专性细胞内病原体的治疗和诊断的制作方法

专利名称：：专性细胞内病原体的治疗和诊断的制作方法专性细胞内病原体的治疗和诊断本发明涉及检测专性细胞内或膜相关病原体，例如衣嚴沐fC77/amyAa9、支嚴沐^^ycop/wmay>和厭嚴沐(77/^ap/asmaj禾中类。这可以用于，例如诊断和治疗病原体感染和病原体感染相关的疾病。目前，病原性微生物诊断的常规检测是基于宿主细胞的样本，例如从拭子中获得的。这些检测获得的结果可变性很高，改进检测病原体的方法是人们所期待的。本申请的发明人发现细胞内或膜相关病原体细胞可以在血液的非细胞成分例如血浆和血清中灵敏而可靠地检测到。这些细胞，可以是原生小体，或者其他细胞形式，呈现出一种不能被常规检测可靠检出的独特病原体持久形式。在患者血浆和血清中检测这些病原体细胞可用于发现病原体感染和评估病原体相关疾病病况。本发明的一些方面涉及评估个体遭受病原体感染的方法，其包括测定从个体获得的血液样本中病原体细胞的存在。病原体细胞的存在可以指示病原体感染。病原体细胞可以包括专性细胞内病原性微生物持久形式的原生小体。优选的，细胞的存在通过测定血液样本中病原性微生物中核酸的存在而被测定。一种方法可进一步包括浓缩或富集样本中的病原体细胞，例如原生小体，例如采用特异性结合元件以产生富集或浓縮的部分。一种评估个体感染专性细胞内病原性微生物持久形式的方法可以，例如，包括使来自个体的血液样本与特异性结合元件接触，以分离或纯化所述样本的部分，并且；在所述部分中测定病原性微生物核酸的存在。分离和/或纯化的部分可包括提高了浓度的与血液样本有关的病原性微生物的原生小体或其他持久形式的细胞。样本或分离部分中病原性微生物核酸的存在指示样本或分离和/或纯化的部分包括病原性微生物的原生小体或其他持久形式的细胞，并且个体被一种专性细胞内病原性微生物的持久形式感染。优选的用于本发明这些方面的特异结合分子包括抗体和片段或者其衍生物('抗体分子')。采用特异结合元件例如抗体分离和/或纯化样本的部分和成分可以通过任何合适的技术实现并且本领域技术人员能够根据他们的偏爱和公知常识而选择合适的方式。在一些优选实施方式中，原生小体或其他病原体细胞的存在可以在血液样本(即在血浆或血清中)的非细胞部分中检测到。非细胞部分可被包含在全血样本中或者在检测之前从全血样本中分离以产生非细胞血液样本(S卩一种血浆或血清样本)。这里所描述的方法包含从个体获得的血液中提供一个非细胞样本(即一种非细胞血液样本)。一种非细胞血液样本是一种来自个体的血液样本，其不含有个体的血细胞，即其它没有红血细胞，白血细胞，血小板和在血液中发现的其他宿主细胞。一种非细胞血液样本可以，例如，是一个包含凝血因子的血浆样本，或者一个缺少凝结因子的血清样本。一种非细胞血液样本可以通过从来自个体的血液样本中去除血细胞而产生。血细胞可通过任何常规方法从血液样本或制品中去除。例如，细胞可以通过离心去除，通常在2,000gIO分钟，或通过过滤，例如通过柱、膜、滤器或其他分离装置。病原体细胞是病原性微生物的单个单位并且包括原生小体，网状小体和其它形式的微生物。持久感染是指其中病原体没有被宿主应答或药物治疗清除，而仍然存在于被感染个体的特异细胞中或结合在膜上的感染。这里所述的评价个体可以是哺乳动物，优选人类。个体可以是健康的，即没有表现出病原体感染或者病原体相关疾病的症状(即无症状的)，或者可以显示一种或多种与病原体感染或者病原体相关疾病有关的症状。在一些实施方式中，个体被怀疑患有或者有风险患上某种病原体感染或者相关疾病。样本可以与特异结合元件接触，其结合到包含一个或多个血浆/血清分子的复合物以分离和/或纯化包含一个或多个所述复合物的部分。一个或多个血浆/血清分子可以是抗体，而复合物可以是一种免疫复合物。特异结合元件可以结合到免疫球蛋白上，并因此结合样本中的免疫复合物。合适的特异结合元件包括蛋白A，或抗-Ig、抗-IgA、抗-IgM抗体，或其他免疫球蛋白或免疫复合物结合/捕获分子。一个或更多血浆/血清分子可以是血清脂蛋白或脂多糖结合蛋白(LBP)。特异结合元件与这些血清脂蛋白或脂多糖结合蛋白结合，例如抗-脂蛋白或抗-LBP抗体。病原体细胞优选一种专性细胞内或膜相关病原性微生物，特别是专性细胞内病原性细菌的持久形式。例子包括衣原体中类的细菌，例如^^炎衣/資'沐pwewmom'aeJ或^、/^^"嚴沐frac/zowa&J，或支原体科种类，例如一种支原体例如生^"支嚴沐^^co;/asmage""a//ww」，或者一种脲原体例如》,^^^辰沐ft/rea//<xsm<afwea(y"cwmJ。细胞可以是，例如，一种呼吸道病原体，例如^敲炎衣嚴沐p"ewmom'aeJ或者一种生殖或尿道病原体，例如汐^衣嚴沐fC.Zrac/2。顧toJ、生遭支嚴沐(M戸//as腸gem'to//—或,,,嚴沐例如，一种评估个体衣原体感染的方法可以包括测定从个体获得的血液样本中衣原体细胞的存在。衣原体可以是,，炎衣嚴体戶wmom'G"或^、淑衣嚴沐frac/wm"toJ细胞。在病原体是/《炎^"嚴沐;"^mom'ad的实施方式中，血液样本优选这里所描述的非细胞血液样本。一种评估个体支原体科感染的方法可以包括测定从个体获得的血液样本中支原体细胞的存在。支原体科细胞可以包括支原体或脲原体细胞。支原体细胞可以是f遭:^嚴沐fMycop/aswagem'to//w—细胞。脲原体细胞可以是嚴嚴沐ft/rea//a環aMrea(y"cwmJ细胞。这里所描述的方法可用于评估病原体相关疾病或病况。一种评估个体病原体相关疾病的方法可以包括测定从个体获得的血液样本中病原体细胞的存在。病原体细胞的存在指示病原体相关疾病或病况的存在。评估个体病原体相关疾病可以包括在个体中诊断病原体相关疾病；在个体中测定病原体相关疾病的存在；或在个体中检测病原体相关疾病。在其他实施方式中，可以评估个体中病原体相关疾病的严重程度和预后或者可以确定个体在未来患上病原体疾病的风险。与,炎衣嚴^(T.，ewmom'a"相关的疾病可以包括呼吸、关节、大脑或血管疾病，包括，例如，动脉粥样硬化的病况。一种动脉粥样硬化的病况可以包括心血管疾病，例如动脉粥样硬化、缺血性心脏病(冠心病)、心肌缺血(心绞痛)、心肌梗塞、动脉瘤疾病、外周血管粉瘤病、主动脉骼动脉疾病、慢性临界下肢缺血、内脏缺血、肾动脉疾病、脑血管疾病、中风、动脉粥样硬化视网膜病、血栓症和异常血凝，以及高血压。这些病况可以是医学或者兽医学的病况。与^、^T衣嚴沐^Wrac/zom油'W相关的疾病包括例如阴道、宫颈、子宫内膜、输卵管、前列腺、膀胱、尿道的慢性炎症和生殖功能紊乱，或关节病。与支原体和脲原体相关的疾病包括肺炎或其他呼吸疾病，子宫、阴道、宫颈、子宫内膜、输卵管、前列腺、膀胱、尿道的慢性炎症和生殖功能紊乱。适合采用本方法检测的个体可以显示急性生殖器感染症状。本方法可以在常规PCR拭子或尿检中被诊断为阳性的患者确认病原体感染的存在，嚴沐0#^^,嚴沐r^rea;/^ma)f^p.)，或者在常规PCR拭子或尿检中被诊断为阴性的患者中确定感染的存在。其它适合于这里所描述的检测的个体可以不显示急性生殖器感染症状，但是可以显示子宫、输卵管、前列腺、膀胱、尿道等的慢性炎症症状。这些患者通常在常规PCR拭子或尿检中被诊断为阴性。采用本方法对病原体例如^、/^凌嚴沐fC7z/am_y<i/"frac/zcwa^、J、主M"^"嚴沐("Afyco//(a^wagemW,—、ifi厥嚴沐WWi嚴沐ft/層//(xy腸w層/,.c謂JJ>的阳性检测将确认慢性感染的存在。其它适合于这里所描述的检测的个体可以是有不孕不育问题而不能排除生殖系统存在慢性无症状炎症的人。病原体例如沙淑衣嚴体fC7/函—,afrac/zo扁"d、-生遭支嚴沐(71^0//<3纖0g簡W/画J、i乂桑沐n,/^l^嚴沐wrea(y"cwmJJ(^7p.)与f荒产有关，因lt匕用本方法检测出感染可用于治疗不孕不育问题。这里所描述的方法还可以用于监控和检验治疗后病原体感染的消除和防止病原体感染的传播，例如源自常规检测为阴性而本方法检测为阳性的个体的输血或其血液制品的使用。优选的，病原体细胞在样本中的存在，例如一种原生小体，通过浓縮、分离和/或纯化样本中的病原体细胞而被评估，例如在检测之前产生一种富集原生小体或其他病原体细胞的分离和/或纯化的部分。在某些实施方式中，样本通过分离、纯化和/或浓縮包含原生小体和其它病原体细胞的样本中的复合物，或者包含这样复合物的样本部分而被浓缩。在分离的、纯化和/或浓縮的复合物中的病原体细胞于是可以被测定。包含病原体细胞，例如原生小体或其他形式病原体细胞的复合物可进--步包含一种或多种血浆/血清分子，例如免疫球蛋白分子、血清脂蛋白、脂多糖结合蛋白或其他存在于血清和/或血浆中的细菌结合分子。例如，原生小体或其他病原体细胞可以被包含在具有一种或更多抗体的免疫复合物中。细胞可以通过分离、纯化和/或浓縮来自所述样本的免疫复合物而被浓縮，例如利用一种免疫球蛋白结合试剂。在本领域中有很多技术用于分离和/或纯化复合物并且可以用于浓縮原生小体或其它病原体细胞。这些包括物理和化学/生物技术和其组合。例如，样本可以和免疫球蛋白结合试剂，例如蛋白A或一种抗Ig抗体相接触，未结合的材料被清除或洗掉。结合到试剂的免疫复合物可采用常规技术洗提或直接检测病原体细胞的存在。或者，样本可以通过过滤，例如采用硅凝胶柱。或其他具有合适的孔径尺寸适合于保留病原体细胞和/或其复合物的合适的滤器。在样本或其浓縮部分中的原生小体或其它病原体细胞可通过任何常规方法测定。例如，免疫化学检测(例如，ELISA)，或核酸检测(例如，PCR)，细胞培养方法，或动物实验。在某些实施方式中，细胞培养检测可用于检测样本中病原体细胞的存在。样本可以，例如，在适合于被检测样品中的病原体和病原体细胞生长的条件下培养。细胞培养和鉴定病原性微生物，例如,炎玄嚴沐fC戸e^7。m'a"、#、/^衣屑-沐(TC.frac/zo附a"sJ、生^"支嚴沐(^fyco//os附age""a/Zwmj禾口角军脲脲原体(J^^厭嚴体a/"a;/a^^wea/;;"CMm"的技术是本领域公知的。在其他实施方式中，一种非人动物模型可以被用于检测样本中病原体细胞的存在。一种动物模型，例如一种啮齿类，可以被灌输所述样本并且在所述动物模型中测定病原体感染的存在。动物中感染的存在指示样本中病原体细胞的存在。在其他实施方式中，一种免疫化学检测(例如，ELISA)可以用于检测样本中病原体细胞抗原的存在。例如，一种在血液样本中测定病原体细胞存在的方法可以包括使样本与一种特异结合病原体细胞的抗体接触；以及，测定所述抗体的结合。特异性结合病原体细胞的抗体可以与病原体细胞的特征性抗原结合并且不会显示与其他病原体种类细胞的明显结合。特异性结合病原体，例如#炎衣辰沐/we謂謹'aeJ、沙淑衣嚴沐Zrac/70謹"sJ>、主遭支抗体是本领域公知的。抗体分子的结合可以通过任何合适的方法测定。标记各个报道分子是一个可行的方法。报道分子可以直接或间接产生可检测，优选可测量的信号。报道分子的连接可以是直接或间接的，共价的，例如通过肽键，或者非共价的。经过肽键的连接可以是编码抗体和报道分子的基因融合重组表达的结果。例如，抗体可采用荧光团标记，例如FITC或若丹明，一种放射性同位素，或一种非同位素标记试剂，例如生物素或地高辛；含有生物素的抗体可以通过"检测试剂"，例如共扼在预定标记例如荧光染料上的抗生物素蛋白来检测。在某些实施方式中，另一种抗体可以被加入来检测第一抗体的结合。测定结合的模式不是本发明的特征，本领域技术人员可以根据他们的偏爱和公知常识选择合适的模式。合适的方法包括免疫组化染色、免疫细胞化学染色、蛋白印迹(WesternBlotting)、免疫荧光/酶联免疫吸收检测(ELISA)/放射免疫检测(RIA)、免疫放射检测(IRMA)和免疫酶检测(IEMA)，包括釆用单克隆和/或多克隆抗体的夹心检测。所有这些方法是本领域公知的。用于这里所描述的方法中的抗体可以是固定或非固定的，即在溶液中游离的。在优选实施方式中，一种核酸检测被用于检测核酸的存在，例如来自样本中的病原体的DNA或RNA。在某些优选实施方式中，核酸可以是分离或提取自样本的。优选地，核酸被非特异的分离或提取，即样本中所有的核酸被从样本的其它成分，例如蛋白质中纯化和/或去除。在分离或提取的核酸中病原体核酸的存在随一种方法可以，例如，包括从个体中获得的血液样本中分离和/或纯化复合物，例如免疫复合物，从复合物中分离和/或提取DNA，并且；在提取的核酸中检测病原体核酸的存在。从样本中提取核酸的很多合适方法是本领域公知的并且被采用，包括硅凝胶膜柱，例如QIAampDNA血液袖珍试剂盒(QIAGen)、Chelex螯合树脂(Chelex100，Sigma)、或者高纯度PCR模板制备试剂盒(BMkit，Boehringer)等。DNA还可以通过常规的蛋白酶K苯酚氯仿方法提取。RNA可以，例如，采用Trizol方法(Invitrogen)常规分离。用于处理核酸的技术和方法，包括提取，分离和纯化核酸在以下文献中被详细公开CurrentprotocolsinMolecularBiology，Ausubel等，eds.JohnWiley&Sons,1992，禾口MolecularCloning:aLaboratoryManual:3rdedition,Russell等.，2001，ColdSpringHarborLaboratoryPress。样本中病原体核酸的存在可以核酸提取后随意被测定，可采用任何合适的技术，包括核酸扩增(NAA)技术和非核酸扩增技术，包括DNA探针杂交技术例如Northern禾PSouthern印迹。在一些优选实施方式中，病原体核酸的存在通过核酸扩增技术，例如聚合酶链反应(PCR)而被测定。PCR包括模板核酸的变性，引物和模板的退火，以及引物随模板的延伸这些重复的循环过程。PCR是本领域公知的，并且在例如"PCR方案；AGuidetoMethodsandApplications",Eds.Innis等，1990，AcademicPress,NewYork,Mullis等，ColdSpringHarborSymp.Quant.Biol.，51:263，(1987)，Ehrlich(ed)，PCRtechnology,StocktonPress,NY，1989，和Ehrlich等，Science,252:1643-1650，(1991))中被公开。循环的数量，每一步的具体条件，反应管中试剂的组成，或任何其他反应的参数可以由本领域人员根据情况作出变化或调节。附加的步骤(例如初始变性，热启动，触地，酶延吋释放PCR，重复PCR)也可以被采用。PCR的变种包括嵌套PCR，其中第二次扩增采用来自第一次扩增产品之内的第二对引物，和RT-PCR(逆转录酶PCR)，在其中RNA被逆转录成cDNA并随后采用PCR扩增。实时PCR(或者实时逆转录酶PCR)是一种高灵敏度检测方法，其定量校板的起始数量(Arya等，2005，ExpertRevMolDiagn.5:209-219;Klein，2002，TrendsMolMed8:257-260)。在某些实施例中，可以采用实时PCR。PCR和RT-PCR的众多变种和修饰种是本领域已知的，并且可以由本领域人员在实现本方法时采用。进行PCR或RT-PCR反应的化学药品、试剂盒、原料和试剂是可商购的。其他特异的核酸扩增技术包括链置换激活、QB复制酶系统、修复链反应、连接酶连锁反应、结扎活化的转录、SDA(链置换扩增)和TMA(转录介导的扩增)。为了方便，并且因为它通常是优选的，这里上下文所用的术语PCR涵盖了本领域技术人员所用的其他核酸扩增技术。除非上下文中另有所指，PCR应该覆盖本领域可得到的任何合适的核酸扩增反应。病原体核酸的存在可以通过病原体特异扩增而被测定。病原体特异扩增仅仅发生在病原体核酸存在于样本中时。随着病原体特异扩增产生的扩增产物指示样本中存在病原体细胞。病原体特异扩增通常采用一种或更多病原体特异引物来实现，例如，在PCR中，一个或两个引物可以与病原体核酸特异地杂交，这样扩增产物仅仅在样本中存在病原体核酸时通过引物产生。利用PCR特异检测样本中病原体是本领域公知的并且本领域人员精通于设计合适的引物，反应条件等。合适的引物包括具有10或更少密码子的寡核苷酸(例如6、7或8)，即长度为大约30或更少核苷酸(例如18、21或24)。通常，特异引物的长度在14核苷酸以上，但是不需要多于18-20。各种软件适合于设计引物，包括PrimerExpressTM、PrimerPremier5TM、FastPCRTM、Primo丁M和01igoTM。合成寡核苷酸引物的各种技术是本领域公知的，包括磷酸三酯和磷酸二酯合成方法。定制的寡核苷酸引物可以从各种商业来源获得。基于现有的序列信息，对于本领域人员来说设计仅仅扩增来自特异病原体的核酸的合适引物是常规的，例如一种衣原体，例如#，炎衣嚴沐广C.J或^、淑衣嚴沐rC.frac/zoma"d。对应于来自特异病原体的核酸序列的引物特异性可以通过将引物序列与来自其他病原体的基因组核酸序列相比较而确定，例如，在序列数据库中的基因组核酸序列。优选地，来自系统发育相关病原体的基因组核酸序列拿来与引物序列相比较。与来自系统发育相关病原体的基因组核酸序列相比显示出很少或者无序列相同的引物在针对这样序列的扩增条件下被预知是很少或不会杂交的，并且被认为是对具体病原体特异的。例如，针对来自^^"炎衣嚴体^7z/w>y^/7"ewwom'ad核酸引物的特异性，可以通过将引物序列与来自衣原体科其它成员的基因组核酸序列相比较而确定。例如，引物的特异性可以通过将引物的靶DNA序列与GenBank数据库中其它细菌和真核有机体的DNA序列相对比而确认。序列比较可以采用常规序列分析软件进行，例如BLAST,TBLASTN(其采用Altschul等人，(1990)/Mo/.肠/.215:405-410的方法)，psi-Blast(Nucl.AcidsRes.(1997)253389-3402)或者FASTA(其采用Pearson禾卩Lipman，(1988)/WASOS^85:2444-2448的方法)。或者，针对特异病原体核酸序列的引物特异性，例如一种衣原体细胞，例如,，炎衣嚴沐rC7z/aw;^'a/3"ewwom'aeJ,可以通过采用引物在来自微生物平板的基因组核酸上进行核酸扩增而被测定。仅仅扩增目标病原体的基因组核酸的引物对于该病原体可能是特异的。许多种类的基因组序列是可获得的并且可以被用于鉴别对于特异病原体独一无二的核酸序列和可以用作设计病原体特异扩增引物的靶标。例如，,*炎衣嚴体rC/z/aw;^/a/wewwom'ae^的基因组，例如，具有数据库参考值gil5835535，NC—002491.1;gil5617929，NC—000922.1;gi33241335，NC一005043.1;和gi58021288和NC—002179.2。其它病原体的基因组也可以从公共数据库中获得。针对一种病原体特异的引物在扩增条件下与该病原体基因组内的靶核酸序列杂交，该靶序列对于该病原体是独一无二的并且在其他病原体中没有发现，特别是在系统发育相关的病原体中，即引物在扩增条件下除了靶病原体之外不会与其他病原体的基因组内的核酸序列杂交。例如，/，炎衣嚴沐化.戸ewmm'ad特异引物在扩增条件下不会与沙淤衣嚴体Zrac/wJ基因组中的序列杂交并且反之亦然，以及Mgem'to//ww特异引物在扩增条件下不会与f/."r^/;^cMm基因组中的序列杂交。例如，fC77/am_yc//a/wewmom'aeJ牛寺异弓l物可以，例如，扩增部分16SrRNA基因(数据库登记号L06108.1GI:174111)或者/，炎衣嚴沐fC/wewmom'aeJ的om;^4基因的可变区域IV(VDIV)。针对厥炎衣嚴沐rr.戶ewwow'ad的16SrRNA基因的引物可以选自以下组成的组CPN90:5，GGTCTCAACCCCATCCGTGTCGG3'CPN91:5'TGCGGAAAGCTGTATTTCTACAGTT3'(Madico等，JClinMicrobiol.2000Mar;38(3):1085-93.)探针553:5'-CAAGTCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGC-3'探针557:5'-TCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGCATCG-3'5，TTACAAGCCTTGCCTGTAGG3'5'GCGATCCCAAATGTTTAAGGC3'5,TTATTAATTGATGGTACAATA3'5'ATCTACGGCAGTAGTATAGTT3'CpnA5'TGACAACTGTAGAAATACAGC3'CpnB5'CGCCTCTCTCCTATAAAT3'针对/*炎衣/f#TC./"ewwom'ae9的om/」基因的可变区域IV(VDIV)的引物可以选自以下组成的组Cpn5P:5'CCAATATGCACAGTCCAAACCTAAAA3'Cpn3P:5'CTAGATTTAAACTTGTTGATCTGACAG3'Cpn5N5'CTCTGTAAACAAACCGGGC3'Cpn3N5'GATCTGACAGGAAACAATTTGCAT3'克隆的HL15'GTTGTTCATGAAGGCCTACT3'HR15'TGCATAACCTACGGTGTGTT3'(Nested)CP15'TTACAAGCCTTGCCTGTAGG3'CP25'GCGATCCCAAATGTTTAAGGC3'CPC5'TTATTAATTGATGGTACAATA3'CPD5'ATCTACGGCAGTAGTATAGTT3'#、淑衣嚴体fC7z/a^yAafrac/wwafeJ特异引物可以，例如，扩增该病原体的部分隐蔽性质粒(参见，例如，X06707.2GI:4691224)。合适的沙源衣辰沐fC7z/"w;^'a/rac/zow^/W特异引物包括.-CP24-5，GGGATTCCTGTAACAACAAGTCAGG3'CP27-5'CCTCTTCCCCAGAACAATAAGAAC3，.生遭支嚴沐(^>^^/"^^<^""0//^^特异引物可以，例如，扩增全部或部分的140kDa粘着蛋白基因，MgPa(JensenJS等，J.Clin.Microbiol.1991Jan;29(1):46-50;M31431.1GI:150157)。合适的.生遭支嚴沐卩i^co//o纖agem'a"ww戶寺异引物包括MgPa-1-5'AGTTGATGAAACCTTAACCCCTTGG3'MgPa-3-5，CCGTTGAGGGGTTTTCCATTTTTGC3't/rea//a;wrea(y〃ca特异引物可以，例如，扩增t/reflp/asma脲酶基因的全部或部分(BlanchardA等，ClinInfectDis.1993Aug;17Suppll:S148-53;AF085724.2GI:9967025)。合适的i>ea//asmawrea(y"ca特异引物包括Ul-5，GATGGTAAGTTAGTTGCTGAC3'U2-5,ACGACGTCCATAAGCAACT3，.随着样本病原体特异扩增，扩增产物的存在可以被检测。在病原体特异扩增后扩增产物的存在指示样本中病原体细胞的存在。检测核酸扩增产物的多种技术是本领域公知的。合适的技术，例如，包括凝胶或毛细管电泳、色谱、阵列杂交、链置换扩增(SDA)或测序。扩增的核酸产物的检测和/或分离可以需要标记核酸片段，在扩增反应的同时或随后进行。本发明的其他方面涉及提供用于在细胞或非细胞血液样本中检测病原体细胞的试剂盒，例如检测病原体感染或评估与病原体相关的疾病。上面所描述的病原体特异引物可形成试剂盒的一部分，例如在一个合适的容器中，例如一个小瓶，在其中的内容物被保护不受外界环境的干扰。用于检测病原体感染或评估个体患有病原体感染相关疾病的试剂盒可以包括一个或多个病原体特异引物采用引物扩增来自血清样本中的病原体特异核酸所用的试剂，和；检测采用引物扩增的血清样本的产物所用的检测试剂。检测试剂可包括缓冲溶液，清洗液等。试剂盒可进一步包括用于转移，处理和储藏血液样本的装置和/或用于从血液样本中转移血细胞的工具。合适的的工具可以包括过滤装置。试剂盒可进一步包括用于分离和/或纯化含有所述持久病原体感染的原生小体的血液样本的部分的特异结合元件。合适的特异结合元件包括用于分离和/或纯化血液样本中中免疫复合物的免疫球蛋白结合试剂。免疫球蛋白结合试剂包括蛋白A和抗Ig抗体。免疫球蛋白结合试剂可以被固定在固相支持物或基质上。试剂盒可进一步包括用于分离和/或纯化要采用所述引物扩增的DNA的装置。合适的装置是本领域公知的，在这里不作描述。试剂盒还可以包括在血清样本上使用病原体特异引物的说明，例如这里所述的检测病原体感染或与病原体相关的疾病的方法。本发明的另一方面提供了一种分离专性细胞内或膜相关病原性微生物持久形式的细胞的方法，包括分离和/或纯化从包含所述持久形式细胞的个体获得的血液样本的部分，分离和/或纯化来自所述部分的所述细胞。细胞可以是微生物持久形式的原生小体。分离的原生小体或者其他细胞可以来自专性细胞内或膜相关病原性微生物的持久形式，选自以下组成的组,，炎衣嚴沐fC.p"wmom^"、沙源衣嚴沐frflc/oma"s,、生M^嚴銜M戸p/as麵炉"a"—或,厥l屑沐fLVe"//(xy附"wrea/_y〃cMmJ。分离的原生小体或持久形式微生物的其它细胞可能感染细胞以产生LPS缺陷和抗生素敏感的网状小体，相对于所述微生物的参照菌株。分离的原生小体或其他细胞还可以具有非典型形态的小细胞内含物。合适的专性细胞内或膜相关病原性微生物的参照菌株包括^银炎衣嚴沐pwewwom'aeJTW-183、AR-39、Kajaani6、沙凝衣嚴体frac/zomfl/^,Bu434、—生^"支嚴沐f^^co/7/asmagem'to"w附9G37禾口M30禾口Jf^",嚴沐0/reap/氾maweafy"ciw^血清型1至10。这些可以从商业培养收集中心中得至U(例如欧洲细胞培养收集中心(ECACC)，SalisburyUK)持久形式微生物的原生小体或其它细胞可采用常规浓縮技术分离和/或纯化，例如吸附，过滤或超速离心法。在某些实施方式中，分离的原生小体或其他细胞可以来自^^炎衣嚴/,fC/z/amj^z'ap"ewwm'ae9的持久形式，其能感染细胞以产生不表达Omp2(60kDa)、Omp3(9kDa)或PmpD，并且表达高水平Hsp60的网状小体；并且相对于沙淑衣嚴沐fC7z/am;^afrac/zowa"J的参照菌株MOMP水平降低。在某些实施方式中，分离的原生小体或其他细胞可以来自^，炎玄嚴沐^^/fl^>^'p"wmom'ad的持久形式，其能感染细胞以产生不表达LPS的网状小体并包含相对于/，炎^"屑'沐fC77/aw>^/ap"eMwom'aeJ参照菌株尺寸减小了的内含物。本发明的另一方面提供了产生被专性细胞内或膜相关病原性微生物持久形式感染的宿主细胞的的方法，包括分离和/或纯化来自包含所述持久形式的原生小体的个体的血液样本部分，使一定种群的宿主细胞与部分接触，并且鉴定在所述种群中的宿主细胞，其包含微生物的持久形式。专性细胞内或膜相关病原性微生物的合适宿主细胞包括培养的哺乳动物细胞例如McCoy、HL、Hep-2或HeLa细胞。鉴定后含有微生物持久形式，例如含有细胞内网状小体的形式的宿主细胞可以被分离和/或纯化。鉴定后的宿主细胞可以被进一步培养。培养哺乳动物细胞的方法和技术是本领域公知的(参见，例如，BasicCellCultureProtocols'C.Helgason，H應anaPressInc.U.S.(15Oct2004)ISBN:1588295451;HumanCellCultureProtocols(MethodsinMolecularMedicineS.)HumanaPressInc.,U.S.(9Dec2004)ISBN:1588292223;CultureofAnimalCells:AManualofBasicTechnique,R.Freshney，JohnWiley&SonsInc(2Aug2005)ISBN:0471453293，HoWY等，JImmunolMethods.(2006)310:40-52)。可采用标准的哺乳动物细胞培养条件，例如37。C、21%氧、5%二氧化碳。培养基优选每两天更换并且细胞在重力作用下可以贴附。专性细胞内或膜相关病原性微生物可选自如下组成的组^"炎衣嚴沐戶e謂函.ae入沙淑波嚴沐fC.加c/z謹(3^y入主遭支屑浙Myc。//o顧gew/to/Zww」禾口i^^,嚴沐rt/reap/wwafwea(y"cwwJ，其在上文中更力口详细描述过。本发明的另一方面提供了一种含有专性细胞内或膜相关病原性微生物持久形式的宿主细胞，其可通过上述的方法获得。宿主细胞可包含一个或多个细胞，以专性细胞内或膜相关病原性微生物持久形式的网状小体形式，其与微生物的参照菌株相比抗生素敏感降低。专性细胞内或膜相关病原性微生物持久形式的网状小体与所述微生物的参照菌株相比脂多糖可减少的或没有。专性细胞内或膜相关病原性微生物持久形式的网状小体与所述微生物的参照菌株相比可能基因表达有改变。在某些实施方式中，网状小体可以不表达特定的基因，该基因通常被参照菌株表达，例如在一种急性形式的感染中，并且可以表达参照菌株不表达的基因。网状小体还可以与参照菌株相比过表达、低表达或其他非正常表达其它的基因。例如，沙^在—嚴沐0^/"mj^7arac/20wa&9持久形式的网状小体不表达Omp2(60kDa)、Omp3(9kDa)或PmpD;并且，与^、^f衣嚴沐fCWamj^/afrac/wma"、J的参照菌株相比，表达Hsp60的水平提髙；而MOMP的水平降低。本发明的其他方面涉及筛选化合物的方法，这些化合物可用于治疗这里所述的病原体感染相关的病况。一种筛选抗菌化合物的方法，可包含使感染了这里所述的专性细胞内病原性微生物持久形式的宿主细胞与待测化合物接触；并且测定所述化合物对所述宿主细胞中病原性微生物的作用，其中与对照相比所述宿主细胞中所述病原性微生物数量的减少指示待测化合物是一种抗菌化合物。优选地，待测化合物对宿主细胞无毒。待测化合物的浓度范围或制备可以首先认定其对宿主细胞无毒。宿主细胞随后与浓度范围内的待测化合物接触以测定其对病原性微生物的作用。实现这里所述的方法的精确模式可以被那些本领域技术人员根据常规技术和知识作出改变。采用这里所述的方法筛选的化合物可以是天然的或用于药物筛选程序化学合成的化合物。也可以采用含有几种特征性或非特征性成分的植物、微生物或其他微生物的提取物。组合库技术提供了有效的方法，其能够检测潜在的巨大数量的能够调节一种相互作用的化合物。对于所有形式的天然产物，小分子和肽，及其他，这样的库及其用途是本领域公知的。在特定的情况下优选肽库。待测化合物数量或可被加入本发明方法中的化合物通常通过系列稀释试验而确定。通常，可采用从大约0.001nM至1mM或更多假定的抑制剂化合物，例如从0.01nM至100pM，例如0.1至50pM，例如大约10(xM。一种方法可以包括鉴别待测化合物为一种抗菌化合物。这样的化合物可以，例如，用于减少或消除这里所述微生物的感染，例如可用于如这里所述的治疗感染或感染相关病况。一种采用一个或多个初步筛选鉴别出来的具有在所述宿主细胞中与对照相比能减少所述病原性微生物数量的能力的待测化合物，可以采用一个或多个二次筛选进行进一步的评估。二次筛选可以，例如，涉及在动物模型中检测其对微生物感染或对与微生物感染相关的疾病的作用。待测化合物可以被分离/或纯化或者，它可以采用重组表达或化学合成的常规技术而合成。而且，它可以制造和/或用于制备，即，制造或配制一种组合物，例如药剂、药物组合物或药物。这些可以给予个体用于治疗微生物感染或与微生物感染相关的疾病。本发明的方法因此包含将待测化合物与药学上可接受的赋形剂、载体或载体一起配制成药物组合物用于治疗用途，如下进一步所述。在鉴定一种化合物具有抗菌活性之后，方法可进一步包括修饰该化合物以优化其药物特性。对于鉴定为具有生物活性的"先导"化合物进行修饰是药物研发领域公知的方法并且对于很难合成或合成很昂贵的活性化合物或对于不适于特定给药方法的化合物来说是非常有用的，例如肽由于很容易被消化道中蛋白酶快速降解而不适合于制备口服组合物活性剂。对一种已知活性化合物的修饰(例如，产生拟似物)可以用于避免盲目筛选对应于目标特性的大量分子。对"先导"化合物修饰以优化其药学特性包括几个步骤，首先，化合物对于确定目标特性关键和/或重要的特有部分被测定。在肽的情况下，这可以通过系统改变肽中的氨基酸残基而进行，例如通过依次取代每个残基。这些组成化合物活性区域的部分或残基被称为"药效团"。一旦药效团被发现，它的结构根据其物理特性而被模型化，例如，立体化学、键、大小和/或电荷，采用多种来源的数据，例如分光镜技术、X射线衍射数据和NMR。计算分析、相似性图谱(其模拟药效团的电荷和/或体积，而不是原子之间的键)以及其它技术可以用于这种模拟过程。在这种方法的变体中，抗菌化合物的三维结构被模拟。这特别适用于化合物改变构象，允许模型在优化先导化合物时考虑这一点。模板分子随后被选择，在其上嫁接模拟药效团的化学基团。模板分子和嫁接在其上的化学基团可被常规选择以便修饰的化合物容易地合成，药理学上能够被接受，并且不在体内降解，同时保持先导化合物的生物活性。通过这种方法发现的修饰化合物可以随后进行筛选以观察它们是否具有目标特性，或显示目标特性的程度。修饰的化合物包括先导化合物的拟似进一步的优化或修饰可以随后进行以获得一种或多种最终化合物用于体内或临床试验。如上所述，鉴定的和/或采用本方法获得的化合物可以配制在药物组合虽然对于一种活性抗菌化合物有可能单独给药，优选的是将其作为药物组合物(例如制剂)呈现，其包含至少一种如上所限定的活性化合物，和一种或多种药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂、稀释剂、填充剂、缓冲剂、稳定剂、防腐剂、润滑剂，或其他那些本领域公知的材料和任选的治疗或预防剂。药物组合物包含如上限定的抗菌化合物，例如，一种抑制剂与一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂、缓冲剂、佐剂、稳定剂，或其他如这里所述的原料，相混合或配制在一起，可以被用于这里所描述的方法。术语"药学上可接受的"这里用于指化合物、原料、组合物和/或药剂形式，其在合理的药物判断范围之内，适合于与主体(例如人)的组织接触而没有过多的毒性、刺激、变态反应，或其他问题或并发症，有相称的合理益处/风险比例。每个载体、赋形剂等，在与其它组合物成分相一致的意义上，也必须是"可接受的"。合适的载体、赋形剂等可以在标准制药手册中找到，例如，Remington'sPharmaceuticalSciences,18thedition,MackPublishingCompany，Easton，Pa.，19卯。制剂可以常规地存在于单位药剂形式中并且可以被制药领域公知的任何方法制备。这样的方法包括将活性化合物加入到载体中的步骤，载体组成了一种或更多必需的成分。通常，制剂通过将活性化合物均匀而密集的加入液体载体中或者充分分散入固体载体中或两者均采用而被制备，然后如果需要该产物成形。制剂可以是如下形式液体、溶液、悬浮液、乳剂、酏剂、糖桨、片剂、锭剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、扁囊剂、丸剂、针剂、栓剂、阴道栓剂、软膏剂、凝胶剂、贴剂、霜剂、喷雾剂、合剂，泡沫剂、洗剂、油、大药丸、干药糖剂或气雾剂。本发明的其他方面涉及采用这里所述的方法来治疗和监控与病原体相关的病况。一种治疗病原体感染相关病况的方法可以包括给个体施用一种抗菌化合物；以及，在给药之后在来自个体的血液样本的非细胞部分中测定病原体细胞的存在。给予个体抗菌化合物可以重复进行直到在血液样本的非细胞部分中找不到病原体细胞。在血液样本的非细胞部分中检测病原体细胞的存在的方法在以上已经详细描述过了。病原体可以是专性细胞内或膜相关病原性微生物的持久形式。一种治疗专性细胞内或膜相关病原性微生物持久感染的方法可以包括i)给个体施用抗菌化合物；ii)在给药之后从个体获得血液样本；iii)采用特异结合元件与所述血液样本接触以分离和/或纯化所述样本的部分，以及；(iii)在所述样本的所述部分中测定病原性微生物核酸的存在；iv)重复步骤i)至iii)直到在来自样本的部分中检测不到来自病原性微生物的核酸。用于在样本的所述部分中检测病原性微生物中核酸存在的方法在以上已经详细描述过了。一种抗菌化合物杀死或抑制微生物的生长，特别是病原性细菌，例如C7z/謹—J7;.或A^yco//a扁齒ce"spp.。合适的抗菌化合物包括红霉素、利福拉齐、罗红霉素、氧氟沙星、克林沙星、环丙沙星、氯林可霉素、阿奇霉素、强力霉素、美满霉素、四环素、莫昔沙星、利福平、coarithromycin、grepafoaxcin、左氟沙星、曲伐沙星、特利霉素、克拉霉素、喹诺酮类和/或其他氟喹诺酮、大环内酯类、酮内酯类，或来自其他组的抗菌药物。病原体可以包括C7z/aw^/z'a例如^、;W^"嚴沐frac/zowm^J或#，炎^"嚴沐<TC./"e"wom'ae^，或者脚co/Axwatoce"spp.，例如一禾中支原体，例如—生/fj^嚴沐(^^co;/a^7a或脲原体，例如》f^,与这些病原体相关的疾病在以上已经详细描述过。例如，一种治疗与病原体感染相关的性传播感染或一种炎症疾病，例如盆腔炎的方法可包括给予体一种抗菌化合物；并且，检测在给药之后从个体中获得的血液样本非细胞部分中病原体细胞的存在。性传播的感染包括沙#,衣屑'沐fC.frac/zowa"s9或Mycop/aswafacec！spp.的感染。炎症疾病，例如盆腔炎，可能与病原体，例如#、殿衣嚴沐《./rac/zoma/^J或aiVfycop/asAwafaceaspp.的感染相关。这里所述的方法可用于减少病原体例如沙淑波嚴沐fmc/zom油'd的假阴性诊断情况，通过提高其完成的概率来提高抗菌治疗的效果和确保通过根除病原体例如C^Y7C/70WW^来防止感染慢性持久形式的发展。本发明的其他方面具体涉及采用这里所述的方法治疗和监控动脉粥样硬化的病况。动脉粥样硬化的病况与,炎衣嚴沐fC戶wmom'G"感染相关，并且，特别是，催化抗体，被称为'抗体酶，，它氧化脂质并且与7，炎衣嚴体;^e,wm^d反应。动脉粥样硬化病况的有效治疗还可以包括降低抗体酶水平的治疗和减少或根除潜在的^，炎衣辰沐;7恥"wom'a"感染的治疗。这里所述的对血液中厥炎衣嚴沐fC.戸ewwom'ad的检测可用于鉴别适合于抗菌治疗的个体，通过提高其完成的概率来提高抗菌治疗的效果和通过确保根除^炎衣嚴沐rC./7"wmom'""以防止抗衣原体脂质氧化抗体酶重现和动脉粥样硬化病况的发展。一种在个体中治疗动脉粥样硬化病况的方法包括i)给予个体一种抗体酶抑制剂和一种抗菌化合物；ii)在施药后从个体获得一个血液样本；iii)在血液样本的非细胞部分中检测抗体酶活性的水平；其中所述的给予个体抗体酶抑制剂被重复直至抗体酶的活性在非细胞部分中基本上没有，并且iv)采用如上所述的方法检测血液样本非细胞部分中i^炎衣辰体/wewmo9原生小体或其他细胞的存在与否，其中所述的给予个体抗菌化合物被重复直至血液样本非细胞部分中没有#*炎衣嚴沐fC.pwewmom'aeJ原生小体或其他细胞。抗体酶抑制剂是一种抑制催化抗体的脂质氧化活性的化合物，例如在血清或血浆中的IgG分子。显示脂质氧化活性的催化抗体可以是抗-衣原体抗体。合适的抗体酶抑制剂包括阿齐霉素、lactolycopene、胡萝卜素、a-生育酚、甲磺酰基去铁敏、儿茶酚，例如EGCG、血红素衍生物、青霉胺、硫普罗宁、曲恩汀二盐酸盐、二乙基二硫氨基甲酸酯、依地酸氢二钠/三钠、乙酰水杨酸、依地酸、酮内酯类、二巯基丙醇磺酸钠、a-生育酚、甘露醇、水飞蓟宁、抗坏血酸和其他在低pH起作用的抗氧化剂。合适的抗菌化合物如上所述。在某些实施方式中，可以采用一种单一化合物，其既具有抗菌活性又具有抗体酶抑制剂活性。合适的化合物包括阿奇霉素和特利霉素(ketek)。例如，一种在个体中治疗动脉粥样硬化病况的方法可以包括i)给予个体阿奇霉素；ii)在所述给药后从个体获得血液样本；iii)在血液样本的非细胞部分中检测抗体酶活性水平，并且；iv)采用上述方法在血液样本的非细胞部分中检测/，炎衣嚴沐;9wewwom'fle;>细胞的存在与否，其中所述给予个体阿奇霉素被重复直至在来自个体的血液样本非细胞部分中没有抗体酶活性和i^炎^r嚴沐pwewmom'ad细胞。抗体酶抑制剂和抗菌化合物可以作为药物组合物给药。除了活性的抗体酶抑制剂或抗菌化合物之外，一种药物组合物可以包括，药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或本领域公知的其他材料。这样的材料应该是无毒的并且应该不干扰活性成分的效果。载体或其它材料的准确特性应该取决于给药方式，其可以是口服，或者是注射，例如经皮肤，皮下或静脉。用于口服的药物组合物可以是片剂、胶囊、粉末或液体形式。片剂可以包括一种固相载体，例如凝胶，或者一种佐剂。液体药物组合物通常包括一种液体载体，例如水、石油、动物或植物油、矿物油或合成油。可以包括生理盐溶液，葡萄糖或其他糖溶液或乙二醇例如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。对于静脉、皮肤或皮下注射，活性成分将处于注射药物可接受的水溶液形式，其为无热原质的并且具有合适的pH、等渗并且稳定。那些相关领域的技术人员利用，例如等压媒介例如氯化钠注射液、Ringer's注射液或LactatedRinger's注射液能够制备合适的溶液。如果需要，可以包括防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/添加剂。抗体酶抑制剂和/或抗菌化合物的给药优选"预防有效剂量"或者"治疗有效剂量"(根据具体情况而定，虽然预防也可能被认为是治疗)，这对于个体足够显示益处。实际的给药量，以及给药的速度和时间安排将取决于所治疗情况的性质和严重性。治疗的处方，例如剂量等的决定，是一般医学从业者和其他医生的职责范围内。在一些优选实施方式中，抗体酶抑制剂和/或抗菌化合物周期性地给予体，例如，每小时、每天、每周、每两周或每个月。周期性给药将持续直至发现抗体酶活性和/或病原体细胞在来自个体的血液样本中减少或者消失。血液样本可以从个体中周期性地获得，例如每天、每周、每两周或每个月，当个体正在进行抗体酶抑制剂和/或抗菌化合物治疗时，并且样本中的抗体酶活性水平和/或病原体细胞的存在被测定。来自个体的血液样本非细胞部分中抗体酶的活性水平可以通过检测部分中抗体介导的脂质氧化活性而被测定，特别是部分中由抗衣原体抗体介导的脂质氧化活性。例如，一种抗体，优选一种来自样本的血清或血浆部分衣原体结合抗体，可以被检测其氧化脂质的能力。脂质氧化活性，包括脂质过氧化活性，可以通过检测(例如通过检测或测量)宿主脂质(即来自样本的脂质)的氧化而测定，来自外源抗原例如一种衣原体细胞的脂质，例如一种衣原体细胞，或者来自另一种来源的脂质，例如可作为检测方法的部分加入。脂质氧化可以通过检测产物或副产物的堆积而被测定，例如共氧化的偶联报道分子或者底物的消失或消耗例，如非修饰的脂质或共同底物，例如氧。测定脂质过氧化的很多方法是本领域公知的并且适合用于本发明。测定脂质氧化的精确模式并非本发明的特征，并且本领域的技术人员能够根据他们的偏爱和公知常识选择合适的模式。合适的方法是，例如，公开于如下文献CRCHandbookofMethodsforOxygenRadicalResearch,CRCPress,BocaRaton，Florida(1985)，OxygenRadicalsinBiologicalSystems。MethodsinEnzymology，v.186，AcademicPress,London(1990);OxygenRadicalsinBiologicalSystems。MethodsinEnzymology,v.234，AcademicPress,SanDiego，NewYork,Boston,London(1994);以及FreeRadicals.Apracticalapproach.IRLPress,Oxford,NewYork,Tokyo(1996)。在优选实施方式中，氧化通过检测脂质氧化产生的产物(即存在或数量)而测定。在其中氧化起始的氧化产物和/或脂质媒介可以被测定或者在其中氧化被传播的氧化产物和/或脂质媒介可以被测定。一种合适的脂质氧化产物可以包括醛例如丙二醛(MDA)、(脂质)过氧化物、二烯烃交联物或碳氢气体。脂质氧化产物可采用合适的方法测定。例如，脂质过氧化产物可采用HPLC测定(Brown，R.K.，禾口Kelly，F.JIn:FreeRadicalss.Apracticalapproach.IRLPress,Oxford,NewYork,Tokyo(1996)，119-131)，UV光谱(Kinter，M.Quantitativeanalysisof4-hydroxy-2-nonenal.Ibid.，133-145)，或者气相色谱质谱(Morrow，J.D.，andRoberts，L.J.F2-Isoprostanes:prostaglandin-likeproductsoflipidoreoxidation.Ibid.，147-157)。脂质的过氧化可导致蛋白、糖类、核酸和其它类型分子的氧化。这样的氧化产物也可以被用于直接检测抗体酶的活性。此外，过氧化可导致与传播脂质氧化相关的报道分子特性的改变。如下所述，报道分子可以在这些脂质中被包封，例如成脂质体，而报道分子从脂质体中的释放指示氧化。合适的报道物质和分子可以包括完整的发光细菌、发光氨、光泽精、穿石贝素和虫荧光素。这样的物质可以，例如，被偶联至H202/02'—/02-利用分子，例如过氧化物酶、酯酶、氧化酶、荧光素酶、过氧化氢酶、超氧化物酶歧化酶、二萘嵌苯、NAD+以及丫啶酯双(三氯苯基)草酸酯(CampbellA.K.Chemiluminescence.VCH，EllisHorwoodLtd.,England,1988)。其它易受自由基链反应影响的材料也可以用于检测脂质氧化。例如，脂质过氧化，作为一个链过程，起始和增强丙烯酰胺的聚合。脂质氧化因而可以通过检测"C-丙稀酰胺的共聚合而被测定(KozlovYuP.(1968)RoleofFreeRadicalsinnormalandpathologicalprocesses.Doctoratethesis-MGUMoscow1968)。由于脂质和脂蛋白过氧化是一种自由基介导的过程，脂质氧化抗体酶可以通过检测这些自由基而被检测。自由基可以采用如下技术而被检测或测量内在低水平化学发光(具有或没有致敏剂)(Vladimirov，Y.A.，和Archakov，A丄LipidpreoxidationinBiologicalmembranes.Nauka，Moscow(1972》Vladimirov，Y.A.Intrinsiclow-levelchemiluminescence.In:FreeRadicals.Apracticalapproach.IRLPress,Oxford,NewYork,Tokyo(1996)，65-82)，顺磁共振(带有旋转捕获(Mason，R.P./"Wfraandv/vodetectionofFreeRadicalmetaboliteswithelectronspinresonance.In:FreeRadicals.Apracticalapproach.IRLPress,Oxford,NewYork,Tokyo(1996》11-24)或不带方定车专捕获(Petyaev，M.M.Biophysicalapproachesinthediagnosisofcancer.Medicina，Moscow(1972))或其他本领域公知的技术。脂质氧化还可以通过测定在反应中脂肪酸或其它基质的消耗而被测定。在某些优选实施方式中，在与2-硫巴比妥酸(通常lmM)反应之后，通过测量在合适波长例如525nm的吸收值，丙二醛(MDA)的产物被测定。在某些实施例中，来自样本血清或血浆部分的抗体结合衣原体细胞，例如一种i^"炎衣嚴沐/"wwom'aeJ、C.pw'"ac/或^、/W衣嚴沐/rac/wwa^J细胞的能力可以被测定。抗体酶活性的测定在以下文献中详细描述WO03/019196、WO03/019198和WO03/017992。采用抗体酶抑制剂对个体的治疗可以持续直至在来自个体的血液样本非细胞部分中抗体酶活性被测定为零或基本上为零。在来自个体的血液样本非细胞部分中抗体酶活性被降低为零或基本上为零之后，可以停止用抗体酶抑制剂的治疗。/，炎在7,沐peMmom'd细胞在血液样本非细胞片断中的存在与否可采用上述方法检测。采用抗菌化合物的治疗可以持续直至在来自个体的血液样本非细胞片断中被检测不到^"炎衣嚴沐".戶e應om'ad细胞。嚴炎衣嚴沐p"ewmmhd细胞在血液样本非细胞片断中清除之后，抗菌化合物的治疗可以停止。在某些实施方式中，可以检测一种抗菌化合物在治疗个体中专性细胞内或膜相关病原性微生物持续感染的效果。一种方可以包括i)在给予抗菌化合物之前和之后从个体中获得血液样本；(ii)使所述血液样本与一种特异结合元件接触以分离和/或纯化所述样本的部分；并且，(iii)在所述样本的所述部分中检测病原性微生物核酸的存在，其中在给药之后所获得的样本的所述部分中病原性微生物核酸数量与给药之前获得的样本相比较降低指示抗菌制剂在治疗持久感染中是有效的。通过本说明书，那些本领域的技术人员将会了解本发明更多的方面和实施方式。所有在本说明书中提到的文献全文在此引入作为参考。本发明包括上述特征的每种组合及其亚组合。本发明的特定的方面和实施方式现在通过例子并结合以下附图及表格而加以说明。图1显示在CHD患者中检测,，炎衣嚴沐fC77/aw>^'ap"wmom'aeJDNA。泳道3和4和泳道7以及8是采用蛋白A浓度梯度，而泳道5和6没有采用蛋白A浓度梯度。图2显示采用这里所述的方法在CHD患者中检测^银炎衣嚴沐^C/z/aw少Wa;weMmom'fle9DNA。泳道1、2禾口6显示CHD患者的结果，而泳道7显示健康对照的结果。图3显示采用荧光团FAM-490的实时PCR标准曲线图。图4显示FAM-4卯的实时PCRAmp/Cycle图。图5显示采用嵌套式PCR检测样本中的^^衣嚴体H^/薩;^'a;wewmom'aeJDNA。泳道6禾卩7显示PCR阴性样本P084禾卩P094，而泳道8显示PCR阳性样本P078。图6显示C./wezw20"/"e的16SrRNA基因中引物对CPN90/91的靶序列与其他病原体中16SrRNA基因的序列对比。原点显示相同的碱基，而字母指示与,炎沈疑体《.戶e画om'a"不同的碱基。短条指示缺失。图7显示在采用抗菌治疗之前或期间采用本方法检测到患者中衣原体抗原的水平。图8显示采用小孔径柱作为细菌保留滤器，在人类血清中浓縮沙凝^嚴体(X7z/謂j^iZa加c/70應"、J后检领lj沙淑衣嚴体rC77/画j^'a加c/zo顧/7WDNA。泳道如下编号1，新方案，从200|il的血清浓縮*;2，新方案，从200^1的血清浓縮，1:10*;3，新方案，从200(^1的血清浓縮，1:100*;4，QIAGEN方案，从200(^1的血清浓縮；5，QIAGEN方案，从200|il的血清浓縮，1:10;6，QIAGEN方案，200^1的血清，1:100;7，新方案，从500|11浓缩*;8，新方案，从500^1浓縮，1:10*;9，新方案，从500|il浓縮，1:100*;10，QIAGEN方案，500W的血清；11，QIAGEN方案，500(il的血清，1:10;12，QIAGEN方案，500^1的血清，1:100;13、14—阳性对照；15-阴性对照。*在血清样本细菌浓縮之后，不考虑所釆用的从200|11至3,000(il体积，采用标准的QIAGEN方案处理200ul样本。表1显示基于这里所述的血液血清的PCRDNA检测与对全血进行的常规检测的比较。患者组包括通过外科确诊为CHD的人和患有呼吸疾病怀疑有嚴炎衣嚴沐fC7z/amyJ/a/"g画om'fleJ涉及的人。表2显示基于这里所述的血液血清的PCRDNA检测与对全血进行的常规检测的比较。患者组包括患有CHD/无症状局部缺血的人。对照组包括健康个体。表3显示常规和实时PCR之间核酸检测的相互关系。表4显示在血液样本中检测#、#罗衣嚴沐rr/z/amj^/afrac/zoma^J。表5显示在血液样本中检测主^"支嚴沐〈Mycop/owagem'to/Ziw^。表6显示在血液样本中检测嚴厭i嚴沐C^i厥嚴沐ft/"，/a扁a表7显示在治疗沙yW衣嚴沐《.frac/2om油'"生殖器感染中血清DNA检测和拭子诊断的诊断值的比较。表8显示在诊断急性汐凝衣嚴沐fC.加c/^m油、J感染(rag/m力VcerWc&VMreAW"力中血清DNA检测和拭子诊断的诊断值的比;丄较。表9显示在关节炎(Reiter's疾病)中诊断^、^衣嚴沐frac/zoma/d感染的血清DNA检测和拭子诊断的诊断值的比较。表10显示在慢性盆腔炎中诊断汐^衣/#沐《.加c/z函油'W感染的血清DNA检测和拭子诊断的诊断值的比较。表11显示在无症状患者中诊断沙殿衣嚴沐"./rac/7ow加'"感染的血清DNA检测和拭子诊断的诊断值的比较。表12显示#、>^衣嚴沐^rac/wm""d中基因表达的分析。表13显示沙嫩衣嚴釘C.frac/7o顧""禾口厕炎^"嚴沐rC.戸調固'aeJ的参照和持久菌株对阿奇霉素的易感性。表14显示在血液中炎在"/費'沐fC/z/flwyc/z'a/"ewm(m'ae)DNA阳性检测采用PCR与标准方案的比较，对于对照，CHD/无症状的局部缺血，以及外周闭塞疾病患者。表15显示对照和CHD患者在血液中/*炎衣嚴沐f02/"^)^'"戸e應om'agJ感染的检测。实验材料和方法样本静脉血液样本从三组不同的临床患者中获得外科确诊为CHD的患者；患有呼吸疾病怀疑涉及厕炎《嚴沐^7z/am;^a戶eMWom'fleJ的患者；以及临床健康个体作为对照。45静脉血液样本也从带有或不带有生殖器/尿道感染症状的患者中收集以及从临床健康个体中收集作为对照。收集后一些样本在检测前在-2(TC冰冻和保藏，一些保持在+4。C，而一些在收集后立即检测。血清采用离心2,000g10分钟而从全血中分离。采用蛋白A浓縮细胞蛋白-A-琼脂糖与血清样本在37°C共孵育30-60分钟。带有固定免疫球蛋白(游离的和在免疫复合物中的)的吸附剂在3,000-5,000g离心10分钟并且上清液被弃去。吸附剂小球随后在PBS中再悬浮并重复离心过程。该清洗步骤重复两次以上。之后，再悬浮小球被用于DNA检测。通过过滤浓縮细胞1,000|il、200(^1-2,000|il血清样本，被填充在QIAGEN硅凝胶柱中并且在l,OOOg离心5分钟或在8,000g离心1分钟。200^1的QIAGEN缓冲剂AL和20^1蛋白酶被填充在柱中并且在56°C孵育10分钟。加入200^1乙醇并且在8,000g离心柱1分钟。之后按照柱制造者提供的方案进行。简言之，500^1的AW1缓冲剂被加入并且在8，000g离心1分钟。500|il的AW2缓冲剂被加入并且在12,000g离心3分钟。100(il的AE缓冲剂被加入并且孵育1分钟和在8,000g离心1分钟。一个5-10pl的样本随后被取出用于PCR。PCR从1ml血清样本中采用QIAampDNABloodMiniKit(QIAGen)提取DNA并且再悬浮于100|ul的AE(QIAGen)缓冲剂中。提取的DNA采用如下对应于16SrRNA基因可变片段的引物通过PCR进行扩增，其特异针对/，炎衣嚴沐0:/z/am;^'ap"e"mom'aeJ:CPN90一5'GGTCTCAACCCCATCCGTGTCGG3'nCPN91-5，TGCGGAAAGCTGTATTTCTACAGTT3'(MadicoG.等，J.Clin.Microbiol.2000，38:1085-1093)。扩增片段的长度是197个碱基对。扩增反应在25pi的PCR溶液中进行，其包括10mMTris/HCl(pH8.3)、50mMKCl、1.5mMMgCl2、200的每种dNTP、15pmol的每个引物、1UTaq-DNA-聚合酶(Promega)和5pi的样本。采用如下PCR方案45s在94。C，45s在60。C，和45s在72°C在DNA热循环仪Perkin-ElmerCetus上进行45次循环。检测分析灵敏度为每PCR100基因组等价物(GE)。PCR产物在1，2%琼脂糖凝胶中电泳分离之后通过溴化乙锭染色显现。实时PCR引物和探针的设计基于/，炎衣嚴沐fC/7/aw_yA"/wewwom'aeJ的16SrRNA基因，采用用于"Taqman探针"的设计程序"引物表达"(AppliedBiosystems)。所用的引物和探针探针553:5'-CAAGTCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGC-3'，探针557:5'-TCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGCATCG-3'，引物CPN90:5'-GGTCTCAACCCCATCCGTGTCGG陽3'，引物CPN91:5'-TGCGGAAAGCTGTATTTCTACAGTT-3'。BLAST程序被用于确定所选择的引物对其它衣原体科种类的16SrRNA基因的特异性。基于16SrRNA的定量实时PCR。PCR引物和探针的^^炎衣嚴/,《.，e訓om'ad-特异序列，采用引物表达软件(AppliedBiosystems，FosterCity，Calif.)从/，炎衣嚴银/7麼Mmom'aeJ的16SrRNA中选择(GenBank登录号AF131889.1GI:4545320或AE009440.1GI:33236960)，并通过AppliedBiosystems合成。产生的PCR产物为197bp;且引物和T叫Man探针的序列如下正向引物CPN卯，5'-GGTCTCAACCCCATCCGTGTCGG-3';反向引物CPN91，5'-TGCGGAAAGCTGTATTTCTACAGTT-3';以及TaqMan探针557，5'-TCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGCATCG-3'。TaqMan探针在5，端采用6-羧基荧光素进行荧光标记作为报道染料，而在3'端采用6-羧基四甲基若丹明作为淬灭剂。采用BLAST程序进行检索以检查引物和探针的特异性。在PCR延伸阶段当探针被DNA聚合酶的5'核酸外切酶活性裂解时PCR产物由于荧光提高而被检测到。这种裂解打断了荧光能量共振转移而报道染料开始发出荧光，其与所产生的PCR产物水平成正比。循环阈值(C》，定义为循环数量其中报道染料的荧光首次超出计算的背景水平，该值通过仪器对每次反应自动被评价。Cr值的标准曲线图来自纯化的^^炎衣嚴沐《.p"ewwom'"dDNA的连续稀释。未知的临床血清样本的CV值根据纯化的厕炎衣嚴沐fC.戶ewwom'adDNA的标准曲线确定。具有己知浓度的培养的/，炎衣嚴沐《./"ewwom'"d的DNA作为稀释液中的标准物介于1fg至10pg。实时PCR采用iCyclerIQsystem(BIO-RAD)进行。5pl提取的DNA被分析而采用的PCR混合物总体积为50pl。PCR混合物由10mMTris(pH8.3)、50mMKC1、1.5mMMgCl2、200|iM的每种dNTP、5U的Termostarr呵DNA聚合酶(Sintol);200nM探针；禾P300nM正向和反向引物组成。实时PCR为10分钟在95°C，和50个循环，其中1分钟在94。C，1.5分钟在63。C。所有的样本分成三份重复本进行分析。如果在三份重复本中的检测都为阳性，并且如果PCR的平均值大于或等于1.0，则样本被认为是阳性。常规嚴炎*嚴沐广C.p"g画o"/agJ检测循环PBMC通过静脉穿刺获得而进入一个8-mlVacutainerCPT细胞制备管中(BDVacutainerSystems,FranklinLakes,N丄)。CPT管包含一种血液分离介质，其包括触变聚酯凝胶和密度梯度液体溶液。简言之，CPT管在BeckmanGPR离心机中1,500xg离心30分钟并冷冻。运送到研究实验室之后，样本通过倒置和再次离心混合，单核细胞层或直接位于凝胶上的1ml血浆被吸出并在-70。C冷冻。单核细胞制剂被成批地解冻并且采用QIAampDNAminikits(Qiagen，Mississauga，Ontario,Canada)提取200-|iil整数倍于100^的洗提缓冲剂中。嵌套式PCR检测^^炎衣嚴沐p"ewmom'aeJ采用嵌套式PCR，其靶为基因的可变区域IV(VDIV)(外引物Cpn5P[5'CCAATATGCACAGTCCAAACCTAAAA3']和Cpn3P[5'CTAGATTTAAACTTGTTGATCTGACAG3'];嵌套引物-Cpn5N[5'CTCTGTAAACAAACCGGGC3']和Cpn3N[5'GATCTGACAGGAAACAATTTGCAT3'])。扩增反应在25(al的PCR溶液中进行，其由10mMTris/HCl(pH8.3)、50mMKCl、1.5mMMgCl2、200的每dNTP、15pmol的每种引物、1UTaq-DNA-聚合酶(Promega)和5|ul的样本组成。循环条件包括在95°C进行5分钟的起始变性，随后是95°C变性30秒，在60。C退火30秒，在72。C延伸30秒，进行45次循环。在第二圈PCR，2nl的第一圈产物与25nl上述扩增混合物混合，采用引物Cpn5N和Cpn3N，并在相同的循环条件下扩增。PCR产物在1.2%琼脂糖凝胶电泳分离之后用溴化乙锭染色显现。沙淤衣嚴体fC^flc/7om^m'd的检测一种沙^衣嚴沐fC/z/aw;^'afrac/zow加'd隐蔽性质粒的特异DNA片端被用来检测该病原体。产生210-bp片段的如下引物是CP24-5'GGGATTCCTGTAACAACAAGTCAGG3'CP27-5'CCTCTTCCCCAGAACAATAAGAAC3，。扩增反应在25pl的PCR溶液中进行，其包括10mMTris/HCl(pH8.3)、50mMKCl、1.5mMMgCl2、200(iM的每禾中dNTP、15pmol的每个引物、1UT叫-DNA-聚合酶(Promega)和5pi的样本。采用一台PCRThermocyclerPerkinElmer进行45次循环扩增。每次循环包括在94。C变性45秒，在55°C引物退火45秒，在72°C引物延伸45秒。扩增产物(IOpl)通过在1.5%琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色而显现。MgemW/M附的检领ljPCR特异针对生M"支嚴沐fM;;co;/wwagem'to/^附j140kDa粘附蛋白基因的革巴区域，MgPa(JensenJS等，J.Clin.Microbiol.1991Jan;29(l):46-50)。采用如下产生一个281-bp片段引物对MgPa-1-5,AGTTGATGAAACCTTAACCCCTTGG3'MgPa-3-5，CCGTTGAGGGGTTTTCCATTTTTGC3，。扩增反应在25pi的PCR溶液中进行，其包括10mMTris/HCl(pH8.3)、50mMKCl、1.5mMMgCl2、200|iM的每种dNTP、15pmol的每种引物、1UT叫-DNA-聚合酶(Promega)和5pi的样本。采用一台PCRThermocyclerPerkinElmer进行45次循环扩增。每次循环包括在94°C变性45秒，在55°C引物退火45秒，在72°C引物延伸45秒。扩增产物(IOfd)通过在1.5%琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色而显现。^^^^^嚴,r6Vgflp/(^yma^gfl/^7'cww^的检观!l采用对t/"，/a扁a^,脲酶基因中高度保守区域特异的引物进行PCR(BlanchardA等，ClinInfectDis.1993Aug;17Suppll:S148-53.)。采用产生一个429-bp片段的如下引物对Ul—5'GATGGTAAGTTAGTTGCTGAC3'U2-5，ACGACGTCCATAAGCAACT3，。扩增反应在25^的PCR溶液中进行，其包括10mMTris/HCl(pH8.3)、50mMKCl、1.5mMMgCl2、200的每种dNTP、15pmol的每个引物、1UTaq-DNA-聚合酶(Promega)和5的样本。采用一台PCRThermocycler(PerkinElmer)进行45次循环扩增。每次循环包括在94°C变性45秒，在55°C引物退火45秒，在72°C引物延伸45秒。扩增产物(IOpl)通过在1.5%琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色而显现。细胞培养对于沙#/^衣/,沐(C7z/aw;^afrac/7owa^9分离采用McCoy细胞，而对于/，炎衣'/f沐rC/z/awj^/a;"eMmom'ae9采用HL细胞。每种细胞系的细胞被接种在带有盖玻片的24-孔细胞培养板上(大约2xl05细胞每孔)，并在37。C孵育24小时以获得单层汇合。lml的血清在4°C14,000xg离心1小时以沉淀细菌细胞。弃去上清液并且在0.5ml的GM(培养基RPMI，5%[vol/vol]胎牛血清，2.0mML画谷氨酸盐，8.8%[vol/vol]葡萄糖，每毫升4.0pg的庆大霉素和5.0的amfotherycinB/ml)中悬浮沉积物。细胞单层被悬浮接种并且在20°C2,500xg离心l小时。感染的细胞在37。C孵育2小时；之后，去除培养基并且更换带有放线菌酮(l.O(ig/ml)的GM。细胞在37。C在4。/。032中孵育72小时。盖玻片上的细胞采用丙酮固定并采用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的衣原体种属特异(抗-LPS)和沙淑衣嚴沐fC77/am;^a^flc/wwa""-特异(抗-MOMP)抗体染色。衣原体内含物通过荧光显微镜检测。衣原体和细胞DNAs混合物的分离采用QIAGENMiniKit根据制造商的说明书来进行。DNA采用lOOiil的TE缓冲剂洗提。PCR可采用商业可获得的PCR试剂盒用于沙淑衣嚴沐fC/7/am;^/a加c/70wa",d禾口厕炎衣嚴沐(X7/am_yci/a戸ewwom,aeJ。RNA分离总RNA采用SVTotalRNAIsolationSystem(Promega)根据制造者的说明书而被分离。RNA通过无核糖核酸酶的脱氧核糖核酸酶I处理并且采用100^的无核酸酶水从SpinBasket中洗提。RNA样本被检测基因组DNA污染。RT-PCRC.frac/7omato的16SrRNA、HSP60、MOMP和其他外膜蛋白的基因表达采用RT-PCR分析。用于RT-PCR引物的核苷酸序列如下16srRNACTR705'-GGCGTATTTGGGCATCCGAGTAACG3'CTR715'-TCAAATCCAGCGGGTATTAACCGCCT3'MOMP-L5，CGTTCGTTGCAGACTTACCAMOMP-R5'GTTCCTCGCATACCGAATGTOMCB-L5，-CTGCAACAGTATGCGCTTGTOMCB-R5，-CACGCTGTCCAGAAGAATGAOMCA-L5，-GTTGCTTCGAAGATCCATGCOMCA-R5'-GGGCCATGTTTAGCATCTTGPMPA-L5，-GCATTTAGCGGCAATACCATPMPA-R5,-TGACAATGCCATGACAGGATPMPB-L5，-GAAGGCGGTGCTATCTTCTCTCPMPB-R5,-TCGCTTGCTGTTTGAGCTTTAGPMPC-L5，-CACCTACGACAACACCAACGPMPC-R5，-GGAGCAATATCACCCGTCAGPMPD-L5，-GTTAGACCAAATTCGAGATCPMPD-R5，-AAGATTCTCCGTCACGAGGAPMPE-L5，-CTAACTGCTATCTCGATAACCPMPE-R5，-TCACGAATCTCCACGGTAGGHSP60GroEL-L5，-TCTGCGAACGAAGGATATGAGroEL-R5，-ATAGTCCATTCCTGCGCCAGG抗生素敏感检测McCoy和HL细胞被接种和输入上述的血清样本，但是在2,500xg离心1小时和在37°C孵育2小时之后，感染的细胞被含有连续二倍稀释浓度范围从0.05至0.8(ig/ml的抗生素(阿奇霉素，Pliva)的培养基覆盖并且在37°C在4%C02中孵育72小时。沙凝衣嚴沐fC7z/awyAafrac/wwa"dL-2禾口//^炎衣/穷沐〔C7z/am;^/a/7"ew附om'aeJKajaani6菌株l皮用i"乍参照菌株。MIC被定义为最低浓度，其中没有内含物被检测到。结果来自所有患者组60份样本的血清中^，炎衣嚴沐p"ewwom'fl"DNA的PCR检测被进行，并且与来自相同患者的全血样本中通过常规酚提取基于PCR的检测的DNA检测比例相比较。采用这里所描述的基于血液血清的检测厕炎衣嚴体《.，ewmo"/a"DNA的扩增和检出率为患者库中的38%(60名患者中有23名)。与之对照的是，基于从循环PBMC分离的DNA进行的常规PCRDNA检测，所检测出的^^衣嚴沐《.戸ewwom'a"DNA在相同患者库仅仅为1.7%(60名患者中有1名)(见表1)。新技术提高了在患者中检测细菌DNA感染的灵敏度至22倍。来自CHD/无症状局部缺血患者血清中,，炎衣嚴沐fCp"eMmom'fldDNA的PCR检测被进行，并且与采用从循环PBMC分离的DNA的常规基于PCR的检测以及与健康个体的对照组相比较。基于全血的常规PCRDNA检测中J，炎衣嚴沐O:.p"ewwom'adDNA检出率仅仅为CHD/无症状局部缺血患者的3.9X(102名患者中有4名)(见表2)。这样低水平的DNA发现率使得PCR不能成为在患有CDH的患者中检测厲「炎^"嚴体p"wwom'ad感染的有意义的诊断方法。相反，当采用所述的基于血液血清的PCRDNA检测方法时，/》炎衣嚴沐/7"ewwm'aeJDNA在CHD/无症状局部缺血患者中的被扩增和检出率为58%(24名患者中有14名)。新技术提高了在患者中检测细菌DNA感染的灵敏度至15倍。在健康个体的对照组中，相同技术检测的,炎fC.p"e謂om'aeJDNA仅仅为案例中的4.8%(22名对照个体中有1名)。在患有CHD/无症状局部缺血的患者血清中^^炎衣嚴谬/"ewwom'ae9DNA的实时PCR检测被进行，并与相同血清样本的常规基于PCR的检测相比较。其中常规PCR方法仅仅能以定性的方式确定#^衣嚴一沐^7z/"m;^'a/wewmom'ad的存在，基于本方法的实时PCR可以定量存在于样本中的DNA。在lml血液中i^炎衣嚴沐fC/z/awj^Za/wewmom'ae9基因组等价物的数量变化从20-180/*炎衣嚴沐fC7z/aw;^/a/"ewwom'aeJ基因组，指示在受感染的个体中细菌负载量的变化(表3)。在血液血清样本中采用嵌套式PCR在ow/J基因上(图7)检测/，炎衣嚴沐rC/z/a^ycfe/"ewwom'ae;>DNA。在患有急性生殖器感染和慢性生殖系统感染和/或不孕不育问题的患者中，在血清中沙淑^"嚴沐fC/^w少Wafrac/7owWd的检测被拿来与在尿液和拭子中的检测相比较。这些结果见表4。在5名患有急性生殖器感染而采用尿液和拭子检测为阴性的患者中通过PCR或MIF在血清中检测到了沙淤衣嚴体rCWa^^afrac/20w油'd。在6名患有慢性生殖系统感染和/或不孕不育问题而采用尿液和拭子检测为阴性的患者中通过PCR或MIF在血清中检测到了沙凝衣嚴沐fC/z/a^y^afrac/zcwa^y>。在血清样本中C化ac/KW7G^的浓縮在蛋白A不存在时，采用具有低孔径的硅凝胶柱(Qiagen)作为细菌保持滤器而实现。采用这些柱，观察到Cfrac/wmafe细胞成功地从血清样本中而浓縮(图8)。在患有急性生殖器和/或尿道感染和慢性生殖系统感染和/或不孕不育问题的患者中，在血清中生遭—支嚴沐rM;;c印/wwagem'to"ww)的检测被拿来与在尿液和拭子中的检测相比较。这些结果见表5。有2名患有急性生殖器和/或尿道感染而采用尿液和拭子检测为阴性的患者通过PCR或MIF在血清中检测到了生遭支嚴沐fMycop/氾附agem'to"w—。有3名患有慢性生殖系统感染和/或不孕不育问题而采用尿液和拭子检测为阴性的患者通过PCR或MIF在血清中检测到了主;^支嚴沐fMjco//asmagem'to/Zw^)。在血清中i^^^^沐fL^"p/wmaJ的检测被拿来与患者中尿液和拭子中的检测相比较。结果见表6。采用PCR或MIF在3名患者的血清中检测到y^^^,嚴沐a/""//osmawreo(y"cwmJ,其采用尿液和拭子检测也是阳性。对被诊断为患有^^^衣嚴体fCWa^y&fl^ac/7owa";^感染的患者进行抗菌治疗的效果被调查。两名被诊断患有fC/2/函;^'afrac/zo麵toJ感染的患者每天两次采用400mgAvelox(moxifoxacinhydrochloride)治疗并且沙殿衣嚴,O^/awj^Z/a/rac/zoma"W感染的存在采用常规拭子检测和这里所描述的血液检测同时进行。结果见表7。在两个案例中，这里所描述的血液检测连续检测到了沙^衣嚴沐rC7z/a^^'"/rac/wm^"J的存在而常规检测为阴性。这显示这里所描述的血液检测减少了沙^衣嚴沐fC72/am>^afrac/zo/^m;^假阴性诊断的病例。而且显示抗菌治疗的效果通过采用目前的血液检测而提高，因为完全根除感染的机会提高了。这还可以用于防止感染的慢性持久形式的发展。患有急性阴道炎/子宫颈炎/尿道炎的患者中#、凝衣嚴沐(T/7/am;^'afrac/wmato)的血清DNA检测被拿来与标准DNA拭子检测相比较，结果见于表8。在总共13名患者中，11名(85%)被拭子检测检测为阳性而12名(92%)被血液检测检测为阳性。表9显示在反应性关节炎(Reiter's疾病)患者中沙^衣嚴沐(T/z/aw少^7^ac/7oma^9血清DNA检测的临床确认结果与DNA拭子检测相比较。在总共15名患者中，8名(53%)被拭子检测检测为阳性而12名(80%)被血液检测检测为阳性。表IO显示在慢性盆腔炎症疾病(阴道炎、子宫颈炎、子宫内膜异位、尿道炎、附睾炎和前列腺炎)患者中/，、凝衣)货银fC77/fl"y^"rac^wm//J血清DNA检测的临床确认结果与DNA拭子检测相比较。在总共215名患者中，17名(8%)被拭子检测检测为阳性，而57名(26.5%)被血液检测检测为阳性。表11显示在无症状患者中#、/^*嚴沐rT7z/a^^/a/rac/zoma"、J血清DNA检测的临床确认结果与DNA拭子检测相比较。在总共124名患者中，3名(2.4%)被拭子检测检测为阳性，而24名(19%)被血液检测检测为阳性。在反应性关节炎患者中，发现针对沙淑衣嚴沐fC7z/fl^yc^^"domfltoJ的本血液检测能降低50%假阴性诊断，在慢性盆腔炎症患者中为335%，而在无症状的感染患者中为800%。要注意的是通过血清检测随机检查捐赠人的样本显示出11人中有2人，或者18%，是汐淑衣嚴沐^V7/"w;^"/mc/w附"/^JDNA阳性的。对基因表达的分析见表12。沙^衣—嚴沐fC7z/am>^'flfrac/wwatoJ血清分离物的免疫化学检测通过用抗-LPS(属-特异)和抗-MOMP(种-特异)单克隆抗体染色显示细胞膜中LPS和MOMP的降低。血清分离物的LPS在细胞培养的第一代和第二代中明显恢复。3代之后，MOMP在相同的降低水平被检测到。阿奇霉素敏感性见表13。在患有冠心病和外周闭塞疾病的患者血液中炎衣嚴沐fC7z/wj^'a的新PCR检测结果见表14。在对照和CHD患者血液中诊断/-炎衣嚴沐fC/z/am;^'a;"ewwo"/ad的直接和细胞培养PCR检测结果见表15。以上所列数据显示本方法可用于检测细胞内的病原体感染，例如沙淑玄嚴沐"ac/z画a"W、厥炎衣嚴沐;"e画歸'aeJ、f潜支嚴沐fMyo//os腸gem'to/^m^y^^^^^fL^efl//ay顧wrea/,'c訓J。重要的是注意到目前没有其他能用于血液库筛选的用于这四种感染的血液检这里所公开的方法和试剂盒可用于治疗和防止这些持久血液感染的传播以及相关的疾病情况。参考文献1.FabricantCG等，J五x;A/ed1978，148(1):335-340.2.FongIW:CM^/2000，163(1):49-563.MattilaKJ等，C//"/"/ecf1998，26(3):719-7344.CampbellLA等，E醇g/"/ec/■1998，4(4):571-5795.SaikkuP等，丄cmcen988，2(8618):983-9866.DaneshJ等，1997，350(9075):430-4367.DaneshJ等，6M/2000,321(7255):208-2138.BomanJ等，M〖cra&WWev2002，15(1):1-209.ShorA等，JX/z'wiWzo/1998，51(11):812-81710.CampbellLA等，J/"/eW1995，172(2):585-58811.DechendR等，C7簡/加.ow1999，100(13):1369-137312.CoombesBK等，1999，67(6):2909-291513.JacksonLA等，」wJ尸a/1/70/1997，150(5):1785-179014.ApfalterP等，JC7z'w7Wcrc^/o/2001，39(2):519-52415.BlasiF等，//"/e"2000,181(Suppl3):S444-S44616.RamirezJA，爿""/"&r"Medl996，125(12):979-98217.JacksonLA等，//"/e"Dz、1997，176(1):292-29518.ApfalterP等，五w〃C7/wMcra&W/"/e"D/52000，19(4):305-30819.KarlssonL等，￡wr/F羅五油雨cig2000，19(6):630-63520.BattelsC等，C/腦/油'o"2000，101(2):137-14121.BergerM等，JZa6C7/"Afed2000，136(3):194-20022.BomanJ等，J7"/e"1998，178(1):274-27723.FreidankHM等，￡wrJC//"M,.cro^'o〃"/e"2002，21(1):60-6224.KaulR等，C/rcw/a"o"2000，102(19):2341-234625.MarahaB等，￡wr/C//wMc威o〃"/e"ZXs2001，20(2):111-11626.SessaR等，A/7e簡c/e画^2001，159(2):521-52527.SmiejaM等，JC//wMcra&o/2001，39(2):596-60028.WongYK等，J」mCo〃CaW/o/1999，34(5):1435-143929.MaassM等，2000，181CSuppl3):S449-S45130.BlasiF等，J/"/ecf1999，180(6):2074-207631.Taylor-Robi謂nD等，Co〃CWz'o/2000，36(2):657誦65832.SmiejaM等，餅C/"/e"2002，2(1):1233.11iescuEA等，尸er"飽〃"/2000，20(6》722-72634.BodettiTJ等，/"/e"/mw丽2000，68(5):2744-2747Med脸油W/薩画/2001，190:139-144,，7V謹/脂.o"2001，41(9):1114-1119J他r/騰/w7V蘭Z)1992，12(8):945-947等，J她dMcra&o/1998，47(5):441-446/C//"iW2o/1993，46(4):313-317服J1997，315(7109):629-634/C/^她油'o/1999，37(12):3791-3799J/"/e"i^2000，181(Suppl3):S452-S454/C//"2001，39(5):1796-1801等，Af/cra&o/2002，40(7):2357-2362"JC7/wM,cra^/2000，38(7):2622-2627C7聰/a"o"2001，103(3):351-35647.Smieja等，SMC/w/ec"owsD/seayes2002，2:2148.MadicoG.等，/C7,nM/③&o/2000，38:1085-109349.AryaM.等，ExpertRevMolDiagn2005，5:209-21950.KleinD，TrendsMolMed2002，8:257-26051.Ausuble等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,199252.Russell等，MolecularCloning:aLaboratoryManual,3rdedition,2001，ColdSpringHarborLaboratoryPress35.RassuM等，36.HaranagaS等37.HahnDL等，38.VonHertzen39.TongCY等，40.EggerM等，41.BomanJ等，42.BomanJ等，43.SmiejaM等，44.CherneskyM45.MahonyJB,46.GieffersJ等，临床组厥i^^"嚴沐fC7z/謹-.a戸e謹om'aeJDNA检测阳性的案例，用于PCR的样本获得自常规制备CTL所有的制备样本板来自所有的患者组60名患者中有1名(+)，或为1.7%60名患者中有23名(+)，或为38%表1临床组,炎衣嚴沐fC7z/a附;/(^戶ewmom.aeJDNA检测阳性的案例，用于PCR的样本获得自常规制备CTL所有的制备对照n/a21名患者中有1名(+)，或为4.8%CHD/无症状局部缺血102名患者中有4名(+)，或为3.9%24名患者中有14名(+)，或为58%表2<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>*在细胞培养中通过营养剥夺表12<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>表14<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>权利要求1.一种评估个体遭受专性细胞内或膜相关病原性微生物持久形式感染的方法，其包括在从个体获得的血液样本中测定所述持久形式细胞的存在。2.根据权利要求l的方法，其中细胞的存在通过以下测定使来自个体的血液样本与一种特异结合元件相接触以分离和/或纯化所述样本的部分，以及；在所述部分中测定来自病原性微生物核酸的存在。3.根据权利要求1或2的方法，其中细胞的存在通过以下测定从血液样本或分离和/或纯化的部分中浓縮和/或提取DNA，以及；在浓縮的和/或提取的核酸中测定病原体核酸的存在。4.根据权利要求l-3任何一项的方法，其中病原体细胞的存在在血液样本的非细胞部分中被测定。5.根据权利要求l-3任何一项的方法，包括从所述血液样本中去除宿主细胞以产生一种非细胞血液样本，并且在非细胞血液样本中测定病原体细胞的存在。6.根据权利要求l-3任何一项的方法，其中血液样本是一种非细胞血液样本。7.根据权利要求l-6任何一项的方法，其中特异结合元件结合到包括一种或多种血浆/血清分子的复合物上，并且分离和/或纯化的部分包括一种或多种所述的复合物。8.根据权利要求7的方法，其中一种或更多血浆/血清分子是抗体，并且复合物是一种免疫复合物。9.根据权利要求8的方法，其中特异结合元件结合至免疫球蛋白。10.根据权利要求9的方法，其中特异结合元件是蛋白A。11.根据权利要求7的方法，其中血浆/血清分子是血清脂蛋白或脂多糖结合蛋白。12.根据权利要求ll的方法，其中特异结合元件结合至所述血清脂蛋白或脂多糖结合蛋白。13.根据权利要求1-12任何一项的方法，其中分离和/或纯化的部分包括-种浓度提高了的所述病原性微生物的持久形式的细胞。14.根据权利要求13的方法，其中分离和/或纯化的部分包括一种浓度提高了的所述病原性微生物的持久形式的原生小体。15.根据前述权利要求任何一项的方法，其中在所述部分中病原体核酸的存在指示个体中病原体感染的存在。16.根据权利要求15的方法，其中在所述部分中病原体核酸的存在指示与病原体感染相关疾病的的存在。17.根据权利要求16的方法，其中,炎衣嚴沐rc，e謂om'""核酸的存在指示个体中动脉粥样硬化的病况的存在。18.根据权利要求16的方法，其中沙凝衣嚴体frac/wwa""核酸的存在指示个体中生殖功能紊乱的存在。19.根据权利要求16的方法，其中沙凝衣嚴沐fmc/7oma&)核酸的存在指示个体中选自如下组的感染的存在阴道炎、子宫颈炎和尿道炎。20.根据权利要求16的方法，其中沙^，嚴沐frac/2ow^/W核酸的存在指示个体中反应性关节炎(Reiter's疾病)的存在。21.根据权利要求16的方法，其中汐^《嚴沐《.？rac/2w^"W核酸的存在指示个体中慢性盆腔炎症疾病的存在。22.根据权利要求16的方法，其中沙淤衣嚴沐rC.^ac/2ow油'd核酸的存在指示个体中无症状感染的存在。23.根据权利要求16的方法，其中A^co;/wmaface"e核酸的存在指示个体中呼吸疾病、盆腔炎症疾病或生殖功能紊乱的存在。24.根据前述权利要求任何一项的方法，其中在分离和/或纯化的部分中病原体核酸的存在通过采用病原体特异引物扩增而测定，扩增产物的存在指示病原体核酸的存在。25.根据权利要求24的方法，其中样本中病原体核酸的存在采用病原体特异引物通过PCR进行测定。26.根据前述权利要求任何一项的方法，其中病原体是一种C7i/am3^^27.根据权利要求26的方法，其中C/7/aw;^'a^.是厕炎衣嚴沐《.戸ewmom.o!eJ或C加c/zo附a^。28.根据权利要求26或27的方法，其中衣原体细胞的存在通过采用衣原体特异引物测定衣原体核酸的存在而被测定。29.根据权利要求28的方法，其中衣原体是/，炎衣嚴沐fC7z/"mj^"30.根据权利要求29的方法，其中衣原体特异引物扩增i^炎衣嚴沐J16SRNA基因的全部或部分。31.根据权利要求30的方法，其中引物选自如下组成的组5,GGTCTCAACCCCATCT3'5'-GGTCTCAACCCCATCCGTGTCGG-3'5，TGCGGAAAGCTGTATTTCTACAGTT3'5'-CAAGTCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGC-3'以及，5'-TCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGCATCG-3'。32.根据权利要求29的方法，其中衣原体特异引物扩增/*炎衣嚴沐fC/z/aw少J/(2/3"ewmom'ae)OmpA基因的全咅卩或部分。33.根据权利要求32的方法，其中引物选自如下组成的组5'CCAATATGCACAGTCCAAACCTAAAA3'5'CTAGATTTAAACTTGTTGATCTGACAG3'5'CTCTGTAAACAAACCGGGC3'5'GATCTGACAGGAAACAATTTGCAT3'。34.根据权利要求28的方法，其中病原体是沙勰衣嚴沐^Tz/am;^'a35.根据权利要求34的方法，其中#、/^衣嚴沐fC/z/awyAafrac/zoma^9特异引物扩增沙殿衣嚴体《.加c/z函油W隐蔽性质粒的全部或部分。36.根据权利要求35的方法，其中引物是CP24-5'GGGATTCCTGTAACAACAAGTCAGG3'CP27-5'CCTCTTCCCCAGAACAATAAGAAC3,。37.根据权利要求l-25任何一项的方法，其中病原体是一种支原体科种类。38.根据权利要求37的方法，其中病原体是一种支原体。39.根据权利要求38的方法，其中支原体是L生遭支嚴沐fMgemY^画)。40.根据权利要求39的方法，其中生^"^7^银(^^0//"1^"^"^//"^)的存在通过采用生遭支嚴沐fMyco//"纖agem'to"w一特异引物测定生遭支沐(7l^cop/twmagemYa"wmy)核酸的存在而被领!l定。41.根据权利要求40的方法，其中全^"^"嚴^/Mj^o//oywagew'to//wm)特异引物扩增MgPa基因的全部或部分。42.根据权利要求41的方法，其中引物是MgPa-1-5,AGTTGATGAAACCTTAACCCCTTGG3'MgPa-3-5'CCGTTGAGGGGTTTTCCATTTTTGC3'。43.根据权利要求37的方法，其中病原体是一种脲原体。44.根据权利要求43的方法，其中脲原体是t/.wea(y"CMW。45.根据权利要求44的方法，其中Oeap/wwawefl/"/cflf的存在通过采用L^ea//oy画wrea/，/ca特异弓l物观!j定tA"ea/7/a膽awea(y"ca核酸的存在而46.根据权利要求45的方法，其中L^ea;/wmawea(y"ca特异引物扩增脲酶基因的全部或部分。47.根据权利要求46法，其中引物是Ul-5'GATGGTAAGTTAGTTGCTGAC3'U2-5'ACGACGTCCATAAGCAACT3，。48.—种检测原体感染的试剂盒，包括一种或多种病原体特异引物，采用病原体特异引物从血液样本中扩增病原体特异核酸的试剂和；采用引物从血清样本中检测扩增的产物的检测试剂。49.根据权利要求48的试剂盒，包括一种特异结合元件，其用于分离和/或纯化一种包含持久形式病原体细胞的血液样本的部分。50.根据权利要求49的试剂盒，其中特异结合元件是一种免疫球蛋白结合试剂，用于分离和/或纯化血液样本中的免疫复合物。51.根据权利要求48-50任何一项的的试剂盒，进一步包括用于转移、处理和储藏血液样本的仪器。52.根据权利要求48-51任何一项的的试剂盒，进一步包括用于从血液样本中去除血细胞的装置。53.根据权利要求48-52任何一项的的试剂盒，包括用于分离和/或纯化用于通过所述引物扩增的DNA的仪器。54.—种持久专性细胞内或膜相关病原性微生物的分离的原生小体，选自以下组成的组厥炎^"嚴体匸C.戶e"wom'a"、沙淑衣嚴伴f厂ac/7o附a"sJ>、生遭支嚴)^YA^co;/(Xs附flgemYa/Zw^)或,厥嚴沐55.—种根据权利要求54的原生小体，其中原生小体感染一种细胞以产生一种网状小体，其相对于所述微生物的参照菌株，为LPS缺陷和抗生素不敏感的。56.—种根据权利要求55的分离的原生小体，其中病原性微生物是沙殿衣'扇'沐fC/7/am;^arac/wwa"J;所述网状小体不表达Omp2(60kDa)、Omp3(9kDa)或PmpD，并且；相对于沙淑衣嚴沐0:/z/aw;^'a,rac/zow油;^的参照菌株，所述网状小体表达水平提高了的Hsp60;和水平降低了的MOMP。57.—种产生被专性细胞内或膜相关病原性微生物持久形式感染的宿主细胞的方法，包括分离和/或纯化来自含有所述持久形式细胞的个体血液样本的部分，使一群宿主细胞与所述部分接触，并且在所述群中鉴别含有微生物持久形式的宿主细胞。58.根据权利要求57的方法，包括分离或纯化所述鉴别的宿主细胞。59.根据权利要求57或58的方法，包括培养所述鉴别的宿主细胞。60.根据权利要求57-59任何一项的方法，其中专性细胞内或膜相关病原性微生物选自如下组成的组厕炎衣嚴体O:.戶e蘭om'a"、沙凝衣嚴沐frac/z謹a"d、^T遭支嚴浙M戸;/a纖age""a/Z—或,嚴嚴嚴体61.—种包含专性细胞内或膜相关病原性微生物持久形式的宿主细胞，其采用根据权利要求57-60任何一项的方法获得。62.—种根据权利要求61的宿主细胞，其中所述的专性细胞内或膜相关病原性微生物的持久形式与所述微生物参照菌株相比具有降低了的抗生素敏感。抗生素敏感63.—种根据权利要求61或62的宿主细胞，其中所述的专性细胞内或膜相关病原性微生物的持久形式与所述微生物参照菌株相比具有降低了的LPS或LPS缺陷。64.—种根据权利要求61-63任何一项的宿主细胞，其中专性细胞内或膜相关病原性微生物选自如下组成的组,炎衣嚴沐fC.戶e画om'fl"、#、凝衣扇沐(TC.rac/z画""sJ、生遭支嚴沐(^c。/7/ay歸gem.m/Z麵y)或J^屑沐Wm2/7/a扁awre—"cwwJ。65.—种根据权利要求64的分离的宿主细胞，其中病原性微生物是沙源衣扇""沐fC7z/flmyAa^ac/zoma"d;所述持久形式细胞不表达Omp2(60kDa)、Omp3(9kDa)或PmpD，并且；相对于沙淑衣嚴沐fCWawyAafrac/wwa&9的参照菌株，所述持久形式细胞表达水平提高了的Hsp60;和水平降低了的MOMP。66.—种筛选抗菌化合物的方法，可以包括使根据权利要求57-65任何一项的宿主细胞与一种待测化合物接触；并且测定所述化合物对所述宿主细胞中病原性微生物的作用，其中在所述宿主细胞中所述病原性微生物与对照相比数量的减少的指示待测化合物为一种抗菌化合物。67.—种测定抗菌化合物在治疗个体中专性细胞内或膜相关病原性微生物持久感染的效果的方法，其包括i)在施用抗菌化合物之前和之后从个体中获得血液样本；(ii)测定在所述样本中病原体细胞的数量或浓度；其中在给药之后获得的样本与给药之前相比病原性微生物细胞数量的降低指示该抗菌制剂对于治疗持久感染是有效的。68.根据权利要求67的方法，其中在所述样本中病原体细胞数量或浓s、(i)使所述血液样本与一种特异结合元件相接触以分离和/或纯化所述样本的部分，并且；(ii)在所述样本的所述部分中测定病原性微生物核酸的存在，其中在给药之后获得的样本部分与给药之前相比其中病原性微生物核酸数量的降低指示该抗菌制剂对于治疗持久感染是有效的。69.—种在个体中治疗专性细胞内病原性微生物持久感染的方法，包括i)给予个体一种抗菌化合物；ii)在给药之后从个体获得血液样本，iii)采用根据权利要求1-16任何一项的方法在血液样本中测定所述专性细胞内或膜相关病原性微生物细胞的存在与否，iv)重复步骤i)至iii)直至从样本部分中找不到来自病原性微生物的细胞。70.根据权利要求68或69的方法，其中细胞的存在被如下测定使来自个体的血液样本与一种特异结合元件相接触以分离和/或纯化所述样本的部分，并且；在所述部分中测定来自病原性微生物核酸的存在。71，根据权利要求70的方法，其中所述特异结合元件结合至免疫球蛋白，并且所述的分离和/或纯化的部分包括免疫复合物。72.根据权利要求70的方法，其中所述特异结合元件结合至脂蛋白，并且所述的分离和/或纯化的部分包括脂蛋白复合物。73.根据权利要求70-72任何一项的方法，其中分离和/或纯化部分包括所述持久形式的原生小体。74.根据权利要求67-73任何一项的方法，其中专性细胞内或膜相关病原性微生物选自如下组成的组厕炎沈辰沐fC戶e謂om'^;、沙淑衣嚴沐rac/zo聽"^J、主遭支嚴沐("Mycop/a^歸ge""a"ww,或,厭,嚴沐75.—种在个体中治疗动脉粥样硬化病况的方法，包括i)给予个体一种抗体酶抑制剂和一种抗菌化合物；ii)给药之后从个体获得血液样本，iii)在血液样本的非细胞部分中测定抗体酶活性水平，其中给予个体抗体酶抑制剂被重复直至抗体酶活性从非细胞部分中基本消失，并且iv)在血液样本非细胞部分中采用根据权利要求1-16任何一项的方法测定^炎衣嚴沐(T.戶ew附om'a"细胞的存在与否，其中给予个体抗菌化合物被重复直至/，炎衣嚴沐/wewmom'a"细胞从血液样本的非细胞部分中消失。76.—种在个体中治疗动脉粥样硬化病况的方法，包括i)给予个体阿奇霉素；ii)在所述给药之后从个体获得血液样本；iii)在血液样本的非细胞部分中测定抗体酶活性水平，并且；h0釆用根据权利要求1-16任何一项的方法在血液样本的非细胞部分中测定i^炎衣i資-沐rC.，eMmom'ad细胞的存在与否；其中给予个体阿奇霉素被重复直至抗体酶活性和^^衣嚴沐a:.p"ewmom'a"细胞均从来自个体的血液样本的非细胞部分中消失。77.根据权利要求75或76的方法，其中抗体酶活性水平通过测定部分中抗体介导的脂质氧化活性领'J定。78.根据权利要求77的方法，其中抗体酶活性水平通过测定部分中抗衣原体抗体介导的脂质氧化活性而被测定。全文摘要本发明涉及在血液样本中，特别是在血浆和血清样本中检测病原体，特别是专性细胞内或膜相关微生物的持久形式例如衣原体、支原体和脲原体种类。本发明的方法和试剂盒可用于检测病原体感染和评估病原体相关疾病病况，并且还可以用于研发和筛选新的抗菌药物，产品和治疗手段。文档编号A61K39/02GK101356436SQ200680045150公开日2009年1月28日申请日期2006年10月13日优先权日2005年10月14日发明者伊万·派特伊夫,奈利亚·阿哈托夫娜·西格加吉罗瓦申请人:伊万·派特伊夫