毗连氨基酸残基，可以是30、40、50或更多个氨基酸残基。可纠正与保守残基取代或缺口相关的序列相同性(参见Smith-Waterman同源性搜索算法)。感兴趣天然IL-2多肽的生物活性变体与天然多肽可以有少至1-15个氨基酸，少至1-10个如6-10个，少至5个，少至4、3、2或1个氨基酸残基不同。具有IL-2活性的多肽的确切化学结构取决于许多因素。由于该分子中存在可离子化的氨基和羧基，所以可获得作为酸盐或碱盐或中性形式的具体多肽。置于合适的环境条件中时，保留其生物学活性的所有这些制剂属于具有本文所述IL-2活性的多肽的定义。而且，可通过糖部分(糖基化)或其它补充分子如脂质、磷酸、乙酰基等的衍生化增加多肽的一级氨基酸序列。也可通过糖偶联增加。通过生产宿主的翻译后加工系统完成这种增加的某些方面；可在体外引入其它这种修饰。在任何情况下，这种修饰属于本文所用IL-2多肽的定义，只要该多肽的IL-2活性未被破坏。预计在各种试验中这种修饰可能定性或定量地影响活性，如提高或降低该多肽的活性。而且，可通过氧化、还原或其它衍生途径修饰该链中的单个氨基酸残基，可切割该多肽，以获得保留活性的片段。不破坏活性的这种改变不会使该多肽序列超出本文所用的感兴趣IL-2多肽的定义。本领域提供了关于制备和使用多肽变体的大量指导。在制备IL-2变体时，本领域技术人员不难确定对天然蛋白质的核苷酸或氨基酸序列进行何种修饰会产生适合用作本发明方法中所用药物组合物的治疗活性成分的变体。用于本发明方法的IL-2或其变体可来自任何来源，但优选是重组产生的。"重组IL-2"或"重组IL-2变体"指与天然序列IL-2的生物学活性相当并通过如Taniguchi等(1983)Wa^w302:305-310和Devos(1983)A^c/e/c^c/cfe/ewarc/z11:4307-4323所述的重组DNA技术制备的白介素-2或其变体，或如Wang等(1984)224:1431-1433所述突变改变的IL-2。通常，如本文所述，克隆编码IL-2的基因，然后在转化生物体、优选微生物、最优选大肠杆菌(五.co/Z)中表达。在表达条件下宿主生物体表达该外来基因以产生IL-2。也可以在真核细胞如酵母或人细胞中制备合成重组iL-2。培养、收获、破坏或提取细胞中的IL-2的方法主要参见例如，美国专利4,604,377;4，738，927;4,656,132;4,569,790;4,748,234;4,530,787;4,572,798;4，748，234;和4,931,543,将其全文纳入本文作参考。变体IL-2蛋白的例子参见欧洲专利(EP)公开号EP136，489(其公开了天然产生IL-2的氨基酸序列的以下一种或多种改变Asn26至Gln26;Trpl21至Phel21;Cys58至Ser58或Ala58,Cysl05至Serl05或Alal05;Cysl25至Serl25或Alal25;缺失所有Argl20后的残基；和其Met-l形式)；和1983年10月13日提交的欧洲专利申请83306221.9(1984年5月30日公开，公开号为EP109，748)所述的重组IL-2突变蛋白，它是比利时专利号893,016和共有美国专利号4,518，584(公开了按照天然人IL-2编号，位置125上的半胱氨酸缺失或被中性氨基酸取代的重组人IL-2突变蛋白；丙氨酰-serl25-IL-2;和脱丙氨酰-serl25-IL-2)的等价形式。也参见美国专利号4，752,585(其公开了以下变异IL-2蛋白alal04serl25IL-2,alal04IL-2,alal04alal25IL-2，val104serl25IL-2,val104IL-2,val104alal25IL-2,des-alalalal04serl25IL-2，des-alalalal04IL-2,des-alalalal04alal25IL-2,des-alalval104serl25IL-2,des-alalval104IL陽2，des-alalval104alal25IL-2,des-alaldes-pro2alal04serl25IL-2,des-alaldes-pro2alal04IL陽2，des-alaldes-pro2alal04alal25IL-2,des-alaldes-pro2val104serl25IL-2,des-alaldes-pro2val104IL陽2，des-alaldes-pro2val104alal25IL-2，des誦alaldes-pro2des-thr3alal04serl25IL-2,des-alaldes隱pro2des-thr3alal04IL-2，des-alaldes-pro2des-thr3alal04alal25IL-2,des-alaldes-pro2des-thr3val104serl25IL-2,des-alaldes-pro2des-thr3val104IL-2,des-alaldes-pro2des-thr3val104alal25IL-2，des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4alal04serl25IL-2,des-alaldes-pro2des-thr3des隱ser4alal04IL-2，des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4alal04alal25IL-2，des陽alaldes-pro2des-thr3des-ser4val104serl25IL-2,des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4val104IL-2,des-alaldes-pro2des陽thr3des-ser4val104alal25IL-2,des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5alal04serl25IL-2,des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5alal04IL-2，des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5alal04alal25IL-2,des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5val104serl25IL-2,des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5val104IL-2,des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5val104alal25IL-2,des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04alal25IL-2，des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04IL-2,des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04serl25IL-2,des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6val104serl25IL陽2，des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6val104IL-2,禾口des-alaldes-pro2des隱thr3des-ser4des-ser5des-ser6val104alal25IL-2》和美国专利号4，931,543(其公开了用于本文实施例的IL-2突变蛋白脱丙氨酰-1、丝氨酸-125人IL-2以及其它IL-2突变蛋白)。也参见欧洲专利公开号EP200,280(1986年12月10日公开)，其公开了位置104上的甲硫氨酸被保守氨基酸取代的重组IL-2突变蛋白。例子包括以下突变蛋白ser4des-ser5alal04IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5alal04alal25IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5glul04serl25IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des陽ser5glul04IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5glul04alal25IL-2;des-alaldes-pro2des誦thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04alal25IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des陽ser6alal04IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04serl25IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6glul04serl25IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6glul04IL-2;禾口des-alaldes-pro2des國thr3des-ser4des-ser5des-ser6glul04alal25IL-2。也参见欧洲专利公开号EP118,617和美国专利5,700,913，它们公开了用丙氨酸代替作为天然分子N-末端氨基酸的甲硫氨酸的未糖基化的人IL-2变体；缺失了第一个甲硫氨酸以致于脯氨酸是N-末端氨基酸的未糖基化的人IL-2;和N-末端甲硫氨酸和脯氨酸之间插入丙氨酸的未糖基化的人IL-2。其它IL-2突变蛋白包括WO99/60128所述突变蛋白(用组氨酸或异亮氨酸取代位置20上的天冬氨酸，用精氨酸、甘氨酸或异亮氨酸取代位置88上的天冬酰胺，或者用亮氨酸或谷氨酸取代位置126上的谷胺酰胺)，据报道，这种突变蛋白对表达T细胞受体的细胞表达的高亲和IL-2受体的选择性活性优于NK细胞，并且降低了IL-2毒性；美国专利5,229,109所述的突变蛋白(用丙氨酸取代位置38上的精氨酸，或用赖氨酸取代位置42上的苯丙氨酸)，与天然IL-2相比它与高亲和IL-2受体的结合降低，而保持了刺激LAK细胞的能力；国际公开号WO00/58456所述的突变蛋白(改变或缺失天然IL-2中天然产生的(x)D(y)序列，其中D是天冬氨酸，(x)是亮氨酸、异亮氨酸、甘氨酸或缬氨酸，(y)是缬氨酸、亮氨酸或丝氨酸)，据称这些蛋白减少了血管渗漏综合征；国际公开号WO00/04048所述的IL-2pl-30肽(对应于IL-2的前30个氨基酸，其含有IL-2的整个ot-螺旋A，并与IL-2受体的P链相互作用)，据报道，这种突变蛋白能刺激NK细胞和诱导LAK细胞；WO00/04048所述的IL-2pl-30肽的突变形式(用赖氨酸取代位置20上的天冬氨酸)，据报道，这种突变蛋白不能诱导血管出血，但仍能产生LAK细胞。此外，可用聚乙二醇修饰IL-2，以提高溶解度和改变药代动力学概况(参见美国专利号4,766,106)!预测毒性降低的IL-2突变蛋白的其它例子参见2004年3月5日提交的美国临时申请序列号60/550,868，将其全文纳入本文作参考。这些突变蛋白含有用丝氨酸取代成熟人IL-2序列位置125上的半胱氨酸并且在成熟人IL-2序列内至少还有另一个氨基酸取代的成熟人JL-2的氨基酸序列，以使所述突变蛋白具有以下功能特征在相当的试验条件下与相似量的脱丙氨酰-1、C125S人IL-2或C125S人IL-2相比，1)维持或增加天然杀伤细胞(NK)的增殖，和2)诱导NK细胞产生的促炎细胞因子水平降低。在一些实施方式中，所述另一个取代选自T7A、T7D、T7R、K8L、K9A、K9D、K9R、K9S、K9V、K9W、T10K、T丽、Q11A、Q11R、Q11T、E15A、H16D、H16E、L19D、L19E、D20E、124L、K32A、K32W、N33E、P34E、P34R、P34S、P34T、P34V、K35D、K35I、K35L、K35M、K35N、K35P、K35Q、K35T、L36A、L36D、L36E、L36F、L36G、L36H、L36I、L36K、L36M、L36N、L36P、L36R、L36S、L36W、L36Y、R38D、R38G、R38N、R38P、R38S、L40D、L40G、L40N、L40S、T41E、T41G、F42A、F42E、F42R、F42T、F42V、K43H、F44K、M46I、E61K、E61M、E61R、E62T、E62Y、K64D、K64E、K64G、K64L、K64Q、K64R、P65D、P65E、P65F、P65G、P65H、P65I、P65K、P65L、P65N、P65Q、P65R、P65S、P65T、P65V、P65W、P65Y、L66A、L66F、E67A、L72G、L72N、L72T、F78S、F78W、H79F、H79M、H79N、H79P、H79Q、H79S、H79V、L80E、L80F、L80G、L80K、L80N、L80R、L80T、L80V、L80W、L80Y、R81E、R81K、R81L、R81M、R81N、R81P、R81T、D84R、S87T、N88D、N88H、N88T、V91A、V91D、V91E、V91F、V91G、V91N、V91Q、V91W、L94A、L94I、L94T、L94V、L94Y、E95D、E95G、E95M、T102S、T102V、M104G、E106K、Y107H、Y107K、Y107L、Y107Q、Y107R、Y107T、E116G、N119Q、T123S、T123C、Q126I或Q126V;其中氨基酸残基位置对应于成熟人IL-2氨基酸序列的编号。在其它实施方式中，这些突变蛋白含有用丙氨酸取代成熟人IL-2序列位置125上的半胱氨酸并且成熟人IL-2序列内至少还有另一个氨基酸取代的成熟人IL-2的氨基酸序列，以使所述突变蛋白具有这些相同功能特性。在一些实施方式中，所述另一个取代选自T7A、T7D、T7R、K8L、K9A、K9D、K9R、K9S、K9V、K9W、T10K、T10N、Q11A、Q11R、Q11T、E15A、H16D、H16E、L19D、L19E、D20E、124L、K32A、K32W、N33E、P34E、P34R、P34S、P34T、P34V、K35D、K35I、K35L、K35M、K35N、K35P、K35Q、K35T、L36A、L36D、L36E、L36F、L36G、L36H、L36I、L36K、L36M、L36N、L36P、L36R、L36S、L36W、L36Y、R38D、R38G、R38N、R38P、R38S、L40D、L40G、L40N、L40S、T41E、T41G、F42A、F42E、F42R、F42T、F42V、K43H、F44K、M46I、E61K、E61M、E61R、E62T、E62Y、K64D、K64E、K64G、K64L、K64Q、K64R、P65D、P65E、P65F、P65G、P65H、P65I、P65K、P65L、P65N、P65Q、P65R、P65S、P65T、P65V、P65W、P65Y、L66A、L66F、E67A、L72G、L72N、L72T、F78S、F78W、H79F、H79M、H79N、H79P、H79Q、HT9S、H79V、L80E、L80F、L80G、L80K、L80N、L80R、L80T、L80V、L80W、L80Y、R81E、R81K、R81L、R81M、R81N、R81P、R81T、D84R、S87T、N88D、N88H、N88T、V91A、V91D、V91E、V91F、V91G、V91N、V91Q、V91W、L94A、L94I、L94T、L94V、L94Y、E95D、E95G、E95M、T102S、T102V、M104G、E106K、Y107H、Y107K、Y107L、Y107Q、Y107R、Y107T、E116G、N119Q、T123S、T123C、Q126I和Q126V;其中氨基酸残基位置对应于成熟人IL-2氨基酸序列的编号。在其它实施方式中，这些突变蛋白含有成熟人IL-2序列内至少还有另一个氨基酸取代的成熟人IL-2的氨基酸序列，以使所述突变蛋白具有这些相同功能特性。在一些实施方式中，所述另一个取代选自T7A、T7D、T7R、K8L、K9A、K9D、K9R、K9S、K9V、K9W、T10K、T10N、Q11A、Q11R、Q11T、E15A、H16D、H16E、L19D、L19E、D20E、124L、K32A、K32W、N33E、P34E、P34R、P34S、P34T、P34V、K35D、K35I、K35L、K35M、K35N、K35P、K35Q、K35T、L36A、L36D、L36E、L36F、L36G、L36H、L36I、L36K、L36M、L36N、L36P、L36R、L36S、L36W、L36Y、R38D、R38G、R38N、R38P、R38S、L40D、L40G、L40N、L40S、T41E、T41G、F42A、F42E、F42R、F42T、F42V、K43H、F44K、M46I、E61K、E61M、E61R、E62T、E62Y、K64D、K64E、K64G、K64L、K64Q、K64R、P65D、P65E、P65F、P65G、P65H、P65I、P65K、P65L、P65N、P65Q、P65R、P65S、P65T、P65V、P65W、P65Y、L66A、L66F、E67A、L72G、L72N、L72T、F78S、F78W、H79F、H79M、H79N、H79P、H79Q、H79S、H79V、L80E、L80F、L80G、L80K、L80N、L80R、L80T、L80V、L80W、L80Y、R81E、R81K、R81L、R81M、R81N、R81P、R81T、D84R、S87T、N88D、N88H、N88T、V91A、V91D、V91E、V91F、V91G、V91N、V91Q、V91W、L94A、L94I、L94T、L94V、L94Y、E95D、E95G、E95M、T102S、T102V、M104G、E106K、Y107H、Y107K、Y107L、Y107Q、Y107R、Y107T、E116G、N119Q、T123S、T123C、Q126I或Q126V;其中氨基酸残基位置对应于成熟人IL-2氨基酸序列的编号。美国临时申请序列号60/550,868所述的其它突变蛋白包括上面鉴定的突变蛋白，不同之处在于缺失了成熟人IL-2序列位置1上的第一个丙氨酸残基。本文所用术语IL-2旨在包括IL-2融合物或偶联物，其中IL-2融合于第二种蛋白质或共价偶联于聚脯氨酸或水溶性聚合物，以降低给药频率或提高IL-2耐受性。例如，可用本领域已知方法(参见WO01/79258)将IL-2(或其变体(如本文所述))融合于人白蛋白或白蛋白片段。或者，IL-2可共价偶联于聚脯氨酸或聚乙二醇均聚物和聚氧乙烯化多元醇，其中该均聚物未取代或一端用烷基取代，该多元醇未取代(采用本领域已知方法)(参见例如美国专利4,766,106、5，206,344和4,894,226)。含有IL-2作为治疗活性成分的任何药物组合物均可用于本发明方法。本领域已知这种药物组合物，包括但不限于美国专利4,745,180;4,766,106;4,816,440;4,894,226;4,931,544;和5,078,997所述的药物组合物；纳入本文作参考。因此，本领域已知的含有IL-2或其变体的液体、冻干或喷雾干燥组合物可制备成含有IL-2或其变体作为治疗或预防活性成分的水性或非水性溶液或悬液，随后给予对象。"治疗或预防活性成分"指特别将IL-2或其变体掺入该组合物，产生所需的治疗或预防反应，以在该药物组合物给予对象时治疗或预防该对象的疾病或病症。优选地，该药物组合物含有合适的稳定剂、填充剂或二者，以最大程度减少制备和储存期间蛋白质稳定性和生物学活性损失带来的问题。在本发明的优选实施方式中，用于本发明方法的含有IL-2的药物组合物是含有稳定的单体IL-2或其变体的组合物、含有多聚IL-2或其变体的组合物和含有稳定的冻千或喷雾干燥的IL-2或其变体的组合物。2000年10月3日提交的PCT申请号PCT/US00/27156公开了含有稳定的单体IL-2或其变体的药物组合物，将该PCT申请的内容纳入本文作参考。"单体"IL-2指在本文所述药物组合物中主要以单体形式、而非聚集形式存在的蛋白质分子。因此，不存在IL-2的共价或疏水寡聚物或聚集体。简言之，用足够量的氨基酸基料配制这些液体组合物中的IL-2或其变体，以减少储存期间IL-2或其变体形成的聚集体。氨基酸基料是一种氨基酸或氨基酸组合，其中任何给定氨基酸以其游离碱形式或其盐形式存在。优选氨基酸选自精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸或谷氨酸。这些组合物还含有缓冲剂，以将液体组合物的pH位置在IL-2或其变体稳定的可接受范围内，其中所述缓冲剂是基本不含盐形式的酸、盐形式的酸或酸和其盐形式的混合物。该酸优选选自琥珀酸、柠檬酸、磷酸或谷氮酸。在本文中将这种组合物称为稳定的单体IL-2药物组合物。这些组合物中的氨基酸基料用于稳定IL-2或其变体，以防止液体药物组合物在储存期间形成聚集体，将基本不含盐形式的酸、盐形式的酸或酸和其盐形式的混合物用作缓冲剂导致液体组合物的渗透压接近等渗。液体药物组合物还可掺入其它稳定剂，更具体是甲硫氨酸，非离子表面活性剂如聚山梨醇酯80和EDTA，以进一步提高该多肽的稳定性。据说这种液体药物组合物稳定，因为加入氮基酸基料与基本不含盐形式的酸、盐形式的酸或酸和其盐形式的混合物导致该组合物的储存稳定性相对于在没有这两种成分的组合时配制的液体药物组合物有所提高。含有稳定的单体IL-2或其变体的这些液体药物组合物可以水性液体形式应用，或以冷冻状态储存待用，或以干燥形式储存随后按照本发明方法重建成适合给予对象的液体形式或其它形式。"干燥形式"指通过冷冻干燥(即冻干法；参见例如，Williams和Polli(1984)J.尸a簡詢/7fec/mo/.35:48-59)、喷雾干'燥(参见Masters(1991)《喷雾干燥手册》(*ra_y-Z>;;/"g//a"必oo/t)(第5版；LongmanScientificandTechnical,Essez，英国)，第491-676页；Broadhead等(1992)Z>wgDeve/.1169-1206;和Mumenthaler等(1994)尸/za"".11:12-20)或空气干燥(Carpenter和Crowe(1988)25:459-470;和Roser(1991)5/o;/zfl簡.4:47-53)干燥液体药物组合物或剂型。含有非聚集单体状态的IL-2的IL-2制剂的其它例子包括Whittington和Faulds(1993)Drugs46(3):446-514所述制剂。这些制剂包括重组IL-2产物，其中用等渗盐水重建的0.25。/。冻干粉末形式的人血清白蛋白配制重组IL-2突变蛋白Teceleukin(氨基末端加有甲硫氨酸残基的未糖基化的人IL-2)以及配制重组IL-2突变蛋白Bioleukin(氨基末端加有甲硫氨酸残基的人IL-2并用丙氨酸取代人IL-2序列位置125上的半胱氨酸残基)使0.1-1.0mg/mlIL-2突变蛋白与酸混合，其中该制剂的pH为3.0-4.0，宜不含缓冲液，电导率小于1000mmhos/cm(宜小于500mmhos/cm)。参见EP373,679;Xhang等(1996)泡謹固/.L13(4):643-644;和Prestrelski等(1995)泡画，,.版12(9):1250-1258。含有多聚IL-2或其变体的药物组合物的例子参见共有美国专利4,604,377，将其公开内容纳入本文作参考。"多聚"指药物组合物中存在的蛋白质分子以平均分子结合程度为10-50分子的微聚形式存在。这些多聚体以松散结合的物理相连IL-2分子形式存在。可以商品名Proleukin(ChironCorporation,Emeryville,加利福尼亚州)购得这些组合物的冻干形式。此参考文献公开的冻干制剂含有选择性氧化的、微生物产生的重组IL-2，其中所述重组IL-2与作为填充剂(bulk)的水溶性运载体如甘露醇和足量十二垸基硫酸钠混合，以保证重组IL-2在水中的溶解度。这些组合物适合在胃肠道外给药的水性注射液中重建，它们是稳定的，并且在人类患者中耐受良好。重建时，IL-2或其变体保持其多聚状态。本发明方法包括含有多聚IL-2或其变体的这种冻干或液体组合物。在本文中将这种组合物称为多聚IL-2药物组合物。本发明方法也可采用稳定的冻干或喷雾干燥的含有IL-2或其变体的药物组合物，它们可以重建成按照本发明方法给药的液体或其它稳定形式。以全文纳入本文作参考的共待审的2000年11月28日提交的美国专利申请序列号09/724,810和2000年12月27日提交的国际申请PCT/US00/35452中公开了这种药物组合物。这些组合物还可含有至少一种填充剂、含量足以在干燥过程中稳定蛋白质的至少一种物质，或二者。"稳定"指冻干或喷雾干燥获得该组合物的固体或干燥粉末形式后，IL-2蛋白或其变体保持其单体或多聚形式以及质量、纯度和效力的其它关键特性。在这些组合物中，用作填充剂的优选运载体物质包括甘氨酸、甘露醇、丙氨酸、缬氨酸或其任意组合，最优选甘氨酸。在制剂中所述填充剂的含量范围是0%-约10%(w/v)，取决于所用填充剂。用作稳定剂的优选运载体物质包括任何糖和糖醇，或任何氨基酸。优选糖包括蔗糖、海藻糖、棉子糖、水苏糖、山梨糖醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖或其任意组合，优选蔗糖。所述稳定剂是糖时，其含量范围约为0-9.0%(w/v)，优选约0.5-5.0%，更优选约1.0-3.0%,最优选约1.0%。所述稳定剂是氨基酸时，其含量范围约为0-1.0%(w/v)，优选约0.3-0.7%，最优选约0.5%。这些稳定的冻干或喷雾干燥的组合物可任选地含有甲硫氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)或其盐之一如EDTA二钠盐或其它螯合剂，它能保护IL-2或其变体不被甲硫氨酸氧化。共待审的美国临时申请序列60/157696中描述了以这种方式使用这些物质，纳入本文作参考。可用缓冲剂配制稳定的冻干或喷雾干燥组合物，在液相中时，如配制过程中或干燥形式的组合物重建后，所述缓冲剂能将药物组合物的pH位置在可接受的范围内，tt;选约pH4.0-pH8.5。选择缓冲液，以使它们与干燥过程相容，并且在加工期间和储存期间不影响该蛋白的质量、纯度、效力和稳定性。上述稳定的单体、多聚体和稳定的冻干或喷雾干燥IL-2药物组合物代表了适用于本发明方法的组合物。然而，本发明方法包括含有IL-2或其变体作为治疗活性成分的任何药物组合物。化疗药本发明联合疗法还包括给予至少一种化疗药或方案。"化疗药"是用于治疗癌症的化合物或化合物组合。化疗药的例子包括烷化剂如硫替派和环磷酰胺(CYTOXANTM);烷基磺酸酯如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；吖丙啶如苯佐替派、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替派；氮丙啶和甲蜜胺(methylamelamine)，包括六甲蜜胺、曲他胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三甲蜜胺(trimethylolomelamine);氮芥如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlomaphazine)、氯磷酰胺(chol叩hosphamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、双氯乙基甲胺、盐酸氧氮芥、美法仑、诺凡比英(novembiehin)、苯乙酰胆固醇氮芥、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀；亚硝基脲如卡莫司汀、吡葡亚硝脲、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素如阿柔比星、放线菌素、安曲霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素c、卡奇霉素、卡拉比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、放线菌素d、道诺霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星(idambicin)、马赛罗霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、波非罗霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、块菌素、乌苯美司；净司他丁、佐柔比星；抗代谢药如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);叶酸类似物如二甲叶酸、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、5-FU:雄激素如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酪；抗肾上腺素药如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂如叶烷酸(frolinicadd);醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安吖啶；贝拉布昔(bestrabucil);比生群；伊达曲沙(edatraxate);地磷酰胺(defofamine);秋水仙胺；地吖醌；艾佛米星(elfomithine);依利醋胺；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；蘑燕多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；PSKTM;雷佐生；施佐非兰；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2，,2"-三氯三乙胺；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；加胞嘧啶(gacytosine);阿糖胞苷("Ara-C");环磷酰胺；硫替派；紫杉垸类如紫杉醇(TAXOTO，Bristol-MyersSquibbOncology,Princeton,新泽西州)和多西他赛(TAXOTEW、Rh6ne-PoulencRorer，Antony,法国)；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；钼类似物如顺钼和卡铂；长春碱；铂；依托泊甙(VP-16);异环磷酰胺；丝裂霉素C;米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维本；二羟基蒽醌；替尼泊苷；柔红霉素；氨蝶呤；适罗达；伊班膦酸盐；CPT-11;拓扑异构酶抑制剂RFS2000;二氟甲基鸟氨酸(DMFO);视黄酸；埃斯波霉素；卡培他滨；和上述药物的药学上可接受的盐、酸或衍生物。其它有用的化疗药包括用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素药，如抗雌激素药，包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、芳香酶抑制性4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、凯奥昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬(Fareston);和抗雄激素药如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；和上述药物的药学上可接受的盐、酸或衍生物。尤其有用的是称为CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松联用)的化疗方案以及单独采用CHOP组分或各种形式的联用如CO、CH、CP、COP、CHO、CHP、HO、HP、HOP、OP等；CHOP和博来霉素(CHOP-BLEO);环磷酰胺和氟达拉滨；环磷酰胺、米托蒽醌、泼尼松和长春新碱；环磷酰胺、地塞米松、多柔比星和长春新碱(CAVD);CAV;环磷酰胺、多柔比星和泼尼松；环磷酰胺、米托蒽醌、泼尼松和长春新碱(CNOP);环磷酰胺、甲氨蝶呤、甲酰四氢叶酸和阿糖胞苷(COMLA);环磷酰胺、地塞米松、多柔比星和泼尼松；环磷酰胺、泼尼松、丙卡巴肼和长春新碱(COPP);环磷酰胺、泼尼松和长春新碱(COP和CVP-I);环磷酰胺和米托蒽醌；依托泊甙；米托蒽醌、异环磷酰胺和依托泊甙(MIV);阿糖胞苷；甲泼尼龙和顺钼(ESHAP);甲泼尼龙、阿糖胞苷和顺铂(ESAP);甲氨蝶呤、甲酰四氢叶酸、多柔比星、环磷酰胺、长春新碱、博来霉素和泼尼松(MACOP-B);甲氨蝶呤、博来霉素、多柔比星、环磷酰胺、长春新碱和地塞米松(m-BACOD);泼尼松、环磷酰胺、依托泊武、阿糖胞苷、博来霉素、长春新碱、甲氨蝶呤和甲酰四氢叶酸(PROMACE-CYTABOM);依托泊甙、环磷酰胺、长春新碱、泼尼松和博来霉素(VACOP-B);氟达拉滨和米托蒽醌；顺铂、阿糖胞苷和依托泊甙；地塞米松、氟达拉滨和米托蒽醌；苯丁酸氮芥和泼尼松；白消安和氟达拉滨；ICE;DVP;ATRA;黄胆素、hoelzer化疗方案；LaLa化疗方案；ABVD;CEOP;2-CdA;FLAG和IDA(随后进行或不进行G-CSF治疗)；VAD;M和P;C-Weekly;ABCM;MOPP;顺铂，阿糖胞苷和地塞米松(DHAP)，以及其它已知的化疗方案。用于治疗非霍奇金淋巴瘤患者的优选化疗方案是CHOP。抗CD20抗体如上所述，抗CD20抗体可与IL-2治疗和化疗药联合给予。尤其有用的是通过IgGl/FqR介导的ADCC介导细胞毒作用的抗体。这种抗体包括但不限于利妥昔，靶向癌变B细胞上的CD20抗原，能有效治疗B细胞淋巴瘤，包括非霍奇金B细胞淋巴瘤和慢性淋巴细胞性白血病(CLL));和其它抗CD20抗体如Hu-MAX-CD20、IMMU-106、TRU-015,包括经工程改造提高ADCC活性的抗体。其它有用的还有一种放射免疫治疗剂Zevalin,它含有通过强连接剂(丢昔坦(tiuxetan))与放射性同位素(钇-90)结合的鼠单克隆抗体(替伊莫单抗)，可与利妥昔联用。Zevalin治疗方案包括输注利妥昔，然后注射连接于放射性同位素铟-111的Zevalin抗体，7-9天后第二次输注利妥昔@，然后注射连接于放射性同位素钇-90的Zevalin(剂量为0.4mCi/kg体重)。采用托西莫单抗(抗CD20)和碘1-131托西莫单抗的BEXXAR放射免疫治疗方案也可用于所述方法。本文所用术语"抗CD20抗体"包括特异性识别CD20B-细胞表面抗原的任何抗体，包括多克隆抗CD20抗体、单克隆抗CD20抗体、人抗CD20抗体、人源化抗CD20抗体、嵌合抗CD20抗体、异种抗CD20抗体和特异性识别CD20B-细胞表面抗原的这些抗CD20抗体的片段。优选地，所述抗体是单克隆抗体。"单克隆抗体"指获自基本均一的抗体群体的抗体，即群体中的单个抗体相同，除了可能存在少量天然产生的突变。单克隆抗体是高度特异的，并且抗单个抗原位点，即本发明的CD20B-细胞表面抗原。而且，与一般包含不同决定簇(表位)的不同抗体的常规(多克隆)抗体制剂相反，各单克隆抗体针对抗原上的一个决定簇。修饰词"单克隆"指抗体特征是获自基本均一的抗体群体，不限制产生抗体的任何具体方法。例如，用于本发明的单克隆抗体可以用首先由Kohler等(1975)Atoww256:495描述的杂交瘤方法制备，或者可以用重组DNA法(参见例如美国专利号4,816，567)制备。也可用Clackson等(1991)Atow^352:624-628和Marks等(1991)JMo/.说'o/.222:581-597所述技术从噬菌体抗体文库分离"单克隆抗体"。鼠源抗CD20抗体适用于本发明方法。这种鼠抗CD20抗体的例子包括但不限于B1抗体(如美国专利号6,015,542所述)；lF5抗体(参见Press等(1989)乂C//".0"co/.7:1027);NKI-B20和BCA-B20抗CD20抗体(如Hooijberg等(1995)CancerResearch55:840-846所述方法)；和IDEC-2B8(购自IDECPharmaceuticalsCorp.,加州圣地亚哥)；2H7抗体(如Clark等(1985)尸rac.Ato/.Sc/.U&482:1766-1770所述)；和Clark等(1985)同上和Stashenko等(1980)J/mmw"o/.125:1678-1685所述的其它抗体。本文所用术语"抗CD20抗体"包括嵌合抗CD20抗体。"嵌合抗体"指最优选用重组脱氧核糖核酸技术产生的抗体，它含有人(包括免疫"相关性"物种如黑猩猩)和非人组分。因此，该嵌合抗体的恒定区最优选与天然人抗体的恒定区基本相同；该嵌合抗体的可变区最优选衍生自非人来源，并具有所需的对CD20细胞表面抗原的抗原特异性。非人来源可以是可用于产生人CD20细胞表面抗原的抗体的任何脊椎动物来源或含有人CD20细胞表面抗原的物质。这种非人来源包括但不限于啮齿动物(如兔、大鼠、小鼠等；参见例如，美国专利号4.816，567)和非人灵长动物(如旧大陆猴、猿等；参见例如，美国专利5,750,105和5,756,096)。最优选地，非人组分(可变区)衍生自鼠来源。用于嵌合抗CD20抗体时，本文所用术语"免疫活性"指结合人Clq、介导人B淋巴细胞系的补体依赖性裂解("CDC")并通过抗体依赖性细胞毒作用("ADCC")裂解人耙纸胞的嵌合抗体。嵌合抗CD20抗体的例子包括但不限于可以利妥昔单抗(利妥昔《;IDECPharmaceuticalsCorp.，加州圣地亚哥)的商品名购得的美国专利5,736,137、5,776,456和5,843,439所述IDEC-C2B8，将这些专利的全部内容纳入本文作参考；美国专利5,750,105所述嵌合抗体；美国专利5,500,362;5,677,180;5,721,108和5,843,685所述嵌合抗体，将所有这些专利的全部内容纳入本文作参考。本文所用术语抗CD20抗体也包括人源化抗CD20抗体。"人源化"指含有最少非人免疫球蛋白序列衍生序列的抗CD20抗体的形式。人源化抗体大部分是其中受体超变区的残基被具有所需特异性、亲和力和容量的非人种类(如小鼠、大鼠、兔或非人灵长动物)超变区的残基(供者抗体)取代的人免疫球蛋白(受体抗体)。参见例如，美国专利5,225,539;5,585,089;5,693,761;5,693,762;5,859,205。在一些情况下，人免疫球蛋白的构架残基被相应的非人残基取代(参见例如美国专利5,585,089;5,693,761;5,693,762)。而且，人源化抗体可含有在受体抗体或供体抗体中没有发现的残基。进行这些修饰是为了进一步提高抗体性能(如以获得所需亲和力)。通常，人源化抗体含有基本上所有的至少一个、一般是两个可变区，其中所有或基本上所有超变区均对应于非人免疫球蛋白的超变区，所有或基本上所有构架区都是人免疫球蛋白序列的构架区。人源化抗体也任选含有免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，一般是人免疫球蛋白的至少一部分。其它详情参见Jones等(1986)Nature331;522-525;Riechmann等(1988)Nature332:323-329;禾PPresta(1992)Cht.Qp.5Vra".S/o/.2:593-596。术语抗CD20抗体也包括在非人哺乳动物宿主、更具体是转基因小鼠中产生的异种或修饰的抗CD20抗体，其特征是失活的内源性免疫球蛋白(Ig)基因座。在这种转基因动物中，使能够表达宿主免疫球蛋白的轻亚基和重亚基的内源性基因无功能，并用类似的人免疫球蛋白基因座取代。这些转基因动物产生基本没有宿主免疫球蛋白的轻亚基或重亚基的人抗体。参见例如，美国专利号5,9.39,598。抗CD20抗体的片段只要保留了全长抗体的所需亲和力，即适用于本发明方法。因此，抗CD20抗体片段保留了结合于CD20B-细胞表面抗原的能力。抗体片段含有一部分全长抗体，通常是其抗原结合区或可变区。抗体片段的例子包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段和单链抗体分子。"单链Fv"或"sFv"抗体片段指含有抗体的含有Vh和VL结构域的片段，其中这些结构域存在于一条多肽链中。参见例如，美国专利4,946,778;5,260,203;5,455,030;5,856,456。通常，Fv多肽还包含Vh和VL结构域之间的多肽接头，使sFv形成结合抗原所需结构。sFv的综述参见Pluckthun(1994)，《单克隆抗体的药理学》(7Te尸/wrmaco/ogyo/Mo"oc/o"a/颠W一，第113巻，Rosenburg禾HMoore编(Springer隱Verlag，纽约)，第269-315页。可从用McCafferty等(1990)Nature348:552-554(1990)所述技术产生的抗体噬菌体文库分离抗体或抗体片段。Clackson等(1991)Nature352:624-628和Marks等(1991)J.Mo/.历o/.222:581-597分别描述了用噬菌体文库分离鼠抗体和人抗体。后续发表物描述了用链改组产生高亲和(nM范围)人抗体(Murks等(1992)Bio/Technology10:779-783)，以及作为构建非常大的噬菌体文库的方案的组合感染和体内重组(Waterhouse等(1993)iVwc/e/c.v4c/^i"21:2265-2266)。因此，这些技术是用于分离单克隆抗体的传统单克隆抗体杂交瘤技术的可行替代方式。人源化抗体从非人来源引入了一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基常常称作"供体"残基，它们一般取自"供体"可变区。可基本按照Winter和同事的方法(Jones等(1986)Nature321:522-525;Riechmann等(1988)Nature332:323-327;Verhoeyen等(1988)Science239:1534-1536)、用啮齿动物CDR或CDR序列取代人抗体的相应序列进行人源化。参见例如，美国专利5,225,539;5,585,089;5,693,761;5,693,762;5，859，205。因此，这种"人源化"抗体可包括远远达不到完整的人可变区被非人种类的相应序列取代的抗体。在实践中，人源化抗体一般是一些CDR残基、也可能是一些构架残基被啮齿动物抗体中类似位点的残基取代的人抗体。参见例如，美国专利5,225,539;5,585,089;5,693,761;5,693,762;5,859,205。也参见美国专利号6,180,370和国际公开号WO01/27160，其中公开了人源化抗体和产生对预定抗原的亲和力提高的人源化抗体的技术。开发了产生抗体片段的各种技术。传统上，通过蛋白水解消化完整抗体产生这些片段(参见例如，Morimoto等(1992)Jowmfl/o/5,oc/zew/ca/5/op/z;as7.cfl/Af"/zoiis24:107-117(1992)和Brennan等(1985)<Sc/ece229:81)。然而，现在这些片段可由重组宿主细胞直接产生。例如，可从上述抗体噬菌体文库中分离抗体片段。或者，可从大肠杆菌(五."//)直接回收？&1'-811片段并经化学偶联形成？(&13')2片段(0&1^等(1992)所o/rec/mo/ogy10:163-167)。根据另一种方法，可从重组宿主细胞培养物直接分离F(ab')2片段。本领域技术人员了解产生抗体片段的其它技术。而且，用于本发明方法之前，任何前述抗CD20抗体均可偶联。本领域可获得这种偶联抗体。因此，可用间接标记或间接标记法标记抗CD20抗体。"间接标记"或"间接标记法"指将螯合剂共价连接于抗体，将至少一种放射性核素插入该螯合剂。参见例如，Srivagtava和Mease(1991)7Vwc/.Med历o.18:589-603所述的螯合剂和放射性核素。或者，可用"直接标记"或"直接标记法"标记抗CD20抗体，其中将放射性核素直接共价连接于抗体(一般通过氨基酸残基)。Srivagtava和Mease(1991)同上中提供了优选的放射性核素。尤其优选间接标记法。也参见例如，美国专利号6,015,542所述的抗CD20抗体的标记形式。一般用标准技术在药学上可接受的缓冲液如无菌盐水、无菌缓冲液、丙二醇、上述缓冲液的组合等中提供抗CD20抗体。制备可胃肠道外给药的药物的方法参见《雷明顿药物科学》(Remington'sPharmaceuticalSciences)(第18版；MackPub.Co.:Eaton，Pennsylvania,19卯)。也参见例如国际公开号WO98/56418，它描述了适用于本发明方法的稳定的抗体药物制剂。该公开内容描述了含有40mg/mL利妥昔单抗、25mM乙酸盐、150mM海藻糖、0.9%节醇、0.02%聚山梨酯20、pH5.0，2-8°C储存时最小贮存期为2年的液体多剂剂型。感兴趣的另一种抗CD20制剂含有9.0mg/mL氯化钠配制的10mg/mL利妥昔单抗、7.35mg/mL二水合柠檬酸钠、0.7mg/mL聚山梨酯80和注射用无菌水，pH6.5。国际公开号WO97/04801描述了适合用于皮下给药的冻干制剂。可用合适的稀释剂将这种冻干制剂重建至高蛋白浓度，可将该重建的制剂皮下给予待治疗哺乳动物。给药给予至少一个治疗有效剂量的化疗药、IL-2或其变体和任选的抗CD20抗体。这些药物各自的"治疗有效剂量或量"指与其它药物联用时，对B细胞淋巴瘤，尤其是NHL患者产生阳性治疗反应的用量。尤其感兴趣的是如本文所述产生抗肿瘤作用的这些药物的用量。"阳性治疗反应"指接受本发明联合治疗的个体的一种或多种B细胞淋巴瘤症状(这是该个体接受治疗的原因)有改善。因此，例如，"阳性治疗反应"是与联合治疗有关的疾病改善和/或与联合治疗有关的该疾病的一种或多种症状改善。因此，例如，阳性治疗反应指以下一种或多种疾病改善(l)肿瘤体积减小；(2)癌细胞数量减少；(3)抑制(即减缓到某种程度，优选中止)肿瘤生长；(4)抑制(即减缓到某种程度，优选中止)癌细胞浸润到周围器官中；(5)抑制(即减缓到某种程度，优选中止)肿瘤转移；和(6)某种程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。这些治疗反应可被进一步表征为改善程度。因此，例如，改善可表征为完全反应。"完全反应"指经体检、实验室、核和射线照相研究(即CT(计算机体层摄影)和/或MRI(磁共振成像))以及对所有初始异常或进入研究时的阳性部位进行的其它非侵入性方法验证的所有可测定或可评价疾病的所有症状和病征的消失。或者，疾病改善可归类为部分反应。"部分反应"指与预处理测量值相比，所有可测量损伤的正交直径之积的总和降低50%以上(对于仅有可评价反应的患者，部分反应不适用)。在某些实施方式中，用治疗活性方案给予多个治疗有效剂量的各种化疗药、IL-2或其变体和任选的抗CD20抗体。可按照每日给药方案或间歇性给予IL-2。By"间歇性"给药指可以(例如)每隔一天、每两天、每三天(等)给予治疗有效剂量。例如，在一些实施方式中，在一段延长时间如l、2、3、4、5、6、7、8...10...15周等内IL-2每周给药两次或每周给药三次。例如，每周一次或每周两次地间歇性给予抗CD20抗体，重复该周期。在一些实施方式中，在一段延长时间如1、2、3或4周内抗CD20抗体每周给予一次或两次。"每周两次"指在7天内将所研究药物的两个治疗有效剂量给予对象，从给药第一周的第l天开始，给药间隔最少72小时、最大96小时。"每周三次"指在7天内将三个治疗有效剂量给予对象，给药间隔最少48小时、最大72小时。出于本发明目的，这种类型的给药称为"间歇性"治疗。按照本发明方法，对象可接受一周或多周的间歇性治疗(即每周给予治疗有效剂量两次或三次)，直到达到所需治疗反应。可通过下述任何可接受的给药途径给予药物。可在给予化疗药和/或抗CD20抗体之前、同时或之后给予IL-2或其变体。例如，可釆用化疗药如CHOP和抗CD20抗体进行初次治疗，然后用IL-2和抗CD20抗体治疗一次或多次。如果与化疗药和/或抗CD20抗体同时提供，可在相同或不同的组合物中提供IL-2或其变体。因此，可通过同时治疗的方式将这三种药物或其中两种药物递送给个体。"同时治疗"指给予人对象，以便在接受治疗的对象中引起联用这些物质的疗效。例如，可通过给予至少一个治疗有效剂量的含有IL-2或其变体的药物组合物实现同时治疗，可给予至少一个治疗剂量的化疗药如CHOP。类似地，可按照具体的给药方案给予至少一个治疗有效剂量的含有至少一种抗CD20抗体或其抗原结合片段的药物组合物。可在相同时间(即同时)或不同时间(即连续、依任一顺序、在同一日或在不同日)给予单独的药物组合物，只要在接受治疗的对象中引起联用这些物质的疗效。在本发明其它实施方式中，含有药物如IL-2或其变体的药物组合物是持续释放制剂或用持续释放装置给予的制剂。这种装置是本领域熟知的，包括例如透皮贴剂和微型可植入泵，这种泵可在一定时间内以连续、稳态方式递送不同剂量的药物，以便用非持续释放的药物组合物实现持续释放效果。可按照本领域已知的任何医学上可接受的方法用相同或不同的给药途径给予含有化疗药或药物、抗CD20抗体和IL-2或其变体的药物组合物。合适的给药途径包括胃肠道外给药，如皮下(s.c)、腹膜内(i.p.)、肌肉内(i.m.)、静脉内(i.v.)或输注、口服(p.o.)和肺部、鼻、局部、透皮和栓剂。通过肺部递送给予该组合物时，调整治疗有效剂量，以使该药物如IL-2或其变体在血流中的溶解水平等于用经胃肠道外给药如s.c.、i.p.、i.m.或i.v.的治疗有效剂量获得的水平。在本发明的一些实施方式中，通过i.m.或s.c.注射，特别是局部给予用于癌症治疗方案的治疗剂或药物的区域的i.m.或s.c.注射给予含有IL-2或其变体的药物组合物。类似地，可通过i.v.、i.m.、i.p.或s.c.注射给予抗CD20抗体。在尤其优选的实施方式中，例如，静脉内给予化疗药。静脉内给药时，可用约0.5-10小时、如约2-8小时、如约3-7小时、如约4-6小时或约6小时中输注给予含有化疗药或抗CD20抗体的药物组合物。在一些实施方式中，用约0.5-2.5小时、约0.5-2.0小时、约0.5-1.5小时或约1.5小时进行输注，所需时间取决于所给药物。在一个具体实施方式中，通过静脉内注射给予所述化疗药一次，在给予所述化疗药的同一天给予第一个剂量的IL-2或其变体和任选的抗CD20抗体。随后进行采用IL-2和任选的抗CD20抗体的间歇性治疗。或者，在给予所述化疗药和任选的抗CD20抗体之前可通过递送1-5或更多剂量如2或3个剂量用IL-2或其变体预先治疗患者。给予的各种组合物的量的影响因素包括但不限于给药方式、给药频率(即每曰或间歇性给药如每周两次或三次)、所用的具体化疗方案、进行治疗的具体疾病、疾病严重程度、病史、该个体是否同时接受另一种治疗剂的治疗，以及接受治疗的个体的年龄、身高、体重、健康状况和身体情况。通常，随着接受治疗的对象的体重增加，优选采用较高剂量的药物。参见例如，Gluck等，C"".Ca"cer7"(2004)10:2253-2264;共待审美国专利公开20030185796和共待审美国专利申请号60/491，371公开的治疗方案，将其全部内容纳入本文作参考。IL-2(天然序列或保持IL-2生物学活性的天然序列变体，如本文所述突变蛋白)给药量范围可以是约0.1-15mIU/m2。参见Gluck等，Clin.CancerRes.(2004)10:2253-2264；共待审美国专利公开20030185796和共待审美国专利申请号60/491，371中IL-2和利妥昔单抗治疗B细胞淋巴瘤和CLL的推荐剂量。就抗体而言，给予患者的剂量一般是0.1mg/kg-100mg/kg患者体重。优选地，给予患者的剂量为0.1mg/kg-20mg/kg患者体重，更优选1mg/kg-10mg/kg患者体重。例如，给予人对象的抗CD20抗体剂量可以是i.v.输注递送100mg/m2-750mg/m2，通常是200mg/m2-500mg/m2，更优选300mg/m2-400mg/m2，如300...310...320...330...340...350...360...370...375...380...390...400等，或者所述范围之间的任何整数。参见Gordon等，J.Clin.Oncol.(2005年1月)。通常，由于对外来多肽的免疫应答，人抗体在人体内的半衰期比来自其它物种的抗体长。因此，常常可能给予较低剂量的人抗体且给药频率较低。而且，可通过修饰如脂化提高本发明抗体的摄取和组织渗透，从而降低给予该抗体的剂量和频率。本领域已知用于本发明的合适剂量和化疗组合物。例如，可以如全文纳入本文作参考的Mohammad等，Clin.CancerRes.(2000)6:4950;McKelvey等，Cancer(1976)38:1484-1493;Armitage等，J.Clin.Oncol.(1984)2:898-902;Skeel,R.T.,《癌症化疗手册》(HandbookofCancerChemotherapy),第三版，Little,Brown&Cp.,1991:343;和美国专利6,645,983;6,455,043;6,593,342所述给予CHOP和其单个组分。给药途径一般是i.p.i.v.或p.o.。方案可以是每天(qd)(如上所述)、每隔一天(q2d)等，如在8天中每天给药品(qdx8)，q4dx3(在第1、5、9天等给予3个剂量)。CHOP组分的剂量一般如下环磷酰胺，至多200mg/kg单剂量i.v.或i.p.；长春新碱，0.2-0.5mg/kg单剂量或1dx8i.p.或i.v.;泼尼松，八为单一药稀至多10mg/kg/天p.o.。可用于人的另一种方案如下环磷酰胺(CTX)750mg/m2i.v.,D1，多柔比星(DOX)50mg/m2i.v.,D1，长春新碱(VCR)1.4mg/m2i.v.,D1，泼尼松(Pred)100mg/天p.o.,D1-5,21天周期。对于CHOP-BLEO，典型方案是CTX750mg/m2i.v.,D1,DOX50mg/m2i.v.,D1,VCR2mgi.v.,D1,5,Pred100mg/天p.o.,D1-5,博来霉素(BLEO)15单位/天i.v.,D1-5,14或21天周期(参见例如，Rodriguez等，BLOOD(1997)49325-333)。对于COMLA，典型方案是CTX1500mg/m2i.v.,D1,VCR1.4mg/m2i.v.,Dl,8,15，甲氨蝶呤(MTX)120mg/m2i.v.，D22,29，36,43,50,57,64，71,甲酰四氢叶酸(Leu)25mg/m2p.o.，D23,30,37，44，51,58,65,72q6hx4剂量(从MTX后24小时开始)，阿糖胞苷(ARA-C)300mg/m2i.v.，D22，29,36，43，50，57,64，71，91天周期(参见例如，Gaynor等，/C//".0腳/.(1985)2:1596-1604。对于COP，典型方案是CTX400-800mg/m2i.v.，Dl，VCR2mgi.v.，Dl，Pred60mg/m2/天p.0.，Dl-5，然后剂量递减至40、20、10mg/天，14天周期(参见例如，Luce等，Cancer(1971)28:306-317。对于CVP-1，典型方案是CTX400mg/m2p.o.，Dl-5，VCR1.4mg/m2i.v.，Dl，Pred100mg/m2/天p.o.，Dl-5，21天周期(参见例如，Bagley等，」""./"/em.Med(1972)76:227-234。对于DHAP，典型方案是顺钼(CDDP)IOOmg/m2c丄v.24小时，Dl，ARA-C2g/mg/m2i.v.3小时，D2，地塞米松(DEX)40mg/天p.o.或i.v.，D1-44天，3-4周周期(参见例如，Velasquez等，5/ood(1988)71:117-122)。，对于ESAP，典型方案是甲泼尼龙(SOL)500mg/天i.v.，Dl-4，依托泊甙(VP-16)40mgZm2/天i.v.，Dl-4，ARA-C2g/m2i.v.2小时，D5，完成CDDP后，CDDP25mg/m2/天x4c.i.v.，Dl-4(总剂量100mg)，耐受周期(参见例如，Velasquez等，Aco.(1989)§:256)。对于MACOP-B，典型方案是MTX400mg/m2i.v.，第2、6禾卩10周，Leu15mgp.o.q6hrx6齐ij量，从MTX后25小时开始，DOX50mg/m2i.v.，第1、3、5、7、9、11周，CTX350mg/m2i.v.，第1、3、5、7、9、11周，VCR1.4mg/m2i.v.，第2、4、6、8、10、12周，BLEO10单位/m2i.v.，第4、8、12周，Pred75mg/天，p.o.，在最后15天递减(参见例如，Connors.等编，《治疗弥散性大细胞淋巴瘤的新方案》(UpdateonTreatmentforDiffuseLargeCellLymphoma)Wiley和Sons(1986):37-43)。对于MIV，典型方案是米托蒽醌(DHAD)IOmg/m2i.v.，Dl，异环磷酰胺(IFF)1500mg/m2/天i.v.，D1-3MESNA，VP-16150mg/m2/天i.v.，Dl-3，21天周期(参见例如，Herbrecht等，/Voc.Aco.(1991)10:278)。对于m-BACOD，典型方案是MTX200mg/m2i.v.，D8,15，Leu10mg/m2p.o.，D9，16q6hx8剂量，从MTX后24小时开始，DOX45mg/m2i.v.，Dl，CTX600mg/m2i.v.，Dl，VCR1mg/m2i.v.，Dl，DEX6mg/m2/天p.o.，Dl-5,3周周期(参见例如，Shipp等，爿朋.MW.(1986)104:757-765。对于PROMACE-CYTABOM，典型方案是Pred60mg/m2/天p.o.，Dl-14,DOX25mg/m2i.v.，Dl，CTX650mg/m2i.v.，Dl，VP-16120mg/mM.v.，D15ARA-C300mg/m2i.v.，D8,BLEO5单位/m2i.v.,D8，VCR1.4mg/m2i.v.，D8，MTX120mg/m2i.v.，D8，Leu25mgp.o.，D9q6hx4齐糧，从MTX后24小时开始，21天周期，从D22开始下一周期(参见例如，Fisher等，尸rac.Aco.(1984):242摘要)。对于VACOP-B，典型方案是VP-1650mg/m2i.v.，Dl禾口100mg/m2/天p.o.，第3、7、11周的D2,3，DOX50mg/m2i.v.，第1、3、5、7、9、11周，CTX350mg/m2i.v.，第l、5、9周，VCR1.2mg/m2i.v.，第2、4、6、8、10、12周，Pred45mg/m2p.o.，qDxl周，然后qODxll周，BLEO10单位/m2i.v.，第2、4、6、8、10、12周(参见例如Connors等/Voc.Aco.(19卯)9:254)。本领域技术人员不难确定这些和其它方案的其它合适的化疗剂量。参见例如，Freedman和Nadler，"非霍奇金淋巴瘤"，《癌症医学》(Ca"cerMW/c/"e)，第2巻，第6章，Holland和Frei(编)。当接受上述给药方案治疗的对象产生部分反应，或在延长缓解期后复发，随后可能需要同时治疗过程，以完全缓解该疾病。因此，第一次疗程后的一段时间后，对象可接受一个或多个附加疗程，包括IL-2与抗CD20抗体联合治疗和/或给予化疗药。在本文中，将疗程之间的时期称为中止期。应了解，中止期的长短取决于这些治疗剂同时治疗的任何在先疗程获得的肿瘤反应程度(即完全与部分)。III.实验下面是实施本发明的具体实施方式举例。仅为展示目的举例，而不意于在任何方面限制本发明。尽力确保有关所用数字的准确性(如数量、温度等)，当然也允许实验误差和偏差。材料和方法A.IL-2所用IL-2制剂由加州Emeryville的ChironCo卬oration生产，商品名为Proleuki,。这种制剂中的IL-2是重组产生的非糖基化人IL-2突变蛋白，称为阿地白介素，它与天然人IL-2氨基酸序列的不同之处在于消除了第一个丙氨酸残基，并且位置125上的半胱氨酸残基被丝氨酸残基取代(称为脱丙氨酰-l、丝氨酸-125人白介素-2)。在大肠杆菌中表达这种IL-2突变蛋白，随后用渗滤法和阳离子交换色谱纯化，如美国专利号4,931,543所述。商品名为Proleuki^的IL-2制剂是白色-灰白色无防腐剂的无菌冻干粉末，装在含有1.3mg蛋白质(22MIU)的药瓶中。B.抗CD20抗体所用抗CD20抗体是利妥昔⑧(利妥昔单抗；IDEC-C2B8;IDECPharmaceuticalsCoip.，加州圣地亚哥)("R")。C.CHOP所用的CHOP组分(环磷酰胺，C;多柔比星，H;长春新碱，0;和泼尼松，P)如下-Cytoxan(C，环磷酰胺)注射用粉末-静脉内-冻干粉末500mg冻干的Cytoxan,Bristol-MyersSquibb。多柔比星(H)溶液-静脉内-2mg/ml阿霉素，BedfordLaboratories长春新碱(O)溶液-静脉内-1mg/ml硫酸长春新碱，SICORPharmaceuticalsInc.泼尼松(P)溶液-口服-5mg/5ml泼尼松，RoxaneLaboratoriesInc.D.细胞系人B细胞NHLDaudi细胞系获自美国典型培养物保藏中心(弗吉尼亚州马纳萨斯)。用补充有10。/。热灭活胎牛血清(FBS，GibcoLifeTechnologies,Ga他ersburg，MD)的RPMI培养细胞。将细胞培养成悬浮培养物，维持在37"C和5y。C02的湿润大气中。釆用指数生长期、活力大于98%(用台盼蓝排除法测定)并确定无支原体的细胞。E.小鼠无胸腺BALB/c裸小鼠(4-6周龄)获自CharlesRiverLaboratories,Inc.(马萨诸塞州威尔明顿)并适应l周，然后开始研究。小鼠随意接受无菌啮齿动物饲料和水，在顶部装有无菌滤器的笼子中以12-小时明/暗周期饲养。所有体内研究都符合动物护理和使用委员会和实验室动物护理和处理指南的要求。F.体内效力研究以及肿瘤抑制和反应的评价用总体积0.1ml的50。/o基质胶(BDBiosciences)重建传代的克隆衍生Daudi细胞(5x106个细胞/小鼠)，并皮下植入经辐射(3Gy)的BALB/c裸小鼠的右侧。平均肿瘤体积达到150-300mm3时开始治疗。一般，将小鼠随机分组，每组10只小鼠。对于给予CHOP的小组，这种治疗由第1天给予40mg/kg环磷酰胺，i.v.;3.3mg/kg多柔比星，i.v.;0.5mg/kg长春新碱，i.v.;和第l-5天给予0.2mg/kg泼尼松，p.o.组成(Mohammad等(20(B)Mo/.Omcw77^.2:1361-8)。用游标卡尺测定肿瘤体积。用下式将肿瘤的游标卡尺测定值转化成肿瘤体积(mm'/2(长(mm)x[宽(mm)]2)。用[l-(治疗组的平均肿瘤体积/对照组的平均肿瘤体积)xlOO]计算肿瘤生长抑制率(TGI)。将反应分为完全反应(CR，无可测定肿瘤)、部分反应(PR，与开始治疗时各动物的肿瘤体积相比，肿瘤体积减小50-99%)、最小反应(MR，最多抑制第1天初始肿瘤体积的25-50%)、稳定疾病(SD，肿瘤生长为初始肿瘤体积的+/-25%)。用下式进行肿瘤生长延迟(TGD)分析[(治疗组的平均肿瘤体积达到1000mm3的天数)-(对照组的平均肿瘤体积达到1000mmS的天数)]。条件存活百分数是各组中肿瘤体积未达到1000mm3的小鼠的百分数。G.统计学分析用单向方差分析(ANOVA)进行多重比较；用Student-NewmanKeuls检验(SigmaStat)完成事后检验，以比较不同治疗方式。各动物的肿瘤生长延迟(至1000mm3的时间)用作条件存活的终点，用LogRank(对数秩)检验(Prism)分析治疗组之间的显著性。中止研究后尸检没有发现肿瘤的小鼠被认为通过此分析的检査。p<0.05时认为有统计学显著性差异。协同反应定义为各治疗的预计抑制。/。(。/。T/C治疗1X%T/C治疗2)除以联合治疗组的。/。T/C观察值的比值〉l(Yokoyama，Y.等，C獻erL(2000)60:2190-2196)。实施例1治疗人B细胞淋巴瘤的各种IL-2/CHOP/利妥昔单抗方案的评价在人B细胞淋巴瘤的Daudi异种移植瘤模型中评价了IL-2(Pr0leukin)、利妥昔单抗禾PCHOP联合用药，如下所述。参见例如，Hudson等，Leidemfa(1998)12:2029-2033描述的Daudi异种移植瘤模型。Daudi/BALB/c裸小鼠模型表达高水平的CD20，并且与侵占性较低/低级疾病特征相关联。而且，在没有细胞因子如IL-2活化的情况下NK细胞不能裂解Daudi肿瘤细胞。参见例如，Damle等，//扁腳/.(1987)138:1779-1785。使120只无胸腺BALB/c裸小鼠适应1周，以接种Daudi人B-细胞系。用体积为0.1ml的50%基质胶将Daudi细胞(5x106个细胞/小鼠)皮下植入(右侧)经辐射的幼年裸小鼠(3Gy约3.2分钟)，使其生长为皮下肿瘤，直到肿瘤体积达到110mm3。此时指定为研究日1。按照已知的临床剂量方案(参见Mohammad等，C7/w.Owcwi^.(2000)6:4950)模拟CHOP和利妥昔单抗给药，肿瘤建立时(150-200mm3)开始治疗。治疗组包括单用CHOP(C，40mg/kg，i.v;H，3.3mg/kg，i.v;O，0.5mg/kg，i.v，以上都在第8天给药；P，0.2mg/kg，在第8-12天给药)或者从第8天开始单独给予利妥昔单抗(R)(IOmg/kg，每周一次，i.p)的4周周期或CHOP与4周周期的利妥昔单抗联用。Proleukii^治疗(1mg/kg;s.c，每周三次)同时(第8天)或一周后(第15天)开始，共4周。参见表1和图1A-1C。每周测定肿瘤体积和体重两次。记录临床观察结果。表1第l-7天第8天1.未处理载体se.0.2ml3xAvk2.未处理CHOPiv.，仅第8天3.未处理IL-2(Proleukin)1mg/kgsc.3x/wkx4wk,第8天4.未处理利妥昔单抗10mg/kgip.lx/wkx4wk，第8天5.未处理CHOPiv.第8天+利妥昔单抗10mg/kgip.lx/wkx4wk，第8天6.未处理IL-2lmg/kgsc.3x/wk第8天+利妥昔单抗10mg/kgip,lx/wkx4wk，第8天7.未处理CHOPiv.第8天+IL-21mg/kgsc.3x/wkx4wk第8天+利妥昔单抗10mg/kgip.lx/wkx4wk第8天8.未处理CHOPiv.第8天+利妥昔单抗10mg/kglx/wkx4wk，第8天+IL-2sc.3x/wkx4wk/,第15天9.IL-2(第1,3,5天)利妥昔单抗10mg/kgip.lx/wkx4wk,第8天10.IL-2(第1,3,5天)CHOPiv.第8天+利妥昔单抗10mg/kgip.lx/wkx4wk,第8天11.IL-2(第1,3,5天)CHOPiv.第8天+IL-2lmg/kgsc.3x/wkx4wk，第8天+利妥昔单抗10mg/kgip.6lx/wkx4wk,第8天12.IL-2(第1,3,5天)CHOPiv.第8天+利妥昔单抗10mg/kgip.lx/wkx4wk，第8天+IL-21mg/kgsc.3x/wkx4wk，第15天结果见图1-13以及表2和3。具体说，在Daudi异种移植瘤模型中，与载体治疗组相比，以测试的剂量方案单用IL-2、CHOP、利妥昔单抗(R)以及联用IL-2/利妥昔单抗、CHOP/利妥昔单抗和IL-2/利妥昔单抗都显著抑制了肿瘤生长(p0.001，第29天进行ANOVA)(图1-4;表2和3)。与单用IL-2、利妥昔单抗相比，IL-2/利妥昔单抗显著抑制肿瘤生长并延迟肿瘤体积达到1000mm3的时间(肿瘤生长延迟，TGD)(pO.Ol，LogRank,TGD，p<0.05，第29天进行ANOVA)(图4，表3;IL誦2/第3组与IL-2和利妥昔单抗/第6组)。根据延迟至肿瘤进展的时间和可评价反应的数量(IL-2/R^6CR;CH0P=1CR)，与单用CHOP相比，IL-2和利妥昔单抗联合治疗的效力显著提高。而且，IL-2/R联合治疗与CHOP/R治疗在肿瘤生长抑制(TGI)和至1000mm3TGD分析中的效力相等(LogRank，至1000mm3的TGD，p=0.274;第29天的ANOVA，p:0.579)(图5和6)。CHOP/R显著抑制肿瘤生长(99%肿瘤生长抑制，TGI;5/10CR)，它优于单用R(63%TGI，1CR)或CHOP(77%TGI，1CR)(图7和8)。显然，将IL-2加入CHOP/R(在D8或D15开始，参见实验设计)能诱导显著的肿瘤消退，分别为7/10和9/10CR，并且优于CHOP/R(p0.05)(图9-12)。而且，与单用CHOP/R相比(90天)，将IL-2加入CHOP/R能显著增加至肿瘤进展时间(>164天)(图9-12)。所有剂量的受试药物都耐受良好(图13)。总之，CHOP/R后接IL-2/R是安全、有效的，预计与单用CHOP或CHOP/R相比有利于延迟至肿瘤进展时间。预计这些发现能应用于化疗与其它抗体联用和/或通过其它免疫刺激性细胞因子/药物介导的过程。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>ANOVA/Student-Newman-Keul检验BAI^显著(bright)，警告，反应表3<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>实施例2用IL-2、CHOP和CHOP组分联合治疗在上述人B细胞淋巴瘤的Daudi异种移植瘤模型中评价了用IL-2(Proleukii^)与CHOP和IL-2与CHOP各单个组分(环磷酰胺，C;多柔比星，H;长春新碱，0;和泼尼松，P)的联合治疗。使无胸腺BALB/c裸小鼠(10只小鼠/组)适应环境并进行辐射，将上述Daudi细胞植入小鼠。肿瘤约为140mm、寸开始治疗。此时称为研究日1。按照已知的临床剂量方案(参见Mohammad等，C"".(2000)6:4950)模拟CHOP给药。治疗组如下环磷酰胺(C，环磷酰胺)，40mg/kg，i.v，第l天；多柔比星(H，阿霉素)，3.3mg/kg，i.v，第l天；长春新碱(O),0.5mg/kg，i.v，第l天；泼尼松(P)，0.2mg/kgp.o，第l-5天；CHOP(C，40mg/kg，i.v;H，3.3mg/kg，i.v;O，0.5mg/kg，i.v禾卩P，0.2mg/kg，p.o，都在第l天给药)Proleukin(IL-2)，1mg/kg;s.c，每周给药三次，共四周，共计12个剂量；Proleukii^(IL-2)+—种化疗药(单独给药，从第1天开始)；ProleukiiAlL-2)+CHOP(与一种药物的给药方案类似，从第1天开始)。受试剂量的单独IL-2、化疗药或与环磷酰胺、多柔比星、长春新碱或泼尼松联用耐受良好。在此模型中，单独IL-2显示出稍有肿瘤生长抑制作用(与载体相比14%，p=0.37)。根据肿瘤生长抑制、反应和生长延迟分析，用IL-2+环磷酰胺(图14和表4)和IL-2+长春新碱(图16和表6)观察到大于加成的效果。IL-2+多柔比星(图15和表5)和IL-2+泼尼松(图17和表7)联用显示出加成反应。与单用Proleukir^或泼尼松相比，IL-2+泼尼松分别显示出21%和24%抑制。IL-2+泼尼松的结果表明，免疫抑制剂如泼尼松与所用剂量方案的联用可能不破坏功效。最后，虽然IL-2+CHOP单独组分有效，但根据肿瘤生长抑制程度、反应和生长延迟分析，IL-2+CHOP联用的功效优于单用一种药物(图18和表8)。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>表5<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>表6<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>表7<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>表8<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>表9显示了来自1次或2次独立研究的其它数据。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>『來自1次或2次独立研究的10-20只小鼠/组;实施例3治疗后血液和脾脏中细胞群体的分析为了阐明协同作用的机理基础，检测了CHOP-R/IL-2治疗后关键免疫效应细胞群的药效学反应。肿瘤约为300mmS时开始治疗。此时称为研究日1。在第1天用CHOP或CHOP-R治疗Daudi肿瘤荷瘤BALB/c裸小鼠。在第8天开始用IL-2/R治疗进行免疫重建。在所示处理后不同时间，从5只小鼠/组收集血液和脾脏。将全血(100nl)转移到FACS/TruCount试管(BDBiosciences)中，置于冰上。以5x106/ml的密度悬浮分离的脾细胞制备物；在96孔板中用抗体处理并染色5x105个细胞/样品，如下所述。用0.5吗小鼠Fc部件(抗小鼠CD16/CD32;BDBioSciences)处理样品，在冰上孵育20分钟。将下述荧光素偶联抗体加入样品中，在冰上避光孵育20分钟。涡旋血样，同时加入2mllxFACS裂解溶液(BDBiosciences),然后室温孵育10分钟，接着1250rpm离心。所有样品洗涤两次，悬浮于PBS+2%FBS中，4。C保存，然后在BDFACSCalibur上获取样品，随后用CellQuestPro软件进行分析。根据TruCount珠参比确定绝对细胞数量。用不同抗体鉴定总淋巴细胞(CD45，BDBiosciences)、单核细胞(F4/80;CalTag;BurlingameCA)和NK细胞(DX5，BDBioSciences)。再染色淋巴细胞中的B细胞(CD19)和T细胞(CD4、CD8)。通过染色II类MHC强度(BDBioSciences)检测活化单核细胞。CHOP、IL-2和利妥昔单抗治疗如上所述。图19显示了单用CHOP的结果。在第4天进行血细胞计数。如图19所示，CHOP治疗耗尽了血液中的单核细胞和淋巴细胞群体。图20显示了IL-2、IL-2+利妥昔单抗、CHOP+利妥昔单抗和CHOP+利妥昔单抗+IL-2的结果。在第15天测定细胞。如图所示，用CHOP+利妥昔单抗+IL-2治疗后提高了脾脏对活化单核细胞的消耗。图21显示了IL-2、IL-2+利妥昔单抗、CHOP+利妥昔单抗和CHOP+利妥昔单抗十IL-2的结果。在第15天对全血NK细胞进行计数。如图所示，用CHOP+利妥昔单抗+IL-2处理后血液NK细胞数量增加。图22显示了IL-2、IL-2+利妥昔单抗、CHOP+利妥昔单抗和CHOP+利妥昔单抗+化-2的结果。在第15天对全血活化单核细胞进行计数。如图所示，用CHOP+利妥昔单抗+IL-2处理后活化单核细胞数量增加。实施例4治疗后Daudi肿瘤的组织学和免疫组化分析也通过测定在体内将免疫效应细胞运输到Daudi肿瘤内检测药物治疗的药效。对用CHOP、IL-2和利妥昔单抗的各种组合治疗的动物的Daudi肿瘤进行组织学和免疫组化分析。具体说，使无胸腺BALB/c裸小鼠(10只小鼠/组)适应环境并进行辐射，将上述Daudi细胞植入小鼠。肿瘤约为300mm、寸开始治疗。此时称为研究日1。给予CHOP、IL-2和利妥昔单抗治疗的方案如下CHOP,第l天；利妥昔单抗，第l天和第8天；IL-2，第8、10和12天。切下肿瘤，用10%福尔马林中性缓冲液固定，转移到70%乙醇中，随后用Excelsior组织处理器(ThermoElectronCorporation,美国宾西法尼亚州匹兹堡)处理，以进行石蜡包埋。在轮转切片机(RM2235，LeicaMicrosystems,Nussloch，德国)上切出组织切片(4nm)。制备苏木精和伊红(H&E)染色的切片。用DiscoveryXT自动玻片染色系统(VentanaMedicalSystems,美国亚利桑那州图森)进行免疫组化染色。所用的第一抗体为用于检测单核细胞和巨噬细胞的F4/80(Serotec)，用于检测NK细胞的抗穿孔蛋白抗体(1:800稀释，ResearchDiagnostics,Inc.,新泽西州佛兰德)，用于检测凋亡的切割胱冬酶3抗体(Ab-2，1:10稀释，OncogeneResearchProducts,马萨诸塞州波士顿)，用于检测细胞增殖速率的Ki-67(K-2，纯，VentanaMedicalSystems)和用于检测同种型对照的兔IgGl(ChromPure，JacksonImmunoResearchLaboratories,Inc.,WestGrove，PA)。用CC1(VentanaMedicalSystems)进行热诱导表位回收。然后用合适的第二抗体(兔抗小鼠IgGl生物素化抗体，1:100稀释，ResearchDiagnostics;或山羊抗兔IgG生物素化抗体，1:100稀释，JacksonImmunoResearchLaboratories)孵育样品。辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素-生物素系统与3-3'-二氨基联苯胺色原(VentanaMedicalSystems)用于定位。切片用苏木精复染，以改善组织形态的观察效果。H&E分析显示紧密充满(packed)的肿瘤细胞，载体治疗组中还有少量退化细胞，CHOP和CHOP-R组中数量稍多(图23a-c)。在〉50%肿瘤区域中，CHOP-R/IL-2肿瘤显示了退化的组织、浸润的单核细胞和纤维化间质组织(图23d)。通过染色穿孔蛋白鉴定活化的免疫效应细胞，假定是NK/LAK细胞(BALB/c裸小鼠没有T细胞)。在载体、CHOP或CHOP-R治疗的肿瘤中零星分布着非常少的NK细胞(图23e-g)，在CHOP-R/IL-2治疗组中检测的NK细胞数量稍多(图23h)。采用F4/80免疫染色检测肿瘤中的巨噬细胞。与零星的NK细胞浸润相反，发现用利妥昔单抗、IL-2+R、CHOP-R和CHOP-R+IL-2治疗的肿瘤中沉积了较多数量的巨噬细胞，在大多数情况下，这些巨噬细胞主要出现在肿瘤外围和/或与退化细胞区域连续的区域(图23i-l)。为了解释Daudi肿瘤对CHOP-R/IL-2治疗反应的机制，对肿瘤切片进行标记染色，以检测凋亡和增殖细胞(图24a-h)。用切割胱冬酶-3免疫染色作为凋亡标记物评价肿瘤细胞死亡情况(图24a-d)。虽然所有药物治疗组中切割胱冬酶-3阳性细胞的数量稍有增加，鉴于用IL-2/CHOP-R治疗的坏死面积较大，所以在活组织单位面积上用IL-2/CHOP-R治疗引起的凋亡细胞数量远远大于其它治疗组。此外，将Ki67切片染色作为肿瘤细胞增殖标记物验证了用IL-2/CHOP-R治疗提高了抗肿瘤作用，与到第15天产生强大和快速的早期反应一致(图24e-h)。在IL-2/R(未显示)和CHOP-R治疗组中也发现了Ki67水平降低，但没有IL-2/CHOP-R治疗组显著(图24h)。总之，如上所述给予CHOP+利妥昔单抗+IL-2能在Daudi肿瘤中诱导凋亡并降低增殖活性。发现CHOP+利妥昔单抗+IL-2的机制与组织学和IHC终点紧密相关，这表明对抗Daudi肿瘤的抗增殖和凋亡活性增加。实施例5评价联合治疗组的协同活性在Daudi淋巴瘤模型中对这些药物和这些药物的联用进行了几项研究。然后汇集来自多个实验的数据进行进一步分析(表10)。用多种药效分析法由联合治疗的反应指数评价体内药物协同作用。表IO.在Daudi异种移植瘤模型中IL-2、利妥昔单抗、化疗或其它联合用药的效力<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>+IL-2、=各研究中10只小鼠/组。在多个独立研究中测试治疗的情况下，合并数据。在这些研究中，肿瘤达到100-250mm3时开始治疗。b联合治疗的预计肿瘤生长抑制。/。(c/。T/Cexp二。/。T/C治疗1x%T/C治疗2)除以联合治疗的y。T/C观察值(。/。T/Cobs)的比率M时，定义为协同作用。％T/Cexp/%T/Cobs=l是定义为加成作用，％T/Cexp/%T/Cobs<1时定义为拮抗作用。在BALB/c裸小鼠Daudi模型中，单种药物环磷酰胺、多柔比星和泼尼松稍有肿瘤生长抑制作用(<15%)，与载体治疗组没有统计学显著性差异(表10)。长春新碱在此Daudi模型中有效，引发50%肿瘤生长抑制(？=0.002)。以CHOP联合给药形式给予化疗药时，观察到统计学显著性肿瘤生长抑制作用(78%，PO.001)和肿瘤反应(4PR，ICR;17%反应率)(表10)。以1mg/kgs.c.每周给予三次时，IL-2单独治疗耐受良好并产生14。/。肿瘤生长抑制(PX).05)。评价了IL-2与环磷酰胺、多柔比星、长春新碱或泼尼松联合用药。与单独用药相比，所有这些联用方案都产生加成的肿瘤生长抑制作用。没有观察到协同作用的迹象。与单独用药相比，IL-2与CHOP方案联用显示出肿瘤生长抑制作用增强，这表明强化了药物作用(联合治疗。/。T/CW€/%T/C观察位3)(表10)。与单独用药相比，IL-2与利妥昔单抗治疗联用显示出协同活性。评价了将IL-2加入CHOP+利妥昔联合治疗的效果，以确定IL-2是否增强CHOP-R的抗肿瘤活性(图25)。显然，将IL-2加入CHOP-R治疗在20只小鼠的19只中有疗效；到第36天观察到完全反应的证据，这种证据至少持续到药物治疗开始后第160天(表10，图26A)。在第160天实验终止时，在肿瘤植入部位用抗人线粒体抗体的免疫组化染色检测残余的人Daudi细胞，以验证完全反应。与所有单独用药或双治疗组相比，肿瘤体积至1000mm3时间限定的Kaplan-Meir存活率分析有统计学显著性(图26B)。所有治疗方案耐受良好，没有药物相关性副作用或显著体重下降。这些实施例中的数据表明，在人低级CD20+B细胞淋巴瘤的BALB/c裸小鼠Daudi异种移植瘤模型中，IL-2与CHOP-R联合给予或者作为CHOP-R治疗后的维持治疗与利妥昔单抗联合用药增强了总体肿瘤功效和反应持续时间。最重要的发现是IL-2/CHOP-R治疗在95。/。治疗小鼠中有疗效，与所有双药叠代(特别是目前的标准药物CHOP和利妥昔单抗)相比效力显著提高。药物加和性分析也支持这些数据，表明加入IL-2使CHOP-R治疗协同受益。权利要求1.一种治疗B细胞淋巴瘤的方法，所述方法包括给予需要治疗的对象治疗有效量的(a)化疗药；(b)IL-2;和任选的(c)抗CD20抗体或其抗原结合片段。2.如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述化疗药含有选自下组的一种或多种成分(a)环磷酰胺，(b)多柔比星，(c)长春新碱，(d)泼尼松和(e)环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松的组合。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述化疗药含有环磷酰胺。4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述化疗药含有多柔比星。5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述化疗药含有长春新碱。6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述化疗药含有泼尼松。7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述化疗药含有环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松(CHOP)。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体是免疫球蛋白Gl(IgGl)单克隆抗体。9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述抗体是利妥昔单抗。10.如权利要求i所述的方法，其特征在于，所述IL-2是重组产生的IL-2，其氨基酸序列与人IL-2氨基酸序列的序列相同性至少为70%。11.如权利要求IO所述的方法，其特征在于，所述IL-2的氨基酸序列与人IL-2氨基酸序列的序列相同性至少为80%。12.如权利要求IO所述的方法，其特征在于，所述IL-2的氨基酸序列与人IL-2氨基酸序列的序列相同性至少为90%。13.如权利要求IO所述的方法，其特征在于，所述IL-2的氨基酸序列与人IL-2氨基酸序列的序列相同性至少为95%。14.如权利要求IO所述的方法，其特征在于，所述IL-2是脱丙氨酰-l、丝氨酸-125人白介素-2(阿地白介素)。15.如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述B细胞淋巴瘤是低级非霍奇金淋巴瘤(NHL)。16.如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述B细胞淋巴瘤是中级非霍奇金淋巴瘤(NHL)。17.如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述B细胞淋巴瘤是高级非霍奇金淋巴瘤(NHL)。18.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给予所述对象多种治疗有效剂量的所述IL-2和所述抗CD20抗体。19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，按照一周两次或一周三次的给药方案给予所述IL-2。20.如权利要求18所述的方法，21.如权利要求18所述的方法，述抗CD20抗体。22.如权利要求1所述的方法，23.如权利要求1所述的方法，24.如权利要求l所述的方法，25.如权利要求1所述的方法，的所述化疗药和所述抗CD20抗体。26.如权利要求25所述的方法，27.如权利要求25所述的方法，抗体后给予多种治疗有效剂量的所述IL-2和所述抗CD20抗体。28.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述化疗药是CHOP。29.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给予所述化疗药后给予多种治疗有效剂量的所述IL-2。30.如权利要求29所述的方法，其特征在于，用足够时间将多种治疗有效剂量的所述IL-2给予所述对象，以影响免疫重建。31.如权利要求29所述的方法，其特征在于，32.如权利要求1所述的方法，其特征在于，的所述化疗药和所述IL-2。33.如权利要求32所述的方法，其特征在于，34.如权利要求1所述的方法，其特征在于，的所述化疗药、所述抗CD20抗体和所述IL-2。35.如权利要求34所述的方法，其特征在于，所述化疗药是CHOP。36.—种治疗低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的方法，所述方法包括给予需要的对象治疗有效量的(a)CHOP;(b)脱丙氨酰-l、丝氨酸-125人白介素-2(阿地白其特征在于，其特征在于，其特征在于，其特征在于，其特征在于，其特征在于，其特征在于，其特征在于，皮下给予所述IL-2。按照一周一次的给药方案给予所静脉内给予所述抗CD20抗体。静脉内给予所述化疗药。口服给予所述化疗药。给予所述对象多种治疗有效剂量所述化疗药是CHOP。给予所述化疗药和所述抗CD20所述化疗药是CHOP。给予所述对象多种治疗有效剂]所述化疗药是CHOP。给予所述对象多种治疗有效剂i介素)；和任选的(C)利妥昔单抗。37.如权利要求36所述的方法，其特征在于，给予所述对象多种治疗有效剂量的所述阿地白介素和所述利妥昔单抗。38.如权利要求36所述的方法，其特征在于，给予所述对象多种治疗有效剂量的所述阿地白介素和所述CHOP。39.如权利要求36所述的方法，其特征在于，给予所述对象多种治疗有效剂量的所述阿地白介素、所述CHOP和所述利妥昔单抗。40.如权利要求36所述的方法，其特征在于，方案给予所述阿地白介素。41.如权利要求40所述的方法，其特征在于42.如权利要求36所述的方法，其特征在于，述利妥昔单抗。43.如权利要求36所述的方法，其特征在于44.如权利要求36所述的方法，其特征在于，有效剂量的所述阿地白介素。45.如权利要求36所述的方法，其特征在于，的所述CHOP和所述利妥昔单抗。46.如权利要求45所述的方法，其特征在于，抗后给予多种治疗有效剂量的所述阿地白介素和所述利妥昔单抗。47.化疗药、IL-2和任选的抗CD20抗体或其抗原结合片段在治疗B细胞淋巴瘤的方法中的应用，所述方法包括给予需要的对象治疗有效量的(a)化疗药；(b)IL-2;和任选的(c)抗CD20抗体或其抗原结合片段。48.化疗药、IL-2和任选的抗CD20抗体或其抗原结合片段在生产治疗B细胞淋巴瘤的药物中的应用。49.CHOP、脱丙氨酰-1、丝氨酸-125人白介素-2(阿地白介素)和任选的利妥昔单抗在生产治疗低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的药物中的应用。,按照一周两次或一周三次的给药，皮下给予所述阿地白介素。按照一周一次的给药方案给予所，静脉内给予所述CHOP。给予所述CHOP后给予多种治疗给予所述患者多种治疗有效剂量给予所述CHOP和所述利妥昔单全文摘要本发明公开了治疗B细胞淋巴瘤，如非霍奇金淋巴瘤(NHL)的方法。所述方法采用化疗药、IL-2和任选的抗CD20抗体的联合治疗。文档编号A61K38/20GK101146548SQ200680009028公开日2008年3月19日申请日期2006年2月14日优先权日2005年2月15日发明者C·海斯,D·门尼泽斯,K·德尼斯-米泽,S·E·威尔逊申请人:诺华疫苗和诊断公司