专利名称：6-硫鸟苷三磷酸的类似化合物的改进、它们在医药领域中的用途及其制备方法
技术领域：
本发明涉及6-硫鸟苷三磷酸的类似化合物、它们在医药领域中的用途及其制备方法。
特别地，本发明涉及6-硫鸟苷三磷酸的类似化合物的治疗用途，例如作为用于预防器官移植物的排斥与移植后肾病的免疫抑制剂和用于治疗涉及免疫系统的病理状况，例如，举例来说，炎性慢性肠病，如局限性回肠炎、溃疡性直肠结肠炎、不确定性结肠炎或自身免疫性肠病、活动性慢性肝炎、类风湿性关节炎、斯蒂尔(Still)病、系统性红斑狼疮、获得性溶血性贫血、自发性血小板减少、结节性多关节炎、脉管炎、多脉管炎、多肌炎、重症肌无力、结节病、脂样肾炎、多发性硬化症、皮肌炎、寻常型天疱疮、原发性胆汁性肝硬变、原发性硬化性胆管炎、再发性多形红斑、慢性光化性皮炎、坏疽性皮下组织、红糠疹、韦格纳(Wegener)肉芽肿病、皮肤脉管炎、特应性皮炎、牛皮癣、多脓疱性类天疱疮以及通常用于除放射治疗、皮质类固醇与其它细胞毒性剂之外的免疫抑制性治疗。后者也包含器官移植(例如肾脏、心脏、肺、胰腺与肝脏移植)后的免疫抑制治疗。
背景技术：
参与炎性免疫反应的细胞能够在炎性位点存活，然而在该反应结束后，大多数细胞必须“死亡”以保持生物的内环境稳定(Boise，1995)。由于未受控制的淋巴细胞增殖可以引起炎性慢性病理状况的发展，免疫系统通过称为凋亡(程序性细胞死亡)的过程控制活化的淋巴细胞的衰竭。由于固有层细胞的凋亡抗性可以在肠水平上导致慢性炎症反应，所以这可以设想粘膜免疫系统的特殊重要性(Tiede，2003)。
粘膜免疫系统的激活在局限性回肠炎的发病机制中起关键作用。特别是，由T淋巴细胞与巨噬细胞产生的促炎性细胞因子，尤其是白介素-6(IL-6)与白介素-12(IL-12)，可以导致T淋巴细胞对抗凋亡，这依次引起淋巴细胞的肠蓄积并建立长期的疾病(Tiede，2003)。
淋巴细胞激活以两个信号开始抗原与TCR(T细胞受体)的特异性结合和以跨膜蛋白为代表的第二共刺激信号，如CD28(Maltzman，2003)。已显示用CD28的共刺激提高了活化的T淋巴细胞的体外存活；事实上，CD28诱导作为T淋巴细胞存活的外源性因子起作用的白介素-2(IL-2)的产生提高，和T淋巴细胞抵抗凋亡的固有能力(Boise，1995bis)。这是因为CD28作用与被称为bcl-xL基因的抗凋亡基因的表达相关而发生的(Khoshnan，2000；Noel，1996)。
将凋亡抑制发生的步骤综合如下，如图1中所示 -CD28通过其胞质部分与“连接物”蛋白的复合体和被称为Vav的分子发生作用(Frauwirth，2002)； -Vav作为另一个被称为Rac 1的分子的鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)起作用(Frauwirth，2002)； -Rac 1，小的GTP酶，以在与GDP结合的非活性状态和与GTP结合的活性状态之间切换的方式起开关功能(Frauwirth，2002)； -激活的Rac 1，通过MEK磷酸化依次导致激酶(IKK)的激活，其使得NF-κB抑制蛋白(类似I-κB α)磷酸化(Marinari，2002)； -因此，NF-κB不再在细胞液中保持非活性形式，但是能够易位至细胞核，在细胞核中诱导bcl-xL表达(Khoshnan，2000)； -另外，激活的Rac 1刺激属于STAT家族(信号传导与转录激活蛋白)的蛋白，即STAT-3的活化，因而诱导其易位至细胞核和STAT-3依赖性基因的相应表达(Faruqi，2001)。特别是，STAT-3诱导bcl-xL表达，因而促进对凋亡的抗性和局限性回肠炎过程中T淋巴细胞在发炎粘膜中的蓄积(Mudter，2003)。另一方面，肠T淋巴细胞的研究指出，STAT-3在局限性回肠炎患者中被稳定地激活，但在健康的志愿者中不被稳定地激活(Lovato 2003)。
Rac 1，与RhoA和Cdc42一起，属于Rho家族，该家族是小G蛋白的超家族，其特征是能结合鸟苷核苷酸并调节许多细胞反应。它们在非活性状态(当与GDP结合时)与活性状态(以GTP替代GDP)之间循环。该反应通过被称为GEF的鸟苷核苷酸交换因子(如Vav)维持。与GTP结合诱导构象变化，这使得Rac 1及其它GTP酶与它们的效应子结合。其它称为GTP酶活化蛋白(GAPs)的作用刺激这些小G蛋白固有的GTP酶活性，并使它们转变回到其GDP结合的非活性状态。因为Rac 1刺激基因表达(本例中的bcl-xL基因)的交替，调制转录因子的活性，例如本例中的NF-κB与STAT-3，所以它通常如同属于Rho家族的所有GTP酶一样，在有丝分裂发生过程、增殖与浸袭(invasivity)中起重要的作用(Van Aelst，1997)。
硫唑嘌呤被视为免疫抑制治疗局限性回肠炎的“金标准”，即使这个有效成份的作用机理还未知。然而，将嘌呤核苷酸生物合成的抑制以及DNA和RNA合成的抑制以及T和B淋巴细胞功能的下调(Tiede2003)设想为硫唑嘌呤主要的治疗机制。
最近，已显示硫唑嘌呤在T淋巴细胞水平上起作用的新作用机制。在硫唑嘌呤体外诱导激活的T淋巴细胞凋亡和用硫唑嘌呤的治疗引起IBD患者的循环与固有层二者T淋巴细胞凋亡的证据之后，指出了特殊的分子机制(Tiede 2003)。
代表药物的真正功能性代谢产物的代谢产物6-硫鸟苷三磷酸(6-硫GTP)将代表关键点。具体地说，6-硫GTP代替GTP与Rac 1直接地结合，因而阻断其活化。该阻断对Rac 1是高度特异性的，因为其它属于同一家族的GTP酶不被6-硫GTP抑制，并且该特异性提示该阻断与Rac 1蛋白的结构相关。观察到Rac 1鸟苷核苷酸交换因子Vav蓄积的事实与实现Rac 1激活的补偿机制相一致。
Rac 1激活的阻断导致通常受Rac 1自身诱导的NF-κB与STAT-3的阻断，并因此导致在mRNA与蛋白质水平上检测的bcl-xL基因表达的阻断。因而，硫唑嘌呤通过调节Rac 1活性将由CD28介导的抗凋亡共刺激信号转换为前凋亡信号。
这种新的作用机制能够解释硫唑嘌呤疗效中熟知的“延迟”，其需要长的治疗时间以这样的方式引起临床反应在早于治疗的4个月观察不到益处与临床反应。这归因于与通常与Rac 1结合的GTP相比，6-硫GPT对Rac 1的亲和力小20倍。因此，硫唑嘌呤治疗需要同时并长期服用高剂量的具有显著的副作用如骨质疏松、糖尿病、白内障的类固醇。
根据上文，具有任意使用的新免疫抑制药是合乎需要的，该新免疫抑制药与已知化合物相比引起更快和更有效的治疗反应。
根据本发明，制备了新的一类6-硫GTP类似药物，其能够抑制Rac 1并且特征是与硫唑嘌呤治疗的延迟效应与最好疗效相比，对Rac1的亲和力更大，Rac 1活性的抑制更高并因此具有更大的免疫抑制功效与作用。
因此，本发明的目标是提供一类通式(I)的6-硫鸟苷三磷酸的类似化合物
其中糖部分中的虚线键可以为单键，也可以为双键，并且其中R1、R2、R3、R4或R5彼此相同或不同，有通式-(Int)m-Ter，其中m在0和12之间并且Int和Ter为内部与末端的结构单元，其中Int选自由如下基团组成的组
并且Ter选自由如下基团组成的组
其中X代表芳环中的碳原子或氮原子，Y代表氧原子或硫原子并且附加的Q基团，一个Qi基团或多个Qi基团(Qi表示可以结合到所述环的任意不饱合部分的一个基团或多个基团)选自-OH、-COOH、-N(CH3)2、-N(CH2-CH3)2、-CO-CH3、-CO-O-CH3、-O-CH3、-S-CH3、-SO2-CH3、、-CN、-NO2或-卤族元素。
或者，R5可以为
及其金属和铵盐，其中n在0和5之间，或者氧或磷部分或全部被氮、硫、亚甲基或它们的衍生物替代。
在一些实施方案(特殊地，但不限于R5是HO-[PO3]n及其金属和铵盐的那些，其中n在0和5之间，或者氧或磷子部分或全部被氮、硫、亚甲基或它们的衍生物替代)中，TER选自由如下基团组成的组
式(I)的化合物可被标记，特别是R3或R4选自
或
其中Q选自-OH(FAM)或-N(CH3)2(TAMRA)。
另外，式(I)的化合物的糖部分可以选自由下列糖部分或类糖部分组成的组
本发明的化合物可以具有从通式(Ia)和/或(I)衍生出的通式(II)，其中R1为[-SH](应理解鸟苷部分可以经历酮-烯醇互变异构转换而形成[＝S])，R2是[-H]，R5是[-(PO3)n-OH]以及R3与R4中的一个是[-OH]并且R3与R4中的另一个是[-O-CO-NH-Intm-Ter](相同混合物中提供两种形式，即[-O-CO-NH-Intm-Ter]将是相同的，但一部分分子将有[-O-CO-NH--Intm-Ter]连接在R3上，R4是OH，另一部分分子将有[-O-CO-NH-Intm-Ter]连接在R4上，R3是OH)
其中n＝1、2或3，m在0和5之间，Int选自由如下基团组成的组
以及Ter选自由如下基团组成的组
其中X代表芳环中的碳原子或氮原子，Y代表氧原子或硫原子并且附加的Q基团或Qi基团(i表示Q基团可以结合的所述环的任意不饱合部分的位置)选自-CH3、-C(CH3)3、-OH、-COOH、-CO-CH3、-CO-O-CH3、-O-CH3、-S-CH3、-SO2-CH3、-N(CH3)2、-N(CH2-CH3)2、-CN、-NO2或-卤族元素。
在式(I)、(Ia)与(II)本发明的一些实施方案中，Ter选自由如下基团组成的组
依照本发明的一些实施方案，式(I)的化合物是如下所述的化合物
其中R1、R2、R3、R4或R5，彼此相同或不同，具有通式-(Int)m-Ter，其中m在0和12之间，并且Int和Ter是内部与末端的结构单元，其中Int选自由如下基团组成的组
并且Ter选自由如下基团组成的组
其中，附加的Q基团，一个Qi基团或多个Qi基团(Qi表示该一个或多个基团可以结合到所述环的任意不饱合部分)选自-OH、-COOH、-N(CH3)2、-N(CH2-CH3)2或-卤族元素。
另外，式(I)化合物的糖部分可以选自由以下糖部分或类糖部分组成的组
式(I)、(Ia)与(II)的化合物可被标记，特别是R3或R4选自
或
其中Q选自-OH(FAM)或-N(CH3)2(TAMRA)。
根据本发明的一些实施方案，式(I)、(Ia)与(II)的化合物是下面所述的化合物 2’，3’-EDA-6-硫代-GTP，ID05B-0
FAM-2’，3’-EDA-6-硫代-GTP
TAMRA-2’，3’-EDA-6-硫代-GTP
天冬氨酸-2’，3’-EDA-6-硫代-GTP，ID05B-1
谷氨酸-2’，3’-EDA-6-硫代-GTP，ID05B-2
苏氨酸-2’，3’-EDA-6-硫代-GTP，ID05B-3
丝氨酸-2’，3’-EDA-6-硫代-GTP
2’，3’，5’，O-三乙酰基-N-2-(乙酰基-6”-氨己基)-鸟苷
2’，3’，5’-三乙酰基-N-2-(6”-硫代乙酰胺-己基)-6-硫鸟苷(V4)[TWI107/7]
N-2-(6”-硫代乙酰胺-己基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-氨己基)-6-硫鸟苷，ID05A-0
N-2-(6”-胍基-己基)-6-硫鸟苷，ID05A-1
N-2-(6”-氨己基)-6-硫代-GMP
N-2-(6”-胍基-己基)-6-硫代-GMP，ID05A-2
N-2-(6”-氨己基)-6-硫代-GTP
N-2-(6”-胍基-己基)-6-硫代-GTP，ID05A-3
N-2-(6”-天冬氨酸-己基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-谷氨酸-己基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-苏氨酸-己基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-丝氨酸-己基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-氨丁基)-6-硫代-鸟苷，ID05C-0
2-N-2-(6”-胍基-丁基)-6-硫鸟苷，ID05C-1
2-N-2-(6”-胍基-丁基)-6-硫代-GMP，ID05C-2
2-N-2-(6”-胍基-丁基)-6-硫代-GTP，ID05C-3
N-2-(6”-天冬氨酸-丁基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-谷氨酸-丁基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-苏氨酸-丁基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-丝氨酸-丁基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-氨丙基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-胍基-丙基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-天冬氨酸-丙基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-谷氨酸-丙基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-苏氨基-丙基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-丝氨酸-丙基)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-氨基-2-丁烯)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-胍基-2-丁烯)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-天冬氨酸-2-丁烯)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-谷氨酸-2-丁烯)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-苏氨酸-2-丁烯)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-丝氨酸-2-丁烯)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-氨基-2-丁炔)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-胍基-2-丁炔)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-天冬氨酸-2-丁炔)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-谷氨酸-2-丁炔)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-苏氨酸-2-丁炔)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-丝氨酸-2-丁炔)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-氨基-2，4-己二炔)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-胍基-2，4-己二炔)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-天冬氨酸-2，4-己二炔)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-谷氨酸-2，4-己二炔)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-苏氨酸-2，4-已二炔)-6-硫鸟苷
N-2-(6”-丝氨酸-2，4-己二炔)-6-硫鸟苷
参考所示名称，公开了本发明的更多化合物。
06D-1
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06D-32
06D-33
依照本发明的化合物可以有利地用于医药领域中；因此本发明的另一个目的是药物组合物，其包含至少一种上述式(I)的化合物作为有效成分以及一种或多种药学上可接受的辅助剂或赋形剂，该辅助剂或赋形剂为本领域的技术人员所熟知并且当前用于制药技术中。
本发明的一个目的是提供用于制备免疫抑制药物的化合物，及其用途以及治疗与医疗用途。本发明的目的是提供本发明的化合物与组合物，以及它们的用途，用于下列医疗方法和/或疗法中；预防器官移植(例如，肾脏、心脏、肺、胰腺、肝脏移植)的排斥与移植后肾病以及用于治疗涉及免疫系统的病理状况，例如，举例来说，炎性慢性肠病，如局限性回肠炎、溃疡性直肠结肠炎、不确定性结肠炎或自身免疫性肠病、活动性慢性肝炎、类风湿性关节炎、斯蒂尔病、系统性红斑狼疮、获得性溶血性贫血、自发性血小板减少、结节性多关节炎、脉管炎、多脉管炎、多肌炎、重症肌无力、结节病、脂样肾炎、多发性硬化病、皮肌炎、寻常型天疱疮、原发性胆汁性肝硬变、原发性硬化性胆管炎、再发性多形红斑、慢性光化性皮炎、坏疽性皮下组织、红糠疹、韦格纳肉芽肿病、皮肤脉管炎、特应性皮炎、牛皮癣、多脓疱性类天疱疮和通常除了放射治疗、皮质类固醇和其他细胞毒性剂之外的免疫抑制治疗。另外，依照本发明的化合物可以有利地用于制备用于癌症治疗的药物。
本发明还涉及标记的式(I)化合物的用途，特别是R3或R4选自
或
其中，Q选自-OH(FAM)或-N(CH3)2(TAMRA)，作为探针通过RacI/Vav系统用于评估式(I)化合物的结合性质。
根据另一方面，本发明涉及制备式(I)、(Ia)和(II)化合物的方法，其中在鸟苷环的2位引入-NH-R基团，该方法包括以下步骤 a)保护三-O-乙酰基-肌苷的NH部分； b)氧化性鸟苷环-打开并且O-脱保护； c)鸟苷环-闭合并通过使用CS2在鸟苷环的2位引入SH基团； d)通过使用过量的脂肪族二胺，用氨基-连接物替代2位的SH基团。该方法可进一步包括附加步骤e)通过乙酰化保护核糖OH基团和伯胺基团，以及，此外，附加步骤f)通过使用拉韦松(Lawesson’s)试剂将C＝O基团硫醇化(thiolation)。
现将根据本发明的优选实施方案，特别参考所附图的各图，为举例说明而非限制性目的，描述本发明。
图1显示凋亡抑制作用与硫唑嘌呤作用的机制的图解。
图2显示3天后V1＝BMB20＝EDA-6-硫代-GTP、V2＝TWI 35/1＝N-2-(6”-氨己基)-鸟苷、V3＝TWI 71/2＝2’，3’，5’，o-三乙酰基-N-2-(乙酰基-6”-氨己基)-鸟苷、V4＝TWI 107/7＝2’，3’，5’-三乙酰基-N-2-(6”-硫代乙酰胺-己基)-6-硫鸟苷、V5＝BMB＝TAMRA-EDA-6-硫代-GTP对人CD4+T淋巴细胞中凋亡的诱导作用。
图3显示4天后V1＝BMB20＝EDA-6-硫代-GTP、V2＝TWI 35/1＝N-2-(6”-氨己基)-鸟苷、V3＝TWI 71/2＝2’，3’，5’，o-三乙酰基-N-2-(乙酰基-6”-氨己基)-鸟苷、V4＝TWI 107/7＝2’，3’，5’-三乙酰基-N-2-(6”-硫代乙酰胺-己基)-6-硫鸟苷、V5＝BMB＝TAMRA-EDA-6-硫代-GTP对人CD4+T淋巴细胞中凋亡的诱导作用。
图4显示5天后V1＝BMB20＝EDA-6-硫代-GTP、V2＝TWI 35/1＝N-2-(6”-氨己基)-鸟苷、V3＝TWI 71/2＝2’，3’，5’，o-三乙酰基-N-2-(乙酰基-6”-氨己基)-鸟苷、V4＝TWI 107/7＝2’，3’，5’-三乙酰基-N-2-(6”-硫代乙酰胺-己基)-6-硫鸟苷、V5＝BMB＝TAMRA-EDA-6-硫代-GTP对人CD4+T淋巴细胞中凋亡的诱导作用。
图5凋亡的诱导作用。暗黄(Buffy)代表“暗黄覆盖层”，它是通过离心获得的血液的一部分，并包含白细胞和血小板。在此情况下，暗黄覆盖层用于分离实验的单核细胞，“Buffy 1 vom 08/03/05”表示“2005年3月8日的暗黄覆盖层”。V1与V3在4个独立实验中试验了4次，而V2和V5在2个单独的实验中试验了2次。例如V1在08/03/2005试验了2次(所写的08/03/2004是错误的，并应读作08/03/2005)并在22/04/2005试验了2次。
图6图5中汇编的化合物生物活性的结果。
图7本发明更多化合物的列表，以及提供用于鉴别某些分子的一部分速记的检索表。将要注意的是，一些化合物有不同的对映异构体形式，并且图7中的表述可以显示本文本中讨论的可替代的对映异构体形式。
图8半胱天冬酶-图将未处理的细胞的发光值定义为100％半胱天冬酶活性。由于处理的细胞特定的发光值，因此计算了它们的半胱天冬酶活性。半胱天冬酶活性的诱导作用×[％]＝半胱天冬酶活性×[％]-半胱天冬酶活性未处理的[％]。呈现3个不同实验的平均值±SEM(平均值的标准误差＝标准偏差/根(n))。本图的概要6-硫代-GTP能够诱导半胱天冬酶活性(作为阳性对照)。05B-0也非常有效。与前面用膜联蛋白V/PI染色的数据相一致，05B-1比05B-0效果更小。关于D-组衍生物，06D-13、06D-14和较低程度06D-22是有希望的。
实施例1制备2-取代的-6-硫代-鸟苷核苷酸的方法。
2’，3’，5’-三-O-乙酰基-1-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]肌苷的制备(Kohyoma等，2003)
将肌苷-2′，3′，5′-三乙酸酯(4g，10.2mmol)溶于100毫升二氯甲烷并且于0℃在作为支持性碱的二异丙基乙胺的存在下用1.4毫升(12.2mmol)2-(甲氧基乙氧基)甲基氯处理该溶液。一小时后，用水将反应猝灭。将该溶液搅拌30分钟，然后加入氯仿。用氯仿将水层萃取并且将组合并洗涤的有机层浓缩至干。经色谱法纯化后，该反应产出3.93g(8.2mmol，80％)的2’，3’，5’-三-O-乙酰基-1-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]肌苷(硅胶，乙酸乙酯-甲醇，50∶1)。
5-氨基-1-β-呋喃核糖基咪唑-4-甲酰胺的制备(Kohyoma等，2003)
将氨水溶液(28％，20ml)加到2’，3’，5’-三-O-乙酰基-1-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]肌苷(3,5g，7.3mmol)在50毫升甲醇中的溶液中。将反应混合物于室温搅拌1小时并浓缩，得到脱保护的核苷(2,44g，6.9mmol，95％)。将该产物不经进一步纯化用于下一步骤。
将核苷(2,44g，6.9mmol)用50毫升氢氧化钠水溶液(0.2M)回流1小时，冷却至室温，用盐酸(6M)中和并蒸发至干。将残留物溶于乙醇，经不溶的材料过滤并浓缩至干。用柱色谱法(硅胶，氯仿∶甲醇，3∶1)纯化粗制品，得到1.32克(5.11mmol，70％)的5-氨基-1-β-呋喃核糖基咪唑-4-甲酰胺。
2-巯基肌苷的制备(Imai等，1971)
将5-氨基-1-β-呋喃核糖基咪唑-4-甲酰胺(1,3g，5mmol)溶解于吡啶并将18ml(15mmol)异硫氰酸苯酯缓慢加入。将反应混合物在氩气气氛中回流2小时。将溶液冷却至室温，经过滤将沉淀物收集，并用乙醚洗涤。将得到的产物的吡啶鎓盐溶于氢氧化钠水溶液(15％，40ml)中。将溶液于60℃加热30分钟，并在真空下浓缩。然后加入甲醇，并将溶液保存在冰箱中过夜。20小时后，经过滤收集沉淀的无色棱形物，得到1,2g(80％)2-巯基肌苷。
根据可替代的制备方法，于30℃，将化合物-氨基-1-β-呋喃核糖基咪唑-4-甲酰胺(1,3g，5mmol)加到氢氧化钠(1g，25mmol)在20ml甲醇中的溶液中。将二硫化碳(1,9g，25mmol)加入，并在180℃将溶液在高压釜中加热3小时。将混合物冷却至室温，将沉淀物滤出，用冷的甲醇洗涤，并从水中再结晶，得到1,1g(3.8mmol，75％)2-巯基肌苷。
N-2-(6”-氨己基)-鸟苷的制备
将2-巯基肌苷(1g，3mmol)溶于100ml水并冷却到0℃。超声照射后，获得澄清的溶液。将过氧化氢(1ml，9mmol)在剧烈搅拌下于20分钟内加入。在0℃搅拌1小时后，高效液相色谱法显示起始化合物已全部氧化成肌苷-2-磺酸钠盐。不经进一步纯化，将得到的溶液用过量的1，6-二氨基己烷(20g，200mmol)处理。将混合物在155℃回流2.5小时。经真空蒸馏将过量的1，6-二氨基己烷去除得到橙色残留物。通过柱色谱法(硅胶RP-18，从100％水到100％甲醇的线性梯度)，对粗制品纯化后得到N-2-(6”-氨己基)-鸟苷(0,85g，2.2mmol，50％)。
2’，3’，5’-三乙酰基-N-2-(6”-乙酰胺-己基)-鸟苷的制备(Ostermann等，1999)
在氩气气氛下，将核苷(220mg，0.575mmol)在20毫升无水吡啶中的溶液于室温与1ml(10mmol)乙酸酐一起搅拌15小时。真空下将溶剂去除，并将残留物溶于氯仿(10ml)和甲醇(2ml)的混合物中。将溶液装载到硅胶上并用氯仿/甲醇(5∶1)洗脱，得到284,7mg(0.52mmol，90％)的完全受保护的核苷。
2’，3’，5’-三乙酰基-N-2-(6”-硫代乙酰氨基-己基)-6-硫鸟苷的制备
将二噁烷(200ml)加到完全受保护的核苷(5,03g，9,13mmol)中。加入8g(19.8mmol)拉韦松试剂后，将混悬液于80℃剧烈搅拌2小时。最初不透明的反应混合物10分钟后变得澄清。将溶液在室温冷却并通过真空蒸馏将溶剂蒸发。通过柱色谱法(硅胶，氯仿)纯化粗产物，最终得到2’，3’，5’-三乙酰基-N-2-(6”-硫代乙酰氨基-己基)-6-硫鸟苷(2,92g，5,02mmol)，收率为55％。
实施例2制备核糖修饰的6-硫代-鸟苷-三磷酸的类似物的方法。
6-硫代-鸟苷-三磷酸的制备(Ludwig，1981)
在氩气气氛下，将6-硫代-鸟苷(1g，3.34mmol)溶于6ml磷酸三甲酯。将溶液冷却至0℃并加入1,3ml二甲基吡啶。10分钟后，将0,4ml(4.4mmol)氯氧化磷小心加到溶液中。一小时后，10分钟内于真空下将过量的POCl3去除。
然后用三-正丁铵焦磷酸盐(17ml，100mM)在二甲基甲酰胺中的溶液处理最初形成的中间体二氯磷酸盐溶液。2分钟后，加入100ml的0.25M三乙铵碳酸氢盐缓冲液将反应猝灭，通过离子交换色谱法纯化，得到6-硫代-鸟苷-三磷酸(0,5g，1mmol，30％)。
2’/3’-EDA-6-硫代-鸟苷-三磷酸的制备
用含500mg羰基二咪唑的25ml二甲基甲酰胺处理干燥的化合物的三丁胺盐(0.5mmol)。将得到的混合物于0℃搅拌6小时，使之达到室温并加入0,2ml甲醇，并随后加入0,3ml乙二胺。
将得到的沉淀物离心沉淀并溶于水。为在三磷酸酯部分分解得到的中间体氨基磷酸酯，将溶液调至pH 2。18小时后，将pH调到7.5并随后在减压状态下将溶剂去除。通过离子交换色谱法纯化粗产物，得到116mg(0.4mmol，80％)2’/3’-EDA-6-硫代-鸟苷-三磷酸。
TAMRA-2’/3’-EDA-6-硫代-鸟苷-三磷酸的制备
将TAMRA的N-羟基-琥珀酰亚胺酯(1mg，2μmol)溶于200μl无水二甲基甲酰胺，并于室温加到1mg(3μmol)2’/3’-EDA-6-硫代-鸟苷-三磷酸在500μl 100mM硼酸钠缓液(pH 8.5)中的溶液中。2小时后，用甲醇将反应混合物猝灭。通过反相HPLC对反应混合物进行后处理，以70％收率得到TAMRA标记的产物(2,4mg，1.4μmol)。
实施例32-取代的6-硫代-鸟苷核苷酸的合成 N-2-(6”-硫代乙酰胺基-已基)-6-硫鸟苷(10)的制备
A，将7M氨的甲醇溶液(70ml)加到完全受保护的核苷9(1.15g，1.97mmol)中。将溶液于室温搅拌20小时。经蒸馏将溶剂去除，得到灰白色残留物。不经进一步纯化使用粗制的N-2-(6”-硫代乙酰胺基-己基)-6-硫鸟苷(10)(0.85g，1.8mmol，95％)。
N-2-(6”-氨己基)-6-硫鸟苷(11)的制备
将核苷10(0.1g，0.22mmol)在5ml NH3/水(30％)中的溶液于80℃搅拌90分钟。真空下将溶剂去除并将残留物溶解于水(2ml)中。通过柱色谱法(硅胶RP-18，从100％水到100％甲醇的线性梯度)对粗制品纯化后，得到N-2-(6”-氨己基)-6-硫鸟苷(11)(0.80g，2.0mmol，91％)。
N-2-(6”-胍基-己基)-6-硫鸟苷(12)的制备
将N-2-(6”-氨己基)-6-硫鸟苷(11)(0.091g，0.23mmol)溶解于1ml二甲基甲酰胺(DMF)中并将得到的溶液在用作支持碱的39μl(0.23mmol)N-乙基-二异丙胺的存在下于室温用0.34g(0.23mmol)三唑-1-甲脒盐酸盐处理。2小时后，将反应混合物蒸发至干。通过反相色谱法(硅胶RP 18，从100％水到100％ ACN的线性梯度)纯化粗制品，得到0.92g(0.21mmol，90％)的N-2-(6”-胍基-己基)-6-硫鸟苷(12)。
N-2-(6”-氨己基)-6-硫鸟苷-5’-一磷酸(13)的制备
在氩气气氛下，将核苷9(0.3g，0.6mmol)溶解于3ml磷酸三甲酯中。将溶液冷却至0℃并用0.3ml二甲基吡啶处理。
10分钟后，将0.15ml(1.1mmol)氯氧化磷小心加入。1小时后，真空下于10分钟内将过量的POCl3去除。
通过加入100ml 0.25M(pH 7.5)三乙铵碳酸盐缓冲液，将溶液猝灭。通过离子交换色谱法纯化，得到N-2-(6”-硫乙酰胺基-己基)-6-硫鸟苷-5’-一磷酸。将产物溶解于5ml氨/水(30％)中并于80℃搅拌90分钟。随后于真空状态去除溶剂。通过离子交换色谱法纯化粗制品，得到N-2-(6”-氨己基)-6-硫鸟苷-5’-一磷酸(13)(0.17g，0.36mmol，60％)。
N-2-(6”-胍基-己基)-6-硫鸟苷-5’-一磷酸(14)的制备
将N-2-(6”-氨己基)-6-硫鸟苷-5’-一磷酸(13)(0.053g，0.11mmol)溶解于0.8ml水与0.5ml DMF的混合物中。随后在18μl(0.11mmol)作为支持性碱的N-乙基-二异丙胺的存在下于室温用0.16g(0.11mmol)三唑-1-甲脒盐酸盐处理该溶液。16小时后，将反应混合物浓缩至干。通过反相色谱法(硅胶RP 18，从100％水到100％ CAN的线性梯度)纯化粗产物，得到0.037g(0.072mmol，65％)N-2-(6”-胍基-己基)-6-硫鸟苷-5’-一磷酸(14)。
实施例4核糖修饰的6-硫代-GTP类似物的合成 天冬氨酸-2’/3’-EDA-6-硫代-鸟苷-三磷酸(4)的制备
将Boc/tBu保护的天冬氨酸的N-羟基-琥珀酰亚胺酯(2.8mg，7μmol)溶解于200μl无水DMF中并于室温将其加到1(5mg，7μmol)在500μl 100mM硼酸钠缓冲液(pH 8.5)中的溶液中。16小时后，用甲醇将反应混合物猝灭。通过反相HPLC对反应混合物进行后处理后，以70％收率得到天冬氨酸衍生物4(3.6mg，4.9μmol)。
谷氨酸-2’/3’-EDA-6-硫代-鸟苷-三磷酸(5)的制备
将Boc/tBu保护的谷氨酸的N-羟基-琥珀酰亚胺酯(2.9mg，7μmol)溶解于200μl无水DMF中，并于室温将其加到1(5mg，7μmol)在500μl 100mM硼酸钠缓冲液(pH 8.5)中的溶液中。16小时后，用甲醇将反应混合物猝灭。通过反相HPLC对反应混合物进行后处理后，以70％收率得到谷氨酸标记的产物5(3.7mg，4.9μmol)。
苏氨酸-2’/3’-EDA-6-硫代-鸟苷-三磷酸(6)的制备
将Boc保护的苏氨酸的N-羟基-琥珀酰亚胺酯(2.3mg，7μmol)溶解于200μl无水DMF中，并于室温将其加到1(5mg，7μmol)在500μl100mM硼酸钠缓冲液(pH 8.5)中的溶液中。16小时后，用甲醇将反应混合物猝灭。通过反相HPLC对反应混合物进行后处理后，以70％收率得到苏氨酸衍生物6(3.4mg，4.9μmol)。
实施例55种新合成的6-硫代-GTP-衍生物诱导人CD4+T淋巴细胞凋亡的能力的分析 所用的物质 ·硫唑嘌呤 ·6-巯基嘌呤 ·V1＝BMB20＝EDA-6-硫代-GTP ·V2＝TWI 35/1＝N-2-(6”-氨己基)-鸟苷 ·V3＝TWI 71/2＝2’，3’，5’，o-三乙酰基-N-2-(乙酰基-6”-氨己基)-鸟苷 ·V4＝TWI 107/7＝2’，3’，5’-三乙酰基-N-2-(6”-硫代乙酰胺-己基)-6-硫鸟苷 ·V5＝BMB＝TAMRA-EDA-6-硫代-GTP V3与V4不溶于水，因此将V3用乙醇重构，并将V4用甲醇重构。
实验设计 用蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)梯度将人外周单核细胞(PBMC)从4个暗黄覆盖层中分离。根据厂商(Miltenyi Biotec)提供的实验设计，用附着在免疫磁性微珠上的CD4单克隆抗体将PBMC进一步纯化。用CD3的包被抗体(0,04μg/ml)和可溶性CD28抗体(PharMingen；1 □g/ml)加白介素-2(R&D系统，Wiesbaden，德国；40U/ml)在完全RPMI-1640培养基(RPMI-1640+10％ FCS+100U/ml青霉素/链霉素+3mM L-谷氨酰胺)中将T淋巴细胞刺激3、4或5天。于第0天，将硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、V1、V2、V3、V4或V5加入T细胞培养物中至终浓度为5μM。为测定这些T淋巴细胞中凋亡的诱导，使用FACS对细胞进行分析。为进行FACS分析，使用膜联蛋白V异硫氰酸荧光素凋亡试剂盒I(Annexin V FITC ApoptosisDetection Kit I)(PharMingen)，通过用膜联蛋白V与碘化丙锭(propidium iodide)染色对凋亡细胞进行检测。简而言之，将T细胞在PBS中洗涤两次，并将粒状沉淀物再悬浮于膜联蛋白V结合缓冲液(PharMingen)中，浓度为106细胞/毫升。加入膜联蛋白V异硫氰酸荧光素(Annexin V FITC)与碘化丙锭(各5μl/105细胞)。在FACS分析前，将样品轻轻混合，并于室温黑暗中培养15分钟。
结果 ·膜联蛋白-阳性、碘化丙锭-阴性细胞(黑色条带)呈现早期凋亡细胞的比率。膜联蛋白-阳性、碘化丙锭-阳性细胞(白色条带)呈现晚期凋亡或坏死细胞。
·凋亡的诱导＝(所示处理后凋亡细胞的比率)-(未经处理细胞的凋亡的比率) ·将V1、V2与V3在4个独立的实验中进行检测。将V4与V5在2个独立的实验中进行检测。
结论 我们第一结果显示，V1与V5能够在CD3/CD28共刺激的T淋巴细胞中诱导凋亡。V2、V3与V4不能诱导凋亡。将V1和V5介导的凋亡的诱导与硫唑嘌呤或6-巯基嘌呤介导的凋亡的诱导比较，V1与甚至V5介导的作用看起来更显著并且出现得更早(图2-4)。
实施例5 6-硫代-鸟苷-三磷酸的2’/3’-次甲氨基氨基甲酸酯衍生物的制备
将干燥的6-硫代-GTP的三丁铵盐1(0.2mmol)用4ml含有200mg羰基二咪唑的二甲基甲酰胺处理。于0℃将得到的混合物搅拌6小时，使之至室温，随后加入80μl甲醇。10分钟后，将2mmol适宜的次甲基(methyleno)胺与2ml三乙胺也加到反应混合物中。于室温将溶液搅拌过夜，并于减压状态将溶剂去除。为在三磷酸酯部分分解得到的中间体氨基磷酸酯，将残留物吸纳于30ml水中，并将该混合物调至pH 1。20分钟后，将溶液调至pH 7.5，将沉淀物滤出并于真空下将溶剂去除。通过离子交换色谱法随后经反相HPLC将得到的粗产物纯化。
实施例6 2’/3’-次甲氨基氨基甲酸酯-6-硫代-鸟苷-三磷酸衍生物2a
依照通常程序，使3-噻吩基-甲胺(226mg，2mmol)与1反应，通过离子交换色谱法并随后经反相HPLC纯化后，得到2a(0.58mmol，29％)。
2’/3’-次甲氨基氨基甲酸酯-6-硫代-鸟苷-三磷酸衍生物2b
依照通常程序，使(1，5-二甲基-1H-吡唑-3-基)甲胺(250mg，2mmol)与1反应，通过离子交换色谱法并随后经反相HPLC纯化后，得到2b(0.66mmol，33％)。
实施例7 6-硫代-鸟苷-三磷酸的2’/3’-氨基甲酸酯衍生物的制备
将干燥的化合物1的三丁铵盐(0.2mmol)用4ml含有200mg羰基二咪唑的二甲基甲酰胺处理。于0℃将得到的混合物搅拌6小时，使之至室温，随后加入80μl甲醇。10分钟后，将2mmol适宜的胺与2ml含有1M六甲基二硅化钾(potassium hexamethyldisilazide)(KHMDS)的THF小心加到溶液中。于室温将溶液搅拌1小时，并于减压状态将溶剂去除。为在三磷酸酯部分分解得到的中间体氨基磷酸酯，将残留物吸纳于30ml水中，并将混合物调至pH 1。20分钟后，将溶液调至pH 7.5，将沉淀物滤出并于真空下将溶剂去除。通过离子交换色谱法并随后经反相HPLC将得到的粗产物纯化。
实施例8 关于图5和6，将至少3个关于凋亡的实验数据集的综述显示如下。此处，D化合物中的一部分能够诱导凋亡。B0是凋亡诱导最强的候选药物。在这些结果中，应该考虑两个问题。
·凋亡的负诱导意味着未处理组中比处理组中有更多的凋亡细胞。此现象时时出现，并可以用一种统计方差来解释。
·在这些实验中，平均说来药物6-硫代-GTP不能诱导凋亡。通常6-硫代-GTP药物应是诱导T细胞中凋亡的阳性对照。在这些实验中，阳性对照的效果不是非常好。这可能被解释为经常用从不同供体的血中新鲜分离的初级T细胞进行该实验。众所周知，一些人对硫唑嘌呤治疗不敏感。这样，一些供体的T细胞可能对6-硫代-GTP诱导的凋亡有抵抗。然而无论如何，B0和D化合物中的一部分能够诱导凋亡，这提示它们为候选药物。
另外，进行了用于筛选D-组衍生物的可替代方法(图8)。确定分析经D-组衍生物处理的T细胞中半胱天冬酶-3/7的活性。与膜联蛋白V/PI染色相比，这种新方法可能具有如下一些优点 ·它是一种更容易的实验设计。因此，个体误差的可能性更小。
·增强的半胱天冬酶-3活性对凋亡来说是非常特异的。因此，这种方法对于凋亡的检测十分灵敏。没有坏死细胞的干扰影响。
·一式两份进行测定。这样，有内部对照。
使用半胱天冬酶-Glo 3/7测定法(PromegaTM)。该测定法基于半胱天冬酶依赖性发光信号。实验设计通过磁珠(Dynal)将CD4+T细胞从人血中分离。在96孔板中，用CD3的包被抗体(0,04μg/ml)和可溶性CD28抗体(PharMingenTM 1μg/ml)加白介素-2(R & D SystemsTM，Wiesbaden，德国；40U/ml)，在完全RPMI-1640培养基(RPMI-1640+10％FCS+100U/ml青霉素/链霉素+3mM L-谷氨酰胺)中，将T淋巴细胞刺激3天。用不同的D-组衍生物处理细胞，或对其不予处理。在培养的第3天，进行半胱天冬酶-3/7测定法。将25μl的半胱天冬酶-Glo 3/7试剂加到每个孔中。将探针轻轻地混合2分钟，并于室温培养30分钟。最后，将100μl的每种探针转移到白壁的96孔发光测量仪平板中，并在读板的发光测量仪中进行分析。加入的试剂含有半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-7的特异性底物。激活的半胱天冬酶-3对该底物的裂解导致萤光素酶反应。发光与存在的半胱天冬酶活性的数量成比例(图8)。
实施例8 2’/3’-氨基甲酸酯-6-硫代-鸟苷-三磷酸衍生物3a
依照通常程序，使3-氨基嘧啶(190mg，2mmol)与1反应，通过离子交换色谱法并随后经反相HPLC纯化后，得到3a(0.076mmol，3.8％)。
实施例9 2’/3’-氨基甲酸酯-6-硫代-鸟苷-三磷酸衍生物3b
依照通常程序，使3-(叔丁基)-1-甲基-1H-吡唑-5-胺(306mg，2mmol)与1反应，通过离子交换色谱法并随后经反相HPLC纯化后，得到3b(0.11mmol，5.5％)。
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-Ludwig(1981)Acta Biochim.Acad.Sci.Hung.1613权利要求
1.通式(I)的化合物
其中糖部分中的虚线键可以为单键或双键，其中R1、R2、R3、R4或R5，彼此相同或不同，具有通式-(Int)m-Ter，其中m在0和12之间并且Int与Ter是内部与末端的结构单元，其中Int选自由如下基团组成的组
并且Ter选自由如下基团组成的组
和
并且其中X代表芳环中的碳原子或氮原子，Y代表氧原子或硫原子并且另外的基团Q，一个基团Qi或多个基团Qi(Qi表示该一个或多个基团可以结合到所述环的任意不饱和部分)选自-OH、-COOH、-N(CH3)2、-N(CH2-CH3)2、-CO-CH3、-CO-O-CH3、-O-CH3、-S-CH3、-SO2-CH3、-CN、-NO2或卤族元素，并且
其中R5可以为
及其金属和铵盐，其中n在0和5之间，或者氧或磷被氮、硫、亚甲基基团或其衍生物部分或全部替代。
2.根据权利要求1的化合物，Int选自由如下基团组成的组
3.根据权利要求1或权利要求2的化合物，其中Ter选自由如下基团组成的组
和
4.根据任一上述权利要求的化合物，其中所述化合物是标记的。
5.根据任一上述权利要求的化合物，其有通式(Ia)
其中R1、R2、R3、R4或R5，彼此相同或不同，具有通式-(Int)m-Ter，其中m为0至12并且Int与Ter是内部与末端的结构单元，其中Int选自由如下基团组成的组
并且Ter选自由如下基团组成的组
其中另外的基团Q，一个基团Qi或多个基团Qi(Qi表示该一个基团或多个基团可以结合到所述环的任意不饱和部分)选自-OH、-COOH、-N(CH3)2、-N(CH2-CH3)2或卤族元素。
6.根据任一上述权利要求的化合物，其中式(I)化合物的糖部分选自有以下糖部分或类糖部分组成的组
7.根据任一上述权利要求的化合物，其中R3或R4选自
或
并且其中Q选自-OH(FAM)或-N(CH3)2(TAMRA)。
8.权利要求1-6任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下结构
05B-0。
9.权利要求1-6任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下结构
05B-1。
10.权利要求1-6任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下结构
05B-2。
11.权利要求1-6任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下结构
05B-3。
12.权利要求1-6任何一项中所要求保护的化合物，其有以下结构
05C-0。
13.权利要求1-6任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下结构
05C-1。
14.权利要求1-6任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下结构
05C-2。
15.权利要求1-6任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下结构
05C-3。
16.权利要求1-6任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下结构
V4
17.权利要求1-6任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下结构
18.权利要求1-6任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下结构
V3
19.根据权利要求1-5任何一项的化合物，其具有通式(II)
其中n＝1、2或3，m在0和5之间，Int选自由如下基团组成的组
并且Ter选自由如下基团组成的组
其中X代表芳环中的碳原子或氮原子，Y代表氧原子或硫原子并且另外的基团Q或基团Qi(i表示该基团Q可以结合到所述环的任意不饱和部分的位置)选自由如下基团组成的组-CH3、-C(CH3)3、-OH、-COOH、-CO-CH3、-CO-O-CH3、-O-CH3、-S-CH3、-SO2-CH3、-N(CH3)2、-N(CH2-CH3)2、-CN、-NO2或卤族元素。
20.根据权利要求19的化合物，其中Ter选自由如下基团组成的组
21.权利要求19或20中所要求保护的化合物，其中n为1-3。
22.权利要求19-21任何一项中所要求保护的化合物，其中n为3。
23.权利要求19-21任何一项中所要求保护的化合物，其中n为1。
24.权利要求19-21任何一项中所要求保护的化合物，其中n为2。
25.权利要求19-22任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下通式
06D-1
26.权利要求19-22任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下通式
06D-3
27.权利要求19-22任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下通式
06D-6
28.权利要求19-22任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下通式
06D-12
29.权利要求19-22任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下通式
06D-13
30.权利要求19-22任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下通式
06D-14
31.权利要求19-22任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下通式
06D-22
32.权利要求19-22任何一项中所要求保护的化合物，其具有以下通式
06D-130
33.根据权利要求1-9任何一项的化合物，其中所述化合物选自由如下化合物组成的组2’，3’-EDA-6-硫代-GTP，FAM-2’，3’-EDA-6-硫代-GTP，TAMRA-2’，3’-EDA-6-硫代-GTP，天冬氨酸-2’，3’-EDA-6-硫代-GTP，谷氨酸-2’，3’-EDA-6-硫代-GTP，苏氨酸-2’，3’-EDA-6-硫代-GTP，丝氨酸-2’，3’-EDA-6-硫代-GTP，2’，3’，5’，O-三乙酰基-N-2-(乙酰基-6”-氨己基)-鸟苷，2’，3’，5’-三乙酰基-N-2-(6”-硫乙酰胺-己基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-硫乙酰胺-己基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-氨己基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-胍基-己基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-氨己基)-6-硫代-鸟苷一磷酸，N-2-(6”-胍基-己基)-6-硫代-鸟苷一磷酸，N-2-(6”-氨己基)-6-硫代-GTP，N-2-(6”-胍基-己基)-6-硫代-GTP，N-2-(6”-天冬氨酸-己基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-谷氨酸-己基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-苏氨酸-己基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-丝氨酸-己基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-氨基丁基)-6-硫代-GTP，N-2-(6”-胍基-丁基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-天冬氨酸-丁基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-谷氨酸-丁基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-苏氨酸-丁基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-丝氨酸-丁基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-氨基丙基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-胍基-丙基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-天冬氨酸-丙基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-谷氨酸-丙基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-苏氨酸-丙基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-丝氨酸-丙基)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-氨基-2-丁烯)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-胍基-2-丁烯)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-天冬氨酸-2-丁烯)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-谷氨酸-2-丁烯)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-苏氨酸-2-丁烯)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-丝氨酸-2-丁烯)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-氨基-2-丁炔)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-胍基-2-丁炔)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-天冬氨酸-2-丁炔)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-谷氨酸-2-丁炔)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-苏氨酸-2-丁炔)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-丝氨酸-2-丁炔)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-氨基-2，4-己二炔)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-胍基-2，4-己二炔)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-天冬氨酸-2，4-己二炔)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-谷氨酸-2，4-己二炔)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-苏氨酸-2，4-己二炔)-6-硫鸟苷，N-2-(6”-丝氨酸-2，4-己二炔)-6-硫鸟苷。
34.药物组合物，它包含任一上述权利要求中所要求保护的至少一种化合物作为有效成分以及一种或多种药学上可接受的辅助剂或赋形剂。
35.权利要求1-33任何一项中所要求保护的化合物或权利要求34中所要求的药物组合物在制备免疫抑制药物中的用途。
36.根据权利要求35的用途，其中所述免疫抑制药物用于预防器官移植物的排斥或预防移植后肾病。
37.权利要求1-33任何一项中所要求保护的化合物或权利要求34中所要求的药物组合物在制备用于治疗其中涉及免疫系统的病理学的药物中的用途。
38.权利要求1-33任何一项中所要求保护的化合物或权利要求34中所要求的药物组合物在制备用于治疗一种或几种病理状况的药物中的用途，其中该病理状况选自炎性慢性肠病、自身免疫性肠病、活动性慢性肝炎、类风湿性关节炎、斯蒂尔病、系统性红斑狼疮、获得性溶血性贫血、自发性血小板减少、结节性多关节炎、脉管炎、多脉管炎、多肌炎、重症肌无力、结节病、脂样肾炎、多发性硬化症、皮肌炎、寻常型天疱疮、原发性胆汁性肝硬变、原发性硬化性胆管炎、再发性多形红斑、慢性光化性皮炎、坏疽性皮下组织、红糠疹、韦格纳肉芽肿病、皮肤脉管炎、特应性皮肤炎、牛皮癣、多脓疱性类天疱疮。
39.根据权利要求38的用途，其中所述炎性慢性肠病选自局限性回肠炎、溃疡性直肠结肠炎、不定性结肠炎。
40.根据权利要求35-39任何一项的用途，还包括放射疗法、皮质类固醇或细胞毒性药物。
41.权利要求1-33任何一项中所要求保护的化合物或权利要求34中所要求的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
42.权利要求1-33任何一项中所要求保护的化合物或权利要求34中所要求的药物组合物作为探针的用途，该探针用于通过RacI/Vav系统评估式(I)化合物的结合性质。
43.权利要求1-33任何一项中所要求保护的化合物或权利要求34中所要求的药物组合物在疗法和/或治疗中的用途。
44.权利要求43中所要求保护的用途，其中所述疗法和/或治疗用于如下的一种或几种器官移植物的排斥与移植后肾病的排斥、涉及免疫系统的病理状况、炎性慢性肠病如局限性回肠炎、溃疡性直肠结肠炎、不确定性结肠炎或自身免疫性肠病、活动性慢性肝炎、类风湿性关节炎、斯蒂尔病、系统性红斑狼疮、获得性溶血性贫血、自发性血小板减少、结节性多关节炎、脉管炎、多脉管炎、多肌炎、重症肌无力、结节病、脂样肾炎、多发性硬化症、皮肌炎、寻常型天疱疮、原发性胆汁性肝硬变、原发性硬化性胆管炎、再发性多形红斑、慢性光化性皮炎、坏疽性皮下组织、红糠疹、韦格纳肉芽肿病、皮肤脉管炎、特应性皮肤炎、牛皮癣、多脓疱性类天疱疮、包括肾脏、心脏、肺、胰腺和肝脏移植在内的器官移植后的免疫抑制治疗。
45.制备权利要求1-33任何一项中所要求保护的化合物的方法，其中在鸟苷环的2位引入-NH-R基团包含以下步骤
a)保护三-O-乙酰基-肌苷的NH部分；
b)氧化的鸟苷环打开并且O-脱保护；
c)鸟苷环闭合并且通过使用CS2在鸟苷环的2位引入SH基团；
d)通过使用过量的脂肪族二胺用氨基连接体替换2位的SH基团。
46.根据权利要求45的方法，它包含进一步的步骤e)通过乙酰化保护核糖OH基团与伯胺基团。
47.根据权利要求46的方法，它包含进一步的步骤f)通过使用拉韦松试剂硫化C＝O基团。
48.参考随附的化学式与图实质上如本文所述的化合物。
49.参考随附的化学式与图实质上如本文所述的用途。
50.参考随附的化学式与图实质上如本文所述的方法。
51.参考随附的化学式与图实质上如本文所述的疗法和/或治疗的方法。
52.参考随附的化学式与图实质上如本文所述的药物组合物。
全文摘要
本发明涉及通式(I)的6-硫鸟苷三磷酸的类似化合物。通式(I)的化合物；其中糖部分中的虚线键可为单键或双键并且其中R1、R2、R3、R4或R5彼此相同或不同，具有通式-(Int)m-Ter，其中m在0和12之间并且Int与Ter为内部与末端的结构单元，其中Int选自由式(II)组成的组；并且Ter选自由式(III)组成的组。并且其中X代表芳环中的碳原子或氮原子，Y代表氧原子或硫原子并且另外的基团Q，一个基团Qi或多个基团Qi(Qi表示该一个基团或多个基团可以结合到所述环的任意不饱和部分)选自由如下基团组成的组-OH、-COOH、-N(CH3)2、-N(CH2-CH3)2、-CO-CH3、-CO-O-CH3、-O-CH3、-S-CH3、-SO2-CH3、-CN、-NO2或卤族元素，并且其中R5可以是式(IV)及其金属和铵盐，其中n在0和5之间，或者氧或磷被氮、硫、亚甲基基团或其衍生物部分或全部替代。本发明还涉及上述化合物在医药领域中的用途及其制备方法。
文档编号A61K31/708GK101243102SQ200680030229
公开日2008年8月13日 申请日期2006年7月24日 优先权日2005年7月22日
发明者G·纳卡里, S·巴罗尼 申请人:朱利亚尼国际有限公司