专利名称：：含有香豌豆提取物的化妆料的制作方法
技术领域：
：本发明涉及含有香豌豆提取物的化妆料等。技术背景皮肤老化时，细胞的活动和增殖减少，弹性蛋白、胶原蛋白、粘多糖等细胞外基质的产生也会降低。且由于弹性蛋白酶、胶原酶促进弹性蛋白、胶原蛋白的分解，从而导致铍纹、松弛的产生。以预防、改善皮肤老化为目的的研究为数众多，已知具有弹性蛋白酶活性抑制作用的成分有细毛火烧兰、凹唇鸟巢兰、长苞头蕊兰、白山千鸟兰(Orchisaristata)(例如，参照专利文献l);荔枝种子(例如，参照专利文献2);葡萄糖胺(例如，参照专利文献3);蓝色龙舌兰、剑麻、轮叶沙参(例如，参照专利文献4)等。且已知促进纤维芽细胞增殖的成分有库拉索芦荟、杏仁、芝麻、山药、西洋蒲公英、西洋接骨木、川芎、桑白皮、桃仁、鱼腥草、朴蕈、麦门冬、木槿、薏苡仁、小球藻(例如，参照专利文献5)等。但是，配合香豌豆提取物的化妆料及其化妆料所具有的优异的预防、改善老化作用却还不为人知。专利文献1:日本特开2004-018793号公报专利文献2:日本特开2004-043420号公报专利文献3:日本特开2004-083432号公报专利文献4:日本特开2004-244382号公报专利文献5:日本特开2004-035440号公报
发明内容本发明提供具有预防、改善老化效果的化妆料。本发明的主要构成如下所示。1.化妆料，其含有香豌豆提取物。2.l.中所述的化妆料，其中，香豌豆提取物的提取部位是花及/或茎。3.1.或2.中所述的化妆料，其特征在于，香豌豆提取物是通过水及/或水溶性有机溶剂提取的提取物。4.细胞增殖促进剂，其含有从香豌豆的花及/或茎中提取的提取物。5.弹性蛋白酶活性抑制剂，其含有从香豌豆的花中提取的提取物。6.抗老化剂，其以香豌豆提取物为有效成分。7.6.中所述的抗老化剂，其中，香豌豆提取物的提取部位是花及/或茎。8.化妆料，其含有4.7.中任一项所述的制剂。本发明可确认香豌豆提取物具有促进细胞增殖、弹性蛋白酶活性抑制、抗老化等的作用效果，提供发挥这些作用的化妆料、细胞增殖促进剂、弹性蛋白酶活性抑制剂、抗老化剂。并可确认上述物质安全性高。图1表示弹性蛋白酶活性抑制试验的结果。图2表示细胞增殖促进试验的结果。图3表示针对正常人体纤维芽细胞的细胞毒性试验的结果。图4表示针对正常人体表皮角质化细胞的细胞毒性试验的结果。图5表示针对来自兔角膜的细胞的细胞毒性试验的结果。具体实施方式香豌豆(LathyrusodoratusL.)是豆科香豌豆属植物，别名又叫做麝香连理草、麝香豌豆，是主要用于观赏的原产地中海的园艺品种。花色有白、粉红、蓝、紫等，具香味。香豌豆提取物，可通过将其植物的全草或花、茎、叶、根、种子中的一个以上于常温或加温下浸渍于溶剂中进行提取或使用索氏提取器等的提取器具提取来获得。也可使用色谱法等精制成分。为获得具有更优异的预防、改善老化效果的提取物，提取部位优选花及茎，特别优选花。可从包含花瓣、萼片、雄蕊、雌蕊的花整体中提取，也可只选择性地采集花瓣，从花瓣中提取。香豌豆提取物可使用各种溶剂提取液、其稀释液、其浓縮液或将提取液干燥、冷冻干燥后所得到的干燥粉末或糊状形态。为获得香豌豆提取物所使用的提取溶剂，可使用极性溶剂、非极性溶剂的任一种。例如，水、醇类的甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等；多元醇类的丙二醇、丁二醇等；酮类的丙酮、甲基乙基酮等；酯类的乙酸甲酯、乙酸乙酯等；链状及环状醚类的四氢呋喃、乙醚等；聚醚类的聚乙二醇等；卣代烃类的二氯甲垸、三氯甲烷、四氯化碳等；烃类的己烷、环己烷、石油醚等；芳香族烃类的苯、甲苯等；吡啶类等，也可混合使用上述的2种以上。上述提取溶剂中，为获得弹性蛋白酶活性抑制效果或细胞增殖促进效果优异的提取物，优选使用水或水溶性有机溶剂。水溶性有机溶剂可为甲醇、乙醇、丙醇、2-丙醇、丙二醇、丁二醇、丙酮等。香豌豆提取物的配合量无特别限定，但干重以0.000110质量％左右为宜。本发明的化妆料、细胞增殖促进剂、弹性蛋白酶活性抑制剂、抗老化剂、含有上述制剂的化妆料中，可含有如植物油的油脂类、高级脂肪酸、高级醇、硅酮、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂、非离子表面活性剂、防腐剂、糖类、金属离子封锁剂、如水溶性高分子的高分子、增粘剂、粉体成分、紫外线吸收剂、紫外线屏蔽剂、如透明质酸的保湿剂、香料、pH调节剂、干燥剂等。还可含有维生素类、皮肤活化剂、血流促进剂、常驻菌控制剂、活性氧消除剂、抗炎症剂、抗癌剂、美白剂、杀菌剂等的其他药效成分、生理活性成分。油脂类，例如可为山茶油、月见草油、澳洲胡桃油、橄榄油、菜籽油、玉米油、芝麻油、荷荷巴油、胚芽油、小麦胚芽油、三辛酸甘油酯等的液体油脂、可可脂、椰子油、氢化椰子油、棕榈油、棕榈核油、木蜡、木蜡核油、氢化油、氢化蓖麻油等的固体油脂、蜂蜡、小烛树蜡、棉蜡、糠蜡、羊毛脂、醋酸羊毛脂、液状羊毛脂、蔗蜡等的蜡类。烃类，例如可为液体石蜡、角鲨烯、角鲨烷、微晶蜡等。高级脂肪酸，例如可为月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)等。高级醇，例如可为月桂醇、硬脂醇、十六烷醇、十八十六醇等的直链醇、十八垸基甘油醚、羊毛醇、胆固醇、植物甾醇、辛基十二垸醇等的支链醇等。硅酮，例如可为链状聚硅氧烷的二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷等、环状聚硅氧垸的十甲基环五硅氧垸等。阴离子表面活性剂，例如可为月桂酸钠等的脂肪酸盐、月桂基硫酸钠等的高级垸基硫酸酯盐、POE月桂基硫酸三乙醇胺等的烷基醚硫酸酯盐、N-酰基肌氨酸、磺基琥珀酸盐、N-酰基氨基酸盐等。阳离子表面活性剂，例如可为十八垸基三甲基氯化铵等的垸基三甲基铵盐、氯化苯甲烃铵、苄索氯铵等。两性表面活性剂，例如可为烷基甜菜碱、酰胺甜菜碱等的甜菜碱系表面活性剂等。非离子表面活性剂，例如可为失水山梨醇单油酸酯等的失水山梨醇脂肪酸酯类、氢化蓖麻油衍生物等。防腐剂，例如可为对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯等。金属离子封锁剂，例如可为乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠盐等的乙二胺四乙酸盐等。高分子，例如可为阿拉伯胶、西黄蓍胶、半乳聚糖、瓜尔豆胶、卡拉胶、果胶、琼脂、榲梓子、葡聚糖、普鲁兰多糖、羧甲基淀粉、胶原蛋白、酪蛋白、明胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠(CMC)、海藻酸钠等。增粘剂，例如可为卡拉胶、西黄蓍胶、榲椁子、酪蛋白、糊精、明胶、CMC、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、瓜尔豆胶、黄原胶、膨润土等。粉末成分，例如可为滑石粉、高岭土、云母、二氧化硅、沸石、聚乙烯粉末、聚苯乙烯粉末、纤维素粉末、无机白色颜料、无机红色系颜料、云母钛珠光颜料、氧化钛包覆的滑石粉、着色型云母钛珠光颜料等的珠光颜料、红色201号、红色202号等的有机颜料等。紫外线吸收剂，例如可为对氨基苯甲酸、水杨酸苯酯、对甲氧基肉桂酸异丙酯、对甲氧基肉桂酸辛酯、2,4-二羟基二苯甲酮等。紫外线屏蔽剂，例如可为氧化钛、滑石粉、胭脂红、膨润土、高岭土、氧化锌等。保湿剂，例如可为聚乙二醇、丙二醇、二丙二醇、1，3-丁二醇、1,2-戊二醇、甘油、双甘油、聚甘油、木糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖、山梨糖醇、葡萄糖、果糖、硫酸软骨素钠、透明质酸钠、乳酸钠、吡咯垸酮羧酸、环糊精等。药效成分，例如可为维生素A油、视黄醇等的维生素A类、核黄素等的维生素B2类、吡哆醇盐酸盐等的B6类、L-抗坏血酸、L-抗坏血酸磷酸酯、L-抗坏血酸单棕榈酸酯、L-抗坏血酸二棕榈酸酯、L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷等的维生素C类、泛酸钙等的泛酸类、维生素D2、维生素D3等的维生素D类；a-维生素E、醋酸维生素E、DL-a-维生素E烟酸酯等的维生素E类等的维生素类等。且优选的其他共存成分可为谷胱甘肽、虎耳草提取物等的美白剂、蜂王浆、山毛榉提取物等的皮肤活化剂、辣椒素、姜酮、斑蝥素、鱼石脂、咖啡因、单宁酸、Y-谷维素等的血流促进剂、甘草酸衍生物、甘草次酸衍生物、甘菊环等的消炎剂、精氨酸、丝氨酸、亮氨酸、色氨酸等的氨基酸类、常驻菌控制剂的麦芽糖蔗糖縮合物、氯化溶菌酶等。并且，还可为洋甘菊提取物、荷兰芹提取物、山毛榉提取物、葡萄酒酵母提取物、葡萄柚提取物、金银花提取物、米提取物、葡萄提取物、啤酒花提取物、米糠提取物、琵琶提取物、薏米仁提取物、当药提取物、草木樨提取物、加拿大黄桦提取物、甘草提取物、芍药提取物、肥皂草提取物、丝瓜提取物、辣椒提取物、柠檬提取物、龙胆提取物、紫苏提取物、芦荟提取物、迷迭香提取物、鼠尾草提取物、铺地百里香提取物、海藻提取物、黄瓜提取物、胡萝卜提取物、欧洲七叶树提取物、金缕梅提取物、桑树提取物等的各种提取物。本发明的化妆料、细胞增殖促进剂、弹性蛋白酶活性抑制剂、抗老化剂及含有上述制剂的化妆料，例如可适用于水溶液、油剂、乳液、悬浊液等的液剂、凝胶、霜剂等的半固体剂、粉末、颗粒、胶囊、微胶囊、固体等的固体剂的形态。用以往公知的方法制备成上述形态，可为洗液、乳剂、凝胶剂、霜剂、软膏、硬膏、巴布剂、气雾剂、粉末剂、颗粒剂等的种种剂型。上述制剂可适用于向身体涂抹、粘贴、喷雾等。化妆料、细胞增殖促进剂、弹性蛋白酶活性抑制剂、抗老化剂及含有上述制剂的化妆料的具体用途可以是化妆水、乳液、霜剂、面膜等的护肤用品、用于化妆的基础化妆水、用于化妆的霜剂、乳液状或奶油状或软膏形的粉底、口红、眼影、胭脂类的化妆用品、护手霜、美腿霜、润肤液等的身体用护肤品、洗浴用品、毛发用品。以下，根据实施例具体说明本发明，但本发明并不限定于此。[提取液1]将香豌豆的花瓣(紫色)45.9g和蒸馏水459g装入瓶中，用90100°C的热水加热30分钟。冷却后，用纱布榨取，再进行3000rpmX10分钟的离心分离。将上清液用热水温度约为65"C的旋转式蒸发器浓縮，加水定容到45.9g。提取液中的可溶性固体成分为4.87%。[提取液2]将提取液1用旋转式蒸发器浓縮，得到5倍浓度的浓縮液。可溶性固体成分的浓度为24.4%。[提取液3]将香豌豆的茎148.2g和蒸馏水741g装入瓶中，在90100'C的热水中加热60分钟。冷却后，用纱布搾取，再进行3000rpmX10分钟的离心分离。将上清液用热水温度约为65'C的旋转式蒸发器浓縮，加水定容到29.6g。提取液中的可溶性固体成分为13.6%。[弹性蛋白酶活性抑制试验]将稀释成各浓度的提取液13的溶液50"1、Elastase(20iig/ml)50u1、lmMN-SUCCINYL-ALA-ALA-ALA-p-NITROANILIDE100u1混合，使其在25"C下反应50min，测定415nm的吸光度。各溶液稀释时使用缓冲液0.2MTris-HCLbuffer(pH8.0)。作为对照，添加缓冲液代替Elastase。根据以下公式计算抑制率。抑制率(％)=[1-(样品添加试剂吸光度-样品添加试剂对照吸光度)/(样品未添加试剂吸光度-样品未添加试剂对照吸光度)]xioo结果如图l所示。结果，提取液1在添加浓度为5.0%、2.5%时，分别显示出29%、6%的弹性蛋白酶活性抑制效果。提取液2在添加浓度为2.5%时，显示出44%的弹性蛋白酶活性抑制效果。将提取液2用5.0%添加浓度测定时，因原料自身的吸光度高，未能得到正确的值，所以从测定结果中去除。另一方面，提取液3未显示出弹性蛋白酶活性抑制效果。[细胞增殖促进试验]含有10%FBS(胎牛血清)的DMEM培养基，将人体正常纤维芽细胞以1X104cells/we11的浓度播种于96孔培养板。播种一天后，更换成包含样品的含有1%FBS的DMEM培养基，培养6日后，通过MTT试验法计算细胞量。将未添加样品的试剂作为对照试剂。通过所得到的吸光度使用下式求出细胞量变化。阳性对照使用FBS。细胞量变化(％)=样品添加试剂的吸光度/对照试剂的吸光度乂100结果如图2所示。添加2.5%提取液2的结果，细胞量增加到180%。阳性对照为添加2.5%FBS(胎牛血清)时，细胞量变化为134%，在细胞增殖效果上提取液2比FBS更优异。添加2.5%提取液1的结果，细胞量增大到120%，添加2.5%提取液3的结果，细胞量增大到127%，虽略低于FBS，但也具有优异的细胞增殖效果。[细胞毒性试验]1.使用纤维芽细胞的细胞毒性试验将正常人体纤维芽细胞(NHFB)按3.5X10+4cells/ml播种于96孔培养板上，在37"、C025M的环境下培养5日。在汇合状态下，更换至将提取液13调整到0.008%1.0%的血清10%配合DMEM培养基，使细胞暴露。暴露24小时后，使用MTT试验法求出细胞存活率。结果如图3所示。直到1.0%的浓度的提取液13的任一个，对正常人体纤维芽细胞均无毒性。2.使用表皮角质化细胞的毒性试验方法将正常人体表皮角质化细胞(NHKC)按4.0X10+5cells/ml播种于96孔培养板上，在37'C、C025。/。的环境下培养l日。在汇合状态下，更换至将提取液13调整到0.008%1.0%的表皮角质化细胞增殖用无血清培养基，使细胞暴露。暴露24小时后，使用MTT试验法求出细胞存活率。结果如图4所示。直到1.0%的浓度的提取液13的任一个，对正常人体表皮角质化细胞均无毒性。3.使用来自眼粘膜细胞的毒性试验方法将来自兔角膜的细胞株(SIRC)按4.0X10+5cells/ml播种于96孔培养板上，在37。C、C025。/。的环境下培养5日。在汇合状态下，更换至将提取液13调整到0.008%1.0%的血清10%配合MEM培养基，使细胞暴露。暴露24小时后，使用MTT试验法求出细胞存活率。结果如图5所示。直到1.0%的浓度的提取液13的任一个，对来自兔角膜的细胞均无毒性。以上毒性试验的结果显示，直到1.0%的浓度的提取液13，对于正常人体纤维芽细胞、正常人体表皮角质化细胞、来自兔角膜的细胞均未显示毒性。因此，可以说本发明的香豌豆提取物的安全性高。[预防、改善老化的效果试验]对具有粗糙肌肤、细纹、干燥肌肤等的女性受试者(3555岁)10人，使其涂抹如下处方的试剂，1日2次(早'晚)，连续涂抹4周，并评价4周后的效果。试验结果，为确认预防、改善老化的效果，对于皮肤的湿润性、平滑性、弹性的各项目，将回答确实感到皮肤有了湿润感、皮肤变光滑了、皮肤有了弹性的效果的人数和回答没感到有效果的人数如表1所示。[表l]<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>以下表示本发明的配方例，但本发明不限于此。实施例1〈乳液〉<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>[制法]将属于A的水相成分和属于B的油相成分分别加热溶解，将油相成分混合到水相成分中，用乳化机乳化。冷却后，混合属于C的成分后获得乳液。实施例2〈化妆水〉<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>[制法]混合溶解上述成分后获得化妆水。实施例3〈美容液〉<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>[制法]混合溶解属于上述A的成分后，混合属于B的成分后获得美容液。实施例4〈霜剂〉<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>[制法]将属于A的水相成分和属于B的油相成分分别加热溶解，将油相成分混合到水相成分中，用乳化机乳化。冷却后，混合属于C的成分后获得霜剂。实施例5〈乳液〉<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>[制法]将属于A的水相成分和属于B的油相成分分别加热溶解，将油相成分混合到水相成分中，用乳化机乳化。冷却后，混合属于C的成分后获得乳液。权利要求1.化妆料，其含有香豌豆提取物。2.权利要求1中所述的化妆料，其中，香豌豆提取物的提取部位是花及/或茎。3.权利要求1或2中所述的化妆料，其特征在于，香豌豆提取物是通过水及/或水溶性有机溶剂提取的提取物。4.细胞增殖促进剂，其含有从香豌豆的花及/或茎中提取的提取物。5.弹性蛋白酶活性抑制剂，其含有从香豌豆的花中提取的提取物。6.抗老化剂，其以香豌豆提取物为有效成分。7.权利要求6中所述的抗老化剂，其中，香豌豆提取物的提取部位是花及/或茎。8.化妆料，其含有权利要求47中任一项所述的制剂。全文摘要本发明涉及以预防及改善老化为目的的含有香豌豆提取物的化妆料、细胞增殖促进剂、弹性蛋白酶活性抑制剂、抗老化剂。文档编号A61K8/97GK101146513SQ200680009020公开日2008年3月19日申请日期2006年3月14日优先权日2005年4月1日发明者人见高正,松熊祥子申请人:株式会社芳珂