专利名称：柚皮素和柚皮苷作为转化生长因子-β1信号通路抑制剂的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及柚皮素(naringenin)和柚皮苷(naringin)的应用，特别 是作为转化生长因子-pi(transforming growth factor betal ，简称TGF-(31)信号通路的抑制剂在制药领域中的应用。
背景技术：
纤维化是各种慢性疾病共同的病理基础和组织器官硬化乃至肿瘤发生 的重要中间环节，它主要是指各种致病因素刺激组织脏器细胞坏死，组织 内细胞外基质(extracdluar matrix, ECM )异常增多和过度沉积的病理过 程，其特点是大量纤维组织增生和沉淀，胶原含量增加4 7倍[Won-I1 Jeong etal,，Hepatology,44(6):1441-1451,(2006)]。在组织器官纤维化过程中，成 纤维细胞是区域纤维化多种表象的基础，激活的成纤维细胞具有很强的产 生和重组胶原能力，组织损伤或炎症发生中一些细胞因子，如细胞粘附分 子l、血管内皮生长因子、结缔组织生长因子等调控着成纤维细胞的激活 [Jurgen J. W. et al， Annals of Surgery ,242(6):880-887,(2005)]。诸多研究表 明，TGF-p在纤维化过程、尤其是病理性纤维化过程中起关键作用，它不 仅直接激活静态的成纤维细胞向肌成纤维细胞转化，还能诱导PDGF的产 生及其受体在成纤维细胞上表达，间接刺激成纤维细胞的增殖和活化，促 进成纤维细胞合成胶原、纤维连接蛋白及蛋白多糖等细胞外基质，使ECM 合成增力口 [Victorino R. Briones et al, Biochem Biophys Res Commun, 345(2):595-601, (2006)]。另外，TGF-P也能通过下调MMPs表达令ECM不 能正常降解，同时还上调PAI和TIMPs的表达抑制ECM降解，加速ECM的 积聚，最终导致纤维化的发生。因此，抑制TGF-卩有可能阻止和治疗纤维 化疾病[Christelle Guyot et al， The International Journal of Biochemistry & Cell Biology 38: 135—151,(2006)]。TGF-(3不仅是纤维化形成的关键调节者，也是细胞生长、分化和迁移的很强调节者，对肿瘤的发生、发展及转移也起重要作用，临床己经证明，TGF-(31过表达至少与人类乳腺癌、直肠癌、食道癌、胃癌、肝癌、肺癌、 胰腺癌的肿瘤发病有关，尤其是TGF-(31过表达与肿瘤进展、转移、新生血 管形成及过差的预后有关[Brian Bierie et al, Cytokine & Growth Factor Reviews, 17:29-40, (2006)]。 TGF-卩在肿瘤发生的起始对肿瘤生长有一定抑 制作用，但随后便转为促进肿瘤发展，这主要表现在3个方面①使细胞 丧失生长抑制控制；②使肿瘤细胞获得转移性；③使肿瘤细胞逃逸免疫监 视。其中使肿瘤细胞逃逸免疫监视的主要机理是TGF-(31在CD4+T细胞的 初始和记忆阶段以不同方式抑制其产生干扰素-Y(interferon-Y， INF-力。所 以，抑制TGF-卩也有可能阻止和治疗肿瘤疾病[Brian Bierie et al, Nature Reviews/Cancer, 6 :506-520， (2006)]。近年来，癌相关成纤维细胞概念的提出使人们注意到纤维化疾病也与 肿瘤的发生相关[AkiraOrimoetal， Cell Cycle, 5(15): 1597-1601,(2006)]，本 发明的发明人在研究中发现纤维化为肿瘤提供了有利于其发展的微环境， TGF-(3信号通路在这一过程中起到重要的作用。目前以TGF-(3信号通路为靶点的治疗包括改变后的免疫成分、小分子 抑制剂、可溶性蛋白和反义复合物抑制剂，但尚无一个干预TGF-p信号通 路的药物上市，临床上对纤维化的治疗除传统的重组INF-Y外也无较理想 的药物[Eiji Suzuki et al, Cancer Res, 67(5): 2351-2359(2007)]。黄酮类化合物是中药中普遍存在的有效成分，具有抗菌、消炎、清除 自由基、抗肿瘤等多种药理作用[Mourning Zhao et al， International Immunopharmacology , 7: 162—166,(2007)]。柚皮苷(naringin)又称柚甙、柑橘甙、异橙皮甙，分子式C27H32014， 分子量580.53，主要存在与芸香科植物葡萄柚、橘、橙的果皮和果肉中， 也是中草药骨碎补、枳实、枳壳、橘红的主要有效成分。有报道表明大鼠 皮下注射100mg/kg柚皮苷有明显的抗炎作用，200mg/L浓度的柚皮苷对 水疱性口炎病毒有很强的抑制作用。柚皮苷还可降低血液的粘滞度、减少 血栓的形成,并且有镇痛、镇静以及较强的增加实验动物胆汁分泌的作用。 柚皮苷还有脱敏和抗过敏、活血解痉、改善局部微循环和营养供给的性能， 对促进药物排泄、解除链霉素对第8对脑神经的损害、缓解链霉素的毒副作用有独特疗效[Bok, S. H et al, i 仏20, 1007-1015(2000)]。柚皮素(naringenin)是柚皮苷的甙元，也是柚皮苷产生药理作用的结 构部分，分子式C15H1205， 272.25，也具有抗菌、抗炎、痉和利胆等作用 [Chul-Ho Lee et al, Biochemical and Biophysical Research Communications 284, 681-688 (2001)]。柚皮素和柚皮苷的结构如下HO OH发明内容本发明发明人首次发现在柠檬、葡萄汁、橘子等中普遍存在的天然黄酮类小分子化合物柚皮素及柚皮苷可以抑制TGF-p信号通路，从而升高血 清INF-Y，体内、体外实验均证明其具有治疗或预防纤维化及肿瘤作用， 进而对其潜在的临床应用进行了深入的研究。本发明涉及柚皮素和柚皮苷作为转化生长因子-(31信号通路抑制剂的应用。本发明涉及柚皮素和柚皮苷作为转化生长因子-pi信号通路抑制剂的 应用，其中所述转化生长因子-pi信号通路抑制剂在制备用于治疗或预防纤 维化的药物中的应用。本发明涉及柚皮素和柚皮苷作为转化生长因子-(31信号通路抑制剂的 应用，其中所述转化生长因子-(31信号通路抑制剂在制备用于治疗或预防肿 瘤的药物中的应用。本发明涉及柚皮素和柚皮苷作为转化生长因子-PH言号通路抑制剂在 制备用于治疗或预防纤维化的药物中的应用，其中所述纤维化包括各组织 器官的纤维化，优选为肝纤维化和肺纤维化。本发明涉及柚皮素和柚皮苷作为转化生长因子-pi信号通路抑制剂在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的应用，其中所述肿瘤包括各种实体 瘤、非实体瘤和转移性肿瘤，优选为肝癌和肺癌。本发明涉及柚皮素和柚皮苷作为转化生长因子-Pl信号通路抑制剂在 制备用于治疗或预防纤维化的药物中的应用，其中所述柚皮素和柚皮苷用 于治疗或预防纤维化伴随肿瘤疾病的动物有效剂量范围是口服10-300mg/kg体重/日、皮下注射4-200mg/kg体重/日、静注l-30mg/kg体重/ 日，优选剂量为口服50-200mg/kg体重/日、皮下注射10-100mg/kg体重/日、 静注5-20mg/kg体重/日。推算的人用有效剂量范围为口服0.8-24mg/kg体重/ 日、皮下注射0.2-6mg/kg体重/日、静注0.8-4mg/kg体重/日，优选剂量为口 服4-12mg/kg体重/日；皮下注射0.6-2mg/kg体重/日；静注0.1-0.4mg/kg体重 /日。本发明涉及柚皮素和柚皮苷作为转化生长因子-pi信号通路抑制剂在 制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的应用，其中所述转化生长因子-pi信号通路抑制剂用于治疗或预防肿瘤的动物有效剂量范围是口服10-300mg/kg体重/日、皮下注射4-200mg/kg体重/日、静注l-30mg/kg体重/ 日，优选剂量为口服50-200mg/kg体重/日、皮下注射10-100mg/kg体重/日、 静注5-20mg/kg体重/日。推算的人用有效剂量范围为口服0.8-24mg/kg体重/ 日、皮下注射0.2-6mg/kg体重/日、静注0.8-4mg/kg体重/日，优选剂量为口 服4-12mg/kg体重/日；皮下注射0.6-2mg/kg体重/日；静注0.1-0.4mg/kg体重 /日。本发明揭示柚皮素和柚皮苷作为TGF-pi信号通路的抑制剂可以用于 治疗或预防纤维化及肿瘤。柚皮素抑制大鼠肝星形细胞增殖及其细胞基质 和胶原蛋白分泌(见图1和图2)。柚皮素对大鼠肝星形细胞增殖有明显抑 制作用，且显著抑制纤溶酶原激活抑制剂1(PAI-1)、纤维连接蛋白(FN)和 胶原lci (ColIalphal)的表达。上述结果表明柚皮素具有潜在的抗纤维化 作用。柚皮素对四氯化碳(CCU)所致小鼠肝损伤(纤维化)具有保护作用。 肝脏大小直接反应肝脏的受损肿胀程度，柚皮素高、中剂量对CCU致肝纤 维化小鼠肝脏增大有明显抑制作用(pO.Ol，见图3)。MDA (malondialdehyde，丙二醛)是机体脂质过氧化损伤后的产物，其含量越高表示机体受损程度越重，柚皮素高、中、低剂量对CCl4致肝纤维化小鼠血清MDA均有明显降低作用(p<0.05，见图4); CAT (catalase， 过氧化氢酶)、POD(peroxidase,过氧化物酶)有清除机体H202、减少自身 损害的作用，体内&02浓度升高是刺激CAT与POD活性增加的主要因 素，柚皮素高、中、低剂量对CCU致肝纤维化小鼠血清CAT及POD应激 性升高均有降低作用(p<0.05，见图4)，数据表明柚皮素有减少体内自由 基作用。ALT (Alanine aminotransferase，丙氨酸氨基转移酶)、AST(Aspartate aminotransferase,天冬氨酸氨基转移酶)活性直接反映肝脏受损程度，其活 性越高代表肝脏损害越重，柚皮素高、中、低剂量对ccu致肝纤维化小鼠 血清ALT、 AST升高均有降低作用(pO.Ol，见图5)。上述结果表明柚皮 素对CC14所致的小鼠肝损伤(纤维化)有明显的保护作用。另外，柚皮素口服200、 100、 50mg/kg体重/日或静注20、 10、 5mg/kg 体重/日或皮下注射40、 20、 10mg/kg体重/日3个剂量治疗和等摩尔剂量 的柚皮苷对小鼠肝癌H22皮下肿瘤的生长均有显著地抑制作用(PO.01, 见图6、图7和图8)。三个剂量组的柚皮素均能减少Lewis肺癌的肺转移数(P<0.05，见图 9)，减慢肺转移肿瘤的生长(P<0.01，见图10)，表明柚皮素有抗肿瘤转 移作用。柚皮素对博来霉素诱导的肺纤维化小鼠血清TGF-(31有显著地抑制作 用(PO.Ol，见图11)，可以显著地升高血清中INF-Y水平(PO.05,见图 12)，表明柚皮素可通过抑制TGF-卩1、诱生INF-Y起到治疗纤维化和肿瘤 疾病作用。同时，柚皮素降低了小鼠血清MDA (PO.Ol，见图12)。总之，结合上述发明内容，本发明的有益效果可以概括成以下五个方面① 柚皮素和柚皮苷对四氯化碳所致小鼠肝纤维化有治疗或预防作用， 可以减轻肝'纤维化程度，调节肝功能水平趋于正常。② 柚皮素和柚皮苷对博来霉素所致的小鼠肺纤维化有治疗或预防作 用，可以明显减轻肺纤维化程度，阻止肺损伤。③ 柚皮素和柚皮苷对小鼠肝癌H22皮下肿瘤有明显生长抑制作用，可以减慢肿瘤生长速度，延长小鼠存活时间。④柚皮素和柚皮苷对小鼠Lewis肺癌转移有明显抑制作用，可以减少 Lewis肺癌转移发生率，阻止肺转移肿瘤生长速度。 柚皮素和柚皮苷对纤维化引起的小鼠血清TGF-pi及MDA升高均 有明显降低作用，可以将其调至正常水平，同时柚皮素对因TGF-(31升高 所致小鼠血清INF-Y降低也有明显回升作用。
图1是柚皮素对大鼠肝星形细胞增殖影响的曲线图。图2是柚皮素对纤溶酶原激活抑制剂l(PAI-l)、纤维连接蛋白(FN)和 胶原la (ColIalphal)的细胞基质胶原蛋白分泌表达图。图3是柚皮素对CCU致肝纤维化小鼠肝脏增大的影响的柱状图，其中 Nar(ig)表示用柚皮素或柚皮苷灌胃、Nar(iv)表示用柚皮素或柚皮苷静脉注 射(iv)、和Nar(sc)表示用柚皮素或柚皮苷皮下注射(sc)。图4是柚皮素对CCU致肝纤维化小鼠血清MDA、 CAT、 POD升高的 影响的柱状图，其中Nar(ig)表示用柚皮素或柚皮苷灌胃、Nar(iv)表示用柚 皮素或柚皮苷静脉注射(iv)、和Nar(sc)表示用柚皮素或柚皮苷皮下注射 (sc)。图5是柚皮素对CCU致肝纤维化小鼠血清ALT及AST升高的影响的 曲线图，其中Nar(ig)表示用柚皮素或柚皮苷灌胃、Nar(iv)表示用柚皮素或 柚皮苷静脉注射(iv)、和Nar(sc)表示用柚皮素或柚皮苷皮下注射(sc)。图6是柚皮素对小鼠肝癌H22皮下肿瘤生长的影响的曲线图，其中 Nar(ig)表示用柚皮素或柚皮苷灌胃、Nar(iv)表示用柚皮素或柚皮苷静脉注 射(iv)、和Nar(sc)表示用柚皮素或柚皮苷皮下注射(sc)。图7是柚皮素(iv)对小鼠肝癌H22皮下肿瘤生长的影响的曲线图， 其中Nar(ig)表示用柚皮素或柚皮苷灌胃、Nar(iv)表示用柚皮素或柚皮苷静 脉注射(iv)、和Nar(sc)表示用柚皮素或柚皮苷皮下注射(sc)。图8是柚皮素(sc)对小鼠肝癌H22皮下肿瘤生长的影响的曲线图， 其中Nar(ig)表示用柚皮素或柚皮苷灌胃、Nar(iv)表示用柚皮素或柚皮苷静 脉注射(iv)、和Nar(sc)表示用柚皮素或柚皮苷皮下注射(sc)。图9是柚皮素对小鼠Lewis肺癌转移的影响的曲线图，其中Nar(ig)表 示用柚皮素或柚皮苷灌胃、Nar(iv)表示用柚皮素或柚皮苷静脉注射(iv)、 和Nar(sc)表示用柚皮素或柚皮苷皮下注射(sc)。图10是柚皮素对小鼠Lewis肺癌转移肿瘤生长的影响的曲线图，其中 Nar(ig)表示用柚皮素或柚皮苷灌胃、Nar(iv)表示用柚皮素或柚皮苷静脉注 射(iv)、和Nar(sc)表示用柚皮素或柚皮苷皮下注射(sc)。图11是柚皮素对博来霉素致肺纤维化小鼠血清TGF-pi升高的影响的 曲线图，其中Nar(ig)表示用柚皮素或柚皮苷灌胃、Nar(iv)表示用柚皮素或 柚皮苷静脉注射(iv)、和Nar(sc)表示用柚皮素或柚皮苷皮下注射(sc)。图12是柚皮素对博来霉素致小鼠血清IFN-y降低及MDA升高的影响 的曲线图，其中Nar(ig)表示用柚皮素或柚皮苷灌胃、Nar(iv)表示用柚皮素 或柚皮苷静脉注射(iv)、和Nar(sc)表示用柚皮素或柚皮苷皮下注射(sc)。
具体实施方式
可以将本发明的柚皮素和柚皮苷作为TGF-pl信号通路的抑制剂用于 治疗或预防纤维化及癌症。本发明对柚皮素和柚皮苷的抗纤维化及抗肿瘤 活性进行了试验，柚皮苷在等摩尔剂量下作用与柚皮素相当，所以下面试 验仅以柚皮素为例。本发明中的柚皮素和柚皮苷均购自陕西慧科植物开发 有限公司。实施例l.柚皮素对大鼠肝星形细胞增殖及细胞基质胶原蛋白分泌的影响实验方法大鼠肝星形细胞(HSC-T6， Hepatic stellate cell,由美国Mount Sinai医学中心Friedman教授提供)培养于含10%胎牛血清(美国PPA公 司)、青霉素和链霉素各100 U/ml的RPMI1640培养基中(Sigma公司)， 5%C02、 37°C (FIL-TER型培养箱，德国Thermo公司)。将丰度90%的 细胞用0.25%的胰蛋白酶消化后将细胞数调至5xl0Vml，以100 pl/孔接种 于96孔培养板，细胞贴壁过夜后补充含不同浓度柚皮素的培养基100 (il/ 孔，每个浓度4-6个复孔，继续培养48h后，除去培养基，以100pl/孔加 含0.5mg/ml MTT (dimethylthiazol-2-yl)- 2，5- diphenyltetrazolium bromide, Sigma公司)的磷酸盐缓冲液(PBS)，培养4h后除去MTT，加二甲基亚砜10DMSO( dimethyl sulfoxide) 100pl/孔，在酶标仪590 nm测吸光度(MK3型， 德国Thermo公司)。以对照孔(不含柚皮素)的吸光度为100%，药物孔 与对照孔间的吸光度比值为细胞存活百分率，做细胞存活曲线观察柚皮素 对大鼠肝星形细胞增殖的影响。对于柚皮素对大鼠肝星形细胞基质胶原蛋 白分泌的影响，将细胞以2xlOVml接种于6孔板，每孔3复孔，药物处理 方式均同96孔板。药物处理48h后，将细胞用胰酶消化，用PBS洗3次 后按Western blotting方法检测胶原la (Col Ialphal， collagen lal )、纤维连 接蛋白(FN, fibronectin)和纤溶酶原激活抑制齐U l(PAI-l, plasminogen activator inhibitor-l)。本实施例中人重组细胞因子TGF-(31购自美国R&D 公司，标准蛋白及蛋白分子量标准购自美国Bio-Rad公司，所有抗体(包 括基础抗体和第二抗体)均购自美国Santa Cruz生物技术公司。结果肝星形细胞的激活增殖是肝纤维化形成的基础，柚皮素对大鼠 肝星形细胞增殖有明显抑制作用(p<0.05，见图O 。纤溶酶原激活抑制剂 l(PAI-l)、纤维连接蛋白(FN)和胶原la (Col Ialphal)均由激活的星状细胞 分泌，是纤维化形成所需的基质胶原蛋白物质，柚皮素对3种基质胶原蛋 白均有下调作用(见图2)。以上结果表明柚皮素有抗纤维化作用。实施例2.柚皮素对四氯化碳(CCU)所致小鼠肝纤维化的影响实验方法雌性balb/c小鼠(北京维通利华实验动物公司提供)皮下注 射腦CCU (carbon tetrachloride) ， 0.2ml/只，每周2次，连续4周造成肝 纤维化模型。从第2周开始治疗组用柚皮素(Nar)高(100mg/kg)、中 (50mg/kg)和低(25mg/kg)3个剂量灌胃(ig),或静脉注射(iv) 5mg/kg及皮 下注射(sc) 20mg/kg治疗，另设l组未造纤维化模型的小鼠为正常对照小 鼠，每组10只小鼠，每日给药1次，连续3周。第28天眶静脉取血用于血液 指标检测，然后，处死小鼠，剥离肝脏，称重。本实施例中MDA、 CAT 及POD试剂盒购自中国南京建成生物技术公司，ALT和AST试剂盒购自中 国北京中生北控生物技术公司。结果肝脏大小直接反应肝脏的受损肿胀程度，柚皮素ig高、中剂量 对CCU致肝纤维化小鼠肝脏增大有明显抑制作用湘皮素iv及sc给药也同样 有效(pO.Ol，见图3) 。 MDA (malondialdehyde，丙二醛)是机体脂质过氧化损伤后的产物，其含量越高代表集体损伤越重，柚皮素高、中和低剂量对CCl4致肝纤维化小鼠血清MDA均有明显降低作用；柚皮素iv及sc给 药也同样有效(p<0.05，见图4) ; CAT (catalase，过氧化氢酶)、 POD(peroxidase,过氧化物酶)有清除机体H202、减少自身损害的作用，体内 H202浓度升高是刺激CAT与POD活性增加的主要因素，柚皮素高、中和低 剂量对CCU致肝纤维化小鼠血清CAT及POD应激性升高均有降低作用；柚 皮素iv及sc给药也同样有效(p<0.05，见图4)，间接证明柚皮素有减少体 内自由基作用。ALT (Alanine aminotransferase,丙氨酸氨基转移酶)、 AST(Aspartate aminotransferase,天冬氨酸氨基转移酶)活性直接反应肝脏 受损程度，其活性越高代表肝脏损害越重，柚皮素高、中和低剂量对CCU 致肝纤维化小鼠血清ALT、 AST升高均有降低作用；柚皮素iv及sc给药也 同样有效(pO.Ol，见图5)。上述结果表明，柚皮素对CCU所致的小鼠肝 纤维化有抑制作用。实施例3.柚皮素对小鼠肝癌H22皮下肿瘤生长的影响实验方法将小鼠肝癌H22皮下肿瘤(中国医学科学院药物研究所提 供)用PBS制成细胞悬液后，调细胞数5xl0Vml，以0.2ml/只接种于雌性 balb/c小鼠前肢腋部皮下。肿瘤接种后次日开始治疗组用柚皮素(Nar)灌 胃(ig) 200mg/kg、 100mg/kg和50mg/kg3个剂量或静脉注射(iv) 20mg/kg、 10mg/kg和5mg/kg3个剂量或皮下注射(sc) 40mg/kg、 20mg/kg和10mg/kg3 个剂量治疗，每组10只小鼠，每日给药1次，连续2周。从肿瘤长出后，每 隔2天用游标卡尺测量肿瘤体积，以长x宽x0.5宽表示肿瘤体积，绘制肿瘤 生长曲线。结果柚皮素ig或iv高、中和低3个剂量及柚皮素sc高、中2个剂量对小 鼠肝癌H22皮下肿瘤的生长均有抑制作用(PO.01或PO.05，见图6、图7 和图8)，表明柚皮素有抗肿瘤作用。实施例4.柚皮素对Lewis肺癌转移的影响实验方法将小鼠Lewis肺癌皮下肿瘤(中国医学科学院药物研究所 提供)用PBS制成细胞悬液后，将细胞数调至lxl06/ml，以0.2ml/只iv。肿瘤接种后次日开始治疗组用柚皮素(Nar)高 (100mg/kg)、中(50mg/kg)和低(25mg/kg)3个剂量灌胃(ig),或静脉注射 (iv) 5mg/kg或皮下注射(sc) 20mg/kg治疗，每组10只小鼠，每日给药 l次，连续3周。肿瘤接种后第22天处死小鼠，剥离肺脏，称重，计数肺 部肉眼可见的肿瘤结节数。结果柚皮素ig高中能减少Lewis肺癌的转移数(P<0.05，见图9)， 减慢肺转移肿瘤的生长(P<0.01，见图IO)，柚皮素iv或sc给药同样有效， 表明柚皮素有抗肿瘤转移作用。实施例5.柚皮素对小鼠血清TGF-pi、 INF-y和MDA的影响实验方法用戊巴比妥钠30mg/kg(0.3。/。， 0.2ml/只)将雌性balb/c小鼠 麻醉后，以博来霉素100ug/只(日本化药株式会社产品，2ug/ml,50ul/只) 一次性滴鼻造肺纤维化模型。肿瘤接种后次日开始治疗组用柚皮素(Nar) ig (50mg/kg)或iv (5mg/kg)或sc (20mg/kg)治疗，每组10只小鼠， 每日给药1次，连续3周。造模后第22天采血分离血清用ELISA试剂盒 检测TGF-(31、 INF-Y及MDA。本实施例中TGF-(31和INF-y试剂盒由美 国Genzyme公司提供。结果TGF-pi (转化生长因子pi)是纤维化形成的主要细胞因子，也 是肿瘤发生、发展的促进因子；INF-y(干扰素y)有与TGF-(31相反的作用， 可以减少纤维化、阻止肿瘤生长。柚皮素3种给药途径对博来霉素诱导的 肺纤维化小鼠血清TGF-(31升高均有明显抑制作用(PO.Ol，见图ll)、可 以促进INF-y分泌(P<0.05，见图12)，表明柚皮素可通过抑制TGF-(31、 诱生INF-丫起到治疗纤维化和肿瘤疾病作用。柚皮素降低小鼠血清MDA (P<0.01，见图12)是柚皮素可以阻止机体损伤的又一佐证。
权利要求
1.柚皮素和柚皮苷作为转化生长因子-β1信号通路抑制剂的应用。
2. 权利要求l的应用，其中所述转化生长因子-pi信号通路抑制剂在制 备用于治疗或预防纤维化的药物中的应用。
3. 权利要求l的应用，其中所述转化生长因子-(31信号通路抑制剂在制 备用于治疗或预防肿瘤的药物中的应用。
4. 根据权利要求2的应用，其中所述纤维化包括各组织器官的纤维化， 优选为肝纤维化和肺纤维化。
5. 根据权利要求3的应用，其中所述肿瘤包括各种实体瘤、非实体瘤 和转移性肿瘤，优选为肝癌和肺癌。
6. 根据权利要求l、 2和4任一项的应用，其中所述柚皮素和柚皮苷用 于治疗或预防纤维化伴随肿瘤疾病的动物有效剂量范围是口服 10-300mg/kg体重/日、皮下注射4-200mg/kg体重/日、静注l-30mg/kg体重/ 日，优选剂量为口服50-200mg/kg体重/日、皮下注射10-100mg/kg体重/日、 静注5-20mg/kg体重/日；推算的人用有效剂量范围为口服0.8-24mg/kg体重/ 日、皮下注射0.2-6mg/kg体重/日、静注0.8-4mg/kg体重/日，优选剂量为口 服4-12mg/kg体重/日；皮下注射0.6-2mg/kg体重/日；静注0.1-0.4mg/kg体重 /日。
7. 根据权利要求l、 3和5任一项的应用，其中所述转化生长因子-(31信 号通路抑制剂用于治疗或预防肿瘤的动物有效剂量范围是口服 10-300mg/kg体重/日、皮下注射4-200mg/kg体重/日、静注l-30mg/kg体重/ 曰，优选剂量为口服50-200mg/kg体重/日、皮下注射10-100mg/kg体重/日、 静注5-20mg/kg体重/日；推算的人用有效剂量范围为口服0.8-24mg/kg体重/日、皮下注射0.2-6mg/kg体重/日、静注0.8-4mg/kg体重/日，优选剂量为口 服4-12mg/kg体重/日；皮下注射0.6-2mg/kg体重/日；静注0.1-0.4mg/kg体重/曰。
全文摘要
本发明公开了柚皮素和柚皮苷作为转化生长因子-β1信号通路的抑制剂的应用，特别是用于治疗或预防纤维化及肿瘤。
文档编号A61K31/352GK101322700SQ20071011887
公开日2008年12月17日 申请日期2007年6月13日 优先权日2007年6月13日
发明者刘金平, 吕和平, 张鸿雁, 杜钢军, 伟 梁, 振 樊, 伟 王, 金凌涛 申请人:中国科学院生物物理研究所;河南天方药业股份有限公司