专利名称：：一种治疗淋症的中药组合物及其制备方法和质量控制方法
技术领域：
：本发明涉及一种治疗淋症中药组合物及其质量控制方法，特别是涉及一种治疗湿热蕴结所致淋症的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。
背景技术：
：淋病是感染淋病双球菌所引起的泌尿生殖系统的急慢性炎症。据调查,在我国性病发病率中占首位。中医学认为淋症主要是因为湿热蕴结膀胱，膀胱气化不行所致。症见小便频数短赤，欲出不出，出而不畅，欲止不尽，少腹拘急，淋沥涩痛等。常见的治疗淋症的西药虽然能较快治愈淋症的发病症状，近期效果比较好，对治疗淋症有一定作用，但是治标不治本，且长期服用对人体有一定的副作用。因此选择高效而又相对安全、质量稳定的中药来治疗淋病，己经成为各方研究的热门。
发明内容本发明目的在于提供一种治疗湿热蕴结所致淋症的中药组合物；本发明目的还在于提供一种治疗湿热蕴结所致淋症的中药组合物的制备方法。本发明目的还在于提供一种治疗湿热蕴结所致淋症的中药组合物的质量控制方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的-本发明所述的治疗淋症的中药组合物是由如下重量比的原料制成的四季红34-67.5重量份车前草88.5-135重量份本发明所述的治疗淋症的中药组合物是由如下重量比的原料制成的四季红67.5重量份车前草88.5重量份本发明所述的治疗淋症的中药组合物是由如下重量比的原料制成的-四季红34重量份车前草135重量份本发明所述中药组合物的制备方法为，将上述比例的四季红和车前草，加46倍量水逆流循环提取3-6小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮，温度是60-100。C，压力是-0.08-0.10Mpa，浓縮至50。C测定相对密度为1.101.15的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达40-70%，搅匀，静置24小时，取上清液，将沉淀加水溶解至相对密度为1.101.15，继续加乙醇使含醇量达40-70%搅匀，静置24小时，取上清液，将上清液合并，减压回收乙醇，压力是-0.08-0.10Mpa，温度是50-8(TC，浓縮至50。C测定相对密度为1.351.40的稠膏，按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、软胶囊、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。本发明所述中药组合物的制备方法为，将所述比例的四季红和车前草，5倍量水逆流循环提取5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮，温度是80。C,压力是-0.08Mpa，浓縮至5(TC测定相对密度为1.101.15的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达50%，搅匀，静置24小时，取上清液，将沉淀加水溶解至相对密度为1.101.15，继续加乙醇使含醇量达50%搅匀，静置24小时，取上清液，将上清液合并，减压回收乙醇，压力是-0.08Mpa，温度是65。C，浓縮至5(TC测定相对密度为1.351.40的稠膏，按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、软胶囊、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。本发明中药组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种鉴别(1)取本中药组合物制剂相当于原药材l-4g，加甲醇15ml，加热回流0.5-2小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液。另取四季红对照药材0.2-lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各1-10y1，分别点于同一含0.5%氢氧化钠的以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸-水(2-6:2-6:0.2-1:0.2-1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏5-15分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。(2)取本中药组合物制剂相当于原药材6-20g，加水20-60ml，加热溶解，用醋酸乙酯振摇提取l-3次，第l次10-30ml，第2次5-15ml,合并醋酸乙酯，水洗1-3次，每次5-15ml挥干，残渣加无水乙醇0.5-2ml溶解，作为供试品溶液。取车前草对照药材1-5g，用醋酸乙酯超声10-40分钟，过滤，滤液挥干，残渣加无水乙醇0.5-2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液、车前草对照药材溶液各1-10p1，分别点于同一以梭甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10-40:l)为展开剂展开,取出晾干，再展开，取出，晾干，置碘蒸气中显色，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。2)含量测定(1)照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；甲醇-(0.02%-0.8%)磷酸溶液(30-70:30-70)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥12-48小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lml含5-15ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本中药组合物制剂相当于原药材0.5-2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇一盐酸一水(3-10:0.5-2:1-3)的混合溶液5-15ml，密塞，摇匀，称定重量，于7(TC水浴中加热回流1-3小时，每20分钟振摇一次，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。领!l定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1，注入液相色谱仪，测定，即得。本中药组合物以成人每次服用量含四季红槲皮素(C15H1007)计，不得少于0.25mg。(2)照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.02mol/L磷酸二氢钠-甲醇(5-20:80-95)为流动相；检测波长为215nm。理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。Agilent1100型高效液相色谱仪;流速0.6-1.OmLmirT1;检测波长215nra;柱温20°C。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的熊果酸对照品适量，加甲醇制成每lml含5-80ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本中药组合物制剂相当于原药材1.0-5.0g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，摇匀，称定重量，超声10-40分钟，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15y1，注入液相色谱仪，测定，即得。本中药组合物的质量控制方法，其特征在于该质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种1)鉴别(1)取本中药组合物制剂相当于原药材2g，加甲醇15ml，加热回流l小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取四季红对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5u1，分别点于同一含0.5%氢氧化钠的以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸-水(4:4:0.5:0.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏IO分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本中药组合物制剂相当于原药材10g，加水40ml，加热溶解，用醋酸乙酯振摇提取2次，第1次20ml，第2次10ml，合并醋酸乙酯，水洗2次，每次10ml挥干，残渣加无水乙醇lml溶解，作为供试品溶液。取车前草对照药材2g,用醋酸乙酯超声30分钟，过滤，滤液挥干，残渣加无水乙醇lml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液、车前草对照药材溶液各2y1，分别点于同一以梭甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(20:1)为展开剂展开,取出晾干，再展开，取出，晾干，置碘蒸气中显色，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。2)含量测定(1)照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇_0.4%磷酸溶液(50:50)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lml含10ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本中药组合物制剂相当于原药材lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇一盐酸_水(7:1:2)的混合溶液10ml，密塞，摇匀，称定重量，于7(TC水浴中加热回流2小时，每20分钟振摇一次，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。本中药组合物以成人每次服用量含四季红槲皮素(C15H1()07)计，不得少于0.25mg。(2)照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；0.02mol/L磷酸二氢钠-甲醇(15:85)为流动相；检测波长为215nm。理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。AgilentIIOO型高效液相色谱仪；流速0.8mLmirf1;检测波长215nm;柱温20°C。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的熊果酸对照品适量，加甲醇制成每lml含60ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本中药组合物制剂相当于原药材2.0g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，摇匀，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10!U，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明组合物具有很好的药效，相比现有制剂表现出很好的药效；本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定方法中通过对样品、供试品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控制，并且用该方法测定的产品要相比其他方法测定的产品在药理效果上表现的更为稳定。下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例l.提取分离工艺的筛选四季红为本发明处方君药，具有清热利湿，解毒止痛，和血散淤，利尿通淋等作用。主要含有槲皮素及其甙类等黄酮类成分。故我们用槲皮素作为其有效成分的指标进行提取工艺的优选，具体方法如下1.提取浓縮工艺条件的优选以槲皮素的含量为考察指标，采用正交试验对提取浓缩工艺中加水量、煎煮时间和浓縮温度参数进行考察。具体方法如下分别称取四季红675g、车前草885g，混合，共9份。按照正交表L9(34)安排，进行正交试验，对9个样品分别进行水提、滤过、浓縮，对9个提取物中槲皮素的含量进行测定，结果换算成四季红中槲皮素的含量(mg/g)，进行方差分析，结果分别见表l、表2、表3。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>Rj0.0173330.0096670.0430000.007667SSj0.0005310細1470.0036420.000108<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结论该工艺稳定可行。2.醇沉工艺条件的优选以醇沉后浸膏得率和槲皮素的含量为考察指标，采用正交试验对药液相对醇沉时间和含醇量及醇沉次数进行探讨。具体方法如下称取四季红675g、车前草885g，混合，按优选提取最佳方案所示条件AAC2进行提取，得到的煎液平均分为9份。按照正交表"(34)的安排，进行正交试验，对9份提取物的干浸膏量和四季红槲皮素含量进行测定，试验结果进行方差分析，结果分别见表5、表6、表7、表8。表5.醇沉工艺因素水平表ABC水平醇沉时间药液含醇量醇沉次数<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表6.醇沉工艺筛选正交试验^据表—一,<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表7.槲皮素含量方差分析表<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>e(D)O扁OIO20.000005F005(2，2)=19.00;F001(2，2)=99.00表8.醇沉后浸膏得率方差分析表方差来源离差平方和自由度均方和F比显著性A0.6872890.34366.50B5.47095622.735551.73C16.44798944.112077.76e(D)0.10575620.0529F005(2,2)=l9.00;F001(2,2)=99.00以槲皮素含量为考察指标，由表6中极差R值大小显示，因素作用主次为B〉OA;直观分析以A2BiC3为最佳工艺；方差分析结果表明B因素和的C因素影响均具有显著性意义,A因素的影响无显著性意义，以醇沉后浸膏得率考察指标，由表6中极差R值大小显示，因素作用主次为B>OA;直观分析以A2B^3为最佳工艺；方差分析结果表明B因素和的C因素影响均具有显著性意义,A因素的影响无显著性意义，综合生产可行性和节约能源和时间考虑。优选A2BiC2,也即药液浓縮至相对密度为1.101.15,加乙醇使含醇量达50%，，醇沉2次，每次24小时。验证试验按A2BiC2最佳方案所示条件重复三次试验。结果见表9表9.醇沉工艺重复性试验结果表因素槲皮素含量醇沉后浸膏得率试验号ABC(mg/g)(%)12450%20.1028.622450%20.0987.932450%20.1038.2结论该工艺稳定可行。实验例2药理试验药品与试剂本发明要物组I:四季红340g车前草1350g本发明要物组II:西季红675g车前草885g制备方法加5倍量水逆流提取5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮，温度是80°C，压力是-0.08Mpa，浓縮至5(TC测定相对密度为1.101.15的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达50%，搅匀，静置24小时，取上清液，将沉淀加水溶解至相对密度为1.101.15，继续加乙醇使含醇量达50%搅匀，静置24小时，取上清液，将上清液合并，减压回收乙醇，压力是-O.08Mpa，温度是65'C，浓缩至5(TC测定相对密度为1.351.40的稠膏，加入糊精270g，制粒，干燥,制成450g即得。阳性对照组通淋舒片，国药准字Z20069073，江西普正制药有限公司，批号061204一、利尿作用l.实验动物健康大白鼠，雌雄不拘，体重200300克,大鼠由北京大学医学实验动物中心提供。2.方法选取健康大白鼠，随机分为常水组、阳性对照组、本发明要物组I和II。每组6只，阳性对照组给药剂量0.4g/kg，本发明药物组2.4g/kg生药量，灌胃给药，灌胃第14d时，每只置于玻璃钟罩内，每只大白鼠腹腔注射生理盐水20mL/kg体重水负荷。用分析天平称量法记录每40分钟滤纸的增重量，连续观察4小时，称量滤纸时去掉大白鼠粪粒。并对结果进行t检验。结果见下表表IO对给予水负荷大鼠尿量的影响(n=10，X±S)分组给予水负荷后4h的尿量(ml)常水组5.6±1.7本发明药物组I8.4±1.7*本发明药物组n9.1±1.7*A阳性对照组12.9士1.5林与阴性对照组比较+P〈0.05，**P<0.01,与本发明药物组I比较AP〈0.05。从上表可以看出，本发明药物组I、II对水负荷大鼠尿量有显著性的影响，与阳性对照组比较具有显著性差异。本发明药物组n的影响更强于本发明药物组i。二.抗炎作用l.对棉球肉芽肿的作用取Wistar种大鼠40只，用乙醚麻醉，在各鼠蹼部用碘液消毒，95%乙醇脱碘后，各切开lOmm长的小口，用眼科镊子将已称重为lOmg的灭菌棉球(上加青霉素和链霉素混合液O.2ml)，从小切口置人皮下，随即缝合皮肤，手术后随机分为四组。第1组为本发明药物组I，给药剂量2.4g/kg生药量;第2组为本发明药物组II，给药剂量2.4g/kg生药量;第3组为阳性对照组，给药剂量0.4g/kg;第4组为阴性对照组，用同体积的水。术后24h开始给药，均为灌胃给药，连续给药6d，第7天打开原切口，将棉球连同周围的结缔组织一起取出来，剔除脂肪组织卜筛球放人烘箱于9(TC烘干lh后取出称重。将称得的重量减去棉球原重量即得肉芽肿的重量。结果见表ll。表11本发明中药组合物对棉球肉芽肿的作用(x±S)_动物数(只)肉芽肿重(mg)本发明药物组I837.5±4.3*本发明药物组II830.8±5.8**AA阳性对照组834.7±8.5*常水组_^_47.8±7.5_与常水组相比较，*P〈0.05，**P〈0.Ol;与本发明药物组I比较AP〈0.05结果表明用本发明药物组II灌胃的大鼠肉芽肿重量与常水组比有非常显著差异(P〈0.01)，与本发明药物组I比较有显著差异(P〈0.05)。2.对角叉菜胶引起的足肿胀的作用取Wistar种大鼠40只并称重，随机分为四组，用苦味酸标记。第1组为本发明药物组I，给药剂量2.4g/kg生药量;第2组为本发明药物组n，给药剂量2.4g/kg生药量;第3组为阳性对照组，给药剂量0.4g/kg;第4组为阴性对照组，用同体积的水。连续灌胃给药7d，在第7天将大鼠的后肢拉直，用软尺分别来量取足拓周长，连续测2次，其平均值为用药前的周长。分别在大鼠右后肢足掌远端进针至躁关节附近，皮下注射10g/L的角叉菜胶0.lml之后，于l、2、4、6、8h分别测量大鼠足跖周长。足肿胀率=[(对照组足肿胀值一给药组足肿胀值)/对照组足肿胀值]X10(W，结果见表12。表12本发明中药组合物对角叉菜胶引起的足肿胀的作用(x土S)注射后足肿胀率lh2h4h6h8h本发明药16.2±8.724.3±9.2**30.4±8.5**36.1±8.2**36.8±9.5物组I本发明药11.3±7.618.1±10.824.2±9.329.1±11.4.30.7±30.7**物组n△阳性对照9.2±5.823.7±9.730.7±10.139.4±8.744.4±8.7组常水组14.3±10.628.8±5.937.3±5.241.6±8.646.0±5.6与常水组相比较，*P<0.05，**P〈0.01;与本发明药物组I比较AP〈0.05结果表明用本发明药物组II灌胃的大鼠在致炎后的不同时间右足肿胀率与常水组比在2h就有差异(P〈0.05)，说明本发明药物组II对角叉菜胶引起的足肿胀抑制作用显效快，8h后，本发明药物组n与常水组相比有非常显著差异(p〈0.01)，与本发明药物组i比较也有非常显著差异(P〈0.01)。三、体外抑菌作用取灭菌有棉塞的试管2X10支，编号排列在试管架上，于每管中先加人无菌肉汤培养基l.Oml，然后于第一管中加入灭菌的本发明药物组I溶液(0.3g/ml)1.0ml，混匀后取出l.Oml放入第二管中，以此类推，直至第九管中取出l.Oml弃去，使成1:2，1:4,1:8，1:16(共9管)等各种浓度，第10管不加药物作对照。取肉汤培养8h的实验菌液(大肠杆菌、变形杆菌)一环，分别加人上述1-10管中，混匀后一起放人37'C的孵箱中培养20h。将各管内肉汤转种到琼脂平板上，无细菌生长，即表示该试管标量就是受试液最低抑菌浓度。本发明药物组n以上述方法进行操作。结果本发明药物组I接种大肠杆菌的各管经肉汤琼脂平板培养都有细菌生长，表明该药液0.3g/ml以下对大肠杆菌无抑制作用，接种变形杆菌的各试管经肉汤琼脂平板培养，第1-3管没有细菌生长，因此本发明药物组I对变形杆菌的最低抑菌浓度为0.02g/ml。本发明药物组II接种大肠杆菌各管经肉汤琼脂平板培养，都有细菌生长，第1管没有细菌生长，表明该药液最低抑菌浓度为0.075g/ml。接种变形杆菌的各试管经肉汤琼脂平板培养，第1-5管没有细菌生长，因此本发明药物组n对变形杆菌的最低抑菌浓度为5mg/ml。以上结果，本发明药物组具有一定的抗菌作用，且本发明药物组II对大肠杆菌、变形杆菌的抗菌作用的作用强度明显高于本发明药物组I。实验例2鉴别筛选实验1)四季红的薄层鉴别①供试品溶液的制备取本中药组合物制剂相当于原料药4g共四份，研细，加甲醇15ml，加热回流20、40、60、80分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取四季红对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一含0.5%氢氧化钠的以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸-水(4:4:0.5:0.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏10分钟。比较供试品溶液和对照药材溶液不同提取时间各斑点在薄层板上的显色效果，结果见下表表13供试品溶液的制备<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>从上表可以看出，超声提取60分钟所制备的供试品溶液与对照品溶液，各主斑点在薄层板上显色清晰，已经符合实验要求。②展开剂的选择吸取供试品溶液和对照品溶液各5y1点于硅胶G板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，配比见下表，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏10分钟。比较应用不同配比展开剂，供试品溶液和对照药材溶液各斑点在薄层板上的展开效果，结果见下表:表14展开剂的选择<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>从上表可以看出展开剂配比为苯-醋酸乙酯-甲酸-水4:4:0.5:0.5时，在薄层板上展开效果好，适合试验要求。③供试品溶液点样量的选择分别吸取供试品溶液2ul、3ul、5ul、7nl、10iil，对照药材溶液各2ul，点于硅胶G板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸-水(4:4:0.5:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏10分钟。比较供试品溶液各斑点的显色效果，结果见下表表15供试品溶液点样量的选择<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>从上表可以看出供试品点样量在5ul时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。④阴性对照试验取缺四季红的阴性样品，照上述鉴别方法中供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。2)车前草的薄层鉴别①薄层板的选择取车前草对照药材2g，用醋酸乙酯超声30分钟，过滤，滤液挥干，残渣加无水乙醇lml使溶解，作为对照药材溶液。取对照药材溶液2W，分别点于硅胶G和硅胶H板上，比较对照品在不同薄层板上的展开效果，结果见下表3)表16车前草的鉴别中薄层板的选择<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>从上表可以看出，薄层板选择硅胶G板展开效果好，分离度好。②供试品溶液的制备取本发明药物制剂内容物相当于原料药4g，研碎，加水40ml加热溶解，用下表方法处理，取车前草对照药材2g，用醋酸乙酯超声30分钟，过滤，滤液挥干，残渣加无水乙醇lml使溶解，作为对照药材溶液，比较供试品提取方法主斑点在薄层版上的显色效果，结果见下表表17供试品溶液的制备<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>从上表可以看出，展开剂配比为三氯甲垸-甲醇20:l时，供试品溶液和对照品溶液展开效果好，无干扰，符合实验要求。④供试品点样量的选择吸取供试品溶液1W、2W、3W、5^1，对照品溶液各2W，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(20:1)为展开剂，展开，取出，晾干，再展开，取出、晾干，置碘蒸汽中显色，比较供试品溶液和对照药材溶液在薄层板上的显色效果，结果见下表表19供试品点样量的选择<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>从上表可以看出，供试品点样量在2yl、3yl时，在薄层板上显色清晰，均适合试验要求，所以从实际操作角度，选择供试品溶液点样量为2ul。⑤阴性对照试验取缺车前草的阴性样品，照上述鉴别方法中供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液，展开后在对照药材溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。以上四季红、车前草的部分薄层鉴别筛选试验，经验证可以从定性检测方面有效控制本发明药物组合物制剂的质量，使本发明药物组合物制剂的质量得到提高。实验例3含量测定实验1)四季红的含量测定以本发明实施例6所述胶囊剂为供试品，采用高效液相色普法测定其槲皮素(C15H1()07)的含量，以完善本发明的质量检测方法，试验结果见下-①供试品溶液的制备在对本发明药物中槲皮素的含量测定中采用了如下制备方法取本中药组合物制剂相当于原药材lg共四份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇_盐酸一水(7:1:2)的混合溶液10ml，密塞，摇匀，称定重量，于7CTC水浴中加热回流2小时，每20分钟振摇一次，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。比较了不同回流时间，供试品溶液中槲皮素的含量，结果见下表表20供试品溶液的f<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>从上表可以看出，回流提取120分钟已经可以将本发明药物中的槲皮素提取完全，所以供试品溶液的制备选择超声提取120分钟即可。②流动相的选择比较了以甲醇-0.4%磷酸溶液不同配比的流动相，配比分别为80:20、70:30、60:40、50:50，供试品溶液色谱图中各峰的分离效果，结果见下表表21流动相的选择<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>从上表可以看出，流动相配比为50:50时供试品色谱图中各峰的分离效果好，主峰没有出现干扰。③含量检测的方法学考察对本发明药物所采用的含量检测方法，从线性关系、稳定性、精密度、重现性、回收率等方面进行了相关方法学考察，具体方法及结果如下检测仪器用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇_0.4%磷酸溶液(50:50)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于5000。AgilentIIOO型高效液相色谱仪；十八垸基硅垸键合硅胶(ZobaxC18，4.6ramX25cmX5ym)厂家AgilentTechnologies安捷伦科技有限公司(中国)流动相甲醇_0.4%磷酸溶液(50:50);流速lmL口min—、检测波长360nm;柱温2CTC。对照品来源槲皮素购于中国药品生物制品检定所批号0209-9202(1)线性关系考察取对照品溶液(0.0143mg/ml)摇匀，分别精密吸取2、4、6、8、10、12p1注入高效液相色谱仪，测定峰面积，结果见下表，并绘制标准曲线图，表明槲皮素在0.0286ug0.1716ug之间呈现良好的线性关系，其回归方程为Area=3446.6974XAmt+6.5677(r=0.9999)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>(2)稳定性试验取对照品溶液，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，依法测定，结果表明，其在24小时内基本稳定，结果见下表<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>(3)精密度试验精密吸取供试品溶液l(Hil，重复进样5次，求得相对标准偏差<2%，结果见下表'表24.精密度试验<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>从以上试验结果可以看出，对本发明药物制剂中的有效成份槲皮素进行含量检测控制，方法稳定、科学，可以有效保证药物质量和疗效，这也是本发明药物疗效与同类产品比较更显著的原因。2)车前草的含量测定采用高效液相色普法测定本发明药物中的熊果酸的含量，以完善本发明的质量检测方法，试验结果见下①供试品溶液的制备'在对本发明药物中熊果酸的含量测定中采用了如下制备方法取本中药组合物制剂相当于原药材2.0g共四份，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，摇匀，称定重量，分别超声10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。比较了不同回流时间，供试品溶液中熊果酸的含量，结果见下表表27.供试品溶液的制备<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>从上表可以看出，流动相配比0.02mol/L磷酸二氢钠-甲醇(15:85)时供试品色谱图中各峰的分离效果好，主峰没有出现干扰。③含量检测的方法学考察对本发明药物所采用的含量检测方法，从线性关系、稳定性、精密度、重现性、回收率等方面进行了相关方法学考察，具体方法及结果如下检测仪器用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；0.02mol/L磷酸二氢钠-甲醇(15:85)为流动相；检测波长为215nm。理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。Agilent1100型高效液相色谱仪；流速0.8mL.min—、检测波长215nm;柱温20°C。对照品来源熊果酸购于中国药品生物制品检定所批号0302-9824(1)线性关系考察取对照品溶液(0.0058mg/ml)摇匀，分别精密吸取2、4、6、8、10、12ul注入高效液相色谱仪，测定峰面积，结果见下表，并绘制标准曲线图，表明熊果酸在0.0116yg0.0696ng之间呈现良好的线性关系，其回归方程为Area=2021845.24XAnit—2067.9(r=0.9997)表29.线性关系考察<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>(2)稳定性试验取对照品溶液，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，取相同体积注入高效液相色谱仪，结果表明，其在24小时内基本稳定，结果见下表<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>从以上试验结果可以看出，对本发明药物制剂中的有效成份熊果酸进行含量检测控制，方法稳定、科学，可以有效保证药物质量和疗效，这也是本发明药物疗效与同类产品比较更显著的原因之一。下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果具体实施方式实施例1.四季红1350g车前草1770g将四季红和车前草加10.6L水逆流提取5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮，温度是80°C，压力是-O.08Mpa，浓縮至50。C测定相对密度为1.101.15的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达50%，搅匀，静置24小时，取上清液，将沉淀加水溶解至相对密度为1.101.15，继续加乙醇使含醇量达50%搅匀，静置24小时，取上清液，将上清液合并，减压回收乙醇，压力是-0.08Mpa，温度是65。C，浓縮至5(TC测定相对密度为1.351.40的稠膏，按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、滴丸、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。实施例2:颗粒剂四季红680g车前草2700g加16.9L水逆流提取5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮，温度是80'C，压力是-0.08Mpa，浓縮至5(TC测定相对密度为1.101.15的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达50%，搅匀，静置24小时，取上清液，将沉淀加水溶解至相对密度为1.101.15，继续加乙醇使含醇量达50%搅匀，静置24小时，取上清液，将上清液合并，减压回收乙醇，压力是-O.08Mpa，温度是65'C，浓縮至50'C测定相对密度为1.351.40的稠膏，加糊精540g、甜菊素40g，制粒，干燥，得800g颗粒，即得。鉴别(1)取本中药组合物lg，研细，加甲醇15ml，加热回流l小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取四季红对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5y1，分别点于同一含0.5%氢氧化钠的以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶0薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸-水(4:4:0.5:0.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏10分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本中药组合物5g,研细，加水40ml，加热溶解，用醋酸乙酯振摇提取2次，第1次20ml,第2次lOml，合并醋酸乙酯，水洗2次，每次10ml挥干，残渣加无水乙醇1ml溶解，作为供试品溶液。取车前草对照药材2g，用醋酸乙酯超声30分钟，过滤，滤液挥干，残渣加无水乙醇lml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液、车前草对照药材溶液各2yl，分别点于同一以梭甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(20:1)为展开剂展开，取出晾干，再展开，取出，晾干，置碘蒸气中显色，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。含量测定四季红照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lml含10ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本中药组合物装量差异项下的内容物，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇一盐酸一水(7:1:2)的混合溶液10ml，密塞，摇匀，称定重量，于7(TC水浴中加热回流2小时，每20分钟振摇一次，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。实施例3:软胶囊四季红680g车前草2700g以上药材，加16.9L水逆流提取5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮，温度是80°C，压力是-0.08Mpa，浓縮至50。C测定相对密度为1.101.15的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达50%，搅匀，静置24小时，取上清液，将沉淀加水溶解至相对密度为l.101.15,继续加乙醇使含醇量达50%搅匀，静置24小时，取上清液，将上清液合并，减压回收乙醇，压力是-0.08Mpa，温度是65'C，浓縮至50'C测定相对密度为1.351.40的稠膏，真空干燥，粉碎至100150目，按药粉PEG600:甘油(6:6:1)的重量比混合均匀，压制成软胶囊，即得。软胶囊囊壳以明胶甘油水(3:1:2)比例制备。鉴别取本中药组合物3粒，取内容物加硅藻土2g混匀，减压干燥，研细，加甲醇15ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取四季红对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5yl，分别点于同一含0.5%氢氧化钠的以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸-水(4:4:0.5:0.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏10分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定四季红照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇_0.4%磷酸溶液(50:50)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lml含10ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本中药组合物4粒，加硅藻土2g搅碎混匀，减压干燥，研细，，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇一盐酸一水(7:1:2)的混合溶液10ml,密塞，摇匀，称定重量，于70。C水浴中加热回流2小时，每20分钟振摇一次，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1，注入液相色谱仪，测定，即得。实施例4:泡腾剂四季红680g车前草2700g以上药材，加16.9L水逆流提取5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮，温度是80°C，压力是-0.08Mpa，浓縮至5(TC测定相对密度为1.101.15的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达50%，搅匀，静置24小时，取上清液，将沉淀加水溶解至相对密度为1.101.15，继续加乙醇使含醇量达50%搅匀，静置24小时，取上清液，将上清液合并，减压回收乙醇，压力是-0.08Mpa，温度是65'C，浓縮至5(TC测定相对密度为1.351.40的稠膏，真空干燥，粉碎至100150目，得药粉660g将药粉等分成两份，一份加66g柠檬酸，用乙醇制粒，另一份加碳酸氢钠110g，用乙醇制粒，分别干燥、整粒，然后混匀，压片，得500片，即得。鉴别(1)取本中药组合物lg,研细，加甲醇15ml，加热回流l小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取四季红对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5u1，分别点于同一含0.5%氢氧化钠的以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸-水(4:4:0.5:0.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏10分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本中药组合物5g，研细，加水40ml，加热溶解，用醋酸乙酯振摇提取2次，第.1次2ml，第2次10ml，合并醋酸乙酯，水洗2次，每次10ml挥干，残渣加无水乙醇1ml溶解，作为供试品溶液。取车前草对照药材2g，用醋酸乙酯超声30分钟，过滤，滤液挥干，残渣加无水乙醇lml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液、车前草对照药材溶液各2yl，分别点于同一以梭甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(20:l)为展开剂展开,取出晾干，再展开，取出，晾干，置碘蒸气中显色，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。含量测定四季红照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lml含10ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本中药组合物装量差异项下的内容物，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇一盐酸一水(7:1:2)的混合溶液10ml，密塞，摇匀，称定重量，于7(TC水浴中加热回流2小时，每20分钟振摇一次，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。车前草照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；0.02mol/L磷酸二氢钠-甲醇(15:85)为流动相；检测波长为215nm。理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。AgilentIIOO型高效液相色谱仪;流速0.8mL'min、检测波长215nm;柱温20°C。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的熊果酸对照品适量，加甲醇制成每lml含60ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本中药组合物制剂相当于原药材2.0g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，摇匀，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。实施例5:片剂四季红680g车前草2700g加16.9L水逆流提取5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩，温度是80'C,压力是-O.08Mpa，浓縮至5(TC测定相对密度为1.101.15的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达50%，搅匀，静置24小时，取上清液，将沉淀加水溶解至相对密度为1.101.15，继续加乙醇使含醇量达50%搅匀，静置24小时，取上清液，将上清液合并，减压回收乙醇，压力是-O.08Mpa，温度是65。C，浓縮至50'C测定相对密度为1.351.40的稠膏，加入1.6倍的碳酸钙，搅匀，5倍量淀粉，混匀，制粒，干燥，整粒，压片，得1000片，即得。鉴别取本中药组合物5g，研细，加水40ml，加热溶解，用醋酸乙酯振摇提取2次，第1次2ml，第2次10ml，合并醋酸乙酯，水洗2次，每次10ml挥干，残渣加无水乙醇1ml溶解，作为供试品溶液。取车前草对照药材2g,用醋酸乙酯超声30分钟，过滤，滤液挥干，残渣加无水乙醇lml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液、车前草对照药材溶液各2yl，分别点于同一以梭甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(20:1)为展开剂展开，取出晾干，再展开，取出，晾干，置碘蒸气中显色，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。四季红照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05%磷酸溶液(80:100)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lml含10ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本中药组合物装量差异项下的内容物，研细，取0.5g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇一盐酸一水(7:1:2)的混合溶液10ml，密塞，摇匀，称定重量，于70。C水浴中加热回流2小时，每20分钟振摇一次，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1，注入液相色谱仪，测定，即得。车前草照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；0.02mol/L磷酸二氢钠-甲醇(15:85)为流动相；检测波长为215nm。理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。AgilentIIOO型高效液相色谱仪;流速0.8mL'min—、检测波长215nm;柱温20°C。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的熊果酸对照品适量，加甲醇制成每lml含60ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本中药组合物制剂相当于原药材2.0g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，摇匀，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ixl，注入液相色谱仪，测定，即得。功能与主治苗医旭嘎帜沓痂，洼据通诘休洼凯纳。中医清热解毒，利尿通淋。用于湿热蕴结所致淋症，证见排尿不畅，淋漓涩痛。用法与用量口服，一次2片，一日3次；5天一疗程。规格每片重0.35g实施例6:胶囊剂四季红675g车前草]880g以上药材，加12.8L水逆流提取5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮，温度是80。C，压力是-0.08Mpa，浓縮至5CTC测定相对密度为1.101.15的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达50t搅匀，静置24小时，取上清液，将沉淀加水溶解至相对密度为1.101.15，继续加乙醇使含醇量达50%搅匀，静置24小时，取上清液，将上清液合并，减压回收乙醇，压力是-0.08Mpa，温度是65。C，浓縮至50。C测定相对密度为1.351.40的稠膏，加入300g糊精，混匀，制粒，干燥，装入胶囊，制成1000粒即得。质量控制方法鉴别(1)取本中药组合物lg，研细，加甲醇15ral，加热回流l小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取四季红对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5u1，分别点于同一含0.5M氢氧化钠的以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸-水(4:4:0.5:0.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏10分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本中药组合物5g，研细，加水40ml，加热溶解，用醋酸乙酯振摇提取2次，第1次2ml，第2次10ml,合并醋酸乙酯，水洗2次，每次10ml挥干，残渣加无水乙醇1ml溶解，作为供试品溶液。取车前草对照药材2g，用醋酸乙酯超声30分钟，过滤，滤液挥干，残渣加无水乙醇lml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液、车前草对照药材溶液各2yl，分别点于同一以梭甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(20:1)为展开剂展开,取出晾干，再展开，取出，晾干，置碘蒸气中显色，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lml含10yg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本中药组合物内容物，研细，取0.5g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇一盐酸一水(7:1:2)的混合溶液10ml，密塞，摇匀，称定重量，于70°C水浴中加热回流2小时，每20分钟振摇一次，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10yl，注入液相色谱仪，测定，即得。本中药组合物以成人每次服用量含四季红槲皮素(C15H1()07)计，不得少于0.25mg。实施例7.:口服液四季红680g车前草2700g加16.9L水逆流提取5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮，温度是80。C，压力是-0.08Mpa，浓縮至50。C测定相对密度为1.101.15的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达50%，搅匀，静置24小时，取上清液，将沉淀加水溶解至相对密度为1.101.15，继续加乙醇使含醇量达50%搅匀，静置24小时，取上清液，将上清液合并，减压回收乙醇，压力是-0.08Mpa，温度是65。C，浓縮至5(TC测定相对密度为1.351.40的稠膏，加入适量蔗糖、山梨酸，加水调整总量至1000ml，搅匀，灌装，即得。功能主治清热解毒，利尿通淋。用于湿热蕴结所致淋症，证见排尿不畅,淋漓涩痛。用法用量口服，一次1支，一日3次；5天一疗程。规格每支10ml。权利要求1.一种治疗湿热蕴结所致淋症的中药组合物，其特征是该组合物是以下列重量份的原料制成的四季红34-67.5重量份车前草88.5-135重量份2.如权利要求l所述的中药组合物，其特征是该组合物是以下列重量份的原料制成的四季红67.5重量份车前草88.5重量份3.如权利要求l所述的中药组合物，其特征是该组合物是以下列重量份的原料制成的四季红34重量份车前草135重量份4.如权利要求l-3任一项所述的中药组合物的制备方法，其特征在于将所述比例的四季红和车前草，加4-6倍量水逆流循环提取3-6小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮，温度是60-100。C，压力是-O.08-0.10Mpa，浓縮至50。C测定相对密度为1.101.15的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达40-70%，搅匀，静置24小时，取上清液，将沉淀加水溶解至相对密度为1.101.15,继续加乙醇使含醇量达40-70%搅匀，静置24小时，取上清液，将上清液合并，减压回收乙醇，压力是-0.08-0.10Mpa，温度是50-8(TC，浓縮至5(TC测定相对密度为1.351.40的稠膏，按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、软胶囊、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。5.如权利要求4所述的中药组合物的的制备方法为，将所述比例的四季红和车前草，加5倍量水逆流提取5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮，温度是80"C，压力是-0.08Mpa，浓縮至50。C测定相对密度为1.101.15的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达50%，搅匀，静置24小时，取上清液，将沉淀加水溶解至相对密度为1.101.15，继续加乙醇使含醇量达50%搅匀，静置24小时，取上清液，将上清液合并，减压回收乙醇，压力是-0.08Mpa,温度是65°C,浓縮至5(TC测定相对密度为1.351.40的稠膏，按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、软胶囊、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。6.如权利要求4所述的中药组合物的质量控制方法，其特征在于本发明中药组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种鉴别(1)取本中药组合物制剂相当于原药材l-4g，加甲醇15ml，加热回流0.5-2小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取四季红对照药材0.2-lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各1-lOii1，分别点于同一含0.5%氢氧化钠的以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸-水(2-6:2-6:0.2-1:0.2-1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏5-15分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取本中药组合物制剂相当于原药材6-20g，加水20-60ml，加热溶解，用醋酸乙酯振摇提取1-3次，第1次1-3ml，第2次5-15ml，合并醋酸乙酯，水洗1-3次，每次5-15ml挥干，残渣加无水乙醇0.5-2ml溶解，作为供试品溶液；同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液、车前草对照药材溶液各1-10"1，分别点于同一以梭甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10-40:1)为展开剂展开，取出晾干，再展开，取出，晾干，置碘蒸气中显色，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；含量测定(1)照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定；色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；甲醇_(0.02%-0.8%)磷酸溶液(30-70:30-70)为流动相；检测波长为360nm;理论板数按槲皮素峰计算应不低于5000;对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥12-48小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lml含5-15txg的溶液，即得；供试品溶液的制备取本中药组合物制剂相当于原药材0.5-2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇一盐酸一水(3-10:0.5-2:1-3)的混合溶液5-15ml，密塞，摇匀，称定重量，于70'C水浴中加热回流1-3小时，每20分钟振摇一次，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1，注入液相色谱仪，测定，即得；(2)照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.02mol/L磷酸二氢钠-甲醇(5-20:80-95)为流动相；检测波长为215nm;理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000;Agilent1100型高效液相色谱仪;流速0.6-1.OmLmin—、检测波长215nm;柱温20。C;对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的熊果酸对照品适量，加甲醇制成每lml含5-80ug的溶液，即得；供试品溶液的制备取本中药组合物制剂相当于原药才1.0-5.0g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，摇匀，称定重量，超声10-40分钟，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15!U，注入液相色谱仪，测定，即得。7.如权利要求6所述的中药组合物的质量控制方法，其特征在于该质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种鉴别(1)取本中药组合物制剂相当于原药材2g，加甲醇15ml，加热回流l小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取四季红对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5!x1，分别点于同一含0.5%氢氧化钠的以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酉旨-甲酸-水(4:4:0.5:0.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏IO分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取本品5g，研细，加水40ml，加热溶解，用醋酸乙酯振摇提取2次，第1次2ml，第2次10ml,合并醋酸乙酯，水洗2次，每次10ml挥干，残渣加无水乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液、车前草对照药材溶液各2iil，分别点于同一以梭甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(20:1)为展开剂展开，取出晾干，再展开，取出，晾干，置碘蒸气中显色，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；(1)照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定；色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50)为流动相；检测波长为360nm;理论板数按槲皮素峰计算应不低于5000;对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lml含10iig的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇一盐酸一水(7:1:2)的混合溶液10ml，密塞，摇匀，称定重量，于7(TC水浴中加热回流2小时，每20分钟振摇一次，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1，注入液相色谱仪，测定，即得；(2)照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定；色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；0.02mol/L磷酸二氢钠-甲醇(15:85)为流动相；检测波长为215nm;理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000;AgilentIIOO型高效液相色谱仪;流速0.8mL*min—、检测波长215nm;柱温20°C;对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的熊果酸对照品适量，加甲醇制成每lml含60pg的溶液，即得；供试品溶液的制备取本中药组合物制剂相当于原药才2.0g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ral，密塞，摇匀，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。全文摘要本发明提供了一种治疗湿热蕴结所致淋症的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，本发明的药物组合物原料组成为四季红、车前草；本发明结合有效成分的含量测定对提取分离工艺进行了优化；本发明的质量控制方法对四季红、车前草进行了鉴别，对处方中四季红以槲皮素计进行了含量测定，对车前草以熊果酸计进行了含量测定，通过本质量控制方法能有效的对产品进行质量控制，并且使用该方法控制的产品在药理效果上表现的更为稳定。文档编号A61P31/04GK101417014SQ20071017622公开日2009年4月29日申请日期2007年10月23日优先权日2007年10月23日发明者付建家,付立家申请人:北京亚东生物制药有限公司