使用可溶性ctla4突变型分子治疗与移植物移植有关的免疫病症的方法

专利名称：：使用可溶性ctla4突变型分子治疗与移植物移植有关的免疫病症的方法
技术领域：
：本发明涉及可溶性CTLA4突变型分子在与移植物移植有关的免疫病症治疗中的用途，与野生型CTLA4比较所述可溶性CTLA4突变型分子与CD80(B7-1)和CD86(B7-2)的结合抗体亲抗原性增加。
背景技术：
：考虑到T细胞在移植排斥中的重要作用，目前免疫抑制疗法中的一个共同目标是阻断T细胞激活和功能(SayeghMH，TurkaLA.TheroleofT-cellcostimulatoryactivationpathwaysintransplantrejection.NEnglJMed1998;338(25):1813-21)。T细胞需要抗原特异性(信号1)和共刺激信号(信号2)两者用于完全激活(LenschowDJ,WalunasTL，BluestoneJA.CD28/B7systemofTcellcostimulation.AnnuRevImmunol1996;14:233-58)。最佳表征的共刺激途径之一涉及CD28-CD80/86(B7—1/2)相互作用(LinsleyPS,LedbetterJA.TheroleoftheCD28receptorduringTcellresponsestoantigen.AnnuRevImmunol1993;11:191-212)。细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA4)以比CD28更高的抗体亲抗原性结合CD80/86，并且在其激活后瞬时表达在T细胞上，在其中它中断CD"和CDS0/86之间的一目互4乍用(OosterwegelMA,GreenwaldRJ，MandelbrotDA,LorsbachRB，SharpeAH.CTLA-4andTcellactivation.CurrOpinImmunol1999;11(3):294-300)。这产生了对于T细胞激活的负反馈信号。先前已使用CTLA4Ig寻求这个途径中的干涉。CTLA4Ig已成功地用作治疗T细胞介导的自身免疫性病症例如类风湿性关节炎(KremerJM,WesthovensR,LeonM，等人，TreatmentofrheumatoidarthritisbyselectiveinhibitionofT-cellactivationwithfusionproteinCTLA4Ig.NEnglJMed2003;349(20):1907-15)和牛皮癣(Ab丽sJR,LebwohlMG，GuzzoCA，等人，CTLA4Ig-mediatedblockadeofT-cellcostimulationinpatientswithpsoriasisvulgaris.JClinInvest1999;103(9):1243-52)的策略。LEA29Y已在非人灵长类动物移植模型中单独以及与其他免疫抑制剂组合进行研究。ChristianLarsen等人(C.Larsen,T.Pearson,A.Adams,P.Tso，N.Shirasugi,E.Strobert，D,Anderson,S.Cowan，K.Price,J.Naemura,J.Emswiler,J.Greene，L.A.Turk,J.Bajorath，R.Townsend,D.Hagerty,P.Linsley和R.Peach;RationalDevelopmentofLEA29Y(belatacept),aHigh—AffinityVariantofCTLA4—IgwithPotentImmunosuppressiveProperties;AmericanJournalofTransplantation;第5巻，Issue3,March2005，第443页)已显示在用于研究肾同种异体移植排斥的非人灵长类动物模型中与CTLA4-Ig比较时，LEA29Y的免疫抑制活性增强。LEA29Y在手术中(10mg/kg，静脉内)、在第4天时(15mg/kg)以及在手术后第14、28、42、56和70天时(20mg/kg,静脉内)施用。CTLA4Ig(16mg/kg)在手术中以及在手术后第4、8、11和16天时施用。治疗方案还包括MMF(15mg/kg,在第0-14天时每天2次皮下，在第15-180天时每日)、曱基强的松龙(根据下列时间表皮下(subcutaneouse)注射，第O天20mg，第1天16mg，第3天8mg，第4天4mg，第5-14天3mg，第15-180天1mg)和巴利昔单抗(basiliximab)(0.3gm/kg,在第0和4天时静脉内)。尽管血清浓度相当，但用LEA29Y治疗的肾同种异体移植受体的存活明显优于用CTLA4-Ig治疗组的那种。用清蛋白治疗的对照受体显示与用CTLA4-Ig治疗组类似的中值存活时间。然而，尽管正在进行使用LEA29Y的治疗，但所有受体经历肾功能的显著衰退(血清肌酸酐升高)。AndrewAdams等人(A.Adams,N.Shirasugi，T.Jones,M.Durham,E.Strobert,S.Cowan,P.Rees,R.Hendrix，K.Price,N.Kenyon，D，Hagerty，R.Townsend,D.Hollenbaugh，T.Pearson和C.Larsen;DevelopmentofaChimericAnti-CD40MonoclonalAntibodyThatSynergizeswithLEA29YtoProlongIsletAllograftSurvival;TheJournalofImmunology;Jan2005;174;第542页)已显示LEA29Y和Chi220(嵌合抗人CD40mab)的组合在胰岛移植的非人灵长类动物模型中协同作用以延长同种异体移植物的存活。LEA29Y在手术中(20mg/kg);在手术后第4、7和14天时；随后每2周静脉内施用直至第100天。另外的剂量(20mg/kg)每月施用1次经过6个月。测试4种方案1)单独的LEA29Y，2)Chi220(抗CD40),3)LEA29Y与Chi220组合，和4)LEA29Y与抗CD20组合。AndrewAdams等人(A.Adams,N.Shirasugi,M.Durham,E.Strobert,D.Anderson,P.Rees,S.Cowan,H.Xu,Y.Blinder,M.Cheung,D.Hollenbaugh,N.Kenyon，T.Pearson和C.Larsen;CalcineurinInhibitor-FreeCD28Blockade-BasedProtocolProtectsAllogeneicIsletsinNonhumanPrimates;Diabetes,第51(2)巻,February2002,第265页)已显示在胰岛移植的非人灵长类动物模型中LEA29Y、雷帕霉素和抗-IL-2RmAb的组合显著延长胰岛同种异体移植物的存活。LEA29Y在手术中(10mg/kg)和在手术后第4天时(15mg/kg)静脉内施用。另外的20mg/kg剂量在手术后第14天时和每2周给予直至手术后第154天。在2003年期间，在美国移植了超过25,000个器官。肾移植代表大约60%的实体器官移植，随后为21%的肝移植，8%的心脏、4%的肺，并且剩余的7%代表其他器官移植例如胰和肠。(在www.optn.org上的OPTN/SRTRAnnualReport2004)。肾移植是关于终末期肾病的最有效治疗。它提供了改善的存活和生活质量(QoL)。功能肾移植的维持要求终生免疫抑制疗法以防止移植物的免疫破坏。当前的免疫抑制方案产生对于尸体89%以及对于活供体移植物94%的l年存活率。然而，随着时间过去，存在受试者和移植物两者的渐进性丢失。对于尸体和活相关供体肾移植的5年存活分另l]为66%和79%。(在www.unos.org上的UnitedNetworkforOrganSharingRenalTransplantRegistry2003)长期受试者和移植物丢失的最常见原因分别是心血管疾病和慢性同种异体移才直物肾病(CAN)。(L.C.Paul,Chronicallograftnephropathy-AmodelofimpairedrepairrominjuryNephrolDialTransplant2000;15:149-151)荒谬的是，关于肾移植的主要疗法-钙依赖磷酸酶抑制剂(CNIs)、CsA和他克莫司直接促成长期同种异体移植物丢失和受试者死亡，因为它们本来就是肾毒性的，并且还引起或加剧心血管危险，包括高血压、高胆固醇血症和糖尿病。虽然如此，但是这些试剂形成了关于肾移植的所有常规免疫抑制方案的基础。目前，没有批准的试剂可以代替CNIs作为在广泛范围的受试者中维持免疫抑制剂疗法的基础。一种试剂西罗莫司(雷帕霉素，来自Wyeth/Ayerst的Rapamune)已被批准用于在CNI-节制方案中使用。然而，对于移植后至少3个月CNIs仍必须与西罗莫司一起使用。更重要的是，只在受试者处于移植物丢失的低至中等危险中的背景下西罗莫司已被批准作为CNI-节制剂。因此，对于处于移植物丟失较高危险中、其CNIs肾毒性作用的避免将具有最大利益的那些，没有关于CNIs的批准的替代物。因此，存在对于免疫抑制剂的未满足的医学需要，其可以提供与期受试者死亡和移植物丟失的毒性。理想地，该试剂将不仅在低危险的受试者中有用，还在处于移植物丢失的较高危险中的受试者中有用。发明概述本发明提供了通过施用CTLA4突变型分子治疗与移植物移植有关的免疫病症的方法，所述CTLA4突变型分子与CD80和/或CD86抗原结合的抗体亲抗原性大于野生型CTLA4或非突变型CTLA4Ig。CTLA4分子具有包括CTLA4细胞外结构域的第一种氨基酸序列，其中在S25-R33区和M97-G107区内的某些氨基酸残基是突变的。本发明的突变型分子还可以包括增加突变型分子溶解性的第二种氨基酸序列。CTLA4突变型分子的一个例子是如本文描述的L104EA29YIg(图7，SEQIDNOS:3和4)。CTLA4突变型分子的另一个例子是如本文描述的L104EIg(图8,SEQIDNOS:5和6)。L104EA29YIg和L104EIg比CTLA4Ig以更高抗体亲抗原性结合CD80和CD86。本发明的CTLA4突变型分子的施用可以经过各种时间进行。一般地，施用方案包括其中在最大的免疫学危险期过程中剂量较高且施用频率增加的早期，随后为维持期。早期可以是移植后的前3-6个月。在早期过程中的施用方案可以依受体/移植物的状态而变。在一个实施方案中，本发明提供了通过给受试者施用有效剂量的CTLA4突变型分子治疗与移植物移植有关的免疫病症的方法，所述CTLA4突变型分子具有如SEQIDNO:8中所示、起始于第26位的丙氨酸或第27位的甲硫氨酸且终止于第150位的天冬氨酸的CTLA4细胞外结构域或其部分。另外，在细胞外结构域或其部分中第55位的丙氨酸由酪氨酸置换，并且第130位的亮氨酸由谷氨酸置换。此外施用方案包括早期方案，其中早期方案可以是移植后的前3-6个月且涉及最初比每月l次更频繁的施用。在另一实施方案中，本发明提供了通过给受试者施用有效剂量的CTLA4突变型分子治疗与移植物移植有关的免疫病症的方法，所述CTLA4突变型分子具有SEQIDNO:4的起始于第27位的甲硫氨酸且终止于第150位的天冬氨酸的氨基酸序列，或具有SEQIDNO:4的起始于第26位的丙氨酸且终止于第150位的天冬氨酸的氨基酸序列。此外CTLA4突变型分子施用方案包括早期方案，其中早期方案可以是移植后的前3-6个月且涉及最初比每月1次更频繁的施用。附图简述图1显示了L104EA29YIg、L104EIg和野生型CTLA4Ig与CD86Ig的平衡结合分析。图2A和2B举例说明了来自FACS测定的数据，显示了如下文实施例2中所述L104EA29YIg、L104EIg和CTLA4Ig与人CD80-或CD86-转染的CHO细胞的结合。图3A和3B描述了如下文实施例2中所述CD80-阳性和CD86-阳性CHO细胞的增殖抑制。图4A和4B显示如下文实施例2中所述在抑制初级和次级同种刺激的(allostimulated)T细胞增殖方面，L104EA29YIg比CTLA4Ig更有效。图5A-C举例说明了如下文实施例2中所述在抑制同种刺激的人t细胞的IL-2(图5A)、IL-4(图5B)和y-干扰素(图5C)细胞因子生产方面，LI04EA29YIg比CTLA4Ig更有效。图6证实了如下文实施例2中所述在抑制植物凝集素(PHA)刺激的猴T细胞增殖方面，L104EA29YIg比CTLA4Ig更有效。图7(SEQIDNOS:3和4)描述了如下文实施例1中所述的CTLA4突变型分子("L104EA29YIg")的核苷酸和氨基酸序列，其包括信号肽；起始于第+1位的曱硫氨酸且终止于第+124位的天冬氨酸、或起始于第-1位的丙氨酸且终止于第+K4位的天冬氨酸的CTLA4突变细胞外结构域；和Ig区。SEQIDNOS:3和4分别描述了CTLA4突变型分子("L104EA29YIg")的核苷酸和氨基酸序列，其包括信号肽；起始于第+27位的甲硫氨酸且终止于第+150位的天冬氨酸、或起始于第+26位的丙氨酸且终止于第+150位的天冬氨酸的CTLA4突变细胞外结构域；和Ig区。图8(SEQIDNOS:5和6)描述了如下文实施例1中所述的CTLA4突变型分子("L104EIg")的核苷酸和氨基酸序列，其包括信号肽；起始于第+1位的曱硫氨酸且终止于第+124位的天冬氨酸、或起始于第-l位的丙氨酸且终止于第+124位的天冬氨酸的CTLA4突变细胞外结构域；和Ig区。SEQIDNOS:5和6分别描述了CTLA4突变型分子("L104EIg")的核苷酸和氨基酸序列，其包括信号肽；起始于第+27位的曱石危氨酸且终止于第+150位的天冬氨酸、或起始于第+26位的丙氨酸且终止于第+150位的天冬氨酸的CTLA4突变细胞外结构域；和Ig区。图9(SEQIDNOS:7和8)描述了CTLA4Ig的核苷酸和氨基酸序列，其具有信号肽；起始于第+1位的甲硫氨酸至第+124位的天冬氨酸、或起始于第-1位的丙氨酸至第+124位的天冬氨酸的CTLA4细胞外结构域的野生型氨基酸序列；和Ig区。SEQIDNOS:7和8分别描述了CTLA4Ig的核普酸和氨基酸序列，其包括信号肽；起始于第+27位的曱硫氨酸且终止于第+150位的天冬氨酸、或起始于第+26位的丙氨酸且终止于第+150位的天冬氨酸的CTLA4细胞外结构域的野生型氨基酸序列；和Ig区。图10A-C是关于CTLA4Ig(泳道1)、L104EIg(泳道2)和L104EA29YIg(泳道3A)的SDS凝胶(图10A);以及CTLA4Ig(图10B)和L104EA29YIg(图10C)的大小排阻层析。图IIA和IIB举例说明了由通过NMR光谱学测定的溶液结构产生的CTLA4细胞外IgV-样折叠的带状图解。图11B显示S25-R33区和MYPPPY区的放大图，显示了抗体亲抗原性增强突变L104和A29的定位和侧链方向。图12描述了具有L104EA29YIg插入片段的载体piLN-L104EA29Y的示意图。图13描述了CTLA4受体的核苷酸和氨基酸序列(SEQIDNOS:9和10)。发明详述定义除非另有说明，本申请中使用的所有科学和技术术语都具有本领域通常使用的含义。如本申请中使用的，下列单词或短语具有说明的含义。如本文使用的，"配体"指特异性识别并结合另一分子的分子，例如关于CTLA4的配体是B7分子。如本文使用的，"野生型CTLA4"或"非突变型CTLA4"具有如图13中所示(SEQIDNOS:9和10;还如美国专利号5,434,131、5,844,095、5,851,795中所述)天然存在的全长CTLA4的氨基酸序列，或其任何部分或衍生物，其识别并结合B7或干扰B7，从而使得它阻断与CD28和/或CTLA4(例如内源性CD28和/或CTLA4)的结合。在具体实施方案中，野生型CTLA4的细胞外结构域起始于第+1位的曱石克氨酸且终止于第+124位的天冬氨酸，或野生型CTLA4的细胞外结构域起始于第-1位的丙氨酸且终止于第+124位的天冬氨酸。野生型CTLA4是细胞表面蛋白，具有N末端细胞外结构域、跨膜结构域和C末端细胞质结构域。细胞外结构域结合靶分子，例如B7分子。在细胞中，天然存在的野生型CTLA4蛋白质翻译为未成熟的多肽，其包括在N末端的信号肽。未成熟的多肽经历翻译后加工，这包括切割并去除信号肽以产生CTLA4切割产物，其具有的新生成的N末端不同于未成熟形式的N末端。本领域技术人员将理解可以存在另外的翻译后加工，其从CTLA4切割产物的新生成的N末端去除一个或多个氨基酸。可替代地，信号肽可以不完全去除，从而产生在共同的起始氨基酸甲硫氨酸之前开始的分子。因此，成熟的CTLA4蛋白质可以起始于第+1位的甲硫氨酸或第-1位的丙氨酸。成熟形式的CTLA4分子包括细胞外结构域或其结合B7的任何部分。"CTLA4Ig"是可溶性融合蛋白，其包括与Ig尾连接的野生型CTLA4的细胞外结构域，或其结合B7的部分。具体实施方案包括起始于第+1位的曱石危氨酸且终止于第+124位的天冬氨酸；或起始于第-1位的丙氨酸至第+124位的天冬氨酸的野生型CTLA4(如图9中所示，SEQIDNOS:7和8)的细胞外结构域；在第+125位的接头氨基酸残基谷氨酰胺；和包括第+126位的谷氨酸到第+357位的赖氨酸或第+356位的甘氨酸的免疫球蛋白部分(编码CTLA4Ig的DNA根据布达佩斯条约(BudapestTreaty)的规定于1991年5月31日保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC),10801UniversityBlvd.,Manassas,VA20110-2209,并且已给予ATCC登记号ATCC68629;Linsley,P.，等人，1994/mw冊/(y1:793-80。表达CTLA4Ig的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系CTLA4Ig-24于1991年5月31日保藏，ATCC识别号为CRL-10762)。可溶性CTLA4Ig分子可以包括或不包括信号(前导)肽序列。如本文使用的，"融合蛋白"定义为使用本领域众所周知的且如美国专利号5,434,131或5,637,481中描述的方法连接在一起的一种或多种氨基酸序列。连接的氨基酸序列从而形成一种融合蛋白。如本文使用的，"可溶的"指任何分子，或其片段和衍生物不结合或附着至细胞，即流动的。例如，CTLA4、B7或CD28可以通过将免疫球蛋白Ug)部分分别附着至CTLA4、B7或CD28的细胞外结构域变得可溶。可替代地，分子例如CTLA4可以通过去除其跨膜结构域变得可溶。如本文使用的，"CTLA4的细胞外结构域"是识别并结合CTLA4配体例如B7分子的CTLA4部分。例如，CTLA4的细胞外结构域包括第+1位的甲硫氨酸至第+124位的天冬氨酸(图13,SEQIDNOS:9和10)。可替代地，CTLA4的细胞外结构域包括第-1位的丙氨酸至第+124位的天冬氨酸(图13，SEQIDNOS:9和10)。细胞外结构域包括结合B7分子的CTLA4片段或衍生物。如图13(SEQIDNOS:9和10)中所示的CTLA4的细胞外结构域还可以包括改变CTLA4分子对B7分子的结合抗体亲抗原性的突变。如本文使用的，"CTLA4突变型分子"意指如(SEQIDNOS:9和IO)中显示的野生型CTLA4或其任何部分或衍生物，其具有一个突变或多个突变(优选在野生型CTLA4的细胞外结构域中)。CTLA4突变型分子具有的序列类似但不等同于野生型CTLA4分子的序列，但仍然结合B7。突变可以包括由具有保守(例如用异亮氨酸置换亮氨酸)或非保守(例如用色氨酸置换甘氨酸)结构或化学性质的氨基酸置换的一个或多个氨基酸残基、氨基酸缺失、添加、移码或截短。CTLA4突变型分子可以包括在其中或与其附着的非CTLA4分子。突变型分子可以是可溶的(即，流动的)或结合至细胞表面。另外的CTLA4突变型分子包括美国专利申请序列号09/865,321、60/214,065和60/287,576;美国专利号6,090,914、5，844，095和5,773,253中描述的那些；以及如Peach,R.J.,爭乂，在/￡xp^fed180:2049-2058(1994))中描述的。CTLA4突变型分子可以合成或重组制备。"L104EA29YIg"是可溶性CTLA4突变型分子的融合蛋白，所述CTLA4突变型分子包括与Ig尾连接、具有氨基酸改变A29Y(酪氨酸氨基酸残基置换第29位的丙氨酸)和L104E(谷氨酸氨基酸残基置换第+104位的亮氨酸)的野生型CTLA4的细胞外结构域，或其结合B7分子的部分(包括在图7中，SEQIDNOS:3和4;编码L104EA29YIg的DNA于2000年6月20日保藏，ATCC号为PTA-2104;在引入本文作为参考的美国专利申请序列号09/579,927、60/287,576和60/214,065中共同未决)。在本发明的方法和/或试剂盒中使用的可溶性L104EA29YIg分子可以包括或不包括信号(前导)肽序列。一般地，在本发明的方法和/或试剂盒中，该分子不包括信号肽序列。如本文使用的，术语"突变"意指野生型分子的核苷酸或氨基酸序列中的变化，例如，野生型CTLA4细胞外结构域的DNA和/或氨基酸序列中的变化。DNA中的突变可以改变密码子，从而导致氨基酸序列中的变化。DNA变化可以包括置换、缺失、插入、可变剪接或截短。氨基酸变化可以包括置换、缺失、插入、添加、截短、或蛋白质的加工或切割错误。可替代地，核普酸序列中的突变可以导致如本领域充分理解的氨基酸序列中的沉默突变。在那点上，某些核普酸密码子编码相同的氨基酸。例子包括编码氨基酸精氨酸(R)的核苷酸密码子CGU、CGG、CGC和CGA;或编码氨基酸天冬氨酸(D)的密码子GAU和GAC。因此，蛋白质可以由在其具体核普酸序列方面不同，但仍编码具有相同序列的蛋白质分子的一种或多种核酸分子编码。氨基酸编码序列如下<table>complextableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>突变型分子可以具有一个或多个突变。如本文使用的，"非CTLA4蛋白质序列"或"非CTLA4分子"意指不结合B7且不干扰CTLA4与其靶结合的任何蛋白质分子。例子包括但不限于，免疫球蛋白(Ig)恒定区或其部分。优选地，Ig恒定区是人或猴Ig恒定区，例如人c(y)1，包括铰链、ch2和ch3区。Ig恒定区可以被突变以减少其效应子功能(美国专利5,637,481、5，844，095和5，434，131)。如本文使用的，"片段"或"部分"是识别并结合其靶例如B7分子的CTLA4分子的任何部分或区段，优选CTLA4的细胞外结构域或其部分或区段。CTLA4的细胞外结构域可以包括改变CTLA4分子对B7分子的结合抗体亲抗原性的突变。如本文使用的，"B7"指可以识别并结合CTLA4和/或CD28的B7分子家族，包括但不限于，B7-1(CD80)、B7-2(CD86)和B7-3。如本文使用的，"B7阳性细胞"是在细胞表面上表达一种或多种类型的B7分子的任何细胞。如本文使用的，"衍生物"是共有其亲本分子的序列同源性和活性的分子。例如，CTLA4的衍生物包括具有至少70%类似于野生型CTLA4的细胞外结构域的氨基酸序列并且识别并结合B7的可溶性CTLA4分子，例如CTLA4Ig或可溶性CTLA4突变型分子L104EA29YIg。如本文使用的，"调节"免疫应答是激活、刺激、上调、抑制、阻断、下调或修改免疫应答。本文描述的自身免疫性疾病可以通过调节免疫应答来治疗，例如通过调节功能性CTLA4-和/或CD28-阳性细胞与B7阳性细胞的相互作用。例如，用于调节免疫应答的方法包括使B7阳性细胞与本发明的可溶性CTLA4分子接触，从而形成可溶性CTLA4/B7复合物，可溶性CTLA4分子干扰内源性CTLA4和/或CD28分子与所述B7细胞的反应。如本文使用的，"阻断"或"抑制"受体、信号或分子意指如通过领域公认的测试检测的，干扰受体、信号或分子的激活。阻断或抑制可以是部分或全部的。例如，细胞介导的免疫应答的阻断可以通过测定移植物的功能性来检测，例如肾移植后的血清肌酸酐浓度。如本文使用的，"阻断B7相互作用"意指干扰B7与其配体例如CD28和/或CTLA4的结合，从而阻碍T细胞和B7阳性细胞的相互作用。阻断B7相互作用的试剂的例子包括但不限于，识别并结合任何CTLA4、CD28或B7分子(例如B7-1、B7-2)的分子例如抗体(或其部分或衍生物)；可溶形式的分子(或其部分或衍生物)例如可溶性CTLA4;设计为通过CTLA4/CD28/B7介导的相互作用干扰细胞信号的肽片段或其他小分子。在优选实施方案中，阻断剂是可溶性CTLA4突变型分子，例如L104EA29YIg(ATCCPTA-2104)。如本文使用的，"治疗"病症或疾病意指通过医学或其他疗法处理疾病或病症。疾病或病症的治疗可以抑制与疾病有关的免疫介导事件，改善疾病或病症的症状，减少疾病或病症的严重性，改变疾病或病症进展的过程，和/或改善或治愈基本疾病或病症问题。例如，治疗过调节功能性CTLA4-和/或CD28-阳性细胞与B7阳性细胞的相互作用。可替代地，治疗免疫疾病或病症可以通过经由使用本文描述的排斥包括如i过肾小球i过率(gf1)测量的肾移植排斥的抑制。例如，治疗与移植物移植有关的免疫病症包括通过施用L104EA29YIg预防器官排斥。此外，治疗与移植物移植有关的免疫病症可以延长宿主和移植器官的存活。如本文使用的，"免疫系统疾病"包括由T细胞与B7阳性细胞相互作用介导的任何疾病，包括但不限于，自身免疫性疾病、免疫增生性疾病、以及与移^i物移纟直有关的免疫病症。如本文使用的，"与移植物移植有关的免疫病症"意指由T细胞与B7阳性细胞相互作用介导的任何移植相关疾病，包括但不限于，与移纟直物移纟直排斥有关的免疫病症，移;ti物相关病症，移#_物抗宿主病(GVHD)(例如，可以由骨髓移植引起，或在耐受性的诱导中)，移植物或移植体排斥包括移植物或移植体的急性排斥和移植物或移植体的慢性排斥。移植物可以是实体器官同种异体移植物或异种移植物、组织或细胞同种异体移植物或异种移植物、或外解剖学同种异体移植物或异种移植物，包括但不限于皮肤、胰岛细胞(也称为胰岛)、肌肉、肝细胞、神经元、心脏、肝、肾、肺、附肢、肢、鼻、耳或脸。1如本文使用的，免疫增生性疾病包括但不限于，T细胞淋巴瘤；急性T细胞型淋巴母细胞白血病；睾丸血管中心(testicularangiocentric)T细胞淋巴瘤；和良性淋巴细胞性脉管炎。如本文使用的，自身免疫性疾病包括但不限于，疾病例如狼疮(例如红斑狼疮、狼疮肾炎)，牛皮癣；Hashimoto氏曱状腺炎，原发性粘液性水肿，Grave氏病，恶性贫血，自身免疫性萎缩性胃炎，Addison氏病，糖尿病(例如胰岛素依赖性糖尿病、I型糖尿病、II型糖尿病)，goodpasture氏综合4正，重症月几无力，天疱痴，Crohn氏病，炎性肠病(IBD),交感性眼炎，自身免疫性葡萄膜炎，多发性硬化，自身免疫性溶血性贫血，特发性血小板减少症，原发性胆汁性肝硬变，慢性活动性肝炎，溃疡性结肠炎，Sjogren氏综合征，风湿性疾病(例如类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎)，多发性肌炎，硬皮病，和混合型结締组织病。为了本文描述的本发明可以被更充分地理解，阐述了下列描述。本发明的组合物和方法本发明提供了用于移植的一类新的免疫抑制疗法。其是结合抗原呈递细胞(APCs)表面上的B7分子的融合蛋白，抑制T细胞激活必需的共刺激。本发明的可溶性CTLA4突变型分子在其分子靶的限制别并结合CD80和/或CD86的^T溶性C^l14突变型分子。在^些实施方案中，可溶性CTLA4突变体对于CD80和/或CD86的抗体亲抗原性比CTLA4Ig更高。例如，L104EA29YIg与CD80的结合抗体亲抗原性为野生型CTLA4Ig(以下称为CTLA4Ig)的大约2倍，并且与CD86的结合抗体亲抗原性为大约4倍。这种更强烈的结合导致L104EA29YIg在阻断免疫应答方面比CTLA4Ig更有效。本发明的一个实施方案提供了用于治疗免疫系统疾病的方法。该方法包括给受试者施用包括本文公开的可溶性CTLA4突变型分子的治疗组合物，其量有效减轻与免疫系统疾病有关的至少一种症状。另外，本文公开的可溶性CTLA4突变型分子可以提供用于免疫系统疾病的长期治疗，这通过阻断T细胞/B7阳性细胞的相互作用，从而阻断经由共刺激信号例如B7与CD28结合的T细胞激活/刺激，从而导致T细胞无反应性或耐受性的诱导来实现。免疫系统疾病包括但不限于，自身免疫性疾病、免疫增生性疾病以及上文讨论的与移植物移植有关的免疫病症。另一实施方案提供了通过施用包括本文公开的可溶性CTLA4突变型分子的治疗组合物用于在患有与移植物移植有关的免疫病症的受试者中诱导耐受性的方法。本文公开的可溶性CTLA4突变型分子显示出体内抑制特性。在其中T细胞/B7阳性细胞相互作用，例如T细胞/B细胞相互作用由于T细胞和B7阳性细胞之间的接触而发生的条件下，引入的CTLA4突变型分子与B7阳性细胞例如B细胞的结合可以干扰，即抑制T细胞/B7阳性细胞相互作用，从而导致免疫应答的调节。另一实施方案提供了用于调节免疫应答的方法。通过本文公开的可溶性CTLA4突变型分子下调(减少)的免疫应答可以经由抑制或阻断已经在进行中的免疫应答，或可以涉及预防免疫应答的诱导。本文公开的可溶性CTLA4突变型分子可以通过抑制T细胞应答或通过诱导T细胞中的特异性耐受，或两者来抑制活化T细胞的功能，例如T淋巴细胞增殖、细胞因子分泌和/或细胞因子生产。此外，本文公开的干扰CTLA4/CD28/B7途径的可溶性CTLA4突变型分子可以抑制T细胞增殖和/或细胞因子分泌，并因此导致组织破坏减少和T细胞无应答性或无反应性的诱导。CTLA4突变型分子包括CTLA4的至少细胞外结构域，或其结合CD80和Z或CD86的部分。CTLA4突变型分子的细胞外部分包括起始于第+1位曱硫氨酸到第+124位的天冬氨酸的氨基酸序列(图7,SEQIDNOS:3和4;或图8,SEQIDNOS:5和6)。可4夺代地，CTLA4的细胞外部分可以包括起始于第-l位丙氨酸到第+124位的天冬氨酸的氨基酸序列(图7，SEQIDNOS:3和4;或图8，SEQIDNOS:5和6)。在一个实施方案中，可溶性CTLA4突变型分子是包括CTLA4的细胞外结构域的融合蛋白，其在起始于第+25位的丝氨酸且终止于第+33位的精氨酸的氨基酸序列(S25-R33)区域中具有一个或多个突变。例如，野生型CTLA4的第+29位的丙氨酸可以由酪氨酸(密码子UAU、UAC)置换。可替代地，丙氨酸可以由亮氨酸(密码子UUA、UUG、CUU、CUC、CUA、CUG)、苯丙氨酸(密码子UUU、UUC)、色氨酸(密码子UGG)或苏氨酸(密码子ACU、ACC、ACA、ACG)置换。如本领域j支术人员容易理解的，RNA序列中的尿嘧-定(U)核苷酸对应DNA序列中的胸腺嘧啶(T)核苷酸。在另一实施方案中，可溶性CTLA4突变型分子是包括CTLA4的细胞外结构域的融合蛋白，其在起始于第+97位的甲疏氨酸且终止于第+107位的甘氨酸的氨基酸序列(M97-G107)区域中或附近具有一个或多个突变。例如，野生型CTLA4的第+104位的亮氨酸可以由谷氨酸(密码子GAA、GAG)置换，具有这种置换的CTLA4突变型分子在本文中称为L104EIg(图8,SEQIDNOS:5和6)。在再一实施方案中，可溶性CTLA4突变型分子是包括CTLA4的细胞外结构域的融合蛋白，其在S25-R33和M97-G107区域中具有一个或多个突变。例如，在一个实施方案中，CTLA4突变型分子包括第+29位的酪氨酸代替丙氨酸；和第+104位的谷氨酸代替亮氨酸。具有这些置换的CTLA4突变型分子在本文中称为L104EA29YIg(图7,SEQIDNOS:3和4)。编码L104EA29YIg的核酸分子包含在pD16U04EA29YIg中，并且于2000年6月20日保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)，10801UniversityBlvd.，Manasas，VA20110—2209(ATCC号PTA-2104)。pD16L104EA29YIg栽体是pcDNA3栽体(INVITROGEN)的衍生物。本发明进一步提供了包括如图7(SEQIDNOS:3和4)或图8(SEQIDNOS:5和6)中所示的CTLA4突变体的细胞外结构域或其部分，以及改变CTLA4突变型分子的溶解性、亲和力和/或效价的部分的可溶性CTLA4突变型分子。依照本发明的实践，该部分可以是免疫球蛋白恒定区或其部分，例如CH1结构域、铰链、CH2结构域或CH3结构域中的一个或多个。对于体内使用，优选免疫球蛋白恒定区不在受试者中引起有害的免疫应答。例如，在临床方案中，优选突变型分子包括人或猴免疫球蛋白恒定区或其部分。合适的免疫球蛋白结构域的例子包括但不限于，IgCyl(IgCgamma1)、IgCy2(IgCgamma2)、IgCy3(IgCgamma3)、IgCy4(IgCgamma4)、IgCp(IgCmu)、IgCal(IgCalphal)、IgCa2UgCalpha2)、IgCS(IgCdelta)或IgCs(IgCepsilon)。其他同种型也是可能的。此外，其他免疫球蛋白恒定区或其部分也是可能的(优选其他弱或非免疫原性的免疫球蛋白恒定区或其部分)。对于临床方案，优选免疫球蛋白部分不在受试者中引起有害的免疫应答。优选的部分是免疫球蛋白恒定区或其部分，包括人或猴免疫球蛋白分子恒定区或其部分。合适的免疫球蛋白区的一个例子是人Cy1，包括铰链、CH2和CH3区，其可以介导效应子功能例如结合Fc受体、介导补体依赖性细胞毒性(CDC)、或介导依赖抗体的细胞毒性(ADCC)。免疫球蛋白部分可以在其中具有一个或多个突变(例如在CH2结构域中，以减少效应子功能，例如CDC或ADCC)，其中所述突变通过增加或减少免疫球蛋白与Fc受体的结合能力调节免疫球蛋白与其配体的结合能力。例如，免疫球蛋白部分中的突变可以包括铰链结构域内的任何或所有其半胱氨酸残基中的变化，例如第+130、+136和+139位的半胱氨酸由丝氨酸置换(图9,SEQIDNO:8)。免疫球蛋白部分还可以包括如图9(SEQIDNO:8)中所示由丝氨酸置换的第+148位的脯氨酸。此外，免疫球蛋白部分中的突变可以包括由苯丙氨酸置换第+144位的亮氨酸，由谷氨酸置换第+145位的亮氨酸，或由丙氨酸置换第+147位的甘氨酸。免疫球蛋白部分的例子包括美国专利7>开号2002/0114814Al和2004/0151725Al，美国专利号6,444,792和6,750，334，以及WO97/28267中描述和公开的那些。其他部分包括多肽标记。合适标记的例子包括但不限于p97分子、envgpl20分子、E7分子和ova分子(Dash，B.，等人，(1994)J.G饥PW.75:1389-97;Ikeda，T.,等人，(1994)G騰138:193-6;Falk，K.,等人，(1993)Ce〃./mm腸/.150:447-52;Fujisaka,K.等人，(1994)P7ra/ogy204:789-93)。用作标记的其他分子也是可能的(Gerard，C.等人，(1994)A^^osc^"ce62:721-739;Byrn，R.等人，(1989)63:4370—4375;Smith,D.等人，(1987)Sc〖騰e238:1704-1707;Lasky，L.,(1996)Sc/e,233:209_212)。本发明进一步提供了可溶性突变型CTLA4Ig融合蛋白，优选与野生型CTLA4比较与CD80和/或CD86抗原更有反应性。一个例子是如图7(SEQIDNOS:3和4)中所示的L104EA29YIg。在另一实施方案中，可溶性CTLA4突变型分子包括接头氨基酸残基，其位于CTLA4部分和免疫球蛋白部分之间。接头氨基酸可以是任何氨基酸，包括谷氨酰胺。接头氨基酸可以通过本领域已知的分子或化学合成方法引入。在另一实施方案中，可溶性CTLA4突变型分子包括免疫球蛋白部分(例如，铰链、CH2和CH3结构域)，其中免疫球蛋白部分的铰链结构域内的任何或所有半胱氨酸残基由丝氨酸置换，例如第+130、+136或+139位的半胱氨酸(图7,SEQIDNOS:3和4;或图8,SEQIDNOS:5和6)。突变型分子还可以包括如图7(SEQIDNOS:3和4)或图8(SEQIDNOS:5和6)中所示由丝氨酸置换的第+148位的脯氨酸。可溶性CTLA4突变型分子可以包括与突变型分子CTLA4部分的细胞外结构域的N末端连接的信号肽序列。信号肽可以是将允许突变型分子分泌的任何序列，包括来自制瘤素M(Malik,等人，(1989)M/ec.Ce〃.肌o/.9:2847-2853)或CD5(Jones，N.H.等人，(1986)323:346-349)的信号肽，或来自任何细胞外蛋白质的信号肽。突变型分子可以包括在CTLA4的细胞外结构域的N末端连接的制瘤素M信号肽，以及与CTLA4的细胞外结构域的C末端连接的人免疫球蛋白分子(例如，铰链、CH2和CH3)。这种分子包括包含第-26位的曱硫氨酸到第-1位的丙氨酸的氨基酸序列的制瘤素M信号肽，包含第+1位的曱硫氨酸到第+124位的天冬氨酸的氨基酸序列的CTLA4部分，第+125位的接头氨基酸残基谷氨酰胺，以及包含第+126位的谷氨酸到第+357位的赖氨酸或第+356位的甘氨酸的氨基酸序列的免疫球蛋白部分。本发明的可溶性CTLA4突变型分子可以通过分子或化学合成方法获得。分子方法可以包括下列步骤将表达且编码可溶性CTLA4突变型分子的核酸分子引入合适的宿主细胞；在允许宿主细胞表达突变型分子的条件下培养这样引入的宿主细胞；并分离表达的突变型分子。突变型分子的信号肽部分允许蛋白质分子表达在细胞表面上并由宿主细胞分泌。翻译的突变型分子可以经历翻译后修饰，涉及切割信号肽以产生具有CTLA4和免疫球蛋白部分的成熟蛋白。切割可以在第-1位的丙氨酸后发生，从而导致具有第+1位的曱硫氨酸作为第一个氨基酸的成熟的突变型分子(图7，SEQIDNOS:3和4;或图8，SEQIDNOS:5和6)。可替代地，切割可以在第-2位的曱硫氨酸后发生，从而导致具有第-1位的丙氨酸作为第一个氨基酸的成熟的突变型分子。本领域技术人员将知道在哺乳动物细胞中表达L104EA29YIg可以导致N和C末端变体的产生，从而使得产生的蛋白质可以具有氨基酸残基序列(i)+l至+357,(ii)-1至+357;(iii)+1至+356或(iv)-1至356(图7,SEQIDNOS:3和4;或图8，SEQIDNOS:5和6)。优选实施方案是具有与人免疫球蛋白分子(例如，铰链、CH2和CH3)的全部或部分连接的人CTLA4的细胞外结构域的可溶性CTLA4突变型分子。这种优选分子包括包含第+1位的曱硫氨酸到第+124位的天冬氨酸的氨基酸序列的可溶性分子CTLA4部分，第+125位的接头氨基酸残基谷氨酰胺，以及包含第+126位的谷氨酸到第+357位的赖氨酸或第+356位的甘氨酸的免疫球蛋白部分。具有CTLA4的细胞外结构域的部分被突变，从而使得第+29位的丙氨酸由酪氨酸置换，并且第+104位的亮氨酸由谷氨酸置换。突变型分子的免疫球蛋白部分可以被突变，从而使得第+130、+136和+139位的半胱氨酸由丝氨酸置换，并且+148位的脯氨酸由丝氨酸置换。这种突变型分子在本文中被称为L104EA29YIg(图7,SEQIDNOS:3和4)。L104EA29YIg的另一实施方案是具有第-1位的丙氨酸到第+124位的天冬氨酸的氨基酸序列，第+125位的接头氨基酸残基谷氨酰胺，以及包含第+126位的谷氨酸(例如+126到第+357位的赖氨酸或第+356位的甘氨酸)的免疫球蛋白部分的突变型分子。具有CTLA4的细胞外结构域的部分被突变，从而使得第+29位的丙氨酸由酪氨酸置换；并且第+104位的亮氨酸由谷氨酸置换。突变型分子的免疫球蛋白部分可以被突变，从而使得第+130、+136和+139位的半胱氨酸由丝氨酸置换，并且+148位的脯氨酸由丝氨酸置换。这种突变型分子在本文中被称为L104EA29YIg(图7,SEQIDNOS:3和4)。在信号序列已切割后，L104EA29YIg可以起始于第+1位的曱硫氨酸，或起始于第-1位的丙氨酸。本发明的另一种突变型分子是具有与人免疫球蛋白分子(例如铰链、CH2和CH3)连接的人CTLA4的细胞外结构域的可溶性CTLA4突变型分子。这种分子包括编码起始于第+1位的甲硫氨酸到第+124位的天冬氨酸的CTLA4的氨基酸序列部分，第+125位的接头氨基酸残基谷氨酰胺，以及包含第+126位的谷氨酸到第+357位的赖氨酸或第+356位的甘氨酸的氨基酸序列的免疫球蛋白部分。具有CTLA4的细胞外结构域的部分被突变，从而使得第+104位的亮氨酸由谷氨酸置换。突变型分子的铰链部分可以被突变，从而使得第+130、+136和+139位的半胱氨酸由丝氨酸置换，并且+148位的脯氨酸由丝氨酸置换。这种突变型分子在本文中称为L104EIg(图8，SEQIDNOS:5和6)。可替代地，L104EIg的一个实施方案是具有与人免疫球蛋白分子(例如铰链、CH2和CH3)连接的人CTLA4的细胞外结构域的可溶性CTLA4突变型分子。这种优选的分子包括包含起始于第-1位的丙氨酸到第+124位的天冬氨酸的氨基酸序列的CTLA4部分，第+125位的接头氨基酸残基谷氨酰胺，以及包含第+126位的谷氨酸到第+357位的赖氨酸或第+356位的甘氨酸的免疫球蛋白部分。具有CTLA4的细胞外结构域的部分被突变，从而使得第+104位的亮氨酸由谷氨酸置换。突变型分子的铰链部分可以被突变，从而使得第+130、+136和+139位的半胱氨酸由丝氨酸置换，并且+148位的脯氨酸由丝氨酸置换。这种突变型分子在本文中称为L104EIg(图8，SEQIDNOS:5和6)。此外，本发明提供了可溶性CTLA4突变型分子，其具有(a)与第二种氨基酸序列融合的，膜糖蛋白例如CD28、CD86、CD80、CDM和gp39的第一种氨基酸序列，其阻断T细胞增殖；(b)是突变型CTLA4的细胞外结构域片段的第二种氨基酸序列，其阻断T细胞增殖，例如包括第+1位的甲硫氨酸到第+124位的天冬氨酸的氨基酸分子(图7,SEQIDNOS:3和4;或图8,SEQIDNOS:5和6);和(c)第三种氨基酸序列，其充当鉴别标记或增强分子的溶解度。例如，第三种氨基酸序列可以基本上由非免疫原性的免疫球蛋白分子的铰链、CH2和CH3区的氨基酸残基组成。合适的免疫球蛋白分子的例子包括但不限于，人或猴免疫球蛋白，例如IgCyl。其他同种型也是可能的。本发明还提供了通过给受试者施用有效剂量的CTLA4突变型分子治疗与移植物移植有关的免疫病症的方法，所述CTLA4突变型分子具有如SEQIDNO:8中所示、起始于第26位的丙氨酸或第27位的甲硫氨酸且终止于第150位的天冬氨酸的CTLA4细胞外结构域或其部分。另外，在细胞外结构域或其部分中第55位的丙氨酸由酪氨酸置换，并且第130位的亮氨酸由谷氨酸置换。此外，施用方案包括早期方案，其中早期方案可以是移植后的前3-6个月且涉及最初比每月1次更频繁的施用。另外，本发明提供了通过给受试者施用有效剂量的CTLA4突变型分子治疗与移植物移植有关的免疫病症的方法，所述CTLA4突变型分子具有SEQIDNO:4的起始于第27位的甲硫氨酸且终止于第150位的天冬氨酸的氨基酸序列，或SEQIDNO:4的起始于第26位的丙氨酸且终止于第150位的天冬氨酸的氨基酸序列。此外CTLA4突变型分子施用方案包括早期方案，其中早期方案可以是移植后的前3-6个月且涉及最初比每月l次更频繁的施用。本发明进一步提供了包括编码氨基酸序列的核苷酸序列的核酸分子，所述氨基酸序列对应于本发明的可溶性CTLA4突变型分子。在一个实施方案中，核酸分子是DNA(例如cDNA)或其杂交体。可替代地，核酸分子是RNA或其杂交体。另外，本发明提供了包括本发明的核苷酸序列的载体。还提供了宿主载体系统。宿主载体系统包括在合适的宿主细胞中的本发明载体。合适的宿主细胞的例子包括但不限于，原核和真核细胞。本发明包括用于在与移植物移植有关的免疫病症治疗中使用的药物组合物，其包括药学有效剂量的可溶性CTLA4突变型分子。在某些实施方案中，与移植物移植有关的免疫病症由CD28-和/或CTLA4-阳性细胞与CD80和/或CD86阳性细胞的相互作用介导。可溶性CTLA4突变型分子优选是在CTLA4的细胞外结构域中具有一个或多个突变的CTLA4分子。药物组合物可以包括可溶性CTLA4突变型蛋白质分子和/或核酸分子，和/或编码所述分子的载体。在优选实施方案中，可溶性CTLA4突变型分子具有如图7(SEQIDNOS:3和4)或8(SEQIDNOS:5和6)中所示的CTLA4细胞外结构域的氨基酸序列，分别为L104EA29Y或L104E。再更优选地，可溶性CTLA4突变型分子是如本文公开的L104EA29YIg。组合物可以另外包括其他治疗剂，包括但不限于，药物毒素、酶、抗体或缀合物。药物组合物还优选包括合适的载体和佐剂，其包括当与本发明的分子(例如可溶性CTLA4突变型分子，例如L104EA29Y或L104E)组合时保留分子的活性且与受试者的免疫系统不反应的任何材料。合适的载体和佐剂的例子包括但不限于，人血清清蛋白；离子交换剂；氧化铝；卵磷脂；緩冲物质，例如磷酸盐；甘氨酸；山梨酸；山梨酸钾；以及盐或电解质，例如硫酸鱼精蛋白。其他例子包括任何标准药学载体例如磷酸緩沖盐水溶液；水；乳状液，例如油/水乳状液；以及各种类型的湿润剂。其他载体还可以包括无菌溶液；片剂，包括糖衣片剂和胶嚢。一般地此类载体包含赋形剂，例如淀粉、乳、糖、某些类型的粘土、明胶、硬脂酸或其盐、硬脂酸镁或钙、滑石、植物脂肪或油、树胶、乙二醇、或其他已知的赋形剂。此类载体还可以包括食用香料或色料添加剂或其他成分。包括此类载体的组合物通过众所周知的常规方法进行配制。此类组合物还可以在各种脂质组合物例如脂质体以及各种聚合物组合物例如聚合物微球体内进行配制。本发明的药物组合物可以使用常规施用方式给受试者施用，包括但不限于，静脉内(i.v.)施用，腹膜内(i.p.)施用，肌内(i.m.)施用，皮下施用，经口施用，作为栓剂、或作为局部接触、或緩释装置例^口孩么型；参透泵(miniosmoticpump)的才直入施用。本发明的药物组合物可以是各种剂型，其包括但不限于，液体溶液或悬浮液、片剂、丸剂、粉末、栓剂、聚合微型胶嚢剂或微泡、脂质体、以及可注射或可输注的溶液。优选的形式取决于施用方式和治疗应用。用于静脉内(i.v.)施用的本发明的一般药物组合物在下文列出。冻干的L104EA29YIg100mg/小瓶药物产品的组成<table>complextableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>a每个小瓶包含对于重构溶液的小瓶、针及注射器容纳量的10%过满。冻干的药物产品可以用水载体构建。本文的目的水载体是药学可接受的(对于给人的施用是安全且无毒的)且在冻干后对于液体制剂制备有用的水载体。一般地，冻干的药物产品用10ml无菌注射用水，USP(SWFI)或0,9%氯化钠注射液，USP构建为约25mg/ml。构建的溶液用0.9。/。氯化钠注射液，USP进一步稀释至1-10mg/ml的药物产品浓度。用于注射的稀释药物产品是等渗的且适合于通过静脉内输注施用。表面活性剂可以加入制剂中，其量足以减少或预防构建的药物产品与硅化处理注射器的相互作用。关于本发明组合物的最有效的施用方式和剂量方案i[又决于疾病的严重性和病程、患者的健康状态和对治疗的应答以及治疗医生的判断。因此，组合物的用量(也称为剂量)应当滴定给个别患者。可溶性CTLA4突变型分子可以给受试者施用，其量、在时间段内的频率(例如，时间的长短和/或多次)足以阻断受试者中的内源性B7(例如CD80和/或CD86)分子结合其各自的配体。内源性B7/配体结合的阻断从而抑制了B7阳性细胞(例如CD80-和/或CD86-阳性细胞)与CD28-和/或CTLA4-阳性细胞之间的相互作用。治疗剂的剂量取决于许多因素，包括但不限于，受影响的组织类型、治疗的与移植物移植有关的免疫病症的类型、疾病的严重性、受试者的健康状态以及受试者对试剂治疗的应答。本发明的分子或药物组合物的剂量基于体重，并且施用方案可以由靶血清谷特征指定。一般地，在移植后的前3-6个月内约3pg/mL-约30pg/mL的本发明CTLA4突变型分子的靶谷血清浓度将足以维持同种异体移植物的功能，优选约5ng/mL-约20pg/mL。一般地，在维持期过程中的本发明CTLA4突变型分子的靶谷血清浓度为约0.2fig/mL-约3(ig/mL,优选约0.25(ig/mL-约2.5|ug/mL。本发明的CTLA4突变型分子可以以约0.1-约20.0mg/kg患者重量的量施用，一般为约1.0-约15.0mg/kg。例如，L104EA29Y在早期-移植后的高危险期可以以10mg/kg患者重量施用，并且对于维持剂量减少至5mg/kg患者重量。本发明的分子或药物组合物的施用可以经过各种时期进行。一般地，施用方案包括其中在最大的免疫学危险期过程中剂量较高且施用频率增加的早期，随后为维持期。早期方案可以是移植后的前3-6个月且涉及最初比每月1次更频繁的施用，取决于免疫学危险和/或靶谷血清浓度优选频繁至每天1次、每周1次或每2周1次。维持期在早期结束时开始且涉及不比每月l次更频繁的施用，并且持续所需的时间长度，一般为患者保留移植物的时间长度。如本文使用的，第1天定义为移植当天或用本发明的分子或药物组合物治疗的第一天。早期中本发明的CTLA4突变型分子的剂量为约8-约12mg/kg患者重量，优选约10mg/kg。维持期中本发明的CTLA4突变型分子的剂量为约3-约7mg/kg患者重量，优选约5mg/kg。早期可以是移植后的前3-6个月。在早期过程中的施用方案可以依受体和/或移植物的状态而变。例如，较加强的早期方案将在第1天、第5天、第2周就诊时(例如第13-17天)、随后对于前3个月每2周1次(例如，在第4周就诊、第6周就诊、第8周就诊、第10周就诊和第12周就诊时)，随后为每月l次的施用到第6个月就诊(例如，在第4个月就诊、第5个月就诊和第6个月就诊时)施用较高剂量的本发明的分子或药物组合物。一般较加强的早期方案的例子是在第1、5、15、29、43、57、71、85、113、141和169天时施用10mg/kg患者重量的L104EA29YIg。较不加强的方案，例如，将在第1天、第2周就诊、第4周就诊、随后为每月1次到第3个月就诊时施用本发明的分子或药物组合物。一般较不加强的早期方案的例子是在第1、15、29、57和85天时施用10mg/kg患者重量的L104EA29YIg。一般地，早期随后为维持期，其中较低剂量的本发明的分子或药物组合物以1-2个月的时间间隔施用所需时间长度，一般为患者保留移植物的时间长度。关于上文描述的较加强方案的维持期例子包括起始于第7个月就诊每月施用1次5mg/kg患者重量的L104EA29YIg。同时关于较不加强方案的维持期例子将包括起始于第4个月就诊每月施用1次5mg/kg患者重量的L104EA29YIg。可替代地，本领域技术人员将能够响应于患者的危险状态和/或响应于移植后的治疗修改施用方案。例如，上文描述的早期较不加强方案可以修改为给方案添加第5天的施用，从而增加最大的免疫学危险期过程中的施用频率。如本文使用的，"4周"、"月"或"每月"指28±5天的时间段。如本文使用的，"2周"指14土3天的时间段。施用方案中的灵活性是促进移植受体生活中的施用时间安排所必需的，同时维持本发明的CTLA4突变型分子的耙谷特征。关于施用剂量的允许窗口如下<table>complextableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>靶曰期是先前实际就诊日期加所需持续时间的结果。对于第2周就诊的所需持续时间是10天。对于计划离先前就诊为2周的就诊，所需持续时间是l4天，例如第6周就诊在第4周就诊之后。对于计划离先前就诊为1个月或4周的就诊，所需持续时间是28天，例如第4个月的就诊在第3个月的就诊之后。对于计划离先前就诊为2个月的就诊，所需持续时间是56天，例如第8个月就诊在第6个月就诊之后。例如，第15天的实际就诊日期加14天产生第29天的第4周靶日期。基于上文的就诊窗口，施用可以在第29天±3天发生。如果施用发生在第26天，那么那天变成用于计算下一个革巴日期的实际就诊日期。低危险的急性排斥受体一般包括接受来自活相关供体的移植以及匹配良好的受体/供体的那些。高危险的急性排斥受体一般包括接受来自边缘供体的移植或再次移植，具有高系列反应性抗体或者是非裔美国人的那些。除了中等危险的急性移植排斥之外，维持药物例如4丐依赖磷酸酶抑制剂和类固醇经过长期的使用导致负面影响长期结果和患者生活质量的毒性。例如，维持药物的副作用包括导致肾功能衰退和/或移植物丟失的肾毒性(CAN),以及心血管和代谢疾病例如高血压、高脂血症和糖尿病，其导致心血管疾病和死亡。另外的副作用包括多毛症(hirsuitism)、秃头(alpecia)、牙龈增生、震颤、神经毒性和骨丢失，其导致不顺从和生活质量降低。本发明的分子或药物组合物在治疗与移植物移植有关的免疫病症，或治疗处于这些结果危险中的受试者中与移植物移植有关的免疫病症时，可以用于避免这些结果，减少这些结果的发生率、发展和/或进展。本发明的分子或药物组合物可以用于改善例如经由GFR测量的肾功能。本发明的分子或药物组合物的施用可以经由30分钟至1个或更多小时的静脉内输注。可替代地，单至多次皮下注射可以递送所需剂量。一般地，当患者在医院和/或进行用于监控的健康护理专业人员的预定就诊时，30分钟的静脉内输注是在治疗早期过程中使用的施用途径。皮下注射是在维持期过程中使用的一般施用方式，从而允许患者通过减少用于静脉内输注的健康护理专业人员的就诊回到其正常时间表。本发明的可替代实施方案提供了用于治疗已接受移植后的可替代免疫抑制疗法的受试者中与移植物移植有关的免疫病症的方法。接受可替代药物免疫抑制疗法的受试者可以改变或转换或转变至包括本发明的分子或药物组合物的疗法，从而除去替代药物。一般地被除去的药物基于开处的那种特定药物的指导经过合适的时间段斜降(rampdown)，同时本发明的分子或药物组合物比每月1次更频繁地施用。一旦受试者已完全脱离替代药物，受试者就可以回到使用本发明的分子或药物组合物的标准维持方案。例如，接受CsA/MMF士皮质类固醇方案的受试者可以用L104EA29YIg转换CsA成为L104EA29YIg/MMF士皮质类固醇方案。转变的施用时间表可以包括经过2个月斜降CsA的剂量，并在那2个月过程中每2周施用5mg/kgL104EA29YIg。一旦CsA已除去，受试者随后就可以进入维持期并继续每4或8周接受5mg/kg用于在CsA不存在下治疗的持续。一个实施方案提供了关于本文公开的可溶性CTLA4突变型分子的合适剂量，其有效用于阻断B7与其配体的相互作用和/或治疗免疫系统疾病。例如，剂量可以基于体重，并且施用方案可以由靶血清谷特征指定。例如，本文公开的可溶性CTLA4突变型分子治疗免疫系统疾病有效的靶谷血清浓度可以为约0.2|ug/mL-约30pg/mL。可替代地，本文公开的可溶性CTLA4突变型分子可以以约0.1-约20.0mg/kg患者体重的量施用以治疗免疫系统疾病。本发明进一步提供了用于治疗与移植物移植有关的免疫病症的方法。在具体实施方案中，与移植物移植有关的免疫病症由CD28-和/或CTLA4-阳性细胞与CD80/CD86-阳性细胞的相互作用介导。在进一步的实施方案中，T细胞相互作用被抑制。这些方法包括给受试者施用本发明的可溶性CTLA4突变型分子，以调节T细胞与CD80-和/或CD86-阳性细胞的相互作用。与移植物移植有关的免疫病症的例子在上文讨论。本发明进一步提供了用于预防或抑制或防止经受试者的实体器官、组织、细胞和/或外解剖学移植排斥，该受试者是实体器官、组织、细胞和/或外解剖学的移植受体。一般地，在移植中，移植物的排斥通过其被T细胞识别为异物开始，随后为破坏移植物的免疫应答。本发明的可溶性CTLA4突变型分子通过抑制T淋巴细胞增殖和/或细胞因子分泌可以导致组织破坏减少和抗原特异性T细胞无应答性的诱导，这可以导致长期移植物接受。实施例3中描述的研究比较了在肾移植受体中用作由巴利昔单抗(Simulect;Novartis)诱导、霉酚酸酯(MMF;CellCept;Roche)和皮质类固醇组成的无CNI组合方案的部分时，L104EA29YIg作为维持免疫抑制剂与环孢菌素A(CsA)在12个月内的功效和安全性。目的包括在6个月和1年时评估急性排斥的发生率(活组织检查证实的或推测的)；在1、6和12个月时经由碘海醇清除率测量的肾小球滤过率(GFR);高血压参数包括血清胆固醇和甘油三酯；和总体安全性。其他预先指定的分析包括在1年时患者死亡或移植物丢失；急性排斥的严重性；移植后糖尿病的发生率[定义为在以前不知道是糖尿病的患者中，高血糖症^4周，或血红蛋白A1C(HbAlc)>7%所需的任何治疗];使用肾病饮食调整(MDRD，LeveyAS，BoschJP，LewisJP,GreeneT,RogersN,RothD.Amoreaccuratemethodtoestimateglomerularfiltrationratefromserumcreatinine:anewpredictionequation.ModificationofDietinRenalDiseaseStudyGroup.AnnInternMed1999;130:461-470),Jelliffe(RW.Creatinineclearance:Bedsideestimate.AnnInterMed.1973;79:604—605)，Cockcroft—Gault(CockcroftDW,GaultMH.Predictionofcreatinineclearancefromserumcreatinine.Nephron1976;16:31-41)，和Nankivell(NankivellBJ，GruenewaldSM,AllenRD,ChapmanJR.Predictingglomerularfiltrationrateafterkidneytransplantation.Transplantation.1995;59(2):1683-I689)公式计算的GFR;药物代谢动力学和免疫原性。急性排斥(AR)的诊断和治疗基于Banff97标准和等级(RacusenLC,SolezK,ColvinRB,等人,TheBanff97workingclassificationofrenalallograftpathology.KidneyInt1999;55(2):713-23.)。由此进行慢性同种异体移植物肾病(CAN)发生率的分析。这项12个月的研究证实与CsA比较，基于L104EA29YIg的维持疗法在防止AR以及类似的患者和移植物存活方面赋予等价的功效。此外，与基于CsA的维持免疫抑制比较，L104EA29YIg证实肾功能的显著改善和CAN的减少。L104EA29YIg是安全和良好耐受的并且不伴随一般的CNI相关毒性。在移植后第一年过程中改善的肾功能已显示与更佳的长期结果关联(HariharanS,McBrideMA，CherikhWS,TollerisCB,BresnahanBA，JohnsonCP.Post-transplantrenalfunctioninthefirstyearpredictslong-termkidneytransplantsurvival.KidneyInt2002;62(1):311-8)，这是因为CNIs的长期使用受到其肾毒性的限制(DanovitchGM.Immunosuppressivemedicationsforrenaltransplantation:amultiplechoicequestion.KidneyInt2001;59(1):388-402),这导致具有所有其伴随问题的移植物功能减少和肾机能不全。因此，用Ll(MEA"YIg治疗观察到的最显著发现可能是与CsA比较与12个月的肾组织学偶联的较佳GFRs,其显示CAN发展和/或进展的减少。这是个令人惊讶的结果并且是这类发现首次已在免疫抑制疗法的随机化II期试验中显示。因为通过防止免疫学、心血管和/或代谢损伤保存肾单位量促成对患者和移植物存活的有利作用，所以L104EA29YIg可能与较佳的长期结果有关。这些问题对于来自扩大标准供体或受体的器官使用增加是特别重要的，因为这些对CNI相关毒性特别易感。已经历肾移植的患者中CV和代谢事件的发生率减少对于改善长期结果也是关键的。本发明的分子或药物组合物可以用于治疗受试者中与移植物移植有关的免疫病症，所述受试者是扩大标准受体和/或接受来自扩大标准供体的移植物的受体。这些标准部分基于由器官共享联合网(UnitedNetworkofOrganSharing)(UNOS)提出的标准，可以包括下列中的一个或多个供体年龄小于10岁或大于或等于60岁；心源性死亡后的供体；供体器官的预期冷缺血时间大于或等于24小时；经历第1次移植当前PRA》50%，或经历再次移植PRA》30。/。的患者；在移植后的前6个月过程中由于急性排斥先前移植物丢失的受试者；使用供体淋巴细胞和受体血清的T细胞淋巴细胞毒性交叉配型阳性的受试者；具有HIV感染的受试者；在前3年内具有需要治疗的活动性结核的受试者；或由器官共享联合网(UNOS)提出的其他标准。关于供体和/或供体肾的可能扩大标准的例子包括关于器官捐赠的下列扩大标准中的至少一个a)供体年龄^60岁或b)供体年龄50-59岁以及下列之一(i)脑血管意外(CVA)+高血压+8(^>1.5mg/dL或(ii)CVA十高血压或(iii)CVA+SCr>1.5mg/dL或(iv)高血压+SCr>1Jmg/dL或c)CIT224小时，供体年龄〉10岁或d)心源性死亡的供体(无心跳供体)。本发明还提供了用于抑制受试者中的移植物抗宿主病的方法。这种方法包括伴随或顺次地给受试者单独或连同与IL-2、IL-2R、IL-4或y干扰素反应的进一步另外配体施用本发明可溶性CTLA4突变型分子。例如，本发明的可溶性CTLA4突变型分子可以施用于骨髓移植受体以抑制供体T细胞的同种反应性。可替代地，骨髓移植物内的供体T细胞可以在移植前对受体的同种异体抗原先体外后体内耐受化。本发明的可溶性CTLA4突变型分子，例如L104EA29Y，可以作为唯一的活性成分或与免疫调谐方案中的一种或多种其他药物、免疫抑制剂和/或其他抗炎剂一起伴随或顺次施用，例如用于治疗、防止或抑制或预防同种异体移植物或异种移植物的急性或慢性排斥或诱导耐受性。例如，它可以与下列试剂组合使用钩依赖磷酸酶抑制剂(例如环孢菌素A或FK506);免疫抑制性大环内酯(例如他克莫司、雷帕霉素、西罗莫司)或其衍生物(例如40-0-(2-羟基)乙基-雷帕霉素、西罗莫司、centican);淋巴细胞归巢剂(例如FTY720)或其类似物(FK778，Jak-3)，皮质类固醇；环磷酰胺；azathioprene;氨曱蝶呤；来氟洛米或其类似物；咪唑立宾；霉酚酸；霉酚酸酯；15-deoxyspergualine或其类似物;4十对白细月包受体(例如，MHC、CD2、CD3、CD4、CDlla/CD18、CD7、CD25、CD27、B7、CD40、CD45、CD58、CD137、ICOS、CD150(SLAM)、0X40、4-lBB或其配体)的免疫抑制性单克隆抗体(例如，巴利昔单抗、达克珠单抗(daclizumab))、配体、单克隆抗体或其抗体片段；或其他免疫调谐化合物(例如CTLA4/CD28-Ig)，或其他粘附分子抑制剂(例如mAbs)或低分子量抑制剂包括LFA-1拮抗剂、选择素拮抗剂和VLA-4拮抗剂。该化合物与干扰CD40及其配体(例如，针对CD40的抗体或针对CD40-L的抗体)的化合物例如Chi220(美国专利6,051,228)组合，例如在上述适应症例如耐受性的诱导中特别有用。当本发明的可溶性CTLA4突变型分子与其他免疫抑制/免疫调谐疗法例如如本文说明的一起伴随或顺次施用时，共施用的免疫抑制剂或免疫调谐化合物的剂量当然将依采用的共同药物(co-drug)的类型例如它是类固醇还是环孢菌素、采用的具体药物、待治疗的状况等而变。依照前述，本发明进一步提供了例如用于在如上限定的任何方法中使用的治疗组合例如试剂盒，其包括游离形式或药学可接受盐形式的L104EA29YIg,以用于与包括免疫抑制剂、免疫调谐剂或消炎药的至少一种药物组合物伴随或顺次使用。试剂盒可以包括关于其施用的说明书。依照前述，本发明在再进一步的方面提供了如上限定的方法，其包括例如伴随或顺次共施用治疗有效剂量的本发明的可溶性CTLA4突变型分子与免疫抑制剂。免疫抑制剂包括可溶性gp39(也称为CD40配体(CD40L)、CD154、T-BAM、TRAP)，可溶性CD29，可溶性CD40,可溶性CD80(例如ATCC68627),可溶性CD86,可溶性CD28(例如68628),可溶性CD56,可溶性Thy-1，可溶性CD3,可溶性TCR,可溶性VLA-4,可溶性VCAM-1,可溶性LECAM-1,可溶性ELAM-1，可溶性CD44，与gp39反应的配体、抗体或抗体片段(例如ATCCHB-10916、ATCCHB-12055和ATCCHB-12056)，与CD40反应的配体、抗体或抗体片段(例如ATCCHB-9110)，与B7反应的配体、抗体或抗体片段(例如ATCCHB-253、ATCCCRL-2223、ATCCCRL-2226、ATCCHB-301、ATCCHB—11341等)，与CD28反应的配体、抗体或抗体片段(例如ATCCHB-11944或如Martin等人(J.Clin.Immun.4(1):18-22,1980描述的mAb9.3)，与LFA-l反应的配体、抗体或抗体片段(例如ATCCHB-9579和ATCCTIB-213),与LFA-2反应的配体、抗体或抗体片段，与IL-2或IL-2R反应的配体、抗体或抗体片段，与IL-12反应的配体、抗体或抗体片^:,与IFN-y反应的配体、抗体或抗体片段，与CD2反应的配体、抗体或抗体片段，与CD48反应的抗体配体、抗体或抗体片段，与任何ICAM(例如ICAM-1(ATCCCRL-2252),ICAM-2和ICAM-3)反应的配体、抗体或抗体片段，与CTLA4反应的配体、抗体或抗体片段(例如，ATCCHB-304)，与Thy-1反应的配体、抗体或抗体片段，与CD56反应的配体、抗体或抗体片段，与CD3反应的配体、抗体或抗体片段，与CD29反应的配体、抗体或抗体片段，与TCR反应的配体、抗体或抗体片段，与VLA-4反应的配体、抗体或抗体片段，与VCAM-1反应的配体、抗体或抗体片段，与LECAM-1反应的配体、抗体或抗体片段，与ELAM-1反应的配体、抗体或抗体片段，与CD44反应的配体、抗体或抗体片段。在某些实施方案中，单克隆抗体是优选的。在其他实施方案中，抗体片段是优选的。抗体片段包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv和结构域抗体(dAbs),包括但不限于WO2006/030220中描述的那些。如本领域技术人员容易理解的，组合可以包括本发明的可溶性CTLA4突变型分子和1种其他免疫抑制剂，可溶性CTLA4突变型分子和2种其他免疫抑制剂，可溶性CTLA4突变型分子和3种其他免疫抑制剂等。最佳组合和剂量的确定可以使用本领域众所周知的方法确定和最优化。一种特别有用的组合是L104EA29YIg或其药物组合物与干扰IL-2及其配体的化合物，特别是针对在活化T淋巴细胞表面上选择性表达的IL-2R(a)的拮抗剂。结合IL-2R(a)的化合物竟争性抑制IL-2介导的淋巴细胞激活，这是同种异体移植物排斥中涉及的细胞免疫应答的关键途径。某些具体组合包括下列L104EA29YIg和CD80单克隆抗体(mAbs);L104EA29YIg和CD86mAbs;L104EA29YIg、CD80mAbs和CD86mAbs;L104EA29YIg和gp39mAbs;L104EA29YIg和CD40mAbs;L104EA29YIg和CD28mAbs;L104EA29YIg、CD80和CD86mAbs以及gp39mAbs;L104EA29YIg、CD80和CD86mAbs和CD40mAbs;和L104EA29YIg、抗-LFAlmAb和抗-gp39mAb。gp39mAb的具体例子是MR1。其他组合也是本领域技术人员容易了解和理解的。依照前述，本发明在再进一步的方面提供了如上限定的方法，其包括例如伴随或顺次共施用治疗有效剂量的本发明的可溶性CTLA4突变型分子与附加剂和/或皮质类固醇。目的是用本发明的CTLA4突变型分子代替毒性钙依赖磷酸酶抑制剂。然而，本发明的CTLA4突变型分子还可以与CNIs例如环孢菌素(Neoral,来自Novartis的Sandimmune)和他克莫司(FK506,来自Fujisawa的Progra产)伴随或顺次共施用。附加剂的例子包括但不限于肌苷一磷酸脱氢酶(IMPDH)的抑制剂，例如霉酚酸酯(MMF;来自RocheLaboratories的Cellcept)和霉酚酸(来自Novartis的Myfortic);雷帕霉素(西罗莫司，来自Wyeth/Ayerst的Rapamune);口米p坐3危噪口令(来自Salix的Azarsan,Imuran,—般的);淋巴细胞归巢剂,例如FTY720(来自Novartis);FK778(来自Fujisawa);Jak-3(来自Pfizer);和Certican(来自Novartis的依维莫司(everolimus))。皮质类固醇的例子包括但不限于，倍他米松、布地奈德、氢化可的松、可的松、地塞米松、hydrocritisone、曱基强的松龙、强的松龙、强的+〉禾口去炎+>。一般的共施用组合包括但不限于L104EA29YIg和选自上文列出的组的至少一种附加剂；L104EA29YIg和选自上文列出的组的至少一种皮质类固醇；L104EA29YIg、MMF(来自Roche的Cellcept)和选自上文列出的组的一种皮质类固醇；L104EA29YIg、雷帕霉素(西罗莫司，来自Wyeth/Ayerst的Rapamune)含或不含选自上文列出的组的皮质类固醇。上文描述的共施用组合可以与诱导剂例如免疫抑制性单克隆抗体一起使用，例如巴利昔单抗(来自Novartis的Simulect)、莫罗单抗(m腦monab)(来自OrthoBiotech的OrthocloneOKT3)、利妥昔单抗(来自Genentech的Rituxan)和达克3朱单抗(来自RocheLabs的Zenapax);或抗胸腺细胞球蛋白(来自SangStat的Thymoglobulin)。例如，合适的组合包括但不限于巴利昔单抗(来自Novartis的Simulect)与L104EA29YIg,MMF(来自Roche的Cellcept)详口强的+〉龙；或达克玉朱单4元(来自RocheLabs的Zenapax)、L104EA29YIg和雷帕霉素(西罗莫司，来自Wyeth/Ayerst的Rapamune)。一般地，上文描述的共施用药物的标准剂量和施用方案不受向治疗方案中加入本发明CTLA4突变型分子的影响。然而，由于向治疗方案中掺入较低毒性的本发明CTLA4突变型分子，本领域技术人员可以开处较低剂量的共施用药物，例如附加剂和/或皮质类固醇。处方信息可以基于关于每种共施用药物的包装插页。皮质类固醇可以与本发明的分子或药物组合物共施用。例如，受试者可以用皮质类固醇每天治疗1次。一种类固醇维持和逐渐减少的策略可以包括在到达手术室(OR)时500mg静脉内曱基强的松龙，在第2天时250mg静脉内甲基强的松龙，随后为在第3天时经口100mg强的松(或强的松龙)，随后为到第2周结束时逐渐减少至20-30mg/天的强的松(或强的松龙)，随后为到第6个月逐渐减少至不低于2.5mg/天的强的松(或强的松龙)。受试者可以在其治疗过程中自始至终保持在至少2.5mg/天。另外的共施用药物可以包括霉酚酸酯(MMF)。一般地MMF根据与时刻和膳食有关的一致时间表以2次分开的剂次施用。关于MMF的施用方案的例子包括每天2g。第l剂可以在手术前施用。后续剂可以在受试者一能够耐受经口药物时就经口(p.o.)施用。剂次和时间表可以基于实验室值(例如减少的WBCs)和受试者可容许性来调整。包装插页提供了完整的处方信息。另一种共施用药物可以包括巴利昔单抗。重构的巴利昔单抗(溶于5mL中的20mg)可以用生理盐水或葡萄糖5%稀释至50mL的体积并且作为静脉内输注在20-30分钟内施用。第1次20mg剂量可以在第1天时(移植当天)施用。第2次^mg剂量可以在第5天时给予。包装插页提供了完整的处方信息。另外提供的是例如用于在如上限定的任何方法中使用的治疗组合例如试剂盒，其包括游离形式或药学可接受盐形式的L104EA29YIg,以用于与包括附加剂和皮质类固醇的至少一种药物组合物伴随或顺次使用。试剂盒可以包括关于其施用的说明书。标签和/或说明书可以指出药物组合物可以单独或与第二种试剂组合伴随或顺次使用，以治疗选择的状况，例如如上所述的免疫系统疾病、自身免疫性疾病、免疫增生性疾病、与移植物移植有关的免疫病症。标签可以指出关于本文公开的分子的合适剂量。例如，标签可以指出对于阻断B7与其配体相互作用和/或治疗免疫系统疾病有效的分子剂量可以基于体重，并且施用方案可以由靶血清谷特征指出。例如，标签可以指出本文公开的CLTA4突变型分子治疗免疫系统疾病的有效靶谷血清浓度可以为约0.2|Lig/mL-约30貼/mL。可替代地，标签可以指出本文公开的CLTA4突变型分子可以以约0.1-约20.0mg/kg患者重量的量施用以治疗免疫系统疾病。用于生产本发明分子的方法CLTA4突变型分子的表达可以是在原核细胞中。最常见的原核生物由各种细菌菌林代表。细菌可以是革兰氏阳性或革兰氏阴性的。一般地，革兰氏阴性菌例如大肠杆菌(E.coli)是优选的。其他微生物菌抹也可以使用。编码CLTA4突变型分子的序列可以插入到设计用于在原核细胞例如大肠杆菌中表达外来序列的载体内。这些载体可以包括常用的原有操纵基因，连同核糖体结合位点序列，包括此类常用启动子如P内酰胺酶(青霉素酶)和乳糖(lac)启动子系统(Chang，等人，(l977)Wo^re198:1056),色氨酸(trp)启动子系统(Goeddel,等人，(1980)Wwc/e/cJc/Ai^^.8:4057)和X衍生的PL启动子和N基因核糖体结合位点(Shimatake，等人，(1981)7V"^292:128)。此类表达载体还将包括复制起点和选择标记，例如赋予抗生素抗性的P内酰胺酶或新霉素磷酸转移酶基因，从而使得载体可以在携带质粒的细菌和细胞中复制，当在抗生素例如氨千青霉素或卡那霉素的存在下生长时可以选择。表达质粒可以经由各种标准方法引入原核细胞内，包括但不限于CaCl2^木克(Cohen，(1972)A^".Jc"dfAS^69:21IO，和Sambrook等人，(eds.)，"Mo/ecM/crC7om'"gv^丄G6ora/^7Mtm冊/",2ndEdition,ColdSpringHarborPress,(1989))和电穿孑L。依照本发明的实践，真核细胞也是合适的宿主细胞。真核细胞的例子包括无论是原代还是无限增殖化的任何动物细胞，酵母(例如啤酒并唐酵母(Sacc/zaromycesceww\s/ae)、粟酒裂歹直#唐酵母(5V/2/zosacc/zaraw;KCM/o"6e)和巴斯德毕赤氏酵母(尸/c/z/a/7"5ton、))，和植物细胞。骨髓瘤、COS和CHO细胞是可以用作宿主的动物细胞的例子。具体的CHO细胞包括但不限于，DG44(Chasin,等人，1986S纖CW/.G潔A12:555-556;Kolkekar1997肌oc/^脂.W^y36:10901—10909)，CHO-Kl(ATCCNo.CCL_61),CHO—KlTet-On细胞系(Clontech)，称为ECACC85050302的CHO(CAMR，Salisbury,Wiltshire,UK)，CHO克隆13(GEIMG，Genova,IT)，CHO克隆B(GEIMG,Genova,IT),称为ECACC93061607的CHO—Kl/SF(CAMR，Salisbury,Wiltshire,UK),以及称为ECACC92052129的RR—CHOK1(CAMR，Salisbury,Wiltshire,UK)。示例性植物细胞包括烟草(完整植物、细胞培养物或愈伤组织)、玉米、大豆和稻细胞。玉米、大豆和稻种子也是可接受的。编码CTLA4突变型分子的核酸序列也可以插入到设计用于在真核宿主中表达外来序列的载体内。载体的调节元件可以根据具体的真核宿主而变。用于在表达载体中使用的常用真核控制序列包括与哺乳动物细胞相容的启动子和控制序列，例如，CMV启动子(CDMS载体)和鸟类肉瘤病毒(ASV)ULN载体)。其他常用的启动子包括来自猿猴病毒40(SV40)的早期和晚期启动子(Fiers，等人，(1973)A^w"273:113)，或其他病毒启动子例如来源于多瘤、腺病毒2和牛乳头瘤病毒的那些。诱导型启动子例如hMTII(Karin,等人，(1982)A^fwre299:797-802)也可以-使用。用于在真核生物中表达CTLA4突变型分子的载体也可以携带称为增强子区的序列。这些在基因表达最优化中是重要的并且在启动子区的上游或下游找到。用于真核宿主细胞的表达载体的例子包括但不限于用于哺乳动物宿主细胞的载体(例如BPV-1,pHyg，pRSV,pSV2，pTK2(Maniatis);pIRES(Clontech);pRc/CMV2，pRc/RSV,pSFVl(LifeTechnologies);pVPakc载体，pCMV载体，pSG5载体(Stratagene))，逆转录病毒载体(例如pFB载体(Stratagene))，pCDNA-3(Invitrogen)或其修饰形式，腺病毒载体；腺伴随病毒载体，杆状病毒载体，酵母载体(例如pESC载体(Stratagene))。编码CTLA4突变型分子的核酸序列可以整合到真核宿主细胞的基因组内并且当宿主基因组复制时进行复制。可替代地，携带CTLA4突变型分子的载体可以包含允许染色体外复制的复制起点。对于在啤酒糖酵母中表达核酸序列，可以使用来自内源性酵母质粒的复制起点_2|^环。(Broach,(1983)Me仇￡"z.101:307)。可替代地，可以使用能够促进自主复制的来自酵母基因组的序列(参见，例如，Stinchcomb等人，(1979)to匿282:39);Tschemper等人，(1980)10:157;以及Clarke等人，(1983)Mw/z.101:300)。关于酵母载体的转录控制序列包括用于合成糖酵解酶的启动子(Hess等人，(1968)J.Jdv.7:149;Holland等人，(1978)B/oc/zem&^y17:4900)。本领域已知的另外启动子包括CDM8载体中提供的CMV启动子(Toyama和Okayama，(1990)i^L8S268:217-221);用于3-磷酸甘油酸激酶的启动子(Hitzeman等人，(1980)J.肌o/.C/zew.255:2073)，以及用于其他糖酵解酶的那些。长培i基i调节。这些诱导型启动子包口括来自关于热激蛋白:醇i氬酶2、异细胞色素(isocytochrome)C、酸性磷酸酶、与氮分解代i射有关的酶、以及负责麦芽糖和半乳糖利用的酶的基因的那些。调节序列还可以被置于编码序列的3'末端。这些序列可以用于稳定信使RNA。此类终止子在几种酵母来源的和哺乳动物基因中编码序列后的3'非翻译区内找到。关于植物和植物细胞的示例性载体包括但不限于，土壤杆菌属(Agrobacterium)Tj质粒、花椰菜花叶病毒(CaMV)和番茄金黄花叶病毒(TGMV)。哺乳动物细胞宿主系统转化的一般方面已由Axel描述(1983年8月16日授权的美国专利号4，399，216)。哺乳动物细胞可以通过下列方法转化，包括但不限于在磷酸钙的存在下转染、显微注射、电穿孔或经由使用病毒载体的转导。用于将外来DNA序列引入植物和酵母基因组内的方法包括(1)机械法，例如将DNA显微注射到单细胞或原生质体内，在DNA的存在下使细胞与玻璃珠一起涡旋，或将DNA包被的鴒或金球体射入细胞或原生质体；(2)通过经由聚乙二醇处理或实施高压电脉冲(电穿孔)使细胞膜对大分子可渗透而引入DNA;或(3)使用与细胞膜融合的脂质体(包含cDNA)。CTLA4突变型分子的表达可以通过本领域已知的方法来4企测。例如，突变型分子可以通过考马斯染色SDS-PAGE凝胶和使用结合CTLA4的抗体的免疫印迹来检测。蛋白质回收可以使用标准蛋白质纯化方法例如亲和层析或离子交换层析进行，以产生基本上纯的产物(R.Scopes:"Proto'w尸wWca"ow,/VZwc/p/esa/W尸ra"/ce",ThirdEdition,Springer-Verlag(1994))。美国专利申请美国/^开号2005/0019859、2005/0084933和WO04/058944教导了通过动物或哺乳动物细胞培养用于生产本发明的蛋白质，特别是重组糖蛋白产物的方法，并引入本文作为参考。本发明进一步提供了本文上文生产的可溶性CTLA4突变型分子。基于CTLA4Ig密码子的诱变在一个实施方案中，使用定点诱变和新型筛选操作来鉴别CTLA4细胞外结构域中改善对于CD86的结合抗体亲抗原性的几种突变。在这个实施方案中，突变在丝氨酸25至精氨酸33的CTLA4细胞外结构域区内、C，链(丙氨酸49和苏氨酸51)、F链(赖氨酸93、谷氨酸95和亮氨酸96),以及曱硫氨酸97到酪氨酸102、酪氨酸103到甘氨酸107区内，以及G链中谷氨酰胺111、酪氨酸113和异亮氨酸115位上的残基中进行。这些位点基于嵌合CD28/CTLA4融合蛋白的研究(Peach等人，J.Exp.Med，1994，180:2049-2058)，以及预测哪个氨基酸残基侧链将是溶剂暴露的模型且在CD28和CTLA4之间的某些位置上缺乏氨基酸残基同一性或同源性选择。同样地，在空间上紧密接近于(5-20埃单位)被鉴别残基的任何残基都视为本发明的部分。为了合成并筛选对于CD80和/或CD86亲和力改变的可溶性CTLA4突变型分子，采用2步策略。实验需要首先产生在CTLA4细胞外部分的特定密码子上的突变文库，并随后通过BIAcore分析筛选这些，以鉴别对于CD80或CD86反应性改变的突变。Biacore测定系统(Pharmacia,Piscataway,N丄)使用表面等离振子共振检测器系统，其基本上涉及CD80Ig或CD86Ig与位于检测器内的葡聚糖包被的传感器芯片的共价结合。测试分子随后可以注射到包含传感器芯片的室内并且结合的互补蛋白质的量可以基于分子量中的变化进行评估，所述分子量与传感器芯片的葡聚糖包被侧物理关联；分子量中的变化可以通过检测器系统进行测量。本发明的优点因为CTLA4与CD80和CD86结合的特征在于快速"结合(on)"速率和快速解离("解离(off)")速率，并且因为CTLA4Ig-CD86复合物的解离为CTLA4Ig-CD80复合物的大约5-8倍，所以推断CTLA4Ig从CD80和/或CD86解离的速率减慢将导致具有更有效的免疫抑制特性的分子。因此，与野生型CTLA4或非突变形式的CTLA4Ig比较，对于CD80-或CD86-阳性细胞抗体亲抗原性更高的可溶性CTLA4突变型分子预期比野生型CTLA4或非突变形式的CTLA4Ig更有效地阻断抗原特异性活化细胞的启动。实施例呈现下列实施例以举例说明本发明并帮助本领域技术人员制备并使用其。实施例不希望以任何方式在其他方面限制本发明的范围。实施例1这个实施例提供了用于产生编码本发明可溶性CTLA4突变型分子的核香酸序列的方法描述。产生单位点突变体L104EIg并测试对于CD80和/或CD86的结合动力学。将L104EIg核苷酸序列用作模板以产生双位点突变体CTLA4序歹'JL104EA29YIg，测试其对于CD80和/或CD86的结合动力学。基于CTLA4Ig密码子的诱变开发一种诱变和筛选策略以鉴别从CD80和/或CD86分子解离的速率("解离"速率)较慢的突变型CTLA4Ig分子。使用CTLA4Ig(美国专利号:5,844,095;5,851,795;和5,885,796;ATCC登记号68629)作为模板产生单位点突变体的核苦酸序列。诱变寡核苷酸PCR引物被设计为通过允许密码子的第l和2位上是任何碱基，但第3位只是鸟嘌呤或胸腺嘧啶(XXG/T;也称为NNG/T)用于特定cDNA密码子的随机诱变。以这种方式，编码氨基酸的特定密码子可以被随机突变以编码20种氨基酸中的每一种。在那点上，XXG/T诱变产生编码20种氨基酸中的每一种的32种可能密码子。编码紧密接近于CTLA4Ig的-M97-G107的突变的PCR产物(参见图7，SEQIDNOS:3和4;或图8,SEQIDNOS:5和6)用Sacl/Xbal消化并亚克隆到类似切割的CTLA4Ig兀LN(也称为piLN)表达载体内。这种方法用于产生单位点CTLA4突变型分子L104EIg(图8，SEQIDNOS:5和6)。对于接近于CTLA4Ig的S25-R33的诱变，首先通过PCR引物指导的诱变向这个环的5'引入沉默Nhel限制位点。将PCR产物用Nhel/Xbal消化并亚克隆到类似切割的CTLA4Ig或L104EIg表达载体内。这种方法用于产生双位点CTLA4突变型分子L104EA29YIg(图7，SEQIDNOS:3和4)。具体地，编码单位点CTLA4突变型分子L104EIg的核酸分子用作模板以产生双位点CTLA4突变型分子L104EA29YIg。具有L104EA29YIg的piLN载体在图12中显示。实施例2下文提供了用于鉴别由实施例1中所述构建体表达的单和双位点突变型CTLA4多肽的筛选方法描述，与非突变的CTLA4Ig分子比较其显示出对于CD80和CD86抗原更高的结合抗体亲抗原性。目前的体外和体内研究指出CTLA4Ig自身不能完全阻断抗原特异性活化T细胞的启动。使用CTLA4Ig以及对CD80或CD86特异的单克隆抗体测量T细胞增殖抑制的体外研究指出抗CDSO单克隆抗体不增力。CTLA4Ig抑制。然而，抗CD86单克隆抗体的确增加抑制，从而表明CTLA4Ig在阻断CD86相互作用方面不够有效。这些数据支持Linsley等人，(/mw冊/(y,(1994)，1:793-801)的早期发现，其显示CD80介导的细胞应答的抑制需要为对于CD86介导的应答的大约1/100的CTLA4Ig浓度。基于这些发现，推测具有对于CD86的抗体亲抗原性比野生型CTLA4更高的可溶性CTLA4突变型分子应当能够比CTLA4Ig更好地阻断抗原特异性活化细胞的启动。为此，使用新型筛选方法筛选上文实施例1中描述的可溶性CTLA4突变型分子，以鉴别CTLA4细胞外结构域中改善对于CD80和CD86的结合抗体亲抗原性的几种突变。这种筛选策略提供了无需蛋白质纯化或定量而直接鉴别具有明显较慢的"解离"速率的突变体的有效方法，因为"解离，，速率测定是浓度依赖性的(O，Shannessy等人，(1993)肌oc/ze肌，212:457-468)。COS细胞用单个小量制备纯化的质粒DNA转染并繁殖几日。将3天条件培养基施加于由可溶性CD80Ig或CD86Ig包被的BIAcore生物传感器芯片(PharmaciaBiotechAB,Uppsala,瑞典)。突变蛋白的特异性结合和解离通过表面等离振子共振测量(O，Shannessy，D.J.,等人，(1993)肌oc/7em.212:457—468)。所有实验都于25。C在BIAcoreTM或BIAcore2000生物传感器上进行。配体使用标准N-乙基-N，(二曱氨基丙基)碳二亚胺-N-羟基琥珀酰亚胺偶联固定在研究级NCM5传感器芯片(Pharmacia)上(Johnsson,B.,等人，(1991)^wa/.5/oc/76>"7.198:268—277;Khilko，S.N.,等人(1993)丄肠/.C7z縱268:5425-15434)。筛选方法在24孔组织培养板中生长的COS细胞用编码突变型CTLA4Ig的DNA瞬时转染。3天后收集包含分泌的可溶性突变型CTLA4Ig的培养基。允许COS细胞的条件培养基流经用CD86Ig或CD80Ig衍生化的BIAcore生物传感器芯片(如Greene等人，1996历o/,C/zem.271:26762-26771中描述的)，并且鉴别具有比对于野生型CTLA4Ig观察到的那种更慢的"解离"速率的突变型分子。测序对应于所选培养基样品的cDNAs并且制备DNA以进行大规模的COS细胞瞬时转染，在培养基的A蛋白纯化后由其制备突变型CTLA4Ig蛋白质。如J.Greene等人，1996J.Biol.Chem.271:26762-26771中所述，并如本文所述进行BIAcore分析条件和平衡结合数据分析。BIAcore数据分析传感图(Senosorgram)基线在分析前对零应答单位(RU)进行标准化。样品经过模拟衍生化的流动室以测定由于溶液之间的体积折光指数差异的背景应答单位(RU)值。平衡解离常数(Kd)由R叫对C的图计算，其中Req是稳定状态的应答减去对模拟衍生化的芯片的应答，并且c是分析物的摩尔浓度。结合曲线使用商业非线性曲线拟合软件(Prism,GmphPADSoftware)分析。实验数据首先对单配体结合单受体的模型拟合(1位点模型，即简单朗格缪尔系统，A+B屮AB),并且平衡解离常数(Kd=[A]*[B]\[AB])由等式R二R隨'C/(Kd+C)计算。随后，数据对最简单的2位点配体结合模型拟合(即，如等式R^R,x,'CA(Kdl+C)+Rmax2'C\(Kd2+C)描述的具有2个非相互作用的独立结合位点的受体)。这2个模型的拟合优度通过比较实验数据在视觉上以及通过平方和的F检验在统计学上分析。选择较简单的单位点模型作为最佳拟合，除非2位点模型拟合明显更佳(p<0.1)。使用BIA评估2.1Software(Pharmacia)进行结合和解离分析。结合速率常数k。n以2种方式计算，假定同质单位点相互作用和平行的2位点相互作用。对于单位点相互作用，k。。值根据等式R产R叫(1-exp—ks(tA)计算，其中Rt是在给定时间t的应答；Req是稳定状态的应答；t。是注射开始时的时间；以及ks=dR/dt=k。n*Ck。ff，并且其中C是分析物的浓度，根据单体结合位点计算。对于2位点相互作用，k。n值根据等式R产R叫(1-exp—ksl(t—V+R叫2(1-expks2(t—V计算。对于每种模型，k。J直由ks对C的图计算的斜率(至约70%的最大结合)测定。解离数据根据单位点(AB=A+B)或2位点(AiBj=Ai+Bj)模型分析，并且速率常数(k。ff)由最佳拟合曲线计算。使用结合位点模型，除了残留比机器背景(2-10RU,根据机器)更高时，在这种情况下使用2结合位点模型。受体占有的半衰期使用关系t1/2=0.693/k。ff计流式细胞术鼠类mAbL307.4(4元CD80)购自BectonDickinson(SanJose,California)并且IT2.2(抗B7-0[也称为CD86])购自Pharmingen(SanDiego，California)。对于免疫染色，CD80阳性和/或CD86阳性的CHO细胞通过在包含10mMEDTA的磷酸緩冲盐水(PBS)中温育从其培养瓶中取出。CHO细胞(1-10x105)首先在包含10%胎牛血清(FBS)的DMEM中与mAbs或免疫球蛋白融合蛋白温育，随后洗涤并与异硫氰酸荧光素缀合的山羊抗小鼠或抗人免疫球蛋白第二步试剂(Tago，Burlingame,California)温育。对细胞给予最终洗涤并在FACScan(BectonDickinson)上分析。SDS-PAGE和大小排阻层析SDS-PAGE在Tris/甘氨酸4-20%丙烯酰胺凝胶(Novex,SanDiego,CA)上进行。分析型凝胶用考马斯蓝染色，并通过数字扫描获得湿凝胶的图像。CTLA4Ig(25吗)和L104EA29YIg(25吗)通过大小排阻层析使用在包含0.02%NAN3的磷酸緩冲盐水中平衡的TSK-GELG300SWxl柱(7.8x300mm,Tosohaas,Montgomeryville,PA)以1.0ml/分钟的流速进行分析。CTLA4Xc,2os和L104EA29YXC120S单链CTLA4Xd2。s如先前所述进行制备(Linsley等人，(1995)J.Biol.Chem.，270:15417—15424)。简言之，制瘤素MCTLA4(OMCTLA4)表达质粒用作模板，选择正向引物GAGGTGATAAAGCTTCACCAATGGGTGTACTGCTCACACAG以匹配载体中的序列；并且反向引物GTGGTGTATTGGTCTAGATCAATCAGAATCTGGGCACGGTTC对应于CTLA4的细胞外结构域中的最后7个氨基酸(即氨基酸118-124)，并且包含限制酶位点和终止密码子(TGA)。反向引物限定C120S(第120位的半胱氨酸至丝氨酸)突变。具体地，上文所示反向引物的核苷酸序列GCA(核苦酸34-36)由下列核苷酸序列之一代替AGA、GGA、TGA、CGA、ACT或GCT。如本领域技术人员将理解的，核普酸序列GCA是关于半胱氨酸的密码子TGC的反向互补序列。类似地，核苷酸序列AGA、GGA、TGA、CGA、ACT或GCT是关于丝氨酸的密码子的反向互补序列。聚合酶链反应产物用///"t/III/X^I消化并直接亚克隆到表达载体兀LN(Bristol-MyersSquibbCompany,Princeton，NJ)内。以相同方式制备L104EA29YXC12QS。每种构建体通过DNA测序验证。高抗体亲抗原性突变体的鉴别和生物化学表征选择24个氨基酸用于诱变并通过表面等离振子共振(SPR;如上所述)分析所得到的2300种突变蛋白的CD86Ig结合。每个位点上的诱变的占优势作用概括于表II中。S25-R33中某些氨基酸的随机诱变显然不改变配体结合。E31和R33以及残基M97-Y102的诱变显然导致配体结合减少。残基S25、A29和T30、K93、L96、Y103、L104和G105的诱变导致具有緩慢"结合"和/或緩慢"解离"速率的蛋白质。这些结果证实先前发现S25-R33区内的残基，以及M97-Y102中或附近的残基影响配体结合(Peach等人，(1994)J.Exp.Med.，180:2049—2058。位点S25、T30、K93、L96、Y103和G105的诱变导致鉴别从CD86Ig"解离"速率较慢的某些突变蛋白。然而，在这些情况下，緩慢的"解离"速率被緩慢的"结合"速率折衷，这导致具有对于CD86Ig的总体抗体亲抗原性的突变蛋白，这显然类似于由野生型CTLA4Ig观察到的那种。此外，K93的诱变导致显著聚集，这可能已负责观察到的动力学变化。L104的随机诱变随后为COS细胞转染，并且培养基样品经过固定化的CD86Ig的SPR筛选产生包含突变蛋白的6种培养基样品，所述突变蛋白具有为野生型CTLA4Ig的大约1/2的"解离"速率。当对这些突变体的相应cDNA进行测序时，发现每种都编码亮氨酸至谷氨酸的突变(L104E)。显然亮氨酸104至天冬氨酸的置换(L104D)不影响CD86Ig结合。随后如上所述在表II中列出的每个位点上重复诱变，这次使用L104E代替野生型CTLA4Ig作为PCR模板。再次使用固定化的CD86Ig的SPR分析鉴别来自丙氨酸29诱变的6个培养基样品，其具有为野生型CTLA4Ig的大约1/4的"解离"速率的蛋白质。最慢的2种是酪氨酸置换(L104EA29Y)，2种是亮氨酸(L104EA29L)，1种是色氨酸(L104EA29W),并且1种是苏氨酸(L104EA29T)。显然当丙氨酸29在野生型CTLA4Ig中单独随机突变时，没有鉴别出緩慢"解离"速率的突变体。纯化的L104E和L104EA29YIg的相对分子量和聚集状态通过SDS-PAGE和大小排阻层析评估。L104EA29YIg(~1吗；泳道3)和L104EIg(~1)ag;泳道2)在还原(~50kDa;+13ME;力口2-巯基乙醇)和非还原(~100kDa;-BME)条件下显然具有与CTLA4Ig(~1|ig;泳道1)相同的电泳迁移率(图10A)。大小排阻层析证实L104EA29YIg(图10C)显然具有与二聚CTLA4Ig(图10B)相同的迁移率。主峰代表蛋白质二聚物，而图10B中较快洗脱的次峰代表较高分子量的聚集物。大约5.0%的CTLA4Ig呈现为较高分子量的聚集物，但没有L104EA29YIg或L104EIg聚集的证据。因此，对于L104EIg和L104EA29YIg观察到的与CD86Ig的较强结合不能归因于由诱变诱导的聚集。平tf和动态结合分析使用表面等离振子共振(SPR)对A蛋白纯化的CTLAWg、L104EIg和L104EA29YIg进行平衡和动态结合分析。结果显示于表I中。表I<table>complextableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>(值是来自3次不同实验的平均值士标准差)观察到的平衡解离常数(Kd;表I)由经过一定浓度范围(5.0-200nM)产生的结合曲线来计算。L104EA29YIg比L104EIg或CTLA4Ig更强烈地结合CD86Ig。L104EA29YIg(3.21nM)比L104EIg(6.06nM)或CTLA4Ig(13.9nM)更低的Kd表明L104EA29YIg与CD86Ig更高的结合抗体亲抗原性。L104EA29YIg(3.66nM)比L104EIg(4.47nM)或CTLA4Ig(6.51nM)更低的Kd表明L104EA29YIg与CD80Ig更高的结合抗体亲抗原性。动态结合分析揭示关于CTLA4Ig、L104EIg和L104EA29YIg结合CD80的比较"结合"速率是类似的，关于CD86Ig的"结合"速率(表I)也一样。然而，关于这些分子的"解离"速率并不相等(表I)。与CTLA4Ig比较，L104EA29YIg从CD80Ig"解离"的速率为大约1/2，并且从CD86Ig"解离"的速率为大约1/4。L104E具有在L104EA29YIg和CTLA4Ig中间的"解离"速率。因为这些突变的引入没有明显地影响"结合"速率，所以由L104EA29YIg观察到的对于CD80Ig和CD86Ig的抗体亲抗原性增加很可能主要是由于"解离"速率减少。为了确定L104EA29YIg对于CD86Ig和CD80Ig的抗体亲抗原性增加是由于突变影响每种单体结合为二聚物的方式，还是有抗体亲抗原性增强性结构变化引入每种单体中，如上文以及Linsley等人，(1995)J.Biol.Chem.，270:15417-15424所述,将半胱氨酸120诱变至丝氨酸后制备CTLA4和L104EA29Y细胞外结构域的单链构建体。在其配体结合特性通过SPR分析前，纯化蛋白质CTLA4XC120S和L104EA29YXd2。s通过凝胶渗透层析显示是单体的(Linsley等人，(1995),同上)。结果显示2种单体蛋白质对于CD86Ig的结合亲和力为对于其分别的二聚物观察到的大约1/80-1/35(表I)。这支持先前公布的数据，其确定CTLA4的二聚作用对于高抗体亲抗原性配体结合是必需的(Greene等人，(1996)J.Biol.Chem.，271:26762-26771)。L104EA29YXC12QS以为CTLA4XC12QS的大约2倍的亲和力结合CD80Ig和CD86Ig。增加的亲和力是由于从两种配体解离的大约1/3的速率。因此，经由L104EA29Y的较强配体结合最可能是由于已引入每种单体链内的抗体亲抗原性增强性结构变化而不是其中分子二聚化的改变。抗体亲抗原性增强性突变的定位和结构分析CTLA4的纟田月包夕卜IgV样结构域的溶液结构最近已通过NMR光语学测定(Metzler等人，(1997)NatureStruct.Biol.,4:527-531。这允许亮氨酸104和丙氨酸29在三维折叠中的精确定位(图11A-B)。亮氨酸104位于高度保守的MYPPPY氨基酸序列附近。丙氨酸29位于S25-R33区的C末端附近，其在空间上邻近于MYPPPY区。虽然这2个区底部的残基之间有明显的相互作用，但显然L104和A29之间没有直接的相互作用，尽管它们都构成蛋白质中的邻接疏水核的部分。2个抗体亲抗原性增强性突变的结构结果通过建模来评估。A29Y突变可以容易地容纳在S25-R33区和MYPPPY区之间的裂缝中，并且可以用于稳定MYPPPY区的构象。在野生型CTLA4中，L104与MYPPPY区附近的L96和V94形成广泛的疏水相互作用。由于2个原因，谷氨酸突变采用类似于L104的那种的构象是非常不可能的。首先，如果不显著干扰S25-R33区就没有足够的空间容纳结构中更长的谷氨酸侧链。其次，在疏水区内隐藏谷氨酸侧链的负电荷的能量成本将是大的。相反，建模研究预测谷氨酸侧链向外翻转至表面上，在那里它的电荷可以通过溶剂化来稳定。此类构象变化可以容易地被G105适应，而区内的其他残基具有最低限度的变高抗体亲抗原性突变体与表达CD80或CD86的CHO细胞的结合CTLA4Ig和突变型分子与稳定转染的CD80+和CD86+CHO细胞结合的FACS分析(图2)如本文所述进行。CD80阳性和CD86阳性CHO细胞与浓度增加的CTLA4Ig、L104EA29YIg或L104EIg温育，并随后洗涤。结合的免疫球蛋白融合蛋白使用异硫氰酸荧光素缀合的山羊抗人免疫球蛋白片全测。如图2中所示，CD80阳性或CD86阳性CHO细胞(1.5x105)与指示浓度的CTLA4Ig(闭合方块)、L104EA29YIg(圓圈)或L104EIg(三角形)于23。C温育2小时，洗涤，并与异硫氰酸荧光素缀合的山羊抗人免疫球蛋白抗体温育。在FACScan上分析关于总共5,000个存活细胞的结合(单个测定)，并使用PC-LYSYS由数据直方图测定平均荧光强度(MFI)。数据对于只与第二步试剂温育的细胞测量的背景荧光(MFI=7)进行校正。对照L6mAb(80jug/ml)产生MFI<30。这些结果代表4次独立实验。L104EA29YIg、L104EIg和CTLA4Ig与人CD80转染的CHO细胞的结合大约相等(图2A)。L104EA29YIg和L104EIg比CTLA4Ig更强烈地结合由人CD86稳定转染的CHO细胞(图2B)。功能测定人CD4阳性T细胞通过免疫磁性负选择分离(Linsley等人，(1992)J.Exp.Med.176:1595-1604)。分离的CD4阳性T细胞在滴定浓度的抑制剂的存在下用乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)力。CD80阳性或CD86阳性CHO细胞刺激。CD4阳性T细胞(8-10x104/孔)在1nMPMA的存在下与或不与被照射的CHO细胞刺激剂一起培养。增殖应答通过在72小时培养的最后7小时过程中添加1pCi/孔[3H]胸苷测量。进行经由L104EA29YIg和CTLA4Ig的PMA力口CD80阳性CHO或CD86阳性CHO、刺激的T细胞的抑制。结果显示于图3中。L104EA29YIg抑制CD80阳性PMA处理的CHO细胞增殖超过CTLA4Ig(图3A)。L104EA29YIg在抑制CD86阳性PMA处理的CHO细胞增殖方面同样比CTLA4Ig有效(图3B)。因此，L104EA29YIg是CD80和CD86介导的T细胞共刺激的更有效的抑制剂。图4显示通过L104EA29YIg和CTLA4Ig抑制上文制备的同种刺激的人T细胞，以及用表达CD80和CD86、称为PM的人B类淋巴母细胞系(LCL)进一步同种刺激的(T细胞为3.0xl0V孔，并且PM为8.0xl0V孔)。初级同种刺激发生6天，随后细胞用3H胸苷脉沖7小时，之后测定4参入的》文射性标记。次级同种刺激如下进行。7天初级同种刺激的T细胞经由淋巴细胞分离培养基(LSM)(ICN,Aurora,OH)收获并静置24小时。T细胞随后在滴定量的CTLA4Ig或L104EA29YIg的存在下通过加入与上文相同比率的PM再刺激(次级)。刺激发生3天，随后细胞如上用放射性标记脉沖并收获。L104EA29YIg对初级同种刺激的T细胞的作用显示于图4A中。L104EA29YIg对次级同种刺激的T细胞的作用显示于图4B中。L104EA29YIg比CTLA4Ig更好地抑制初级和次级T细胞增殖应答。为了测量细胞因子生产(图5)，建立一式两份的次级同种刺激板。3天后，使用ELISA试剂盒(Biosource，Camarillo,CA)使用由制造商推荐的条件测定培养基。发现在阻断次级同种异体刺激后T细胞的IL-2、IL-4和y-IFN细胞因子生产方面L104EA29YIg比CTLA4Ig更有效(图5A-C)。L104EA29YIg和CTLA4Ig对猴的混合淋巴细胞应答(MLR)的作用显示于图6中。来自2只猴的外周血单核细胞(PBMC，S;来自每只猴的3.5xl0"细胞/孔)经由淋巴细胞分离培养基(LSM)纯化并与2pg/ml植物凝集素(PHA)混合。细胞被刺激3天随后在收获前用放射性标记脉沖16小时。L104EA29YIg抑制猴T细胞增殖比CTLA4Ig更佳。表II通过所列位点上的CTLA4Ig诱变对CD86Ig结合的作用<table>complextableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>(占优势的作用由符号"+"指示)实施例3这项研究比较了在肾移植受体中用作由巴利昔单抗(Simulect;Novartis)诱导、霉酚酸酯(MMF;CellCept;Roche)和皮质类固醇组成的无CNI组合方案的部分时，上文描述的L104EA29YIg作为维持免疫抑制剂与CsA在12个月内的功效和安全性。来自活或已故供体、非HLA相同(non-HLA-identical)的肾同种异体移植物的成人受体是合格的。具有先前肾移植、系列反应性抗体史>20%的受试者，或由研究者视为处于急性排斥的较高危险中的那些限制为S10%的研究人群。排除标准包括局灶性和节段性肾'J、球硬化症、I或II型膜性增生性肾小球肾炎或溶血性尿毒性综合征/血栓形成性血小板减少性紫癜的潜在肾病；活动性乙型或丙型肝炎，或HIV;以及供体年龄>60或<6,心源性死亡的供体，或供体肾冷缺血时间〉36小时。这是在美国、欧洲和加拿大进行的开放(open-label)、随机化、活性对照、多剂、多中心研究。经历肾移植的各性别年龄^18岁的合格患者(已故或活供体，除了当供体和受体HLA相同时)被随机化以以1:1:1的比率使用L104EA29YIg较加强(MI)的治疗方案、L104EA29YIg较不加强(LI)的治疗方案、或环孢菌素A(CsA)治疗；全都与使用巴利昔单抗(Simulect;Novartis)的诱导疗法、使用霉酚酸酯(MMF;CellCept;Roche)的辅助维持疗法和皮质类固醇组合。2种L104EA29YIg方案包括其中L104EA29YIg以10mg/kg施用的早期，以及其中L104EA29YIg以5mg/kg、每4(q4)周或每8(q8)周的时间间隔施用的维持期。关于每种方案的剂量基于体重。这些剂量通过在非人灵长类动物研究过程中显示有效的靶谷特征指示。这些特征使在最大的免疫学危险期(第0-90天)过程中最初较高的剂量成为必要。早期在MI方案中更长(6对3个月)，并且包括更频繁的给药。L104EA29YIg较加强(MI)的治疗方案由第1、5、15、29、43、57、71、85、113、141和169天10mg/kg,随后每4或8周5mg/kg的施用组成。L104EA29YIg较不加强(LI)的治疗方案由第1、15、29、57和85天10mg/kg,随后每4或8周5mg/kg组成。L104EA29YIg以30分钟的静脉内输注施用。随机化至CsA的患者接受每天2次的剂量(7土3mg/kg)，以达到预先指定的第l个月期间150-400ng/ml以及第2-12个月期间150-300ng/ml的靶血清浓度范围，这与目前的医疗实践一致。所有患者都接受每天2gMMF和每4天20mg巴利昔单抗。还给予皮质类固醇逐渐减少方案，其由第l天时甲基强的松龙静脉内快速灌注(bolus)500mg以及第2天时250mg,随后为第3天时经口强的松100mg，第4天时50mg，第5-30天时25mg，第31一44天时22.5mg,第45-58天时20mg,第59—72天时17.5mg,第73-86天时15mg，第87-100天时12.5mg,以及第101-114天时10mg组成。第114天后，强的松剂量可以每隔一月减少2.5mg,^旦不J氐于5mg/天。初级目的是证实在6个月时在预防急性排斥中L104EA29YIg不劣于CsA。次级目的包括在6个月和1年时评估急性排斥的发生率(活组织检查证实的或推测的)；在l、6和12个月时经由碘海醇清除率测量的肾小球滤过率(GFR);高血压参数；血清胆固醇和甘油三酯；和总体安全性。其他预先指定的分析包括在l年时患者死亡或移植物丢失；急性排斥的严重性；移植后糖尿病的发生率[定义为在以前不知道是糖尿病的患者中，高血糖症24周，或血红蛋白A1C(HbAlc)>7%所需的任何治疗];使用肾病饮食调整(MDRD，LeveyAS,BoschJP，LewisJP，GreeneT,RogersN,RothD.Amoreaccuratemethodtoestimateglomerularfiltrationratefromserumcreatinine:anewpredictionequation.ModificationofDietinRenalDiseaseStudyGroup.AnnInternMed1999;130:461-470),Jelliffe(RW.Creatinineclearance:Bedsideestimate.AnnInterMed.1973;79:604-605)，Cockcroft-Gault(CockcroftDW，GaultMH.Predictionofcreatinineclearancefromserumcreatinine.Nephron1976;16:31-41)，和Nankivell(NankivellBJ,GruenewaldSM,AllenRD，ChapmanJR.Predictingglomerularfiltrationrateafterkidneytransplantation.Transplantation.1995;59(12):1683-1689)公式计算的GFR;药物代谢动力学和免疫原性。急性排斥(AR)的诊断和治疗基于Banff97标准和等级(RacusenLC,SolezK,ColvinRB,等人,TheBanff97workingclassificationofrenalallograftpathology.KidneyInt1999;55(2):713-23.)。由此进行慢性同种异体移植物肾病(CAN)发生率的分析。急性排斥(AR)的诊断和治疗基于Banff97标准和等级(RacusenLC,SolezK,ColvinRB,等人,TheBanff97workingclassificationofrenalallograftpathology.KidneyInt1999;55(2):713-23.)。进行手术中的肾同种异体移植物活组织检查以评估基线组织学。活组织检查的组织根据Banff97肾移植病理学工作分类进行染色和分级。活组织冲全查由对治疗不知情的独立病理学家评估以确纟人在AR治疗前所有发作的临床上可疑的AR。另外的终末点包括在12个月时临床上可疑和活组织检查证明的急性排斥(CSBPAR);在1年时死亡或移植物丢失；AR发作的严重性(使用Banff97刻度表测量)；治疗失败(定义为研究者的意见；^1IB级排斥；复发或抗类固醇排斥)；在l、6和12个月时的肾功能(经由碘海醇清除率评估的肾小球滤过率[GFRs])以及慢性同种异体移植物肾病(CAN)的证据(间质纤维化和肾小管萎缩)；高血压参数(舒张血压[BP]^90mmHg和/或收缩压BP^140mmHg);血清脂质；与CsA治疗的患者比较，在用L104EA29YIg治疗的患者中的安全性、可容许性和不利事件(AEs)。对于安全性和可容许性评估，在常规预定的临床就诊期间记录AEs、实验室测量值(血液学、生物化学和尿分析)和生命体征。结果总共218名患者经历肾移植，并且随机化至MI组(N=74)、LI组(N二71)或CsA(N=73)。基线人口统计学和临床特征在3个治疗组之间是相似的。总共164名患者完成了l年的治疗。在l年之前中断的患者中(N爿6对16对20;MI方案对LI方案对CsA)，最常见的原因是AEs(N=5对8对9)和治疗失败(N=7对5对3)。CSBPAR的发生率在所有3个治疗组中很少出现，并且在CSBPAR或活组织检查证明的急性排斥(BPAR)的发生率中在治疗组之间没有统计学显著差异。在6和12个月时，CSBPAR的发生率对于MI、LI和CsA治疗分别为6.8%、5.6%和8.2°/0。BPAR的发生率在6和12个月时在组之间也是相似的，尽管BPAR在LI组中略微高于其他2个组中(对于MI、LI和CsA治疗分别为18.9%、29.6%和17.8%)。活组织检查证明的急性排斥在所有治疗组中都比CSBPAR更频繁，并且在LI组中最普遍。然而，发现这些事件中的许多发生在L104EA29YIg低于所需谷血清浓度的患者中。在AR严重性中没有看到治疗组之间的统计学显著差异；然而，数目小并且不导致移植物丢失。这项研究对研究药物不是不知情的以允许关于CsA的护理标准，这可能促成与CsA组(N=144)比较，L104EA29YIg组(N=345)中获取的活组织检查的数目增加。尽管这对于以这种方式设计的研究并不意外，但它可能已增加L104EA29YIg治疗组中肾组织学异常的诊断率。死亡和/或移植物丟失在所有治疗组中很少发生，在MI组中报告了1例死亡，CsA组中4例并且在LI组中没有。大多数移植物丢失不是由免疫学事件引起的，并且与LI组中的1个比较在MI和CsA组中只有3个移植物丟失。与基于CsA的免疫抑制比较，使用基于L104EA29YIg的治疗观察到肾功能的显著改善。在所有时间点上使用Ll(MEA29YIg治疗的碘海醇清除率更大，在12个月时与CsA比较平均改善为11ml/分钟/1.73m2(~20%)。在12个月时，相对而言，慢性同种异体移植物肾病(CAN)在L104EA29YIg治疗患者中比CsA治疗患者中低30-50%地更不常见。在12个月时新或恶化的CAN比率对于MI、LI和CsA组分别为29%、19%和44%。在1年时，与MI(130mmHg)和LI(129mmHg)治疗组中的患者比较，在用CsA治疗的患者(133mmHg)中平均收缩血压高3"mmHg。尽管在L104EA29YIg组中较少使用抗高血压药物(MI:87.5%;LI84.1%:CsA92.2%)也如此。与CsA(212mg/dL)治疗的患者比较，使用L104EA29YIg(MI:198mg/dL;LI:201mg/dL)的总血清胆固醇略微更低，尽管对于L104EA29YIg降脂质药物的使用同样较少(MI:36.1%;LI:31.9%;CsA:53.1%)。与L104EA29YIg治疗组中的1名比较，在CsA组中4名(5.5%)患者死亡。不利事件(AEs)的比率在治疗组之间是可比较的；然而，相关AEs在L104EA29YIg治疗后比CsA治疗明显更低。L104EA29YIg的静脉内施用是良好耐受的，没有输注反应。L104EA29YIg治疗的患者没有显示出一般的CsA相关的不利事件，例如贫血、白细胞减少症、多毛症、震颤和牙龈增生。与基于CsA的治疗比较，基于L104EA29YIg的治疗与任何感染或恶性肿瘤的危险增加无关。结论这项12个月的研究证实与CsA比较，基于L104EA29YIg的维持疗法给予预防AR中的相等功效以及类似的患者和移植物存活。另外，与基于CsA的维持免疫抑制比较，L104EA29YIg证实肾功能的显著改善和CAN的减少。L104EA29YIg是安全和良好耐受的并且不伴随一般的CNI相关毒性。CSBPAR和BPAR的比率在3个治疗组之间是相似的，从而证实使用基于CsA的疗法观察到的低AR比率使用L104EA29YIg同样达到了。大多数BPARs分类为亚临床的，从而提示肾功能未受损。与LI组比较MI组中数字上较低的AR比率提示对于L1(MEA29YIg可能的剂量依赖性应答。L104EA29YIg组中更频繁的活组织检查可能已导致这些组中急性和慢性排斥的过度诊断，从而提示L104EA29YIg治疗的利益在这项研究中可能被少说。大多数BPAR事件在移植后的前3个月内发生，这并不意外，因为其他人已显示在移植后的早期过程中需要较高剂量的免疫抑制剂(WiecekA,NowickiM,KokotF,RitzE.Acutefailureofthetransplantedkidney-一pathophysiology,diagnosisandprevention.AnnTransplant1996;1(4):5—9和BennettWM.Posttransplantacuterenalfailure.RenFail1997;19(2):225-6)。因为大多数这些事件在低于所需谷值发生，所以应当考虑改变在达到稳定状态之前的第1个月治疗方案。在维持期过程中可见的大多数BPARs在非常低或不可检测的L104EA29YIg水平上发生，从而提示在那些时间段过程中AR的发生率与不足的免疫抑制相关，这可以通过剂量方案中的改变避免。这项研究证实与CsA比较L104EA29YIg伴随类似的总AE比率，而与研究药物相关的AE较少。在3个治疗组之间没有鉴别出病毒相关的AEs数目中的实际差异。在低AR比率的存在下，维持免疫抑制的新目标是减少长期健康并发症，包括高血压、高脂血症、药物毒性和预防瘢痕形成。如在自身免疫性疾病中，出现了新一代的免疫选择性维持免疫抑制剂。经由用L104EA29YIg免疫选择性共刺激阻断抑制T细胞共刺激代表了新的范例，从而在肾移植中提供更有选择性的维持免疫抑制、减少的毒性和改善的长期结果的希望。实施例4存在对肾移植中新疗法的相当大的未满足的医学需要，所述疗法可以提供与CNIs可比较的短期受试者和移植物存活，而无其长期肾毒性、心血管和代谢作用。该需要在ECD定义的肾同种异体移植物的受体中特别重大，其长期受试者和移植物存活率明显低于来自符合标准合格标准的供体的同种异体移植物受体的那些。具有新型作用机制的免疫抑制剂L104EA29YIg是用于在ECD同种异体移植物的肾移植受体中使用的有希望的非肾毒性候选者。因为Ll(MEA"YIg可以在移入时而不是以延迟方式施用，如对于CNIs通常必需的-特别是在肾功能最初受损的那些同种异体移植物中-所以它提供了及时方式的免疫抑制并且无需多克隆抗淋巴细胞制剂。这可以转化为具有有利的安全特征的可比较的急性排斥率。因为L104EA29YIg预期不是肾毒性的，所以可见关于同种异体移植物结构(即，CAN)和功能(即GFR)的另外利益。最后，与CNIs不同，L104EA29YIg作用的靶定机制应提供免疫抑制而不会不利地影响心血管/代谢特征。下文提供了关于L104EA29YIg在这种受试者群体中使用的总体利益-危险评估。将研究2种剂量方案(如实施例3中所述，伴随LI方案的较小修改并使用每4周的维持输注时间表)。初乡及目的1)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时受试者和移植物存活复合的作用。2)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时测量的GFR<60mL/分钟/1.73!!12或从第3个月到第12个月测量的GFR减少三10mL/分钟/1.73m2复合的作用。次级目的1)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时测量的GFR的作用。2)评估L104EA29YIg相对于CsA对由12个月的活组织检查证明的CAN的作用。3)评估L104EA29YIg相对于CsA对在3个月时测量的GFR，以及从基线(3个月)到12个月的变化的作用。4)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时测量的GFR〈30mL/分钟/1.73m2的受试者比例的作用。5)评估L104EA29YIg相对于CsA对在3、12、24和36个月时测量的GFR,以及从基线(3个月)到12、24和36个月的变化的作用。6)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时PTDM的作用。7)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时高血压测量的作用，包括SBP和DBP、高血压和受控制的高血压的发生率和流行率、以及治疗方案的强度。8)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时血脂异常测量的作用，包括血清总、非HDL、低密度脂蛋白(LDL)和HDL胆固醇和TGs,血脂异常和受控制的血脂异常的发生率和流行率，以及治疗方案的强度。9)评估L104EA29YIg相对于CsA对在24和36个月时受试者和移植物存活的作用。10)评估L104EA29YIg相对于CsA对在6个月时急性排斥测量的作用，包括急性排斥的发生率和严重性、用于受损的肾功能和预期DGF的多克隆抗淋巴细胞制剂的使用、用于治疗急性排斥的淋巴细胞消耗疗法的最初使用、抗类固醇急性排斥的发生率、急性排斥后完全恢复(SCr回到基线)的发生率、亚临床性排斥的发生率、以及不管组织学发现所有治疗的急性排斥发作的发生率。11)评估L104EA29YIg相对于CsA对QoL的作用。12)评估L104EA29YIg相对于CsA的总体安全性。第三级目的1)评估L104EA29YIg相对于CsA对从基线(3个月)到12、24和36个月计算的GFR的斜率和截距的作用。2)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时测量的GFR<45mL/分钟/1.731112的受试者比例的作用。3)评估L104EA29YIg相对于CsA对在第12个月时计算的GFR<75mL/分钟/1.731112的受试者，以及从第3个月到第12个月计算的GFR减少至少15mL/分钟/1.73m2的受试者比例的作用。4)评估L104EA29YIg相对于CsA对DGF发生率的作用。5)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时急性排斥测量的作用，包括急性排斥的发生率和严重性、用于受损的肾功能和预期DGF的多克隆抗淋巴细胞制剂的使用、用于治疗急性排斥的淋巴细胞消耗疗法的最初使用、抗类固醇急性排斥的发生率、急性排斥后完全恢复(SCr回到基线)的发生率、亚临床性排斥的发生率、以及不管组织学发现所有治疗的急性排斥发作的发生率。6)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时复合心血管疾病终末点(判定的心血管性死亡、心肌梗死、缺血性发作、由于心血管原因的非选择性住院治疗、和经皮冠状介入)的作用。7)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时复合心肾疾病终末点(死亡、移植物丟失、非致命性心肌梗死和中风)的作用。8)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时Framingham危险;平分的作用。9)评估L104EA29YIg相对于CsA对研究药物中断发生率的作用。10)评估L104EA29YIg相对于CsA对抗供体人白细胞抗原(HLA)抗体的作用。11)评估L104EA29YIg相对于CsA对活组织4企查样品中C4d阳性的作用。研究设计该研究的持续时间是3年，伴随关于安全性评估的后续8周随访期。在3年治疗期结束时，受试者可能对于长期延伸研究是合格的。这是随机化、半盲、活性对照、平行组研究。所有受试者都将接受来自具有如下定义的扩大标准的供体的肾。这些标准部分基于由器官共享联合网(UNOS)提出的那些；它们还包括广泛用于鉴别潜在的损害器官的其他特征，例如来自心源性死亡(DCD,无心跳)或延长的冷缺血时间(CIT)供体的那些。大约540名受试者将以1:1:1的比率随机化至使用L104EA29YIg(MI方案)、Ll(MEA"YIg(LI方案)或CsA的治疗。所有受试者还将接受使用巴利昔单抗的诱导，以及MMF和皮质类固醇的背景维持免疫抑制方案。随机化至MI方案的受试者将接受第1和5天时，随后每2周到第3个月(第2、4、6、8、IO和12周)，以及随后每4周到第6个月(第16、20和24周)的静脉内L104EA29YIg(10mg/kg)。6个月后，MI治疗组中的受试者将接受每4周施用的L104EA29YIg5mg/kg的维持剂量，直至36个月试验完成时。随机化至LI方案的受试者将接受第1和5天时，以及随后每2周到第1个月(第2和4周)，以及每4周到第3个月(第8和12周)的静脉内L104EA29YIg(10mg/kg)。3个月后，LI治疗组中的受试者将接受每4周施用的L104EA29YIg5mg/kg的维持剂量，直至36个月试-险完成时。LI和MI组之间的不知情将借助于在第6和10周时LI治疗组中的安慰剂输注来保持。随机化至CsA的受试者将接受每天2次的剂次，其设计为达到与目前医疗实践一致的指定谷血清浓度范围。多克隆抗淋巴细胞制剂(Thymoglobulin或ATGAM)的使用对于随机化至CsA、经历受损的肾同种异体移植物功能和预期DGF的受试者是允许的-但不是必需的。这些试剂以这种能力广泛用于提供免疫抑制，直至移植物功能恢复用于施用CsA。在这种临床情况中多克隆抗淋巴细胞制剂使用和剂量的决定由研究者在方案指南内自行决定。L104EA29YIg的安全性和功效将在1、2和3年时评估。初级结果测量每种基于L104EA29YIg的方案将对于下列初级功效结果测量与基于CsA的方案进行比较(1)在12个月时受试者和移植物存活的复合；(2)在12个月时测量的GFR<60mL/分钟/1.731!12或从第3个月到第12个月测量的GFR减少>10mL/分钟/1.73m2的复合。目的是证实对于死亡和移植物丢失的非劣势以及对于肾功能的优势。选择受试者和移植物存活的终末点，因为这些测量是关于同种异体移植物受体的最重要的临床结果。尽管同种异体移植物丢失可以通过有效的免疫抑制疗法来预防，但相同疗法可增加由于感染、PTLD、恶性肿瘤、肾毒性或心血管疾病死亡的危险。因此，一企查受试者和移才直物存活的复合终末点作为同种异体移植物受体中免疫抑制疗法的净利益的概括测量是合适的。这种复合终末点具有在所有受试者中不由于漏失数据或受试者错误分类而偏性评估的进一步优点。选择肾功能作为终末点，这是因为移植后肾功能和长期肾结果之间的关联已在各种情况下重复证实。无论肾功能在移植后数天、出院时、还是在移植后6和12个月时测量，这种关联都存在。这已在来自活和尸体供体肾的受体、来自较年轻和较年长的尸体供体肾的受体、第2次移植受体、以及成年人和儿科受体中观察到。来自多中心研究的结果证实SCr对于预期长期移植物存活的重要性。肾功能和长期预后之间的关联是强烈且可重现的，但不是严格线性的。在成年人肾移植受体的分析中，1年时的SCr和预计的移植物中值半衰期之间的关联检查揭示SCr>1.5mg/dL时的显著拐点。类似地，从6个月到l年的SCr变化(△SCr)和预计的移植物中值半衰期之间的关联检查揭示△SCrmg/dL时的显著拐点。因此，l年时肾功能的绝对水平和从6个月(或类似稳定的早期移植后时间点)到1年的肾功能变化适合于用作结果测量。肾功能与长期结果关联的一线性的存在提示肾功能的分类测量将比空间测量具有更大的临床关联性。关于肾功能在l年时>1.5mg/dL的阔值以及从第6个月到第1年SCr20.3mg/dL的变化看起来是合适的。在上文参考的研究中，肾功能的预后重要性使用SCr作为标记证实。这些研究一般太大而不能使用肾小球滤过的直接测量。SCs作为肾功能标记的局限性是众所周知的。SCs水平主要反映肌酸酐的肾排泄和肌酸酐的内源性产生之间的平衡。后者可以受肌肉量、感染、炎症和类固醇使用中的变化的显著作用，所述变化在移植群体中是非常普遍的。此外，肌酸酐的肾排泄可以通过2种途径-肾小球滤过和肾小管分泌发生。肾小球滤过的丧失对SCr的影响通常被肾小管分泌中的补偿性增加掩盖，并且增加的SCr作为肾损伤标记的效用从而减少。已估计40。/。GFR减少的受试者将具有正常或低SCr。已开发了众多公式，其寻求通过说明人口统计学和生物统计学因素的作用来改善SCr和GFR之间的关联。在具有稳定肾功能的294名移植受体中研究由各种公式估计的GFR和通过菊粉清除率测量的真实GFR之间的一致水平。预测的GFR值与测量的菊粉清除率的不同为至少10mL/分钟/1.73m2的比例对于Jelliffe公式为34%，至对于Nankivell公式为53%。由Levey等人提出的公式将在这项研究中用于计算GFR。这个公式已显示在移植群体中比其他公式例如Nankivell更精确地预测GFR，在预测和测量值之间具有最佳关联。考虑到真实GFR和计算的GFR之间的相当大差异，真实肾小球滤过标记的清除率将用于评估肾功能的初级终末点(附录l)。60mL/分钟/1.73m2的GFR，或至少10mL/分钟/1.731112的GFR变化将用作在大流行病学研究中确立的1.5mg/dL的SCr阈值或至少0.3mg/dL的SCr变化的近似等价物。复合终末点的变化组分将从第3-12个月评估，这是因为移植后肾功能在第3个月大部分稳定。其他结果测量关键的次级目的是评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时测量的GFR以及对在12个月时活组织检查证明的CAN的作用。这些终末点与其他次级终末点分开以强调其在L104EA29YIg评估中的重要性。如上文讨论的，ECD肾中的功能性肾单位量和肾保存由于供体特征(例如，较大的年龄、心血管共病(co-morbidities)、获得操作和CIT)在移植时很可能是减少的，所得到的受试者和移植物存活率显著低于使用标准条件供体器官观察到的那种。因为肾功能在移入时可能是减少的，所以可能相当大比例的受试者可以满足在研究入组或基线肾同种异体移植物功能测定时共同初级肾功能终末点的标准。因此，方案的关键次级目的是评估L104EA29YIg相对于CsA在12个月时测量的GFR中的差异中的作用。这种关键次级终末点允许不考虑这种ECD群体中预先存在的供体变异性而区别L104EA29YIg与CsA比较的作用。它还促成肾功能的总体评估，并进一步巩固L104EA29YIg在肾移植受体中提供显著医学利益的结论。其余的关键次级目的是由12个月的活组织冲全查证明的CAN。CAN是死亡的^又仅第二位的原因，其中功能性移植物是晚期肾同种异体移植物丢失的主要原因。荒谬的是，CNIs被视为通过直接(即直接肾毒性作用)和间接途径(即不利的心血管和代谢作用)促成CAN。由于其具体作用机制，L104EA29YIg不可能是直接肾毒性的，或不可能不利地改变心血管和代谢参数。在上文实施例中，在L104EA29YIg治疗的受试者中可见CAN发生率减少中的有利作用。在目前研究中，确立CAN发生率的减少连同肾功能的改善将巩固L104EA29YIg在肾移植受体中提供显著医学利益的结论。L104EA29YIg在预防急性排斥中的功效将通过各种结果测量来评估。这些包括其发生率、严重性、对治疗的应答性和结果。然而，这些测量的解释被L104EA29YIg和CsA中的固有差异复杂化。L104EA29YIg在移植时施用，而CsA在存在初始肾功能证据时开始。预期在这项研究中随机化至CsA的某些受试者将接受多克隆抗淋巴细胞制剂以提供免疫抑制覆盖，如果初始肾功能是受损的并且预期DGF的话。这种治疗作用可以预防或掩盖CsA治疗的受试者中急性排斥的发展，并且使得受试者对于急性排斥的结果测量不可评价。因为在随机化至L104EA29YIg、从移植时开始治疗的受试者中无需采取类似作用，所以急性排斥的比较评估是不相等的。为了更精确地评估L104EA29YIg在预防急性排斥中的功效，这种能力的多克隆抗淋巴细胞制剂的使用还连同其他急性排斥测量一起报告。研究群体研究群体包括由于供体特征、获得操作、CIT或其他因素可能是不最理想的肾同种异体移植物的受体。具体的合格标准基于由UNOS提出的器官捐赠'扩大标准，。来自延长的CIT或来自DCDs供体肾的受体也将是合格的。一般地，免疫学标准在受试者选择中将不起主要作用。各种免疫学危险水平上的受试者是合格的。然而，该研究将排除最大的免疫学危险的受试者(交叉配型阳性、系列反应性抗体[PRA]230%，或先前移植的那些)。这些受试者可能需要减少其抗体负荷的治疗，例如血浆去除术，这超出这种方案的范围。受试者将在全球大约90个地点入选。初级功效结果测量1)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时受试者和移植物存活复合的作用。2)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时测量的GFR<60mL/分钟/1.73m2或从第3个月到第12个月测量的GFR减少210mL/分钟/1.73m2复合的作用。次级功效结果测量1)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时测量的GFR的作用。2)评估L104EA29YIg相对于CsA对由12个月的活组织4全查证明的CAN的作用。3)评估L104EA29YIg相对于CsA对在3个月时测量的GFR,以及从基线(3个月)到12个月的变化的作用。4)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时测量的GFR<30mL/分钟/1.73m2的受试者比例的作用。5)评估L104EA29YIg相对于CsA对在3、12、24和36个月时测量的GFR,以及从基线(3个月)到12、24和36个月的变化的作用。6)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时PTDM的作用。7)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时高血压测量的作用，包括SBP和DBP、高血压和受控制的高血压的发生率和流行率、以及治疗方案的强度。8)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时血脂异常测量的作用，包括血清总、非HDL、LDL和HDL胆固醇和TGs,血脂异常和受控制的血脂异常的发生率和流行率，以及治疗方案的强度。9)评估L104EA29YIg相对于CsA对在24和36个月时受试者和移植物存活的作用。10)评估L104EA29YIg相对于CsA对在6个月时急性排斥测量的作用，包括急性排斥的发生率和严重性、用于受损的肾功能和预期DGF的多克隆抗淋巴细胞制剂的使用、用于治疗急性排斥的淋巴细胞消耗疗法的最初使用、抗类固醇急性排斥的发生率、急性排斥后完全恢复(SCr回到基线)的发生率、亚临床性排斥的发生率、以及不管组织学发现所有治疗的急性排斥发作的发生率。11)评估L104EA29YIg相对于CsA对QoL的作用。10)评估L104EA29YIg相对于CsA的总体安全性。第三级结果测量1)评估L104EA29YIg相对于CsA对从基线(3个月)到12、24和36个月计算的GFR的斜率和截距的作用。2)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时测量的GFR<45mL/分钟/1.73m2的受试者比例的作用。3)评估L104EA29YIg相对于CsA对在第12个月时计算的GFR<75mL/分钟/1.731112的受试者，以及从第3个月到第12个月计算的GFR减少至少15mL/分钟/1.73m2的受试者比例的作用。4)评估L104EA29YIg相对于CsA对DGF发生率的作用。5)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时急性排斥测量的作用，包括急性排斥的发生率和严重性、用于受损的肾功能和预期DGF的多克隆抗淋巴细胞制剂的使用、用于治疗急性排斥的淋巴细胞消耗疗法的最初使用、抗类固醇急性排斥的发生率、急性排斥后完全恢复(SCr回到基线)的发生率、亚临床性排斥的发生率、以及不管组织学发现所有治疗的急性排斥发作的发生率。6)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时复合心血管疾病终末点(判定的心血管性死亡、心肌梗死、缺血性发作、由于心血管原因的非选择性住院治疗、和经皮冠状介入)的作用。7)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时复合心肾疾病终末点(死亡、移植物丢失、非致命性心肌梗死和中风)的作用。8)评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时Framingham危P企"i平分的4乍用。9)评估L104EA29YIg相对于CsA对研究药物中断发生率的作用。10)评估L104EA29YIg相对于CsA对抗供体HLA抗体的作用。11)评估L104EA29YIg相对于CsA对活组织;险查样品中C4d阳性的作用。移植物丢失的定义移植物丢失定义为功能丧失或躯体缺失。功能丧失将定义为如通过中心实验室测定的SCr^6.0mg/dL(530(mol/L)的持续水平^4周或^56连续透析天数，或肾功能损害至这样的程度，从而使得受试者接受第2次移植。移植物丟失的所有原因将由独立的EAC判定。移植物功能延迟(DGF)的定义DGF定义为到研究第8天(手术后第7天)的透析治疗。慢性同种异体移植物肾病(CAN)的定义活组织检查证明的CAN将通过不知情的中心组织病理学家使用Banff97肾移植病理学工作分类来测定。CAN发生率将通过比较所有第1天后的活组织检查与移植时获得的基线活组织检查来测定。这种比较确定随后可能解释为CAN的任何预先存在的组织病理学的存在和严重性。移植后糖尿病的定义PTDM将根据由近期国际一致指南20阐述的定义进行定义。这些标准概括为a)糖尿病症状加血浆葡萄糖(PG)浓度偶尔^200mg/dL(11.1mmol/L)，或b)空腹血糖(FPG)2126mg/dL(7.0mmol/L),或c)在经口葡萄糖耐量测试过程中2小时PG2200mgZdL(11.1mmol/L)，和d)在伴随急性代谢失代偿的明确高血糖症不存在下必须在另一天进行基于静脉PG测量的证实性实验室测试。该研究将利用FPG用于评估PTDM，然而，如果受试者使用这些其他方法评估且发现满足上述标准，那么他们将被视为患有PTDM。高血压测量的定义高血压在这项研究中将根据关于预防、检测、评估和治疗高血压的全国联合委员会第7次报告(SeventhReportoftheJointNationalCommitteeonthePrevention，Detection,Evaluation,andTreatmentofHighBloodPressure)21对于患有慢性肾病的受试者进行定义。这个定义依据SBP2130mmHg或DBP兰80mmHg。另夕卜，SBP<130mmHg和DBP<80mmHg、正在接受用于高血压适应症的抗高血压药物或具有高血压医疗史的所有受试者包括在这个定义内。高血压发生率定义为在随机化和移植后发展高血压的受试者比例。高血压流行率定义为在任何给定时间满足上文说明的高血压定义的受试者比例。受控制的高血压定义为SBP<130mmHg和DBP<80mmHg，同时4妻受用于高血压适应症的抗高血压药物，或具有高血压医疗史、接受用于另一种适应症的抗高血压药物。SBP<130mmHg和DBP<80mmHg、没有高血压医疗史、开处用于除高血压以外的适应症的抗高血压药物(例如用于偏头痛预防的(3阻滞剂)的受试者，将不视为具有高血压或受控制的高血压。治疗方案的强度定义为用于控制高血压的抗高血压药物的总数目。所有抗高血压药物将对于患有高血压或受控制的高血压的受试者中的高血压适应症计H因为抗高血压效应的存在与适应症无关。血脂异常测量的定义血脂异常依据来自全国肾脏基金会肾脏疾病纟吉果质量4昌i义(NationalKidneyFoundationKidneyDisaseOutcomesQualityInitiative)(NKF-K/DOQI)22的近期指南进行定义。血脂异常定义为高甘油三酸酯血症(TGss500mg/dL[5.65mmol/L])、高胆固醇血症(LDLs100mg/dL[2.59mmol/L])、或在高TGs(TGss200mg/dL[2.26mmol/L的存在下非HDL升高(非HDLs130mg/dL[3.36mmol/L])。受控制的血脂异常在这项研究中定义为接受用于上文说明的血脂异常之一的药理学处理的受试者，所述血脂异常被成功治疗，并且其脂质值降到先前段落中描述的阈值之下。这些试剂中的一些具有关于伴随CsA使用的起始剂量或最大推荐剂量，关于肾机能不全给药的特殊预防措施和/或警告，或可以引起CsAPK改变。参考关于具体推荐的合适的包装插页。用作抗高血脂药的任何其他试剂(即，非抑制素疗法)将视为水平I的治疗强度。抑制素和另一类试剂(例如依泽替米贝(ezetimibe))的伴随使用将抑制素治疗的强度水平提高l个水平；因此，超过5的强度水平是可能的。急性排斥将定义为需要临床证据和活组织检查证实的临床病理学事件。同种异体移植物活组织检查将通过不知情的中心独立病理学家使用Banff97肾移植病理学工作分类来评估急性排斥的存在和严重性。在急性排斥的分析中，通过中心病理学家的活组织检查解释和分级将代替地方性解释。对于没有完全满足标准，但由中心病理学家解释为是急性排斥并导致用于急性排斥的治疗的可疑急性排斥进行的活组织检查将作为急性排斥计数。亚临床性排斥定义为与急性排斥一致但缺乏其临床关联的中心病理学家的组织学发现。抗类固醇急性排斥定义为在使用皮质类固醇治疗后缺乏SCr改善和/或使淋巴细胞消耗疗法的使用成为必要的组织学发现。Framingham危险评分这种危险评分利用来自FraminghamHeartStudy23的数据以估计关于'顽固性(hard)，冠心病(心肌梗死和冠状死亡)的10年危险。包括在这种计算中的危险因素是年龄、性别、总胆固醇、HDL胆固醇、SBP、糖尿病、关于高血压的治疗以及在先前月份中的任何吸烟。样本大小测定初级目的是评估L104EA29YIg与CsA比较对在12个月时受试者和移植物存活以及肾功能的作用。2个共同初级终末点是(l)在移植后12个月时具有存活移植物的受试者比例和(2)在12个月时测量的GFR<60mL/分钟/1.73n和/或从第3个月到第12个月测量的GFR减少210mL/分钟/1.73rr^的受试者比例。每个治疗组180名受试者的样本大小将提供83%能力，以确定在第一个共同初级终末点(受试者和移植物存活)中关于绝对差异(每个L104EA29YIg方案和CsA方案之间)的97.3%双侧CIs的上限将不超过10%,如果在12个月时真实受试者和移植物存活率对于CsA方案是80。/。并且对于2个L104EA29YIg方案中的每一个为83%的话。对于肾功能终末点，每组180名受试者的样本大小能够检测与CsA方案比较对于每个L104EA29YIg方案满足测量的GFR终末点的受试者比例25%的减少，其中假定75%的CsA受试者满足肾功能终末点以及每个治疗组25%的退出。总的来说，每个治疗组180名受试者将提供至少80%的能力，以检测1L104EA29YIg方案满足2个共同初级终末点，其总第I类误差控制在0.05显著性水平(Dunnett调整)。包括标准靶群体1)受试者是已故供体肾移植的第1次受体2)供体和/或供体肾满足关于器官捐赠的下列扩大标准中的至少一个a)供体年龄^60岁或b)供体年龄50-59岁以及下列之一(i)脑血管意外(CVA)+高血压+SCr〉1.5mg/dL或(ii)CVA+高血压或(iii)CVA+SCr>1.5mg/dL或(iv)高血压+SCr>1.5mg/dL或c)CIT》24小时，供体年龄>10岁或d)心源性死亡的供体(无心跳供体)3)男性和女性，年龄18或更大，包含性的4)WOCBP必须使用适当的避孕方法以以这样的方式避免整个研究期间以及研究后最高达8周怀孕，从而使得怀孕的危险最小化。WOCBP包括已经历月经初潮并且未经历成功的外科手术绝育(子宫切除术、两侧输卵管结扎或双侧卵巢切除术)或不是绝经后(定义为闭经^连续12个月；或使用激素代替疗法的女性，其具有文件证明的血清促卵泡激素水平〉35mlU/mL)的任何女性。甚至使用经口、植入或可注射的避孕激素或机械产品例如宫内器具或障碍方法(隔膜、避孕套、杀精子剂)以预防怀孕或实行节欲或其中配偶不育(例如输精管切除术)的女性都应当视为有分娩的可能性。WOCBP必须具有在研究药物开始前72小时内的阴性血清妊娠测试(最小灵敏度25IU/L或人绒毛膜促性腺激素[HCG]的等价单位)。5)男性整个研究期间以及最后输注后最高达8周必须使用足够的避孕方法，从而使得其配偶的怀孕危险降到最低。排除标准1)不愿意或不能使用可接受的方法以避免整个研究时间段以及最后输注后最高达8周怀孕的WOCBP。2)怀孕或进行母乳喂养的女性3)在入选时或在研究药物施用前妊娠测试阳性的女性4)对于整个研究时间段以及研究药物最后输注后最高达8周不愿意或不能使用适当的避孕方法的男性5)供体年龄<10岁6)具有下列潜在肾病的受试者a)局灶性节段性肾小球硬化症(活组织检查证明的)b)I或II型膜性增生性肾小球肾炎c)溶血性尿毒性综合征/血栓形成性血小板减少性紫癜综合征7)目前PRA^30%的受试者8)T细胞淋巴细胞毒性交叉配型阳性的受试者9)具有任何先前实体器官移植(包括肾)的受试者10)接受同时发生的实体器官(心脏、肝、胰)或细胞(胰岛、骨髓、干细胞)移植的受试者11)接受来自扩大标准供体的成对肾的受试者(双肾移植)12)丙型肝炎抗体阳性或关于丙型肝炎的聚合酶链反应(PCR)阳性的受试者13)乙型肝炎表面抗原阳性或关于乙型肝炎的PCR阳性的受试者14)已知人免疫缺陷病毒(HIV)感染的受试者15)在前3年内具有需要治疗的活动性结核(TB)的受试者或先前需要关于TB的三重(或更多)组合治疗的任何受试者。已知纯化的蛋白衍生物(PPD)阳性的受试者对于研究将不是合格的，除非他们完成关于潜伏TB的治疗并且在入选时具有阴性胸部X射线检查。在最后12个月内进行的PPD测试是可接受的，只要存在结果的文件证明。具有先前的阴性结果、在最后12个月中没有PPD的受试者可以入选，如果他们在入选时还具有阴性胸部X射线斥企查，没有指示TB的症状，没有已知的TB接触，目前没有居住在TB地方性流行区域、近期没有去所述区域旅游、或先前不是从所述区域移来的话。210mm硬结的PPD应答或在非卡介苗(非BCG)免疫受试者中>1或在BCG免疫受试者中〉2的Heaf得分应当视为阳性测试。根据16)具有活性感^染或通常将排除移植的其他禁k症的受试者'17)生命期望受疾病状态或其他潜在医学状况严格限制的受试者18)在最后5年内具有癌症史(通过局部切除术治愈的除非黑素瘤皮肤细胞癌外的)的受试者19)在过去5年内具有物质滥用(药物或酒精)史，或与适当的研究随访不相容的精神病症的受试者20)具有活性消化性溃疡病、慢性腹泻或胃肠吸收不良的受试者21)地方实验室值为通用毒性标准(CTC)II级或更大的受试者不能参与该研究。然而，对于CTCII级是例外的某些特定实验室参数将是允许的。注意下列允许血液学血红蛋白可以低于CTCII级(但不低于8g/dL)。血小板可以低于CTCII级，j旦不低于80,000/mm3(80x109/L)。总白细月包(WBC)计数可以低于CTCII级，但不低于3000/mm3(3x109/L)。粒细胞和淋巴细胞计数可以是任何值。化学SCr和血液尿素氮(BUN)值可以是任何值。血糖可以是任何值。尿分析尿分析结果可以是任何值22)所有40岁或更大的女性，和具有乳癌史的一级亲属或具有乳癌的其他危险因素的任何年龄的女性必须具有筛选乳房X线照片、或提供在入选6个月内进行的筛选乳房X线照片结果。具有怀疑恶性肿瘤的乳房X线照片以及在另外的临床、实验室或其他诊断评估后不能合理地排除恶性肺瘤可能性的受试者将被排除。如果筛选乳房X线照片没有在入选6个月内进行，但受试者由地方标准视为合适的移植候选者，那么基线乳房X线照片可以在移植后4周内获得23)具有静脉内进入困难或可能将排除测量的GFR共同初级终末点评估的其他原因的受试者，或不太可能(例如由于预先存在的凝固问题)或不愿意经历方案指定的12个月同种异体移植物活组织检查的受试者24)具有对静脉内注射碘化X射线造影剂的真实变态反应史的受试者25)在第1天就诊前30天内已使用任何试验药的受试者26)先前用L104EA29YIg治疗的受试者27)囚犯或由于精神病或身体(例如传染病)疾病治疗被强制拘留(非自愿的禁闭)的受试者必须不能入选这项研究。L104EA29YIg的施用第1天定义为移植当天(移植后第0天)。第1天给药的输注应当在外科医生已进行最初手术中评估，且已得出结论为受试者仍然是移植候选者并且将进行移植后，以及在开始移植血管吻合前开始。输注剂量将基于在研究第l天时的受试者实际体重，并且在研究过程期间将不修改，除非体重变化±10%。研究药物应当以相对恒定的速率经过30分钟施用于受试者。第1天和第5天(移植后第4天)的剂量应当隔开大约96小时(±6小时)施用。后续就诊和输注窗口在下文提供。对于进行透析的受试者，L104EA29YIg的输注以及受试者重量的测定应当在透析治疗后发生。L104EA29YIgMI方案随机化至MI方案的受试者将接受第1和5天时，以及随后2个月每隔一周(第2、4、6、8、10和12周)，以及随后每4周到第6个月(第16、20和24周)的静脉内L104EA29YIg(10mg/kg)。6个月后，MI治疗组中的受试者将接受每4周的L104EA29YIg5mg/kg的维持剂量，直至36个月时试验完成。L104EA29YIgLI方案随机化至LI方案的受试者将接受第1和5天时，以及随后2周每隔一周(第2和4周)，以及2个月每4周(第8和12周)的静脉内L104EA29YIg(10mg/kg)。3个月后，LI治疗组中的受试者将接受每4周的L104EA29YIg5mg/kg的维持剂量，直至36个月时试验完成。LI和MI组之间的不知情将借助于LI治疗组中的2次安慰剂输注来保持。因此，随机化至LI方案的受试者将在第6和10周时施用安慰剂(溶于注射用水的葡萄糖5%[D5W])输注。环孢菌素(CsA)的施用CsA的日剂量应当根据与时刻和膳食有关的一致时间表以2次分开的剂次施用。在研究就诊日时，受试者必须停止早晨CsA剂次直至获得谷CsA血液水平后。在研究就诊日时，当受试者将具有标准化的BP监控和/或测量的GFR评估时，这些测量将在CsA给药前完成。最初日剂量应为7±3mg/kg(即，4-10mg/kg)。后续剂量应当进行调整以维持预定范围的谷血清浓度第1个月靶水平l50-300ng/mL第l个月后耙水平100-250ng/mL。使用给药后2小时的血浆浓度(C2)监控CsA水平在这项研究中不使用。尽管通过C2监控管理Neoral的近期国际一致声明支持C2监控的使用，但它也清楚地声明缺乏关于对肾功能的长期作用、CAN的发生率、以及与C2监控有关的一般安全性特征的数据。24此外，不是所有受试者都适合于C2监控，包括患有糖尿病、緩慢胃排空的受试者，或者使用改变CsA清除率的伴随药物的受试者。此外，低C2水平可以由真实的低吸收(其中CsA剂量应当增加)或由慢吸收(其中存在延迟的最大血浆浓度并且剂量增加可能产生毒性)引起。最后，这种实践并不普遍，并且预期证实这种实践超过目前方案的范围。关于另外的处方信息，参见包装插页。CsA应当在所有受试者中第7天开始。对于其中研究者认为开始CsA根本不是为了受试者的最佳利益(例如，由于肾功能受损)，并且相反选择使用非研究药物(例如西罗莫司)的受试者，这种行为将被视为中断研究药物。对于具有立即同种异体移植物功能的受试者对于随机化至使用CsA治疗的受试者，CsA的第1剂应当一有适当的同种异体移植物功能的证据就施用，但直到那时才施用。适当的同种异体移植物功能定义为与最初的移植后值比较SCr减少至少lmg/dL,或在移植后12小时(或更少)的时间段内尿排出量2250mL。对于具有受损的肾同种异体移植物功能和预期DGF的受试者具有手术后受损的同种异体移植物功能和预期DGF的受试者对于接受多克隆抗淋巴细胞制剂合格-但不是必需的。无论受试者接受多克隆淋巴细胞制剂与否，当存在同种异体移植物功能恢复的证据(如上文限定)或第7天时应当开始CsA。皮质类固醇这项研究中的所有受试者将每天用皮质类固醇治疗。类固醇维持-逐渐减少。移植日(第1天)在到达手术室(OR)后静脉内500mg曱基强的松龙(作为琥珀酸钠)第2天甲基强的松龙(作为琥珀酸钠)250mg静脉内第3天强的松(或强的松龙)100mg经口(口月良)第4天到第14天(即，第2周结束时)强的松(或强的松龙)逐渐减少至20-30mg每天1次口服第15天到第6个月强的松(或强的松龙)逐渐减少至不低于2.5mg每天1;欠口月良受试者必须保持在至少2.5mg每天1次口服到第3年。前2个剂量(研究第1天，移植日和研究第2天，手术后第1天)将静脉内施用。其余剂量将口服施用。然而，当经口给药不可能时静脉内给药相等剂量的曱基强的松龙有时也是允许的。关于静脉内而不是口服给药的此类原因是并发性疾病、手术后肠梗阻、或由研究者自行决定的其他原因。如果甲基强的松龙不可用，那么允许使用与甲基强的松龙剂量等价的另一种静脉内皮质类固醇试剂。霉酚酸酯给药这项研究中的所有受试者将用MMF治疗。每天的MMF应当根据与时刻和膳食有关的一致时间表以2次分开的剂次施用。剂量应当是每天2g;然而，在非裔美国人中，可以由研究者自行决定施用每天3g。25MMF应当口服施用。由于并发性疾病、手术后肠梗阻、或由研究者自行决定的其他原因，如果需要，静脉内给药是允许的。第1次剂量应当在手术前施用。后续剂量应当一旦受试者能够耐受经口药物就口服施用。剂量和时间表可以基于实验室值(例如减少的WBCs)和受试者可容许性(参见下文)来调整。关于完整的处方信息，参见包装插页。对于发展恶心、腹泻或其他MMF相关胃肠不利作用的受试者(例如症状充分评估并且—见为不具有除对MMF不耐受以外的病因)，MMF剂量可以减少至最大耐受剂量。对于发展嗜中性白细胞减少症(绝对嗜中性粒细胞计数〈1.3xl03/fL)的受试者，使用MMF的给药应当中断或按照包装插页减少剂量。巴利昔单抗给药这项研究中的所有受试者将用巴利昔单抗的推荐给药方案治疗。巴利昔单抗应当只通过外周或中央静脉施用。重构的巴利昔单抗(溶于5mL中的20mg)应当用生理盐水或葡萄糖5%稀释至50mL的体积并且作为静脉内输注在20-30分钟内施用。第1次20mg剂量应当在第1天时(移植当天；手术后第0天)施用。对于随机化至L104EA29YIg的受试者，这种第1次巴利昔单抗输注应当在L104EA29YIg输注完成后尽快发生。第2次20mg剂量应当在第5天时(手术后第4天)给予。第2次巴利昔单抗剂量不应施用于受试者，如果他们已接受或预期接受淋巴细胞消耗疗法的话。关于另外的信息，参见包装插页。用于受损的肾同种异体移植物功能和预期DGF的多克隆抗淋巴细胞制剂多克隆抗淋巴细胞制剂(Thymoglobulin或ATGAM)的使用对于随机化至CsA、移植后经历受损的肾同种异体移植物功能和预期DGF的患者是允许的-但不是必需的。在其中存在市场授权的区域内，并且如果它们标明用于治疗肾移植中的急性排斥，则允许使用其他多克隆抗淋巴细胞制剂或多克隆抗胸腺细胞球蛋白。值得注意的是，0KT3不用于这个目的，但可以用于治疗Banff97IIb级或更大的急性排斥或抗类固醇急性排斥。Campath1-H(阿仑单抗(alemtuzumab))的使用在这种方案中是不允许的，因为它没有标明用于在肾移植中使用。这些试剂以这种能力广泛用于提供免疫抑制，直至移植物功能允许施用CsA。因此，在这种临床情况中可以由研究者自行决定在满足>1个下列标准的受试者中使用多克隆抗淋巴细胞制剂，所述标准在存在移植物动脉和静脉未闭，并且通过声波图没有'If积水的证据的情况下观察到a)尿排出量〈250cc/12小时b)SCr从基线值经过移植后的前24-72小时没有显著改善(<lmg/dL)c)透析治疗。用于受损的肾同种异体移植物功能和预期DGF的这些试剂的使用在L104EA29YIg治疗的受试者中是不允许的。新诺明/曱氧千啶给药参与这项研究、没有禁忌症的所有受试者都应当接受新诺明/曱氧千咬预防以防止泌尿道和卡氏月市孢子虫(尸"ewmoqy"^c"n'm7)感染。给药和施用将由与包装插页一致的肾功能水平决定。具有针对磺胺药或曱氧节啶的禁忌症或不耐受的受试者可以由研究者自行决定接受使用吸入的戊烷脒的预防治疗。关于完整的处方信息，参见包装插页。瓦更昔洛韦/更昔洛韦，阿昔洛韦/伐昔洛韦给药没有针对瓦更昔洛韦、更昔洛韦、阿昔洛韦和伐昔洛韦的禁忌症的所有受体都应当用这些药物预防性治疗以防止由于CMV和单纯疱渗(//erp"w'wp/ex)的感染。下列是关于预防性治疗的给药和持续时间的指南用于移植后的前10天或在T细胞消耗疗法过程中的预防所有移植受试者都将根据关于手术后10天的方案接受瓦更昔洛韦或更昔洛韦。如果使用关于诱导治疗的T细胞消耗疗法或关于急性排斥的疗法治疗，那么受试者对于T细胞消耗疗法的持续时间将接受瓦更昔洛韦或更昔洛韦。如果受试者在10天前出院，那么将如下文所述基于CMV免疫状态开始经口瓦更昔洛韦、更昔洛韦、伐昔洛韦或阿昔洛韦。用于预防的瓦更昔洛韦肌酸酐清除率^60mL/分钟，剂量900mg每日；肌酸酐清除率40-59mL/分钟，剂量450mg每日；肌酸酐清除率〈40mL/分钟，剂量450mg每隔一曰。用于预防的更昔洛韦如果受试者不能耐受经口药物，或者瓦更昔洛韦不能用于使用，那么更昔洛韦悬浮液或胶嚢可以代替。肌酸酐清除率S70mL/分钟，剂量lg每天3次；肌酸酐清除率50-69mL/分钟，剂量500mg每天3次；肌酸酐清除率25-49mL/分钟，剂量500mg每天2次；肌酸酐清除率10-24mL/分钟，剂量500mg每日；肌酸酐清除率〈10mL/分钟，剂量500mg,血液透析后3次/周。如果需要静脉内更昔洛韦，那么参见包装插页用于给药。移植后IO天后到至少3个月的预防CMV抗体血清反应阳性供体对CMV抗体血清反应阴性受体上文列出的瓦更昔洛韦或更昔洛韦方案持续>3个月。CMV抗体血清反应阳性或血清反应阴性供体对CMV抗体血清反应阳性受体经口阿昔洛韦>移植后3个月血清肌酸肝250mL/分钟，剂量800mg经口每天4次；血清肌酸酐25-49mL/分钟，剂量800mg经口每天3次；血清肌酸酐11-24mL/分钟，剂量800mg经口每天2次；血清肌酸酐〈10mL/分钟，剂量800mg经口每日；对于血液透析，血液透析后剂量800mg每日。在出院时为了受试者方便伐昔洛韦可以代替阿昔洛韦。血清肌酸酐^50mL/分钟，剂量500mg经口每天2次；血清肌酸酐25-49mL/分钟，剂量500mg经口每日；血清肌酸酐11-24mL/分钟，剂量500mg经口每日；血清肌酸酐<10mL/分钟，剂量250mg经口每日；对于血液透析，血液透析后剂量250mg每日。CMV抗体血清反应阴性供体对CMV抗体血清反应阴性受体经口阿昔洛韦方案只对于疱渗预防需要持续^移植后3个月。阿昔洛韦400mg口服每天2次，或在出院时为了患者方便伐昔洛韦可以代替阿昔洛韦。关于完整的处方信息，参考包装插页。仅输注就诊操作a)对于随机化至L104EA29YIg治疗的受试者在L104EA29YIg施用前要求阴性妊娠测试。剂量基于最近的先前研究就诊时的受试者重量。应当监控受试者的生命体征(输注前和后)，并且应当评估AEs。在某些就诊时可能需要PK样品。b)对于随机化至CsA治疗的受试者受试者应当只对于AEs评估进行联系。这种就诊可以是电话联系，并且应当在关于指定就诊开处的就诊窗口内发生。就诊窗口a)对于随机化至L104EA29YIg治疗的受试者第1天和第5天的剂量应当隔开大约96小时(±6小时)施用。为了促进仅输注就诊的时间安排，下列窗口对于后续剂量是允许的就诊第2周，就诊窗口靶日期±2天；就诊第4周-第6个月就诊窗口靶日期土3天，就诊第7个月-第36个月，就诊窗口靶日期士5天；就诊随访8周，就诊窗口耙日期士5天。b)对于随机化至CsA治疗的受试者第5天后，受试者只需要参加第2、4、8和12周的临床就诊；随后每3个月时间间隔的就诊。在非3个月时间间隔的就诊时(即，第6、10、16、20、28、32周等)，将进行电话联系以收集AE信息。临床和联系就诊应当在与上文指定的关于随机化至L104EA29YIg的受试者相同的就诊窗口发生。关于第3和12个月GFR评估的靶日期是第U周士M天和第52周±14天。在某些情况下，且使用先前批准的医学监控，在第3个月和12个月时测量的GFR评估可以分别到第6个月和15个月进^f亍。可以4吏测量作的存在或由于技术原因需要重复评估。、5''''关于第12个月的同种异体移植物活组织检查的靶日期是第52周±14天。类似地，在某些情况下且使用先前批准的医学监控，同种异体移植物活组织检查可以到第15个月获得。可以使同种异体移植物活组织检查延长有正当理由的此类原因包括关于抗凝作用的临时需要。实施例5本领域技术人员可以利用上文实施例4中描述的施用时间表以设计包括不同研究群体、供体标准和/或目的的研究。例如，这项移植研究将评估接受来自活供体或已故供体、预期冷缺血时间<24小时的肾移植的受试者。各种免疫学危险水平上的受试者将是合格的。然而，该研究将排除最大的免疫学危险的受试者。受试者将如上文实施例4中所述随^M匕至MI、LI或CsA组。初级目的评估L104EA29YIg相对于CsA对12个月的受试者和移才直物存活复合的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时测量的GFR〈60mL/分钟/1.73n^或从第3个月到第12个月测量的GFR减少上10mL/分钟/1.73m2复合的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对12个月的急性排斥发生率的作用。次级目的评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时测量的GFR的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时的活组织冲全查证明的CAN的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时测量的GFR<60mL/分钟/1.731112或从第3个月到第12个月测量的GFR减少>10mL/分钟/1.73n^的初级复合终末点中个别组分的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对12、24和36个月的死亡、移植物丟失和急性排斥的三重复合终末点的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对在24个月时测量的GFR<60mL/分钟/1.73m2的受试者比例的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对在3和24个月时测量的GFR,以及从基线(3个月)到12和到24个月的变化的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对在12和24个月时测量的GFR<30mL/分钟/1.73m2的受试者比例的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对在6、12、24和36个月时计算的GFR,以及从6个月到12、24和36个月的变化的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对12、24和36个月的PTDM的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时高血压测量的作用，包括SBP和DBP、高血压和受控制的高血压的发生率和流行率、以及治疗方案的强度。评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时血脂异常测量的作用，包括血清总、非HDL、低密度脂蛋白(LDL)和HDL胆固醇和TGs,血脂异常和受控制的血脂异常的发生率和流行率，以及治疗方案的强度。评估L104EA29YIg相对于CsA对24和36个月的受试者和移植物存活的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对在24和36个月时计算的GFR<60mL/分钟/1.73m2的受试者比例的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对6、12、24和36个月时急性排斥测量的作用，包括急性排斥的发生率和严重性、用于受损的肾功能和预期移植物功能延迟(DGF)的多克隆抗淋巴细胞制剂的使用、用于治疗急性排斥的淋巴细胞消耗疗法的最初使用、抗类固醇急性排斥的发生率、急性排斥后完全恢复(SCr回到基线)的发生率、亚临床性排斥的发生率、以及不管组织学发现所有治疗的急性排斥发作的发生率，以及急性排斥发作的时间。评估L104EA29YIg相对于CsA对QoL的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA的总体安全性。评估L104EA29YIg相对于CsA对从3个月到12、24和36个月计算的GFR的斜率和截距的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对在12个月时计算的GFR〈60mL/分钟/1.731112的受试者，或从第3个月到第12个月计算的GFR减少至少10mL/分钟/1.731112的受试者比例的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对DGF发生率的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对在12和24个月时如通过测量的GFR评估，具有1期到5期慢性肾脏疾病的受试者比例的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对在36个月时如通过计算的GFR评估，具有1期到5期慢性肾脏疾病的受试者比例的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对12、24和36个月的复合心血管疾病终末点(判定的心血管性死亡、心肌梗死、缺血性发作、和血管再通[外科手术或经皮]操作)的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对12、24和36个月的复合心肾疾病终末点(死亡、移植物丢失、非致命性心肌梗死和中风)的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对在12、24和36个月时Framingham危险评分的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对研究药物中断发生率的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对抗供体人白细胞抗原(HLA)抗体的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对血管紧张素II1型(ATI)-受体抗体的作用。评估L104EA29YIg相对于CsA对活组织检查样品中C4d阳性的作用。研究设计该研究的持续时间是3年，随后是关于安全性评估的8周随访期。这是随机化、半盲、活性对照、平行组研究。所有受试者都将接受来自预期CIT<24小时的活供体或已故供体的肾移植。大约660名受试者将以1:1:1的比率随^/L化至^f吏用L104EA29YIg(MI方案)、L104EA29YIg(LI方案)或CsA的治疗。所有受试者还将接受使用巴利昔单抗的诱导，以及MMF和皮质类固醇的背景维持免疫抑制方案。随机化至MI方案的受试者将接受第1和5天时，随后每2周到第3个月(第2、4、6、8、10和U周)，以及随后每4周到第6个月(第16、20和24周)的静脉内L104EA29YIg(10mg/kg)。6个月后，MI治疗组中的受试者将接受每4周施用的L104EA29YIg5mg/kg的维持剂量，直至36个月时试验完成。随机化至LI方案的受试者将接受第1和5天时，以及随后每2周到第1个月(第2和4周)，以及每4周到第3个月(第8和12周)的静脉内L104EA29YIg(10mg/kg)。3个月后，LI治疗组中的受试者将接受每4周施用的L104EA29YIg5mg/kg的维持剂量，直至36个月时试验完成。LI和MI组之间的不知情借助于在第6和IO周时LI治疗组中的安慰剂输注来保持。随机化至CsA的受试者将接受每天2次的剂量，其设计为达到与目前医疗实践一致的指定谷血清浓度范围。L104EA29YIg的安全性和功效将在1、2和3年时评估。独立的DSMB将在正在进行的基础上再检查来自研究的数据，并在必要时作出关于改变试验进行的建议。研究群体研究群体包括来自预期CIT<24小时的活供体或已故供体的肾同种异体移植物的受体。一般地，免疫学标准在受试者选择中将不起主要作用。各种免疫学危险水平上的受试者是合格的。然而，该研究将排除最大的免疫学危险的受试者(交叉配型阳性、目前系列反应性抗体[PRA]250。/。，或目前PRA》30%的先前移植的那些)。这些受试者可能需要减少其抗体负荷的治疗，例如血浆去除术，这超出这种方案的范围。受试者将在全球大约100个地点入选。包括标准靶群体1)受试者是预期CIT<24小时的活供体或已故供体肾移植的受体2)男性和女性，年龄18或更大，包含性的3)WOCBP必须使用适当的避孕方法以以这样的方式避免整个研究期间以及研究后最高达8周怀孕，从而使得怀孕的危险最小化。WOCBP包括已经历月经初潮并且未经历成功的外科手术绝育(子宫切除术、两侧输卵管结扎或双侧卵巢切除术)或不是绝经后(定义为闭经连续12个月；或使用激素代替疗法[HRT]的女性，其具有文件证明的血清促卵泡激素[FSH]水平〉35mlU/mL)的任何女性。甚至使用经口、植入或可注射的避孕激素或机械产品例如宫内器具或障碍方法(隔膜、避孕套、杀精子剂)以预防怀孕或实行节欲或其中配偶不育(例如输精管切除术)的女性都应当视为有分娩的可能性。WOCBP必须具有在研究药物开始前72小时内的阴性血清妊娠测试(最小灵敏度25IU/L或人绒毛膜促性腺激素[HCG]的等价单位)。排除标准1)不愿意或不能使用可接受的方法以避免整个研究时间段以及最后输注后最高达8周怀孕的WOCBP。2)怀孕或进行母乳喂养的女性。3)在入选时或在研究药物施用前妊娠测试阳性的女性。4)遗传上相同的供体受体对(即单卵双生)。5)供体年龄<10岁。6)接受和扩大标准的供体器官的受试者，其如下定义a)供体年龄》60岁或b)供体年龄50-59岁以及下列之一(i)脑血管意外(CVA)+高血压+SCr〉1.5mg/dL或(ii)CVA+高血压或(iii)CVA+SCr>1.5mg/dL或(iv)高血压+SCr〉1.5mg/dL或c)预期CIT224小时或d)心源性死亡的供体(无心跳供体)。7)具有下列潜在肾病的受试者a)原发性局灶性节段性肾小球硬化症b)I或II型膜性增生性肾小球肾炎c)溶血性尿毒性综合征(HUS)/血栓形成性血小板减少性紫瘋综合征。如果受试者具有病因不明的ESRD和/或没有组织学证实的诊断，那么受试者将入选该研究，只要如研究者判断的，没有与原发性局灶性节段性肾小球硬化症、I或II型膜性增生性肾小球肾炎或HUS的临床诊断一致的临床病征或症状。8)经历初次(第1次)移植目前PRA^50y。的受试者，或经历再次移植PRAs30%的受试者。9)由于急性排斥先前移植物丢失的受试者。10)T细胞淋巴细胞毒性交叉配型阳性的受试者。11)具有先前非肾实体器官移植(在其他研究标准满足前经历肾再次移植的受试者是合格的)，或经历多器官移植(例如肾-胰)的受试者，或由研究者认为在接下来的3年内可能具有第2次实体器官或细胞移植(例如胰或胰岛移植)的受试者。12)接受同时发生的实体器官(心脏、肝、胰)或细胞(胰岛、骨髓、干细胞)移植的受试者。13)接受成对肾的受试者(双或全肾移植)。14)已知丙型肝炎抗体阳性或关于丙型肝炎的聚合酶链反应(PCR)阳性的受试者。15)已知乙型肝炎表面抗原阳性或关于乙型肝炎的PCR阳性的受试者。16)已知人免疫缺陷病毒(HIV)感染的受试者。17)在前3年内具有需要治疗的活动性结核(TB)的受试者或先前需要关于TB的三重(或更多)组合治疗的任何受试者。已知純化的蛋白衍生物(PPD)阳性的受试者对于研究将是不合格的，除非他们完成关于潜伏TB的治疗并且在入选时具有阴性胸部X射线检查。在最后12个月内进行的PPD测试是可接受的，只要存在结果的文件证明。具有先前的阴性结果、在最后12个月中没有PPD的受试者可以入选，如果他们在入选时还具有阴性胸部X射线检查，没有TB指示的症状，没有已知的TB接触，目前没有居住在TB地方性流行区域、近期没有去所述区域旅游、或先前不是从所述区域移来的话。mm硬结的PPD应答或在非卡介苗(非BCG)免疫受试者中〉1或在BCG免疫受试者中>2的Heaf得分应当视为阳性测试。根据公布的指南和i染或通常将排除移植的其他J忌、症的受试;T。、19)生命期望受疾病状态或其他潜在医学状况严格限制的受试者。20)在最后5年内具有癌症史(通过局部切除术治愈的除非黑素瘤皮肤细胞癌外的)的受试者。21)在过去5年内具有物质滥用(药物或酒精)史，或与适当的研究随访不相容的精神病症的受试者。22)具有活性消化性溃疡病、慢性腹泻或胃肠吸收不良的受试者。关于L104EA29YIgMI和LI以及CsA方案的施用和就诊窗口，包括所需的列表，将如上文和实施例4中描述的。如对于本发明所属领域的技术人员将显而易见的，在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，本发明可以以除上文具体公开的那些以外的形式具体化。因此上文描述的本发明的具体实施方案视为说明性而不是限制性的。本发明的范围如附加权利要求中阐述的而不是限制于前述说明书中包含的实施例。权利要求1.一种用于治疗与移植物移植有关的免疫病症的方法，其包括给受试者施用有效剂量的CTLA4突变型分子，所述CTLA4突变型分子包括如SEQIDNO8中所示、起始于第26位的丙氨酸或第27位的甲硫氨酸且终止于第150位的天冬氨酸的CTLA4细胞外结构域或其部分，其中在所述细胞外结构域或其部分中，第55位的丙氨酸由酪氨酸置换，并且第130位的亮氨酸由谷氨酸置换，并且其中所述施用方案包括早期方案，其中所述早期方案可以是移植后的前3-6个月且涉及最初比每月1次更频繁的施用。2.—种用于治疗与移植物移植有关的免疫病症的方法，其包括给受试者施用有效剂量的CTLA4突变型分子，所述CTLA4突变型分子包括(a)SEQIDNO:4的起始于第27位的曱硫氨酸且终止于第150位的天冬氨酸的氨基酸序列，或(b)SEQIDNO:4的起始于第26位的丙氨酸且终止于第150位的天冬氨酸的氨基酸序列，并且其中所述CTLA4突变型分子施用方案包括早期方案，其中所述早期方案可以是移植后的前3-6个月且涉及最初比每月1次更频繁的施用。3.根据权利要求1或2的方法，其中所述早期施用方案包括在第1天、第2周就诊、第4周就诊、第8周就诊和第12周就诊时施用CTLA4突变型分子。4.根据权利要求3的方法，其中所述早期施用方案包括在第5天时施用CTLA4突变型分子。5.根据权利要求4的方法，其中所述早期施用方案包括在第6周就诊、第10周就诊、第4个月就诊、第5个月就诊和第6个月就诊时施用CTLA4突变型分子。6.根据权利要求3、4或5的方法，其中所述施用方案进一步包括维持期方案，其中所述维持期方案在所述早期方案结束后开始并且其中CTLA4突变型分子的施用不比每月1次更频繁。7.根据权利要求3、4或5的方法，其中在所述早期过程中所述有效剂量的CTLA4突变型分子是约10mg/kg所述受试者重量。8.根据权利要求6的方法，其中在所述维持期过程中所述有效剂量的CTLA4突变型分子是约5mg/kg重量。9.根据权利要求1或2的方法，其中所述有效剂量的CTLA4突变型分子是约10mg/kg所述受试者重量，其施用方案包括在第1、15、29、57、85天时施用，以及其后每月1次5gm/kg。10.根据权利要求1或2的方法，其中所述有效剂量的CTLA4突变型分子是约10mg/kg所述受试者重量，其施用方案包括在第1、5、15、29、57、85天时施用，以及其后每月1次5mg/kg。11.根据权利要求1或2的方法，其中所述有效剂量的CTLA4突变型分子是约10mg/kg所述受试者重量，其施用方案包括在第1、5、15、29、43、57、71、85、113、141、169天时施用，以及其后每月1次5mg/kg。12.根据权利要求1或2的方法，其中与移植物移植有关的所述免疫病症包括实体器官、组织和/或细胞移植排斥。13.根据权利要求12的方法，其中与移植物移植有关的所述免疫病症包括肾移植排斥。14.根据权利要求1或2的方法，其中所述CTLA4突变型分子进一步包括改变所述可溶性CTLA4突变型分子的溶解性、亲和力和/或效价的氨基酸序列。15.根据权利要求14的方法，其中改变溶解性、亲和力和/或效价的所述氨基酸序列包括免疫球蛋白部分。16.根据权利要求15的方法，其中所述免疫球蛋白部分是免疫球蛋白恒定区或其部分。17.根据权利要求16的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区或其部分被突变以减少效应子功能。18.根据权利要求16的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区或其部分包括人或猴免疫球蛋白分子的铰链、CH2和CH3区。19.根据权利要求17的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区或其部分包括人或猴免疫球蛋白分子的铰链、CH2和CH3区。20.根据权利要求15的方法，其中所述免疫球蛋白包括如SEQIDNO:4中所示、起始于第+152位的谷氨酸且终止于第+383位的赖氨酸的氨基酸序列。21.根据权利要求1或2的方法，其进一步包括接头氨基酸残基和免疫球蛋白，其中所述接头氨基酸残基位于终止于第+150位的天冬氨酸的所述氨基酸序列和所述免疫球蛋白之间。22.根据权利要求1或2的方法，其中所述CTLA4突变型分子与选自下列的至少一种试剂共施用巴利昔单抗、达克珠单抗、抗胸腺细胞球蛋白、钙依赖磷酸酶抑制剂、环孢菌素、他克莫司、霉酚酸酯、霉酚酸、雷帕霉素、咪唑巯噤呤、莫罗单抗、利妥昔单抗、西罗莫司、依维莫司、FTY720、FK778、Jak-3、centican、皮质类固醇、倍他米松、布地奈德、氢化可的松、可的松、地塞米松、hydrocritisone、曱基强的松龙、强的松龙、强的松和去炎松。23.根据权利要求1或2的方法，其中选自CAN、高脂血症、高血压、糖尿病、多毛症、壳头、牙龈增生、震颤、神经毒性和骨丢失的结果的发展和/或进展减少。24.根据权利要求1或2的方法，其进一步包括约3pg/ml-约30pg/ml靶谷血清浓度的所述CTLA4突变型分子。25.—种用于治疗与移植物移植有关的免疫病症的方法，其包括给受试者施用有效剂量的CTLA4突变型分子，所述CTLA4突变型分子包括(a)图7的起始于第27位的甲硫氨酸且终止于第+357位的赖氨酸或第+356的甘氨酸的氨基酸序列，或(b)图7的起始于第26位的丙氨酸且终止于第+357位的赖氨酸或第+356的甘氨酸的氨基酸序列，并且其中所述CTLA4突变型分子施用方案包括早期方案，其中所述早期方案可以是移植后的前3-6个月且涉及最初比每月1次更频繁的施用。26.根据权利要求1、2或25的方法，其中所述CTLA4突变型分子与包括巴利昔单抗和MMF的试剂伴随或顺次地共施用。27.根据权利要求1、2或25的方法，其中所述CTLA4突变型分子与包括达克珠单抗和西罗莫司的试剂伴随或顺次地共施用。全文摘要本发明提供了可溶性CTLA4突变型分子在与移植物移植有关的免疫病症治疗中的用途，所述可溶性CTLA4突变型分子与CD80和/或CD86抗原结合的抗体亲抗原性大于野生型CTLA4或非突变型CTLA4Ig。文档编号A61K38/17GK101198347SQ200680019897公开日2008年6月11日申请日期2006年4月5日优先权日2005年4月6日发明者D·哈格尔蒂,J·鲁斯纳克申请人:布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司