具有抗角膜新生血管作用的滴眼液及其制备方法

专利名称：：具有抗角膜新生血管作用的滴眼液及其制备方法
技术领域：
：本发明属于药物制剂领域，涉及一种治疗眼角膜新生血管的药物，尤其涉及以青蒿琥酯为原料的青蒿琥酯滴眼液及其制备方法。
背景技术：
：正常角膜组织没有血管，角膜周围组织终止于角膜缘并形成血管网，营养成分由此扩散进入角膜。角膜无血管是维持其透明性和作为重要屈光间质的重要因素之一。在配戴角膜接触镜、眼外伤或化学伤、感染、既往手术史、倒睫和免疫性眼病等疾病和病理状态下，毛细血管由角膜缘长入角膜，形成角膜新生血管(CNV)。CNV破坏了角膜正常的微环境，导致眼前节相关免疫赦免消失，成为角膜移植排斥反应的高危因素。另外，新生血管结构脆弱，常因血管出血、渗出和继发纤维化等引起患者失明，所以CNV成为最常见致盲原因之一。在发达国家，新生血管化角膜引起的眼部疾病已占失明原因的首位；在我国，眼外伤(尤其是化学烧伤)引起的CNV约占角膜疾病的10%,严重视力损害给患者带来巨大痛苦。随着人们对角膜新生血管形成机制的研究，在药物治疗和手术治疗上取得了较大的进展，但治疗效果不尽如人意，例如抑制炎症的激素疗法，尽管能明显抑制角膜炎症与新生血管的发展，但存在延迟角膜上皮愈合、阻断角膜自我修复并可加重角膜溃疡等副作用；最近氩激光光凝疗法用于CNV的治疗，但热损伤波及周围组织有进一步降低视力的危险；而应用血管增生抑制因子以及血管增生拮抗剂的生物治疗，疗效显著，不过全身给药副作用高，成本较高，而且大部分方法还处于实验研究阶段。因此需要寻找更加有效、安全和经济的治疗药物和手段。青蒿素类药物主要来自于黄花蒿，因起效快、副作用低，不易产生耐药以及可有效治疗氯喹耐药性疟原虫，而被用于全球恶性疟和脑型疟的治疗，青蒿琥酯(artesimate;)是唯一一种水溶性青蒿素类衍生物,在体内代谢为双氢青蒿素发挥作用，抗疟效果显著，主要用于脑型疟和各种危重疟疾的治疔。近年来对青蒿琥酯的研究不仅限于治疗疟疾,尚发现它有抗炎、抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用以及抑制肿瘤血管增生的作用。授权公告号为CN1208061C的中国专利文献中公布了一种青蒿琥酯微球注射液，使用缓释聚合物研磨青蒿琥酯，制备成微球注射液，主要用于治疗肿瘤相关性血管增生以及其它疾病4导致的血管增生，但该微球注射液不适应于眼表血管增生的治疗。原因是一方面，眼表疾病的治疗常以使用方便，深受患者欢迎的滴眼液为主，此药物为注射用药，故在剂型方面使用不方便。另外，微球注射液中的聚合物缓慢释药后降解为水和二氧化碳，释放的二氧化碳对眼表的pH值以及其他生理指标是否有影响，以及是否影响受损角膜恢复有待于讨论，所以此专利文献中的青蒿琥酯制剂不适用于治疗角膜新生血管。
发明内容本发明的目的是公开一种安全性好，疗效显著的治疗角膜新生血管的青蒿琥酯滴眼液。本发明中的滴眼液以青蒿琥酯作为活性成分，制剂中包含缓冲液、增稠剂、等渗试剂和防腐剂。缓冲液可以是磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、氨基酸等。增稠剂可以是羟丙基甲基纤维素、羧丙基甲基纤维素、透明质酸钠等。等渗试剂可以是葡萄糖、甘油、氯化钠、硼酸等。防腐剂可以是硫柳汞、苯扎溴铵、对羟基苯甲酸酯等。本发明的帝U剂pH通常调至6.5-8.0。本发明的青蒿琥酯滴眼液可由下列重量份的原料制成青蒿琥酯0.0096-0.0384份；缓冲液中的酸性成分1.0032-12.028份；缓冲液中的碱性成分O.106-18.0477份；增稠剂l.O-35.0份；等渗试剂2.0-4.72份；防腐剂0.01-0.02份。本发明的另一个目的是提供上述滴眼液的制备方法1、取青蒿琥酯用NaHC03溶解，过滤除菌后待用；2、将适量缓冲液成分、等渗试剂和增稠剂溶于蒸馏水中，以100-12(TC高压灭菌20分钟，得工作液，冷却至室温备用；3、将防腐剂用蒸馏水配置成高浓度储存液，过滤除菌分装待用；4、在无菌条件下将青蒿琥酯溶液按照每100ml加16Pl66yl的比例加入到工作液中，混合均匀，同时将防腐剂按照每100m咖50ul100ul的比例加入到缓冲液中，分装制成不同规格的滴眼液，优选是每瓶包装0.5ml。图l:碱烧伤ll天后大鼠角膜裂隙灯显微镜照片(X20);图2:青蒿琥酯滴眼液对碱烧伤角膜治疗效果的评估；图3:青蒿琥酯对HUVEC的抑制作用；图4:滴眼液赋形剂对青蒿琥酯对HUVEC抑制作用的影响；图5:赋形剂对HUVEC增殖的影响作用；图6:原代培养的角膜上皮细胞(X200);图7:青蒿琥酯对兔角膜上皮细胞的抑制作用。具体实施例下列试验实施例和药剂制备实施例仅用于说明本发明的目的，而不能限制本发明的范围。(一)试验实施例——药效实验1、滴眼液对碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管的治疗作用碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管模型的制备选用10(Hil-200W容积的微量移液器枪头，在距尾部15mm处水平切去尖端，并用刀片将切口处削薄。在枪头内填充棉花，确保头部棉花松紧适中，可以充分接触大鼠角膜的球形表面，纸胶布封住模具尾部，此模具容积为22(^1，高压消毒后备用。选取体重150g-230g的雌性SPF级Sprague-Dawley(SD)大鼠15只，由广州中医药大学提供，饲养于中山大学中山眼科中心动物实验室，裂隙灯检查排除眼表疾病，造模前三天每天两次双眼点妥布霉素滴眼液。然后按照45mg/kg体重腹腔注射3%戊巴比妥钠水溶液。在自制大鼠角膜碱烧伤模具内滴入220jillNNaOH。将模具接触大鼠角膜中央35秒，迅速用30-60ml生理盐水冲洗结膜囊和角膜。可见一个圆形居中的灰白色烧灼斑，直径4mm，双眼烧伤。将动物随机分为阴性对照(赋性剂加相当的NaHC03)组、25ymol/L青蒿琥酯滴眼液组(简称青蒿琥酯组)和0.1%地塞米松阳性对照组(简称地塞米松组)，每天分别在8:00am、12:00pm、4:00pm和8:00pm滴眼药水，每次每眼20ul。碱烧伤后第1、2、3、5、7、9、ll天于裂隙灯下观察大鼠眼球，观察指标为炎症指数(包括结膜充血、角膜水肿和眼内渗出或出血三项)，角膜上皮、角膜混浊度和新生血管面积。并按以下标准进行评分结膜充血0--无充血1---角膜缘血管环轻度充血2--角膜缘血管环中度充血3---角膜缘血管环重度充血，血管怒张角膜水肿0--无水肿(角膜厚度正常)眼内渗出或出血1--轻度水肿(角膜厚度轻度增加)2---中度水肿(角膜厚度中度增加)3--重度水肿(角膜厚度重度增加)0---无眼内渗出或出血l…眼内渗出或出血少于大鼠前房1/4体积2--眼内渗出或出血少于大鼠前房1/2体积3…眼内渗出或出血大于大鼠前房1/2体积，眼球体积增大炎症指数为结膜充血、角膜水肿和眼内渗出或出血三项评分的总和。角膜混浊度0…角膜透明l…角膜云翳，虹膜清晰可见2--角膜斑翳，虹膜可见3---角膜白斑，虹膜不可见角膜上皮荧光素钠染色评估将5iUP/。荧光素钠滴入大鼠结膜囊内，棉签擦去多余荧光素钠，并确保其均匀分布于角膜表面。裂隙灯下用钴蓝灯观察。将角膜划分为四部分，每一部分按照以下标准评分，最后得分为四部分之和0—角膜上皮无染色1—角膜上皮着色点少于30个2—角膜上皮着色点少于角膜面积一半3—角膜上皮着色点大于角膜面积一半，或者出现大面积片状荧光素染色:碱烧伤后第一天，荧光素钠染色后测量角膜上皮缺损区的长短径，并计算缺损区面积。角膜新生血管面积测量裂隙灯下用测微尺测量角膜新生血管长度，并记录不同长度的血管所占的钟点数，依照以下公式计算新生血管面积<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>R为SD大鼠角膜半径，L为所测血管长度，C为钟点数实验结果将15只SD大鼠随机分组，阴性对照组10只角膜，青蒿琥酯组ll只角膜，地塞米松组8只角膜，治疗效果评价指标同前，结果如下-(1)青蒿琥酯滴眼液对碱烧伤后角膜新生血管长度和面积的影响。角膜碱烧伤后于各时间点测量各组最长的CNV长度(见图2-A)，计算CNV面积(见图2-B)，青蒿琥酯组角膜CNV长度与面积明显低于对照组(P0.05)，参见表1和表2，第一天青蒿琥酯组和地塞米松组在CNV长度和面积上无差异(&0.05)，但在以后的时间点中两组差异明显(尸<0.05)。结果提示，青蒿琥酯滴眼液能够抑制碱烧伤诱导的角膜新生血管的生长。伤后11天，各组角膜的裂隙灯纤维镜照片见图l，A为阴性对照组，B为青蒿琥酯滴眼液组，C为地塞米松组。表l青蒿琥酯滴眼液对大鼠角膜新生血管长度的影响组别动物数(n)第一天第二天第三天第五天第七天第九天第十一天阴性对照组100.34士0.0700.466±0.1080.768±0.1811.004±0.2751.389±0.1891.628±0.2852.02±0.218青蒿琥酯组110.082±0.055*0.345±0.110*0.547±0.221*0.673±0.257*0.949±0.451*1.354±0.346**1.700±0.295**地塞米松组80.110±0.0680.245±0.06480.275±0.0510.25±0.0620.338±0.1420.498±0.3240.470±0.099与阴性对照组比较V0.05,**P<0.01表2青蒿琥酯滴眼液对大鼠角膜新生血管面积的影响组别动物数(n)第一天第二天第三天第五天第七天第九天笫十一天P月'性J寸fl纟且107.100±1.3989.900±2.74513.794±3.85019.279±3.9322.514±3.4926.403±3.22529.302士2.588青蒿琥酯组111.756±1.869**5.545±1.450**7.731±3.101**9.37±2.456**13.709±3.768**16.990±4.918**22.020±6.378**地塞米松组81.879±2.0722.729±0.6954.515±1.0364.558±1.5926.255±1.9317.35±0.9648.973±1.576与阴性对照组比较V0.05，**P<0.01(2)青蒿琥酯滴眼液的抗炎作用不同时间点青蒿琥酯滴眼液组的炎症指数明显低于阴性对照组，说明青蒿琥酯滴眼液具有显著抑制角膜炎症反应的作用，结果见图2-C。(3)青蒿琥酯滴眼液不阻碍角膜上皮细胞的愈合从第五天开始，青蒿琥酯滴眼液对角膜上皮透明度的评分明显低于阴性对照组，参见图2-D。碱烧伤后24小时角膜上皮已经开始自我修复，损伤早期角膜上皮的快速迁移和正常愈合对角膜的修复以及碱烧伤的治疗具有重要意义。我们对碱烧伤24小时后上缺损面积的测量显示，阴性对照组缺损面积为6.820士1.647mm2，青蒿琥酯组为4.733士0.917mm2，地塞米松组为5.322±1.141mm2，青蒿琥酯组与阴性对照组相比差异有显著意义(P<0.05)，结果见图2-F，说明青蒿琥酯滴眼液对损伤早期的角膜上皮的迁移和愈合无阻碍作用，在后期的各个时间点对角膜上皮的评分中也发现青蒿琥酯滴眼液不影响角膜上皮的愈合，结果见图2-E。2、青蒿琥酯滴眼液在体外对人脐静脉血管内皮细胞增殖的抑制作用(1)人脐静脉血管内皮细胞的原代培养在无菌条件下于健康产妇分娩后立即取新生儿脐带，挤出脐带血管中的血液，浸没于含双抗(青霉素100u/ml，链霉素100ul/ml)的预冷的无菌PBS中，用含双抗的PBS灌洗脐静数次，除净残余血迹后向脐静脉内灌注0.25%胰蛋白酶8ml10ml，并于37。C水浴或培养箱中消化20min。将含有内皮细胞的胰蛋白酶注入50ml锥形离心管中，加入小牛血清2ml终止反应并用30ml含双抗的PBS灌洗液冲洗管腔，收集流出液一并装入离心管。1000r/min离心10min，弃上清，加入完全培养液，充分混合制成细胞悬液，转移入2%明胶铺板的培养瓶中，5%C02，37。C静止培养培养液成份为M199含20y。FBS以及30ug/mlECGS(upstate公司)，3天更换一次培养液，用免疫荧光化学检测细胞是否表达VIII因子以鉴定细胞纯度。取第2-6代细胞供研究用。(2)青蒿琥酯滴眼液对人脐静脉内皮细胞增殖的影响将内皮细胞以4X10"个/孔接种于12孔板中，于37'C、5%(302的条件下培养，待细胞贴壁后，更换为含2y。FBS的培养液并加入不同浓度的青蒿琥酯，设立PBS阴性对照组，每组3个复孔，药物作用48小时后，每孔加200iU5mg/ml的MTT，37°C、5%032的条件下继续孵育2-4小时，弃上清，每孔加2mlDMSO溶解，待颗粒充分溶解后测量每孔在570nm处的吸光度，用处理组的吸光度/对照组吸光度得到细胞存活率。(3)青蒿琥酯滴眼液赋性剂对青蒿琥酯抗血管内皮细胞增殖作用的影响为了检测所选滴眼液的赋形剂是否影响青蒿琥酯药理作用的发挥，选用MTT法观察青蒿琥酯滴眼液以及相同药物浓度的青蒿琥酯-NaHC03溶液对人脐静脉血管内皮细胞增殖影响的差异。方法为将内皮细胞以2X104个/孔接种于24孔板中，于37t:、5%032的条件下培养，待细胞贴壁后，更换为含2y。FBS的培养液并分组，设立PBS阴性对照组、25umol/L青蒿琥酯-NaHC03溶液组和相同青蒿琥酯浓度的各种滴眼液组，每组4个复孔，药物作用48小时后，每孔加100u15mg/ml的MTT，37°C、5%032的条件下继续孵育2-4小时，弃上清，每孔加lmlDMSO溶解，待颗粒充分溶解后测量每孔在570nm处的吸光度，用处理组的吸光度/对照组吸光度得到细胞存活率。(4)滴眼液赋性剂对人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响为检测在青蒿琥酯滴眼液中，除了青蒿琥酯外，是否有其他成分对人脐静脉血管内皮细胞的增殖有影响作用，仍采用MTT观察滴眼液的其他成分组合成的滴眼液赋形剂对血管内皮细胞的影响，方法同上，仍选用24孔板，设立PBS对照组、同以上青蒿琥酯滴眼液相对应的各种赋形剂，每组4个复孔，药物作用48小时后，每孔加100y15mg/ml的MTT，37°C、5%C02的条件下继续孵育2-4小时，弃上清，每孔加lmlDMSO溶解，待颗粒充分溶解后测量每孔在570nm处的吸光度，用处理组的吸光度/对照组吸光度得到细胞存活率。实验结果(1)青蒿琥酯滴眼液能够有效抑制血管内皮细胞的增殖青蒿琥酯滴眼液能够显著抑制血管内皮细胞增殖，PBS对照组、6.25umol/L青蒿琥酯滴眼液组12.5ymol/L青蒿琥酯滴眼液组、25Wmol/L青蒿琥酯滴眼液组、50Hmol/L青蒿琥酯滴眼液组、100umol/L青蒿琥酯滴眼液组的OD57o分别是0.688±0.158、0.511±0.082、0.369±0.053、0.199±0.074、0.076±0.156、0.056土0.046结果显示青蒿琥酯滴眼液剂量依赖性抑制HUVEC的增殖。结果参见图3，n=3(2)青蒿琥酯滴眼液各成份以及赋形剂对青蒿琥酯抗HUVEC增殖作用的影响将滴眼液中各成份组和，制成代表性溶液，进行实验，实验表明，青蒿琥酯滴眼液中的增稠剂(羟丙基甲基纤维素和羧丙基甲基纤维素)、渗透压调节剂(氯化钠)和防腐剂(苯扎溴铵和硫柳汞)在所选浓度内对青蒿琥酯的抗血管增生作用没有影响，n=4，PBS组、25umol/L青蒿琥酯溶液组，以及25pmol/L的青蒿琥酯滴眼液各组al、bl、cl、dl、el、fl、gl、a2、b2、c2、d2、e2、f2和g2，其中al、bl、cl、dl、el、fl、gl、a2、b2、c2、d2、e2、f2和g2分别代表不同的配方的滴眼液OD57o分别是0.691±0.129、0.379±0.060、0.361±0.074、0.374±0.107、0.281±0.078、0.274±0.114、0.356±0.032、0.358±0.058、0.273±0.1133、0.335±0.0469、0.370±0.077、0.354±0.0641、0.354±0.050、0.331±0.0358、0.371±0.053、0.417±0.093，药物与细胞存活率(％)的关系参见图4(n=4)。(3)滴眼液中的赋形剂成份对HUVEC的增殖的影响PBS组、al、bl、cl、dl、el、fl、gl、a2、b2、c2、d2、e2、G和g2组(al、bl、cl、dl、el、fl、gl、a2、b2、c2、d2、e2、G和g2各代同的配方滴眼液的赋形剂)的0057()分别是0.566土0.0382、0.635±0.055、0.626±0.039、0.615±0.008、0.578±0.054、0.641±0.079、0.61475±0.063、0.518±0.084、0.624±0.101、0.582±0.029、0.491±0.0312、0.524±0.065、0.604±0.113、0.587±0.0725、0.542±0.037，实验发现，没有青蒿琥酯的滴眼液赋形剂对HUVEC的增殖没有影响，结果参见附图5，n=4。3、滴眼液在体外对兔角膜上皮细胞的毒性作用(1)原代培养兔角膜上皮细胞于无菌条件下取角膜，除去角膜缘后，用含青链霉素的PBS溶液清洗角膜。在一个干净培养皿中滴0.25。/。胰蛋白酶和0.2。/。EDTA的l:l混合液34滴，将上述兔角膜上皮面朝下置于混合消化液上，置37。C培养箱中消化2530min，力卩12滴胎牛血清终止消化。翻转角膜片，用DMEM(或R1640)培养液轻轻冲洗上皮面，冲洗液离心56min(1000r/min)，弃上清，按每角膜4mL比例加入上皮细胞培养液，吹打混匀。血细胞计数板计数，制成150xl(^200xlO"L细胞悬液，以每孑L2mL将上皮细胞接种于已铺明胶(2。/。)的12或6孔培养板中，置37匸、5%(:02培养箱中培养，培养液23天更换一次。将消化后或未消化的角膜放在无菌平皿中内皮面朝下，切成数块，放进培养皿或6孔板中，上皮面向下，加入少量培养液，使液体刚浸没角膜组织周围而不浸没角膜组织块的表面，置37'C、5%032培养箱中培养，24h后添加部分培养液，培养液23天更换一次。培养液成份为RMPI1640含20y。FBS以及10-20ng/mlEGF，经细胞角蛋白3/12免疫组化鉴定后，取第l代细胞进行后续实验。(2)青蒿琥酯对兔角膜上皮细胞的毒性作用用MTT法检测青蒿琥酯对角膜上皮细胞增殖是否有抑制作用，进而观察青蒿琥酯在体外对角膜上皮细胞的毒副作用。取第1代的兔角膜上皮细胞以2X104个/孔的密度接种于24孔板中，于37'C、5%<:02的条件下培养，待细胞贴壁并伸展出正常形态后，更换为含3y。FBS的培养液并分为PBS阴性对照组、NaHC03对照组、50umol/L、100umol/L、200umol/L、400umol/L青蒿琥酯组，每组4个复孔，药物作用48小时后，每孔加IOOU15mg/ml的MTT，37°C、5%<:02的条件下继续孵育2-4小时，弃上清，每孔加lmlDMSO溶解，待颗粒充分溶解后测量每孔在570nm处的吸光度，用处理组的吸光度/对照组吸光度得到细胞存活率。实验结果原代培养的第l代兔角膜上皮细胞，细胞内角蛋白3/12的细胞免疫化学鉴定细胞纯度，发现几乎所有细胞都表达角蛋白3/12，结果见图6，A为第l代兔角膜上皮细胞的相差显微镜照片，B为PBS组，C为角蛋白3/12组。因青蒿琥酯滴眼液在50Umol/L处能够显著抑制HUVEC增殖，故选取50Umol/L做为最低浓度组，同时为排除溶剂NaHC03对角膜上皮细胞的作用，设立同青蒿琥酯最高浓度组400nmol/L含量相当的NaHC03做为阴性对照2。PBS组和NaHC03组00570分别为0.601±0.054和0.589±0.102，50ymol/L、100ymol/L、200umol/L和400Pmol/L青蒿琥酯组的OD570分别为0.545±0.099、0.4525±0.065、0.426±0.112和0.3735±0.128，结果证明当青蒿琥酯浓度高达200ymol/L时对兔角膜上皮细胞有轻微抑制作用，说明在体外，青蒿琥酯在IOOPmol/L及100umol/L以下浓度对兔角膜上皮细胞无毒性作用。三、眼刺激试验(1)单次给药眼刺激试验取新西兰家兔(由广东省实验动物中心提供)4只，，雌雄兼半，体重2.5-3.0kg，每只兔左眼滴入0.1ml赋形剂，右眼滴入0.1ml50umol/L青蒿琥酯滴眼液。然后轻合眼睑约10s。在给药后l、24、48、72小时、第4天、第5天和第7天对眼部进行检查，观察角膜、虹膜、结膜刺激反应程度和局部反应情况，观察指标及评分标准见表4。(2)多次给药眼刺激试验取新西兰家兔(由广东省实验动物中心提供)4只，，雌雄兼半，体重2.5-3.0kg，每只兔左眼滴入0.1ml赋形剂，右眼滴入0.1ml50nmol/L青蒿琥酯滴眼液。然后轻合眼睑约10s。每天给药六次，一小时一次。每天给药前以及最后一次给药后l、24、48、72小时、第4天、第5天和第7天对对眼部进行检查，检查及评价方法同上。实验结果由单次用药和多次用药结果表明，但此用药没有明显的刺激反应。多次用药后l/4例在最后一次给药后l小时、给药后48小时出现轻度结膜充血，最后一次给药后72小时恢复正常，给药期间无改变，根据眼刺激性评价标准，多次给药眼刺激综合平均分值最高分为0.5分，属无刺激性。结果表明青蒿琥酯滴眼液连续用药没有明显刺激性。表3眼刺激反应分值标准眼刺激反应分值角膜无混浊0散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见1半透明区易分辨，虹膜模糊不清2出现灰白色半透明区，虹膜细节不清，瞳孔大小勉强可见3角膜不透明，虹膜无法辨认4虹膜正常0皱褶明显加深、充血、肿胀，角膜周围轻度充血，瞳孔对光仍有反应1出血/肉眼可见坏死/对光无反应(或其中一种)2结膜充血(指睑结膜和球结膜)血管正常012<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>(二)制备实施例以下制备实施例以硼酸盐缓冲液作为缓冲液成分，氯化钠作为等渗剂、羧丙基甲基纤维素或羟丙基甲基纤维素作为增稠剂、硫柳汞或苯扎溴铵作为防腐剂，如上所述，此制备实施例仅用于说明本发明，不能用于限制发明的范围。青蒿琥酯0.0096-0.0384份；硼酸(H3B03)9.30-12.028份;硼砂(Na2B4O7'10H2O)0.573-4.775份；羟丙基甲基纤维素(或羧丙基甲基纤维素)1.5-3.0份；氯化钠2.2-2.4份；苯扎溴铵(或硫柳汞)0.01-0.02份。将青蒿琥酯配制成浓度为60mg/ml的青蒿琥酯-NaHCO3溶液，过滤除菌后待用。将硫柳汞用蒸馏水配制成浓度为的溶液浓度为2%，过滤除菌后分装于玻璃瓶中待用。将苯扎溴铵用蒸馏水配制成浓度为的溶液浓度为2%，过滤除菌后分装于玻璃瓶中待用。取硼酸12.4g溶于l000ml蒸馏水中制成硼酸溶液、溶硼砂19.1g于1000ml蒸馏水中制成硼砂溶液备用。1、木发明滴眼液，以100ml滴眼液计，取氯化钠0.22g、羧丙基甲基纤维素0.15g溶于100ml的硼酸-硼砂缓冲液中，其中硼酸溶液97ml、硼砂溶液3ml，高压蒸汽灭菌20分钟，冷却后无菌条件下加入青蒿琥酯溶液16ul、苯扎溴铵溶液50ul，pH6.7。2、本发明滴眼液，以100ml滴眼液计，取氯化钠0.22g、羟丙基甲基纤维素0.15g溶于100ml的硼酸-硼砂缓冲液中，其中硼酸溶液97ml、硼砂溶液3ml，高压蒸汽灭菌20分钟，冷却后无菌条件下加入青蒿琥酯溶液33y1、硫柳汞溶液100n1，pH6.7。3、本发明滴眼液，以100ml滴眼液计，取氯化钠0.22g、羟丙基甲基纤维素0.15g溶于100ml的硼酸-硼砂缓冲液中，其中硼酸溶液90ml、硼砂溶液10ml，高压蒸汽灭菌20分钟，冷却后加入青蒿琥酯溶液66ul、苯扎溴铵溶液100yl，pH7.36。4、本发明滴眼液，以100ml滴眼液计，取氯化钠0.22g、羧丙基甲基纤维素0.15g溶于100ml的硼酸-硼砂缓冲液中，其中硼酸溶液90ml、硼砂溶液10ml，高压蒸汽灭菌20分钟，冷却后加入青蒿琥酯溶液16ul、硫柳汞溶液50ul，pH7.36。5、本发明滴眼液，以100ml滴眼液计，取氯化钠0.23g、羟丙基甲基纤维素0.15g溶于100ml的硼酸-硼砂缓冲液中，其中硼酸溶液85ml、硼砂溶液15ml，高压蒸汽灭菌20分钟，冷却后加入青蒿琥酯溶液33lU、苯扎溴铵溶液溶液100u1，pH7.6。6、本发明滴眼液，以100ml滴眼液计，取氯化钠0.23g、羧丙基甲基纤维素0.15g溶于100ml的硼酸-硼砂缓冲液中，其中硼酸溶液75ml、硼砂溶液25ml，高压蒸汽灭菌20分钟，冷却后加入青蒿琥酯溶液66ul、硫柳汞溶液100ul，pH7.94。权利要求1、一种具有抗角膜新生血管作用的滴眼液，它以青蒿琥酯作为活性成分，并包含缓冲液、增稠剂、等渗试剂和防腐剂，各原料重量份如下青蒿琥酯0.0096-0.0384份；缓冲液中的酸性成分1.0032-12.028份；缓冲液中的碱性成分0.106-18.0477份；(或表示为缓冲液成分0.106-18.0477份)增稠剂1.0-35.0份；等渗试剂2.0-4.72份；防腐剂0.01-0.02份。2、根据权利要求l所述滴眼液，其特征在于它由下列重量份的原料制成青蒿琥酯0.0096-0.0384份；硼酸(H3B03)9.30-12.028份；硼砂(Na2B4O7*10H2O)0.573-4.775份；羟丙基甲基纤维素1.5-3.0份；氯化钠2.2-2.4份；苯扎溴铵0.01-0.02份。3、根据权利要求l所述滴眼液，其特征在于它由下列重量份的原料制成青蒿琥酯0.0096-0.0384份；磷酸二氢钠(NaH2P04*2H20)1.0032-8.0256份；磷酸氢二钠(Na2HP04'12H20)4.0106-18.0477份；羧丙基甲基纤维素1.5-3.0份；氯化钠4.22-4.75份；硫柳汞0.01-0.02份。4、根据权利要求1或2所述滴眼液，其特征在于它由下列重量份的原料制成青蒿琥酯0.0096份；硼酸(H3B03)12.028份；硼砂(Na2B4O7*10H2O)0'573份；羟丙基甲基纤维素1.5份；氯化钠2.2份；苯扎溴铵0.01份。5、根据权利要求1或3所述滴眼液，其特征在于它由下列重量份的原料制成青蒿琥酯0.0192份；磷酸二氢钠(NaH2P04*2H20)L0032份；磷酸氢二钠(Na2HP04*12H20)18.0477份；羧丙基甲基纤维素2.0份；氯化钠4.25份；硫柳汞0.02份。6、根据权利要求l所述滴眼液，其特征在于其pH为6.5-8.0。7、根据权利要求l所述滴眼液，其特征在于缓冲液可以是磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、氨基酸；增稠剂可以是羟丙基甲基纤维素、羧丙基甲基纤维素、透明质酸钠；等渗试剂可以是葡萄糖、甘油、氯化钠、硼酸；防腐剂可以是硫柳汞、苯扎溴铵、对羟基苯甲酸酯。8、一种具有抗角膜新生血管作用的滴眼液的制备方法，包括A.取青蒿琥酯用NaHC03溶解，成为青蒿琥酯-NaHC03溶液，过滤除菌后待用；B.将适量缓冲液成分、等渗试剂和增稠剂溶于蒸馏水中，以100-12(TC高压灭菌20分钟，得工作液，冷却至室温备用；C.将防腐剂用蒸馏水配置成高浓度储存液，过滤除菌分装待用；D.在无菌条件下将青蒿琥酯溶液按照每100m咖16U1~66"l的比例加入到工作液中，混合均匀，同时将防腐剂按照每100ml加50ul100ul的比例加入到缓冲液中，分装制成不同规格的滴眼液，优选是每瓶包装0.5ml。9、根据权利要求8所述滴眼液，其特征在于青蒿琥酯-NaHC03溶液的浓度为60mg/ml。10、根据权利要求8所述滴眼液，其特征在于防腐剂储存液的浓度为2%。全文摘要本发明涉及一种以青蒿琥酯为原料的治疗眼角膜新生血管的滴眼液及其制备方法。青蒿琥酯滴眼液可由下列重量份的原料制成青蒿琥酯0.0096-0.0384份；缓冲液中的酸性成分1.0032-12.028份；缓冲液中的碱性成分0.106-18.0477份；增稠剂1.0-35.0份；等渗试剂2.0-4.72份；防腐剂0.01-0.02份。该滴眼液的制备方法取青蒿琥酯用NaHCO₃溶解，过滤除菌后待用；将适量缓冲液成分、等渗试剂和增稠剂溶于蒸馏水中，以100-120℃高压灭菌20分钟，得工作液，冷却至室温备用；将防腐剂用蒸馏水配置成高浓度储存液，过滤除菌分装待用；在无菌条件下将青蒿琥酯溶液按照每100ml加16μl～66μl的比例加入到工作液中，混合均匀，同时将防腐剂按照每100ml加50μl～100μl的比例加入到缓冲液中，分装制成不同规格的滴眼液，优选是每瓶包装0.5ml。文档编号A61K31/357GK101427997SQ20071003133公开日2009年5月13日申请日期2007年11月9日优先权日2007年11月9日发明者锐程,高国全申请人:中山大学