专利名称：养颜保健食品的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有养颜作用的复方保健食品。
背景技术：
中国专利申请号200610153340.3公开了“一种由银杏叶与红景天制成的药物组合物”，由银杏叶或其提取物与红景天或其提取物、或者银杏叶总黄酮与红景天或其提取物、或者银杏内酯与红景天或其提取物制备而成。可制成临床上或药学上可接受的任一剂型。两药协同作用，共同发挥抑制血小板聚集和抗血栓形成、改善血流动力学、增加冠脉和脑血流量、降低脑血管阻力、降低血液粘度、保护缺血及缺氧引起的脑损伤和心肌损伤、抗心律失常、抗高血压、抗高血脂、提高机体免疫等多种药理作用，主要用于制备治疗心脑血管疾病的药物。中国专利申请号200410075592.X公开了“一种抗疲劳、降血压血脂、抗癌防癌的保健品及制备方法”，是按重量份取红豆杉10-80份、银杏叶10-80份、绞股蓝10-80份、红景天10-80份分别水洗、烘干粉碎后混合加入北虫草配制而成，主要用于提高人类机体免疫功能，抗衰老，降血脂、降血压，改善心脑血管的微循环，抗疲劳，抗胃肠疾病，抗癌防癌，治疗哮喘，黑发，防糖尿病和抗辐射。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有美容祛斑、免疫调节的养颜保健食品。
本发明所述的养颜保健食品由以下重量配比的成分组成蝙蝠蛾拟青霉菌粉2300-2700、红景天提取物1000-1400、银杏叶提取物1000-1400，每100克保健食品含总黄酮≥2100mg、红景天甙≥1650mg、腺苷≥10.19mg。
所述的蝙蝠蛾拟青霉菌粉又名虫草菌丝粉(体)，为市售产品。所述的银杏叶提取物为目前临床采用的银杏叶提取物(GBE)，该提取物目前主要用于心脑血管疾病。所述的红景天提取物为口服红景天提取物，为已有技术(见“红景天属植物化学成分研究概述”华西医科大学医学院天然药物教研室1991.12)。
本发明所述的蝙蝠蛾拟青霉菌粉也即冬虫夏草菌丝体含有多种氨基酸、多糖、腺苷等化合物，药理研究表明可明显增加小鼠脾重，并能拮抗泼尼松与环磷酰胺可致脾重量减轻，脾重增加的机制可能是促进脾脏DNA的生物合成。增加核酸与蛋白质的含量，使脾细胞增殖；可使小鼠腹腔巨噬细胞；吞噬作用增加，并提高碳粒廓清速度，显示其免疫调节功能。增加SOD含量，降低LPO含量的抗氧化作用，可美容祛黄褐斑。银杏叶提取物富含银杏类黄酮和萜内脂等生理活性物质，是一种较强的自由基清除剂，还有抗血小板活化因子的活血化瘀，通脉疏络作用。临床实验证明，银杏黄酮甙可使人体T淋巴细胞CD3、CD4亚群比值及免疫球蛋白G含量明显增高，对人体免疫系统功能有兴奋作用，动物试验显示银杏叶提取物可明显增加小鼠淋巴细胞线粒体脱氢酶和中性粒细胞MPO的释放，提高小鼠机体免疫细胞功能。银杏叶提取物可提高人体红细胞超氧化岐化酶(E-SOD)活性，降低血浆过氧化脂质(P-LPO)，抑制酪氨酸酶活力，减少黑色素的生成，可美容祛黄褐斑。红景天提取物具有较强的抗氧化作用，可促进蛋白质的合成，降低酸性磷酸酶活性，提高SOD和GSP-PX活性，抑制LPO的形成，延缓细胞衰老；促进细胞生长及细胞代谢。促进真皮中成纤维细胞的分裂及其合成分泌胶原蛋白，这种抗氧化作用是调节免疫及清除黄褐斑的物质基础。
综观全方，冬虫夏草菌丝体、银杏叶提取物和红景天提取物，富含多糖、腺苷、黄酮、甙类通过平衡营养、增强代谢共同发挥调节免疫、美容祛黄褐斑、缓解更年期综合症等的保健功能。
本发明所述产品经毒理学检验，急性毒性实验属实际无毒物质。三项致突实验(Ames试验、小鼠骨髓PCE微核实验和小鼠精子畸变实验)为阴性。30天喂养实验表明该受试物于3.3、2.5、1.65g/kgBW剂量(相当于人群推荐量0.033g/kgBW的100、75和50倍)时，各剂量组对生长发育、血液系统、肝、肾功能，蛋白、脂肪、糖的代谢，以及主要脏器的组织学改变，均无明显影响。卫生学检验结论为37-40℃相对温度下进行三个保温实验，经理化、微生物检验，提示所检指标质量稳定。
本发明功能试验 免疫调节作用检验报告 1材料和方法 1.1样品实施例1产品，胶囊制剂、内容物为棕褐色颗粒，厂家推荐日摄入量为2.00g/60kgbw，以下简称试验用样品。样品溶剂为蒸馏水。
1.2试剂二硝基氟苯、丙酮、麻油、硫化钡、SRBC、鸡红细胞、YAC-1细胞、Hanks液(pH7.2-7.4)、RPMI1640完全培养液、乳酸锂、硝基氯化四氮唑(INT)、吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)、NAD、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液(ph8.2)、2％TritionX100。
1.3饲料选用中国医料大学实验动物中心繁殖的普通级18～22g雄性昆明种小鼠，每组10只动物，实验动物生产许可证号为SCXK(辽)2002-0009。块状鼠料由沈阳市于洪区动物实验饲料厂提供，饲料质量合格证号为辽实动环字1999-024。
1.4试验条件屏障系统动物实验室，恒温恒湿，温度22±1.5℃，湿度50％±10％，工作照度160～280LX，人工照明12h，黑夜12h，噪音＜60dB，实验动物使用许可证号为SYXK(辽)2002-0001。
1.5试验仪器恒温培养箱、离心机、恒温水浴箱、电子分析天平AEL-160(感量0.0001g、沈计力字第M112289号)、动物电子天平ES-2000A(感量0.01g、辽计02041503103)、生物显微镜、雷勃MK3酶标仪(沈计医字第P120206号)、自动洗板机。
1.6剂量分组按厂家推荐人体日摄入量的30倍、20倍、10倍设计，分1.00g/kgbw、0.67g/kgbw、0.33g/kgbw三个实验组及样品溶剂对照组。管饲法染毒，20ml/kgbw。每日称体重后灌胃1次，连续30天后分别测定各项免疫指标。
1.7脏器/体重比值测定称体重后，将小鼠断髓处死，取脾脏、胸腺称重，计算脏器/体重比值。
1.8二硝基氟笨(DNFB)诱导小鼠迟发性变态反应(DTH)试验(耳肿胀法)每鼠腹部皮肤用硫化钡脱毛，范围3×3cm，用DNFB溶液50μl均匀涂抹致敏，5天后用DNFB溶液10μl均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击，用不含DNFB溶液10μl均匀涂抹于小鼠左耳(两面)作对照，攻击后第24h颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下直径8mm耳片，称重，计算左右耳重量之差。并称取体重、胸腺重和脾重，计算脏体比值。左右耳重量之差表示DTH的程度，实验组的差值显著高于样品溶剂对照组，即可判定该项试验结果阳性。
1.9小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法)每鼠腹腔注射20％(v/v)鸡红细胞悬液1ml。间隔30分钟，颈椎脱臼处死动物，将其仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板1分钟。然后吸出腹腔洗液1ml，平均分滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37±1℃孵箱温育30分钟。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞。晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％(v/v)Gimsa-磷酸缓冲液染色3分钟，再用蒸馏水漂洗晾干。镜检，计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和被吞噬鸡红细胞总数。计算吞噬百分率和吞噬指数。实验组的吞噬百分率、吞噬指数与样品溶剂对照组比较，差异有显著性，即可判定该项试验结果阳性。
1.10血清溶血素的测定(血凝法)每鼠腹腔注射2.0％(v/v)SRBC悬液0.20ml进行免疫，第4天摘除眼球取血，分离血清。用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝试验板中，每孔100μl，再加入100μl0.50％(v/v)的SRBC悬液，混匀，装入湿润的平盘内加盖，于37±1℃温箱孵育3h，观察血球凝集程度。计算抗体积数。实验组的抗体积数显著高于样品溶剂对照组，即可判定该项试验结果阳性。
抗体积数＝(S1+2S2+3S3……nSn) 式中1、2、3……n代表对倍稀释的指数，S代表血球凝集程度的级别，抗体积数越大，表示血清抗体越高。
1.11NK细胞活性测定[乳酸脱氢酶(LDH)测定法](1)传代靶细胞(YAC-1细胞)，试验前24h将靶细胞进行传代培养，应用前以Hanks液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为1×105个/ml。(2)制备脾细胞(效应细胞)悬液，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中用镊子轻轻将脾撕碎，制成单细胞悬液，经200目筛网过滤，用Hanks液洗3次，每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬液浮于2ml的完全培养液中，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)。用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为5×105个/mL。(3)NK细胞活性检测，取靶细胞和效应细胞各100μl(效靶比50∶1)，加入U型96孔培养板中，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2％Triton X 100各100μl，上述各项均设3个复孔，于37±1℃，5％CO2培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μl置于平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μl，反应3min，每孔辊入1mol/L的HC130μl，在酶标仪490nm处测定光密度值(OD)。按下式计算NK细胞活性，试验用样品组的NK细胞活性显著高于对样品溶剂照组时，即可判定该项试验结果阳性。
1.12数据处理计量资料中多样本均数比较采用单因素方差分析，各实验组与溶剂对照组比较同时采用最小显著差法、新复极差法、两样本均数t检验。同时进行多样本方差齐性检验(Bartlett法)和各实验组与溶剂对照组的两样本方差齐性检验，若方差不齐，进行变量转换和采用秩和检验(Wilcoxon两样本比较法)。百分率资料用反正弦函数转换后按计量资料进行检验。同时采用行×列表x2检验，各实验组与溶剂对照组比较采用四格表x2检验，对不符合四格表x2检验条件的资料采用秩和检验(Wilcoxon两样本比较法)。各项检验原始数据在Excel2002软件程序中自动进行统计分析，并将分析得到的相关数据自动传输至检验报告表格的指定位置中。
2检验结果 2.1脏器/体重比值测定结果由表1可见，各实验组的胸腺/体重、脾重/体重比值与样品溶剂对照组比较，差异不显著(P＞0.05)。
表1 小鼠脏器/体重比值测定结果 单位mg/g 2.2DNFB诱导小鼠DTH试验结果由表2和表3可见，各实验组体重、体重增重与样品溶剂对照组比较，差异不显著(P＞0.05)；由表4可见，各实验组左右耳重量差与样品溶剂对照组比较，差异不显著(P＞0.05)。
表2 DNFB诱导小鼠DTH试验体重测量结果单位g 表3 DNFB诱导小鼠DTH试验体重增量测量结果 单位g 表4 DNFB诱导小鼠DTH试验左右耳重量差测量结果 2.3小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验结果(半体内法)由表5和表6可见，各实验组体重、体重增重与样品溶剂对照组比较，差异不显著(P＞0.05)；由表7可见，各实验组的吞噬百分率、吞噬指数与样品溶剂对照组比较，差异显著(P＜0.05)。
表5 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡细胞试验体重测量结果单位g 表6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡细胞试验体重增重测量结果 单位g 表7 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡细胞试验吞噬百分率、吞噬指数测定结果 2.4小鼠血清溶血素测定结果(血凝法)由表8和表9可见，各实验组体重、体重增重与样品溶剂对照组比较，差异不显著(P＞0.05)；由表10可见，1.00g/kgbw、0.67g/kgbw实验组的抗体积数与样品溶剂对照组比较，差异显著(P＜0.05)；0.33g/kgbw实验组的抗体积数与样品溶剂对照组比较，差异不显著(P＞0.05)。
表8 小鼠血清溶血素试验体重测量结果 单位g 表9 小鼠血清溶血素试验体重增重测定结果 表10 小鼠血清溶血素试验抗体积数测定结果 2.5小鼠NK细胞活性测定结果由表11和表12可见，各实验组体重、体重增重与样品溶剂对照组比较，差异不显著(P＞0.05)；由表13可见，1.00g/kgbw实验组的NK细胞活性与样品溶剂对照组比较，差异显著(P＞0.05)；0.67g/kgbw、0.33g/kgbw实验组的NK细胞活性与样品溶剂对照组比较，差异不显著(P＞0.05)。
表11 小鼠NK细胞活性试验体重测量结果 单位g 表12 小鼠NK细胞活性试验体重增重测量结果 单位g 表13小鼠NK细胞活性试验测定结果 3小结 试验结果表明试验用样品对各项试验的实验动物体重和体重增重无明显影响，对小鼠胸腺/体重、脾重/体重的比值无明显影响；能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力、能提高小鼠血球凝集程度、能增强高剂量组小鼠NK细胞活性；未能促进二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发性变态反应(DTH)形成。
人体试食报告 1、对象和方法 1.1受试物实施例1产品。
1.2受试对象按自愿原则选择18-65岁具有黄褐斑受试者30例。
1.2.1诊断标准头面部肉眼观察可见黄褐色，多发于颧、颊、额、鼻、唇周等处，无痛痒等症状。
1.2.2纳入者标准凡生有黄褐斑的自愿受试者，经体检合格均可进行试食观察。
1.2.3排除者标准 1.2.3.1年龄在18岁以下或者65岁以上者，妊娠或哺乳期妇女，对本保健品过敏者。
1.2.3.2合并有心肝肾和造血系统等严重原发性疾病，精神病患者。
1.2.3.3不符合纳入标准，未按规定用受试物，无法判定功效或资料不全影响功效或安全判断者。
1.3对照形式采用自身前后对照形式。
1.4服用剂量及时间每次2粒，每日2次，连续30天，受试者在实验期间停止服用有关养颜祛斑的药物或其他保健品及化妆品。
1.5仪器与试剂F-820型血球计数仪，MIDIRON尿十项分析仪(德国产)，Olympus全自动化分析仪(日本产)，型号AU600，中国科学院地理研究所设计研制，测绘出版社1992处出版《实用标准色卡》(第1版)，生化试剂盒全部由中生公司提供。
2、观察指标 实验前后各检查一次。
2.1功效性观察 2.1.1一般情况 详细询问病史，了解受试者饮食情况，观察主要临床症状疲劳感、烦躁、睡眠等。按症状轻重(重症3分、中度2分、轻症1分)在试食前后统计积分值，并就其主要症状改善(每一症状改善2分显效，改善1分为有效)计算改善率。
2.1.2头面部黄褐斑检测 2.1.2.1面积大小改变用标尺测量受试前后同一黄褐斑的长径和宽径，计算面积(cm2)。
2.1.2.2颜色深浅变化 按照中国科学院地理研究所设计研制，测绘出版社1992年出版的《实用标准色卡》(第1版)中的棕色(Y+M+Bk即黄+品红+黑的叠色)色卡为黄褐班颜色深浅的判断标准I度(15、20、5)，II度(30、40、10)III(40、60、15)。
2.3安全性观察 2.3.1血液及尿常规检查 红细胞计数，血红蛋白，白细胞计数，尿十项检测。
2.3.2生化指标测定 血清白蛋白ALB，总蛋白TO，心肝肾功能(谷草转氨酶AST，谷丙转氨酶ALT，尿素UREA，肌苷CRE，血糖GLU、血脂(总胆固醇TC，甘油三脂TG)。
2.3.3腹部B超，心电图，X线胸部透视。
3、祛斑功效判定 显效黄褐斑颜色下降II度，或面积缩小≥30％，不产生新黄褐斑。
有效黄褐斑颜色下降I度，或面积缩小＜30％，≥10％不产生新的黄褐斑。
无效黄褐斑面积缩小＜10％，颜色无明显变化。
4、实验结果 4.1一般状况 共观察黄褐斑受试者30例，均为女性，年龄最小19岁，最大62岁，平均42.33±9.99岁，平均病程6.0±3.51年。
4.2黄褐斑颜色深浅变化 表14 黄褐斑颜色深浅变化 **P＜0.01 4.3黄褐斑面积大小变化表15 黄褐斑面积大小变化 **P＜0.01 4.4功效评定 表16 功效判定 4.5主要症状改善情况 表17 主要症状改善情况 4.6症状积分变化 表18 症状积分变化 **P＜0.01 4.7安全指标检测 表19 安全性指标检测 试食前后各项指标在正常范围。
4.8腹部B超，心电图，X线胸部均在正常范围。
5、结论 5.130例黄褐斑受试者按要求服用本胶囊30天，黄褐斑面积平均缩小6.94±8.04cm2(P＜0.01)，颜色变浅，色卡平均降低0.13±0.22度(P＜0.05)，其中显效3例，有效16例，总有效率63.33％，说明本胶囊有美容(祛黄褐斑)的作用。
5.2本胶囊对黄褐斑受试者的疲劳感、烦躁、睡眠等症状有改善作用。
5.3本胶囊试食前后，血红蛋白、红细胞、白细胞、血清总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌苷、尿素、血糖、血脂及尿常规等检测指标均在正常范围，说明本品对受试者身体健康无不良影响。
5.4本胶囊试食后，未见过敏及其它不良反应。
具体实施例方式 实施例1 取市售的蝙蝠蛾拟青霉菌粉2500克、红景天提取物1250克、银杏叶提取物1250克，分别碾成100目筛的细粉，将三种细粉充分混匀，过100目筛，用85％的乙醇制成软材。通过制粒机14目筛制粒，湿粒经60℃干燥，整粒，灌装制成10000粒胶囊，抛光检验得成品，包装，每粒胶囊0.5克。经Co60辐照灭菌5KGY，入库。取空心硬胶囊符合GB13731-1992《药品明胶硬胶囊》的要求。生产环境符合GB17405-1998保键食品良好生产规范。所用乙醇符合GB/39412-1994食用酒精。需在十万级洁净生产车间进行。
适宜人群免疫力低下者、有黄褐斑者。
不适宜人群儿童。
食用方法及食用量每次2粒，每日2次，温开水送服。
保质期24个月。
储藏方法密封、置阴凉干燥处。
注意事项本品不能代替药物。
实施例2取市售的蝙蝠蛾拟青霉菌粉2300克、红景天提取物1350克、银杏叶提取物1350克，其余同实施例1。
实施例3取市售的蝙蝠蛾拟青霉菌粉2700克、红景天提取物1150克、银杏叶提取物1150克，其余同实施例1。
权利要求
1、一种养颜保健食品，其特征在于由以下重量配比的成分组成蝙蝠蛾拟青霉菌粉2300-2700、红景天提取物1000-1400、银杏叶提取物1000-1400，每100克保健食品含总黄酮≥2100mg、红景天甙≥1650mg、腺苷≥10.19mg。
全文摘要
本发明涉及一种具有养颜作用的复方保健食品。由以下重量配比的成分组成蝙蝠蛾拟青霉菌粉2300－2700、红景天提取物1000－1400、银杏叶提取物1000－1400，每100克保健食品含总黄酮≥2100mg、红景天甙≥1650mg、腺苷≥10.19mg。本发明富含多糖、腺苷、黄酮、甙类，通过平衡营养、增强代谢共同发挥调节免疫、美容祛黄褐斑、缓解更年期综合症等的保健功能。
文档编号A61P17/00GK101066130SQ20071006592
公开日2007年11月7日 申请日期2007年5月31日 优先权日2007年5月31日
发明者梁珍惠, 陈翔 申请人:梁珍惠