一种治疗乳腺增生、乳腺癌的中药组合物及其制备方法

专利名称：：一种治疗乳腺增生、乳腺癌的中药组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种治疗乳腺病的中药组和物及其制备方法，尤其涉及一种治疗乳腺增生、乳腺癌的颗粒剂及其制备方法，属于中药
技术领域：
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背景技术：
：乳腺病是女性的常见病、多发病、久治难愈，发病率高达80%，乳腺增生症的发病率己达育龄女性的60%以上。近几年，乳腺病正处于高峰期，而且癌变率较高，据中国中医乳腺病防治研究中心流行病学统计的最新资料发现，女性乳腺癌发病率近年增加了39%，发病年龄提前了10岁，渐趋于年轻化，乳腺癌在妇女肿瘤的排行榜上由前几年的第五位跃居首位成为女性健康头号杀手。中医认为，乳腺增生病、乳腺癌(中医古称"乳岩")，起自肝郁，终必肾虚，肿块坚硬难消，久治不愈，此乃"阴极阳衰"，寒痰凝聚。寒痰非温不能化，血瘀无阳安能散，且妇人"阳常不足"，用补肾温阳法，鼓舞阳气，以阳化阴，才能达到治愈之效。如果一见乳腺病就疏肝理气，一见内异症就活血化瘀，这就是仅知其一，不知其二，仅治其标，未治其本，有效也仅一时。申请号为CN200610114397.2的专利文献"治疗乳腺疾病的中药组合物及其制备方法"，公开了一种能补肾虚、温肾阳，活血化瘀，软坚散结治疗乳腺癌症及乳腺增生的药物组和物，但其制备工艺存存在不合理性，限制了药物处方疗效的发挥。
发明内容本发明的目的在于提供一种治疗乳腺增生、乳腺癌的中药组和物及其制备方法，该组合物是以下列重量份的原料制成的紫草50-150重量份熟地150-250重量份附子(制)30-60重量份延胡索40-80重量份肉桂40-80重量份瓜蒌150-250重量份鳖甲50-150重量份全蝎10-50重量份鹿角胶2-10重量份该组和物的制备方法包括以下步骤1)取上述紫草重量份的一半、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，备用；2)其余药味加水煎煮1-3次，第一次1-3小时，第二次1-2小时，合并煎液，浓縮至55。C下相对密度为1.101.40的浸膏；3)将步骤l)中细粉与步骤2)中浸膏混合加入常规辅料，混匀，得药物混合物；4)鹿角胶烊化后加入上述混合物中，依照本领域常规技术制成临床接受的制剂，如胶囊剂、片剂、颗粒剂、软胶囊、丸剂。该中药组合物颗粒剂的制备方法为取原料药紫草87.5重量份熟地175重量份附子(制)45.8重量份延胡索58.3重量份肉桂58.3重量份瓜蒌175重量份鳖甲87.5重量份全蝎35重量份鹿角胶5重量份其特征是该方法包括以下步骤1)取上述紫草重量份的一半、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉备用；2)其余药味加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，浓缩至55'C下相对密度为1.281.30的浸膏；3)将步骤l)中细粉与步骤2)中浸膏混合，加入蔗糖粉300重量份、糊精300重量份，混匀，得药物混合物；4)鹿角胶烊化后加入上述混合物中，制成颗粒，干燥，制成1000重量份，即得。本发明原料药中，鳖甲用量较少，且有效成分难以煎出，故将其粉碎成细粉。因全蝎用量较少，比较贵重，同样将其粉碎成细粉。肉桂中含挥发油仅1%2%，在所得制剂中难以鉴别，为了保留该有效成分，特别对制剂过程中使用的药用辅料进行了筛选。为了减少工艺中辅料的用量和制粒的需要将瓜篓、紫草粉碎或部分粉碎。本发明水提原料药中，熟地黄用量较大且熟地黄经炮制后，所含成分发生较大变化，梓醇、多糖等成分较生地黄显著减少，而5-羟甲基糠醛、寡糖及低聚糖等成分含量明显增高。现代药理表明，熟地黄经炮制后的成分改变与其炮制后补血滋阴功效增强相吻合。因此现采用正交实验法，以其滋阴的主要成分之一5-羟甲基糠醛的含量为评价指标，对处方的提取工艺进行优化选择。与现有技术相比，本药物组合物对肿瘤的抑制作用较强，其抗转移效果较好，对化疗药物有减毒增效作用。具体实施例方式下述实验例和实施例进一步说明但不下限于本发明实验例1.本发明中药组和物提取工艺的优选实验1.试验材料AgilentllOO高效液相色谱仪，包括G1311A四元梯度泵、G1313A自动进样器、G1315A二极管阵列检测器(美国惠普公司)；Lambda25UV/VISspectrometer(美国PerkinElmer公司)；AG285分析天平(德国梅特勒公司)；KS-600D超声清洗机(宁波科生仪器厂)；98-1-B型电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司)。5-羟甲基糠醛对照品(批号111626-200402)、购自中国药品生物制品检定所，乙腈色谱纯，其余试剂均为分析纯。2.方法与结果2.1HPLC法测定5-羟甲基糠醛含量2丄1色谱条件色谱柱DiamonsilC18(250X4.6mm，5um);柱温35°C;检测波长280nm;流速l.OmL.min-l;流动相水-乙腈(85:15);进样量10uL。理论塔板数按5-羟甲基糠醛计算应不低于3000。2丄2对照品溶液制备精密称取5-羟甲基糠醛对照品8.10mg置100mL容量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。2丄3线性关系的考察精密吸取对照品溶液2、4、6、8、lOmL分别置lOOmL容量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件进样，以峰面积为纵坐标，5-羟甲基糠醛溶液的量为横坐标作图，得线性回归方程y=7.0725x-6.9933，r=0.9999。表明5-羟甲基糠醛溶液在16.297.2ng间线性关系良好。2丄4供试品溶液的制备及测定精密量取本发明原料药提取液5mL，置25mL量瓶中，加甲醇15mL，超声15min，加甲醇至刻度，滤过，取续滤液作为供试品溶液。在上述色谱条件下取10ixL进样测定，计算。2.2正交试验设计选择提取时间、提取次数、浓縮至相对密度三个因素，每个因素设3个水平，因素水平见表l，试验设计结果见表2，方差分析见表3。称取紫草43.8g、熟地175g、附子(制)45.8g、延胡索58.3g、肉桂58.3g，按表2的设计进行回流提取，趁热滤过，合并二次提取液，浓縮并定容至500mL，按上述方法测定提取液中5-羟甲基糠醛含量，计算。表1优选因素水平表ABC水平提取时间O提取次数(^)至相对密度16011.2529021.29312031.35表2.因素筛选正交试验数据表序ABCD浓縮液中5-羟甲基糠号醛(mg/g)11工116.772122211.57313335.494212310.3522318.35623125.88731328.488321310.579332111.64I23.83025.55023.22026.760S=79.050II24.53030.49033.51025.930III30.69023.01022.32026.360Rj2.2866672.4933333.7300000.005000CT=694.322500SSj9.柳4679.64506725.7678000.114867表3方差分析表方差来源离差平方禾口自由度均方和F比显著性A1.6824.74973382.70*B7.0724.82253383.97承C19.48212.883,224.33氺氺D(误差)0.6220.057433F^乂2,2一9.00Fl謹(2，2—19.00Fl謹(2，2一99.00以5-羟甲基糠醛含量为考察指标的正交试验直观分析及方差分析的结果表明，因素C对试验结果影响最大，以后依次为B、A。其中C2提取效果最好，宜选择C2;最佳提取浓缩工艺条件为A3B2C2。即加水提取2次，每次2小时，浓縮相对密度至1.29。根据该结果和工艺执行中的实际情况，优选方法如下取原料药加水煎煮2次，第一次加8倍量的水提取2小时，第二次加6倍量的水提取1.5小时，合并煎液，浓縮至55'C下相对密度为1.281.30。实验例2.本发明胶囊剂、颗粒剂制备中辅料的筛选本发明提取浸膏中含有较多粘液质和脂多糖等引湿性物质，所得该产品的固体制剂储存过程中易吸潮，使产品质量不稳定；另外，为了使产品装量准确，服用方便，特根据辅料与浸膏粉混匀后制成颗粒的吸湿性、成型性、溶化性、堆密度以及休止角来选择恰当辅料。实验方法取紫草43.8g、熟地175g、附子(制)45.8g、延胡索58.3g、肉桂58.3g处方量药材按优选出的最佳提取工艺提取、浓縮得浸膏，取紫草43.7g、瓜蒌175g、鳖甲87.5g、全蝎35g粉碎成细粉，按表4规定鹿角胶比例浸膏与辅料混匀，取鹿角胶5g烊化后加入上述混合物中，制成颗粒，干燥，制成l-6号颗粒剂，测定成型性、堆密度、休止角、溶化性以及吸湿性。并以成型性、堆密度、休止角、溶化性以及吸湿性为指标综合评价，优选最佳辅料。综合指标=(15/最大成型性值)乂成型性值+(15/最大堆密度值)乂堆密度值+(最小休止角值X15)/休止角值+(20/最大溶化性值)乂溶化性值+(最小吸湿率值X35)/吸湿率值+对挥发油的保留效果(0-20分四个级别)。表4不同辅料与浸膏粉的配伍处方<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>1.1成型性的测定1.1.1实验方法将制备好的颗粒称重，先过一号筛，再过四号筛，收集能通过一号筛但不能通过四号筛的颗粒，称重。成型率=过筛后颗粒质量/过筛前颗粒质量*100%成型性分值计算运用公式(15/最大成型性值)X成型性值，结果见表5。表5成型性的测定<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>1.2堆密度的测定堆密度又称表观密度或松密度，系指单位体积颗粒的质量。堆密度所用的体积是指颗粒及其本身空隙以及颗粒与颗粒之间空隙在内的总体积。颗粒的堆密度大即堆体积小，可表示颗粒密集的程度以及决定体积分剂量的多少。1.2.1实验步骤将过筛后的颗粒放入干燥的量筒中，轻轻振动，读出其近刻度处的ml数(V);将过筛后的质量作为M(g)，两者的比值即为堆密度。堆密度:M/V堆密度分值计算运用公式(15/最大堆密度值)X堆密度值，结果见表6。表6堆密度的测定<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>1.3休止角的测定流动性是颗粒剂的重要性质之一，流动性的好坏与颗粒的质量、分剂量的准确度有关，药剂学上常用流动率和休止角表示。休止角愈小，流动性愈好。通常粒径越小或粒度分布宽的颗粒，其休止角愈大；而粒径圆、大且均匀的颗粒易流动，休止角小。3.3.1实验步骤采用固定漏斗法，将3只漏斗串联并固定于水平放置的坐标纸上lcm的高度处，小心地将颗粒沿漏斗壁倒入最上的漏斗中直到坐标纸上形成的颗粒圆锥体尖端接触到漏斗口为止，由坐标纸测出圆锥底部的直径(2R)，计算出休止角tga二H/R.做5次，计算平均值。休止角分值计算运用公式(最小休止角值X15)/休止角值，结果见表7。表7休止角的测定项目处方号1234_56第一次h(cr(c第二次h(cr(c第三次h(cr(c第四次h(cr(c第五次h(cr(ca平均值32.532.436.036.832.432.7分值(15分)_14.9515.0013.5013.2015.0014.861.4溶化率的测定1.4.1实验步骤在干燥恒重的5ml离心管(最小刻度O.lml)中加入精密称定的颗粒，精密加入沸水5ml，搅拌振荡5min，3000r/min离心15min，弃去上清液，在80。C将残渣烘干至恒重，精密称定，计算溶化率。结果见表5。溶化率=溶化颗粒质量/颗粒质量*100%溶化率分值计算运用公式(20/最大溶化性值)X溶化性值，结果见表8。表8溶化率测定处方号颗粒质量(g)溶化颗粒质量(g)溶化率(%)分值(15分)10.25020.238595.3220.0020.25040.237094.6519.8630.25050.105742.208.8540.25010.105542.188.8450.25050.207382.7517.3660.25030.237995.0519.941.5吸湿性的测定1.5.1实验步骤取一定量的浸膏粉，置3(TC烘箱中恒重48h。将底部放有NaCl饱和溶液的玻璃干燥器中定时放入NaCl直到形成NaCl过饱和溶液，此时干燥器内的相对湿度为75%。在已恒重的扁称量瓶底部放入厚约2mm的药粉，准确称重后置于上述干燥器内(扁称量瓶打开)。48h后称量，计算吸湿百分率。共做两组，计算平均值。吸湿后重量-吸湿前重量955505560557877767887505050505064545468675555555055070707000065550555555989906059750L00505059645454686755505550504345455252吸湿百分率％=--X100%吸湿前重量吸湿率分值计算运用公式(最小吸湿率值X15)/吸湿率值，结果见表9。表9吸湿性的测定处方号吸湿前颗粒重(g)吸湿后颗粒重(g)吸湿百分率(%)平均值OO分值(15分)11.00181.228622.6426.8810.231.00001.311231.1221.00001.腿16.4318.3315.001.00061.202420.2330.99841.235723.7722.8712.021.00051.220321.9741.00191.193228.5325.2510.891.00001.412041.2051.00001.365536.5539.626.941.00061.427842.6960.97211.203223.7721.0413.071.00071.183918.311.6对挥发油的保留效果取以上各处方号颗粒2.0g，研细，加乙醇10ml，冷浸20分钟，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液。另取桂皮醛对照品(挥发油的主要成分)，加乙醇制成每lml含"l的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法《中国药典2005版》(附录VIB)试验，吸取供试品溶液25pl、对照品溶液2pl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(6090°C)-乙酸乙酯(17:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显色情况见表10。表IO对肉桂挥发油的保留效果的检测处方号123456结果斑点显色斑点显色无斑点显斑点显色斑点显色无斑点显很浅清晰色浅浅色分值5200101001.7综合评分对上述6项测试结果进行综合评价，结果见表ll。表ll综合评分处方号成型率(15)堆密度(15)休止角(15)溶化性(20)吸湿性(15)对挥发油的保留(20)总分112.3713.4314.9520.0010.23575.89211.3412.9215.0019.8615.002094.12312.549.2313.508.8511.02055.14415.008.7913.208.8410.891066.73513.1815.0015.0017.366.941077.4867.257.0514.8619.9413.07062.17结论将与糊精、糖粉与本发明浸膏(1:1:1)制成的颗粒容易制粒，稳定，不容易吸湿，易于溶化，且流动性好，制成颗粒后有助于分装和贮存的稳定性，且对肉桂挥发油的保留效果较好。故选用糊精与糖粉(1:1)作为辅料制粒最好。实验例3.本发明片剂的制备取上述紫草二分之一处方量，瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮，合并煎液，浓縮成浸膏，混入上述细粉，再与细粉量0.5—5%的羧甲基淀粉钠混匀，得药物混合物；鹿角胶烊化后加入上述混合物中，制成颗粒，干燥，整粒，压片，包衣，即得。本发明制成片剂的崩解性不好，故我们通过实验对加入的崩解剂进行了筛选，试验结果如下表12:表12不同崩解剂制成片剂的实验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>故本发明选择羧甲基淀粉钠为崩解剂。实验例4.本发明软胶囊的制备取上述紫草二分之一处方量、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮，合并煎液，浓縮，减压干燥，粉碎，与细粉混匀，加入植物油适量，搅匀，制成软胶囊，所用软胶囊辅料为豆油吐温-80:乙基纤维素=5-12:0.2-8:3-10的混合物。为选择合适的辅料及其优选的配比，我们对其进行了筛选试验，结果如下表13表13不同软胶囊辅料的实验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>豆油吐温-80:蜂蜡2:0.1:1.5流动性好，但易于渗漏根据以上结果，我们以豆油、吐温-80、乙基纤维素作为该软胶囊的辅料。实验例5.本发明丸剂的制备取上述紫草二分之一处方量、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮，合并煎液，浓縮，减压干燥，粉碎，与细粉混匀，加入药粉量0.1-6倍微晶纤维素混合，以2-10%PVP的乙醇溶液为粘合剂制成丸剂。本发明制成丸剂时，我们对丸剂的辅料进行了筛选试验，试验结果见表14和表15:表14不同处方丸剂的外观质量<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>以上试验结果表明药粉与微晶纤维素以2:l混合制备丸剂大小均匀、吸湿性小，稳定性好，可操作性和质量均符合规定，固本发明丸剂以微晶纤维素作为赋形剂。实验例3.药效学实验为了证明本发明的疗效，我们进行了以下药效学实验。以下药效试验所用本发明药物组为依实施例6制备的颗粒剂；阳性对照药依申请号为CN200610114397.2的方法制得的颗粒剂-鹿角胶42g、紫草210g、熟地黄210g、瓜蒌210g、鳖甲(醋制)105g、附子(制)56g、肉桂70g、延胡索(醋制)70g、全蝎42g——以上九味,鳖甲加水煎煮l小时后,加入熟地黄、瓜蒌、附子煎煮2小时，滤过，药渣再加水煎煮1.5小时，合并煎液，滤过，滤液备用，肉桂提取挥发油，蒸馏后的水液与上述滤液合并，浓縮至相对密度为1.2(Tl.35(8(rC)的稠膏。紫草、全蝎和延胡索粉碎成细粉，备用。鹿角胶胶烊化后，加入上述稠膏内，混匀。取稠膏，和上述紫草等细粉，喷入挥发油，然后按照中药常规制备方法制成颗粒剂。一、对乳腺增生的治疗和抑制作用的实验研究1材料和方法1.1实验动物实验用雌性成年健康未孕大鼠70只，体重190230g，在同一环境下，用固定配方饲料喂养。1.2实验药物苯甲酸雌二醇注射液(上海通用药业股份有限公司生产，批号060102)。1.3实验方法实验大鼠随机分4组。空白对照组共10只，不给任何药物；模型组共20只，肌内注射苯甲酸雌二醇O.13mg/次，隔日一次，共30d，总剂量为1.95mg/只；第3、4组为治疗组各20只，雌激素用法同上，并分别灌服本发明药物组、阳性对照药溶液，每只0.1g/次，每日一次，共30d，每只灌服2ml。2实验结果2.1大鼠乳房大小测定标准大鼠正常乳房直径〈0.3cm。I度增大乳房直径0.30.49cm;II度增大乳房直径0.50.69cm;III度增大乳房直径0.7cm以上，结果见表16表16三组大白鼠乳房大小比较<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>正常对照组10(100)10注与模型组比较，*P〈0.05;与阳性对照药比较※户〈0.05从表16中看出，对照组乳房大小正常，模型组中11度增大者多达65%，而本发明药物组、阳性对照药组多数恢复正常，n度增大者仅占5%，经统计学处理两组差异有显著性(尸<0.05)。本发明药物组正常大小者占75%，阳性对照药组正常大小者占60%，经统计学处理两组差异有显著性(户〈0.05)。2.2病理组织变化观察以上4组动物在实验30d后处死，测量乳腺体积，解剖取一对乳腺，用10%甲醇固定，石蜡包埋，组织切片，H.E染色，光镜观察乳腺导管管腔、导管上皮、乳腺腺泡数、小叶内腺泡数。镜下可见对照组乳腺组织切片正常。模型组乳腺组织切片可见小叶内腺管数目明显增多，腺管上皮细胞增生呈多层，形成乳头状突入管腔，局部可见淋巴细胞浸润。本发明药物组、阳性对照药组组织切片可见乳腺腺泡数及小叶内腺泡数明显减少，乳腺组织基本正常，仅见腺管有扩张。通过动物实验证明本药物组合物对乳腺增生有明显的治疗作用。二、对小鼠乳腺癌抑瘤、抗转移作用的实验研究1材料与方法1.1材料1.1.1药品来源环磷酰胺(CTX)针剂，为江苏恒瑞医药股份有限公司生产，200mg/支，生理盐水(NS)由上海长征富民药业有限公司生产。1.1.2实验动物津白II号小鼠，68周龄，雌性，体重20g左右。1.1.3MA891瘤株由中国医学科学院肿瘤研究所提供。1.2方法1.2.1小鼠移植性乳腺癌模型的建立TA2MA2891原为一只348日龄雌性津白II型小鼠自发乳腺肿物，经同源雌性小鼠反复传代，获得高自发肺转移模型，病理证实为小鼠乳腺癌Dunn类B型。将对数生长期的小鼠乳腺癌细胞MA891以2X107只接种于津白II号小鼠右侧腋窝皮下。1.2.2实验治疗将接种后的津白II号小鼠随机分为5组，每组10只，即生理盐水(NS)组为对照组，CTX组、本发明药物组、阳性对照药、CTX+本发明药物组为治疗组。接种后第2天给药，连续治疗21天。①CTX组CTX20mg/kg，隔日l次腹腔注射；②本发明药物组、阳性对照药每只O.lg/次，每日l次灌胃；③CTX+本发明药物组方法同CTX组和本药物组合物组；④NS组灌胃，每次0.5ml，每日1次。1.3观察指标1.3.1观察抑瘤率小鼠处死后，剥离肿瘤称重，观察肿瘤的抑制率。抑瘤率=(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重。1.3.2肺转移抑制率计数肺内转移结节，观察肺转移抑制率。转移抑制率=(对照组平均肺转移结节-治疗组平均肺转移结节)/对照组平均肺转移结节。1.3.3脾脏重量及脾脏指数取脾脏称重，脾脏指数=脾重(g)/每10g小鼠重量。1.4统计方法采用SPSS810统计软件，使用单因素方差分析(9检验)，以,〈0.05为有统计学意义。2结果2.1本药物组合物对肿瘤的抑制情况，见表17。表17本药物组合物对津白n号小鼠肿瘤抑制率(/7=40)组别只数肿瘤重量(g)肿瘤抑制率(％)CTX组100.95±0.5172.14%*本发明药物组102.21±1.2035.19%*阳性对照药102.47±1.2427.57%*CTX+本发明药物组100.89±0.4673.90%*NS组103.41±1.200%注与生理盐水组比较，*尸〈0.05从上表可以看出，CTX组、本发明药物组、阳性对照药、CTX+本发明药物组均有显著的抑瘤效果，其中CTX+本发明药物组效果最好，抑瘤率为73.90%;CTX组次之，抑瘤率72.14%，本发明药物组抑瘤率35.19%，阳性对照药组抑瘤率27.57%，本发明药物组优于阳性对照药。2.2本药物组合物对肺转移的抑制率，见表18。表18本药物组合物对津白II号小鼠肺转移抑制率(/7=40)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注与生理盐水组比较，*尸<0.05，与阳性对照药组比较※尸<0.05从表2可以看出，除NS组外其余各组均有很好的抑瘤效果，CTX+本发明药物组抗肿瘤转移效果最好，肺转移抑制率56.91%;本发明药物组肺转移抑制率44.68%;阳性对照药组肺转移抑制率23.67%CTX组肺转移抑制率38.03%。本药物组合物组对肺转移抑制效果较阳性对照药组显著。2.3本药物组合物对脾脏重量的影响，见表19。表19本药物组合物对津白II号小鼠脾脏的影响("=40)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注与NS组比较，*,〈0.05;与阳性对照药组比较，A尸〈0.05表3结果表明本药物组合物组可以明显增加脾脏重量，CTX组、CTX+本发明药物组与^组比较，尸〈0.05脾重明显减轻，尸〈0.05;本发明药物组、阳性对照药组与NS组比较，尸<0.05脾重明显增加；本发明药物组与阳性对照药组比较，A尸〈0.05本试验结果显示，本药物组合物对肿瘤有一定的抑制作用，其抗肺转移效果较好，其中CTX+本药物组合物组抑瘤及抗转移效果最好，说明本药物组合物对化疗药物有减毒增效作用。脾脏是重要的免疫器官，本药物组合物组脾脏重量明显增加，表明本药物组合物具有增强免疫功能的作用，且本发明药物优于阳性对照药，进一步证明了本发明工艺、处方用量的科学性。实验例4.急性、长期毒性试验1、急性毒性试验选用昆明种小鼠随机分组，每组10只，每只每天灌胃根据实施例6制备的本发明药物60g/kg(按体表面积折算成相当于成人用量的30倍)，连续灌胃4周，无l只动物死亡，亦未能检查，以及剖取心肝脾肺肾光学显微镜病理形态学检査，均未见异常。2、长期毒性试验根据实施例8制备的本发明药物2g/kg、10g/kg、100g/kg给大鼠连续灌胃给药3个月，动物的皮毛、肤色、摄食、活动、尿、便等均无异常动物的血常规、肝、肾功能等血液生化指标和动物的主要脏器指数均在正常范围，且正常动力无差异病理组织学检査表明，心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、气管、睾丸、卵巢等重要脏器无病理改变。停药两周后检査以上各项指标均无明显毒性反应，表明无蓄积毒性。实验目的本试验观察本发明药物灌哺乳动物给药大鼠的长期毒性，以了解口服给药的安全性。动物清洁级wistar种大鼠60只，体重为100-110g，由卫生部药品生物制品检定所提供。药品(检品)依实施例6所制药品，批号05091201，由北京亚东生物制药有限公司提供，用时以0.5%甲基纤维素钠配制成所需浓度的均匀混悬液。仪器OLYMPUSBH-2型显微镜EncorelI型全自动生化仪等。方法与结果清洁级wistar种大鼠60只，按体重随机分为三组，每组20只，雌雄各半，①对照组②本发明药物90g/kg组③本发明药物180g/kg组，两给药组的用量按公斤体重折合，分别相当于临床日用量的30倍和60倍。各组动物均于上午灌胃给药2ml/100g，连续给药2个月。(1)一般观察观察动物的行为活动、尿、便和食量。给药前和给药后每周称体重一次，直至实验结束。结果表明，给药期间动物的摄食、活动及排泄情况正常，体重增长情况良好，结果见表20及表21。_表20本发明药物对雄性大鼠体重增长的影响(n=10，1T土SDg)本发明药物本发明药物对昭组_^_90g/kg组_180g/kg组给药前113.2±11.2116.1±9.9118.4±9.8一周145.8±10.9148.5±11.5153.1±11.8二周191.8±11.8196.8±12.2194.8±14.5<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>(2)血常检査给药结束后各组大鼠禁食不禁水18小时，剪尾取血，以直接计数法测红细胞、白细胞、血红蛋白、血小板，瑞氏染色法进行白细胞分类计数，结果见表22及表23。表22本发明药物对大鼠血象的影响(n=20，X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>BPC(lOVmm3)173.75±69.57195.75±52.13195.46±13.64Hb(g%)17.75±0.8616.01±0.7816.15±1.63_表23本发明药物对大鼠白细胞分类的影响(n=20，X±SD)__对照组本发明药物90g/kg组本发明药物180g/kg组NL中性(y。)14.2±4.110.9±6.210.9±5.9Lgm淋巴(％)86.5±3.586.8±5.987.9士6.0Mon单核(％)1.6土1.42.0±0.91.7±1.4Eos嗜酸(％)0.34±0.82_0.07±0.26_0.09±0.24结果表明，对照组及各给药组的红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(BPC)总数和白细胞分类均在正常值范围内，给药组和对照组比较无统计学差异，说明本发明药物对大鼠骨髓无抑制现象。实验例5.临床试验1.病例筛选82例均为女性，年龄3569岁，其中4055岁68例，占8219%，平均年龄48.2岁，未婚3例，已婚未生育2例，有人流史71例，月经紊乱59例，合并子宫肌瘤39例，伴有更年期症候群38例。病例选择①年龄多在40岁以上。②肿块大而硬，属重度乳腺增生病或可疑乳癌者。③久治不愈或反复发作者。④有肾阳不足表现腰酸乏力，全身怕冷，四肢冰凉，夜尿频频，性冷无欲等。⑤手诊肾区晦暗。有以上任何一条即可入选，但多数病例兼有2条以上。2.疗效评价按照国际抗癌联盟(UICC)的实体瘤通用疗效评定标准进行疗效评估。病理学完全缓解(pCR):手术标本中已无浸润癌细胞；临床完全缓解(cCR):临床检查肿瘤完全消失；临床部分缓解(CPR):肿瘤最大直径与其最大垂直径的乘积减少>50%以上；病情稳定(SD):肿瘤最大直径与肿瘤最大垂直径的乘积减少<50%，或增加〈25%;疾病进展(PD):肿瘤最大直径与其最大垂直径的乘积增加>25%。3.治疗方法用法与剂量开水冲服根据实施例6制备的本发明药物，1次12袋，1日23次。每月服药20d左右，经期停药，3个月经周期为l个疗程。服药反应服药l周后多数人自觉精神好转，体力增加，不怕冷，手足转温。若全身有微微热感，口干欲饮的感觉为剂量合适，有这种服药反应者疗效好且起效快。但有人没有任何反应，只按常规服药即可，不必追求服药反应。服药时间最短1.5个月，最长10个月，平均服药4.2个月，大多数病例服药12个疗程。4.治疗结果按照国际抗癌联盟(uicc)的实体瘤通用疗效评定标准进行疗效评估。凡不连续服药，兼用其它药物或疗法者，病例记录不全者不在统计之例。全组有效率为83.5%，其中完全缓解率为40.6%，部分缓解率为42.9%。下述实施例均能实现以上发明效果实施例l.紫草87.5g熟地175g附子(制)45.8g延胡索58.3g肉桂58.3g瓜蒌175g鳖甲87.5g全蝎35g鹿角胶5g取上述紫草取紫草二分之一处方量，瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮1-3次，第一次1-3小时，第二次1-2小时，合并煎液，浓縮至相对密度为1.101.40，加入上述细粉、常规辅料，混匀，得药物混合物；鹿角胶烊化后加入上述混合物中，依照本领域常规技术制成临床接受的制剂，如胶囊剂、片剂、颗粒剂、软胶囊、丸剂。实施例2.紫草87.5g熟地175g附子(制)45.8g延胡索58.3g肉桂58.3g瓜蒌175g鳖甲87.5g全蝎35g鹿角胶5g蔗糖粉300g糊精300g取上述紫草二分之一处方量，瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮l-3次，第一次l-3小时，第二次l-2小时，合并煎液，浓縮至相对密度为1.101.40，加入上述细粉、蔗糖粉、糊精，混匀，得药物混合物；鹿角胶烊化后加入上述混合物中，制成颗粒，干燥，制成1000g，即得。实施例3.片剂紫草50g熟地250g附子(制)30g延胡索80g肉桂40g瓜蒌250g鳖甲50g全蝎50g鹿角胶2g羧甲基纤维素纳20g取上述紫草二分之一处方量，瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮2次第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.281.30，加入上述细粉，羧甲基纤维素纳20g，混匀，得药物混合物；鹿角胶烊化后加入上述混合物中，制成颗粒，干燥，整粒，压片，包衣，制成1000片，即得。实施例4.胶囊剂紫草60g熟地200g附子(制)35g延胡索70g肉桂45g瓜蒌200g鳖甲60g全蝎45g鹿角胶3g蔗糖粉50g糊精50g取上述紫草二分之一处方量、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮2次第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.281.30，加入上述粉碎粉，蔗糖粉、糊精，混匀，得药物混合物；鹿角胶烊化后加入上述混合物中，制粒、装胶囊，制成1000粒，即得。实施例5.软胶囊紫草100g熟地130g附子(制)35g延胡索70g肉桂45g瓜蒌200g鳖甲60g全蝎45g鹿角胶3g取上述紫草二分之一处方量、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮2次第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.281.30，减压干燥，粉碎，与细粉混匀，加入植物油适量，搅匀，制成软胶囊600粒，即得。实施例6.颗粒剂紫草87.5g熟地175g附子(制)45.8g延胡索58.3g肉桂58.3g瓜蒌175g鳖甲87.5g全蝎35g鹿角胶5g取上述紫草取紫草二分之一处方量、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮2次第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，浓縮至相对密度为1.28~1.30，加入上述细粉，蔗糖粉300g、糊精300g，混匀，得药物混合物；鹿角胶烊化后加入上述混合物中，制成颗粒，干燥，制成1000g,即得。功能主治温阳补肾，活血化瘀，软坚散结。用于肾虚型乳腺增生。用法用量开水冲服，一次10g，一日3次。规格每袋装10g实施例7.丸剂紫草87.5g熟地175g附子(制)45.8g延胡索58.3g肉桂58.3g瓜蒌175g鳖甲87.5g全蝎35g鹿角胶5g取上述紫草取紫草二分之一处方量、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，得药物细粉，备用；其余药味加水煎煮2次第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，浓縮至相对密度1.10，6(TC减压干燥，粉碎，与上述细粉混匀以3y。PVP的乙醇溶液为粘合剂制成1000丸，即得。权利要求1.一种治疗乳腺增生、乳腺癌的中药组合物，该组合物是以下列重量份的原料制成的紫草50-150重量份熟地150-250重量份附子(制)30-60重量份延胡索40-80重量份肉桂40-80重量份瓜蒌150-250重量份鳖甲50-150重量份全蝎10-50重量份鹿角胶2-10重量份其特征是该组和物是按下列方法制成的1)取上述紫草重量份的一半、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，备用；2)其余药味加水煎煮1-3次，第一次1-3小时，第二次1-2小时，合并煎液，浓缩至55℃下相对密度为1.10～1.40的浸膏；3)将步骤1)中细粉与步骤2)中浸膏混合加入常规辅料，混匀，得药物混合物；4)鹿角胶烊化后加入上述混合物中，依照本领域常规技术制成临床接受的制剂，如胶囊剂、片剂、颗粒剂、软胶囊、丸剂。2.如权力要求1所述的颗粒剂，该颗粒剂是以下列重量份的原料制成的紫草87.5重量份熟地175重量份附子(制)45.8重量份延胡索58.3重量份肉桂58.3重量份瓜蒌175重量份鳖甲87.5重量份全蝎35重量份鹿角胶5重量份其特征是该颗粒剂是按下列方法制成的1)取上述紫草重量份的一半、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，备用；2)其余药味加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，浓縮至55'C下相对密度为1.281.30的浸膏；3)将步骤l)中细粉与步骤2)中浸膏混合，加入蔗糖粉300重量份、糊精300重量份，混匀，得药物混合物；4)鹿角胶烊化后加入上述混合物中，制成颗粒，干燥，制成1000重量份，即得。3.如权力要求1所述的颗粒剂的制备方法，其特征是步骤3)中所用辅料为蔗糖粉和糊精，其重量比为h1。全文摘要本发明提供了治疗乳腺增生、乳腺癌的中药组合物及其制备方法。本发明的药物组合物原料药组成为紫草、熟地、附子(制)、延胡索、肉桂、瓜蒌、鳖甲、全蝎、鹿角胶，其制备方法为部分重量份的紫草、瓜蒌、鳖甲、全蝎粉碎成细粉，粉碎粉备用；剩余紫草、熟地、附子(制)、延胡索、肉桂、鹿角胶加水煎煮，合并煎液，浓缩至相对密度为1.28～1.30，加入上述粉碎粉、辅料，混匀，鹿角胶烊化后加混合物中，制成临床需要的各种制剂。文档编号A61K9/16GK101371890SQ20071012066公开日2009年2月25日申请日期2007年8月23日优先权日2007年8月23日发明者付建家,付立家申请人:北京亚东生物制药有限公司