专利名称：：冬凌草甲素在制备促周围血管内膜增厚药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及冬凌草甲素在制药中的应用，尤其涉及冬凌草甲素在制备促周围血管内膜增厚药物中的应用。技术背景近年来，肿瘤的发病率明显增高，随着传染病的减少，肿瘤和心脑血管病己上升为第一、二位的疾病，其中肿瘤成为引起死亡的首位疾病。目前治疗肿瘤的常用方法有外科手术、放射治疗、化疗和专利治疗等，其治疗方法各有特点。近年的研究发现肿瘤侵袭转移是肿瘤治疗失败的主要原因,其过程是一个多步骤、多分子参与的癌细胞与宿主细胞间相互作用的复杂连续过程，包括原发瘤增殖、肿瘤新生血管生长、侵袭基底膜，在循环系统形成瘤栓并转移到靶器官等。肿瘤的生长有2个明显不同的阶段，即从无血管的缓慢生长阶段转变为有血管的快速增殖阶段。无血管的肿瘤通过组织间液获取从毛细血管渗透的营养物质，细胞增殖缓慢，原发肿瘤的体积不会超过l2mm，这种状态称血管前期；肿瘤细胞团从宿主基质中建立自身的血液供应系统，即为血管生成，己长成的瘤体从宿主中获取新的血管成分亦属同样的过程。肿瘤血管生成是一个受多种不同层次调节的过程，很显然，针对肿瘤血管生成的治疗措施可以成为一种新颖的抗癌途径。近来随着人们对实体瘤内皮细胞增殖动力学研究的不断深入，针对肿瘤血管的治疗措施也迅速发展起来。肿瘤组织血管内皮细胞的增殖速度比正常组织要快得多，所以抗内皮细胞增殖疗法(Antiproliferatingendothelialtherapy,APET)有间接的抗癌作用，APET这一概念现己扩展到包括任何针对肿瘤血管的治疗措施，称之为抗血管治疗(Anti-vasculartherapy)。冬凌草甲素是从唇形科(Labtea)香茶菜属(Rabdosia)植物中分离出的一种贝壳杉烯二萜类(ent2kau2renediterpenoid)天然有机化合物，主要植物来源有香茶菜(Rabdosiaamethystoides)，显脉叶香茶菜(Rabdosianervosa),毛叶香茶菜(Rabdosiajabdsia)，道孚香茶菜(Rabdosiadownsis)和冬凌草或碎米亚(Rabdosiarubescens),延命草(Isodonjaponicus)。冬凌草甲素属贝壳杉烯二萜类化合物，性状为无色棱柱状结晶，味道极苦，不溶于水,可溶于乙醚、甲醇、乙醇等有机溶剂。冬凌草甲素的结构中与环外亚甲基共轭的环戊酮结构为抗癌活性中心,裂环或亚甲基饱和则作用消失。冬凌草甲素是己知的对肿瘤特别是肝癌、食管癌、贲门癌有抑制作用的化合物(冬凌草甲素的药学研究进展，张典瑞，任天池著，中国药学杂志2003年11月第38巻第11期)，关于冬凌草甲素抑制肿瘤活性的专利也有报道，但是，经检索将冬凌草甲素应用于制备促周围血管内膜增厚药物的研究还未见报道。
发明内容针对现有技术的不足，本发明要解决的技术问题是提供一种冬凌草甲素在制备促周围血管内膜增厚药物中的应用。研究证实实体瘤周边的瘤细胞伸缩，将紧邻的宿主毛细血管静脉端的基底膜降解,导致血管内皮细胞的迅速增殖并向肿瘤迁徙，逐步发育成熟并形成有功能的管状结构(毛细血管袢)，继而与宿主血管发生吻合，由此构成肿瘤的血液循环系统。尽管化疗己广泛使用，但对实体瘤的治疗疗效仍相对较弱。(抗癌化疗药物的研究进展简介，张歧等著，中国药物化学杂志)。目前对于实体瘤的血管疗法己有进展，大多为抗血管生成方法，主要原理为抗内皮细胞增殖及迁徙，阻止肿瘤细胞分泌TAFs,阻断TAFs的效应，即通过抗TAFs抗体或抗TAFs受体的抗体来中和或阻断其生物学效应，抑制血管平滑肌细胞的生长，干扰内皮细胞与细胞外基质(EMC)的相互作用，阻止血管网的形成。.本发明的冬凌草甲素在制备促周围血管内膜增厚药物中的应用。其中所述药物指含有冬凌草甲素的制剂。进一步优选的是所述冬凌草甲素的制剂指冬凌草甲素注射剂；其中冬凌草甲素以C加H280e计为30mg。上述周围血管是指与实体瘤治疗相关的周围血管；其中所述实体瘤指有形瘤，即可通过临床检査如X线摄片，CT扫描，B超，或触诊扪及到的有形肿块称为实体瘤，本发明主要指乳腺癌、直肠癌、肺癌、子宫癌。本发明所述冬凌草甲素的化学结构式为其中本发明所述冬凌草甲素注射剂主药分子量364.43，主药分子式C2。H2806,主药CA号28957-04-2,规格30mg(以CaoH^A计)。本发明通过静脉推注注射用冬凌草甲素使实体瘤患者周围血管内膜增厚，导致血管腔道狭窄乃至堵塞，停止实体瘤的血液供应，最终实现抑瘤目的。试验显示本发明所述冬凌草甲素在促进周围血管中膜与内膜平滑肌细胞生长增殖的同时，对间质细胞、内分泌细胞、神经细胞等多种细胞有促进生长作用，同时促使中膜平滑肌细胞向内膜迁移，在内膜继续大量增殖(血管内膜细胞凋亡率低，过低的凋亡水平不足以抗衡平滑肌细胞增殖)，使血管内膜增厚，导致血管腔道狭窄乃至堵塞，实体瘤的血液供应量减少或停止，使实体瘤萎縮、坏死，最终消失。通过动物试验对注射用冬凌草甲素抑制肿瘤的促周围血管内膜增厚的药理机制进行详细的研究证实，注射用冬凌草甲素可促使实体瘤患者血管内膜与中膜的平滑肌细胞大量增殖，中膜平滑肌细胞向内膜迁移，在内膜继续大量增殖，有效抑制了实体瘤的生长，以此，为冬凌草甲素在制备促周围血管内膜增厚药物的开发奠定了基础。具体实施方式在一个优选的实施方案中观察具有移植性S180实体瘤的荷瘤小鼠在静脉推注注射用冬凌草甲素7d后，试验组实体瘤治疗总有效率86.5%，对照组瘤体未见縮小，为PD级别，光镜观察对照组与试验组实体瘤瘤内血管及宿主血管的结构试验组内膜明显增生，新生内膜中可见局灶性细胞增殖，内膜呈进行性弥漫性增厚，增厚的内膜中以VSMC为主，因此造成内膜增厚，血管腔狭窄乃至堵塞；对照组瘤内血管及宿主血管内膜VSMC排列整齐，血管内膜完好，血管腔未见狭窄。具体动物试验1.动物模型及试验方法的确定选取健康昆明种小鼠20只，体重1822g。每只小鼠右侧腋部皮下接种S-180肿瘤细胞生理盐水混悬液(lX10'个/ml)0.2m1,次日称重后随机分成2组，即试验组与对照组，试验组10只，尾静脉注射给药(冬凌草甲素，规格30mg)，剂量为4mg/kg(f1,每日l次，连续给药10天，给药结束后次日处死小鼠，然后剥其瘤块并称重，计算其抑瘤率，并按照实体瘤的疗效评价标准(ResponseEvaluationCriteriainSolidTumors,RECIST)对治疗效果进行评价,在S-180实体瘤宿主血管相同部位取血管lcm，4%多聚甲醛固定24h,乙醇梯度脱水，石蜡垂直定向包埋，每段血管间断均匀切片810张后，常规HE染色。每只大鼠标本不同时间点各随机取1片进行光镜观察、照相和图像分析，按组织学划分，内弹力膜以内为内膜，内弹力膜与外弹力膜之间为中膜。以MIAS医学图像分析系统分别测量宿主血管和瘤内血管内弹力膜内面积，外弹力膜内面积，管腔面积，外弹力膜周径，内弹力膜周径以及管腔周径。并在此基础上计算出中膜面积、内膜面积、中膜厚度、内膜厚度、内膜面积增生比率、内膜厚度增生比率、内膜/中膜面积比、内膜/中膜厚度比。以上试验结果均与对照组进行对比分析。2.试验结果及分析注射用冬凌草甲素对小鼠S-180实体瘤的抑制效果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>对照组平均瘤重-试验组平均瘤重*抑瘤率a)=xioo%对照组平均瘤重光镜观察对照组与试验组实体瘤瘤内血管及宿主血管的结构试验组内膜明显增生，新生内膜中可见局灶性细胞增殖，内膜呈进行性弥漫性增厚，增厚的内膜中以VSMC为主,因此造成内膜增厚，血管腔狭窄乃至堵塞；对照组瘤内血管及宿主血管内膜VSMC排列整齐，血管内膜完好，血管腔未见狭窄。MIAS医学图像分析系统分析结果表明实验组内膜面积、内膜厚度、内膜面积增生比率、内膜厚度增生比率、内膜/中膜面积比、内膜/中膜厚度比均显著高于对照组。由以上试验结果可见，注射用冬凌草甲素对小鼠S180实体瘤具有明显抑制作用，冬凌草甲素可引起实体瘤宿主血管及瘤内血管细胞内膜增生，使血管腔变狭窄乃至堵塞，切断实体瘤的血液供应，使实体瘤逐渐萎缩乃至死亡脱落。权利要求1.冬凌草甲素在制备促周围血管内膜增厚药物中的应用。2.按照权利要求l所述的应用，其特征是所述冬凌草甲素的化学结构式为:3.按照权利要求1所述的应用,围血管。4.按照权利要求3所述的应用，子宫癌。5.按照权利要求l所述的应用，6.按照权利要求5所述的应用,射剂。其特征是所述周围血管指与实体瘤治疗相关的周其特征是所述实体瘤指乳腺癌、直肠癌、肺癌、其特征是所述药物指含有冬凌草甲素的制剂。其特征是所述冬凌草甲素的制剂指冬凌草甲素注全文摘要本发明公开了一种冬凌草甲素在制备促周围血管内膜增厚药物中的应用。其中所述周围血管指与实体瘤治疗相关的周围血管；所述药物指含有冬凌草甲素的制剂。本发明通过静脉推注注射用冬凌草甲素使实体瘤患者周围血管内膜增厚，导致血管腔道狭窄乃至堵塞，停止实体瘤的血液供应，最终实现抑瘤目的。文档编号A61P9/00GK101244054SQ20081001446公开日2008年8月20日申请日期2008年3月11日优先权日2008年3月11日发明者田久,厉保秋,黄山英申请人:山东大学