一种抑菌护理用品的制作方法

专利名称：：一种抑菌护理用品的制作方法一种抑菌护理用品发明领域本发明涉及一种抑菌组合物，组成该抑菌组合物的物质，以及该抑菌组合物的应用。尤其是所述的抑菌组合物含有羧甲基壳聚糖、水溶性壳聚糖和壳寡糖。发明背景阴道炎、宫颈炎、盆腔炎是妇女的常见疾病，同时，妇女阴部及阴道由于生理结构上的特殊原因，女性阴部及阴道极易感染金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及霉菌、铜绿假单胞菌及绿脓杆菌、大肠杆菌、酵母菌、滴虫等，因此阴道炎、宫颈炎、盆腔炎等是妇女阴部及阴道的常见问题，现有技术对这些问题的相关治疗有釆用抗生素等其他药物和其他剂型的，但使用抗生素会对肝、肾以及相关器官有一定的毒副作用，还会影响阴道正常有益菌群，从而造成对阴道自洁及防御能力的破坏，也易引起阴道、，尿道、肛门的交叉感染。目前，虽然也出现了很多用于阴道抑菌和治疗阴道炎、宫颈炎症等妇科阴部疾病的药物，但其剂型均很传统，显效和作用不够直接，大多数药物功效单一，外用药物多以洗液为主，且疗效不是很理想，而作为妇科炎症的阴道内用药凝胶剂目前尚属新形剂型，仍有许多问题没有解决。壳聚糖(chitosan),又名聚氨基葡萄糖或几丁聚糖，是甲壳素脱去乙酰基的高分子直链型多糖。甲壳素是一种夭然高分子化合物，在自然界中的产量仅次于纤维素，是地球上数量最大的含氮有机化合物。甲壳素的学名是e(1，4)-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡萄糖，由N-乙酰氨基葡萄糖以e-l，4糖苷键缩合而成，广泛存在于虾、蟹的甲壳、昆虫的甲壳、真菌(酵母、霉菌)的细胞壁和藻类的细胞壁中，其结构式见图1。甲壳素在自然界经受降解和脱乙酰基过程，产生不同分子量的甲壳素及不同分子量、不同脱乙酰度的壳聚糖，其结构式见图2。由于脱乙酰化反应破坏了甲壳素分子结构的规整性，因此，壳聚糖溶解性能较甲壳素大为改善，化学性质也较为活泼。同时由于壳聚糖分子中存在游离氨基及活性羟基，反应时取代基团可进入O-位和N-位，因此，相应的产物有O-羧甲基壳聚糖，N-羧甲基壳聚糖和N,0-羧甲基壳聚糖(Muzzarelli，1988)。壳聚糖的主要生理功能包括降脂和降胆固醇；抗微生物活性；提高机体免疫能力；抗肿瘤；降血脂；降血压等。对于抗微生物活性，现有文献报道包括王光华等(1992)发现壳聚糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌等常见食物中毒菌有较强的抑制作用。其中0-羧甲基壳聚糖对金黄色葡萄球菌有较好的抑制作用，而对大肠杆菌的抑菌作用则较差。随着浓度的增大，0-羧甲基壳聚糖的抗菌活性明显增强，当浓度为0.5%时，对金黄色葡萄球菌的抑制率达到100%;当浓度为1%时，几乎能完全抑制细菌的生长，且与分子量之间的关系十分密切，随着分子量的降低，抑菌效果显著提高，当分子量大于10000时，不具备抑菌功能，而当分子量小于5000时，抑菌活性明显增强(陈凌云等，2000)。No等(2002)研究发现，壳聚糖对革兰氏阳性菌具有更强的抗菌作用，其最低抑菌浓度从0.05%至0.1%以上，且也与分子量有关。壳聚糖的抗菌活性还与其不同形式有关。Kim等(2003)比较了天然壳聚糖、脂酶降解壳聚糖和O-羧甲基(O-CM)壳聚糖的抑菌效果，发现天然壳聚糖的抑菌效果优于脂酶降解壳聚糖，而来源于脂酶降解的O-CM壳聚糖的抑菌效果又优于来源于天然O-CM壳聚糖。羧甲基壳聚糖的抑菌作用可能有以下两种机理一是壳聚糖通过吸附在细胞表面形成一层高分子膜，阻止营养物质向细胞内的运输，或吸附壳聚糖在细胞膜表面，改变了细胞膜的选择透过性，致使细胞质流失，细胞质壁分离，从而起到抑菌杀菌作用。二是带正电荷的壳聚糖渗透进入细胞体内，吸附细胞体内带有电荷的细胞质，发生絮凝作用，扰乱细胞正常的生理活动，或阻断细菌体内DNA的转录，从而抑制细菌的繁殖(陈凌云等，2000)。考虑到壳聚糖是一种天然产物，对人体无毒、无刺激，同时具有抑菌作用，本发明将其加工制为可抑菌护理用品。壳聚糖直接用于抑菌，仍存在最小抑菌浓度(MIC)过高的问题，同时存在制剂困难的问题。本发明釆用含有羧甲基壳聚糖、水溶性壳聚糖和壳寡糖的组合物可以很好的解决上述问题。附图l是甲壳素的结构式；附图2是壳聚糖的结构式。发明目的本发明的目的在于提供一种不添加激素和抗生素类药物、无毒副作用、疗效确切，可用于抑菌和治疗妇科炎症的外用抑菌组合物。本发明是通过以下技术方案实现的。以重量百分比计算，组合物含有水溶性壳聚糖占10%--40%，羧甲基壳聚糖不低于50%,壳寡糖占1%—20%。组合物最终在水溶液中的重量百分比为0.5%—5%。1)称取羧甲基壳聚糖加于纯化水中，搅拌5小时，至全部溶解;2)称取水溶性壳聚糖和壳寡糖加入到纯化水中，搅拌5小时，至全部溶解；3)将配制的2步溶液缓慢加入1步溶液中，同时搅拌，避免产生絮状物；300目筛过滤，检查澄明度；分装。优选的技术方案为以重量百分比计算，组合物含有水溶性壳聚糖占20%—30%，羧甲基壳聚糖占60%—70%，壳寡糖占5%—15%。组合物最终在水溶液中的重量百分比为2%--4%。最优选的技术方案为以重量百分比计算，组合物含有水溶性壳聚糖占25%,羧甲基壳聚糖占65%，壳寡糖占10%。组合物最终在水溶液中的重量百分比为3%。如本文所用的，本文中的术语具有以下含义"水溶性壳聚糖"是指壳聚糖经过物理和/或化学处理后，具有良好的水溶性的壳聚糖。目前水溶性壳聚糖的制备主要有3种方法①在温和均相条件下，控制壳聚糖的脱乙酰度在50%左右制备水溶性壳聚糖；②利用甲壳质、壳聚糖分子结构中的轻基和胺基的反应活性，在其分子主链上引入亲水基团，得到水溶性的衍生物团；③降解壳聚糖得到低分子质量的水溶性产物，可分为酸降解法、氧化降解法和酶降解法3大类团。氧化降解法是目前研究的比较多的一种方法，主要有HA法、H202-HC1法、H202—NaCUi、C102法等。水溶性壳聚糖可通过现有技术制备，或从巿场购买。例如可利用中国专利申请CN1225923、CN1283634、CN1283635、CN1554267、CN1563106、CN1803849;以及薛行华等，水溶性低分子壳聚糖的制备，热带作物学报，2005年04期、况伟等，水溶性壳聚糖的制备研究，饲料工业，2005年14期等文献公开的方法制备。在本发明中，优选通过将壳聚糖在1°/。一2%的醋酸溶液处理24小时后，制备水溶性克聚糖。术语"羧甲基壳聚糖"是指壳聚糖经过羧甲基化得到的水溶性产物。由于壳聚糖分子中存在游离氨基，反应时取代基团可进入O和N，则相应的产物有0-羧甲基壳聚糖、N-羧甲基壳聚搪和N、0-羧甲基壳聚糖。若甲壳素直接进行梭甲基化，则产物为羧甲基甲壳素。壳聚糖在羟基上的羧甲基化反应类似于羧甲基纤维素的制备。壳聚糖用浓氢氧化钠溶液在低温下碱化，与氯乙酸进行羧甲基化反应，得到O-CM壳聚糖。若在室温下进行碱化反应，则产物为()-CM壳聚糖。若加热到6(TC，可得到N，0-CM壳聚糖。各种产物的生成，温度的影响是重要的。由于壳聚糖不溶于碱性溶液，使该反应处于多相体系中。另一类反应是在酸性介质中进行，采用乙醛酸作为梭甲基化试剂，可使反应只发生在N上，经还原后可得到N-CM壳聚糖。利用该反应将0-CM壳聚糖再与乙醛酸缩合还原后也可得到N，0-CM壳聚糖，该反应的特点是取代有选择性，不需要加热，可在水溶液中进行.且为均相体系。羧甲基壳聚糖可通过现有技术制备，或从巿场购买。例如可利用中国专利申请CN108064C、CN1329095、CN02110793、CN1431229、CN1594367,以及陈忻等，N，0-羧甲基壳聚糖制备条件及抗突变性能的研究，食品研究与开发:，2000年05期、杨继生等，羧甲基壳聚糖(CMCH)在化妆品中的应用研究，精细化工，1997年04期。术语"壳寡糖"，又称寡聚氨基葡萄糖、甲壳低聚糖，由甲壳质(几丁质)脱乙酰化的产物壳聚糖降解获得，是由2-10个氨基葡萄糖通过P-1，4糖苷键连接而成的低聚糖。它也是自然界中大量存在的天然碱性氨基多糖，水溶性好，易被动物体吸收。目前壳聚糖的主要制备方法是化学法、物理法和生物法。化学法主要有酸水解法、氧化法、超临界流体法、配位降解法等。物理法如微波法、超声波法、光降解法、Y射线法等。生物法主要有酶法降解、反应器和酶降解，还有在人体中降解，糖基转移法等。壳寡糖可通过现有技术制备，或从巿场购买。例如可利用中国专利申请CN1302809、CN1396185、CN1401652、CN1772915、CN1654483、CN1746193、CN1803849、CN1680569、CN1884308、CN1944466、CN1935887;以及陈海燕等，壳寡糖的制备及其生理功能，中国饲料，2007年04期、纪莹等，壳寡糖的制备及组分分析，中国现代应用药学，2003年03期。本发明的组合物中还可以含有其它抑菌药物，例如药物、植物提取物等，包括，但不限于，例如青霉素、链霉素、克霉唑、头孢曲松、磺胺嘧啶、呋喃唑啉、氟哌酸、酮康唑、阿齐霉素、庆大霉素、罗红霉素、环丙沙星、洁霉素、万古霉素等。优选本发明组合物含有克霉唑。本文中所引用专利文献和非专利文献，均以其全部内容在此引入作为参考。至于可用于本发明抑菌组合物中的溶剂而言，可以使用不会对该活性组分产生不利影响的任何溶剂，例如水、醇(例如甲醇、乙醇、乙二醇、丙二醇、甘油等等)、酮(例如，丙酮、甲基乙基酮等等)、醚(例如四氢呋喃、二甘醇二甲醚等等)、脂族烃(例如，己烷、煤油等等)、芳族烃(例如，苯、甲苯、二甲苯、甲基萘等等)、卤化烃(例如，氨仿、四氯化碳等等)、酸性酰胺(例如，二甲基甲酰胺等等)、酯(例如，醋酸甲酯、醋酸乙酯、醋酸丁酯、脂肪酸甘油酯等等)、和硝脑(例如，乙腈等等)。可以单独使用这些溶剂或联合使用两或多种溶剂.至于可用于本发明抑菌组合物中的分散剂而言，可以使用任何不会对该活性成分产生不利影响的分散荆，例如，一种表面活性剂。至于该类表面活性剂而言，可以使用皂类、高级醇硫酸酯、烷基磺酸，垸基烯丙基磺酸，季铵盐、烷氧基胺、脂肪酸酯、聚醚化合物、脱水山梨醇化合物等等。这些分散剂可以单独使用或可以两或多种联合使用。至于可用于本发明抗茵组合物中的载体而言，可以使用任何对该活性成分没有不利影响的分散荆，例如粘土类(例如，高岭土、皂土、酸性粘土等等)、滑石粉类(例如，滑石粉、寿山石粉等等)、硅石类(例如，硅藻土、硅酐、云母粉等等)、矾土、硫粉、活性炭等等.这些载体可以单独使用或可以两或多种联合使用。本发明任意的组合物，均可与药学上可接受的酸或碱反应，形成相应的盐。优选的与无机碱形成盐的例子包括与碱金属，如钠、钾等形成的盐，与碱土金属，如钙、镁等形成的盐，及与铝、铵形成的盐。优选与有机碱形成的盐的例子包括三甲胺、三乙胺、吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、N，N-二苄基乙烯基二胺等所形成的盐。优选的与无机盐形成盐的例子包括与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等所形成的盐。优选与与有机酸所形成盐的例子包括与甲酸、乙酸、三氯乙酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、种檬酸、琥珀酸、苹果酸、甲磺酸、苯磺酸、P-甲基苯磺酸等所形成的盐。本发明使用的术语"药物可接受载体"指在制药上使用的促进该活性成分加工成制剂的赋型齐j或辅助剂。该制剂可通过口服、肌肉内、腹腔内、皮下或静脉内给药。优选地，所述制剂，特别是那些诸如片剂、糖锭剂、栓剂和胶囊的制齐j以及适合的溶液，包含有重量百分比约为0.01—99.99%的活性成分以及赋性剂和/或辅助剂。本发明使用的适合的赋性剂包括诸如多糖的填料，例如乳糖或蔗糖、甘露醇或山梨醇、纤维素衍生物、硫酸镁、诸如磷酸三钩或磷酸氢钩的磷酸钙，以及诸如淀粉糊的结合剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、水稻淀粉、土豆淀粉、明胶、黄芪胶和/或聚乙烯吡咯烷酮。本发明使用的适合的辅助剂包括流体调节剂和润滑剂，例如滑石、硅石、硬脂酸或其盐(诸如硬脂酸镁)和/或聚乙二醇。对糖衣核心提供适合的包被，如果需要的话，其可以耐受胃液。出于该目的，可以釆用浓缩的多糖溶液，可以含有任意的阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及适合的有机溶剂或溶剂混合物。为了生产耐受胃液的包被，即肠溶衣，釆用和诸如乙酰纤维素邻苯二酸酯或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的适合纤维素制剂。可向片剂或糖衣包被中添加染料或色素。本发明中的组合物可以组方成诸如静脉内、皮下和肌肉内注射的注射方式，栓剂或舌下片剂的形式。釆用本领域中普遍接受的方法来制备例如注射剂、栓剂、舌下片剂、片剂和胶囊的剂型的药物制剂。在制备注射剂时，如果需要，可将PH调节剂、缓冲剂、增溶剂、悬浮剂、稳定剂以及防腐剂掺入所述的有效成份中，随后根据常规方法进行静脉内、皮下或肌肉内注射剂的制备。增溶剂的例子包括聚氧化乙烯氢化蓖麻油、聚山梨醇酯80、烟酰胺、聚氧化乙烯脱水山梨醇半月桂酸酯、聚乙二醇和蓖麻油脂肪酸乙酯。悬浮剂的例子包括甲基纤维素、聚山梨醇酯80、羟乙基纤维素、阿拉伯胶、黄芪胶粉末、羧甲基纤维素钠和聚氧化乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯。稳定剂的例子包括亚硫酸钠、焦亚硫酸钠和酯，防腐剂的例子包P-羟苯酸甲酯、P—羟苯酸乙酯、山梨酸、苯酚、甲酚和氯甲酚。在本发明中，当活性化合物或组合物口服给药时，可以釆用片剂或胶囊、或水溶液或悬浮液的形式。当釆用片剂的时候，通常使用的载体包括乳糖、甘露醇和玉米淀粉，且通常加入诸如硬脂酸镁的润滑剂。如果是釆用胶囊形式，活性化合物在硬明胶胶囊中以干燥的形式给药，或在适合的凝胶或液态载体，例如液体聚乙二醇或交叉胶中，在软明胶胶囊中的形式给药。当需要C:服水性悬浮液时，可将活性成分与乳化剂和悬浮剂混合。如果需要的话，还可以添加某些甜味剂和/或调味剂。优选本发明的组合物以水膜剂的形式出现。更优选本发明的组合物在制剂中的重量百分比为2%—4%。更优选本发明的组合物制成的液体，与用水溶性壳聚糖制成的灭菌无纺布组成试剂盒。使用时，将液体制剂倒在灭菌无纺布上，然后，置于施用处。考虑到本发明组合物具有抑菌活性，其可以制成和/或用于具有抑菌活性的药物制剂、医疗器械、护肤用品中。下面结合实施例描述本发明，这些实施例近视对本申请的进一步说明，但这些实施例不对本发明的保护范围起任何限定作用。当参考具体实施方案来描述本发明时，显而易见的是本领域技术人员在不偏离本发明的精神和范围下，将对这些实施方案进行多种变化和修饰。实施例1.仅含有羧甲基壳聚糖、水溶性壳聚糖和壳寡糖的组合物。称取1.95公斤羧甲基壳聚糖加入65公斤纯化水，搅拌5小时，至全部溶解；称取O.75公斤水溶性壳聚糖和0.3公斤壳寡糖加入35公斤纯化水，搅拌5小时，至全部溶解；将第2步溶液缓慢加入第1步溶液中，同时搅拌，避免产生絮状物；300目筛过滤，检查澄明度；分装。2.含有羧甲基壳聚糖、水溶性壳聚糖、壳寡糖和克霉唑的组合物称取l.95公斤羧甲基亮聚糖和5公斤克霉唑加入65公斤纯化水，搅拌5小时，至全部溶解；其它步骤同上。3.实施例l组合物的抑菌效果试验。使用白色念株菌(ATCC10231)作为试验菌株。0。03mol/i磷酸盐缓冲液作为阴性对照。依照GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C进行。对金黄色葡萄球菌的抑菌效果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注对照组平均菌落数及范围4.80x104(2.OOx104-7.75x10"cfu/ml;阴性对照无菌生长。对大肠杆菌的抑菌效果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注对照组平均菌落数及范围6.75x104(5.50x104-7.55x104)cfu/ml;阴性对照无菌生长。对白色念株菌的抑菌效果试验序号作用不同时间(min)的抑菌率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注对照组平均菌落数及范围2.16x104(1.44x104-3.20xio4)cfu/ml;阴性对照无菌生长。结论本发明的组合物与金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念株菌分别作用10min，其平均抑菌率为100%,该组合物具有较强的抑菌作用。4.效果对比试验分为四组a仅含实施例1中羧甲基壳聚糖的洗剂、b仅含实施例1中水溶性壳聚糖的洗剂、c仅含实施例1中壳寡糖的洗剂、d实施例l的洗剂，e实施例2的洗剂、f仅实施例2中的克霉唑的洗剂将以上五种组合物分别提供给妇科阴道炎患者使用，有效率分别为50%、40%、53%、70%、85%、72%。这证明本发明的组合物具有协同作用。权利要求1、一种抑菌组合物，其特征在于含有羧甲基壳聚糖、水溶性壳聚糖和壳寡糖。2、如权利要求1所述的组合物，其中以重量百分比计算，含有水溶性壳聚糖占10%—40%,羧甲基壳聚糖不低于50%，壳寡糖占1%--20%;组合物最终为水溶液形式，并且在水溶液中的重量百分比为0.5°/—5%。3、如权利要求2所述的组合物，其中以重量百分比计算，含有水溶性壳聚糖占20%—30%,羧甲基壳聚糖占60%—70%,壳寡糖占5%--15%;组合物最终为水溶液形式，并且在水溶液中的重量百分比为2/「4%。4、如权利要求3所述的组合物，其中以重量百分比计算，含有水溶性壳聚糖占25%,羧甲基壳聚糖占65%,壳寡糖占10%;组合物最终为水溶液形式，并且在水溶液中的重量百分比为3%。5、一种试剂盒，由如权利要求l-4任意一项所述的抑菌组合物和无纺布组成，其中无纺布用壳聚糖纤维在1%—2%的醋酸溶液处理24小时后，得到水溶性壳聚糖纤维加工制成。6、如权利要求l-4任意一项所述的抑菌组合物在制备用于抑菌的药物制剂、医疗器械、护肤用品中的用途。7、如权利要求1-4任意一项所述的抑菌组合物在制备治疗阴道炎的药物制剂中的用途。8、如权利要求l-4任意一项所述的抑菌组合物，其特征在于为膜剂。9、一种抑菌组合物，由权利权利要求1的组合物和克霉唑组成。全文摘要本发明公开了含有羧甲基壳聚糖、水溶性壳聚糖和壳寡糖的抑菌组合物，以及该组合物在具有的抑菌活性用品中的用途。文档编号A61K31/716GK101156868SQ20071012088公开日2008年4月9日申请日期2007年8月29日优先权日2007年8月29日发明者潘学理申请人:北京海利安生物科技有限公司