一种治疗肾病的中药组合物及其制备方法

专利名称：：一种治疗肾病的中药组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明属于医药领域，涉及一种中药组合物及其提取物以及它们在治疗肾病尤其是糖尿病肾病中的应用。
背景技术：
：肾病是一组严重危害人民身体健康的泌尿系疾病，多数反复发作，迁延难愈，治疗难度很大。特别是当肾病经过多次发作，病情得不到控制或没有得到有效的治疗，都可能发展为肾功能衰竭，最终发展到尿毒症。而一旦演变成尿毒症，就等于间接宣告患者的肾脏即将完全丧失功能。它被医学家称为沉默的"杀手型疾病"，而且近年来有逐渐增加的趋势。人们通常所说的肾病主要是指原发性肾小球疾病，如急性肾小球肾炎、肾病综合征、隐匿性肾小球肾炎等；继发性肾小球疾病如紫癜性肾炎、狼疮性肾炎、糖尿病性肾病、乙肝性肾病等。慢性肾炎、肾功能不全病理变化以肾小球损伤为主，且这种损伤难以逆转，故最终演变成肾功能衰竭、尿毒症。糖尿病肾病(DiabeticNephropathy,DN)即糖尿病肾小球硬化症，是糖尿病(DM)的微血管并发症之一，近年来发病率逐渐增高。在美国，糖尿病肾病己成为终末期肾病(ESRD)的首位病因。在国内，糖尿病肾病所导致的肾功能衰竭亦日益增多，在终末期肾衰病例中约占30%-40%。目前，我国的糖尿病发病率已升至3-5%,而糖尿病肾病的发病率也随之不断攀升，随着糖尿病病程的延长，一旦患者出现持续性蛋白尿，其病情即呈进行性发展并且不可逆转。统计数据表明病程在10-20年的糖尿病患者，无论年龄大小，约有50%伴有不同程度的肾功能损伤。一旦发展至肾衰竭阶段则很难治疗，给病人及家属带来极大痛苦，并危及病人生命。该病现已成为导致糖尿病病人死亡的主要原因。在糖尿病患者中，I型患者糖尿病肾病发生率约为33-44%,II型患者糖尿病肾病发生率约为20%。在我国，近几年在经济发达地区统计资料表明糖尿病肾病所致终末期肾病的比例达15%左右，由于我国人口基数巨大，未来糖尿病肾病及终末期肾病的患病人群必将成为医疗和社会的重大负担。现有的中药复方在临床治疗糖尿病肾病方面已经取得了一定的成果，进一步对于临床上常用方剂中的一些单味药如大黄、黄蜀葵花、黄芪、丹参、夏枯草、银杏等中药进行的研究发现，这些单味药中的某些成分对于糖尿病肾病的有确切的疗效。黄蜀葵」6e/mosc/zmmam7zo《L.)Medic.[///6/scwsmam7zc^L.]为锦葵禾斗植物，黄蜀葵全草入药，能清热、凉血、解毒，其花性味甘寒滑、无毒，具有清利湿热、消炎解毒之功效，内服主治五淋、水肿，外用治疗痈疽肿毒、汤水烫伤。果实种子具有补脾健胃、生肌功效，治疗消化不良、不思饮食、跌打损伤等。黄蜀葵花大而美丽，花期长，具有较高的观赏价值，且含有丰富的黄酮类化合物，其中以金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素-3'-葡萄糖苷含量最高。目前，市售黄蜀葵花胶囊即为黄蜀葵花的单味制剂，主治慢性肾炎。大黄Radixetrhizomerhei，始载于我国现存最早的药学专著《神农本草经》，可泻热通肠、凉血解毒、逐淤通经。在复方中药里，是出现频率最高的药物之一，如厚朴大黄汤、大黄牡丹汤、三黄汤等。近年来许多报道表明含有大黄的方剂以及大黄提取物可有效保护肾功能，延缓糖尿病肾病病人的透析，并延缓慢性肾衰进展，可将其应用于糖尿病肾病的治疗。尤其是大黄酸在治疗糖尿病肾病方面的研究较为深入l.可降低血糖，调节血脂，并改善胰岛素抵抗；2.保护肾功能，改善糖尿病导致的组织器官损伤，肾脏肥大，保护血管内皮细胞，减少蛋白尿的排泄。目前市售的大黄单味及复方制剂主要用于抗酸健胃、清热泻火、治疗便秘，但是用于治疗糖尿病肾病的大黄单味制剂还未上市。由于肾病的发病机制十分复杂，临床表现也多种多样，因此，目前市场上尚无治疗肾病的特效药物。对于糖尿病肾病患者，除了调整生活习惯和控制饮食之外，通常需要药物进行终身治疗。西药治疗主要通过降低血糖，控制血压，降低血脂的药物合用同时配合病人其它并发症的治疗来延缓病情的发展，西药治疗起效较快，能缓解急症，但是长期服药给肾脏功能已有缺陷的肾病患者带来较多副作用。与西药相比，中药治疗糖尿病肾病这种慢性疾病具有明显的优势，虽然在急症的缓解方面要略逊色于西药(如降血糖作用的起效速度较慢)，但其多组分多靶点的协同作用恰恰与糖尿病肾病复杂的病理相符合，尤其在病程初期，其远期治疗效果要远优于西药，且毒副作用小，对于改善和恢复肾脏功能更为有益。但是传统中药复方因配方的选择、用量的多少以及炮制和制备方法的不同，可能产生难以预期的药理作用，同时由于所含成分复杂，在生产中质量难以控制，难以保证临床疗效，所以开发质量可控、安全有效、毒副作用小、服用方便、适合长期使用的中药一直是研究的重点。
发明内容发明人在传统中医学对本病认识的基础上，提供了一种用于治疗肾病尤其是糖尿病肾病的中药组合物。该中药组合物的特征是采用临床使用量的大黄和黄蜀葵花以一定重量百分比组合而成，其中所述的重量百分比为黄蜀葵花10-90%，大黄10-90%;优选的重量百分比为黄蜀葵花30-90%，大黄10-70%,最优选的重量百分比为黄蜀葵花50-90%,大黄10-50%。本发明的另一目的是提供上述中药组合物的有效提取物(以下简称本提取物)。该有效提取物通过以下工艺条件制备步骤l:按上述重量百分比称取所需量的大黄和黄蜀葵花药材，将大黄酌予碎断与黄蜀葵花混合后一并置于提取罐中，加一定浓度的乙醇提取1-3次，每次0.5-3小时；步骤2:合并醇提取液，浓縮至一定体积，放冷，过滤，滤液上大孔吸附树脂柱，水洗，弃去水洗液；以一定浓度的乙醇洗柱除杂，弃去乙醇液；再以3-5倍树脂柱柱体积的高浓度乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓縮至原体积的l/10-l/25后，加4-6倍量95%乙醇沉淀，静置过滤，将滤液蒸干得到的固体粉碎即得。步骤1中乙醇浓度为5-95%，优选10。％-40%;步骤2中所用的大孔吸附树脂柱，其型号可以为HPD-IOO，HPD-400，HPD-450，HPD-700，D101和AB-8，优选HPD-700;步骤2中用于洗柱的乙醇浓度为10-80%，优选40-70%;用于洗脱的乙醇浓度为50-95%，优选70-95%。通过上述方法得到的固体粉末即为本中药组合物的提取物(简称本提取物)，其中大黄酸的含量为0.1%—25%，金丝桃苷0.5%—30°/。，优选大黄酸0.3%—20%,金丝桃苷1%—25°/。，最优选大黄酸0.5%—17%，金丝桃苷1.2%—20%。本发明还有一个目的是提供所述中药组合物及本提取物在制备治疗多种肾病药物中的应用。其中所述的肾病，包括各种原因导致的急、慢性肾炎和肾功能不全，如糖尿病肾病、隐匿性肾炎、间质性肾炎、肾盂肾炎、狼疮性肾炎、IgA肾炎等，其中优选用于治疗糖尿病肾病。所述的药物是指所述中药组合物或本提取物通过常用辅料采用常规制剂方法制备成的常规制剂形式。常规制剂主要为口服制剂，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸、口服液、微丸剂等。优选为片剂、胶囊。片剂包括素片、包衣片、缓释片、分散片、肠溶片、含片、咀嚼片、泡腾片等；胶囊包括硬胶囊、软胶囊、缓释胶囊、肠溶胶囊等；微丸剂包括普通微丸、缓释微丸、肠溶微丸、控释微丸等。本发明所述的临床使用剂量可随特定的给药方式、病症的严重程度等而相应调整。一般情况下临床口服使用的参考剂量为100-40000mg/天。本发明使用的药材有以下要求1.大黄，应为蓼科植物掌叶大黄(i/7ewwpfl/w"加wL.)，唐古特大黄(i/zewmto"gw".cwwMaxim.exBalf.)或药用大黄(i/zewmq^c/"a/eBaill.)的干燥根及根茎，且符合《中华人民共和国药典》(2005年版一部)"大黄"各项下有关规定。2.黄蜀葵花，又名侧金盏花，野芙蓉，应为锦葵科植物黄蜀葵(^k/ma^/n^maw7of(L.)Medic.[///6&cwswaw7zofL.])或冈U毛黄蜀葵(^6e/mosc/zi^mam7zof(L.)Medic.Var.pimgens(Roxb.)Hochr.)的花。本发明与现有技术相比，具有以下显著的优点(1)黄蜀葵花与大黄按照一定比例配伍后所得的中药组合物，无大黄的致泄作用，减少了患者用药过程中的副反应；(2)该中药组合物或者其提取物对肾病尤其是糖尿病肾病具有显著的疗效，特别需要指出的是发明人经过大量的实验研究发现以所述比例配伍得到的组合物在同等剂量条件下较单独使用大黄或黄蜀葵花提取物具有更优的治疗效果，提示上述两种成分的在特定比例下能产生相互协同的治疗作用；(3)本发明所述的本提取物的制备方法，不仅能保证各有效成分相应的含量，而且能控制有效成分之间的含量配比，保证了其对肾病尤其是对糖尿病肾病的显著疗效；(4)本发明的提取和纯化方法简便易行，重现性好，适合工业化生产。下述内容为药效学和毒理学研究，通过这部分实验充分说明了本发明组合物具有突出的技术效果。一、药效学研究为了充分说明组合物的有益效果，实验中将本提取物与黄蜀葵花提取物和大黄提取物作对比。1、1本发明组合物对肾病家兔的治疗作用发明人成功的制备了家兔Masugi肾炎模型，并采用本提取物对肾炎家兔进行治疗。实验结果表明在给予本提取物后在不同时间段造模动物的尿蛋白量、血尿素氮、血肌酐显著下降。同时病理学检查结果显示模型家兔肾小球呈弥漫性损伤，肾小球有明显蛋白沉积，近曲小管上皮细胞肿胀，明显的蛋白管型，肾小球壁层细胞增生及纤维化，新月体形成50%以上。而经本提取物治疗后肾损伤显著减轻，其对模型动物肾功能的保护作用与阳性药地塞米松接近，优于单独的大黄和黄蜀葵花提取物。该部分实验结果显示本发明组合物及其提取物对肾炎有明确的治疗效果，并且通过药物有效成分之间的相互协同作用其药效强度在相同剂量条件下明显优于单味药材或单味药材的提取物。1、2组合物对糖尿病肾病大鼠的治疗作用由于临床医疗实践已经证实血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)如卡托普利、依那普利等能有效预防和治疗糖尿病引起的肾损害，故发明人在药效学考察中采用卡托普利作为阳性对照药。实验中模型大鼠经链脲佐菌素(STZ)腹腔注射72h后，空腹血糖高达27.57±4.79mmol/l，并且血糖维持高水平的同时出现饮水量及尿量增加，体重下降，肾功能降低，尿微量蛋白水平(mAlb)显著增高，肾脏肥大，说明模型大鼠的病理生理变化符合糖尿病肾损害的特征。经本提取物治疗6周，大鼠Ure、Cr、尿量显著低于糖尿病模型组，证实本提取物能改善糖尿病肾病大鼠的肾功能，减轻了肾小球高滤过、高灌注状态。糖尿病肾病的另一重要表现是蛋白尿，在糖尿病肾病早期主要出现尿液微量白蛋白(mAlb)，在糖尿病肾病早期用常规方法还不能检出尿蛋白时，mAlb排出已增加。研究表明实验大鼠在接受本提取物治疗后，mAlb显著减少，提示糖尿病肾病大鼠的肾脏病变得到了明显地抑制与改善。细胞外基质增多是糖尿病肾病的病理特征之一，研究发现本提取物组肾小球基底膜/系膜区面积比明显小于糖尿病肾病模型组，毛细血管襻/系膜区面积比则明显大于糖尿病肾病模型组，提示本提取物可能对糖尿病大鼠肾脏的细胞外基质沉积具有抑制作用。总之，研究结果表明本发明组合物及其提取物能有效改善糖尿病肾病大鼠肾功能、减少蛋白尿、减轻肾小球高滤过、抑制肾脏肥大、抑制细胞外基质增加，对STZ诱导的糖尿病肾病有显著的预防和治疗作用。二、毒理学研究急性毒性试验本发明组合物及其提取物对小鼠的急性毒性反应较小无法测出LD50，故进行最大给药量试验。当给药剂量达到20g/kg时连续观察7天，除个别动物体重稍有下降外，所有小鼠毛色、排泄物、精神状态、行为均正常并且未出现死亡。实验结束后将所有动物处死解剖肉眼观察，未见重要脏器有明显病理改变。急性毒性试验表明本组合物未引起动物急性毒性反应。具体实施例方式通过下述实施例将有助于理解本发明，但并不限制本发明的内容。大黄酸含量测定采用本领域公知的高效液相色谱法测定，条件如下色谱柱C18;X=254nm;v=1.0ml/min;T=30°C;流动相0.1°/。磷酸:甲醇=30:70;标准品大黄酸(购自中检所)。金丝桃苷含量的测定采用本领域公知的高效液相色谱法测定，条件如下色谱柱C18;X=360nm;v=1.0ml/min;T=30°C;流动相乙腈:0.1%磷酸溶液=12:88;标准品金丝桃苷(购自中检所)。实施例一(1)提取取大黄5kg酌予碎断，与黄蜀葵花12kg混合后一并置于提取罐中，加20%的乙醇提取3次，每次150L，提取2小时。(2)分离纯化合并醇提取液，放冷，过滤，滤液上HPD-700型大孔吸附树脂柱，水洗，弃去水洗液，25%乙醇洗柱除杂，再加85%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓縮至总体积为3L，加95。/。乙醇15L醇沉，静置过滤，将滤液蒸干溶剂所得固体粉碎成细粉，即得本提取物349克。其中大黄酸含量为12.8%，金丝桃苷含量为17.8%。(3)取上述提取物，加入适量淀粉制成胶囊制剂，即得。实施例二(1)提取取大黄150kg酌予碎断，与黄蜀葵花170kg混合后一并置于提取罐中，加20%的乙醇提取3次，每次3000L，提取l小时；(2)分离纯化合并醇提取液，放冷，过滤，滤液上HPD-100型大孔吸附树脂柱，水洗，弃去水洗液，25%乙醇洗柱除杂，再加卯％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓縮至总体积为50L，加95。/。乙醇300L醇沉，静置过滤，将滤液蒸干溶剂所得固体粉碎成细粉，即得提取物5110克。大黄酸含量为17.5%，金丝桃苷含量为23.1%。(3)取上述提取物，加入适量淀粉，制粒，压片，即得片剂。实施例三(1)提取取大黄10kg酌予碎断，与黄蜀葵花8kg混合后一并置于提取罐中，加10%的乙醇提取3次，每次200L，提取0.5小时；(2)分离纯化合并醇提取液，放冷，过滤，滤液上HPD-750型大孔吸附树脂柱，水洗，弃去水洗液，25%乙醇洗柱除杂，再加90%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓縮至总体积为3L，加95n/c乙醇14L醇沉，静置过滤，将滤液蒸干溶剂所得固体粉碎成细粉，即得提取物397克。其中大黄酸含量为7.1°/。，金丝桃苷含量为15.6%。(3)取上述提取物，加入适量微粉硅胶制成胶囊制剂，即得。实施例四(1)提取取大黄、黄蜀葵花各15kg,大黄酌予碎断，与黄蜀葵花混合后一并置于提取罐中，加15%的乙醇提取2次，每次300L，提取1小时。(2)分离纯化合并醇提取液，放冷，过滤，滤液上AB8型大孔吸附树脂柱，水洗，弃去水洗液，25%乙醇洗柱除杂，再加95%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓縮至总体积为5L，加95。/。乙醇28L醇沉，静置过滤，将滤液蒸干溶剂所得固体粉碎成细粉，即得提取物408克。其中大黄酸含量为9.1%，金丝桃苷含量为13.7%。(3)取上述提取物，加入适量淀粉，制粒，压片，即得片剂。实施例五(1)提取取大黄16kg酌予碎断，与黄蜀葵花8kg混合后一并置于提取罐中，加20%的乙醇提取2次，每次200L，提取1小时。(2)分离纯化合并醇提取液，放冷，过滤，滤液上HPD-600型大孔吸附树脂柱，水洗，弃去水洗液，25%乙醇洗柱，再加80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓縮至总体积为5L，加95。/。乙醇25L醇沉，静置过滤，将滤液蒸干溶剂所得固体粉碎成细粉，即得提取物305克。其中大黄酸含量为7.5%，金丝桃苷含量为10.7%。(3)取上述提取物，加入适量糊精、糖粉，制粒，压片，即得片剂。实施例六黄蜀葵花提取物的制备取黄蜀葵花7.5kg置于提取罐中，加10%乙醇提取3次，每次75L，提取1小时。合并提取液，放冷，过滤，滤液上HPD-600型大孔吸附树脂柱，水洗，弃去水洗液，90%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂至2L，加95。/。乙醇10L醇沉一次，静置过滤，将滤液蒸干溶剂得到的固体粉碎成细粉，得到黄蜀葵花提取物164g，其中金丝桃苷含量为21.8%。实施例七大黄提取物的制备取大黄5kg酌予粉碎，加10°/。乙醇提取3次，每次50L，提取1.5小时。合并提取液，放冷，过滤，滤液上HPD-700大孔吸附树脂柱，水洗，弃去水洗液；以65%乙醇洗柱，弃去洗柱液；再95%乙醇洗脱，将洗脱液蒸干溶剂得到的固体粉碎成细粉，得到大黄提取物93g，其中大黄酸的含量为18.4%。实施例八本提取物对Masugi肾炎的治疗作用1.材料和方法1、l羊抗兔的抗肾血清制备按文献制备羊抗兔的抗肾血清。取22.5kg家兔，雌雄不计，处死取肾，插入导管用生理盐水反复冲洗，取肾皮质5g匀浆，用弗氏完全佐剂混匀成10ml，加生理盐水20ml，制成混悬液。给绵羊皮下五处注射。每次lml，每2周1次，共4次。于末次注射后2周，采羊血分离血清。加入等量的兔红细胞于4r过夜吸附，离心吸取上清液，于56'C水浴30min灭活备用。本提取物(本发明组合物经提取所得)以及大黄、黄蜀葵花提取物由江苏正大天晴药业股份有限公司研发中心提供。其中所述提取物根据实施例一方法制备，黄蜀葵花提取物根据实施例六方法制备；大黄提取物组根据实施例七方法制备。1、2模型制备取健康家兔36只，体重2.0士0.5kg，雌雄各半。实验前测24h尿蛋白总量查无异常后取其中30只，分别耳缘静脉注射羊抗兔的抗肾血清，每次2ml，30min一次，5次后所有家兔均先后出现蛋白尿，表明造模成功。将30只造模家兔随机分成5组，模型组、阳性组(地塞米松)、提取物组、大黄提取物组、黄蜀葵花提取物组，每组6只，于成模后第一天开始每日灌胃给药，连续灌胃15天。地塞米松剂量为O.lmg/kg;提取物组剂量为110mg/kg;大黄组剂量为110mg/kg、黄蜀葵花组剂量为110mg/kg。1、3观察指标各组动物在造模后第5天、10天、15天收集24h尿液，取血按浊度法、乙酰-肟法、碱性苦味酸法分别测定尿蛋白、血清Urea、血清Cre含量。第15天处死取肾，光镜下观察病理组织学形态变化。1、4统计学方法所测的结果用i士s表示，t检验。2、试验结果2、l受试药物对尿蛋白含量的影响。家兔造模后出现蛋白尿，尿蛋白含量在第5-10天之间维持较高的水平，随后尿蛋白量逐渐降低，显示了该模型一定的自愈趋势。给药后，模型动物尿蛋白含量均有明显下降，表明地塞米松、本提取物、大黄提取物、黄蜀葵花提取物对Masugi肾炎模型家兔的肾功能有保护作用。并且在治疗后IO天内提取物的作用强度明显优于大黄和黄葵提取物组，第10-15天这种优势不明显，推测是动物自身的功能恢复掩盖了药物作用的强度差异。表l、受试药物对尿蛋白含量的影响(3f士s)组别n剂量尿蛋白的量/mgmg/kg5天IO天15天正常对照组模型对照组地塞米松组本提取物组大黄组666660.11101100.46±0.08107.72±19.69#5.96士1.9251518條5.11*25.00±4.21*°0.51±0.1482.83±20.07#4.21±2.06*9.46±2,13*22.96士6.22*。0.73±0.2650.35±15.78#1.59±1.22*5.89±4.38*11.51±6.47*<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>#P<0.05与正常对照组组比较，*P<0.05与模型对照组比较，。PO.05与本提取物组比较。2、2受试药物对血清Urea的影响。动物于造模后5、10、15天耳缘静脉取血测定不同时期血清Urea，阳性药物地塞米松在第10-15天能显著降低动物的血清Urea含量。本提取物在15天降低血清Urea与模型组比较有显著差异，并且与大黄、黄蜀葵花提取物组相比有统计学意义。而大黄、黄蜀葵花提取物组与模型组相比较虽有降低趋势但是没有统计学差异。结果表明本提取物能有效缓解模型动物肾功能的损伤，并且作用强度大于大黄和黄蜀葵花提取物组。表2、受试药物对血清Urea的影响(3^士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>"PO.05与正常对照组比较，*P<0.05与模型对照组比较，。PO.05与本提取物组比较。2、3受试药物对血清Cre的影响动物在造模后血清Cre在第10天开始出现急剧上升，同时地塞米松降低血清Cre与模型组比有显著差异。本提取物、大黄提取组、黄蜀葵花提取物组在第10、15天均显示出了显著的降低血清Cre的作用。尤其是在第15天时本提取物的作用强于大黄组。表3、受试药物对血清Cre的影响(3^土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>弁PO.05与正常对照组比较，*P<0.05与模型对照组比较，。PO.05与本提取物组比较。3、结论通过表1-3的数据可以看出本提取物能有效提高Masugi肾炎家兔的肾功能。能有效降低尿中蛋白含量，并能促进血肌酐和尿素氮的排出。并且其作用强度大于大黄、黄葵提取物组，表明本提取物中两味药材中提取的有效成分之间产生了相互协同的药理作用，表现出了出人意料的技术效果。实施例九对STZ造模大鼠糖尿病肾病的治疗作用1、试验材料1.1受试药物本提取物(本发明组合物经提取所得)，江苏正大天晴药业股份有限公司提供，批号20051215，本试验中给药剂量为200mg/kg;卡托普利，中美上海施贵宝制药有限公司，批号20060103，试验中剂量为8mg/kg;黄蜀葵花提取物试验中剂量为200mg/kg;大黄提取物试验中剂量为200mg/kg。上述药物以蒸馏水配制，灌胃给药。1.2动物清洁级雄性SD大鼠90只，体重200220g购于上海斯莱克实验动物有限责任公司。动物合格证号SCXK(沪)2003-0003。1.3试剂及药品链脲佐菌素(STZ)购于美国Sigma公司，用pH4.2的0.01mmol/ml枸橼酸缓冲液制成8mg/ml的STZ溶液；血糖测定仪及试纸由强生(中国)有限公司提供；血糖(BG)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)等生化试剂购自北京中控中生生物试剂公司；尿微量白蛋白(mAlb)测定试剂购自上海太阳生物技术有限公司。本提取物以及大黄、黄蜀葵花提取物由江苏正大天晴药业股份有限公司研发中心提供。其中本提取物根据实施例一方法制备，黄蜀葵花提取物根据实施例六方法制备；大黄提取物根据实施例七方法制备。2.方法2丄动物模型的建立与分组以45mg/kg的STZ枸橼酸液缓冲液腹腔内注射制备糖尿病肾病大鼠模型，正常对照组腹腔注射等量枸橼酸缓冲液。注射72h后，大鼠尾静脉测血糖M6.6mmol/L为造模成功。动物按血糖值随机分成5组正常对照组、糖尿病肾病模型组、卡托普利组(8mg/kg)、黄蜀葵花提取物组(200mg/kg)、大黄提取物组(200mg/kg)、本提取物组(200mg/kg)。各给药组按10ml/kg灌胃给药，正常对照组、模型对照组给予等体积蒸馏水。各组大鼠于给药后6周，将其置于代谢笼中，留取24h尿液，次日称重后股动脉取血，分离血清，血、尿标本-20。C保存备测。取大鼠肾称重，在冰浴上取肾皮质，置10%甲醛液中固定。2.2.观察指标血、尿中生化指标按试剂盒说明书进行操作测定；相对肾指数为肾重与体重之比。肾脏进行常规HE染色与糖原PAS染色。PAS染色病理进行半定量分析光镜下盲法观察，取PAS染色切片，进行半定量分析，每份标本观察10个肾小球，计算肾小球基底膜与系膜区面积比及毛细血管襻与系膜区面积比，取均值比较。3.统计分析测定数据以^士s表示，采用t检验。4.实验结果糖尿病肾病模型组、各给药组于注射STZ72h后，饮水量及尿量显著增加，体重下降，精神萎靡，其血糖均〉16.6mmo1/1，平均为(27.57±4.79)mmo1/1，且一直保持在高水平。4.1对STZ糖尿病肾病大鼠肾功能与尿微量白蛋白的影响持续高血糖6周后糖尿病肾病模型对照组大鼠血中Ure、血Cr及尿中mALB/Cr显著升高(p0.01)。卡托普利组、黄蜀葵花提取物、大黄提取物组、本提取物组用药6周后血中Ure、血中Cr(SCr)及尿中mALB/Cr均显著低于模型对照组(p<0.01或p0.05)。Tab.l对STZ糖尿病肾病大鼠肾功能与尿微量白蛋白的影响的(3^士s)组别剂量(mg/kg)动物数(n)Ure(mmo1/1)SCrmALB/Cr(mg/(xmo1)正常对照组-156.4U1.2072.07±10.300.29±0.11模型对照组-1518.90±4.60#*95.44±17.94**0.85±0.36##卡托普利组81514,83±2.55**81.08±6.84**0.60±0.14*本提取物组黄蜀葵花组大黄组2002002001515152.79士2,48"14.72±2.20**14.85±3.87*78.70±10.26**84.40±8.68*81.84±9.71*0.57±0.09**0.61土0.1P0.62±0.06*##p<0.01与正常对照组比；*p<0.05**p<0.01与模型对照组比。4.2.对STZ糖尿病肾病大鼠肾指数的影响持续高血糖6周后糖尿病肾病模型大鼠肾指数升高(pO.Ol)。用药6周后，卡托普利与黄葵提取物组对肾指数有一定的抑制作用，但无显著性差异(p>0.05)，而本提取物与大黄组对肾指数有明显的抑制作用(p0.05)。Tab.2对STZ糖尿病肾病大鼠肾脏指数的影响O士s)组别剂量mg/kg动物数(n)肾指数mg/g正常对照组-150.70±0.08模型对照组-151.21±0.18#*卡托普利组81.12±0.07本提取物组2001.07±0.10*黄蜀葵花组2001.12±0.08大黄组200151.10±0.05*##P<0.01与正常对照组比较，*P<0.05与模型对照组比较。4.3对STZ糖尿病肾病大鼠肾脏病理变化的影响实验6周后糖尿病肾病模型对照组的肾小球系膜区弥漫性增宽、系膜基质增多、部分肾小球出现PAS染色阳性的匀质蛋白性物质、肾小球内皮细胞无明显增多、小管-间质无明显病理改变，卡托普利组、本提取物组肾脏病理改变明显轻于糖尿病模型组。肾脏病理图像半定量分析显示糖尿病肾病模型组的肾小球基底膜/系膜区面积比明显大于正常对照组，毛细血管襻/系膜区面积比明显小于正常对照组；各给药组肾小球基底膜/系膜区面积比小于糖尿病肾病模型组，毛细血管襻/系膜区面积比则大于模型组；各给药组与正常对照组相比，改变不明显。5.结论实验结果显示本提取物组能改善造模动物肾功能、减少蛋白尿、减轻肾小球高滤过、抑制肾脏肥大、抑制细胞外基质增加，对STZ诱导糖尿病肾病大鼠的早期肾脏病变有显著的防治作用。实施例十本提取物急性毒性的研究预实验显示本提取物急性毒性较小无法测出LD50，故进行最大给药量试验。1、实验材料本提取物由江苏正大天晴药业股份有限公司研发中心提供。根据实施例一方法制备。药物浓度为0.5g/ml(本提取物最大浓度)。实验动物清洁级小鼠，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司。动物合格证号SCXK(沪)2003-0003。2、实验方法小鼠20只，雌雄各半，取本提取物0.5g/ml，以0.4ml/10g体积灌胃，即剂量为20g/kg时，连续观察7天。除个别动物体重稍有下降外，全部小鼠未出现死亡并且毛色、行为、饮食均正常。观察期满后，所有小鼠均处死解剖，肉眼观察未发现有明显脏器改变。急性毒性试验表明本组合物没有引起动物明显的急性毒性反应。权利要求1.一种中药组合物，特征在于由下列重量百分比的药材制成黄蜀葵花10-90％，大黄10-90％。2.如权利要求l所述的中药组合物，其中按重量百分比计黄蜀葵花30-90%，大黄10-70%。3.如权利要求1或2所述的中药组合物，其中按重量百分比计黄蜀葵花50-90%，大黄10-50%。4.一种权利要求1所述的组合物的提取物，特征是其中大黄酸的含量为0.1%一25%，金丝桃苷0.5%—30°/0。5.权利要求4所述的提取物，其中大黄酸含量为0.3%—20%，金丝桃苷1%—25%。6.权利要求5所述的提取物，其中大黄酸含量为0.5%_17%，金丝桃苷1.2%—20%。7.权利要求l-3所述的任一中药组合物或者是权利要求4-6所述的任一提取物在制备治疗肾病药物中的应用。8.权利要求7所述的应用，其中肾病是指各种原因导致的急、慢性肾炎和肾功能不全。9.权利要求7所述的应用，其中肾病是指糖尿病肾病。全文摘要本发明提供了一种中药组合物及其提取物，以及在治疗肾病中的用途。本发明中所述的治疗肾病的中药组合物及其提取物，对慢性肾病尤其是糖尿病肾病疗效显著。本发明的制备方法重现性好，适合工业化生产。文档编号A61P13/12GK101313943SQ20071002300公开日2008年12月3日申请日期2007年5月30日优先权日2007年5月30日发明者伟宋,徐宏江,杨永安,石赟蓉,郭安军申请人:江苏正大天晴药业股份有限公司