专利名称：：胃肠疾病的治疗的制作方法胃肠疾病的治疗本发明涉及预防和治疗胃肠疾病，和具体地，涉及用源自可食用植物的提取物预防和治疗胃肠疾病。胃炎包括多种不同的病症，所有这些病症都导致胃部的炎症。炎症可以由细菌感染引起，但其他因素，包括外伤性损伤和经常使用某些镇痛药，也可以造成胃炎。尽管有许多与胃炎有关的病症，但是这些疾病的征兆和症状非常相似上腹部的灼烧痛和偶尔胀气、打嗝、恶心或呕吐。在一些情形中，胃炎可以导致溃疡和增高的胃癌风险。胃溃疡是胃或十二指肠衬层上的疮。胃溃疡的一个原因是细菌感染，但是一些渍疡是由长期使用非类固醇消炎药剂(NSAIDs)，如阿司匹林和布洛芬引起的。在少数情形中，胃或胰腺中的癌性肿瘤可以导致溃疡。幽门螺杆菌(H.pylori)是这样的一种细菌类型，其是慢性胃炎的主要原因，并且在胃和十二指肠溃疡的发展中起关键作用(1)。幽门螺杆菌削弱胃和十二指肠的保护粘膜层，这容许酸穿过到达下面的敏感衬层。酸和细菌二者刺激衬层并导致疮，或溃疡。幽门螺杆菌能够在胃酸中生存，因为它分泌中和酸的酶。这种机制容许幽门螺杆菌设法到达"安全"的区域；即保护性粘膜衬层。一旦到达那里，该细菌的螺旋形状帮助其钻入衬层。这种生物体的慢性感染与增高的发展胃腺癌和胃淋巴瘤的风险有关(2)。已经表明幽门螺杆菌对胃上皮的附着影响疾病的严重性(3)。其促进细胞毒素-相关抗原A(CagA)经由由IV型分泌系统(TFSS)编码的cag致病岛易位进入宿主细胞，由此导致宿主细胞功能的颠覆并增加胃癌发展的风险(4)。同样地，附着于宿主胃粘膜的能力是最初建群和随着宿主病理学的后继发展继续生存和增殖的先决条件。幽门螺杆菌的治疗通常遵循7-10天的三重治疗方案，包括质子泵抑制剂诸如奥美拉唑或雷贝拉唑，以及普遍使用的抗生素诸如克拉霉素、甲硝唑和阿莫西林(5)。尽管有效，但是这样的方案从成本观点以及还有当已知发生副作用影响诸如腹泻、金属味道和过敏反应时，可以是不理想的。对克拉霉素和甲硝唑的耐药性也是10-20%患者在治疗后未能成功根除该生物体的治疗失败的主要原因(6)。该高失败率导致了将大量非-抗生素治疗法考虑作为治疗幽门螺杆菌感染的潜在备选方案。若干报告描述了植物提取物和它们分离的成分针对幽门螺杆菌的活性。例如，蔬菜诸如花椰菜(broccoli)用于制备胃炎的用途是公知的(8)。另外，花椰菜的活性成分，莱菔硫烷异硫氰酸盐(isothiocyanatesulforaphane)，显示出针对幽门螺杆菌包括抗生素抗性品系的活性(9)。此外，还显示了由葱火葱(Alliumascalonicum)(10)的醇提取物和由牛至(oregano)和蔓越桔(cranberry)(11)引起的幽门螺杆菌的生长抑制和脲酶生成。显示出表现针对幽门螺杆菌的毒性的其他植物是北美草药血根草(Sanguinariacanadensis)禾口白毛赏(HydrastisCanadensis)(12)、亚洲药草百花丹(Plumbagozeylanica)(13)、一定范围的希腊传统药物(14)、和绿茶提取物(15)。更近期，报告描述了肉豆蔻、香芹(parsley)、龙蒿、荜拨(longpepper)、鼠尾草属和肉桂针对幽门螺杆菌的抗细菌活性(16)。然而，许多这些烹调用和医药药草表现出针对革兰士-阳性和革兰士-阴性细菌二者显示出的具有毒性的广谱活性(17)。因此，消费这样的药草和它们的产品也可以对益生菌微菌群具有副作用，所述益生菌微菌群中的许多已知是有益的(18)。因此，为了有效，天然抗-幽门螺杆菌试剂应该表现出窄谱活性并且理想地是仅对幽门螺杆菌选择性的。本发明的目的是提供有效用于预防或治疗胃肠疾病，具体地胃和十二指肠溃疡的备选非-抗生素组合物。按照本发明的第一方面，提供用于预防或治疗胃肠疾病的组合物，其包括治疗有效量的可源自马铃薯汁的小于或等于4kDa的可溶性级分。按照本发明的第二方面，提供可源自马铃薯汁的小于或等于4kDa的可溶性级分用于制备预防或治疗胃肠疾病的药物的用途。按照本发明的第三方面，提供用于治疗胃肠疾病的方法，其包括向需要所述治疗的受试者施用治疗有效量的可源自马铃薯汁的小于或等于4kDa的可溶性级分。更优选地，所述级分小于或等于3kDa，特别地是l-3kDa。更特别地，可源自马铃薯汁的可溶性级分包括治疗有效量的等于或大于500Da—小于或等于lkDa。具体地，所述级分包括至少一种寡糖。优选地，所述级分在pH8是中性的。所述级分优选地包括苯酚糖苷、苯酚糖苷配基和/或氮化合物，优选地除了生物碱以外。所述级分可以包括选自由苏氨酸、缬氨酸和亮氨酸或异亮氨酸或甲硫氨酸组成的组中的一种或多种氨基酸。按照本发明的第四方面，提供可源自马铃薯汁的可溶性级分，其包括一定量的等于或大于500Da—小于或等于lkDa，其中所述可溶性级分包括三种咖啡酸衍生物和两种芳族衍生物。应该理解按照本发明的可溶性提取物可以处于纯的形式或备选地，其也可以与其他化合物混合，条件是那些化合物不抑制按照本发明的提取物的抗-附着性质。发现所述小于或等于4kDa的提取物，更特别地，等于或大于500Da一小于或等于lkDa的可溶性级分在抑制幽门螺杆菌结合和去除结合的细菌中特别有效，并且因此具有预防或治疗胃炎和十二指肠溃疡的功效。不希望受到任何具体理论的限制，认为小于或等于4kDa的级分，更具体地，等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分，可以模仿或与允许细菌附着于胃或十二指肠上皮的细菌受体竞争，尽管本发明人不希望受到该假说的限制。按照本发明的小于或等于4kDa的可溶性提取物，包括等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分，可以通过下列步骤以其最简单形式制备匀浆马铃薯汁和倾析出水性上清液，离心和分级该上清液从而分出理想的级分。该提取物可以通过，例如，标准技术，例如减压下蒸发进行浓縮、富集或凝聚。浓縮物的实例是至少2-倍，更通常地，至少4-倍，例如至少8-倍，或至少20-倍，或至少100-倍，或至少200-倍，或至少1000-倍浓縮的那些。任何合适的方法可以用于将水溶液分级为活性级分，包括，例如，分子量过滤、在合适的固体支持物诸如琼脂糖凝聚上层析或可以基于尺寸排阻层析的快速蛋白质液相层析(FPLC)。按照本发明的小于或等于4kDa的级分，包括等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分可以通过下列步骤中的一步或多步从马铃薯汁中制备(a)浸渍马铃薯块茎，任选地，新鲜剥皮的；禾口(b)离心过滤由此生成的水性汁。适当的有机溶剂可以用于协助纯化所述级分，所述适当的溶剂可以用于层析法步骤，诸如离子交换树脂和还有在例如Superdex上的尺寸排阻。在本发明的优选实施方案中，对所述级分进行离子交换层析，从而部分纯化提取物。优选地，在pH8，对所述级分进行阴离子HPLC分馏，在pH8，对其流出液进行阳离子HPLC。收集来自该阳离子HPLC的流出液，从而生成部分纯化的具有理想的抗-附着性质的提取物。分馏的上清液可以任选地冷冻或喷雾干燥，从而生成按照本发明的粉末状级分。粗制品(参考以上提到的分级上清液)可以基本"纯的"或甚至"稀释"使用。当是这种情形时，该上清液(无论稀释与否)可以与为了营养原因、医学原因或甚至为了调节接受治疗的受试者消费该提取物的适口性而添加的许多其他试剂相混合。例如，可以用食品或饮料产品配制该提取物，从而提供具有这样的特征的预防或缓解胃炎症状的功能性食品，所述特征.是其包含小于或等于4kDa，更优选地小于或等于3kDa，和最特别地，其包含等于或大于500Da一小于或等于lkDa的马铃薯汁可溶性级分。例如，可以用奶产品，使用奶(例如，奶、奶昔、酸乳酪、酸乳酪饮料或奶增补剂)作为原料配制所述提取物，从而生成具有添加的益处的美味饮料(drink)/饮品(beverage)，所述益处是其包含活性级分并因此应该高度适合作为胃炎患者的点心。所述功能性食品产品可以包括益生菌饮料。应该理解所述提取物可以配制为备选的饮品，诸如果汁，尽管这样的选择可能对胃炎患者不太理想。备选地，所述粗制品可以包含在用于肠喂食的营养液中。例如，所述活性级分可以与用于受试者肠喂食的盐或水溶液(可以包括其他维生素、矿物质和营养物)相混合。应该理解可能需要浓缩所述粗制品，或备选地，粉末状组合物可能是理想的。当是这种情形时，将需要对粗提取物进行浓縮/脱水。小于或等于4kDa，更优选地小于或等于3kDa的级分，和特别地，等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分可以配制为粉末、颗粒或半固体，以引入胶囊中。为了以半固体的形式介绍，所述提取物可以溶解或混悬在粘性液体或半固体赋形剂(vehicle)诸如聚乙二醇，或液体载体诸如二元醇，例如丙二醇、或甘油或植物油或鱼油，例如选自橄榄油、向日葵油、红花油、月见草油、大豆油、冷肝油、鲱鱼油等中的一种油中。然后，可以将其填入到这样的胶囊中，所述胶囊是硬明胶或软明胶类型的或由硬或软明胶等价物制成的，对于粘性液体或半固体填充物优选的是软明胶或明胶-等价物胶囊。包括按照本发明的小于或等于4kDa，更优选地小于或等于3kDa的级分，和特别地，等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分的粉末特别有效用于制备可以用于预防或治疗胃肠疾病，具体地，胃和十二指肠溃疡和胃和十二指肠癌的药物或营养产品。冷冻-千燥或喷雾干燥代表用于生产包括按照本发明的提取物的粉末的优选方法。喷雾干燥导致具有良好流动性质和快速溶解特征的自由-流动颗粒状粉末混合物。粉末状提取物可以重构为清澈/透明的低粘性饮料/饮品。如上讨论地，可以重构到水、乳或果汁中。应该理解所述粉末可以包装到小袋中，并且在需要或希望时由'受试者重构为饮料。粉末混合物代表本发明的优选实施方案。所述混合物包括粉末状提取物(如上所述)，和与之混合的其他成分。所述成分可以为了营养或医学原因或为了改善适口性而添加。粉末状提取物可以与不同颗粒尺寸的砂糖相混合，从而获得不同甜度的自由-流动的粉末混合物。备选地，天然甜味剂或人造甜味剂(例如，天冬甜素、糖精等)可以与所述粉末状提取物混合，从而重构为低卡路里/减少卡路里的甜饮料。所述粉末混合物可以包括矿物质增补剂。矿物质可以是钙、镁、钾、锌、钠、铁、和它们多种组合物中的任意一种。粉末混合物还可以包含缓冲剂诸如柠檬酸盐和磷酸盐缓冲液，和由碳酸盐，例如碳酸氢盐诸如碳酸氢钠或碳酸氢铵形成的发泡剂，和固体酸，例如柠檬酸或酸式柠檬酸盐。小于或等于4kDa，更优选地小于或等于3kDa，和特别地，等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分可以作为食品增补剂或食品添加剂存在，或可以被引入到食品，例如功能性食品或营养药中。这样的产品可以用作主食以及在可能存在临床需要的情况下使用。可以将所述粉末引入到糕点或谷物产品，诸如点心棒例如水果棒、坚果棒和谷物棒中。为了以点心棒的形式出现，粉末可以与选自干果诸如晒干的番茄、葡萄干和淡黄葡萄干(sultanas)、花生(groundnuts)或谷物诸如燕麦和小麦中的任何一种或多种成分混合。应该理解所述小于或等于4kDa的级分,小于或等于3kDa的级分，和特别地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分可以方便地配制用作药剂的药物(需要处方或相反)。粉末状级分或浓縮的液体级分也可以引入片剂、锭剂、糖果或其他用于口服摄取的食品中。也应该理解所述粉末状级分或浓縮的液体级分可以引入到缓慢-释放的胶囊或装置中，所述胶囊或装置可以被咽下并能够长期释放该级分到肠中。还可以将所述小于或等于4kDa的级分,小于或等于3kDa的级分，和特别地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分包封入微胶囊。例如，包封可以通过藻酸钙凝胶胶囊的形成。k-角叉藻聚糖、吉兰糖胶、明胶和淀粉可以用作微胶囊包封的赋形剂。粗制品、液体浓縮物、粉末等可以与治疗胃炎的已知治疗剂组合。同样地，按照本发明的提取物可以用在非常有效的组合治疗中。应该理解溶液中的提取物可以起治疗胃炎的其他治疗剂的理想赋形剂(vehicle)的作用。所述小于或等于4kDa的级分,小于或等于3kDa级分，和特别地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分还可以包括在包括益生菌部分的组合/合生素(synbiotic)治疗剂中。许多益生菌混合物中包含的细菌不具有附着性质，所以不会受到内含活性级分的影响。本发明的组合物可以以包含确定浓度的所述提取物的单位剂型存在。可以选择所述单位剂型，以获得理想水平的生物学活性。受试者需要的提取物的量由生物学活性和生物利用率确定，其又依赖于配制、施药模式、该提取物的物理化学性质和其是作为单治疗还是组合治疗使用。例如，成年人的每日剂量可以是0.1g-100g冷冻-干燥或喷雾-干燥的粉末(不管用何种方法配制的)。更优选地，是lg-30g，例如，如所需地，约5g、10g、或15g。所述提取物在包括在药物制剂诸如片剂或胶囊中时是特别有效的。所述制剂可能需要有肠-溶衣，如果生物利用率指示如此。已知的程序，诸如制药工艺常规使用的那些(例如，体内实验、临床试验等)，可以用于构建特定的药物组合物制剂和准确的治疗方案(诸如化合物的每日剂量和施药频率)。应该理解常规"营养药"程序可以用于制造包括所述小于或等于4kDa的级分，更优选小于或等于3kDa的级分和特别地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分的液体饮料、粉末混合物和食品。每日剂量可以作为单次施药给出(例如，用于口服消费的每日片剂或作为单次液体饮料)。备选地，使用的提取物可以需要在一天内施用2次或更多次。作为实例，包含0.1-20g喷雾干燥的提取物，优选0.3-10g喷雾干燥的提取物和更优选0.5-3.0g的100ml橙味饮料可以用于全天内每隔一定间隔缓和口渴并由此递送建议的剂量。应该理解增补了小于或等于4kDa的马铃薯提取物，小于或等于3kDa的级分和特别地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分的营养产品代表向患有或处于发展胃炎或其其他胃肠疾病风险中的受试者提供按照本发明的提取物的理想方法。因此，按照本发明的第五方面，提供用于预防或治疗胃肠疾病的营养产品，其包括治疗有效量的可源自马铃薯汁的小于或等于4kDa的级分，或小于或等于3kDa的级分和特别地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分。所述营养产品可以包括(a)清澈、低粘性、水样、稳定、易于使用、瓶装、碳酸或非-碳酸饮料；或用于重构的浓縮清澈液体，其包括可源自马铃薯汁的小于或等于4kDa的级分，或小于或等于3kDa的级分和特别地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分；(b)待用水或任何其他可口服摄取的液体重构为可饮用液体的粉末/颗粒混合物，其包括可源自马铃薯汁的小于或等于4kDa的级分，或小于或等于3kDa的级分和特别地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性级分；或(c)混合在食品(例如，谷物或巧克力棒，锭剂等)中的粉末状或颗粒状混合物。营养产品可以如上所述，并可以或可以不包含水溶性维生素、另外的矿物质增补剂、营养化合物、抗氧化剂或调味剂。本发明将进一步通过实施例，参考附图进行举例说明，在所述附图中图1是显示马铃薯汁(PJ)的抗-附着性质存在于小于3kDa的级分中的图表；图2是显示小于3kDa的级分的抗-附着活性是剂量依赖性作用的图表；图3举例说明蛋白酶K和热处理对马铃薯汁(PJ)及其级分的抗-附着性质的影响；图4是所述小于或等于3kDa的级分的阴离子交换HPLC分离层析图；图5是显示阴离子交换HPLC后小于或等于3kDa的级分的活性特征的图表；图6是显示阴离子交换HPLC分级的大规模的小于或等于3kDa的级分的碳水化合物含量；图7是大量分离的小于或等于kDa的级分阴离子交换流出液的阳离子交换HPLC的层析图；和图8是显示阳离子交换HPLC后小于或等于3kDa的级分的活性特征的图表。图9a是小于或等于lkDa—大于或等于500Da的级分在GeminiC18反相柱上的HPLC层析图。在280nm处UV检测，1、2:峰1禾口2;图9b是小于或等于lkDa—大于或等于500Da的级分在GeminiC18反相柱上的HPLC层析图。在350nm处UV检测；图10a是280nrn处峰1的UV光谱；图10b是280nm处峰2的UV光谱；图11是在14-17分钟洗脱下来的成分在350nm处检测的放大图。A-C:峰A-C;图12a是350nm处峰A的UV光谱；图12b是350nm处峰B的UV光谱；图12c是250nm处峰C的UV光谱；图13a是350nm处绿原酸标记的HPLC层析图；和图13b是350nm处绿原酸标记的UV光谱。本发明人进行研究来研究马铃薯汁对幽门螺杆菌具有什么作用。具体地，进行研究来确定马铃薯汁是否能够破坏幽门螺杆菌对胃上皮细胞的附着。破坏幽门螺杆菌建群的基本原理应该导致该生物体的清除和宿主组织损伤和症状的减少。进行进一步的研究，以确定马铃薯汁的抗-附着性质存在于小于或等于3kDa的级分，更特别地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可源自马铃薯汁的似乎中性电荷的可溶性级分。制备提取物通过首先在食物搅拌器中匀浆剥皮的KingEdwards马铃薯，筛滤碾碎的马铃薯并且在8000-3000rpm离心可溶性级分5-20分钟，生成马铃薯汁。然后，利用0.22pm的过滤器过滤溶液并将提取物保存在-8(TC直至需要。新鲜制备的粗马铃薯汁通过在VIVASpin20离心过滤器(MWCO3kDa)中，以3,660rpm离心过滤60分钟，离心3次而分级。收集的小于或等于3kDa的级分保存在-8(TC直至需要用于进一步的分析。另外，帝U备大规模的小于或等于3kDa的马铃薯汁级分，用于分离抗-附着成分。磨碎并过滤清洗和剥皮的马铃薯(8.66Kg)，从而提供2,215mL粗马铃薯汁，其在通过离心过滤分级后，提供853mL的小于或等于3kDa的级分。将其冻干并混悬在水(25mL)中，从而提供黄-红粘性液体。浓縮的级分保存在-8(TC直至需要用于进一步的分析。实施例l利用Bennett和Roberts,2005(19)描述的方法的改进确定马铃薯汁对幽门螺杆菌附着的影响，其中在用AGS细胞培养幽门螺杆菌之前或之后，包括马铃薯汁，或其级分。利用低聚甲醛和甘氨酸将AGS细胞固定在96孔板上。将幽门螺杆菌的培养物调节到OD(600)=0,25，并以1:1的比例与样品提取物混合。将lOO(iL等分试样加入到每个孔中，并在l，OOOrpm旋转IO分钟，随后在37。C微好氧培养90分钟。然后连续稀释和处理样品，从而通过标准程序进行生存计数。结果实验显示小于或等于3kDa的级分对幽门螺杆菌与AGS细胞的结合具有显著作用，如附图的图l中所示。幽门螺杆菌细胞与AGS细胞结合后，加入小于或等于3kDa的级分的连续稀释物。随后，确定结合的细菌数量，将PBS对照中结合的细菌数量表示为100%。小于3kDa级分的浓缩液未稀释。滴定显示剂量依赖性作用(见图2)。图1和2中说明的结果是在细菌附着后加入所述级分后获得的，但是令人兴奋地，发现无论与幽门螺杆菌同时或在细菌附着后(如通过置换测定证明的)将该级分加入到宿主细胞中，所述小于或等于3kDa的级分对幽门螺杆菌与AGS细胞结合的影响均起作用。这显示所述小于或等于3kDa的级分中存在的抗-附着成分不仅能够抑制结合而且能够从AGS细胞中除去结合的幽门螺杆菌，因此提供去除结合的幽门螺杆菌感染宿主的可能性，从而促进根除。研究了热和蛋白酶K消化对马铃薯汁活性的作用。结果显示抗-附着性质不受热处理的影响，且用蛋白酶K(PK)温育对所述提取物的活性似乎不表现出任何明显的影响(图3)。蛋白酶K是非特异性蛋白酶，其裂解脂族、芳族或疏水氨基酸羧基端的肽键。在后者处理的方面，这提示活性成分本质上不是蛋白质样的。进行小于或等于3kDa级分的阴离子和阳离子HPLC分级，从而纯化该级分的抗-附着成分。蛋白质或其他生物分子具有已知为PI值的性质，所述PI值是该分子不携带净电荷的pH。在高于PI值的pH下，分子带负电荷，而在低于PI值的pH下，分子带正电荷。这种性质可以在离子交换层析过程中利用。基本上，离子交换涉及在带正电荷的柱(阴离子交换)或在带负电荷的柱(阳离子交换)上洗脱提取物，最初使用缓冲液，诸如Tris或MES洗脱未结合的物质，并且然后引入线性盐梯度，从而在各自的pH下，置换与柱结合的分子。为了结合，在使用的pH下，分子必须具有与柱的净电荷相反的净电荷。在装配UV检测器(215,254和280nm)和电导率记录仪的ETTANLC(安玛西亚生物科学(AmershamBiosciences))上进行所有的分离。利用Unicom软件分析结果。为了阴离子交换分级，使用的柱是MonoQHR5/5(1mL体积)，带电基团0-CH2-CHOH-CH2-0-CH2-CHOH-CH2-N+(CH3)3。流动相缓冲液A:20mMTris-HCl(pH8)，缓冲液B:处于2MNaCl中的20mMTris(pH8)。用3.5倍柱体积的100。/。缓冲液A洗脱柱，从而去除未结合的物质，之后，引入10倍柱体积的由0%B到100%B进行的线性梯度模式，从而置换结合的物质。流速为0.25-0.4mL.分钟—1。通过500|iL注射环递送10-20个250pL各种级分的等分试样(缓冲液A)。然后，对每次运行收集30份0.5mL级分，并在测定抗-附着活性前将该级分的复制物汇集、冻干并混悬在500laL中。在测定前，通过在Spectra/Por⑧透析管(MWCOlkDa)中，针对蒸馏水的透析对级分8-30进行脱盐。冻干脱盐的级分并混悬在500pL水中。通过阴离子交换分离后，结果显示在级分2-5中洗脱的UV吸收物质(图4)代表"流出液"，且在pH8下，该物质是中性或带正电荷的。随后在级分10-17中洗脱的物质与柱结合，因此在pH下，这些成分携带净负电荷。活性筛选显示活性成分存在于流出液中，并且因此在pH8时是中性或带正电荷的(图5)。糖分析(利用改进的最初由Dubois等(20)描述的苯酚-硫酸法，以促进在96孔板读数器中的分析)显示阴离子交换后所有碳水化合物洗脱在流出液中(图6)。这些结果显示阴离子交换在pH8下，将活性成分从带负电荷的物质中分离出来。大量分离阴离子交换流出液(级分2-7)，并且使用与阴离子交换实验中使用的相同条件，通过阳离子交换分开由此产生的级分。HPLC层析图显示所有UV吸收物质在引入盐梯度前洗脱时，不粘在柱上(图7)。同样地，阳离子交换后，抗-附着成分似乎仍然存在于流出液中，这说明它们在pH8时的中性性质(图8)。因此，在MonoQ柱上阴离子交换，随后在MonoS柱上阳离子交换活性级分后，所述抗-附着成分在pH8时似乎不携带净电荷，并且因此是中性的。清楚地，在pH8时，发生一些纯化，因为通过阴离子交换己经从显著量的带负电荷物质中分出了活性。实施例4针对所述小于或等于3kDa的级分进行植物化学分析该级分的TLC分析显示苯酚糖苷、氮化合物和许多如下表1中所示的未知物的存在。此外，在代表20种已知蛋白质氨基酸的标记旁的提取物TLC分离提示苏氨酸、纈氨酸和亮氨酸或异亮氨酸或甲硫氨酸的存在。表1.关于小于或等于3kDa的级分的TLC数据<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>粗或部分纯化的小于或等于3kDa的级分可以进一步按照本发明加工，从而提供可以用于预防或治疗胃和十二指肠溃疡和癌的功能性食品产品。在该方面，在消费马铃薯原汁可以减轻胃炎症状的同时，应该显然不可能通过这种方式最大化健康益处，这归因于需要消费的马铃薯汁的频率和量。鉴定和分离按照本发明的小于或等于3kDa的级分允许将浓縮量的所述汁的生物活性部分引入到合适的产品("功能性食品")中，所述产品然后可以在需要的时候消费，从而获得理想的健康益处。实施例5-制备马铃薯汁的3kDa级分粉末如上所述地制备匀浆的马铃薯汁的小于或等于3kDa的提取物，并冷冻-干燥形成按照本发明的粉末状提取物。实施例6-制备马铃薯汁的3kDa级分的粉末混合物将3.0g冷冻干燥的粉末状提取物(实施例4)与0.5g粉末状柠檬酸、26.3g砂糖和0.2g标准喷雾-干燥的调味剂混合物相混合。该混合物代表自由-流动的粉末制剂(包含3.0g活性级分)，其适合于包装在小袋中。当患有胃炎的受试者需要时，粉末混合物可以按口味稀释并饮用。实施例7-制备按照本发明使用的橙味饮料(a)将100ml粗制品与100ml两倍浓缩的橙汁(在水中稀释为2倍浓度的橙汁浓縮液)相混合；(b)将3.5g冷冻-干燥的粉末溶解在100ml橙汁(或备选地，用橙汁浓縮液和水)。橙味饮料(a)或(b)可以被受试者立即消费，冷冻以用于随后消费或封装在瓶或硬纸盒中以获得更长的保存期。应该理解橙汁可以方便地被替换为美味的备选物质，诸如奶。实施例8—小于或等于1kDa—大于或等于500Da的级分的HPLC指纹分析通过反相HPLC分析抗-附着级分，即具有小于或等于1kDa—大于或等于500Da的级分的级分，从而提供在不存在盐的条件下直接适合于LC-MS分析的分离物，如具有HPAECHPLC层析图的情形。使用的HPLC柱是GeminiC18250x4.6mmi.d柱，其具有粒子尺寸5pm，使用设计用于分离马铃薯中的游离酚类化合物的程序(21)。在返回到初始条件前，流动相由A二水甲醇乙酸(88:10:2)和B二水甲醇乙酸(8:90:2)组成，且涉及经过9分钟增高到10%B，以及随后在9-13分钟之间剧增至100%B的梯度。以下结果显示关于小于或等于lkDa—大于或等于500Da的级分获得的典型踪迹(图9a)。当在280nm处监测时，存在若干吸收峰，但是明显地，存在2个，即似乎分开的1和2(图9a)。峰1和2的UV光谱分别显示在图10a和10b中。这两种成分性质上均是芳族的，且可以是嘌呤、嘧啶或芳族氨基酸残基。在350nm处，在14-17分钟之间洗脱的成分的HPLC层析图不同(图9b)。该区域的放大图(图ll)显示若干峰。尽管没有完全解析，峰A-C具有指示咖啡酸衍生物(图12a-12c)、与绿原酸属于同一家族的酚类类苯基丙烷(phenolicphenylpropanoids)(图13a和b)UV光谱，酚类类苯基丙垸是马铃薯中主要的酚。在15分钟时，即当绿原酸标记被洗脱下来时，没有观察到明显的峰(图13a，b)。因此，总而言之，所述小于或等于1kDa—大于或等于500Da的级分中存在至少3种以微小浓度存在的咖啡酸衍生物，没有一种是绿原酸。此外，所述级分中存在若干芳族成分，其中两种似乎已被分离。参考文献1.Blaser,MJ,(1998)幽门螺杆菌和胃病(Helicobacterpyloriandgastricdiseases).生物医学杂志(BiomedJ.)316:1507-1510.2.Uemura，N.,Okamoto,S.，Yamamoto,S,,Matsumura，N.,Yamaguchi,S.,Yamakido，M.,Taniyama,K.,禾卩Sasaki,N,,Schlemper,RJ.(2001)幽门螺杆菌感染禾口胃癌的发展(Helicobacterpyloriinfectionandthedevelopmentofgastriccancer).新英格兰医学杂志(N.Engl.J.Med.)345:784-789.3.Guruge，J丄.，Falk,P.G"Lorenz,R.G.，Dans,M.,Wirth，H.R,Blaser,MJ.,Berg,D.E.,和Gordon,J.I.(1998)上皮附着改变幽门螺杆菌感染的结果(EpithelialattachmentalterstheoutcomeofHelicobacterpyloriinfection).美国国家科学院学报(Proc,Natl,Acad,Sci.USA)95:3925-39304.Censini,S.，Stein,M.,和Covacci,A.(2001)与幽门螺杆菌接触后诱导的细胞卩向应(CellularresponsesinducedaftercontactwithHelicobacterpylori).当前微生物学观点(Curr.Opin,Microbiol.)4:41-465.Calvert,X.,Ducons,J.,Bujanda，L.,Bory,F.，Montserrat,A.,禾口Gisbert,J.P.(2005)关于幽门螺杆菌根除的7天对比IO天的雷贝拉唑三重治疗:多中心随机化实验(SevenversustendaysofrabeprrazoletripletherapyforHelicobacterpylorieradiction:amulticenterrandomisedtrial).美国肠胃病学杂志(Am.J.Gastroenterol)100:1696-17016.Goh,K丄.(2002)关于幽门螺杆菌感染包括药物耐药性生物体管理的更新(Updateonthe'managementofHelicobacterpyloriinfection,includingdrugresistantorganisms).肠胃病学和肝脏学杂志OGastroenterolHepatol)17:482-487.7.Kamiji,M.M.,和deOliveiraR.B.(2005)关于幽门螺杆菌感染的非-抗生素治疗法(Non-antibiotictherapiesforHelicobacterpyloriinfection).欧洲肠胃病学和肝脏学杂志(EurJGastroenterolHepatol)17:973-981.8.Galan，M.V.,Kishan,A.A.,Silverman,A丄.，2004.用于治疗幽门螺杆菌感染的口服花椰菜芽初步报告(OralBroccolisproutsforthetreatmentofHelicobacterpyloriinfection:aprelimaryreport).消"[七系统疾病禾卩禾斗学(DigestiveDiseasesandSciences)49,1088-1090.9.Fahey,J.W.,Haristoy，X.,Dolan,P.M.,Kensler,T.W.，Scholtus,L,Stephenson,K.K.,Talalay,P.,Lozneiwski,A.,2002.l-异硫氰基-4R-丁烷抑制幽门螺杆菌胞外、胞内、和抗生素-耐药性菌株并预防benzo[a]pyrene诱导的胃瘤(Sulforaphaneinhibitsextracellular,intracellular,andantibiotic-resistantstrainsofHelicobacterpyloriandpreventsbenzo[a]pyreneinducedstomachtumors).PNAS99,7610-7615.10.Adeniyi,B.A.，Anyiam,F.M.,2004.火葱(百合科)叶甲醇提取物的体外抗-幽门螺杆菌潜力对脲酶活性的易感性和作用(Invitroanti-HelicobacterpyloripotentialofmethanolextractofAlluimascalonicumLinn.(Liliacaea)leaf:susceptibilityandeffectonureaseactivity).植物疗法研究(PhytotherapyResearch)18,358-361.11.Lin,Y.T.,Kwon，Y.I.,Labbe，R.G.,Shetty，K.,2005.由牛至和蔓越桔植物化学协同作用引起的幽门螺杆菌和相关脲酶的抑制(InhibitionofHelicobacterpyloriandassociatedureasebyoreganoandcranberryphytochemicalsynergies).71,8558-8564.12.Mahady,GB.，Pendland，S丄,，Stoia,A.，Chadwick,L.R.,2003.幽门螺杆菌对来自北美草药血根草和白毛茛的异喹啉生物碱体外易感性(InvitrosusceptibilityofHelicobacterpyloritoisoquinolinealkaloidsfromSanguinariaCanadensisandHydrastiscanadensis).植物疗法石jf究(PhytotherapyResearch)17,217-221.13.Wang,Y-C，Huang，T-L.,2005.白花丹的抗-幽门螺杆菌活性(Anti]i-HelicobacterpyloriactivityofPlumbagozeylanicaL).FEMS免疫学和医学微生物学(FEMSImmunologyandMedicalMicrobiology)43,407-412.14.StamatisG.,Kyriazopoulos,P.,Golegou,S.,Basayiannis,A,，Skaltsas，S.,Skaltsa,H.,2003.希腊草药的体外抗-幽门螺杆菌活性(Invitroanti-HelicobacterpyloriactivityofGreekherbalmedicines).禾中方矣药理学(JournalofEthnopharmacology)88，175-179.15.Matsubara,S.，Shibata,H.，Ishikawa,F.,Yokokura,T.,Takahashi,M.,Sugimura,T.,Wakabayashi,K.，2003.在蒙古沙鼠中由绿茶提取物抑制幽门螺杆菌-诱导的胃炎(SupressionofHelicobacterpylori-induced胃炎bygreenteaextractinMongoliangerbils).生物化学和生物物理学研究通信(BichemicalandBiophysicalResearchCommunications)310,715-719.16.O'Mahony,R.,Al匿Khtheeri,H.,Weerasekera,D.,Fernando,N.,Vairi,D.，Holton,J.,Basset,C,2005.烹调用和医学植物针对幽门螺杆菌的杀菌和抗-附着性质(Bactericidalandanti-adhesivepropertiesofculinaryandmedicinalplantsagainstHelicobacterpylori).世界肠胃病学杂志(WorldJournalofGastroenterology)11,7499-7507.17.Deans,S.G.,Ritchie,G.,1987.植物精油的抗菌性质(Antibacterialpropertiesofplantessentialoils).国际食品微生物学杂志(InternationalJournalofFoodMicrobiology)5,165-180.18.Chou,L-S.,Weimer,B.，1999.从嗜酸乳酸菌菌株中分离和表征酸-和胆汁-耐受的隔离禾中群(Isolationandcharacterizationofacid-andbile-tolerantisolatesfromstrainsofLactobacillusacidophilus).学L禾斗学杂志(JournalofDairyScience)82,23-31,19.Bennett,H.，和Roberts,LS.(2005)识别幽门螺杆菌中的新唾液酸-结合蛋白(Identificationofanewsialicacid-bindingproteininHelicobacterpylori).FEMS免疫学和医学微生物学(FEM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