专利名称：：用于分析和治疗aids消耗综合征和免疫细胞功能异常的组合物和方法
技术领域：
：本发明涉及由HIVI型包膜糖蛋白引起的异常细胞信号传导。特别地，本发明提供用于鉴定由HlV-lgpl20及其降解产物引起的黑皮质素受体途径刺激的抑制剂的组合物和方法。如此鉴定的抑制剂被认为适于治疗与HIV有关的恶病质、T细胞的超活化和中枢神经系统疾病。
背景技术：
：体重的非自愿性和进行性下降是HIV感染(与HIV有关的恶病质)的症状。如疾病控制中心所定义的，当这种重量下降的量大于基准体重降低的百分之十(10%)并且伴随有不存在继发感染的情况下的慢性腹泻或慢性虚弱和发烧时，所述重量下降被归为与HIV有关的消耗综合征(例如，AIDS消耗综合征)。已知消耗综合征是AIDS患者的生活品质下降中的重要表现，并且有助于HIV感染的患者的发病率和死亡率。在引入高效抗逆转录病毒疗法(HAART)之前典型的AIDS消耗综合征是很普通的。虽然如此，但是相当多的患者仍旧遭受到与HIV有关的恶病质和消耗综合征的痛苦(Hoffmann,Rockstroh，Kamps等人，HIVMedicine2006,website)。而且，即使在HAART时期，重量下降也保持为死亡率的一个独立的风险因素(Tang等人，JAIDS,31:230-236,2002)。患有典型的消耗综合征的患者还具有提高的机会性感染的风险(DworkinandWilliamson,JAIDS,33:267-273,2003)并且可能患有认知功能障碍(Dolan等人，JAIDS,34:155-164,2003)。人们巳经研究了多种治疗方案，包括营养法(肠内和胃肠外)、食欲增进剂法、合成代谢剂法、细胞因子调节剂法和脂肪酸补充法，但是这些方案的成功率有限。因此本领域需要一种治疗与HIV有关的恶病质和消耗综合征的可选择的方案。发明概述本发明涉及由HIVI型包膜糖蛋白引起的异常细胞信号传导。特别地，本发明提供用于鉴定由HlV-lgpl20及其降解产物引起的黑皮质素受体途径刺激的抑制剂的组合物和方法。如此鉴定的抑制剂被认为适于治疗与HIV有关的恶病质、T细胞的超活化和中枢神经系统疾病。特别地，本发明提供一种用于检测样品中的抗体的方法，该方法包括提供i)样品，其中所述样品包含抗体；以及ii)包含HIV-l促黑素细胞激素表位的多肽；在适于使所述抗体与所述多肽的HIV-1促黑素细胞激素表位结合的条件下使所述多肽与所述样品接触；以及检测与所述多肽结合的HIV-1促黑素细胞激素表位-反应性抗体。在一些实施方案中，所述检测包括酶联免疫吸附测定和/或蛋白质印迹。在一些优选实施方案中，所述样品来自感染HIV-1的患者。在进一歩的实施方案中，所述样品來自AIDS疫苗接种者(例如，其可以是HIV-1阳性，也可以不是HIV-1阳性)。在一些实施方案中，该方法还包括在HIV-1促黑素细胞激素表位-反应性抗体的水平降低或消失的基础上向受试者提供AIDS消耗疾病发展的预后的歩骤。在其他实施方案中，该方法还包括在HIV-1促黑素细胞激素表位-反应性抗体的水平降低或消失的基础上向受试者提供HIV-1T调节细胞功能异常发展的预后的歩骤。在一些优选实施方案中，该方法还包括在HIV-1促黑素细胞激素表位-反应性抗体的水平降低或消失的基础上向受试者提供HIV-1减弱的预后的歩骤。在其他实施方案中，所述样品来自杂种瘤细胞培养物上清液。在一些实施方案中，所述多肽包含通过使用凝血酶切割而制得的HIV-lgpl20的50kDa片段。在其他实施方案中，所述多肽包含载体(例如，BSA、KLH等)。在一些特别优选的实施方案中，所述多肽包含SEQIDNO:17或SEQIDNO:24表征的氨基酸序列。在其他优选的实施方案中，所述多肽包含HIV-lgpl20蛋白。此外本发明提供这样的方法，该方法还包括以体外分析的方式对中和HIV-1的抗体进行检测的步骤。另外，本发明提供用于检测样品中抗体的试剂盒，其包含包含HIV-1促黑素细胞激素表位的多肽；以及用于检测样品中的HIV-1促黑素细胞激素表位-反应性抗体的说明。在一些实施方案中，所述试剂盒还包含阴性对照多肽。在其他实施方案中，所述试剂盒还包含阳性对照抗体和阴性对照抗体。在一些优选实施方案中，所述多肽包含SEQIDNO:17或24表征的氨基酸序列。而且，本发明一种用于鉴定作为人的黑皮质素受体(MCR)的HIV-1促黑素细胞激素表位刺激的抑制剂的化合物的方法，包括提供i)表达人的MCR的细胞系；ii)包含HIV-1促黑素细胞激素表位的多肽；以及iii)化合物；在适于使用所述多肽刺激所述人的MCR的条件下使所述细胞系和所述多肽在存在所述化合物和不存在所述化合物的情况下接触，其中所述人的MCR在不存在而不是存在所述化合物的情况下产生刺激表明所述化合物是所述HIV-1促黑素细胞激素表位的抑制剂。在一些实施方案中，本方法还包括通过下列步骤来鉴定所述化合物作为人的MCR的人神经肽激素刺激的抑制剂在适于使用所述人神经肽激素刺激所述MCR的条件下使所述细胞系和人神经肽激素在存在所述化合物和不存在所述化合物的情况下接触，其中所述人的MCR在不存在而不是存在所述化合物的情况下产生刺激表明所述化合物是所述人神经肽激素的抑制剂。在一些优选实施方案中，所述人的MCR是MC4R。在其他优选的实施方案中，所述人的MCR选自MC1R、MC2R、MC3R和MC5R。在一些特别优选的实施方案中，所述细胞系是表达MC4R的转基因细胞系。在一些优选实施方案中，多肽包含SEQIDNO:17或24表征的氨基酸序列。此外本发明提供这样的实施方案，其中人神经肽激素选自a-促黑激素(oc-MSH)、促皮质素(ACTH)、(3-促黑激素(P-MSH)和y-促黑激素(y-MSH)。图1A示出了阿黑皮素原(POMC)前蛋白原(SEQIDNO:l)的氨基酸序列。图1B示出了POMC-衍生的黑皮质素受体配体的比对a-促黑激素(如SEQIDNO:2表征的a-MSH或a-促黑素细胞激素)、p—促黑激素(如SEQIDNO:3表征的(3-MSH或P-促黑素细胞激素)、Y—促黑激素(如SEQIDNO:4表征的Y-MSH或Tz-促黑素细胞激素)、促肾上腺皮质激素(如SEQIDNO:5表征的ACTH或促皮质素)和反向所示的HIV-1SF2gpl20的片段(如SEQIDNO:6表征的K13M肽)。如该比对所示，所有5个序列中都保存有酪氨酸(Y)、精氨酸(R)和色氨酸(W)残基。图2A示出了来自GENBANK登录No.NM—001035256的POMC转录变体1的cDNA序列(SEQIDNO:7)。图2B示出了来自GENBANK登录N.NM_000939的POMC转录变体2的cDNA序列(SEQIDNO:8)。尽管两个cDNA序列都编码相同的POMC蛋白质序列，但是与较短的变体2相比，较长的变体1在5，非翻译区(UTR)具有额外的序列。图3示出了HIV-1的SF2分离物的包膜(Env)gpl60的氨基酸序列(SEQIDN0:9)。残基l-27对应于信号肽序列，残基28-509对应于gpl20序列(SEQIDNO:15)，以及残基510-855对应于gp41序列(SEQIDNO:16)。图4示出了编码前图的Envgpl60序列的cDNA序列(SEQIDNO:10)。该序列对应于GENBANK登录No.KO2007的HIV-1SF2分离物(Sanchez-Pescador等人，Science,227:484-492，1985)。图5A示出了黑皮质素4受体的氨基酸序列(如SEQIDNO:ll所表征的MC4R)。图5B示出了来自GENBANK登录No.NM_005912的MC4R的cDNA序列(SEQIDNO:12)。图6A示出了黑皮质素5受体(如SEQIDNO:13表征的MC5R)的氨基酸序列。图6B示出了来自GENBANK登录No.NM—005913的MC5R的cDNA序列(SEQIDNO:14)。图7提供结合HIV-1SF2gpl20的肽的黑皮质素受体(SEQIDNO:17)与HIV墨2CAM2的表面糖蛋白(SEQIDNO:18)、HIV-2D205(SEQIDNO:19)、HIV-2D194(SEQIDNO:20)和SlVmac251(SEQIDNO:21)的比对。注意HIV-1gpl20而不是HIV-2和SIV表面糖蛋白含有保存在POMC-衍生的激素中的色氨酸残基。图8示出了激活人的MC4R的称为G25G肽(SEQIDNO:17)的HIV-1SF2#79。图9示出了沿着反向合成的激活人的MC4R的称为K13M(SEQIDNO:6)的HIV-1SF2#33。图10示出了由MC5R+T细胞的HIV-1gpl20剌激介导的CD4+CD25+调解性T细胞发展的失调，表明超活性和随后T细胞缺失。未结合的a-MSH的序列提供为SEQIDNO:2，而结合的K13M病毒促黑素细胞激素表位的序列提供为SEQIDNO:6。图11左边示出了HIV-1gpl20的结构，右边示出了50kDa片段的结构。HIV-1gpl20在V3环内被凝血酶切割，产生两个片段(约70kDa和50kDa)。在切割时暴露的HIV-1促黑素细胞激素表位的位置由箭头示出。表1列出了黑皮质素受体的亚型的药理学性能和分布。表2列出了参与UCSFSCOPEcohort的特性。表3列出了国立精神卫生研究院(NIMH)心理药物筛选计划(PDSP)的人的中枢神经系统分子，该计划筛选与HIV-1gpl20及其降解产物和包含HIV-1促黑素细胞激素表位的合成肽的结合和/或功能分析。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表2<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表3.国立精神卫生研究院(N1MH)心理药物筛选计划(PDSP)的结合分析组分<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>定义术语"基因"是指包含产生多肽或前体(例如HIV-1ENV)所必需的编码序列的核酸(例如DNA)序列。多肽可以由全长编码序列或编码序列的任意部分来编码，只要保留了全长或片段的期望活性或功能性能(例如酶活性、配体结合、信号转导等)即可。该术语还涵盖结构基因的编码区以及在任一端位于靠近编码区的5'和3'端约lkb或更长距离的序列，从而该基因对应于全长mRNA的长度。位于编码区的5'端并且存在于mRNA上的序列也被称为5'非翻译序列。位于编码区的3'端或下游并且存在于mRNA上的序列也被称为3'非翻译序列。术语"基因"涵盖了cDNA和基因组形式的基因。基因的基因组形式或克隆含有被称之为"内含子"或"间插区"或"间插序列"的非编码序列间断的编码区，内含子为转录成核RNA(hnRNA)的基因区段；内含子可含有调节元件(增强子)。内含子被从核或初级转录本上除去或"剪接"；因此内含子在信使RNA(mRNA)转录本中是不存在的。mRNA在翻译期间行使功能，规定了新生多肽中氨基酸的序列或顺序。特别地，术语"HIV-1包膜基因"是指全长HIV-1包膜核苷酸序列。然而，还期望的是术语涵盖HIV-1ENV序列的片段以及全长HIV-1ENV核苷酸序列内的其他域。另外，术语"HIV-1ENV核苷酸序列"或"HIV-1ENV多核苷酸序列"涵盖DNA、cDNA禾卩RNA(例如，mRNA)序列。如果本文中所述的氨基酸序列是指天然存在的蛋白分子的氨基酸序列，则氨基酸序列等术语(如多肽或蛋白)不是将氨基酸序列限制为与所述的蛋白分子有关的完全天然的氨基酸序列。除了含有内含子，基因组形式的基因还包括位于存在于RNA转录本上的序列的5'和3'端的序列。这些序列被称为"侧接"序列或区域(这些侧接序列位于存在于RNA转录本上的非翻译序列的5'或3'端)。5'侧接区可含有调节序列，如控制或影响基因的转录的启动子和增强子。3'侧接区可含有指导转录终止、翻译后切割以及多聚腺苷酰化的序列。术语"野生型"是指具有在天然存在的来源分离时的基因或基因产物的特性的基因或基因产物。野生型基因是一种群中最频繁观察到的基因，因而被武断地指定为基因的"正常"或"野生型"D相反，术语"修饰的"、"突变体"和"变体"是指当与野生型基因或基因产物相比时，在序列上和/或功能性能上表现出修饰(即改变的特性)的基因或基因产物。应当注意的是，天然存在的突变体可以被分离；这些是通过当与野生型基因或基因产物相比时，它们具有改变的特性的事实来鉴定的。如本文中所使用的，术语"核酸分子编码"、"DNA序列编码"和"DNA编码"是指脱氧核糖核酸链上的脱氧核糖核苷酸的顺序或序列。这些脱氧核糖核苷酸的顺序决定了多肽(蛋白质)链上的氨基酸的顺序。因此DNA序列编码氨基酸序列。据说DNA分子具有"5'端"和"3'端"，因为单核苷酸发生反应从而按照这样的方式制得寡核苷酸或多核苷酸，该方式使得一个单核苷酸戊糖环的5'端的磷酸酯与其临近的3'端的氧在一个方向上通过磷酸二酯键而连接。因此，如果5'端的磷酸酯没有和单核苷酸戊糖环的3'端的氧连接，则寡核苷酸或多核苷酸的末端被称为"5'端"；如果3'端的氧未和随后的单核苷酸戊糖环的5'端的磷酸酯连接，则寡核苷酸或多核苷酸的末端被称为"3'端"。如本文中所使用的，据说核酸序列(即使在更大的寡核苷酸或多核苷酸内部)也具有5'端和3'端。在线性或环状DNA分子中，不连续的元件被称为"上游"或"下游"的5'端或3'端元件。这种术语反映了下列事实转录沿着DNA链以5'端至3'端的方式进行。指导连接的基因的转录的启动子和增强子元件通常位于编码区的5'端或上游。然而，增强子元件及时位于启动子元件和编码区的3'端时也可以发挥出它们的作用。转录终止并且多腺苷酸化信号位于编码区的3'端或下游。如本文中所使用的，术语"具有编码基因的核苷酸序列的寡核苷酸"和"具有编码基因的核苷酸序列的多核苷酸"是指包含基因编码区的核酸序列，或者换句话说，编码基因产物的核酸序列的核酸序列。编码区可以以cDNA、基因组DNA或RNA的形式存在。当以DNA的形式存在时，寡核苷酸或多核苷酸可以是单链的(即有义链)或双链的。如果需要，合适的控制元件(增强子/启动子、剪接界、多腺苷酸化信号等)可置于与基因编码区极为接近之处，以允许转录的准确起始和/或初级RNA转录本的正确加工。可选择地，本发明的表达载体中使用的编码区可含有内源性增强子/启动子、剪接界、间插序列、多腺苷酸化信号等，或者含有内源性和外源性控制元件的联合。如本文中所使用的，术语"调节元件"是指控制核酸序列的表达的某些方面的遗传元件。例如，启动子是促进可操作地连接的编码区的转录的起始的调节元件。其他调节元件包括剪接信号、多腺苷酸化信号、终止信号等。如本文中所使用的，术语"互补的"或"互补性"用来指与碱基配对规则相关的多核苷酸(即核苷酸序列)。例如，对于序列"A-G-T"互补于序列"T-C-A"。互补可以是"部分的"，其中仅仅某些核酸碱基依据碱基配对规则配对。或者，核酸之间可以存在"完全"或"全部"的互补。核酸链之间的互补程度对于核酸链间杂交的效率和强度具有重大影响。这在扩增反应、还有依赖于核酸之间的结合的检测方法中尤为重要。术语"同源"是指互补程度。可存在部分同源或完全同源(即相同)。部分互补的序列是至少部分地抑制完全互补的序列与使用功能性术语"基本上同源的"命名的靶核酸杂交的序列。当用来指核酸结合时，术语"结合的抑制"是指抑制由同源序列竞争与靶序列结合而引起的结合。完全互补的序列与耙序列的杂交的抑制可使用杂交测定(DNA或RNA印迹、溶液杂交等)于低度严谨的条件下进行检查。在低度严谨的条件下，基本上同源的序列或探针将竞争并抑制完全同源的核酸分子与靶的结合(即杂交)。这并不是说低度严谨的条件是允许非特异性结合的条件下；低度严谨的条件要求两序列彼此之间的结合是特异性(即选择性)的相互作用。非特异性结合的不存在可通过使用甚至缺少部分互补程度(即小于约30%的同源性)的第二靶进行测试；在非特异性结合的不存在时，探针将不会与第二不互补靶杂交。本领域熟知的是，可以使用多种等同条件构成低度严谨的条件；可考虑诸如探针的长度和性质(DNA、RNA、碱基组成)和靶的性质(DNA、RNA、碱基组成、存在于溶液中的或固定的等)以及盐和其他组分的浓度(如甲酰胺、葡聚糖硫酸酯、聚乙二醇的存在或不存在)之类的因素，并且杂交溶液可以变化，从而产生不同于但又等同于上文所列条件的低度严谨的条件。另外，本领域己知在高度严谨的条件下促进杂交的条件(如提高杂交和/或洗涤步骤的温度、在杂交溶液中使用甲酰胺等)。如本文中所使用的，术语"竞争结合"用来指如果第二多肽是第一多肽的变体、或相关或无关的多肽，则第一多肽具有结合这样的底物的活性，第二多肽具有结合该相同底物的活性。第一多肽与底物结合的效率(如动力学或热力学)可以等于、或大于、或小于第二多肽与底物结合的效率。例如，两种多肽与底物结合的平衡结合常数(KD)可以是不同的。如本文中所使用的，术语"Km"是指酶的Michaelis-Menton常数并且定义为特异性底物的浓度，在该浓度下，给定的酶在酶催化的反应中发挥最大速度的一半速度。如本文中所使用的，术语"杂交"用来指互补核酸的配对。杂交和杂交强度(即核酸之间的结合强度)受到诸如核酸之间的互补程度、涉及条件的严谨性、形成的杂交链的Tm、以及核酸内G:C比之类的因素的影响。如本文中所使用的，术语"Tm"用来指"解链温度"。解链温度是双链核酸分子群半数解离为单链的温度。用于计算核酸Tm的等式是本领域所熟知的。正如标准文献中所指出的那样，当核酸处于lMNaCl的水溶液中时，简单估计的Tm值可通过下列等式来计算Tm=81.5+0.41(%G+C)(例如参见,AndersonandYoung,QuantitativeFilterHybridization,M/c/e/c外6"Vfc加'o"，1985)。其他文献包括更为复杂的将结构还有序列特性考虑到Tm的计算中的算法。如本文中所使用的，术语"严谨性"用来指在其之下进行核酸杂交的温度、离子强度、以及存在其它化合物(如有机溶剂)的条件。本领域技术人员将知道通过改变上面单独或共同所述的参数可以改变"严谨性"条件。在"高度严谨"的条件下，仅仅在具有高频的互补的碱基序列的核酸片段之间发生核酸碱基配对(例如，在约85-100%相同、优选约70-100%相同的同源体之间在"高度严谨"的条件下可发生杂交)。在中度严谨的条件，仅仅在具有中等频率的互补的碱基序列的核酸之间发生核酸碱基配对(例如，在约50-70%相同的同源体之间在"中度严谨"的条件下可发生杂交)。因此，由于互补的序列的频率通常很低，因此"弱度"或"低度"度严谨的条件通常需要衍生自基因不同的有机体的核酸。当"高度严谨的条件"用来指核酸杂交时，包括等同于如下的条件在由5XSSPE(43.8g/1NaCl、6.9g/1NaH2P04H20禾Q1.85g/1EDTA,pH用NaOH调节为7.4)、0.5%SDS、5XDenhardt's试剂和100ng/ml变性鲑鱼精DNA组成的溶液中于42°C结合或杂交，如果使用的是长度约500个核苷酸的探针，接着在包括0.1XSSPE、1.0%SDS的溶液中于42'C洗涤。当"中度严谨的条件"用来指核酸杂交时，包括等同于如下的条件在由5XSSPE(43.8g/lNaCl、6.9g/1NaH2P04H20和1.85g/1EDTA，pH用NaOH调节为7.4)、0.5%SDS、5XDenhardt's试剂和100|ig/ml变性鲑鱼精DNA组成的溶液中于42°C结合或杂交，如果使用的是长度约500个核苷酸的探针，接着在包括l.OXSSPE、1.0%SDS的溶液中于42'C洗涤。"低度严谨的条件"包括等同于如下的条件在由5XSSPE(43.8g/1NaCl、6.9g/1NaH2P04H20禾口1.85g/1EDTA,pH用NaOH调节为7.4)、0.1%SDS、5XDenhardt's试齐J[50XDenhardt's每500ml含5gFicoll(型号400，Pharamcia)、5gBSA(级分V;Sigma)]和100g/ml变性鲑鱼精DNA组成的溶液中于42。C结合或杂交，如果使用的是长度约500个核苷酸的探针，接着在包括5XSSPE、0.1%SDS的溶液中于42"C洗涤。下列术语用于描述两个或多个多核苷酸之间的序列关系"参照序列"、"序列同源性"、"序列同源性百分比"和"基本上同源"。"参照序列"被定义为用作序列对比的基础的序列；参照序列可以是较长序列的亚集(例如为序列列表中给出的全长cDNA序列的区段)，或者可包含完全的基因序列。通常，参照序列的长度为至少20个核苷酸，经常长度为至少25个核苷酸，常常长度为至少50个核苷酸。由于两个多核苷酸可以分别(l)包含在两个多核苷酸之间类似的序列(即，完全的多核苷酸序列一部分)，以及还可包含在两个多核苷酸之间不同的序列，通常通过在"对比窗"上对比两个多核苷酸的序列来进行两个(或多个)多核苷酸的序列对比，从而鉴定和对比类似序列的局部区域。如本文中所使用的，"对比窗"是指至少20个连续的核苷酸位置的概念区段，其中多核苷酸序列可以与至少20个连续的核苷酸的参照序列进行对比，并且其中与两个序列最佳比对的参照序列(不包含添加或缺失)相比，多核苷酸序列在对比窗中的部分可包含20%或更少的添加或缺失(即空隙)。排列对比窗的序列最佳比对可通过localhomologyalgorithmofSmithandWaterman[SmithandWaterman,AdvApplMath,2:482(1981)]bythehomologyalignmentalgorithmofNeedlemanandWunsch[NeedlemanandWunsch,JMolBiol,48:443(1970)]、thesearchforsimilaritymethodofPearsonandLipman[PearsonandLipman,ProcNatlAcadSci，USA,85:2444(1988)]、这些运算方法的计算机处理(Wisconsin遗传学软件包7,0版(geneticsComputerGroup,575ScienceDr.,Madison,Wis.)中GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)、或通过观察进行处理，经多种方法生成的最佳比对法(即导致在对比窗中的最高的同源百分比)被选择。术语"序列同源性"是指两个多核苷酸序列在对比窗中是相同的(即在核苷酸连着核苷酸的基础上)。术语"序列同源性百分比"是通过比对对比窗上两个最佳排列序列、确定相同的核酸碱基(例如A、T、C、G、U或I)存在于两个序列中生成匹配部分的数量、区分对比窗(即窗口尺寸)内部分的全部数量与匹配部分的数量，将结合乘以IOO得到序列同源性百分比。如本文中所使用的，术语"基本上同源"表示多核苷酸序列的特性，其中与具有至少20个核苷酸位点、经常在至少25-50个核苷酸位点的对比窗上的参照序列相比，多核苷酸包含具有至少80%序列同源性、优选至少90%、95%或97%序列同源性、更优选至少99%序列同源性的序列，其中序列同源性百分比通过将参照序列与可包括缺失或添加对比窗上的参照序列的20%或更小的序列进行对比而计算得到。参照序列可以为较大序列的亚集，例如，为本发明在要求的组成的全长序列(例如，HIV-lEnv)的区段。至于多肽，术语"基本上同源"是指两个肽序列，当最佳比对时，如通过程序GAP或BESTFIT采用缺省gapweight,具有至少80%序列同源性，优选至少90%序列同源性，更优选至少95%/97%或99%序列同源性。优选地，不相同的残基位置经保守性氨基酸取代进行区分。保守性氨基酸取代是指具有类似侧链的残基的可交换性。例如，具有脂肪族侧链的一组氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；具有脂肪族-羟基侧链的一组氨基酸为丝氨酸和苏氨酸；具有含有酰胺的侧链的一组氨基酸为天冬酰胺和谷酰胺；具有芳族侧链的一组氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有碱性侧链的一组氨基酸为赖氨酸、精氨酸和组氨酸；以及具有含有硫侧链的一组氨基酸为半胱氨酸和蛋氨酸。优选的保守性氨基酸取代基团为缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸和天冬酰胺-谷酰胺。如本文中所使用的，术语"片段"是指相对于天然蛋白具有氨基末端和/或羧基末端缺失的多肽，但剩余氨基酸序列与由全长cDNA序列推导出的氨基酸序列中的对应位点是同源的。片段的长度通常为至少4个氨基酸，优选长度为至少10个氨基酸，更优选长度为至少15个氨基酸，最优选长度为至少20个氨基酸或长度更长(例如长度为25至50个氨基酸)，并且跨越组成(本发明中要求的)与其各种配体和/或底物的分子间结合所需要的多肽的部分(例如，SEQIDN0:6的K13M或SEQIDNO:17的G25G)。如本文中所使用的，关于适用于对象的术语"天然存在"是指能在自然界中可见对象的事实。例如，这样的多肽或多核苷酸序列是天然存在的，其存在于可从自然界内的一种来源中分离的有机体(包括病毒)中，并且不经过人在实验室中人为修饰。"扩增"是涉及模板特异性的特殊情形的核酸复制。这是和非特异性模板复制(即模板依赖性、但不依赖于特定模板的复制)相比较而言。模板特异性在此不同于复制的保真性(即，合成正确的多核苷酸序列)和核苷酸(核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸)特异性。模板特异性通常是就"靶"特异性而进行描述的。从某种意义上讲，目标序列是"靶"，因为它们被寻找以从其他核酸中分离出来。扩增技术主要针对这种挑选而设计。模板特异性在大多数扩增技术中通过选择酶而实现。扩增酶是这样的酶，其在它们被使用的条件下，在核酸的不均一混合物中，将仅仅加工特定的核酸序列。例如，r"《和p/"聚合酶，由于它们能在高温下发挥作用，因此发现它们对结合的序列显示出高特异性，并因此被引物限定；高温导致了有利于引物和目标序列杂交而不与非目标序列杂交的热动力学条件。如本文中所使用的，当术语"靶"用来指聚合酶链式反应时，是指被用于聚合酶链式反应的引物结合的核酸的区域。如本文中所使用的，术语"引物"是指寡核苷酸，无论是作为纯化的限制性消化产物天然存在的，或者合成产生的，当放置在与核酸链互补的引物延伸产物的合成被诱导的条件下(即在核苷酸和诱导剂诸如DNA聚合酶存在的条件下和在合适的温度和pH中)，该寡核苷酸能够充当合成的起始点。引物优选是单链的，以获得最大的扩增效率，但是可选择地可以是双链的。如果是双链的，在用于制备延伸产物前，引物首先进行处理，以将它的链分开。优选地，引物是寡脱氧核糖核苷酸。引物必需足够长，以在诱导剂的存在下起始延伸产物的合成。引物精确的长度将取决于许多因素，包括温度、引物来源和使用方法。如本文中所使用的，术语"探针"是指寡核苷酸(即核苷酸序列)，无论是作为纯化的限制性消化产物天然存在的，或者合成、重组、或通过PCR扩增产生的，其能够与另一目标寡核苷酸杂交。探针可以是单链的或双链的。探针可用于检测、鉴定和分离特定的基因序列。据认为用于本发明的任何探针可以用任何"报道分子"标记，这样在任何检测系统中是可检测的，检测系统包括但不限于酶(例如ELISA和基于酶的组织化学分析)、荧光、放射和发光系统。不希望本发明受到特定的检测系统或标记的限制。如本文中所使用的，术语"聚合酶链式反应"("PCR")是指Mullis的方法(美国专利No.4,683,195、4,683,202和4,965,188，它们的全文以引用的方式并入本文)，其包括增加在基因组DNA混合物中靶序列片段的浓度，不包括克隆或纯化。用于扩增靶序列的该方法由下述步骤组成将过量的两条寡核苷酸引物加入到含有期望的靶序列的DNA混合物中，然后在DNA聚合酶存在下进行精确有序的热循环。两条引物分别与双链靶序列的两条链互补。为了实现扩增，将混合物变性，然后使引物与它们在靶分子内的互补序列退火。退火之后，用聚合酶延伸引物，以便形成一对新的链。变性、引物退火和聚合酶延伸的步骤可以重读多次(即变性、退火和延伸可以构成一个"循环"，可以有多个"循环")，以获得高浓度的期望靶序列的扩增片段。期望靶序列的扩增片段的长度可以由引物相互之间的位置决定，因此长度是可控参数。依据该方法的重复性，该方法称为"聚合酶链式反应"(下文中为"PCR")。因为靶序列的期望的扩增片段成为混合物中主要的序列(就浓度而言)，它们被叫作"PCR扩增的"。应用PCR，有可能将基因组DNA中的单拷贝的特异性靶序列扩增到用若干不同方法可以检测的水平(例如，与标记探针杂交；掺入生物素化的引物，然后进行抗生物素蛋白-酶偶联物检测；将32P-标记的脱氧核糖核苷三憐酸(如dCTP或dATP)掺入到扩增片段中)。除了基因组DNA以外，任何寡核苷酸或多核苷酸序列可以使用合适的引物分子对进行扩增。特别地，由PCR方法产生的扩增片段本身就是随后PCR扩增的有效模板。如本文中所使用的，术语"PCR产物"、"PCR片段"和"扩增产物"是指在两个或多个循环的变性、退火和延伸的PCR步骤完成之后得到的化合物的混合物。这些术语涵盖已经扩增出一个或多个靶序列的一个或多个片段的情况。如本文中所使用的，术语"扩增试剂"是指扩增所需的除引物、核酸模板和扩增酶之外的那些试剂(脱氧核糖核苷三磷酸、缓冲液等)。典型地，扩增试剂和其他反应组分一起放置和包含在反应容器(试管、微孔等)中。如本文中所使用的，术语"限制性内切核酸酶"和"限制性酶"是指细菌酶，它们中的每一个在特异性核苷酸序列上或附近切割双链DNA。如本文中所使用的，术语"重组DNA分子"在本文中用于指由通过分子生物技术而彼此结合的DNA的片段构成的DNA分子。如本文中所使用的，术语"反义"用来指与特异性RNA序列(例如mRNA)互补的RNA序列。本定义中包括细菌基因调节中涉及的反义RNA("asRNA")分子。反义RNA可以通过任意方法制备，包括以反义方向使目的基因与允许编码链合成的病毒启动子相剪接进行的合成。例如，一旦将被转录链导入胚胎，那么该转录链与胚胎产生的天然mRNA合并而形成双链体。这些双链体将阻断mRNA的进一步转录或阻断其翻译。按照这种方式可以产生突变体表型。术语"反义链"用来指与"有义"链互补的核酸链。命名为(-)(即"负")有时用来指反义链，而命名为(+)有时用来指有义("正")链。可以使用可得到的计算分析方法测定反义分子可介入的核酸序列区。当术语"分离的"用于核酸时，如同在"分离的寡核苷酸"或"分离的多核苷酸"中那样，是指经鉴定并从在其天然来源中其通常所结合的至少一种污染物核酸中分离出来的核酸序列。分离的核酸是在有别于其天然可见的形式或背景下存在的。相反，未分离的核酸是以它们天然存在的状态所见到的核酸，例如DNA和RNA。例如，给定的DNA序列(例如基因)见于宿主细胞染色体上靠近相邻基因处；RNA序列(如编码特异性蛋白的特异性mRNA序列)作为与众多编码蛋白的其他mRNA的混合物见于细胞中。然而，编码MC4R的分离的核酸包括(作为举例)通常表达MC4R的细胞之中的所述核酸处于不同于天然细胞的染色体定位、或者以其他方式侧接了与天然所见的不同的核酸序列的此种核酸。分离的核酸、寡核苷酸或多核苷酸可以以单链的或双链的形式存在。当分离的核酸、寡核苷酸或多核苷酸用于表达蛋白时，寡核苷酸或多核苷酸将至少包含有义链或编码链(即，寡核苷酸或多核苷酸可以是单链的)，但可含有有义链和反义链两者(即，寡核苷酸或多核苷酸可以是双链的)。如本文中所使用的，当术语"部分"用来指核苷酸序列(如在"给定核苷酸序列的一部分"中那样)时，是指该序列的片段。所述片段大小可以从四个核苷酸至全部核苷酸序列减去一个核苷酸(IO个核苷酸、20、30、40、50、100、200等)的范围内变化。如本文中所使用的，当术语"编码区"用来指结构基因时，是指作为mRNA分子翻译的结果，编码在新生多肽中发现的氨基酸的核苷酸序列。在真核细胞中，编码区通过编码引发剂蛋氨酸的核苷酸三联密码"ATG"结合在5'侧，并且通过指定停止密码子的三个三联密码(即TAA、TAG、TGA)中的一个结合在3'侧。如本文中所使用的，术语"纯化的"或"纯化"是指从样品中除去污染物。例如，HIV-lEnv抗体通过除去污染的非免疫球蛋白蛋白质而纯化；它们也通过除去不与HIV-1Env结合的免疫球蛋白而纯化。非免疫球蛋白蛋白质的去除和/或不与HIV-1Env结合的免疫球蛋白的去除导致样品中HIV-1Env-反应性免疫球蛋白的百分比增加。在另一个实施例中，重组HIV-lEnv多肽在细菌宿主细胞中表达，并且所述多肽通过除去宿主细胞蛋白而纯化；进而样品中重组HIV-1Env多肽的百分比增加。术语"重组DNA"是指由通过分子生物技术而彼此结合的DNA的片段构成的DNA分子。类似地，术语"重组蛋白"是指由重组DNA表达的蛋白分子。如本文中所使用的，术语"融合蛋白"是指通过对将两个基因序列合并来制得的杂交基因进行表达而形成的蛋白。典型地，这可通过使用现有的基因将cDNA克隆到框内表达载体中来完成。蛋白伙伴(fusionpartner)可发挥受体的作用(例如(3gal)，可以提供用于分离目的的工具(例如GST)，或者可以增加蛋白体内的半衰期(例如IgGFc)。适于产生重组蛋白的合适的系统包括但不限于原核生物(例如^cAen'c/7^co//)、酵母菌(例如Sacca/ww少c^cerev/w'ae)、昆虫(例如baculovirus)、喃乳动物(例如中国仓鼠卵巢)、植物(例如红花)和无细胞系统(例如兔网状细胞)。如本文中所使用的，术语"天然蛋白"表示蛋白不含由载体序列编码的氨基酸残基；也就是说天然蛋白仅含天然存在的蛋白中可见的那些氨基酸。天然蛋白可通过重组方式来生产，或者可从天然存在的来源中分离。如本文中所使用的，当术语"部分"涉及蛋白(如在"给定蛋白的一部分"中那样)时，是指该蛋白的片段。所述片段大小可以从四个连续的氨基酸残基至全部氨基酸序列减去一个氨基酸的范围内变化。术语"DNA印迹"是指在琼脂糖或丙烯酰胺凝胶上分析DNA以根据大小分级DNA，接着将DNA从凝胶中转移到固相支持物上，例如硝酸纤维素或尼龙膜。然后用标记探针探测固定的DNA，以检测与所用探针互补的DNA物质。所述DNA可在电泳前由限制性内切酶切割。在电泳后，所述DNA可在向固相支持物转移之前或期间部分脱嘌呤和变性。DNA印迹是分子生物学的标准工具(Sambrook等人，Mo〖ecw/wC/om—Jtg:/1丄a6orafo7Afa"wa/，ColdSpringHarborPress,NY,pp9.31-9.58，1989)。如本文中所使用的，术语"RNA印迹"是指通过琼脂糖凝胶上的RNA电泳以根据大小分级RNA，接着将RNA从凝胶中转移到固相支持物上，例如硝酸纤维素或尼龙膜。然后用标记探针探测固定的RNA，以检测与所用探针互补的RNA物质。RNA印迹是分子生物学的标准工具(Sambrook，等人，s，ra,pp7.39-7.52,1989)。术语"蛋白质印迹"、"蛋白质免疫印迹"、"免疫印迹"和"Western"是指免疫分析固定在膜支持物上的蛋白质、多肽或肽。首先通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(即SDS-PAGE)来将蛋白质溶解以将蛋白质分离，接着将蛋白质从凝胶转移到固相支持物上，例如硝酸纤维素或尼龙膜。然后将固定的蛋白质暴露于对于目的抗原具有反应性的抗体。通过使用特异地结合初级抗体的次级抗体来检测抗体(即初级抗体)的结合。次级抗体通常与这样的酶偶联，所述酶通过产生显色的反应产物或催化荧光酶反应(例如ECL试剂、Amersham)来使抗原-抗体复合物可见。在其他实施方案中，可通过使用放射标记的次级抗体来检测初级抗体的结合。如本文中所使用的，术语"抗原决定簇"是指抗原与特定抗体接触的部分(即表位)。当蛋白或蛋白片段用于免疫宿主动物时，蛋白的许多区可诱导产生与蛋白指定区域或三维结构特异结合的抗体；这些区域或结构被称为抗原决定簇。抗原决定簇可与完整的抗原(即用于引起免疫应答的"免疫原")竞争与抗体的结合。术语"抗体"是指多克隆抗体和单克隆抗体。作为对于目的蛋白或其片段进行免疫反应的结果而在动物中形成的多克隆抗体然后可以使用熟知的方法从血液中容易地分离，并通过柱层析色谱法进行纯化，例如也可以使用己知的方法制备单克隆抗体(例如参见，WinterandMilstein，Atowre，349,293-299，1991)。如本文中所使用的，术语"抗体"涵盖重组制备和修饰的抗体及其抗原结合片段，例如嵌合抗体、人源抗体、多功能抗体、双特异性或寡特异性抗体、单链抗休和F(ab)或F(ab)2片段。术语"反应性"用来指这样的抗体，该抗体能够与目的抗原结合。例如，HIV-1促黑素细胞激素表位-反应性抗体是与HIV-1gpl20或HIV-lgpl20片段(例如，包含SEQIDNO:17的氨基酸序列的肽)结合的抗体。如本文中所使用的，术语"免疫测定法"是指任何使用至少一种特异性抗体来检测或定量抗原的测定法。免疫测定法包括但不限于蛋白质印迹法、ELISA法、放射免疫测定和免疫荧光测定法。许多不同的ELISA格式都是本领域已知的，所有这些都在使用本发明中发现。然而，并不希望本发明受到这些测定法的限制。如本文中所使用的，术语"ELISA"是指酶联免疫吸附测定(或EIA)。许多ELISA法和应用是本领域已知的，并且在许多文献中有所描述(例如参见，Crowther,"Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay(ELISA)，"inMo/ecw/ar5/ow"/7ocfe//aw必ooA:,Rapley等人[eds.]，pp.595-617，HumanaPress,Inc.,Totowa，NJ,1998;HarlowandLane(eds.)，爿"0'&odiw爿丄a6on^"M""w"/,ColdSpringHarborLaboratoryPress,1988;Ausubel等人(eds.),Cwre"//Woco/s/"Mo/"w/"r肠/ogy,Ch.11，JohnWiley&Sons,Inc.,NewYork,1994)。另外，还有许多市售的ELISA测试系统。如本文中所使用的，"检测抗体"是发挥可见或定量作用的抗体，其通常是偶联的酶部分，在加入合适的底物后通常产生颜色或荧光反应产物。在ELISA中通常与使用的检测抗体偶联的酶包括辣根过氧化物酶、脲酶、碱性磷酸酶、葡糖淀粉酶和p-半乳糖苷酶。在一些实施方案中，检测抗体针对目的抗原，而在其他实施方案中，检测抗体是抗物质型(anti-species)抗体。可选择地，检测抗体使用标记(如生物素、荧光标记或放射线同位素)来制备并使用该标记来进行检测和/或定量。如本文中所使用的，术语"报道试剂"、"报道分子"、"检测底物"和"检测试剂"用来指允许与抗原结合的抗体的检测和/或定量的试剂。例如，在一些实施方案中，报道试剂是与抗体偶联的酶的比色底物。将合适的底物导入抗体-底物偶联物中导致比色信号或荧光信号的产生(例如在结合与目标抗原偶联的抗体后)。其他报道试剂包括但不限于放射性化合物。这种定义还涵盖使用生物素和抗生物素蛋白基化合物(如包括但不限于neutravidin和streptavidin)作为检测系统的一部分。如本文中所使用的，术语"转基因"是指这样的外源基因，通过将该外源基因导入新的受精卵或早期胚体中来将外源基因置于有机体中。术语"外源基因"是指通过试验控制而导入动物基因组中的任意核酸(例如基因序列)，并且可以包括在该动物中发现的基因序列，只要导入的基因不存在与天然存在的基因所在位点相同的位点即可。如本文中所使用的，术语"载体"用来指将DNA区段从一个细胞转移至另一个细胞的核酸分子。术语"赋形剂"有时与"载体"替换使用。如本文中所使用的，术语"表达载体"是指含有可操作地连接的编码序列在特定的宿主微生物中表达需要的所期望的编码序列和合适的核酸序列的重组DNA分子。在原核生物中表达所需要的核酸序列通常包括启动子、操作子(可任选的)和核糖体结合位点，并且经常是与其他序列一起的。巳知真核细胞使用启动子、增强子以及终止和多腺苷酸化信号。如本文中所使用的，术语宿主细胞是指不管是位于体外还是位于体内的任何真核细胞或原核细胞(例如，诸如￡.co/i之类的细菌细胞、酵母菌细胞、哺乳动物细胞、禽类细胞、两栖类细胞、植物细胞、鱼类细胞和昆虫细胞)例如，宿主细胞可位于转基因动物中。如本文中所使用的，术语"转染"是指将外源DNA导入真核细胞。转染可通过本领域已知的多种方法来完成，包括磷酸钙-DNA共沉淀法、DEAE-葡聚糖介导的转染法、polybrene介导的转染法、电穿孔法、微量注射法、脂质体融合法、脂转染法、原生质体融合法、反转录病毒感染法和生物射弹法。术语"稳定转染"或"稳定地被转染"是指将外源DNA导入并整合到转染细胞的基因组中。术语"稳定转染子"是指将外源DNA稳定地整合到基因组DNA中的细胞。术语"瞬时转染"或"瞬时地被转染"是指如果外源DNA无法整合到转染细胞的基因组中，则将外源DNA导入细胞。外源DNA在转染细胞的核中存在数天。在此期间，外源DNA受到管理内源性基因在染色体中表达的调控。术语"瞬时转染子"是指导入外源DNA但无法整合该DNA的细胞。术语"磷酸钙共沉淀法"是指将核酸导入细胞中的方法。当核酸以磷酸钙-核酸共沉淀的形式存在时，增强了核酸向细胞中的导入。许多研究组改进了GrahamandvanderEb(GrahamandvanderEb，Virol,52:456,1973)的初始的技术，从而优化了用于特定类型的细胞的条件。文献中有许多这种改进。术语"受试化合物"是指可用于治疗或预防疾病、病害、病患或身体技能紊乱，或另外改变样品生理学或细胞状态的任何化学物、药剂、药物等。受试化合物包括已知和潜在的治疗化合物。受试化合物可以通过采用本发明的筛选方法来确定要是治疗的。"己知的治疗化合物"是指在这种治疗或预防中已经显示有效的化合物(如通过动物试验或先前给予人类的经验)。术语"患者"和"受试者"是指为用于接受药物处理的候选者的哺乳类(人或动物)。术语"对照"是指提供试验比较受试者或样品的背景的受试者或样品。例如，对照受试者或样品的使用允许根据试验方法的效果来指定检测方法。在一些实施方案中，术语"对照受试者"是指接受模拟处理(例如仅使用PBS或盐水中的正常兔IgG)的动物。术语"样品"和"样本"以其最广泛的意义使用。一方面，它们是指包括样本或培养物。另一方面，它们是指包括生物样品和环境样品。这些术语涵盖所有由人和其他动物中获得的样品的所有类型，包括但不限于体液，如尿液、血液(例如包括血清或血浆)；排泄物.，脑脊髓液；精液；唾液和伤口分泌液以及固体组织。然而，这些例子不应当理解为对适用于本发明的样品类型的限制。如本文中所使用的，术语"白细胞"是指被称为白血细胞(其帮助机体抵御感染和其他疾病)的细胞，包括(例如)粒细胞(例如嗜中性粒细胞、嗜曙红细胞、嗜碱白血球)、单核吞噬细胞和淋巴细胞(例如B细胞、T细胞、自然杀伤细胞)。如本文中所使用的，术语"纯化的"是指从天然环境中除去的、分离的或分开的分子(例如核酸或氨基酸序列)。因此"分离的核酸序列"是纯化的核酸序列。"基本上纯化的"分子是至少60%、优选至少75%、更优选至少卯％没有可天然存在的其他组分。如本文中所使用的，术语"激动剂"是指模拟"内源"或"天然"化合物的作用的分子或化合物。激动剂可以与这些天然化合物在构象、变化或其他特性方面一致。因此，激动剂可以被在细胞表面上表达的受体识别。这种识别可导致细胞内生理和/或生物学上发生变化，使得细胞在激动剂的存在下按照与天然化合物的存在下相同的方式发生反应。激动剂可包括蛋白、核酸、碳水化合物、或与黑皮质素受体结合或相互反应的任何其他分子。如本文中所使用的，术语"拮抗剂"和"抑制剂"是指抑制"内源"或"天然"化合物的作用的分子或化合物。拮抗剂在与这些天然化合物在构象、变化或其他特性方面可以一致，也可以不一致。因此，拮抗剂可以被激动剂所识别的相同或不同受体识别。掊抗剂可以具有变构象作用，这抑制了激动剂的作用(例如抑制HIV-l促黑素细胞激素表位或HIV-lgpl20与黑皮质素受体结合)。与激动剂相反，拮抗剂化合物在细胞内未导致生理和/或生物学上发生变化，使得细胞在不存在拮抗剂的条件下按照与天然化合物的存在下相同的方式发生反应。拮抗剂和抑制剂可包括蛋白、核酸、碳水化合物、或与黑皮质素受体、包含HIV-1促黑素细胞激素表位的多肽结合或相互反应，或者抑制黑皮质素受体受到包含HIV-1促黑素细胞激素表位的多肽刺激的任何其他分子。如本文中所使用的，术语"提供预后"是指提供有关HIV-1感染的存在对于受试者将来的健康的影响的信息(例如，包括确定与其他感染HIV-1的个体相比，发生与HIV-1有关的恶质病、消耗疾病、T调节细胞功能异常和CNS疾病中的一种或多种疾病的可能性或相反风险)。如本文中所使用的，术语"使用所述试剂盒的说明书"包括有关使用试剂盒中所含的试剂在来自受试者的样品中检测病原性(如HIV-1)促黑素细胞激素表位-反应性抗体的说明书。在一些实施方案中，所述说明书还包括美国食品药品监督管理局(FDA)所要求的有关标注体外诊断产品的目的用途的声明。FDA将体外诊断归类为医疗器械，并要求其通过510(k)或分析物特殊试剂(ASR)手续批准。510(k)申请所需信息包括1)体外诊断产品的名称，包括商品名或专利商品名、通用名或常用名，以及装置的分类名；2)产品的目的用途；3)如果适用的话，递交510(k)呈递书的所有人或操作者的机构登记号；如果已知的话，所述体外诊断产品依FD&C法513章所处的分类、其合适的组别，或者如果所有人或操作者判定所述装置未依此章分类，(应提交)这种判定以及判定所述体外诊断产品未如此分类的根据的声明；4)建议的足以描述所述体外诊断产品的商标、标签及广告，其目的用途、以及使用说明书。适用的情况下，应提供照片或工程图；5)表明所述装置类似于和/或有别于美国商业流通中可比类型的其他体外诊断产品的声明，并附具支持该声明的数据；6)作为实质等同判定基础的安全性和有效性数据的510(k)总结；或者支持FDA发现实质等同的510(k)安全性和有效性信息将在书面请求书的30之内公诸于众的声明；7)递交人确信据其所知在上市前通告中所递交的所有数据和信息真实准确且未遗漏重要事实的声明；8)FDA做出实质等同判定所必需的有关所请求体外诊断产品的任何附加信息。附加信息可在美国FDA的互联网页获得。发明详述本发明涉及由HIVI型包膜糖蛋白引起的异常细胞信号传导。特别地，本发明提供用于鉴定由HIV-1gpl20及其降解产物引起的黑皮质素受体途径剌激的抑制剂的组合物和方法。如此鉴定的抑制剂被认为适于治疗与HIV有关的恶病质、T细胞的超活化和中枢神经系统疾病。I.黑皮质素系统在其他肽类激素中，黑皮质素是一组阿黑皮素原(POMC)衍生肽，包括促皮质素(ACTH)以及a-、p-和y-促黑素细胞激素(MSH)(例如参见，Raffin-Sanson等人，EurJEndocrinol,149:79-90,2003)。这些生物活性肽起到细胞表面黑皮质素受体的内源性激动剂的作用，并且在类固醇生成、色素沉着、消炎、食物摄入、能量消耗和性行为的控制方面扮演许多生理学上的角色。分子克隆研究表明黑皮质素受体存在五个亚型(被称为MC1R、MC2R、MC3R、MC4R禾nMC5R)，它们形成了G蛋白偶联受体的独特的家族。所有五个黑皮质素受体通过刺激G蛋白来激活腺苷酸环化酶，从而提高细胞内的cAMP(Cone,NatureNeuroscience，8:571-578,2005)。受体的五个亚型可通过它们的组织分布、生理学功能和它们识别多种黑皮质素肽的能力(表1)来区分。黑皮质素-4受体(MC4R)在多个中枢神经系统(CNS)位点中表达，并且在维持体重平衡方面表现出关键的作用(O'Rahilly等人，NatureMedicine,10:351-352,2004;以及Huszar等人，Cell,88:131-141,1997)。黑皮质素-4受体的激活通过降低食物摄取和增加能量消耗来减少体内脂肪蓄积(Balthasar等人，Cell,123:493-505,2005)。近期的研究表明了通过黑皮质素-4受体直接中枢调节至白色脂肪组织的交感神经传出，进而导致脂类动员和降低肥胖的证据(Berthound等人,AmJPhysiolRegulIntegrCompPhysiol,289:1236-1237，2005)。下列事实证实了黑皮质素-4受体在人的能量平衡中的重要性黑皮质素-4受体的突变现在已被认为是人的单基因肥胖的最常见的形式(Srinivasan等人，JClinInvest,114:1158-1164;O'Rahilly等人，NatureMedicine,10:351-352,2004;以及Farooqi等人，NEngiJMed,348:1085-1095,2003)。II.HIV-l包膜糖蛋白HIV包膜(Eiw)糖蛋白介导病毒与宿主细胞的结合以及随后的膜的融合(WyattandSodroski，Science,280:1884-1888,1998)。gpl60包膜糖蛋白在合成过程中装配为三聚体，并且在转运至感染的细胞表面的过程中被切割为胞外域(gpl20)片段和跨膜(gp41)片段。切割允许Env在与CD4受体结合(Dalgleish等人,Nature,312,763-767,1984;以及Klatzmann等人，Nature,312:767-768，1984)以及与CXCR4或CCR5共同受体结合(Feng等人，Science,272:872-877,1996;Trkola等人，Nature,384:184-187,1996;以及Wu等人，Nature,384:179-183,1996)时发生构象变化。对来自多个病毒分离物的gpl20氨基酸序列进行比(Starcich等人，细胞，45:637-648,1986)。gpl20胞外域的保守区形成了对于与gp41跨膜域的相互作用和对于与宿主细胞上的病毒受体的相互作用来说都很重要的结构。人们在明晰包膜结构和功能之间的关系的同时测定了HIVgpl20的晶体结构(例如参见，Berger,NatureStructureBiology,5:671-674;Kwong等人，Nature,393:648-659,1998;MooreandBinley，Nature,393:630-631，1998;Rizzuto等人，Science,280:1949-1953;WyattandSodroski,Science,280:1884-1888,1998;以及Wyatt等人，Nature,393:705-711，1998)。gpl20糖蛋白由包膜复合体脱落，并且可以在AIDS患者的血清中发现浓度为约12-92ng/ml(Schneider等人，JGenVirol,67:2533-2538，1986;以及Oh等人，JAIDS,5:251-256,1992)。在自然感染过程中，gpl20引出病毒中和抗体和非中和抗体。非中和抗体经常针对在可溶性gpl20中暴露的但在三聚体包膜复合体中是隐蔽的gpl20区域。相反，中和抗体识别三聚体包膜复合体中的表位(通常在与受体结合位点相邻的gpl20的区域)(SattentauandMoore，JExpMed，182:185-196，1995;以及MooreandSodroski，JVirol,70:1863-1872,1996)。HIV-1gpl20显示出易受V3环切的影响，从而产生70kDa和50kDa两个片段(WernerandLevy，JVirol，67:2566-2574，1993)。特别地，在使用HIV-1gpl20对应于IIIB分离的研究中，人们发现凝血酶和类胰蛋白酶在胰蛋白酶位点(如SEQIDNO:32表征的GPGR/AFVT)处切割gpl20，而组织蛋白酶E在胰凝乳蛋白酶样位点(如SEQIDNO:32表征的GPGRAF/VT)处切割gpl20(Clements等人，AIDSResHumRetroviruses,7:3-16,1991)。还证实的是在CD4结合引起的构象变化后，凝血酶样蛋白酶在如SEQIDNO:32表征的GP/GRAFVT处切割gp120(Johnson等人，FEBSLett,337:4-8，1994)。由于随后T-细胞膜与丝氨酸蛋白酶有关，因此发现类胰蛋白酶TL2在V3环内切割gp120(Niwa等人，EurJBiochem，237:64-70,1996)。本发明认为一个或两个gpl20降解片段(例如，70kDaN端片段和/或50kDaC端片段)在与HIV-1有关的病理学中发挥作用。III.HIV-1gpl20介导AIDS的病理假设由HIV-1gpl20对宿主肽的构象模拟在AIDS病理的多种方面发挥作用。事实上，在发展本发明之前，本发明人提出gpl20的第二变异区的片段(ASTTTNYT，对应于HIV-1SF2序列的残基185-192，如SEQIDNO:22表征)的肽T模拟，MSH激素(Dominy，MedHypothesis,27:1-4,1988)。尽管没有证实这种假设，但是对于HIV-1gpl20的氨基酸序列的进一步的分析表明，如本文中实施例l中所述，促黑素细胞激素表位位于HIV-1gpl20的C端附近。具体而言，在发展本发明的过程中，发现HIV-1gpl20的第五保守域(包括第五a螺旋和第二十五P片层之间的残基)的、被成为G25G(SEQIDNO:17)的肽是MC4R的弱激动剂(图7和8)。另外，如本文中首次所示，发现按照与G25G肽的序列的相反方向的方式合成的、被称为K13M(SEQIDNO:6)的肽和a-MSH、(3-MSH、Y-MSH和ACTH—样具有相同的关键的色氨酸、精氨酸和酪氨酸残基(图l)。重要的是，还发现K13M肽是MC4R的弱激动剂(图9).A.AIDS消耗综合征本发明认为HIV-1gpl20或其降解产物中的促黑素细胞激素表位在体内与MC4R或其他CNS细胞表面分子结合并将它们激活，从而在与HIV有关的恶病质和AIDS消耗综合征的发展中发挥作用。特别地，据认为MC4R受到HIV-1gpl20的慢性刺激有助于食欲减退和增加能量消耗。在查阅本发明的上下文时，近期的研究提供了对本发明的支持。具体而言，人们发现HIV-lgpl20在包括患有与HIV-l有关的痴呆的患者中、在疾病的所有阶段都存在于中枢神经系统中(Ritola等人，JViroI,79:10830-10834,2005)。而且，与仅接受赋形剂的对照大鼠相比，每日侧脑室施用HIV-lIIIBgp120，施用5天，显著地降低了大鼠的食物和水的摄取量(Guzman等人，NeurosciLett,396:50-53,2006)，从而降低了重量的增加。尽管不需要机理方面的知识來实施和使用本发明并且本发明并不限于任何特定的作用机理，但是认为由于感染HIV-l的细胞而引起的gpl20的自然脱落与分泌肽类激素的外分泌腺的情况类似。在类似的扩展中，MC4R的主要内源性配体(x-MSH在浓度为30pg/ml是生理学上活性的，而HIV-1gpl20在AIDS患者的循环浓度为12-92ng/ml级(例如大3倍)。因此，认为超生理性浓度的gpl20与神经肽激素竞争与MC4R结合。B.调解性T细胞的功能异常另外为了在体重平衡中发挥重要作用，黑皮质素系统在调节T细胞激活的水平方面是关键的。通过在抗原致敏型T细胞的表面上表达的黑皮质素-5受体(MC5-R)，a-MSH刺激了CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的发展。CD4+CD25+调解性T细胞反过来部分通过释放转化生长因子(TGF)-p来抑制其他T细胞亚型的激活(TaylorandNamba，ImmunolCellBiol,79:358-367，2001)。近期已经在CD4+T细胞中发现了高水平的MC1R、MC2R和MC3RmRNA以及MC5RmRNA，而在NK细胞、单核细胞和粒细胞中发现中等水平的这些mRNA(Anderson等人，ScandJImmunol,61:279-284，2005)。本发明认为HIV-1gpl20在体内通过SEQIDNO:17的病毒促黑素细胞激素表位与MC1R、MC2R、MC3R和MC5R中的一种或多种结合并使它们激活。HIV-1gpl20的黑皮质素受体刺激肽的鉴定如用于MC5R的实施例2中所述的那样确定。具体而言，本发明认为与抗原致敏型T细胞上的MC5R或其他细胞表面分子结合的HIV-1包膜促黑素细胞激素表位干扰CD4+CD25+调解性T细胞的发展。调解性T细胞数量的减少表明其本身免疫学上过度刺激。实际上，正在积累AIDS的进展与€04+CD25+调解性T细胞的降低和T细胞的超活化的增加之间的关系的证据(Nixon等人，MicrobesInfect,7:1063-1065，2005)。另一方面，cc-MSH(MC5R和MC4R的内源性配体)的血浆水平的提高与感染HIV的患者的存活率的增加有关。具体而言，无进展因子的情况下a-MSH的循环浓度大于有进展因子的情况下oc-MSH的循环浓度，而白细胞介素-l-受体拮抗剂和可溶性肿瘤坏死因子受体的循环浓度则未观察到这种关联(Airaghi等人，JLabClinMed,133:309-315,1999)。C.中枢神经系统疾病在普遍使用高效抗逆转录病毒疗法(HAART)的时期，与HIV有关的神经精神性疾病不断增多。据估计，30Y。的感染HIV-1的成年人受到轻微认知运动损害障碍的影响。另外，尽管使用了HAART，但是10y。的感染的患者将发展与HIV-l有关的痴呆。事实上在美国，HIV-1感染是年轻人的痴呆的最主要的病因。基础研究使与HIV有关的中枢神经系统(CNS)疾病涉及HIV-1包膜糖蛋白(被称为gpl20)。分别在CNS中表达HIV-1gpl20和gpl60的两系转基因小鼠表明了神经病理学(Toggas，Nature,367:188-193,1994;以及Berrada等人，JVirol,69:6770-6778,1995)。本发明认为HIV-lgpl20或其降解产物中的促黑素细胞激素表位在体内与一个或多个CNS细胞表面分子结合并使它们激活，从而在HIV-CNS疾病的发展中发挥作用。特别地，据认为CNS受体受到含有促黑素细胞激素表位的HIV-1包膜片段的慢性刺激有助于与HIV有关的神经精神性疾病。IV.病毒促黑素细胞激素表位-反应性抗体的制备在一些实施方案中，提供抗体以允许检测含有病毒促黑素细胞激素表位的蛋白。抗体可以使用多种免疫原来制备。在一个实施方案中，免疫原是对应于用于制备识别HIV-lsF2gpl20的抗体的HIV-lsF2促黑素细胞激素表位(SEQIDNO:17)的合成肽。这种抗体包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库。在其他优选的实施方案中，HIV-1促黑素细胞激素表位由基因八肽序列WRXXXXXY(SEQIDNO:31)所限定，其中在位置1处的W、在位置2处的R和在位置8处的Y都是不变体，X可以是二十个天然人氨基酸中任何的氨基酸。因此，本发明的HIV-1促黑素细胞激素表位包含至少8个氨基酸。然而，在优选实施方案中，本发明的组合物和方法包含由HIV-lsF2促黑素细胞激素表位(SEQIDNO:17)构成的多肽、含有HIV-lsF2促黑素细胞激素表位(SEQIDNO:17)的多肽、以及由HIV-lsF2促黑素细胞激素表位(SEQIDNO:17)构成的或含有HIV-lsF2促黑素细胞激素表位(SEQIDNO:17)的多肽。在特别优选的实施方案中，变体包括相对于SEQIDNO:17具有l至22(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22)个保守性氨基酸变化(例如替代)的HIV-1促黑素细胞激素表位，使得保持或基本上保持与MC4R或MC5R中一者或两者的结合。在进一步优选的实施方案中，变体包括相对于SEQIDNO:17具有l至22个保守性或非保守性氨基酸变化(例如替代)的HIV-1促黑素细胞激素表位，使得保持或基本上保持与MC4R或MC5R中一者或两者的结合。在更进一步的实施方案中，变体包括相对于SEQIDNO:17具有l至8(例如，1、2、3、4、5、6、7或8)个更少的N-端氨基酸禾n/或具有l至9(例如，1、2、3、4、5、6、7、8或9)个更少的C-端氨基酸的HIV-1促黑素细胞激素表位，使得保持或基本上保持与MC4R或MC5R中一者或两者的结合。在特别优选的实施方案中，HIV-1促黑素细胞激素表位的变体包括SEQIDNO:17表征的氨基酸序列的变体，其中在位置9处的W、在位置10处的R和在位置10处的Y都是不变体，使得保持或基本上保持与MC4R或MC5R中一者或两者的结合。本领域己知的各种方法可用于制备针对病毒促黑素细胞激素表位的多克隆抗体。为了制备抗体，可以通过注射对应于病毒促黑素细胞激素表位的肽来对多种宿主动物(包括但不限于兔、小鼠、大鼠、绵羊和山羊等)进行免疫。在优选的实施方案中，肽与免疫原载体(例如，白喉类毒素、牛血清白蛋白、匙孔血蓝蛋白等)接合。取决于宿主种类，可使用多种佐剂(包括但不限于Fremid's(完全和不完全)、矿物凝胶(例如氢氧化铝)、表面活性物质(例如溶血卵磷脂、pluronic多元醇、聚阴离子、肽、油状乳液、血蓝蛋白、二硝基酚和诸如BCG(卡介苗)之类的潜在有用的人佐剂)来增加免疫应答。为了制备针对病毒促黑素细胞激素表位的单克隆抗体，据认为提供用来由培养中的连续细胞系产生抗体分子的任何技术都将都本发明中发现具有用处(例如参见，HarlowandLane,爿w/7'6o(^'es..j丄fl60n3fOA"yA/awwa/，CoW5]pr/wgT/ar6or丄a60rfl/0a"3;P"m，ColdSpringHarbor，NY)。这些技术包括但不限于用于制备人单克隆抗体的杂种瘤技术(K池lerandMilstein，Nature,256:495-497，1975;以及Cote等人，ProcNatlAcadSci,USA80:2026-2030，1983)以及三系杂交瘤技术和EBV-杂种瘤技术(Cole等人，Mowoc/owa/am/Ccmcer7Tzera/^，AlanR.Liss,Inc.,pp.77-96，1985)。在本发明的另外的实施方案中，单克隆抗体使用诸如PCT/US90/02545中所述的技术来在无菌动物中产生。另外，据认为单链抗体(美国专利No.4,946,778;以引用的方式并入本文)的制备中描述的技术都将在病毒促黑素细胞激素表位-特异性单链抗体的制备中发现具有用处。本发明的另外的实施方案使用构建Fab表达文库中描述的技术(Huse等人，Science246:1275-1281,1989)使得快速和简便地鉴定对于HIV-1gpl20具有所需的特异性的单克隆Fab片段。据认为任何合适地制备抗体片段的技术都将在含有抗体分子独特型(抗原结合区)的抗体片段的产生发现具有用处。例如这些片段包括但不限于可以通过抗体分子的胃蛋白酶消化产生的F(ab')2片段；可以通过使F(ab')2片段的二硫键还原而产生的Fab'片段；以及可以通过用木瓜蛋白酶和还原剂处理抗体分子产生的Fab片段。在抗体的制备中，据认为通过下列本领域己知的方法会完成对所需抗体的筛选例如放射免疫测定法、ELISA(酶联免疫吸附测定法)、"夹心"免疫测定法、免疫放射测定法、凝胶扩散沉淀反应法、免疫扩散测定法、原位免疫测定法(例如胶体金、酶或放射线同位素标记)、蛋白质印迹法、沉淀反应法、凝集测定法(例如凝胶凝集测定法、血凝测定法等)、补体结合测定法、荧光免疫测定法、蛋白A测定法以及免疫电泳测定法。在一个实施方案中，通过检测初级抗体上的标记来检测抗体结合。在另一个实施方案中，通过检测次级抗体或试剂与初级抗体的结合来检测初级抗体。在进一步的实施方案中，次级抗体是标记的。许多用于对免疫测定中的结合进行检测的方式都是本领域已知的，并且都在本发明的范围内。特别地，本领域熟知的是，在任何免疫方案中，应当在不使用载体分子的条件下提供免疫原肽。例如如果肽可与KLH接合，则其可以与BSA接合，或直接在筛选试验中使用。上述抗体可用于与病毒促黑素细胞激素表位的固定和结构有关的领域的方法(例如用于蛋白质印迹法)中，以测定合适的生物样品等中的水平。抗体可用于检测来自个体的生物样品中的病毒促黑素细胞激素表位。生物样品可以是含有细胞的生物流体，例如但不限于血液、血清、血浆、组织间隙液、尿液、脑脊髓液等。然后可以使用合适的策略(例如，ELISA法或放射免疫测定法)和方式(例如，微孔、量杆等)直接测定生物样品中病毒促黑素细胞激素表位的存在。可选择地，可以通过(例如)聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)在存在或不存在十二烷基硫酸钠(SDS)的条件下将样品中蛋白按照大小分离，并通过免疫印迹法(蛋白质印迹法)来检测病毒促黑素细胞激素表位的存在。免疫印迹技术通常对于针对肽(对应于蛋白的表位)而产生的抗体的效果更好，因此特别适用于本发明。V.使用病毒促黑素细胞激素表位进行药物筛选本发明提供使用病毒促黑素细胞激素表位、HIV-1gpl20或其降解产物来作为筛选这样的药物(例如，小分子、肽、肽模拟物、抗体等)的耙的方法和组合物，其中所述药物可以抑制由HIV-1包膜片段引起的CNS细胞表面分子(如MC4R和/或MC5R)的异常刺激。如下面和别处所述，可以设计一些不同的分析系统(授予Lee等人的美国专利No.5，卯8,609，1999;授予Cone等人的美国专利No.6,100,048,2000;以及授予Cone等人的美国专利No.6,278,038,2001,它们的全文以引用的方式并入本文)并用于鉴定调节MC4R和/或MC5R的活性的化合物或组合物。下述系统可配制成试剂盒。为了这个目的，包含病毒促黑素细胞激素表位的多肽可包装在多种容器(例如，小瓶、管、微孔板管、瓶等)内。其他试剂可被包括在单独的容器内，与试剂盒(例如阳性对照样品、阴性对照样品、黑皮质素肽(包括但不限于ot-MSH和ACTH衍生物))、缓冲液、介质等一起提供。A.基于细胞的分析根据本发明，可以使用一种基于细胞的分析系统来筛选用于调节CNS细胞表面分子(如MC4R和/或MC5R)的病毒促黑素细胞激素表位刺激的化合物。在一些实施方案中，如此鉴定的化合物适于治疗AIDS消耗综合征和HIV-介导的T调节细胞功能异常。为了这个目的，可以使用内源性表达MC4R或MC5R的细胞来筛选化合物。可选择地，为了筛选的目的，可以使用基因工程化以表达MC4R或MC5R的细胞系(如293细胞、COS细胞、CHO细胞、纤维原细胞等)。优选地，在分析中可以使用基因工程化以表达功能性受体(对应于因黑皮质素肽引起的激活)的宿主细胞作为端点(例如通过测定化学、生理、生物或表型变化、宿主细胞基因或报道基因的诱导、cAMP水平的变化、腺苷酸环化酶的活性、宿主细胞G蛋白的活性、细胞外酸化速度、宿主细胞激酶的活性、增生、分化等)。为了在筛选分析中使用，表达功能性MC4R或MC5R的宿主细胞应当对于MC4R或MC5R配体给出显著的应答，优选大于5倍背景水平的诱导。取决于读数，宿主细胞应当优选具有许多特性以使由于黑皮质素肽引起的诱导应答最大化，从而用于(例如)检测CRE报道基因较强的诱导，下列方面将是有利的(a)低天然水平的cAMP，(b)能够与MC4R或MC5R相互作用的G蛋白，(c)高水平的腺苷酸环化酶，(d)高水平的蛋白激酶A，(e)低水平的磷酸二酯酶，以及(f)结合蛋白的高水平的cAMP应答元件。为了增加对于黑皮质素肽的应答，宿主细胞可被工程化以表达更大量的有利的因子或更少量的不利的因子。另外，可以减少用于诱导CRE报道分子的可选择的途径以降低基础水平。在使用这种细胞系统中，将表达黑皮质素受体的细胞暴露于受试化合物或赋形剂对照(例如安慰剂)。在暴露后，可以分析细胞以测定黑皮质素受体的信号转导途径的组分的表达和/或活性，或者可以分析信号转导途径本身的活性。例如，在暴露后，可以分析用于诱导cAMP的细胞裂解物。受试化合物提高cAMP水平的能力高于在使用赋形剂对照处理的细胞中观察到的水平的能力，表明受试化合物诱导由黑皮质素受体(其由宿主细胞表达)介导的信号转导。在筛选可用作由病毒促黑素细胞激素表位引起的黑皮质素受体刺激的选择性拮抗剂的化合物中，重要的是包括激活MCR的配体(例如，cc-MSH、p-MSH或ACTH)以测试与赋形剂对照相比，受试化合物对于信号转导的抑制。在本发明的特定的实施方案中，可以向表达黑皮质素受体的细胞中导入含有与许多不同的报道基因中的任何报道基因相连的cAMP应答元件的构建体。这种报道基因可包括但不限于氯霉素乙酰基转移酶(CAT)、荧光素酶、GUS、生长激素或胎盘碱性磷酸酶(SEAP)。在将细胞暴露于受试化合物后，可定量报道基因表达的水平，从而确定受试化合物调节受体活性的能力。由于碱性磷酸酶选自细胞，因此碱性磷酸酶分析法在实施本发明中是特别有用的。因此，可以分析组织培养物上清液中的分泌的碱性磷酸酶。另外，碱性磷酸酶的活性可以通过热量测定法、生物发光测定法或化学发光测定法来测定(Bronstein等人，Biotechniques,17:172-177,1994)。这些分析方法提供了用于药物筛选的简便、灵敏、简单、自动化的检测系统。当需要区分黑皮质素受体并且需要鉴定选择性激动或拮抗MC4R或MC5R的化合物时，应当使用一组宿主细胞来进行上述分析方法，其中所述每个宿主细胞被基因工程化以表达黑皮质素受体中的一种(MC1R至MC5R)。人的黑皮质素受体的表达优选为了药物发现的目的。下列文献描述了各种受体的克隆和表征MC1R和MC2R(Mountjoy等人，Science,257:1248-1251，1992;以及ChhajlaniandWikberg,FEBSLett,309:417-420,1992);MC3R(Roselli-Rehfuss等人，ProcNatlAcadSci,USA:卯:8856-8860,1993;以及Gantz等人，JBiolChem，268:8246-8250,1993);MC4R(Gantz等人，JBiolChem,268:15174-15179,1993;以及Mountjoy等人，MolEndo,8:1298-1308,1994);以及MC5R(Chhajlani等人，BiochemBiophysResCommun，195:866-873,1993;以及Gantz等人，BiochemBiophysResCommun,200:1214-1220,1994);它们的全文均以引用的方式并入本文。因此上述序列中的每一个均可用于使表达黑皮质素受体中一者以用于本文中所述的筛选分析中的细胞或细胞系工程化。为了鉴定特异性或选择性调节MC4R的活性对于病毒促黑素细胞激素表位的刺激的化合物，将MC4R的激活效果或抑制效果与受试化合物对于其他黑皮质素受体的效果相比。可选择地，如果宿主细胞表达超过一种黑皮质素肽受体，则由这些受体产生的背景信号值可以从信号值中"减去"(Gantz等人,supra)。这些非MC4R黑皮质素受体产生的背景应答可以由许多方法确定，包括通过反义抗体或拮抗剂来消除MC4R的活性。就此而言，应当注意的是野生型CHO细胞对于黑皮质素肽表现出小的内源性应答，这必须从背景中减去。可选择地，由其他黑皮质素受体引起的活性可通过使用MC4R特异性配体激活宿主细胞或者包括其他黑皮质素受体的特异性抑制剂来消除。B.非基于细胞的分析除了基于细胞的分析以外，非基于细胞的分析系统可用于鉴定抑制与CNS细胞表面分子(如MC4R和/或MC5R)结合的病毒促黑素细胞激素表位的化合物。例如，分离的膜可用于鉴定抑制与MC4R相互作用的HIV-1gpl20的化合物。在使用分离的膜的典型的试验中，HEK293细胞可基因工程化以表达MC4R。膜可以通过标准的技术而获得，并且和1251-标记的配体(例如，分离的a-MSH、(3-MSH、Y-MSH或ACTH)—起用于体外的结合分析中。通过比较在存在过量的未标记的配体的条件下进行的结合分析来确定特异性结合。为了鉴定抑制病毒促黑素细胞激素表位与MC4R的结合的化合物，将膜和标记的配体在存在或不存在受试化合物的条件下进行温育。与赋形剂对照样品相比，与受体结合并且与标记的配体竞争与膜结合的化合物降低了信号。可选择地，可溶性MC4R可以被重组表达并用于非基于细胞的分析，从而鉴定抑制与MC4R结合的病毒促黑素细胞激素表位的化合物。制备重组表达的MC4R多肽或MC4R融合蛋白。在非基于细胞的分析中，重组表达的MC4R通过本领域熟知的方式附在固体基材(如试管、微孔或柱)上。然后分析受试化合物的抑制与MC4R结合的病毒促黑素细胞激素表位的能力。C.用于筛选目的的候选化合物上述和别处(美国专利公开No.20030105024，Cone等人，2003，其全文以引用的方式并入本文)的分析方法可以鉴定影响病毒促黑素细胞激素表位介导的MC4R的活性的化合物。例如影响病毒促黑素细胞激素表位介导的MC4R的活性的化合物包括但不限于与MC4R的化合物、抑制病原性配体的结合的化合物、和激活信号转导的化合物(激动剂)或阻断激活的化合物(拮抗剂)、以及与MC4R的病原性配体结合并且中和病原性配体(例如，HlV-lgpl20的病毒促黑素细胞激素表位)的化合物。本发明的一些实施方案提供了具有下列通式的哺乳动物的黑皮质素受体激动剂A-B-C-D-E-F-G-酰胺，其中A是脂肪族氨基酸残基，包括(例如)Leu、Ile、Nle和Met以及它们的类似物和取代的衍生物；B是酸性氨基酸残基，包括(例如)Asp和Glu;C是碱性氨基酸残基，包括(例如)His;D是具有d-构象的芳族氨基酸残基，包括d-Phe、d-Tyr及其取代的衍生物；E是碱性氨基酸残基，例如Arg、Lys、高Arg、高Lys、以及它们的类似物或取代的衍生物；F是Trp或其取代的衍生物；以及G是Lys、高Lys、或它们的衍生物。在本发明的黑皮质素受体激动剂的肽的实施方案中，所述肽通过在肽的位置B处的Asp或Glu残基的侧链羧基与位置G处的Lys或高Lys残基的侧链氨基之间形成酰胺键而环化。本发明的其他实施方案提供了具有下列通式的哺乳动物的黑皮质素受体拮抗剂A-B-C-D-E-F-G-酰胺，其中A是脂肪族氨基酸残基，包括(例如)Leu、Ile、Nle和Met、以及它们的类似物和取代的衍生物；B是酸性氨基酸残基，包括(例如)Asp和Glu;C是碱性氨基酸残基，例如，His;D是具有d-构象的芳族氨基酸残基，包括d-Nal及其取代的衍生物；E是碱性氨基酸残基，例如，Arg、Lys、高Arg、高Lys以及它们的类似物和取代的衍生物；F是Trp或其取代的衍生物；以及G是Lys、高Lys或它们的取代的衍生物。在本发明的黑皮质素受体拮抗剂的肽的实施方案中，所述肽通过在肽的位置B处的Asp或Glu残基的侧链羧基与位置G处的Lys或高Lys残基的侧链氨基之间形成酰胺键而环化。在优选的实施方案中，本发明的黑皮质素受体拮抗剂是MC4受体和/或MC5受体的激动剂。然而，应当注意的是适于使用本发明的分析方法还可鉴定调节MC4R或MC5R信号转导的化合物(诸如影响下游信号传导事件之类的化合物，如参与转导由与MC4R结合的配体激活的信号的G蛋白活性的抑制剂或增强子)。这种影响MC4R或MC5R的下游信号传导事件的化合物的鉴定和使用被认为会调节MC4R对于AIDS消耗综合征发展的作用和调节MC5R对于HIV-1介导的调解性T细胞功能异常的作用。可根据本发明筛选的化合物包括但不限于肽、抗体及其片段、和其他优选与HIV-1gpl20结合以抑制由所含的病毒促黑素细胞激素表位引起的MC4R或MC5R刺激的有机化合物(例如肽模拟物)。化合物可包括但不限于肽，例如可溶性肽(包括但不限于任意肽文库的成员)(Lam等人，Nature354:82-84，1991;以及Houghten等人，1991，Nature,354:84-86，1991);以及由D-和/或L-构象氨基酸制成的组合化学衍生的分子文库；磷酸肽(包括但不限于任意的或部分降解的指导的磷酸肽文库的成员)(Songyang，Cell,72:767-778,1993);抗体(包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、抗独特型抗体或单链抗体、以及它们的FAb、F(ab')2和FAb表达文库片段和表位结合片段)；以及小有机或无机分子。其他可根据本发明筛选的化合物包括但不限于(例如)能够穿越血脑屏障的小有机分子。D.被Bygpl20或其降解产物结合的另外的CNS细胞表面分子国立精神卫生研究院(NIMH)的心理药物筛选计划(PDSP)被用于鉴定被HIV-1gpl20及其用凝血酶切割的50kDa和70kDa产物以及包含病毒黑皮质素表位的合成肽结合的另外的CNS细胞表面分子。特别地，本发明考虑受体筛选策略(Roth等人，ProcNatlAcadSciUSA，99:11934-11939，2002;以及ArmbrusterandRoth,JBiolChem,280:5129-5132,2005)以鉴定用于HIV-1包膜的分子耙。配体结合筛选和功能性筛选被用于在分子范围内限定HIV-1包膜介导的精神活动。具体而言，多种包含病毒黑皮质素表位的多肽与细胞的膜制剂接触，所述细胞表达克隆的受体从而以高通量格式的方式确定Ki值。克隆的受体包括但不限于乙酰胆碱受体、肾上腺素能受体、多巴胺受体、GABA受体、组胺受体、谷氨酸受体、阿片受体、肽类受体、5-羟色胺受体、转运蛋白、腺苷受体、前列腺素受体和咪唑啉受体(参见表3)。本发明认为gpl20及其一种或两张降解产物与涉及体重平衡、炎症和认知的CNS受体结合并使它们激活。VI.药物组合物本发明还提供单独包含病毒促黑素细胞激素表位的抑制剂或拮抗剂(包括抗体)或以与至少一种其他试剂(例如稳定用化合物)联用的药物组合物，并且可以在任何灭菌、生物相容的药物载体(包括但不限于盐水、缓冲盐溶液、葡萄糖和水)中施用。本发明的方法发现在治疗疾病或改变生理状态中具有作用。肽可以在药学上可接受的载体(例如生理盐水)中静脉施用至患者。可以使用肽的细胞内递送的标准方法(例如通过脂质体递送)。这些方法是本领域技术人员所熟知的。本发明的制剂可用于胃肠外(例如静脉、皮下、肌肉内和腹膜内)施用。使用上述基因疗法也可以完成多肽的细胞内治疗施用。A.剂量的确定这种化合物的毒性和疗效可以通过标准的药学方法在细胞培养物或试验动物中确定，例如测定LDso(总体的50%的致死量)禾PIEDm)(总体的50%的有效治疗量)。毒性和疗效之间的剂量之比为治疗指数，并且可以表示为LD5()/ED5()。尽管可以使用具有毒副作用的化合物，但是应当小心设计这样的递送系统，其中为了使对未感染的细胞的潜在损害最小化，该系统使这种化合物靶向于影响组织的位点，从而减少副作用。取决于施用途径，正常的剂量可在O.l至IOO，OOO微克之间变化，最大总量为约lg。关于递送的特定剂量和方法的指导在下列文献中有所描述参见美国专利No.4,657,760;5,206,344;或5,225,212，它们全文以引用的方式并入本文。相对于小分子抑制剂，本领域的技术人员使用更多种抗体的制剂。脑内施用可要求以与静脉注射不同的方式进行递送。由细胞培养分析和动物研究中获得的数据可用于配制用于人的剂量。这种化合物的剂量优选在较小毒性或没有毒性的条件下在循环浓度(包括ED5o)的范围内。取决于使用的剂型和使用的施用途径，所述剂量可在该范围内变化。对于本发明的方法中使用的任何化合物，可以由细胞培养物的分析中开始评价治疗有效量。如细胞培养物中确定的那样，可以在动物模型中配制剂量，从而获得包括ICM)(即，受试化合物使症状获得半数最大抑制效果的浓度)的血浆循环浓度范围。这种信息可用于更精确地确定可用于人的剂量。血浆中的含量可通过(例如)高效液相色谱法来测定。B.制剂和应用根据本发明使用的药物组合物可以按照常规的方式使用一种或多种生理学上可接受的载体或辅料来配制。因此，化合物以及它们的生理学上可接受的盐和溶剂化物可以被配制并通过吸入或吹入(通过嘴或鼻)、或口服、面颊、胃肠外或直肠施用的方式进行给药。对于口服给药，药物组合物可采用(例如)通过常规的方式使用下列药学上可接受的辅料制备的片剂或胶囊形式的形式例如粘合剂(如玉米预糊化淀粉、聚乙烯吡咯垸酮或羟丙基甲基纤维素)；填料(如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(如马铃薯淀粉或羧甲淀粉钠)；或润湿剂(如十二烷基硫酸钠)。片剂可以通过本领域熟知的方法进行包衣。用于口服施用的液体制剂可采用(例如)溶液剂、糖浆剂或混悬剂的形式，或者它们可以以干产物的形式存在，并在使用前与水和合适的赋形剂一起构造。这种液体制剂可通过常规的方式使用下列药学上可接受的添加剂来制备例如混悬剂(如山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)；乳化剂(如卵磷脂或阿拉伯树胶)；非水性赋形剂(如杏仁油、油脂、乙醇或分馏植物油)；以及防腐剂(对羟苯甲酸甲酯或丙酯、或者山梨酸)。如果需要，制剂还可含有缓冲盐、香味剂、着色剂和甜味剂。用于口服施用的制剂可被合适地配制，从而控制活性化合物的释放。对于面颊施用，所述组合物可采用以常规的方式配制的片剂或锭剂的形式。对于通过吸入来施用，根据本发明使用的化合物以来自加压药包或喷雾器的气雾剂形式，借助于使用合适的抛射剂(如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙垸、二氧化碳或其他合适的气体)便利地递送。就加压气溶胶而言，可以通过安装递送计量的量的阀门来测定剂量单位。可以配制含有化合物和合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物的用于吸入器和吹入器的明胶的胶囊和药筒。可以配制用于通过注射，例如通过快速推注或连续输注给药的化合物。可以将注射用制剂制成单位剂型，例如含有添加的防腐剂的安瓿或多-剂量容器。这些组合物可以采用诸如在油或水性赋形剂的混悬液、溶液或乳剂这类形式，并且可以含有配制试剂，如混悬剂、稳定剂和/或分散剂。可选择地，活性成分可以为在使用前用合适的赋形剂(如无菌无热原水)溶解的粉末形式。还可以将化合物配制成直肠组合物，诸如栓剂或保留灌肠剂，例如含有常用栓剂基质(如可可脂或其它甘油酯)。除了上述制剂以外，还可以将化合物配制为长效制剂。可以通过植入(如皮下或肌肉内)或通过肌肉内注射来施用这种长效制剂。因此，例如可以使用合适的聚合物或疏水性材料(例如作为在可接受的油中的乳剂)、或离子交换树脂、或作为微溶性衍生物(如作为微溶性盐)来配制化合物。如果需要，可以将组合物制成可以含有一种或多种包含活性成分的单位剂型的药包或配药装置。例如药包可以包括金属或塑料箔(如泡罩包)。所述药包或配药装置可以配有给药用说明书。实验下列实施例的提出是为了表明和进一步解释本发明的某些优选实施方案和方面，不能理解为对本发明的范围的限制。在下面公开的试验中会用到下列縮写eq(等同物)；M(摩尔浓度)；pM(微摩尔浓度)；N(摩尔当量)；mol(摩尔数)；mmol(毫摩尔)；nmol(微摩尔)；nmol(纳摩尔)；g(克)；mg(毫克)；pg(微克)；ng(纳克);I或L(升)；ml(毫升)；(微升)；cm(厘米)；mm(毫米)；nm(微米)；nm(纳米)；。C(摄氏度)；U(单位)，mU(毫单位)；min.(分)；sec.(秒)；％(百分比)；kb(千碱基)；bp(碱基对)；以及PCR(聚合酶链式反应)。实施例1激活人的黑皮质素-4受体(hMC4R)的HIV-lsF2gpl20肽的鉴定通过PeninsulaLabs(Belmont,CA)合成一系列对应于HIV-1SF2gpl20的第五保守域的氨基酸序列的肽。细胞系.将人的黑皮质素-4受体(hMC4R)的DNA编码序列亚克隆到pcDNAIneo载体(Invitrogen)中，并且使用改进的磷酸钙法(ChenandOkayama，MolCellBiol,7:2745-2752,1987)稳定地转染至人胚肾293(HEK293)细胞中。将稳定转染的细胞在含有10。/。的新生小牛血清(NCS)和lmg/ml的G418的DMEM中选择，并在补充500ng/mlG418的介质中生长。腺苷酸环化酶分析.在将细胞暴露于剂量增加的gpl20肽后，通过测定细胞将^H]腺嘌呤转化为卩H]cAMP的能力来直接确定腺苷酸环化酶的活性。使用在含有10%NCS的DMEM中2.5pCi的[3印腺嘌呤来将包含约1x106的细胞的复制孔温育2小时。在使该介质吸气后，使用1mlof2.5。/。高氯酸、0.1mMcAMP来使细胞增容。除去裂解物(0.8ml),使用80pl的4.2NKOH和0.42ml的H20中和。将样品混合，并使沉淀物沉淀。在P-计数仪中对总共0.1ml的各裂解物进行计数，从而确定导入到细胞中的[3司腺嘌呤的总量。在Dowex和氧化铝柱上连续进行层析后将cAMP从裂解物中分离。cAMP从氧化铝柱上用4ml的Tris(pH7.4)洗脱，并在(3-计数仪中计数。通过确定[3司腺嘌呤转化为pH]cAMP的百分率来计算反应性环化酶的活性。使用Kaleidagraph软件包(SynergySoftware,Reading,PA)来拟合数据的曲线，从而计算ECM)和最大应答值。结果.如图8所示，G25G肽(#79)刺激腺苷酸环化酶在表达hMC4R的转基因HEK-293细胞中的活性。具体而言，HIV-lSF2gpl20G25G肽(GGGDMRDNWRSELYKYKVVKIEPLG，SEQIDNO:17)在浓度为10-6M时刺激cAMP的产生，而一些对照肽(例如，#77R12Q=RNSSSSGSSGAGQ,SEQIDNO:23)在测试的浓度下并没有刺激hMC4R诱导的腺苷酸环化酶的活性。另外，如图9中所示，对应于G25G肽的一部分沿着相反方向合成的肽#33K13M也刺激腺苷酸环化酶在表达hMC4R的转基因HEK-293细胞中的活性。具体而言，K13M肽(KYKYLESRWNDRM，SEQIDNO:6)在浓度为1(^M时刺激cAMP的产生，而其他沿着正向或反向合成的具有类似长度的gpl20肽在测试的浓度下并没有刺激hMC4R诱导的腺苷酸环化酶的活性。测试下列另外的gpl20肽#27fM13K=MRDNWRSELYKYK，SEQIDNO:24;#29fR12K=RDNWRSELYKYK,SEQIDNO:25;#31rK14D=KYKYLESRWNDRMD,SEQIDNO:26;#35rK17G=KYKYLESRWNDRMDGGG,SEQIDNO:27;#37fG17K=GGGDMRDNWRSELYKYK,SEQIDNO:28;#39rK12R=KYKYLESR丽DR，SEQIDNO:29;以及#41fD14K=DMRDNWRSELYKYK,SEQIDNO:30。实施例2激活黑皮质素-5受体(MC5R)的HIV-lsF2gpl20肽的鉴定细胞系.将人的黑皮质素-5受体(hMC5R)的DNA编码序列亚克隆到合适的真核生物表达载体(如pcDNAIneo载体(Invitrogen))中，并且使用改进的磷酸钙法(ChenandOkayama,MolCellBiol,7:2745-2752，1987)或其他合适的技术稳定地转染至人胚肾293(HEK293)细胞中。将稳定转染的细胞在含有10%的新生小牛血清(NCS)和lmg/ml的G418的DMEM中选择，并在补充500pg/mlG418的介质中生长。腺苷酸环化酶分析.在将细胞暴露于剂量增加的gpl20肽后，通过测定细胞将^H]腺嘌呤转化为^H]cAMP的能力来直接确定腺苷酸环化酶的活性。使用在含有10%NCS的DMEM中2.5|tiCi的卩H]腺嘌呤来将包含约1x106的细胞的复制孔温育2小时。在使该介质吸气后，使用1mlof2.5n/。高氯酸、0.1mMcAMP来使细胞增容。除去裂解物(0.8ml)，使用80^的4.2NKOH和0.42ml的H20中和。将样品混合，并使沉淀物沉淀。在(3-计数仪中对总共0.1ml的各裂解物进行计数，从而确定导入到细胞中的[3司腺嘌呤的总量。在Dowex和氧化铝柱上连续进行层析后将cAMP从裂解物中分离。cAMP从氧化铝柱上用4ml的Tris(pH7.4)洗脱，并在(3-计数仪中计数。通过确定[311]腺嘌呤转化为["H]cAMP的百分率来计算反应性环化酶的活性。使用Kaleidagraph软件包(SynergySoftware,Reading,PA)来拟合数据的曲线，从而计算EC5。和最大应答值。实施例3病毒促黑素细胞激素表位-反应性抗体的制备和检测肽的合成.使用C端甘氨酸和半胱氨酸残基合成对应于M13K(如SEQIDNO:24表征的MRDNWRSELYKYK)的肽，以与载体偶联。类似地，在将半胱氨酸残基引入N端或C端后合成对应于G25G(SEQIDNO:17)和K13M(SEQIDNO:6)的肽，以促进与载体(如匙孔血蓝蛋白(KLH))偶联。多克隆抗体的制备.使用约50pg在磷酸盐缓冲液(PBS)中重新悬浮并且用等体积的RIBI佐齐!J(RIBIImmunochemResearchInc.,Hamilton,MT)乳化的KLH-偶联的肽在O、15、30天对BALB/c鼠进行腹膜内免疫。在初始免疫前收集血液，并在每次免疫后从尾静脉收集血液，然后分析血清部分的特异性抗体的含量。通过蛋白质印迹使用衍生自十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶的条带(与诸如牛血清白蛋白(BSA)之类的第二载体偶联的减少的肽、重组可溶性HIV-1gpl20和/或HIV-1Env-表达细胞(例如感染的细胞)的裂解物)来测定HIV-1Env-反应性抗体。在示例性的实施方案中，使用在完全Freund's佐剂中的M13K-KLH免疫BALB/c鼠。在8周试验期后，使用在不完全Freund，s佐剂中的M13K-KLH免疫鼠，然后每隔2周使用在PBS中的M13K-KLH重新免疫。在每次用ELISA测试针对M13K-BSA的免疫1周后收集来自鼠的血清。在第一次免疫后，获得1:50至1:400的抗体滴度，在随后的免疫中，抗体滴度增加为l:25，600至1:51,200。单克隆抗体(mAb)的制备.在使用与KLH偶联的gpl20肽免疫后3天从BALB/c鼠中获得脾细胞。该脾细胞按照5:1的比例与P3x63Ag8.653骨髓瘤细胞融合，然后在含有次黄嘌呤-氨喋呤-胸腺定的DMEM中选择杂种瘤。如多克隆抗体的制备中所述，筛选组织培养物上清液的HIV-l-反应性。酶联免疫吸附测定(ELISA).通过免疫诱导的HIV-1包膜-特异性抗体可以通过ELISA使用重组可溶性HIV-1gpl20或gpl20peptide-BSA偶联物作为抗原来分析。Immunlon-2plate在48°C的碳酸钠缓冲液(15mMNa2C03，35mMNaHC03[pH9.8])中过夜，从而包裹rgp120(1mg/ml)。使溶液吸气，然后将孔填充100ml的含有2.5Q/。胎牛血清的阻断缓冲液(FilterPaperDiluent;DuPont,Wilmington,Del.),然后在37。C下温育4小时。将板用含有0.05y。Tween20的PBS洗4次。在含有硼酸盐缓冲液(O.lM硼酸，47mM硼酸钠，75mMNaCl，0.05%[vol/vol]Tween20)和2.5%胎牛血清的孔中按照l:50稀释来评价血浆样品。通过使用碱性磷酸酶-偶联的羊抗猴免疫球蛋白G(SigmaChemicalCompany,St.Louis,Mo.)来观察颜色，然后使用在乙醇胺缓冲液(0.9M乙醇胺-7mMMgC12[pH9.8]和浓HC1)中的对-硝基苯磷酸二钠六水合物(Sigma104phosphatasesubstrate)进行温育。测定405nm处的吸光度。中和抗体的检测.通过使用之前所述的细胞杀伤力测定法(Montefiori等人,JClinMicrobiol,26:231-235，1988)在MT-2细胞中测定中和HIV-1的抗体。病毒原料在H9细胞中制备，并且通过p24浓度和在MT-2细胞中的50%组织感染剂量来滴定。类似的分析可用于测定针对病毒分离物(在CEMxl74细胞中进行病毒原料的滴定和分析)的中和抗体。在测定之前将血清样品在56'C下加热失活1小时。实施例4使用凝血酶对HIV-1gpl20进行切割和抗体的蛋白质印迹分析SF162分离物的HIV-1gpl20由国立卫生研究院AIDS试剂计划(目录no.7363)获得。人血浆凝血酶由Sigma公司(目录no.T9010)获得。将20微升的HIV-1gpl20(1.2pg4a)和10微升的凝血酶(30Units/ml)混合并在37。C下温育2小时。向gpl20-凝血酶混合物中加入SDS加样缓冲液和还原剂，加热至85°C2小时，然后通过SDS-PAGE(2吗gpl20/lane)分析。在电泳后，将蛋白转移至用于蛋白质印迹分析的PVDF膜。转移后的凝胶使用CoomassieBlue染色，转移后的印染使用PonceauS染色。将膜切成条，在4GC下在牛奶-tween溶液中阻断过夜。将每个条带与对照或受试抗体反应。阳性对照是HIV-lgpl20单克隆抗体，阴性对照是细胞培养物介质，受试抗体是由M13K-KLH免疫的鼠的杂种瘤克隆的细胞培养物上清液。120kDa、70kDa和更小的50kDa的条带在CoomassieBlue染色的凝胶中是可见的。50kDa的条带有时被对于对应于BSA稳定剂的更大的条带弄模糊。通过阳性对照抗体检测到120kDa和70kDa的条带，而在测试的稀释液中在受试抗体和阴性对照的线未检测到条带。上述说明书中提到的所有出版物和发明都以引用的方式并入本文。本发明的所述方法和系统的各种变化和改变对于本领域技术人员来说是明显的，并且不脱离本发明的范围和精神。尽管结合特别优选的实施方案对本发明进行了说明，但是应该理解要求的本发明并不受到这种特定的实施方案的限制。事实上，用于实施本发明的方法的各种变化(对于本领域技术人员来说是显而易见的)都在所附权利要求的范围内。权利要求1.一种用于检测样品中的抗体的方法，包括a)提供i)样品，其中所述样品包含抗体；以及ii)包含HIV-1促黑素细胞激素表位的多肽；b)在适于使所述抗体与所述多肽的HIV-1促黑素细胞激素表位结合的条件下使所述多肽与所述样品接触；以及c)检测与所述多肽结合的HIV-1促黑素细胞激素表位-反应性抗体。2.权利要求l所述的方法，其中所述检测包括酶联免疫吸附测定。3.权利要求l所述的方法，其中所述检测包括蛋白质印迹。4.权利要求l所述的方法，其中所述样品来自感染HIV-1的患者。5.权利要求1所述的方法，其中所述样品来自AIDS疫苗接种者。6.权利要求l所述的方法，其中所述样品来自杂种瘤细胞培养物上清液。7.权利要求l所述的方法，其中所述多肽包含通过使用凝血酶切割而制得的HIV-1gpl20的50kDa片段。8.权利要求l所述的方法，其中所述多肽包含载体。9.权利要求l所述的方法，其中所述多肽包含SEQIDN0:17或SEQIDNO:24表征的氨基酸序列。10.权利要求1所述的方法，其中所述多肽包含HIV-1gpl20蛋白。11.权利要求1所述的方法，还包括以体外分析的方式对中和HIV-1的抗体进行检测的步骤。12.—种用于检测样品中的抗体的试剂盒，包含a)包含HIV-1促黑素细胞激素表位的多肽；以及b)用于检测样品中的HIV-1促黑素细胞激素表位-反应性抗体的说明书。13.权利要求12所述的试剂盒，还包含阴性对照多肽。14.权利要求13所述的试剂盒，还包含阳性对照抗体和阴性对照抗体。15.权利要求12所述的试剂盒，其中所述多肽包含SEQIDNO:17或SEQIDNO:24表征的氨基酸序列。16.—种用于鉴定作为人的黑皮质素受体(MCR)的HIV-1促黑素细胞激素表位刺激的抑制剂的化合物的方法，包括a)提供i)表达人的MCR的细胞系；ii)包含HIV-1促黑素细胞激素表位的多肽；以及iii)化合物；b)在适于使用所述多肽刺激所述人的MCR的条件下使所述细胞系和所述多肽在存在所述化合物和不存在所述化合物的情况下接触，其中所述人的MCR在不存在而不是存在所述化合物的情况下产生刺激表明所述化合物是所述HIV-1促黑素细胞激素表位的抑制剂。17.权利要求16所述的方法，还通过下列歩骤c)鉴定所述化合物作为人的MCR的人神经肽激素刺激的抑制剂在适于使用所述人神经肽激素剌激所述MCR的条件下使所述细胞系和人神经肽激素在存在所述化合物和不存在所述化合物的情况下接触，其中所述人的MCR在不存在而不是存在所述化合物的情况下产生刺激表明所述化合物是所述人神经肽激素的抑制剂。18.权利要求16所述的方法，其中所述人的MCR是MC4R。19.权利要求16所述的方法，其中所述人的MCR选自MC1R、MC2R、MC3R禾口MC5R。20.权利要求18所述的方法，其中所述细胞系是表达所述MC4R的转基因细胞系。21.权利要求16所述的方法，其中所述多肽包含SEQIDNO:17或SEQIDNO:24表征的氨基酸序列。22.权利要求17所述的方法，其中所述人神经肽激素选自cx-促黑激素(a-MSH)、促皮质素(ACTH)、(3-促黑激素((3-MSH)和y-促黑激素(y-MSH)。全文摘要本发明涉及由HIVI型包膜糖蛋白引起的异常细胞信号传导。特别地，本发明提供用于鉴定由HIV-1gp120及其降解产物引起的黑皮质素受体途径刺激的抑制剂的组合物和方法。如此鉴定的抑制剂被认为适于治疗与HIV有关的恶病质、T细胞的超活化和中枢神经系统疾病。文档编号A61K39/395GK101415835SQ200780011793公开日2009年4月22日申请日期2007年4月5日优先权日2006年4月5日发明者S·S·多米尼申请人:加州大学评议会