专利名称：：局部指(趾)甲制剂的制作方法局部指(趾)甲制剂本发明涉及用于指(趾)甲施用的局部制剂，所述制剂包含药物和穿透增强剂。甲真菌病是甲板(nailplate)或甲床(nailbed)真菌感染的通称，且是造成高达50%的指(趾)甲病症的原因。能够影响手指甲和脚趾甲。在欧洲，认为目前该病症影响到约5%的人口，且甚至愈发流行。这种增加主要归因于老龄化的人口，这是因为甲真菌病在老年人中更加常见得多。其他起作用的因素包括不良的鞋类以及增加公共使用休闲设备。最经常对引起甲真菌病负责的病原体是皮肤真菌，认为皮肤真菌是造成超过全部90％的案例的原因。红色毛癣菌(Trichophytonrubrum)(脚趾甲56%-手指甲36%)和须毛癣菌(Trichophytonmentagrophyte)(脚足止甲19%-11%手指甲)是特别常见的。酵母感染少见得多，但是通常与白念珠菌(Candidaalbicans)(脚指甲10%-30%手指甲)有关。其次相对常见的指(趾)甲病症是银屑病。银屑病是最常见的皮肤炎性疾病，但是大部分患有皮肤银屑病的患者也患有指(趾)甲银屑病。很少见仅患有指(趾)甲银屑病的患者。银屑病在欧洲和北美最为常见，在那里它影响到大约3%的人口。尽管指(趾)甲病症很少有生命危险，但是它们能够非常痛苦并损害患者的外观。常见症状包括对指(趾)甲颜色的改变，常为黄/绿或较黑的颜色，以及碎屑在指(趾)甲下的聚集，从而引起难闻的味道。另外，指(趾)甲可能变厚和成为薄片状。仅仅是这样的审美标记就对患者的生活质量具有严重的影响。除了这些症状之外，该病症能够非常痛苦。特别地，厚脚趾甲可以导致鞋内的不舒适，并甚至可以使站立和行走对一些患者来说都很不舒服。对甲真菌病和其他指(趾)甲病症有效的治疗受到这样的实际情况的阻碍，所述实际情况是感染的位点由甲板有效地覆盖着，所述甲板主要由角蛋白，即一组纤维性蛋白质所组成。角蛋白纤维通过富含半胱氨酸的球状蛋白结合在一起，它们的二硫键以类似粘着方式(glue-like)作用，并且是造成大量甲板完整性的原因。任何有效的治疗必须能够克服由坚固和刚硬的甲板而存在的屏障，并输送有效物质到甲床上。己知的治疗方法大体分为3个种类。第一类涉及去除全部或部分受影响的指(趾)甲，从而暴露感染的位点。去除可以通过手术或化学方式进行。化学去除可涉及包扎疗法中对甲板短时间地应用尿素。尿素作用，从而显露指(趾)甲中的蛋白质。指(趾)甲变得柔软且与甲床分开。然而，该治疗的创伤性和痛苦特性意味着它不受欢迎，且仅用作最后的手段。治疗的第二类方法是口服适当的药物。目前存在4种用于治疗甲真菌病的主要口服疗法。它们是灰黄霉素(Grisovh^，GSK)，酮康唑(Nizoral,Janssen-Cilag)，伊曲康唑(Sporanox,Janssen-Cilag)和特比萘芬(Lamisil,Novartis)。对于银屑病，口服试剂，如甲氨蝶呤，依曲替酯(etretinate)和环孢素能是有效的。灰黄霉素从20世纪50年代开始存在。由于其对皮肤真菌的抑制真菌活性，所以需要长治疗周期(对于脚趾甲感染，9-12个月)。治愈率低且复发率高。酮康唑是在20世纪80年代引入到甲真菌病治疗中的第一种基于咪唑的药物。然而，由于它的肝细胞毒性，其使用现在仅限于对其他疗法缺乏反应的手指甲感染。更近期的抗真菌试剂，即伊曲康唑和特比萘芬在口服治疗甲真菌病中更有效，其具有比以前所观察到的更高的真菌治愈率和更短的治疗周期。第三类方法涉及向甲板局部施用一种组合物。目前在市场上的对甲真菌病局部疗法包括阿莫罗芬(Loceryl,Galderma)和环己吡酮乙醇胺(ciclopirox)(Penlac，Dermik)。如本文中所使用的，术语"局部的"禾Q"局部地"指施用于表面，如皮肤或指(趾)甲，它与通常通过摄食或注射的全身性施用相反。对指(趾)甲病症局部的治疗原则上是最优选的，因为它们不会带来与全身性药物相同的危险，如肝细胞毒性，并且与涉及完全或部分去除指(趾)甲的治疗相比，较少地引起痛苦和对外观的损害。然而，为了有效，充足量的有效物质必须能够穿透甲板，从而使有效浓度的有效物质能够到达甲板的深层，以及甲床本身。可能由于不良药物穿透性的结果，目前存在的局部治疗效率相对低，且与长治疗时间和低治愈率有关。与皮肤的薄层角质层相比，甲板厚得多。这意味着药物传递到甲床的扩散通路更长。另外，指(趾)甲的作用不像类脂的屏障，而更像浓縮的水凝胶。所述富含半胱氨酸的蛋白质的二硫键是造成指(趾)甲的完整性和结构以及其屏障性质的主要原因。因此，对指(趾)甲病症有效的局部治疗的开发表现出比局部皮肤治疗的开发更大的挑战。存在着若干个影响药物进入和通过甲板扩散率的因子。这些因子包括扩散物质的尺寸，扩散物质的亲水性/亲脂性和媒介物的性质。另外，穿透可以通过有效地减少屏障来增强，该屏障是药物为了到达甲床上感染位点所必须扩散经过的。该屏障可以物理或化学地减少。该屏障的物理减少涉及去除指(趾)甲的部分或全部，或挫掉甲板的上层。这样的程序是不受欢迎的，因为它们既痛苦又损害外观。一种更容易接受的方法涉及使用化学增强剂，所述化学增强剂当施用于指(趾)甲时，与该指(趾)甲结构相互作用并对其进行改良，从而减少药物透过的屏障，并增加有效物质进入和通过甲板的扩散率。尿素常用作指(趾)甲穿透增强剂，只要它具有化学去除甲板的能力。其他方法集中在指(趾)甲中的二硫键以及这些键的破坏剂上，所述破坏剂包括乙酰半胱氨酸和巯基乙醇。目前，不存在这样的局部治疗，所述局部治疗在治疗影响甲板底层和甲床的病症中提供满意结果。US-A-6,664,292公开了用于治疗指(趾)甲病理学病症的局部组合物。所述组合物由低级醇和低级羧酸组成。US-A-5，753,256公开了用于治疗指(趾)甲真菌病的硬膏。所述硬膏包括有效化合物和渗透增强剂。所公开的渗透增强剂是亚砜、乳酸、水杨酸、丙二醇、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺和十二垸基硫酸钠(sodiumdodecylsulphate)。美国申请号2003/0235541公开了用于局部治疗甲真菌病的水性碱性制齐U(basicformulation)。美国专利号2001/0049386公开了一种治疗甲真菌病的方法，其中将包含尿素和抗真菌组合物的组织软化组合物施用到指(趾)甲周围的感染区域，该过程以一个或分离的组合物的形式，同时地或非同时地进行。WO99/40955公开了用于治疗甲真菌病的压力敏感性粘附基质贴片。皮肤渗透增强剂任选地包含于所述贴片中。GB-A-2278056公开了高酯和巯基乙酸的酰胺作为皮肤应用的穿透增强剂，并且公开适合治疗甲真菌病的制剂。然而，这些制剂仅能在指(趾)甲周围施用。另外，这些治疗仍然需要药物的全身存在，这是因为该制剂是经皮施用的，因此尽管该治疗能局部施用，该药物仍将进入血流中。WO99/49895公开了巯基乙酸能够还原指(趾)甲中的角蛋白，并因此能够用于提高药物经过指(趾)甲到达甲床的扩散。DE1000567公开了巯基乙酸与碘化钠的组合使用，从而还原指甲的角蛋白，而EP0712633A1简单地公开了巯基乙酸作为皮肤渗透增强剂的应用。US2003/0007939公开了过氧化氢药物组合物和至少一种其他的皮肤病学试剂，以增强在皮肤、头皮、毛发和指(趾)甲中的穿透。没有描述还原剂的应用。EP0,425,507公开了用于治疗上皮，包括皮肤的异常或受损病症的组合物，所述组合物包含活化的蛋白，氧化剂和还原剂，其中所述氧化剂包括过氧化氢，所述还原剂包括巯基乙酸。因此，仍然存在着对用于治疗指(趾)甲病症有效的且局部施用的制剂的需要。现在我们令人惊讶地发现了还原剂，如巯基乙酸(TA)和氧化剂，如过氧化氢，能够一个接一个地施用于指(趾)甲，从而增强药物的穿透性。在普通的情形中，这两种试剂的组合通常导致极限化学反应。然而，在指(趾)甲上，看起来可以安全地组合这些试剂。因此，在第一个方面中，本发明提供优选为液体的，还原剂和氧化剂的每一种的制剂在制备用于治疗指甲病症的药物中的应用，所述指甲病症可通过药物治疗，所述制剂分别地放置，且由此以先还原剂再氧化剂的顺序相继施用于患者的指(趾)甲，所述药物分别放置于一种或另一种制剂中，或任选地，放置在第三种制剂中，其中所述药物对于所述还原或氧化剂而言是附件的。所述或一种还原剂和/或所述或一种氧化剂可选自已知的药物，如抗真菌剂和抗银屑病药，所述已知药物具有适当的还原或氧化性质，但是通常优选地使用额外的药物，如下文所述。优选地，所述还原和氧化剂有充分的功效，以使这两种制剂的简单组合会引起极限反应，如充分(substantially)放热或甚至剧烈的反应。当以先还原剂再氧化剂的顺序方式施用到指(趾)甲时，现在己经令人惊讶地证实了这样的组合能够安全地施用，而不具极限反应的直接明显标记。可以理解某些还原和氧化剂会太有效以至于不能安全施用到指(趾)甲，或会引起不合需要的反应，如变色，其对一些患者来说可能是不能接受的。然而，只要每种试剂分别能接受地施用到指(趾)甲，则组合也是能接受的，即使当这两者的组合在缺乏指(趾)甲时将会引起极限反应。所述试剂巯基乙酸和过氧化氢提供一种这样的组合的实例。其他试剂/组合可以由本领域中技术人员通过施用上述标准轻易选出。对任意试剂适合的浓度进行独立地选择，且通常在l-50。/。w/v之间，优选地在5-30%的范围内。更优选地，各个浓度分别选自10-25%的范围内，且特别地5-15%。在优选的实施方案中，对所述还原和氧化剂所要求的强度能够通过参考它们的还原电位来选择。如本领域众所周知的，具体物质的还原电位指该物质接受电子的能力，由此提供其能够被还原的能力的指示。根据本发明的氧化和还原剂的还原电位能够通过本领域技术人员所已知的任意方法测量。优选的方法是测量具体试剂在水中或水和乙醇的混合物中的溶液相对于银/氯化银电极，在室温下的还原电位，并相对于氧化还原标准进行校准。根据本发明优选的实施方案，当按照上述方案进行测量时，所述氧化剂的还原电位优选地低于-50mV，更优选地低于-100mV，及最优选地低于-200mV。所述还原剂的还原电位优选地高于+20mV，更优选地高于十50mV，及最优选地高于+75mV。如附加实施例所证明的，如需要，含有任意试剂的溶液的还原电位可以通过改变该溶液中存在的氧化或还原剂的浓度或调节该溶液的pH进行调节。因此，在优选的实施方案中，将所述还原剂配制为碱性制剂，其pH为7-14。更优选地，pH为8-13之间，特别优选地，pH为9-12，这是因为这通常最大化还原化合物的还原电位。相反地，而氧化剂的pH通常比较不重要，其优选地为pHl-7，更优选地为pH2-5，这是因为这倾向于最大化其氧化电位(-ve还原电位)。在任何情形，优选地，两种如此酸性/腐蚀性的制剂，不小心喷溅到皮肤上时，都不引起药物和/或美容上所不能接受的损伤。然而，可以理解可以改进任意制剂的pH，从而获得所需要的效果，如缓和还原电位或反应速率，这样当不存在关于pH的其他相关考虑时，上面所指出的优先选择普遍适用。通常，所述还原和氧化化合物的制剂是非常精选的，以使还原电位在以上所指出的范围内，且通常使得适当地最大化+ve或-ve电位。虽然通常优选地通过浓度最优化还原电位，可以理解可在该溶剂和/或共溶剂的蒸发会在原处引起高浓度处提供具有低浓度的制剂。优选的试剂浓度可按照所附实施例中例证的技术容易地确定。例如，优选的巯基乙酸浓度范围是至少0.1%和高达20%及更高；尿素-&02至少5%和高达40%及更高，&02至少20%和高达100%，禾BDTT至少0.05。/。和高达20%及更高。可以用较低浓度的所述还原或氧化剂配制由乙醇或其他挥发溶剂或共溶剂所配制的制剂，这是因为所述试剂的浓度将会在将所述制剂施用于指(趾)甲时，在对其的施用时增高。特别令人惊讶地，这两种成分的施用似乎是协同的，因为没有理由怀疑由任意能够成为添加剂的成分所产生的增强的渗透性与其他成分有充分的不同。实际上，这个作用模式在本领域中不是绝对的，因为首先施用所述氧化剂通常不引起比两种成分更有效的指(趾)甲渗透性的明显增强。然而，首先施用还原剂似乎引起协同作用，以至于其效果经常比两种试剂组合的效果更好。这个效果可以，但不总是，反映在测量增加的被指(趾)甲所吸收的液体中(下文)。优选的还原剂包括巯基乙酸铵，巯基乙酸钙，巯基乙酸钠，巯基乙酸(TA)和二硫苏糖醇(DTT)，抗坏血酸，对苯二酚，巯基乙醇，谷胱甘肽，L-半胱氨酸，牛磺酸，氨基甲烷磺酸，半胱磺酸，半胱亚磺酸，乙二磺酸，乙磺酸，高牛磺酸，次牛磺酸，羟乙磺酸，巯基乙磺酸，N-甲基牛磺酸(MTAU)，及其简单衍生物。"简单衍生物"指所述化合物的盐、酯或酰胺。巯基乙酸的简单衍生物是特别优选的。此外任何垸基成分优选地为具有总共l-6个碳原子的低级烷基，但是更优选地具有l-4个碳原子，及最优选地l，2，或3个碳原子。所述还原剂优选地为巯基乙酸或其衍生物，且同样地，还原剂通常涉及如本文所指的那些，尽管可以理解任何这样的涉及也会包括其他还原剂，除非另外是清楚或显然的。所述氧化剂可以是任意适合的氧化剂，包括尿素，过氧化氢，过硫酸钾，61l尿B密口定，p-coumericacid，乙醇酸，草酸，cineol，peroxydone，二氧化氯，重铬酸铵，硝酸铵，高氯酸铵，高锰酸铵，溴酸钡，氯酸钡，过氧化钡，氯酸镉，氯酸钙，铬酸钙，高氯酸钙，硝酸铬，硝酸钴，氧化银，高碘酸和吡啶重铬酸盐(pyridinedichromate)。过氧化氢是优选的，且过氧化氢和尿素的加成化合物是更优选的。所述制剂可以一个紧随着另一个施用，但是优选地以先还原剂再氧化剂的顺序施用，且在施用氧化制剂前容许第一种制剂对指(趾)甲短时间作用。合适的时间为10秒-10分钟之间，更优选地l分钟-5分钟之间。虽然这么短的时间是能接受的，但已发现在施用之间可留出很长的一段时间，且优选的还原和氧化剂施用期间的时间是15-30小时，更优选地20-26小时，具有与随后的施用之间相似的时间。当使用这么长的一段时间时，所述药物优选地存在于一种或两种制剂中，或以单独的形式但与一种或两种制剂共同施用。所述药物可以存在于一种或两种制剂中，或可以单独配制，从而在应用所述氧化和还原剂之前，之中或之后施用。在一个实施方案中，将所述还原剂应用于指(趾)甲，随后是所述药物，然后是所述氧化剂，以使所述药物位于所述氧化和还原剂相互作用的事件中，从而导致渗透的增强。通常优选药物存在于单独的制剂中，特别是当不需要延长暴露于氧化和还原剂的一种或两种时。本发明的制剂用于指甲的施用，且可以以任何适合施用于指甲或指(趾)甲的方式配制。所述制剂优选地为水性，任选地具有共溶剂，如乙醇或丙酮。尽管所述共溶剂对所述氧化或还原剂可以是不必需的，但是对所述药物的增溶作用可能是必要的。通常，本发明的指甲的制剂可以以如下形式提供乳膏剂、油膏、凝胶、溶液、洗剂、泡沫、摩丝、喷雾剂、糊剂或漆Oacquer)，意欲将它们直接应用于指(趾)甲。然而，例如，本发明的制剂还可以作为溶液或粉末或预混合料提供。溶液，例如，可以施用于敷料，如膏剂，然后再与指(趾)甲相联系，从而更准确地靶向位点。或者，可以将敷料施用于指(趾)甲，然后将所述溶液再施用于该敷料。在这种方式中，例如，可能将所述敷料完全限制于指(趾)甲表面，或者所述敷料可以以这样的方式构建以使所述溶液和非指(趾)甲表面，或者与待处理的位点的接触受到抑制或阻止，该抑制或阻止是通过所述敷料的构造或通过屏障手段的引入进行的。适合的屏障手段可以包括某些粘合剂或树脂，或其他适合的处理。当使用这样的敷料时，则优选地对每种还原和氧化剂使用单独的敷料，从而避免潜在的剧烈反应的发生。当提供敷料时，一旦所述溶液或药物的其他制剂应用于吸收敷料，对所述敷料施用进一步的封闭敷裹也是理想的，从而防止载体不合需要的蒸发。例如，在通过涂料或漆施用其他试剂后，可以将贴片，即类似于经皮贴片的构造，但是优选地为存储贴片用于提供一种试剂。同样地，例如，可以通过撒粉于涂了漆或涂料的表面来施用粉末。例如，其他粉末和预混物，如需要，可以进一步补充在所述溶液或制剂中，从而施用于指(趾)甲。可以理解本文中所引用的"指(趾)甲"包括对任何适合的指甲表面的引用。在人类，这实际上只包括手指甲或脚趾甲，但可以设想任意的指甲表面。所述试剂适合的载体通常包括水和低级醇，所述低级醇包括一元醇和多元醇。还可以使用其他的溶剂，如丙酮，且通常对于本领域的技术人员来说，哪种溶剂适合于对指(趾)甲施用是显然的。除了所述载体外，其他媒介物可以用作，例如，填充剂。将水用于形成所述制剂的主体时，发现丙二醇通常与较高的指甲穿透作用相关，且通常是更优选的填充剂。所述制剂可为简单水性制剂，或可以含有其他成分，诸如，例如，稠化剂、稳定性增强剂，pH改良剂、气味抑制剂和着色剂。气味抑制剂的使用在下述情形中可以是特别优选的，所述情形为当该药物意欲治疗有臭味的指(趾)甲病症时，其中所述病症是常见的病症，或当需要掩饰该药物自身气味时。相似地，着色剂可以包含在当所治疗的病症引起指(趾)甲不受欢迎的变色时。在一个实施方案中，所述制剂作为在原处变干的清漆进行制备。在另一个实施方案中，所述还原和/或氧化剂，以及特别地，巯基乙酸可以与所述药物缀合，从而进行施用。术语"药物"指本发明制剂的任意有效成分，其能够在对指(趾)甲的施用上发挥治疗效果。所述治疗效果仅当与本发明的穿透增强剂联合时可以察觉。用于本发明制剂的适合的药物可以用于任何与患者的指甲相关的病症，但是通常属于真菌感染或与银屑病相关的病症的分类。所述药物可以以任何适合的形式，且可为固体、液体或气体，存在于制剂中，从而施用于指(趾)甲。适合的气体包括，例如，NO。用于本发明制剂的适合的药物包括抗真菌药物阿莫罗芬、咪康唑、酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、益康唑、环己吡酮乙醇胺、奥昔康唑、克霉唑、特比萘芬、萘夫替芬、两性霉素、灰黄霉素、沃利康唑、氟胞嘧啶、制霉菌素及其药用盐和酯。特别优选的是特比萘芬。与银屑病联合使用的适合药物包括皮质类甾醇、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、依曲替酯、环孢菌素、他克莫司及其衍生物。所用药物的量对本发明不是关键的，且全部所要求的是该药物能够以治疗或预防指甲病症的有效量进行施用。药物的量可依赖于患者的年龄、性别和/或体重，但是通常以原料制剂提供，以施用于指(趾)甲，且所述药物的浓度通常依赖待处理的病症作为其主要决定因素。药物的量可以是充足的，从而一次治疗后就消除所述病症，但是通常的情形是治疗将会连续进行数次，因此药物的量可以为了根据所计划的循环次数逐步处理而进行特制。在循环治疗中，用还原剂和氧化剂循环处理感染的指(趾)甲。优选的策略是第1天用还原剂处理，然后第2天用氧化剂处理，药物优选地与所述氧化剂共同或之后立刻施用，然后在第3天再一次以施用所述还原剂开始重复该过程。任选地，可以在处理间规定间隙，这样该重复处理再从，例如，第4天、第5天、第6天或第7天开始。所述间隙，如果优选，可以更长，但是优选地不超过一个月，且优选地不超过2周。可以理解所述循环可以包括所述任意制剂的两次或更多次应用。例如，可将所述还原剂与所述氧化剂和药物一起，每天施用，并连续施用例如2或3天，或在一天中若干时刻施用，其中所述氧化剂和药物是在最后一次还原剂处理后的那天或第一次处理后的一天施用的，其中所述第一次处理后的一天可以是还原剂最后一次处理后立刻的一天。所述氧化剂可以在连续的几天中或一天中的若千时刻使用，且通常优选地所述药物在与氧化剂的每次处理一起或之后立刻施用。药物在本发明的制剂中适合的浓度依赖于这些因素待治疗的病症和待用的药物，在任何情形中，这些因素对本领域的技术人员是显然的。为了指导，尽管本发明设想了高于或低于这些范围的浓度，适合的浓度可以在0.1%-50%w/w的范围内，更优选地1%-20%w/w，特别地1%-10%w/w。本发明的制剂可以进一步包括其他药物和/或穿透增强剂。多种药物的适合的实例提供在上文中。其他穿透增强剂包括乳酸、DMSO、水杨酸和油酸，其中乳酸、水杨酸和油酸是分别优选的。增强剂的浓度可以是有效地容许比不含增强剂的相似制剂更高的甲板穿透性的任意浓度。通常，增强剂的量会在约0.1。/。w/w-约25%w/w间变化，约1％w/w-约20%w/w间，及更优选地，3%w/w-15%w/w间，经常提供良好的结果。本发明还提供一种用于治疗需要所述治疗的患者指(趾)甲的指甲感染的方法，包括向所述指(趾)甲施用还原剂制剂，随后再向其施用氧化剂制剂，所述指甲的病症可通过药物治疗，所述药物放置在一种所述制剂或第三种制剂中。可以理解上述方法优选地包括任何上文所指定的与该使用相关，和/或如所附权利要求1-43任一项所定义的特征。本发明进一步提供一种试剂盒，包括如上所定义的用于治疗指甲感染的制剂，且优选地包括如权利要求1-43的任一项所定义的制剂。现将进一步通过以下非限制性实施例举例说明本发明。实施例实施例1-4:材料和方法在实施例1-4中，开发了两种模型，以测试指(趾)甲的渗透性。模型一遵循与WO99/49895相似的方式，其中所述指(趾)甲经穿透增强剂处理，所述穿透增强剂溶解于溶剂中，并且测定了其％指(趾)甲重量的增加。认为所述穿透增强剂是角蛋白溶解性的，且因此破坏所述指(趾)甲中的硫键，从而导致其软化和吸收更多的液体。第二种模型实际上测量指(趾)甲的渗透性。在这种新型模型中，一种放射性化合物，即"C-甘露醇，用于跟踪施用穿透增强剂后试剂经过所述指(趾)甲的进程。一种新型的扩散细胞用于测量甘露醇的扩散。实施例l-4使用如下工具、材料和方法。材料表l:本研究中所使用的供应商、等级和材料的大量详细材料。<table><row><column>产品</column><column>供应商</column><column>地址</column><column>等级</column></row><row><column>巯基乙酸铵</column><column>Fluka</column><column>Sigma-AldrichCompanyLtd,Dorset,UK</column><column>水中60%</column></row><row><column>巯基乙酸钙</column><column>Fluka</column><column>Sigma-AldrichCompanyLtd,Dorset,UK</column><column>≥98％</column></row><row><column>EDTA</column><column>Sigma-Aldrich</column><column>Sigma-AldrichCompanyLtd,</column><column>99%</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table><row><column></column><column>Dorset,UK</column></row><row><column></column><column>14C甘露醇CFA238</column><column>GECAmershamPharmacia.</column><column>GECAmershamPharmacia.</column><column>14C甘露醇CFA238原料9.25MBq/1.25mlSt.GilesBucks原料9.25MBq/1.25ml</column></row><table>穿透增强剂由于每种所述穿透增强剂示范了不同的溶解性，将水或乙醇与水的混合物用作溶剂，按照下表2。表2:用于所述穿透增强剂的溶剂<table><row><column>试剂</column><column>溶剂</column></row><row><column></column><column>巯基乙酸铵</column><column>20%乙醇</column></row><row><column></column><column>巯基乙酸钙</column><column>水</column></row><row><column></column><column>巯基乙酸钠</column><column>20%乙醇</column></row><row><column></column><column>巯基乙酸(TA)</column><column>20%乙醇</column></row><row><column></column><column>乙醇酸</column><column>20%乙醇</column></row><row><column></column><column>二硫苏糖醇(DTT)</column><column>20%乙醇</column></row><row><column></column><column>半胱氨酸</column><column>20%乙醇</column></row><row><column></column><column>尿素-H202</column><column>水</column></row><table>方法指(趾)甲溶胀研究洗涤和制备指(趾)甲碎片利用指甲刀从健康人志愿者(经同意)获得大约2mm长的指(趾)甲碎片。利用70%(v/v)的乙醇，通过在28ml的玻璃管内利用WhirlMixer(Fison's，UK)以最大速度涡旋混合1分钟，进行洗涤。然后再在水中通过彻底地涡旋混合l分钟冲洗碎片。重复该过程3次。再将指(趾)甲置于敞开的Petri培养皿中，并将其放入温度控制在30土2℃的恒温箱中进行干燥24小时。在恒温箱干燥后，对所述指(趾)甲称重，并置于24孔微生物板(Costar⑧，UK).的各个孔中。在全部实验中，使用了10组指(趾)甲碎片。穿透增强剂对指(趾)甲碎片的施用将在所述微生物板孔中经洗涤的指(趾)甲碎片浸没在lml所述穿透增强剂溶液中约20小时。将过量的溶液通过用薄纸巾轻拍干燥从所有指(趾)甲碎片除去。对所述指(趾)甲碎片称重，记录其重量。如果使用第二种穿透增强剂，对第二种化合物重复进行相同的程序，并记录第二重量。为了估计所述溶剂本身的影响，对一组对照指(趾)甲进行了检验，所述检验利用相同的方法，但是仅浸没在没有添加所述穿透增强剂的溶剂中。甘露醇指(趾)甲穿透性的研究.-穿透增强剂的制备单一的穿透增强剂在所述适合的溶液中装配，并掺加14C甘露醇(10ul所述原料14C甘露醇)。当多于一种穿透增强剂施用于所述指(趾)甲时，只有最后的穿透增强剂在指(趾)甲施用前掺加14c甘露醇。无穿透增强剂的14C甘露醇用作对照。指(趾)甲扩散细胞的制备校准前的指(趾)甲扩散细胞与完整厚度人指(趾)甲相聚集。将由20%乙醇/水混合物组成的接受液放到接受器的孔中，直到侧臂上的蚀刻标记处。将磁性随动件插入，并且再将所述细胞置于保持在32℃的水浴中的磁性搅拌器上。检查细胞的漏损和气泡。30分钟的平衡期后，从该取样侧臂取出lml样品，并将其置于闪烁管中，随后加入4ml闪烁调剂，并在闪烁计数器上利用双模式设置(3H/14C)进行检验。这是为了确保没有细胞含有任何残留放射性，并也取得这些读数作为各个细胞的背景。然后用新鲜接受液将该细胞加满到蚀刻标记处，在32℃预平衡。利用3H水标准化指(趾)甲在取得背景读数后(在上面的部分中有所描述)，利用预校准的Gilson吸移管，将50uPH水(ca.18000dpm)置于所装配的指(趾)甲扩散细胞中的指(趾)甲上面。然后立刻用parafilm密封该细胞。20小时后，利用lml注射器，将lml所述接受液的样品从侧臂中除去，并置于闪烁管中，随后加入4ml闪烁调剂，并在闪烁计数器上利用双模式设置(3H/14C)进行检验。这些数值用于标准化各个指(趾)甲，且如果认为放射性值太高，则细胞由于泄漏而衰减。如果任何细胞泄漏，则使用Dixon'sQ检验进行测定。再用薄纸巾弄干"H水，并用新鲜接受液将该细胞加满到蚀刻标记处，在32℃预平衡。当检验单一穿透增强剂时，利用预校准的Gilson将每种穿透增强剂的50μl等分试样吸移到完整厚度人指(趾)甲表面上。再用parafilm密封各个细胞。取样时间点取在ca.20小时，44小时，68小时，92小时和116小时。每个时间点后，从侧臂中取lml样品，并置于闪烁管中，随后加入4ml闪烁调剂，且在闪烁计数器上利用双模式设置(3H/14C)进行检验。然后用新鲜接受液将该细胞加满到蚀刻标记处，在32℃预平衡。测试每种穿透增强剂(和对照)，利用以上所概述的程序进行了总共n二5-6次。当使用多于一种穿透增强剂时，利用预校准的Gilson将50ti1无放射性甘露醇的穿透增强剂吸移到完整厚度人指(趾)甲表面上，再用parafilm密封各个细胞。20小时后，用薄纸巾弄干该前述穿透增强剂，并用去离子水(3xlml)洗涤指(趾)甲表面。再施用预掺加"C甘露醇的第二穿透增强剂，并实施上述应用于单一穿透增强剂的方案。实施例l:单一指(趾)甲穿透增强剂的使用指(趾)甲溶胀研究图1显示向指(趾)甲中加入水(对照)、半胱氨酸、巯基乙酸铵(AmTA)、巯基乙酸(TA)、乙醇酸(GA)、过氧化氢(H202)、尿素-过氧化氢(尿素-H202)和1，4-二硫-DL-苏糖醇(DTT)20小时后，指(趾)甲重量的变化(平均值士标准偏差，n=10)。该数值以初始指(趾)甲重量的百分数表示。尽管使用水和20%乙醇水溶液作为对照溶液，但是在这二者间不存在显著区别(p>0.05，ANOVA)。因此，只将水对照显示在图1中。巯基乙酸(TA)、乙醇酸(GA)、过氧化氢(H202)、尿素-过氧化氢(尿素-II202)、二硫苏糖醇(DTT)和巯基乙酸铵(AmTA)与对照相比，在20小时后，都显著地增加(p<0.05，ANOVA)了指(趾)甲的重量。由所检验的7种穿透增强剂中的6种所引起的指(趾)甲重量的增加推断出该指(趾)甲吸收了更多所施用的液体。还注意到了所处理的指(趾)甲外形的物理改变。TA，GA，H202和AmTA处理的指(趾)甲比对照更软，且颜色更浅。.半胱氨酸没有显著地增加(p>0.05，ANOVA)指(趾)甲重量。因此，该液体向用半胱氨酸处理的指(趾)甲中的渗透性没有增强。甘露醇指(趾)甲穿透性研究图2显示在使用不同的单一穿透增强剂时，14C甘露醇经过完整厚度人指(趾)甲的渗透性(n=6±SD，DTTn=5±SD)。饱和TA(50%)在这些实验中是最佳甘露醇穿透增强剂。然而，当将该TA减少到浓度5%时，其穿透增强作用下降到DTT之下。H202在96小时后的甘露醇扩散上，对该5%TA没有显著区别(p<0.05，ANOVA)。实施例2:双指(趾)甲穿透增强剂的使用指(趾)甲溶胀研究对于5。/。TA而言，单一穿透增强剂施用能引起的指(趾)甲重量的最大增加为71%(图1中所示)。然而，两种穿透增强剂的添加，一种跟着另一种，引起指(趾)甲重量增加高达150%，如图3中所示。图3显示用2种穿透增强剂在2个分开的阶段(＞按照指示)以两种施用顺序进行处理时指(趾)甲的百分数重量增加(平均值士标准偏差，n=lO)。加入TA再加入H202或尿素-H202与单独TA相比显著地增加了指(趾)甲重量(p<0.05，ANOVA)。然而，当H202或尿素-H202在TA前使用时，与单独TA相比不显著增加了指(趾)甲重量(p>0.05，ANOVA)。在每个图3中所详述的双穿透增强剂实验中，发现了相似的趋势。还原剂(例如，TA，GA和BDTT)在氧化剂(例如，H202或尿素-11202)之前加入，与以相反的顺序，即先氧化再还原剂来施用试剂相比，显著地提高了指(趾)甲重量的增加。先TA再尿素-H202的施用提供了最大的重量增加,而最低的是先尿素-11202再DTT。实施例3:穿透增强剂浓度的影响指(趾)甲溶胀研究图4显示在不同TA浓度中20小时时期后指(趾)甲的百分数重量增加(平均值士标准偏差，n=10)。在TA处理指(趾)甲的情形中，增高穿透增强剂的浓度引起增加的重量增加。在用20。/。TA处理指(趾)甲时观察到最显著的重量增加。图5显示在不同浓度的尿素-H2O2中20小时的时期后，指(趾)甲的百分数重量增加。X-轴所显示的百分数是存在的总11202浓度(平均值土标准偏差，n=10)。施用于指(趾)甲的尿素-H202浓度也影响重量增加，以及因此，影响该指(趾)甲的渗透性。在指(趾)甲重量增加方面，使用20%尿素-11202比10%显著更好。然而，用在20%-35%间增高浓度的H202处理的指(趾)甲在重量增加上未显示出显著区别(pX).05，ANOVA)。图6显示在不同DTT浓度中20小时时期后指(趾)甲的百分数重量增加(平均值士标准偏差，n=10)。经1%DTT处理的指(趾)甲，与经5%DTT处理的指(趾)甲相比确实显示出显著的重量增加(p>0.05，ANOVA)，但是在5-10%之间进一步的浓度增高没有显示出显著的重量增加(p<0.05，ANOVA)。对指(趾)甲重量最大的影响在用DTT浓度20。/。时观察到，该影响几乎是浓度10%时所观察到的两倍。实施例4:pH对穿透增强剂的影响指(趾)甲溶胀研究图7显示在不同TA的盐(浓度均为5%)中20小时时期后指(趾)甲的百分数重量增加。位于条形柱上方的数字表示每种溶液施用前的pH(平均值土标准偏差，n=10)。不考虑作为穿透增强剂使用的巯基乙酸盐类型，其指(趾)甲重量的增加显著地高于(p>0.05，ANOVA)对照。巯基乙酸钙引起指(趾)甲重量中最大的增加，且因此促进最大量的液体穿透指(趾)甲。盐的类型对施用于指(趾)甲的液体的pH具有直接的影响。TA用作pH2.12的溶液，而巯基乙酸钙pH为11.43。因此，虽然所有的化合物都有效地增强指(趾)甲对液体的吸收，pH＞7.1在指(趾)甲重量增加方面看起来最为有利。实施例5-10:材料和方法实施例5-10使用如下材料和方法。氧化还原测量使用离子分析氧化还原计(Metrohm,UK)在室温下，测量0.5M所述化合物在去离子水中的水性制剂的相对于已知电位的稳定参考电极(Ag/AgCl)的还原电位。特比萘芬扩散研究将直径ca.3mm的人指(趾)甲样品(完整厚度)安置在2个半个的特殊设计的ChubTurTM扩散细胞之间，并将其夹在一起。用预先经声波处理的适合的缓冲系统填充在受体室中，以确保下沉条件，并且将所述细胞固定在有机玻璃支架上，所述支架安装在温度维持在32℃的水浴中的磁性搅拌器上。所述受体室的内容物连续受到小PTFE包被的磁性随动件的刺激，所述磁性随动件由能浸在水中的磁性搅拌器驱动。将已知量的制剂/药物溶液施用于指(趾)甲表面(无限剂量)，并且在规律的时间间隔从该受体室内取得缓冲液样品，并将其替换为新鲜受体培养基，并利用HPLC对其药物含量进行分析。TurChub微生物检验在Sabouraud右旋糖琼脂板上接种红色毛癣菌，该过程是通过利用无菌药签从倾斜培养基中温和取下菌丝体和孢子并将它们转移该琼脂表面上来进行的。将所述板在25℃培养7天。用Ringers溶液(20ml)将白色孢子从该板表面上洗涤下来。将该孢子混悬液经无菌薄纱(Smith+Nephew，Propax,7.5cmx7.5cm,8层薄纱药签，BP型13)过滤，从而除去菌丝体。估算该孢子混悬液的存活计数，并相应地通过稀释或浓缩孢子将该孢子计数调节为在最终体积20ml中大约1X107cfu/ml。最初，末梢的指(趾)甲碎片是从志愿者的脚趾甲获得的，所述脚趾甲长到最少3mm长。要求所有志愿者在6个月内不在脚趾甲上使用涂剂(varnish)或抛光剂(polish),并且在6个月内没有在脚趾甲上出现任何疾病的征兆。要求所有的志愿者用剪刀或标准指甲刀取下末端指(趾)甲部分。不要求特殊的程序，例如无菌取得或清洗指(趾)甲。然后将该指(趾)甲碎片置于合适的容器内，例如塑料袋，管，信封等，之后将该指(趾)甲置于8mlbijou瓶子中，所述小瓶对应于每个提供者/每次提供，并标注所提供的任何详细信息。将该样品储存在冷冻器中，直到需要。利用剪刀，再将该指(趾)甲碎片剪成若干小片，该小片最小为3mmX3mm。对每个指(趾)甲所能获得的小片的数量完全依赖于初始样品的尺寸，因此小脚趾甲仅可产生1或2小片，而较大脚趾甲可产生3-5片。将该指(趾)甲碎片浸没在70%乙醇水溶液中，并涡旋混合l分钟。再将乙醇溶液倾倒出，并替换为新鲜的70%乙醇溶液，再涡旋混合l分钟。然后再将该乙醇溶液倾倒出，并替换为Ringer's溶液，涡旋混合1分钟，并且倾倒并替换为新鲜Ringer's。该利用Ringer's洗涤的过程总共进行了3次，替换各个阶段中的洗涤溶液。一旦完成该洗涤过程，将所述指(趾)甲碎片置于无菌无盖petri培养皿中，并在层流箱下室温空气干燥30分钟。一旦该指(趾)甲碎片干燥了，将它们置于新的8mlbijou瓶中(对每个提供者，每批使用分别的瓶子)。还利用一对测径规测量指(趾)甲的厚度。再在扩散细胞中，用所述穿透增强剂系统处理末端指(趾)甲碎片(完整厚度指(趾)甲)，即，用巯基乙酸处理20小时，随后用尿素H202处理20小时。最初在121℃高压釜中对TurChub腔(下部和上部)消毒15分钟。指(趾)甲的垫圈也在100%乙醇中消毒，并在安装指(趾)甲/膜部分前在层流箱下空气千燥。然后将穿透增强剂处理的指(趾)甲和垫圈装载在下半个1\11€111^@腔上，所述1\11€11油@腔的背侧朝上。然后将预定体积(对每个腔进行校准)的熔化的SDA琼脂(维持在56。C)装载到该腔下面的部分。设置了琼脂后，将固定体积(50yl)的在Ringers溶液中的检验生物体红色毛癣菌应用到该琼脂表面。再通过轻轻地从一端到另一端摇动所述腔，促使所述生物体混悬液均匀散布在该琼脂的表面。利用注射器和针将来自所述生物体混悬液的过量液体从所述腔除去。一旦将所述生物体应用于所述腔，安装所述指(趾)甲，并加入所述腔上面的漏斗部分，且将其固定在有弹簧的位置。设计所述腔，以使过量的流体(如来自浓缩)不交叉污染所述琼脂，而是积聚在所述腔的底部；其次将所述腔以这样的方式定向，即使它们避免来自于在所述琼脂下流出的假阳性结果。将大约100ul所述有效的试剂或制剂应用于所述检验生物体红色毛癣菌7天。通过测量红色毛癣菌在TurChubTM腔中生长抑制区域测定该制剂的功效。实施例5:指甲穿透增强剂氧化还原电位的测量对表现出增强人指(趾)甲溶胀的试剂的氧化还原电位进行检验。预测还原剂具有-ve氧化还原电位，而氧化剂将具有+ve氧化还原电位(或者，当表示为还原电位时，其符号改变，因此还原剂将具有+ve电位)。表3和图8(±SD，n=3)中的结果，显示出在所检验的多种试剂的氧化还原电位上存在着明显的区别。表3.化学试剂(0.5M浓度，n=3)的氧化还原电位及pH值:<table><row><column>编号</column><column>化学品</column><column>平均氧化还原电位(mV)</column><column>标准偏差</column><column>平均pH</column><column>标准偏差</column></row><row><column>1</column><column>间苯二酚</column><column>8.6</column><column>5.3</column><column>5.67</column><column>0.42</column></row><row><column>2</column><column>cineol</column><column>67.2</column><column>100.5</column><column>5.91</column><column>0.30</column></row><row><column>3</column><column>巯基乙酸钙</column><column>-531.3</column><column>12.5</column><column>11.74</column><column>0.24</column></row><row><column>4</column><column>p-coumaricacid</column><column>114,1</column><column>50.8</column><column>3.54</column><column>0.31</column></row><row><column>5</column><column>硫尿嘧啶</column><column>53.4</column><column>18.9</column><column>6,28</column><column>0,08</column></row><row><column>6</column><column>过硫酸钾</column><column>402.5</column><column>28.6</column><column>2.83</column><column>0.06</column></row><row><column>7</column><column>乙醇酸</column><column>247.7</column><column>27.7</column><column>2.03</column><column>0.15</column></row><row><column>8</column><column>草酸</column><column></column><column>254.8</column><column>26.0</column><column>1.33</column><column>0.08</column></row><table><table><row><column>9</column><column>尿素过氧化氢</column><column>349.7</column><column>5.3</column><column>2.72</column><column>0.31</column></row><row><column>10</column><column>巯基乙酸钠</column><column>-281.7</column><column>5.3</column><column>6.90</column><column>0.05</column></row><row><column>11</column><column>巯基乙酸-132.813.82.13</column><column>0.02</column></row><row><column>12</column><column>巯基乙酸铵</column><column>-235.9</column><column>24.0</column><column>6.29</column><column>0.20</column></row><row><column>13</column><column>过氧化氢</column><column>277.3</column><column>48.3</column><column>6.21</column><column>0.31</column></row><row><column>14</column><column>DTT</column><column>-241.0</column><column>10.9</column><column>2.64</column><column>0.53</column></row><row><column>15</column><column>半胱氨酸</column><column>-79.3</column><column>8.2</column><column>——</column><column>——</column></row><table>那些强还原性化学试剂包括巯基乙酸盐，其中巯基乙酸钙在所有所述化学品中具有最低的氧化还原电位(-531.3mV)。最强的氧化剂是那些具有最高氧化还原电位的，其包括尿素-过氧化氢(尿素-H202)、过氧化氢(H202)、乙醇酸、草酸和过硫酸钾。来自这些氧化还原数据的显而易见的是显著改进指(趾)甲溶胀(实施例2)的试剂的那些组合是强氧化或还原剂。此外，这些试剂的使用顺序是很重要的，实施例2中最大的指(趾)甲溶胀是在将所述还原剂首先施用于指(趾)甲时观察到的。实施例6:指甲穿透增强化合物浓度对氧化还原电位的影响研究了浓度对所选择试剂的氧化还原电位的影响。这些包括巯基乙酸、尿素-11202、H202和DTT。滴定的结果显示在表4-7中。表4.TA在浓度0.001。/。-20。/。w/w间的平均氧化还原电位和pH值(n二3)<table><row><column>TA浓度(%w/w)</column><column>平均氧化还原电位</column><column>标准偏差</column><column>平均pH</column><column>标准偏差</column></row><row><column>20%-128.70.1</column><column>1.61</column><column>0.04</column></row><row><column>10%-132.80.6</column><column>1.83</column><column>0.14</column></row><row><column>7.5%-132.70.1</column><column>1.76</column><column>0.03</column></row><table><table><row><column>5%</column><column>-131.5</column><column>0.4</column><column>1.85</column><column>0.02</column></row><row><column></column><column>2.5%</column><column>-126.5</column><column>0.5</column><column>1.71</column><column>0.55</column></row><row><column></column><column>1%</column><column>-119.8</column><column>0.4</column><column>2.23</column><column>0.08</column></row><row><column></column><column>0.1%</column><column>-97.4</column><column>1.4</column><column>2.66</column><column>0.13</column></row><row><column></column><column>0.05%</column><column>-85.6</column><column>0.8</column><column>2.53</column><column>0.12</column></row><row><column></column><column>0.01%</column><column>-67.5</column><column>1,2</column><column>3.05</column><column>0.12</column></row><row><column></column><column>0.005%</column><column>-56.6</column><column>3.8</column><column>3.12</column><column>0.19</column></row><row><column></column><column>0.001％</column><column>-47.7</column><column>5.4</column><column>2.97</column><column>0.32</column></row><table>表4显示，在TA浓度1-20M间，不存在对所述溶液所测量的氧化还原电位的浓度影响。在浓度低于此(0.001-1%)，氧化还原电位随着浓度的下降稳定地條低。当测量DTT的氧化还原电位时，观察到了相似的趋势，并且仅在浓度低于0.05%时，所述溶液的氧化还原电位下降(表5)。表5.DTT在浓度0.005°/。-12%w/w间的平均氧化还原电位和pH值(n=2)<table><row><column>DTT浓度(%w/w)</column><column>平均氧化还原电位</column><column>标准偏差</column><column>平均pH</column><column>标准偏差</column></row><row><column></column><column>10</column><column>-193.1</column><column>11.45513</column><column>5.69</column><column>0.05</column></row><row><column></column><column>7.5</column><column>-209.65</column><column>16.33417</column><column>6.24</column><column>0.30</column></row><row><column></column><column>5</column><column>-201.25</column><column>16.05132</column><column>6.20</column><column>0.23</column></row><row><column></column><column>1</column><column>-185.75</column><column>10.39447</column><column>7.01</column><column>0.06</column></row><row><column></column><column>0.1</column><column>-189.65</column><column>0,919239</column><column>7.59</column><column>0.09</column></row><row><column></column><column>0.05</column><column>-169.19</column><column>0.410122</column><column>7.80</column><column>0.12</column></row><row><column></column><column>0.01</column><column>-134.9</column><column>4.666905</column><column>8.00</column><column>0.02</column></row><row><column></column><column>0.005</column><column>-122.7</column><column>3.818377</column><column>8.07</column><column>0.45</column></row><table>发现H2O2和尿素-H2O2具有相似的作用。后者在5-17.5°/。的高浓度时，没有出现氧化还原电位的巨大差别(表6)。然而，当尿素-H2O2的浓度降为5%以下时，其氧化还原电位及由此的氧化能力下降的更快。该溶液的pH也随着其浓度的降低变得更中性。用&02时，其氧化还原电位下降的关键浓度是20%(表7)。表6.尿素-H202在浓度0.0025-17.5&02含量w/w间的平均氧化还原电位和pH值(n=3)<table><row><column>H202含量浓度(％w/w)</column><column>平均氧化还原电位(mV)</column><column>标准偏差</column><column>平均pH</column><column>标准偏差</column></row><row><column>17.5</column><column>382.3</column><column>1.3</column><column>3.33</column><column>0.09</column></row><row><column>16.25</column><column>382.9</column><column>1.5</column><column>3.87</column><column>0.08</column></row><row><column>15</column><column>380.3</column><column>0.8</column><column>4.04</column><column>0.03</column></row><row><column>10</column><column>377.9</column><column>0.5</column><column>4.23</column><column>0.12</column></row><row><column>5</column><column>372.3</column><column>1.4</column><column>5.10</column><column>0.11</column></row><row><column>0.5</column><column>293.6</column><column>11.2</column><column>5.31</column><column>0.33</column></row><row><column>0.05</column><column>208.1</column><column>5.0</column><column>6.81</column><column>0,16</column></row><row><column>0.025</column><column>199.5</column><column>3.4</column><column>6.56</column><column>0.04</column></row><row><column>0.005</column><column>191.3</column><column>5.2</column><column>6.17</column><column>1.00</column></row><row><column>0.0025</column><column>189.4</column><column>6.0</column><column>6.07</column><column>0.53</column></row><table>表7.H202在浓度0.005-35%w/w间的平均氧化还原电位和pH值(n=3)<table><row><column>H202</column><column>浓度(%w/w)</column><column>平均氧化还原电位</column><column>标准偏差</column><column>平均pH</column><column>标准偏差</column></row><row><column>35</column><column>444.5</column><column>0.6</column><column>2.55</column><column>0.04</column></row><row><column>32.5</column><column>437,9</column><column>1.7</column><column>2.54</column><column>0.08</column></row><row><column>30</column><column>430.4</column><column>3.4</column><column>2.64</column><column>0.02</column></row><row><column>20</column><column>402.8</column><column>1.3</column><column>3.16</column><column>0.01</column></row><row><column>10</column><column>357,2</column><column>3.7</column><column>3.79</column><column>0.02</column></row><row><column>1</column><column>231.6</column><column>9.1</column><column>6.17</column><column>0.03</column></row><row><column>0.1</column><column>193.5</column><column>3.8</column><column>6.71</column><column>0.06</column></row><row><column>0.05</column><column>200.4</column><column>7.8</column><column>6.78</column><column>0.12</column></row><row><column>0.01</column><column>153.0</column><column>18.4</column><column>7.46</column><column>0.26</column></row><table><table><row><column>0.005</column><column>142.3</column><column>6.6</column><column>7.56</column><column>0.08</column></row><table>实施例7:指甲的穿透增强化合物pH对氧化还原电位的影响为了研究该溶液的pH是否对所述穿透增强剂氧化还原电位具有影响，对两种化合物的pH范围进行了研究5。/。TA溶液和具有H202含量15%的尿素-H202。利用pH范围2-11(利用NaOH溶液调节pH)检查TA。在pH2-10(利用HCl和NaOH溶液调节pH)检査所述尿素"《202溶液。TA的氧化还原电位在所检查的pH范围内几乎增加了一个数量级(表8)。相反，尿素-H202复合物的氧化还原电位稳定降低，直到达到pH10时，观察到其氧化还原电位急剧下降(表9)。表8:TA溶液在pH值在pH2-11范围内变化时的平均氧化还原电位(n=3)。<table><row><column>TA的近似pH</column><column>平均氧化还原电位标准偏差</column></row><row><column>2</column><column>-70.4</column><column>20.4</column></row><row><column>3</column><column>-133.1</column><column>13.3</column></row><row><column>4</column><column>-166.7</column><column>24.4</column></row><row><column>5</column><column>-179.5</column><column>33.7</column></row><row><column>6</column><column>-192.9</column><column>37.3</column></row><row><column>8</column><column>-272.3</column><column>49.4</column></row><row><column>10</column><column>-386.5</column><column>52.0</column></row><row><column>11</column><column>-433.8</column><column>50.6</column></row><table>表9.尿素-H，O，溶液在。H值在。H2-10范围内变化时的平均氧化还原电位(n=3+SD)。<table></column></row><row><column>尿素-H202的近似pH</column><column>氧化还原电位(mV)</column><column>标准偏差</column></row><row><column>2</column><column>459.8</column><column>2.0</column></row><row><column>4</column><column>334.1</column><column>5.5</column></row><row><column>6</column><column>284.0</column><column>1.8</column></row><row><column>8</column><column>194.2</column><column>0.7</column></row><table>1016.11.2实施例8:模型药物化合物的穿透增强剂图9是经以下各项预处理后特比萘芬扩散经过人指(趾)甲的图形表示法单独50:50乙醇/水(对照)，尿素-11202或巯基乙酸(TA)，以及所述两种穿透增强剂的组合。该结果证明该双穿透增强剂系统增加典型药物扩散的能力。当将所述指(趾)甲浸没在50:50乙醇/水(对照)溶液中20小时并施用该药物时，214小时后仅有44±13lig/cn^穿透所述指(趾)甲。氧化剂——尿素-过氧化氢的施用对该药物穿透指(趾)甲的量没有显著影响(p>0.05，ANOVA)，这容许44±33Pg/cm2穿过该屏障。在施用特比萘芬前向所述指(趾)甲施用巯基乙酸容许861土135"g/cn^的药物穿透，但是这低于当在特比萘芬前相继施用巯基乙酸和尿素-1^02的情形，后者在219小时后容i午2308士1332yg/cm2。实施例9:施用时间对所述双施用穿透增强剂系统的影响图10是经先巯基乙酸(TA)再尿素-H202预处理不同时间周期后特比萘芬扩散经过人指(趾)甲的图形表示法。施用所述穿透增强剂系统30分钟或1小时在两种情形中都容许少于10ug/cm2的药物穿透所述指(趾)甲。相反，利用所述双穿透增强剂系统，其中每种增强剂施用长达20小时，315小时后其增加穿透人指(趾)甲的特比萘芬的量为3329±1842Pg/cm2。实施例10:利用所述穿透增强剂系统来改良商业抗真菌制剂的表现利用微生物鉴定检查所述双穿透增强剂系统对来自于商业药物漆Loceryl⑧的阿莫罗芬的穿透的影响。该鉴定评估了该制剂对在甲真菌病指(趾)甲中所发现的主要微生物体红色毛癣菌的功效，其中所述制剂是独立的或经巯基乙酸，尿素-过氧化氢或两者共同预处理的。图11是利用TurChub⑧检查腔系统进行的对所述生物体红色毛癣菌抑制域(ZOI)平均长度的比较，该比较是在向预处理的完整厚度末端指(趾)甲碎片施用多种穿透增强剂系统，再向每个的表面施用lOOul标准Loceryl漆并培养7天后进行的(n=4±SD)。图11证明当阿莫罗芬单独施用或在所述指(趾)甲经单一还原剂巯基乙酸预处理20小时后施用时，所述微生物体的生长不受阻止，即不存在能检测到的抑制域。当氧化剂尿素-过氧化氢用于预处理所述指(趾)甲时，检测到小抑制域。然而，当在抗真菌药物前，向所述指(趾)甲相继施用所述氧化剂和还原剂时，观察到差不多2cm的抑制域。这些结果突出了施用氧化剂和还原剂两者显著地增强了利用商业可获得的指甲使用制剂所获得的微生物杀伤。权利要求1.还原剂和氧化剂的每一种的制剂在制备用于治疗指(趾)甲病症的药剂中的用途，所述指(趾)甲可通过药物治疗，所述制剂单独放置并以先还原剂再氧化剂的顺序相继施用于患者的指(趾)甲，所述药物放置在一种或另一种的制剂中，或任选地在第三种制剂中，其中所述药物对于所述还原或氧化剂而言是附加的。2.根据权利要求1的用途，其中所述两种制剂的简单组合会引起极限反应，且其中每种试剂独立地药用于指(趾)甲。3.根据权利要求1或2的用途，其中所述还原剂选自由下列各项组成的组巯基乙酸铵，巯基乙酸钙，巯基乙酸钠，巯基乙酸，和二硫苏糖醇，抗坏血酸，对苯二酚，巯基乙醇，谷胱甘肽，L-半胱氨酸，牛磺酸，氮基甲磺酸，磺基丙氨酸，半胱亚磺酸，乙二磺酸，乙磺酸，高牛磺酸，次牛磺酸，羟乙磺酸，巯基乙磺酸，N-甲牛磺酸，及其简单衍生物。4.根据权利要求3的用途，其中所述衍生物是盐。5.根据权利要求3或4的用途，其中所述还原剂是巯基乙酸或其衍生物。6.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述氧化剂选自由下列各项组成的组尿素，过氧化氢，过硫酸钾，硫尿嘧啶，p-coumericacid，乙醇酸，草酸，cineol，peroxydone，二氧化氯，重铬酸铵，硝酸铵，高氯酸铵，高锰酸铵，溴酸钡，氯酸钡，过氧化钡，氯酸镉，氯酸钙，铬酸钙，高氯酸钙，硝酸铬，硝酸钴，氧化银，高碘酸和吡啶重铬酸盐。7.根据权利要求6的用途，其中所述氧化剂是过氧化氢。8.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述氧化剂是过氧化氢和尿素的加成化合物。9.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述药物存在于一种或两种所述制剂中。10.根据权利要求1-8中任一项的用途，其中所述药物存在于第三种制剂中。11.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述制剂是液体。12.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述还原剂作为碱性制剂来配制，其具有在7-14之间的pH。13.根据权利要求12的用途，其中所述pH在8-13之间。14.根据权利要求13的用途，其中所述pH在9-12之间。15.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述氧化剂的pH在1-7之间。16.根据权利要求15的用途，其中所述pH在2-5之间。17.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述制剂是水性的。18.根据前述权利要求任一项的用途，包括作为填充剂的丙二醇。19.根据前述权利要求任一项的用途，其中巯基乙酸与所述药物缀合。20.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述药物选自由下列各项组成的抗真菌药物组阿莫罗芬，咪康唑，酮康唑，伊曲康唑，氟康唑，益康唑，环己吡酮乙醇胺，奥昔康唑，克霉唑，特比萘芬，萘夫替芬，两性霉素，灰黄霉素，沃利康唑，氟胞嘧啶，制霉菌素，及其药用盐和酯。21.根据权利要求20的用途，其中所述药物是特比萘芬。22.根据权利要求20的用途，其中所述药物是阿莫罗芬。23.根据前述权利要求任一项的用途，其中药物选自由下列各项组成的抗银屑病药物组皮质类甾醇、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、依曲替酯、环孢菌素、他克莫司及其衍生物。24.根据前述权利要求任一项的用途，其中当与Ag/AgCl参考电极比时，去离子水中0.5M所述氧化剂的还原电位低于-50mV。25.根据权利要求24的用途，其中所述还原电位低于-100mV。26.根据权利要求25的用途，其中所述还原电位低于-200mV。27.根据前述权利要求任一项的用途，其中当与Ag/AgCl参考电极比时，去离子水中0.5M所述还原剂的还原电位高于+20mV。28.根据权利要求27的用途，其中所述还原电位高于+50mV。29.根据权利要求28的用途，其中所述还原电位高于+75mV。30.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述还原剂与所述药物缀31.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述氧化剂与所述药物缀合。32.根据前述权利要求任一项的用途，其中至少一种制剂选自由下列各项组成的组乳膏剂、油膏、凝胶、溶液、洗剂、泡沫、摩丝、喷雾剂、糊剂、敷料、粉末、预混物、非水性漆和水性漆。33.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述制剂每个分别选自由下列各项组成的组乳膏剂、油膏、凝胶、溶液、洗剂、泡沫、摩丝、喷雾剂、糊剂、敷料、粉末、预混物、非水性漆和水性漆。34.根据前述权利要求任一项的用途，其中至少一种制剂是基于水的凝胶。35.根据权利要求34的用途，其中全部试剂是基于水的凝胶。36.根据权利要求l-34中任一项的用途，其中至少一种制剂是基于水的漆。37.根据权利要求1-33中任一项的用途，其中全部试剂是基于水的漆。38.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述还原剂制剂在所述氧化制剂前至少IO小时施用。39.根据权利要求38的用途，其中所述还原剂制剂在所述氧化制剂前至少15小时施用。40.根据权利要求38的用途，其中所述还原剂制剂在所述氧化制剂前至少20小时施用。41.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述药物制剂在施用所述氧化剂制剂后1小时内施用。42.根据权利要求41的用途，其中所述药物在施用所述氧化剂制剂后20分钟内施用。43.根据权利要求41的用途，其中所述药物在施用所述氧化剂制剂后立即施用。44.一种治疗需要所述治疗的患者指(趾)甲中的指甲感染的方法，包括向所述指(趾)甲施用还原剂制剂，随后向其施用氧化剂制剂，所述指甲的病症可通过药物治疗，所述药物放置在所述制剂的一种中或在第三种制剂中。45.权利要求44的方法，进一步包括在权利要求2-43中任一项所定义的特征。46.—种试剂盒，包括在权利要求1-43中任一项所定义的制剂。全文摘要向指(趾)甲先施用还原剂再施用氧化剂充分地增加其渗透性，因此使药物通过所述指(趾)甲。文档编号A61K33/40GK101203209SQ200680019900公开日2008年6月18日申请日期2006年6月6日优先权日2005年6月6日发明者斯图尔特·艾伦·琼斯,罗伯特·特纳,马克·巴里·布朗申请人:美地医药有限公司