羧胺三唑及其可用盐的医药新用途的制作方法

专利名称：羧胺三唑及其可用盐的医药新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及羧胺三唑(carboxyamidotriazole, CAI)或其药学上可接受的盐、类 似物或衍生物的医药新用途，特别是其在制备预防或治疗神经变性疾病和/或炎症 性肠道疾病药物中的应用。更具体地，本发明涉及包含羧胺三唑或其药学上可接 受的盐、衍生物、类似物的组合物和使用这种组合物预防或治疗肌萎縮性脊髓侧 索硬化和/或炎症性肠道疾病的用途。
背景技术：
肌萎縮侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis, ALS)是一种渐进的致命性的 运动神经元疾病(motor neuron disease, MND)，又名Lou Gehrig氏病，以脊髓前角 和脑干运动神经元以及锥体束的慢性进行性变性，上下运动神经元同时受损为特 征。多为中老年起病，男女=1.0 1.6 : 1，近年有报道儿童期起病者，平均 发病年龄约为8岁，最小者仅为9个月。多数国家ALS的年发病率为5 7/105，高 的可达40/ 105，太平洋关岛地区为该病的高发区。这种疾病发展迅速，大多数的 患者在病发的2 5年内死亡。患者主要表现为脊髓和脑干所支配的肌肉无力、萎 縮、肌束震颤，球麻痹和锥体束征；感觉系统一般不受侵犯。ALS发病早期，随着 运动神经元死亡，患者出现不正常的疲劳、笨拙、肌肉弱化、口齿不清、肌肉萎 縮和痉挛。随着疾病进展，患者逐渐丧失手、臂、腿和颈部肌肉的作用，最后发 展成瘫痪，丧失说话和吞咽能力，最后导致患者死亡的一般原因是控制呼吸的隔 膜肌丧失作用。ALS可分为家族性肌萎縮性脊髓侧索硬化症(FALS)和散发性肌 萎縮脊髓侧索硬化症(sporadic amyotrophic lateral sclerosis, SALS)，前者约占 5-10%。其发病机制尚未完全清楚，也无特效治疗(TCaroscio,MNMulvihill,R Sterling, and B Abrams ， Amyotrophic lateral sclerosis. Its natural history. J Neurol Clin, Feb 1987; 5(1): 1-8.)。
基于在一些ALS患者脑脊液中发现不正常的高谷氨酸盐水平，针对该疾病提出 的治疗方法之一是调节大脑中谷氨酸盐的水平。在ALS患者和小鼠模型的脑皮层和 脊髓中谷氨酸盐转运子EAAT2减少，导致谷氨酸盐浓度过高，引起激活毒性，即谷氨酸盐受体的激活，神经元中钙离子超载，及下游信号转导受损。研究提示可 以使用谷氨酸盐拮抗剂，阻止大脑中谷氨酸盐的释放。目前唯一通过美国FDA认 证并在全球广泛使用的ALS治疗药物力鲁唑(Riluzole)即属此类，但它不是一种治 愈性药物，不能改善症状或逆转进行性恶化的趋向，此外，利鲁唑的缺点时治疗 易导致肝脏酶指标升高及粒细胞减少，必须监测肝脏酶水平及血红蛋白、血细胞 压积、血细胞计数。其他的谷氨酸盐拮抗剂包括美沙芬和拉莫三嗪(利必通)， 上述几种药物通过血脑屏障前的降解情况依然需要极大的关注。部分细胞因子(脑 源性神经生长因子等)在体外和动物实验中获得较为肯定延长运动神经元和模型 鼠生存时间的疗效，但临床试验的结果却不乐观，可能与细胞因子在体内受到复 杂因素的干扰有关。基因治疗包括与细胞因子、凋亡相关的基因策略，如利用病 毒等载体携带相关基因进入病变组织并表达神经营养因子，该种方式使细胞因子 较稳定地存留于靶组织，但病毒载体的潜在危险性，以及表达相关基因的稳定性 不佳，都是限制其应用的不利因素。
炎性肠道疾病(Inflammatory Bowel Disease, IBD)包括溃疡性结肠炎 (Ulcerative Colitis, UC)和克隆氏病(Crohn's disease, CD)，是一类病因尚未完 全明确的肠道非特异性慢性炎性疾病。溃疡性结肠炎通常是结肠粘膜发炎，严重 时可扩大到粘膜下层。另外直肠也会受到侵害，但只有种少数情况下会累及回肠。 克隆氏病，也称为局限性肠炎或肉芽肿性结肠炎，是常见位于小肠，尤其是位于 回肠的疾病，但也会影响空肠和结肠的任何部分，包括直肠。通常，这种炎症不 同于溃疡性结肠炎，对层的影响较粘膜深，同时对上皮的影响较小。UC和CD的 发病涉及环境、遗传、微生物、免疫等多个因素，其特点是病变复杂、多样，误 诊率高，并发症多、复发率高。临床表现为腹泻，腹痛，发热，消瘦，粘液脓血 便，消化道梗阻，腹腔脓肿及口腔溃疡等表现，病情轻重不等，多呈反复发作。 这两种疾病在发达国家尤其多发，在美国，溃疡性结肠炎的发病率为每100,000人 中有5-15名患者，而克隆氏病的发病率约为每100,000人中有5人患病，这一数 字目前还在升高，并且在我国的发病率也呈明显增长态势。临床治疗除激素、免 疫抑制剂、氨基水杨酸制剂外很少有特效治疗药物。目前使用较多的治疗药物为 柳氮磺胺吡啶(SASP)，该药口服后很少吸收，在肠内分解为磺胺吡啶和5-氨基 水杨酸。磺胺吡啶大部分在结肠吸收，是造成SASP毒性的主要原因，患者用药后 常有恶心、呕吐、皮疹、贫血、关节炎、头痛等副反应。近年来的研究证实，IBD是机体对外界刺激产生免疫性炎症反应后，激活细胞内一系列介质引起的肠道损
伤，这种免疫反应表现为T细胞的异常激活，致炎因子和抗炎因子的失衡。 现有技术中，羧胺三唑类化合物，例如羧胺三唑胶丸用于治疗癌症。 本发明人经过长期和深入的研究，发现药物羧胺三唑及其类似物的新用途，
即它可以明显改善肌萎縮脊髓侧索硬化小鼠、溃疡性结肠炎大鼠的疾病症状，延
长动物寿命。

发明内容
本发明的目的在于提供羧胺三唑类化合物的医药新用途。
本发明具体目的之一是提供羧胺三唑在制备预防和/或延迟，或缓和与各种神 经变性疾病有关的症状的药物的应用。
具体目的之二是提供羧胺三唑可药用的盐、类似物或衍生物在制备预防和/ 或延迟，或缓和与各种神经变性疾病有关的症状的药物的应用。
具体目的之三是提供羧胺三唑在制备预防和/或治疗肌萎縮性脊髓侧索硬化 (ALS)的药物的应用。
具体目的之四是提供羧胺三唑可药用的盐、类似物或衍生物在制备预防和/ 或治疗肌萎縮性脊髓侧索硬化(ALS)的药物的应用。
具体目的之五是提供羧胺三唑在制备治疗溃疡性结肠炎和克隆氏病等炎性肠 道疾病药物的应用。
具体目的之六是提供羧胺三唑可药用的盐或其类似物、衍生物在制备治疗溃 疡性结肠炎和克隆氏病等炎性肠道疾病药物的应用。
具体目的之七是提供一种用于预防和/或治疗神经退行性疾病、预防和/或治疗 肌萎縮性脊髓侧索硬化、和/或炎性肠道疾病的药包或试剂盒。
为了完成本发明的目的，本发明提供如下技术方案
本发明涉及羧胺三唑或者羧胺三唑可药用的盐在制备预防和/或治疗神经退 行性疾病、预防和/或治疗肌萎縮性脊髓侧索硬化、和/或炎性肠道疾病的药物中的 用途，其中所述的羧胺三唑具有式(I)结构的化合物
7其中，Rl具有式(II)结构
——TOp
式(II)中，p为0到2的整数；m是0到4的整数；n为0至U 5的整数；X 可以是O， S， SO， S02， CO， CHCN， CH2或C二NR^其中R6选自氢，CI—C6 的链垸基，羟基，C1一C6的链烷氧基，氨基，C1一C6的链烷氨基，二垸氨基或 氰基；
R4和Rs分别选自卤素，氰基，三氟甲基，C1—C6链烷酰基，硝基，C1一C6 链烷基，Cl-C6链垸氧基，羰基，烷酯基，三氟甲氧基，乙酰氨基，C1—C6链 垸硫基，C1一C6链烷基磺酰基，三氯乙烯基，三氟甲硫基，三氟甲基亚磺酰基， 或者三氟甲基磺酰基；
R2选自氨基，C1一C6链垸氨基，二垸氨基，乙酰氨基，乙酰亚胺，脲基酰基， 甲酰氨基，甲酰亚胺或胍基；
R3选自胺甲酰基，氰基，氨基甲酰基，亚胺基或N-羟基氨甲酰基。
在一个具体技术方案中，所述的羧胺三唑是式(II)中n和m分别为0， l或2; P等于l; X是O， S， CO或CH2; R4选自氟，氯，溴，甲基，三氟甲基，氰基， 甲氧羰基，三氟甲氧基，三氟甲硫基，硝基或三氯乙烯基；R5是氯，溴，氟，甲 基，三氟甲基，氰基，烷酯基，三氟乙烯基或硝基。
在另一个具体实施方案中，所述的羧胺三唑具有如下式(III):
式(II)<formula>formula see original document page 9</formula>
(III)
其中，X是CH2， S， O或CO; R4是Cl， CF3， Br或CH3; Rs是Cl， Br或
N02。
更具体讲，本发明所述的羧胺三唑可以是5-胺基-l-[3，5-二氯-4(4-氯苯甲酰氯) 节基]-lH-l,2,3-三唑-4-苯甲酰胺。
本发明所述的羧胺三唑包括羧胺三唑可药用的盐、其类似物或衍生物。 本发明所述的羧胺三唑可药用的盐包括，但不限于羧胺三唑的盐酸盐、硫酸 盐、醋酸盐。
本发明中所述的药物为一种药物组合物，其包括药物有效剂量的羧胺三唑和 药学上可接受的载体。
本发明中所述的炎性肠道疾病包括溃疡性结肠炎和克隆氏病。
换言之，本发明中，羧胺三唑类化合物包括:
具有式(I)结构的化合物
<formula>formula see original document page 9</formula>
式(I)
其中，R1具有式(II)结构:式(II)
其中，p为0到2的整数；m是0到4的整数；n为0至!j 5的整数；X可以是O， S， SO， S02， CO， CHCN， CH2或C二NRs
其中R6可以是氢，(C1一C6)链烷基，羟基，(C1一C6)链垸氧基，氨基，(Cl 一C6)链垸氨基，二烷氨基或氰基；
R4和R5可以分别是卤素，氰基，三氟甲基，(C1一C6)链垸酰基，硝基，(Cl —C6)链烷基，(C1—C6)链烷氧基，羰基，垸酯基，三氟甲氧基，乙酰氨基，(Cl —C6)链烷硫基，(C1一C6)链垸基磺酰基，三氯乙烯基，三氟甲硫基，三氟甲 基亚磺酰基，三氟甲基磺酰基；
R2是氨基，(C1一C6)链烷氨基，二烷氨基，乙酰氨基，乙酰亚胺，脲基酰 基，甲酰氨基，甲酰亚胺或胍基；
R3是胺甲酰基，氰基，氨基甲酰基，亚胺基或N-羟基氨甲酰基。
根据本发明的技术方案，本发明优选的具体的化合物为式(II)中n和m分
别为0， l或2; P等于l; X是O， S， CO或CH2;
R4是氟，氯，溴，甲基，三氟甲基，氰基，甲氧羰基，三氟甲氧基，三氟甲 硫基，硝基或三氯乙烯基；
Rs是氯，溴，氟，甲基，三氟甲基，氰基，烷酯基，三氟乙烯基或硝基。
根据本发明的技术方案，本发明具体的，式(I )化合物结构式如下R5
X是CH2， S， O或CO; R4是Cl， CF3, Br或CH3; Rs是Cl， Br或N02。 更优选的本发明式(I)化合物为5-胺基-l-[3,5-二氯-4(4-氯苯甲酰氯)苄 基]-lH-l,2,3-三唑-4-苯甲酰胺，即羧胺三唑(carboxyamidotriazole，简称CAI)。 本发明的化合物也包括这些化合物可药用的盐，如盐酸盐、硫酸盐、醋酸盐等。
本发明首先提出上述化合物在制备预防和/或治疗神经退行性疾病、炎性肠道 疾病药物中的应用。其中所述的神经退行性疾病包括但并不仅限于原发性神经变 性疾病；亨廷顿氏舞蹈病；中风和其它缺氧或局部缺血性疾病；继发性神经变性 病(代谢性或毒性疾病)；帕金森氏症；阿尔茨海默氏病；阿尔茨海默型老年性痴 呆(SDAT);与认知功能障碍有关的老化；血管性痴呆，多梗塞性痴呆，雷维小 体痴呆，神经变性痴呆。所述的炎症性肠道疾病包括但并不仅限于溃疡性结肠炎， 克隆氏病、白塞病(Behcet's disease, BD)。
本发明的第二组目的在于提供一种治疗患有神经变性疾病或炎症性肠道疾病 的患者的方法。该方法包括步骤给予一种包含一种羧胺三唑活性剂和一种药学 上可接受的载体的组合物，其中羧胺三唑活性剂基本上由5-胺基-1-[3，5-二氯-4(4-氯苯甲酰氯)苄基]-lH-l,2，3-三唑-4-苯甲酰胺，即羧胺三唑和其药学上可接受的盐、 类似物、衍生物组成。在一种实施方案中，被治疗的神经变性疾病选自肌萎縮性 脊髓侧索硬化症，被治疗的炎症性肠道疾病选自溃疡性结肠炎，所给予的组合物 的剂量为每天约10mg 约300mg的羧胺三唑或其药学上可接受的盐、类似物、衍 生物。
所使用的剂量当然随被治疗的具体疾病以及其它因素而定，其它因素包括年
11龄、体重、健康状况、症状的严重程度、给药途径、治疗的频率和在治疗期间是 否伴随其它的药物。通过本领域普通技术人员已知的常规方法可以容易地确定每 个活性化合物的使用剂量。成人日剂量通常在约10mg 300mg范围内，优选在约 50mg 200mg范围内。例如，可以口服给予患有ALS的人日总剂量为50mg 200mg 之间的本发明的羧胺三唑类化合物。或者，可以直肠给予患有UC的人日总剂量在 50mg 200mg之间的本发明的羧胺三唑类化合物。
本发明的第三组目的在于提供包含本发明的羧胺三唑类化合物的药物组合 物。更具体地说，可以使用标准的本领域技术人员所熟知的药学上可接受的载体、 填料、增溶剂和稳定剂将羧胺三唑类化合物配制成药物组合物。
包含羧胺三唑类化合物的药物组合物通过许多途径中的任一种给予需要这种 药物的个体，包括但不限于，局部、口服、静脉内、肌内、动脉内、髓内、鞘内、 心室内、经皮、皮下、腹膜内、鼻内、肠、局部、舌下或直肠方式。口服制剂可 以是固体制剂如片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、或液体制剂如溶液、悬浮液等。适 合口服给药的制剂可含有药学上可接受的载体或赋形剂。药学上可接受的适合于 固体制剂(如片剂或胶囊)的载体或赋形剂可以是例如粘合剂(如阿拉伯胶、 明胶、糊精、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯垸酮)、稀释剂(如乳糖、 蔗糖、甘露醇、玉米淀粉、马铃薯淀粉、磷酸钙、柠檬酸钙、结晶纤维素)、润滑 剂(如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、滑石粉、无水硅胶)、崩解剂(如玉米淀粉、 马铃薯淀粉、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、藻酸)和湿润剂(如十二烷基硫 酸钠)。适合于液体制剂(如溶液或悬浮液)的药学上可接受的载体或赋形剂可以 是例如水性溶酶(如水)、悬浮剂(如阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤
维素钠、羟甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶)、表面活性剂(如卵磷脂、山梨糖醇酐单
油酸酯、单硬脂酸甘油酯)及非水性溶酶(如聚乙二醇400、甘油、丙二醇、植物 油)。此外，液体制剂可含有防腐剂(如对羟苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸丙酯)、调 味剂和/或着色剂。
肠内灌注制剂(灌肠剂)可以是使用上述水溶酶或悬浮剂制备的水溶液或悬 浮液剂型。必要时，灌肠剂可以是使用增稠剂如聚丙烯酸、明胶等而制备的溶胶 或凝胶制剂。
栓剂可以用常规的方法通过混合羧胺三唑或其药学上可接受的盐、类似物、 衍生物与市售油性基质如Witepsole等或水溶性基质如聚乙二醇、甘油、明胶等制得。栓剂可以是胶囊剂型栓剂、片剂型栓剂或软膏剂型栓剂。 外用制剂可以包括外用散剂、软膏剂、乳膏剂等。
本发明还提供一种包含一个或多个容器的药包或试剂盒，其中容器中充满一 种或多种本发明药物组合物的成分。
换言之，本发明还涉及一种用于预防和/或治疗神经退行性疾病、预防和/或治 疗肌萎縮性脊髓侧索硬化、和/或炎性肠道疾病的药包或试剂盒，其中包含一种或 多种羧胺三唑或者羧胺三唑可药用的盐，包含所述的羧胺三唑或者羧胺三哇可药 用的盐的容器和使用说明书。
根据一种实施方案，本发明提供一种用于治疗肌萎縮侧索硬化症(ALS)患
者的试剂盒。在该实施方案中，试剂盒包含一种或多种本发明的羧胺三唑类化合 物。这些药物可以包装在各种各样的容器中，例如药水瓶、试管、微量孔板、瓶 子等等。优选地，试剂盒还可以包括使用说明书。


图l:显示羧胺三唑及其类似物延长ALS模型动物寿命的作用。
图2:显示转棒实验中羧胺三唑及其类似物对ALS动物运动功能的改善。
图3:显示羧胺三唑对MPTP诱导的脑部氧化应激反应的抑制作用。
图4:显示羧胺三唑类似物对MPTP诱导的脑部氧化应激反应的抑制作用。
图5:显示羧胺三唑及其类似物对溃疡性结肠炎大鼠结肠的保护作用。 图6:显示溃疡性结肠炎大鼠用药后身体状况评分情况。 图7:显示溃疡性结肠炎大鼠用药后体重增加情况。
具体实施例方式
结合下面的实施例可理解本公开内容的一些实施方案。然而，本领域技术人 员可容易地了解具体的材料、组合物，所述结果仅仅举例说明本公开内容，而不 希望，也不应用于限制本公开内容的范围及其各种实施方案。
实施例1:药物对ALS转基因模型动物的保护作用
B6SJL-Tg(SODl*G93A)lGur/J转基因小鼠，其能过表达含有ALS患者中确定 的突变的人S0D1基因，形成成人期发病的、进行性动物恶化。这些转基因小鼠被认为是所述疾病的模型，并已用于测试延迟疾病进展和死亡率的许多策略。
为了评价本发明对ALS的潜在益处，对照组和给药组S0D1G93A转基因小鼠 每天口服施用PEG400溶剂、CAI或CAI的多种类似物(结构式为A的化合 物，其中R,为Cl或H， 112为Cl、 H、 Br、 CH3、或CF3， R3为Cl、 Br、 CF3、 N02或CN， X为O、 S、或C二O)。本实施例中使用的四种羧胺三唑 类似物分别是表1中A1 A4，剂量均采用20mg/kg。小鼠70天龄时开始给药， 并持续到死亡。
(A)
表1几种羧胺三唑类似物的化学结构
预计寿命及其结果图1显示对照小鼠和口服羧胺三唑及Al、 A2、 A3、 A4 四种化合物的小鼠(n = 6)的平均预计寿命。对照小鼠的平均存活时间为128.4
14
CAI类似物 Rl
Al Cl
A2 Cl
A3 H
A4 Cl
A5 Cl
A6 Cl
A7 Cl
A8 Cl
A9 Cl
A10 Cl
X
c = o s s
c = o c = o c = o
o c = o
o
o
R3
Cl Cl Cl CF3 CN Cl Br Br N02 Cl
*i 3 3 3天，经羧胺三唑及A1、 A2、 A3、 A4四种化合物处理后，各组小鼠的平均存活时 间为分别为138.6天、133.5天、139天、138.2天和135.4天，生存时间延长了 5 IO天不等。
旋转棒实验将小鼠置于转棒上，与棒的旋转方向相反，迫使它们保持朝前 运动以防止从转棒上滑落。学习几天后，小鼠能保持在15rpm旋转速率的转棒上 而不跌落。每周测试小鼠1次，在每次转棒实验中，每只小鼠进行3次实验，记 录滑落前在棒上的保留时间(潜伏期)。从3次实验中选择动物在棒上的最长停 留时间作为运动行为的测量值。图2显示随时间推移，对照小鼠和不同药物处理 组小鼠转棒运动能力的变化。从16周开始，羧胺三唑及其类似物等药物处理组小 鼠在转棒上的停留时间明显比对照组小鼠停留时间延长。
实施例2:羧胺三唑抑制MPTP诱导的氧化应激
雄性C57BL/6小鼠，体重18g 22 g， 12只/组，共分4组。动物每天通过 灌胃给予羧胺三唑，连续8周，剂量分别为0， 10， 20，或40mg/kg/天。在进行研 究的当天，给小鼠皮下注射30mg/kg的神经毒素N-甲基-4-苯基-l， 2， 3， 6-四氢 吡啶(MPTP)，以增加动物大脑中的氧化应激反应。1小时后，小鼠腹腔内注射 100mg/kg的水杨酸钠。注射后1小时，处死动物，分离其前脑，测定其中2， 3-二羟基苯甲酸(2， 3-DHBA)含量。
如图3所示，结果表明用剂量分别为20和40mg/kg/天的羧胺三唑进行治疗， 可以显著地降低由MPTP产生的前脑氧化应激，从而抑制神经毒素对神经元的损 伤。此外还进行了毒理学研究，没有检测到药物副作用的证据。
实施例3:羧胺三唑类似物抑制MPTP诱导的氧化应激
雄性C57BL/6小鼠，体重18 g 22 g， 10只/组，共分11组。动物每天通 过灌胃给予表l中A1 A10等化合物，连续8周，剂量均为20mg/kg/天。在进行 研究的当天，给小鼠皮下注射30mg/kg的神经毒素N-甲基-4-苯基-l， 2， 3， 6-四 氢吡啶(MPTP)，以增加动物大脑中的氧化应激反应。1小时后，小鼠腹腔内注 射100mg/kg的水杨酸钠。注射后1小时，处死动物，分离其前脑，测定其中2， 3-二羟基苯甲酸(2， 3-DHBA)含量。
如图4所示，结果表明A1 A10等羧胺三唑类似物均可不同程度地降低由MPTP产生的前脑氧化应激，从而抑制神经毒素对神经元的损伤。
实施例4:药物对溃疡性结肠炎动物模型的治疗作用
雄性Wistar大鼠，体重180g 220 g， 12只/组。共分9组正常组(生理 盐水灌肠)、溃疡模型组(TNBS灌肠)，溶剂对照组(TNBS灌肠+PEG400)，羧 胺三唑治疗组(TNBS灌肠+ CAI 20 mg/kg)，化合物A3治疗组(TNBS灌肠+A3 20 mg/kg)，化合物A4治疗组(TNBS灌肠+A4 20 mg/kg)，化合物A7治疗组(TNBS 灌肠+A7 20 mg/kg)，化合物A8治疗组(TNBS灌肠+A8 20 mg/kg)，阳性对照组 (TNBS灌肠+SASP30mg/kg)。每只动物单笼饲养。其中，化合物A3， A4， A7， A8均为羧胺三唑类似物，结构参见表l。
实验方法1%戊巴比妥麻醉大鼠(lmL/200g)，将TNBS (2， 4， 6-三硝基苯 磺酸)原液以1: 1的比例溶于50% (v/v)乙醇中，通过软管灌入大鼠距肛门8cm 左右结肠处，每只动物灌入0.3ml，诱导实验性结肠炎。灌肠后向上提尾30s然后 腹部向上平躺置于小鼠笼内(敷设垫料)。待动物清醒后观察动物情况，以确定手 术成功(无死亡/肛门处出现血性液体)。术后12小时恢复食物与饮水供应。分别 于手术前l小时，及术后l-5天给药，l次/天。从术后24小时起对动物的以下指 标加以监测 日常观察
*摄食量
*体重/体重增量
*整体情况/精神状态/自主活动
*粪便性状
结果显示，PEG400处理组动物摄食量减少，体重明显减轻，稀便，体质差， 活动减少。结肠病理学表现为腺体数目减少，组织结构紊乱，粘膜出血，有溃疡 斑点。而羧胺三唑及其类似物处理组和阳性药处理组动物摄食量变化不大，体重 比正常组动物略轻，粪便基本成形，病理学检查结肠无粘连，粘膜轻度充血，无 溃疡形成。详细评分结果参见图5 图7。
16附结肠组织形态学评分标准
分数肉眼观察结肠特征
0无损伤
1局部充血、水肿但未出现溃疡
2有溃疡，但没有明显炎症
3有溃疡，仅有一处出现炎症
4有多处溃疡和炎症，溃疡〈lcm
5有多处溃疡和炎症，至少有一处溃疡> 1 cm
附动物身体状况评分标准
粪便形态描述
^ 无疾病体征 正常粪便，成形，硬便
1 活动减少或肢端体温降低 粪便稀松，成形，偏湿，偏软
2 及其瘦弱，萎靡 粪便稀松，不成形，湿软
3 濒临死亡 腹泻
注身体总体状况的评分为体征分数和粪便形态评分两项的加和。
实施例5:羧胺三唑及其类似物对醋酸性肠损害的预防或治疗效果
雄性Wistar大鼠，体重180g 220 g, 10只/组。共分8组正常组(生理 盐水灌肠)、溃疡模型组(醋酸灌肠)，溶剂对照组(醋酸灌肠+ PEG 400)，羧胺 三唑治疗组(醋酸灌肠+ CAI 20 mg/kg)，化合物A3治疗组(醋酸灌肠+ A3 20 mg/kg)，化合物A7治疗组(醋酸灌肠+A7 20mg/kg)，化合物A10治疗组(醋酸 灌肠+A10 20mg/kg)，阳性对照组(醋酸灌肠+SASP30mg/kg)。每只动物单笼饲 养。其中，化合物A3， A7， A10均为羧胺三唑类似物，结构参见表l。
实验方法羧胺三唑及A3、 A7、 A10等化合物分别溶于PEG400，直肠内注 射给予Wistar大鼠，剂量均为20mg/kg。 1小时后，25%的醋酸溶液直肠内注射给 予所述大鼠。醋酸刺激2小时后，取大鼠肠样品，用肉眼以及显微镜观察场内壁 表面病理组织学变化，对肠粘膜损害进行肉眼和组织学评价。
结果发现，在溃疡模型组和溶剂对照组大鼠观察到醋酸引起的广泛肠粘膜损害，而经羧胺三唑及其类似物治疗的大鼠，几乎观察不到肠损害。肠粘膜损害评 j介丰示准参fi 、 Classification and Evaluation of Macpherson, B.R.et al， Digestion, 17, 135-15 (1978)，评分如表2所示。而表2显示了羧胺三唑及其类似物对醋酸性肠损 害的保护作用。
表2:醋酸性肠损害的治疗评分
肉眼可见损害程度组织学损害程度
正常组0.4 ± 0.11.1 ±0.2
模型组10.5 ± 0.49.2 ±0.3
阳性对照组1.6 ±0.33.4 ±0.6
溶剂对照组9.7 ±0.48.8 ±0.7
羧胺三唑治疗组2.6 ±0.23.1 ±0.4
A3治疗组4.2 ±0.43.6 ±0.8
A7治疗组2.9 ±0.74.1 ±0.5
A10治疗组3.7 土 0. 73.1 ±0.8
注表2中所得评分的计算是按照以下评分标准对动物肠样品的每项评分(0-3分)
总和的平均值±标准误。
肉眼可见损害程度的评分标准:
指标及描述分数
粘膜血管可见度
好0
中等(可见区域占整个区域的一半以上)1
差(可见区域占整个区域的一半以下)2
3
无
红斑
无0
线性红斑1
斑点状红斑2
弥漫性红斑
出血
无0
点状出血1
18斑点状出血 多发性出血 糜烂/溃疡 无
小(小于lmm X lmm)
中等(小于5mm X 5mm)
大(5mm X 5mm或更大)或多发性
0
1
2
组织学损害程度的评分标准:
指标及描述
分数
损害面积 无
网状损害
损害限于基部或末端部位 弥漫性损害 水肿 无
中度
出血
无
网状损害
损害限于基部或末端部位 弥漫性损害 糜烂/溃疡 无
粘膜上层 粘膜下层
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
0
1
权利要求
1.羧胺三唑或者羧胺三唑可药用的盐在制备预防和/或治疗神经退行性疾病、预防和/或治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化、和/或炎性肠道疾病的药物中的用途，其中所述的羧胺三唑具有式(I)结构的化合物式(I)其中，R1具有式(II)结构式(II)式(II)中，p为0到2的整数；m是0到4的整数；n为0到5的整数；X可以是O，S，SO，SO2，CO，CHCN，CH2或C＝NR6，其中R6选自氢，C1-C6的链烷基，羟基，C1-C6的链烷氧基，氨基，C1-C6的链烷氨基，二烷氨基或氰基；R4和R5分别选自卤素，氰基，三氟甲基，C1-C6链烷酰基，硝基，C1-C6链烷基，C1-C6链烷氧基，羰基，烷酯基，三氟甲氧基，乙酰氨基，C1-C6链烷硫基，C1-C6链烷基磺酰基，三氯乙烯基，三氟甲硫基，三氟甲基亚磺酰基，或者三氟甲基磺酰基；R2选自氨基，C1-C6链烷氨基，二烷氨基，乙酰氨基，乙酰亚胺，脲基酰基，甲酰氨基，甲酰亚胺或胍基；R3选自胺甲酰基，氰基，氨基甲酰基，亚胺基或N-羟基氨甲酰基。
2.根据权利要求l所述的用途，其特征在于所述的羧胺三唑是式(II)中n和m分别为0， l或2; P等于l; X是O， S， CO或CH2; R4选自氟，氯，溴，甲 基，三氟甲基，氰基，甲氧羰基，三氟甲氧基，三氟甲硫基，硝基或三氯乙烯基; Rs是氯，溴，氟，甲基，三氟甲基，氰基，烷酯基，三氟乙烯基或硝基。
3.根据权利要求l所述的用途，其特征在于所述的羧胺三唑具有如下式(III):<formula>formula see original document page 3</formula>(III)其中，X是CH2， S, O或CO; R4是Cl， CF3， Br或CH3; Rs是Cl， Br或N02。
4. 根据权利要求l所述的用途，其特征在于所述的羧胺三唑是5-胺基-1-[3，5-二氯-4(4-氯苯甲酰氯)苄基]-lH-l，2，3-三唑-4-苯甲酰胺。
5. 根据权利要求l至4任何一项所述的用途，其特征在于所述的羧胺三唑包 括其类似物或衍生物。
6. 根据权利要求l所述的用途，其特征在于所述的羧胺三唑可药用的盐包括 羧胺三唑的盐酸盐、硫酸盐、醋酸盐。
7. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的药物为药物组合物，其包 括药物有效剂量的羧胺三唑和药学上可接受的载体。
8. 根据权利要求1至4任何一项所述的用途，其特征在于所述的炎性肠道疾病包括溃疡性结肠炎、白塞病和克隆氏病。
9. 根据权利要求5任何一项所述的用途，其特征在于所述的炎性肠道疾病包 括溃疡性结肠炎和克隆氏病。
10. 根据权利要求1至4任何一项所述的用途，其特征在于所述的神经退行 性疾病包括原发性神经变性疾病；亨廷顿氏舞蹈病；中风和其它缺氧或局部缺血 性疾病；继发性神经变性病(代谢性或毒性疾病)；帕金森氏症；阿尔茨海痴呆， 多梗塞性痴呆，雷维小体痴呆，神经变性痴呆。
11. 一种用于预防和/或治疗神经退行性疾病、预防和/或治疗肌萎縮性脊髓侧 索硬化、和/或炎性肠道疾病的药包或试剂盒，其中包含一种或多种如权利要求1 所述的用途中的羧胺三唑或者羧胺三唑可药用的盐，包含所述的羧胺三唑或者羧 胺三唑可药用的盐的容器和使用说明书。
全文摘要
本发明披露羧胺三唑或者羧胺三唑可药用的盐在制备预防和/或治疗神经退行性疾病、预防和/或治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化、和/或炎性肠道疾病的药物中的用途；还涉及包括所述药物的药包或试剂盒。
文档编号A61K31/4192GK101618036SQ20081011585
公开日2010年1月6日 申请日期2008年6月30日 优先权日2008年6月30日
发明者叶菜英, 张德昌, 茹 郑, 郝晓键, 磊 郭 申请人:中国医学科学院基础医学研究所