4-氨基-3-芳基氨基-6-芳基吡唑[3,4-d]嘧啶衍生物及其制备方法和其作为抗病毒药物...的制作方法

专利名称：：4-氨基-3-芳基氨基-6-芳基吡唑[3,4-d]嘧啶衍生物及其制备方法和其作为抗病毒药物...的制作方法4-氨基-3-芳基氨基-6-芳勘比唑[3,4-D]嘧啶衍生物及其制备方法和其作为抗病毒药物的应用本发明涉及新型的4-氨基-3-芳基氨基-6-芳基吡唑[3,4-d]嘧啶衍生物及其制备方法，以及作为抗病毒药物、尤其是用于治疗细小核糖核酸病毒感染的应用。细小核糖核酸病毒、尤其是肠道病毒和鼻病毒是人类众多疾病的罪魁祸首。属于肠道病毒的有60多种不同的人致病ftt清型病毒(MdnickJin:FieldsB等编辑.Virology.Philadelphia:Lippincott-Rav印Publishers;1996，655-712)。肠道病毒、埃可病毒、l,奇病毒A型和B型感染通常均伴随无名发烧，而且可弓l起通常与鼻病毒感染没有区别的上呼吸道疾病。属于较为严重的流行性病症有出血性结膜炎、疱疹性咽峡炎、手足口病、无菌性脑膜炎、脑炎以及急性心肌炎。不同类型的病毒可能会引起相同的病症，或者一种类型的病毒弓胞完全不同的病象。随着现代化灵敏方法运用到病毒诊断领域，已证明持续性肠道病毒RNA以及病毒蛋白与例如n型糖尿病、多发'炎以及尤其是漫性心肌炎之类的慢性疾病存在关联。持续'ft^道病毒感染也会发生在丙种球蛋白缺乏症患者身上，表现为持续性肠道病毒脑膜脑炎。作为伴发症状出现的通常是Ml炎或者多发性肌炎。大约有100种血清型病毒属于鼻病毒。人^i:呼吸道的所有呼吸系统疾病有一半以上是鼻病毒感染引起的(CouchRBin:FieldsBM等编辑FieldsVirology,第3版.Lippincott-Raven，Philadelphia^1996，713-35)。这些感冒病症通常无害，平均发病时间约为10天，每年会引起数百万人就诊、中断工作和学习。作为并发症出现的可能有中耳炎、鼻窦炎、哮喘和囊性纤维变性力瞎以及下呼吸道感染，主要发生于幼儿、年纪较大的患者以及免疫功能不全的患者。由于类型繁多，目前尚无法进行接种预防。每年因鼻病毒与肠道病毒引起的这些疾病而产生的工作中断、就医与药物费用十分可观。迄今为止均参照症状治疗这些疾病，因为没有病毒特异性治疗药剂可側吏用(RotbartHA:AntiviralRes2002，53(2),83-98)。此外，通常开出的处方均为无用的抗生素。因此研发新型抗病毒药迫在眉睫。Rotbart于2002年在一篇综述文章中总结了肠道病毒与鼻病毒感染治疗方法的研究结果(RotbartHA:AntiviralRes2002，53(2),83-98)。例如，利巴韦林可抑制宿主细胞酶，即肌苷-5'-—磷酸(IMP)脱氢酶。切断合成嘌呤核苷M0f需的这个关键酶，就可以抑制细小核糖核酸病毒在体外和体内的复制。此外，禾U巴韦林还应当直接gAWM灰质炎病毒的基因组之中，并且以此作为RNA病毒的诱变剂(CrottyS等NatMed,2000,6(12)，1375-9)。由于副作用很大，这些化合物不适宜用于治疗鼻病毒和肠道病毒感染。用于抑制病毒RNA合成的特异性耙就是基因组自身、病毒RNA依赖'(^RNA聚合酶、以及其它复制复合体所需的病毒蛋白。早已为人所知的是，胍类、硫代缩氨基脲、苯并咪唑、双嘧达莫以及黄酮均可在细胞培养基中作为各种细小核糖核酸病毒的聚合酶抑制剂，并且已在体内取得了不同程度的成果。恩韦肟衍生物最有希望成为具有广谱抗肠道病毒与抗鼻病毒活性的候选物质。恩伟月亏可结合在病毒繁歹131程中形成RNA中间体所需的病毒蛋白3A上，从而PJih合成正链RNA(HeinzBA和VanceLM:JViro1，1995，69(7)，4189-97)。临床研究已发现其具有中度疗效或者没有疗效、药物动力学特性不佳，且有有害的副作用(MillerFD等AntimicrobAgentsChemother,1985,27(1)，102-6)。迄今为止没有关于具有更好生物禾,度与耐受性的新型衍生物的临床10基于对病毒蛋白2C的微观结构与机能的认识，已开发出蛋白酶抑制剂AG7088。在细胞培养基中，AG7088在纳摩尔浓度范围内对于48种鼻病毒以及柯萨奇病毒A21、B3、70型肠道病毒70与11型埃可病毒11均有疗效(PatrickAK等AntimicrobilaAgentsChemother,1999，43(10)，2444-50)。迄今为止尚未有最终临床研究数据。随着病毒衣壳分子结构的测定，已营造出定耙设计衣壳阻断剂"WIN物质"的前提条件(DianaGD:CuitMedChem2003，2,1-12)，这^tl质能阻止鼻病毒和肠道病毒吸附或脱壳。其中某些WIN物质仅对单一种类或类型的细小核糖核酸病毒有很强的特异性疗效。其它衍生物可抑制鼻病毒及肠道病毒的繁殖。属于WIN物质的例如有阿立酮、二恶噁沙利及吡罗达韦。这些化合物在细胞培养基中具有非常好的抗病毒作用。由于可溶性差(阿立酮)、生物利用度低(阿立酮和二恶噁沙,)、代谢与排M度快(二噁恶沙利和WIN54954)以及会引起皮疹之类的副作用(WIN54954)，从而无法实现临床应用。另一种名为普乐康尼的衣壳阻断剂则大有希望，普乐康尼具有非常好的口服生物利用度，倉敏结合到病毒衣壳的疏水袋之中后阻止鼻病毒、埃可病毒及MF奇病毒侵入(PevearDC等AntimicrobAgentsChemother1999,43(9),2109-15;McKinlayMA等:AnnuRevMicrobiol1992，46，635-54)，因lt树于常见的感冒直至病毒性脑膜炎或者心肌炎之类的病毒疾病具有潜在的广谱疗效。已观察到鼻病毒、肠道病毒71以及Ml^奇病毒B3有抗药性(Ledford脂等JVirol2004，78(7)，3663-74;GroarkeJM等JInfectDis1999,179(6)，1538-41)。对肠道病毒性脑膜炎(AbzugMJ等PediatrInfectDisJ，2003，22，33541)以及鼻病毒引起的呼吸系统感染(HaydenFG等AntivirTher，2002，7,53-65;HaydenFG等ClinInfectDis，2003,36,1523-32)进行的儿童与駄临床研究富有积极成果。但是已证实的疗效尚不足以使得普乐康尼(美国的Viropharma公司称作Picovir)在美国取得治疗鼻病毒感染的许可。由于治疗成功率低，同时已证实存在副作用，食品与药物管理局(FoodandDrugAdministration:FDA)已于2002年3月驳回了相关申请。也有人将吡唑嘧啶称作CRF拮抗剂(例如EP674642和EP691128)，其例如可抑制腺苷激酶(EP496617或US4，904，666)、黄嘌呤氧化酶(J.Heterocyc.Chem.19，1565，1982)或其它酶系统(US2,965,643禾口US3,600,389)。因此研发治疗鼻病毒和肠道病毒疾病的高效病毒抑制剂，就成为一项紧迫的抗病毒研究任务。例如与普乐康尼相比，新型化合物应当具有良好的耐受性，并且要克月艮抗药性。本发明的目的在于提供新型的化合物及其制造方法与应用，其可用作肠道病毒和鼻病毒的抗病毒药物，并且能避免现有技术的已知缺点，尤其是药物的抗药性和不耐受性问题。按照本发明所述，采用以通式I表示的取代的4-氨基-3-芳基MS-6-芳基口比唑[3，4-d]嘧P定衍生物及其药用盐化儒，即可解决这一问题，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中-基团A和B相互^iJ:也是苯基、萘基、吡啶基、喹啉基、吡嗪基、嘧啶基、吡唑基、三嗪基、咪唑基、呋喃基、噻吩基其中在述招可一个基团中，一至三个氢原子可相互独立地被下歹隨团R1替换，-基团R1可以是N02、CN、CONR22、COOR2、CHO、CONH2、卣素、具有17个链节的饱和或不饱和的直链或支化脂肪基、具有18，节的饱和或不饱和的直链或支化烷醇基、OR2、SR2、NR22、S02NR32、二氟甲基或三氟甲基、苯基，-基团R2、R3、R4、R5可以相互独立地是H、具有17^NI节的饱和或不饱和，卣化或非卤化的直链或支化脂肪基、节基、苯基或萘基、具有杂原子N、S、O的饱和或不饱和单杂环或多杂环，其中上述基团可以独^t也被氟、氯、溴、三氟甲基、烷基、烷氧基、氰基、硝基、氨基、氨烷基、C(O)"烷基、C(O)O-烷基、节基、苯基或難取代。从属权利要求中所述的是具体的被取代的4-氨基-3-芳基氨基-6-芳基吡唑[3，4-d]嘧啶衍生物及其制备方法与应用的有利实施方案，但本发明并不局限于此。在本发明的，实施方案中，所涉及的是通式(I)表示的化合物，其选自以下组中的6-苯基氨基吡唑[3,4-d]嘧啶系列的化合物4-氨基-6-苯基-3-(三-Rb苯基氨基吡唑[3，4-d]嘧啶、4-氨基-6-(三-Rb苯基-3-苯基氨基吡唑[3,4-d]嘧啶、l-烷基-4-氨基-6-苯基-3-(三-R、苯基氨基吡唑[3,4-d]嘧啶、4-氨基-l,6-二(三-R"苯基-3-苯基氨基吡唑[3，4-d]嘧啶、4-氨基-6-苯基-3-(三-W)苯基烷氨基吡唑[3,4-d]嘧啶、l-烷基"4-氨基-6-苯基3-(三-Ri)苯基烷氮基吡唑[3,4-d]嘧啶。本发明尤其也包括以通式(I)表示的6-苯基氨掛比唑[3，4-d]嘧啶，包括4-氨基-3-(3-氟苯基)氨基-6-苯基吡唑[3,4-d]嘧啶、4-氨基-3-(3-氟苯基)氨基-6-(4-氯苯基)吡唑[3,4-d]嘧啶、4-氨基3-(3-氯)氨基-6-苯基吡唑[3,4-d]嘧啶、4-氨基-3-(3-甲氧基)氨基-6-苯基吡唑[3,4-d]嘧啶、4-氨基-3《4-氟苯基)氨基-6-苯基吡唑[3，4-d]嘧啶、4-氨基-3-(4-氟苯基)氨基-6-(4-氯苯基)吡唑[3,4-d]嘧啶、4-氨基-3-(4-氯苯基)氨基-6-苯基吡唑[3，4-d]嘧啶、4-氨基-3《3-氟苯基)氨基-l-甲基-6-苯基吡唑[3，4-d]嘧啶、4-氨基-l-节基-3-(3-氟苯基)氨基-6-苯基卩比唑[3，4-d]嘧啶。对于细小核糖核酸病毒、尤其对于肠道病毒和鼻病毒，本发明所述的化合物在纳摩尔或3,尔浓度的范围剤艮强的抗病毒话性。因此，本发明所述含有以式(I)表示的化合物的药物制剂，特别适合用于治疗细小核糖核酸病毒、尤其是肠道病毒和鼻病毒弓跑的人和动物的呼吸系统感染、无菌性脑膜炎、脑炎、疱疹性咽峡炎等。以下将根据合成方法、以通式表示的4-氨基-3-芳基氨基-6-芳基吡唑[3,4-d]嘧啶衍生物及其对细小核糖核酸病毒感染的疗效与应用，对本发明进fiH羊细解释。以下合成路线l所示为合成本发明戶皿吡唑[3,4-d]嘧啶1的示意图，其包括在第一步骤将[二(甲硫萄亚甲蜀丙二腈2与芳基胺3在醇中縮合成芳基衍生物4。可将后者离析、提纯，以备下一步反应之用，或者不进行提纯直接用于下一步反应("一锅法'反应)。随后的步骤是让芳基衍生物4与肼或者肼衍生物相互作用。该反应在沸腾状态下进行14小时，使得吡唑5的收報高。关键的吡唑[3,4-d]嘧啶1合成步骤包括在有醋酸、三氟醋酸或者醋,存在的条件下，使吡唑5与芳基脒6进纟，合。另一种合成方飽括在有氢化钠存在使丙二腈与芳基彌氰酸酉總疗'一锅法"反应，然后使用碘甲烷或者硫酸二甲酯处理反应混合物。这时将形成大量的烯胺。这里也是在有酸存在的条件下，例如醋酸、三氟醋酸或其盐类(醋酸盐)，将吡唑5与芳基脒6进行縮合，实施制备吡唑[3,4-d]嘧啶1的关键合成步骤。在下歹U实施例中列出了一些以通式(I)表示的具体化合物，这些化合物尤其适用于治疗细小核糖核酸病毒感染(本发明并不仅限于此)。本发明所述的化合物可在药物学可接受的含水介质、有机介质或者7jC-有机介质中配制成溶液或混悬液，用于通过静脉、皮下或者肌肉注射方式进行局部或胃肠外给药，或者用于鼻腔给药；或者这些化合物可用口服给药的常规载体审喊片剂、胶囊或水悬液，或者制成栓剂形式。可以按照每公斤体重0.11000mg的剂量使用以通式(I)表示的上述化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>1、4-氨基-3-芳基氨基-6-芳基吡唑「3,4-dl嘧啶衍生物的制备与分析通过合成方式、元素分析、核磁共振光谱分析与质谱分析，领啶本发明所述化合物的结构。原料按照合成路线1所示的方法以及TominagaY等的描述(XHeterocycl.Chem.，1990，27，775-779)，合成5-氨基斗氰基-3-芳基氨基吡唑。按照已知的现有技术，使用适当的氰基起始化合物合成芳基脒(Boere,RT等J.Organomet.Chem,1987，331,161-167;GarigipatiRS:TetrahedronLett,1990，31,1969-1978;DannO等:JustusLiebigsAnn.Chem.，1982，1836-1839)。实施例1:4-氨基-3-苯氨基-6-苯基吡唑r3.4-dl嘧啶在搅拌下将3.0g(17.24mmol)苯甲脒盐酸水合物以及2,2g(23.0mmol)醋酸钠加入23g(11.5mmol)5-氨基斗氰基-3-苯氨趣比唑之中。在220。C温度下将反应混合物加热30射巾。所得到的物质用50ml水处理、过滤，然后用20ml冷甲醇以及20ml冷酉誕fi^先涤。反应产物通过^DMF/水中的结晶进行提纯。浅黄色固体结晶物质。收率57%。mp253-5。CRf(氯仿-甲醇；10/1)-0.8(硅胶60)。MSm/z302(]Vt).<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>'HNMR(DMSO-d6)512.38(1H，s，NH(9))，8.32-8.36(2H，q，CH(18),CH(19))，8.23(1H,br.s，NH(7))，7.67(2H，d,CH(2),CH(6))，7.48(2H，br.s，NH2),7.42(3H，m,CH(20)，CH(21)，CH(22)),7.12(2H，d,CH(3),CH(5))禾口6.98(1H,叫CH(4加pm.13CNMR(DMSO-d6)5161.0(C(U))，156.2(C(12》，153.0(C(10))，144.2(C(8》，138.3(C(17))，136.0(C(l》，130.3(C(4))，129.8(C(22)),128.8(C(3),C(5))'128.0和127.7(C(18)，C(19))，120.4(C(4)),120.2(C(2)，C(6))，88.7(C(13))ppm，针对C17H14N6的计算值C，67,54;Ii4，67;N,27,80实测值C，67,61;H4，82;N，27，79实施例2:4-氨基-3-(3-氟苯基慮基6-苯基吡唑r3.4-d赠P定与实施例1戶舰的方式一样进行制备。浅黄色固体结晶物质。收率46%。mp267-9°C.Rf(氯仿-甲醇；10/1)-0.85(硅胶60)。MSm/z320—.!HNMR(DMSOO512.61(1H，s，NH(9))，8.35-8.38(2H,q,CH(18)，CH(19》8.64(1H,br.s，NH(7))，7.46(2H,br.s,NH2),73-7.52(6H，m，CH(2)，CH(4)，CH(6):CH(20),CH(21),CH(22))，6.60(lfit,CH(5》ppm.13CNMR(DMSO-d6)S166.2禾卩161.2(C(3))，162.2(C(ll))，161.8(C(IO)):156.1(C(12))'144.3(C(l))，143.4(C(8))，130.0(C(17》，129.8(C(5))，128.5(C(22)):127.0(C(18),C(19))，112.5(C(6))，105.5禾n105.8(C(2))，102.6和103.9(C(4)):89.39(C(13加pm.针对C17H14FN6的计算值:C,63.74;H4.09;N,26.24实测值C，63.60;H，402;N，27.99实施例3:4-氨基-3-(3-甲基苯基慮基-6-苯基吡唑「3.4-d赠啶与实施例1所述的方式一样进行制备。几乎呈白色的固体结晶物质。收率73%。mp246-8°C.Rf(氯仿-甲醇；10/1)-0.90(硅胶60)。MSm/z316(I<).8.23(1H,br.s，NH(7》，7.42-7.67(6H,m,NH2,CH(6),CH(20)，CH(21)，CH(22》:7.21-7,29(2H,m，CH(2),CH(5))禾卩6.42(1H,d，CH(4))，2.17(3H，s，CH3)ppm.针对C18H16N6的计算值C,68.34;H,5.10;N，26.56实测值C,68.43;H，5.16;N，26.71实施例4:4-氨基-3-(4-甲基苯基慮基-6-苯基吡唑f3.4-dl嘧啶与实施例10M的方式一样进行制备。物理化学参数为几乎呈白色的固体结晶物质。收率43%。mp266-8。CRf(氯仿-甲醇；10/1)-0.85(硅胶60)。MSm/z316(>0.iHNMR(DMSO-d6)S12.38(1H,s，NH(9)),8.33-8.38(2!iq,CH(18),CH(19)),8,15(1H,br.s，NH(7))，7.60(2H,d，CH(2)，CH(6))，7.48(2H,br.s，丽2),7.42(3H,m，13CNMR(DMSO-d6)5161.0(C(l1》,156.2(C(12))，153.0(C(IO))，144.2(C(8》:138.3(C(17))，136.0(C(l)),130.3(C(4)),129.8(C(22))，128.0和127.7(C(18)，C(19)),123.8(C(3),C(5))，118.2(C(2)，C(6)),88.9(C(13))，20.8(CH3)ppm.针对C18H16N6的计算值C，68,34;H,5.10;N,26.56实测值C,68.38;H，5.07;N，26.47实施例5:4-氨基-3-(4-溴苯基)氨基-6-苯基吡唑「3.4-d赠啶在搅拌下向1.0ga6mmol)5-氨基4-氰基-3-(4-溴苯基)氨基批唑在20ml醋酸中的溶液内加入1.87g(10.7mmol)苯甲脒盐酸水合物以及0.89g(10.7mmo1)醋酸钠。将反应混合物煮4小时，用50ml7jC进行处理、过滤，然后用20ml冷甲醇以及20ml冷酉誠疗冼涤。粗产物ilii在乙醇中的结晶进行提纯。物理化学参数为黄色固体结晶物质，收率38%。mp2724。CRf(氯仿-甲醇；10/1)-0.9(硅胶60)。MSm/z381(MO.'HNMR(DMSO-d6)512.44讽s,NH(9)),8.33-8.38讽q，CH(18)，CH(19))，8.12(1H,br.s，NH(7》，7.40-7.53(7H，m,NH2,CH(3)，CH(5),CH(20)，CH(21),CH(22》，7.10(2H，d，CH(2)，CH(6》ppm.针对C17H13BrN6的计算值C,53.65;H,3.44;N,22.04实测值C，53,80;H3.48;N,21.95实施例6:4-氨某-3-(4-氟苯基)氨基-6-吡唑「3.4^嘧啶与实施例5所述的方法一样进行合成，{顿三氟醋酸作为溶剂。最终产物从乙醇/DMF中结晶析出。物理化学参数为淡黄色固体结晶物质，收率58%。mp259-263°C.Rf(氯仿-甲醇；10/1)-0.8(硅胶60)。MSm/z320(M^).JHN5MR(DMS0-d6)S12.69(1H，s,NH(9》，8.33-8.41(4H，m,CH(2),CH(6),CH(18)，CH(19》，8.18(1H,br.s，NH(7))，7.58-65风m，鹏，CH(20)，CH(21),CH(22)),7.27-7.31(2H,m,CH(3),CH(5))ppm.针对C17H14FN6的计算值C，63.74;H，4.09;N,26.24实测值C，63.57;H，術;N,26.332、根据本发明的4-氨基-3-芳氨基-6-芳基吡唑「3.4-dl嘧啶衍生物作为抗病毒药物的应用2.1以上实施例16所述的化合物在细胞培养基中的相容性将1X104个HeLa细胞(DSMZ,ACC57)种入^h微量观E微孔的02ml培养基RPM1640之中。在没有测试物的标准情况下(驢37°C，5%C02以及大约95%相对空气湿度)，将微量滴定板在生理斜牛下培养48小时，以便产生分会合单层。然后在该单层上加入具有适当稀释水平的测试物，并且在生理条件下培养72小时。在培养时间终了时，经过戊二醛固定以及亚甲基蓝染色之后，使用微孔板阅读仪(Sunrise,TECAN)测定660nm微量滴定板所有孔的消光系数，并且借助分析禾歸"Magellan"测定CC5()。由于预培养HeLa细胞已使得分会合细胞层形成，因此在随后使用测试物进行培养的过程中，细胞溶解是进行分析的关键因素。将GMK细胞种入微量滴定板之中，然后在5。％C02、温度为37°C且空气湿度为95%的条件下，在培养箱中预培养48小时形成细胞层(SchmidtkeM等:JTirolMeth，2001，95(1-2)，133-143)。然后移去培养基，并且将不同浓度的物质(100|11/17浓度，稀释系数2)施用在培养基中。分别1顿100W培养基来测定对照值(六个未经处理的细M照组)在施用物质并培养72小时之后，f顿结晶紫/甲醇对细胞进行染色。在染料溶解之后，在Dynatech公司的微孔板阅读仪中(550/630nm)测定各个孔的光密度(OD)。对照组的平均值假设为100%。根据平均剂量反应曲线，禾佣缘對辭卜法算出50%细胞毒性浓度(CCso)。实施例在以下细胞中的50%细胞毒性浓度(ng/ml)HeLa细胞GMK细胞139.6>50245.7>50327.7未研究4〉50>5058.542.96443>502.2以上实施例16所述的化合物在培养基中的抗病毒效果使用国际参考株t桥奇病毒B3Nancy(CVB3Nancv)、人鼻病毒2和8(HRV2和HRV14)在HeLa细胞中进行细胞病变效应(zpE)抑制试验在该湖赋中所用病毒的复制导致宿主细胞完全破坏，即明显的细胞病变效应(zpE)。加入抗病毒有效物质(100jLil/孑L/浓度，稀释系数2)能抑制病毒引起的zpE(SchmidtkeM.等:JVirolMeth，2001，95(1-2),133-143)。在试敬程中，使用倉巨在感染之后24小时(CVB3Nancy)或者72小时(HRV2和HRV8)在未经处理的病毒对照组中弓胞完全zpE的病毒剂量，来感染未经处理的以及经过测试物处理的封闭细胞层。这时使用结晶紫/福尔马彬每尚且贴壁的细胞固定，并且进行染色。洗脱染料之后，在Dynatech微孔板阅读仪中以光度法对病毒引起的zpE的抑制效果进行定量检测。将经过测试物处理和未经处理的感染病毒细胞的光密度与设定为訓％的细胞对照组的光密度进行比较，计算抗毒效果。根据平均剂量反应曲线，算出50%的抑制浓度。使用普乐康尼作为对照物质。4顿实施例物质获得的试验结果均汇总在下粒中。实施例<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>使用实施例1所述的物质与奢奇病毒Bl、B2、B4、B5、B6(CVB1、CVB2、CVB4、CVB5、CVB6)进行空斑减少i微(PRT)进行试验时，{顿5080个空斑形成单位(PFU)感染12孔组织培养板中己经封闭两到三天的HeLa细胞层(SchmidtkeM等:JVirolMeth，2001，95(1-2)，133-143)。将两个未感染的板孔作为细IW照组(ZK)。在37°C温度下吸附病毒一小时后，抽去含有病毒的上清液。使用不含(病毒对照组)或者含有非细胞毒性浓度物质(稀释系数为2，每种浓衝则定两次)且含有0.4%琼月旨的i離培养基涂在感染的细祉，然后在37°C、鹏下培养48小时。{顿结晶紫-福尔马糊鄉L板固定、染色之后，移去琼脂，然后用流动的清水冲洗。在灯箱上清点病毒弓胞的空斑数量，然后计算测试物弓l起的空斑百分比减少率。执行三次相同的试验步骤，根据算出的平均剂量反应曲线，计算致使空斑M^50%的浓度(IC50)。使用实施例1戶皿的物质获得的i纖结果均汇总在下表之中<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>2.3实施例2和4所述的化合物在小鼠体内的急性与亚急性毒性确定实施例2和4所述的物质在45周大的小鼠(没有品系名称)体内的急性毒性。在1%羧甲基纤维素溶液中加入12滴TWIN-80律喊悬浮液。每5只小鼠为一组，按照1500、2000、2500、3000、4000或5000mg/kg齐!j量，让其一次口服实施例2和4所述的物质。在随后的3天确定这些小鼠的一般情况、体重变化、1J^^和存活率。一次性喂给浓度在3000mg/kg以下的实施例2和4所述的物质，所有小鼠均能存活(参见下表)。无论是一般情况，还是Ug驢或体重，均没有受到影响。两种物质的50%致死剂量约为3500mg/kg(根据Orber在Mayer等的病毒学工作方^(VirologischeArbeitsmethoden)中公布的计算结果，Gustav-Fischer出版社，Jena，1973)。服用5000mg/kg剂量之后，动物在35小时内死亡。浓度(mg/kg)死,活鼠数量实施例2实施例415000/50/520000/50/525000/50/530000/50/540003/54/550005/55/5根据这些试验结果，在一次性口服瞎况下，实施例2和4所述的物质可评为耐受性非常好。确定这质(实施例2和4)在四周龄的小鼠体内(没有品系名称)的亚急性毒性。在1%羧甲基纤维素溶液中加入12滴TWIN-80制成悬浮液。每7只小鼠为一组，按照100mg/kg剂量，连续5天每天一次让其口服实施例2和4所述的物质。观察时间为10天。每天iff古一般瞎况、体重差、M^^变化和存活率，以及在试验结束时分组评估脾脏、肺和肝脏的形恭变化。月艮用测试物对于一般瞎况以及1没有招可影响。与未经处理的对照组动物一样，体重增加。没有任何动物死亡。按照100mg/kg剂量五次口服实施例2和4所述的物质，结果证明耐受性非常好。所使用的附图标己清单1_吡唑[3，4-d]嘧啶2-[二(甲硫基)亚甲蜀丙二腈3-芳基胺4-芳基衍生物5-吡唑6-芳基脒18权利要求1、4-氨基-3-芳氨基-6-芳基吡唑[3，4-d]嘧啶衍生物，其特征在于是以通式I表示的一种化合物，其中-基团A和B相互独立地是苯基、萘基、吡啶基、喹啉基、吡嗪基、嘧啶基、吡唑基、三嗪基、咪唑基、呋喃基、噻吩基，且在上述任何一个基团中一至三个氢原子相互独立地被以下基团R1替代，-基团R1是NO2、CN、CONR22、COOR2、CHO、CONH2、卤素、具有1～7个链节的饱和或不饱和的直链或支化脂肪基、具有1～8个链节的饱和或不饱和的直链或支化烷醇基、OR2、SR2、NR22、SO2NR32、二氟甲基或三氟甲基、苯基，-基团R2、R3、R4、R5相互独立地是H、具有1～7个链节的卤化或非卤化的饱和或不饱和直链或支化脂肪基、苄基、苯基或萘基、具有杂原子N、S、O的饱和或不饱和单杂环或多杂环，其中每个上述基团任选独立地被氟、氯、溴、三氟甲基、烷基、烷氧基、氰基、硝基、氨基、氨烷基、C(O)-烷基、C(O)O-烷基、苄基、苯基或萘基取代。2、根据权利要求1戶腿的4-氨基3-芳基氨基6-芳基卩比唑[3，丰d]嘧啶衍生物，其特征在于是敏I表示的4-錢-6-苯基-3-(三-R、苯基氨基吡唑[3，4-d]嘧啶，其中基团A和B中的基团R1相互独立地选自CONH2、CN、卤素、N02或者CF3。3、根据权禾腰求1戶腿的4-氨基3-芳基氨基-6-芳基吡唑[3,4-d]嘧啶衍生物，其特征在于是通式I表示的l-RS-4-氨基-6-苯基-3-(三-R"苯基氨基吡唑[3，4-d]嘧啶，其中基团A和B的基团R1相互独lZ^雌自CONH2、CN、卤素、N02、CF3。4、根据权利要求1所述的4-氨基-3-芳基氨基-6-芳基吡唑[3,4-d]嘧啶衍生物，其特征在选自包括以下化合物的6-苯基氨基吡唑[3,4-d]嘧啶化合物4-氨基6-苯基-3-(三-R"苯基氨基吡唑[3,4-d]嘧啶、4-氨基6-(三-R"苯基-3-苯基氨基吡唑[3，4-d]嘧啶、l-烷基-4-氨基-6-雜-3-(三-I^)苯基,吡唑[3,4-d]嘧啶、4-氨基-l，6-二(三-R、苯基-3-苯基氨基吡唑[3，4-d]嘧啶、4-氨基6-苯基-3-(三-R"苯基烷氨勘比唑[3,4-d]嘧啶、l-烷基-4-氨基-6-苯基-3-(三-R"苯基烷氨基吡唑[3,4-d]嘧啶。5、根据权利要求1戶腿的4-氨基-3-芳基氨基-6-芳基吡唑[3，4-d]嘧啶衍生物，其特征在于选自6-苯基氨掛比唑[3，4-d]嘧啶化合物，其中基团A和B中的基团R1相互独ld;tt自卣素。6、根据权利要求1戶腿的4-氨基-3-芳基氨基-6-芳基吡唑[3,4-d]嘧啶衍生物，其特征在于选自包括以下化合物的6-苯基氨勘比唑[3,4-d]嘧啶化合物4-氨基-3-(3-氟苯基)氨基-6-苯基口比唑[3，4-d]嘧啶、4-氨基-3-(3-氟苯基)氨基-6-(4-氯苯基》吡唑[3，4-d]嘧啶、4-氨基-3-(3-氯)氨基-6-苯基卩比唑[3,4-(1]嘧啶、4-氨基-3-(3-甲氧基)氨基-6-苯基吡唑[3,4-d]嘧啶、4-氨基3-(4-氟苯基)氨基-6-苯勘比唑[3,4-d]嘧啶、4-氨基-3-(4-氟苯基)氨基-6-(4-氯苯基)吡唑[3，4-d]嘧啶、4-氨基3-(4-氯苯基)氨基-6-,卩比唑[3，4-d]嘧啶、4-氨基3-(3-氟苯基)氨基l-甲基6-苯基吡唑[3,4-d]嘧啶、4-氨基-l-苯基-3-(3-氟苯基)氨基-6-苯基吡唑[3，4-d]嘧啶。7、权利要求1戶腿4-氨基-3-芳基氨基6-芳勘比唑[3，4-d]嘧P定衍生物的制备方法，其特征在于，在酸(醋酸，三氟醋酸)或者其盐类(醋酸盐)存在下，使吡唑化合物与芳基脒化合物进行縮合反应。8、权利要求16中任一项所述的4-氨基-3-芳基氨基-6-芳基苯基[3,4-d]嘧啶衍生物或者其药用盐类的应用，其特征在于是作为生物活性物质。9、权利要求8所述的4-氮基-3-芳基氮基-6-芳基吡唑[3，4-d]嘧啶衍生物的应用，其特征在于所述生物活性物质具有抗病毒作用。10、权利要求9所述的4-氨基-3-芳基氨基-6-芳掛比唑[3，4-d]嘧啶衍生物的应用，其特征在于是用于预防、治疗病毒感染，例如用于治疗细小核糖核酸病毒感染。11、权利要求810中任一项戶脱的4-氨基3-芳基錢-6-芳基吡唑[3,4-d]嘧啶衍生物的应用，其特征在于是作为单一物质使用。12、权利要求810中任一项所述的4-氨基-3-芳基氨基6-芳基吡唑[3,4-d]嘧啶衍生物的应用，其特征在于是与其它有效物质、尤其是与已知的药物共同舰。全文摘要本发明涉及4-氨基3-芳基氨基-6-芳基吡唑[3，4-d]嘧啶衍生物及其制备方法以及作为抗病毒药物的应用。本发明的目的在于提供新型化合物作为例如用于治疗细小核糖核酸病毒感染的药物，且可避免已知药物的问题，尤其是抗药性和不耐受之类的问题。采用以通式I表示的化合物可解决这一任务。文档编号A61K31/519GK101553489SQ200780023162公开日2009年10月7日申请日期2007年6月20日优先权日2006年6月22日发明者H-M·达赫塞,M·施米特克,P·武茨勒,V·马卡罗夫申请人:第三专利投资有限两合公司