用于防治血管性痴呆的天麻植物提取物及其制备方法

专利名称：用于防治血管性痴呆的天麻植物提取物及其制备方法
技术领域：
本发明属于天然药物技术领域。具体涉及一种含有派立辛A、 B、 C和/或其衍生物的天麻(^"r^^/a e/a" A/咖e)植物提取物在制备 防治血管性痴呆疾病的药物中的用途。从中药天麻中提取、精制得到 的植物提取物及其提取方法。
背景技术：
现代的生活方式，引起血管性痴呆患者日益增加，现代医学研究 认为，血管性痴呆(VD)为多因素疾病，与高血压、糖尿病、高血脂等 致动脉粥样硬化的因素有关。多数学者认为，血管性痴呆的发生常与 皮层病变，尤其是左侧皮层缺血及丘脑、海马的缺血改变密切相关。 此外，双侧、多发性脑梗塞，重要位置的缺血梗塞以及大面积脑损害 对本病的发生有重要作用。不仅卒中的发生发展与VD有着密切的因果 关系，长期慢性脑部缺血亦可导致VD的发生。
血管性痴呆病人一般生活不能自理，时时需要家人照料，给患者、家 庭、社会带来沉重的负担。从已知的安全性较高的中药材中提取中药有 效成分，研制和开发中药新药是很有必要的。
天麻别名明天麻、白龙草、赤箭根。为兰科多年生寄生草本植物天 麻6^Wr^f/a e/Wa A/w迈e的块茎。多年生植物，生于湿润的林下，现 多栽培。在我国主要产自四川、云南、贵州、湖北和陕西等地。在中药 中天麻主要用于息风止痉、平肝潜阳、祛风止痛及偏正头痛等。
派立辛(parishin)是植物天麻中的一种主要化学成分，文献1_5 才艮道了派立辛(parishin) A、 B、 C的结构如下parishin A parishin B parish'm C
其中，派立辛A (parishin A)在以前的文献中通常简称为派立 辛(parishin),本文中为与另外两个已知的派立辛类化合物(派立 辛B、 C)区分开，将其称为派立辛A (parishin A)。
参考文献
1、 LiY. M. ， Zhou Z丄,Hong Y. F. New phenol ic derivat ives from "/eo/a尸a6er/.户/a/ "1993， 59 ( 4 ) : 363-5。
2、 Un J. H. ， Liu Y. C. ， Hau J. P. , " s/. Parishins B and C from rhizomes of ""rod/a 户力7foc力e/z7/"/y, 1996， 42 ( 2 ): 549-551。
3、 周俊，浦湘渝，杨雁宾。新鲜天麻的九种酚性成分。存夢 遞孩，1981， 26 ( 18 ) : 1118-1120。
4、 Dahmen J. ， Leander K. Studies on 0rchidaceae glucosides. Part 7. The structure of parishin, a glucoside from 「a/ da i ar/; 力//.户Ar^ocAe迈/s^ry， 1976， 15 ( 12 ): 1986—7。
5、 Taguchi H. ， Yosioka I. , Yamasaki K. , et al. Studies on the constituents of Ca"rod/a e/"a A7咖e. ， 1981, 29 ( 1 ) : 55-62。
尽管文献报道了通过正相和反相硅胶进行反复多次色谱分离，得 到派立辛衍生物的单体;ft令物的方法，但从未报道过这些单体化合物 与防治血管性痴呆的作用有关。
由于天麻中化学成分复杂，而派立辛类化合物极性有较大差别， 利用适合工业化生产的单次色谱分离技术富集高含量(大于50°/。)派 立辛衍生物有较大难度，目前还没有文献报道得到了高含量(大于50%)的派立辛衍生物的天麻植物提取物，也没有报道过利用色谱分离 技术实现制备富含派立辛其衍生物的天麻植物提取物的方法，也从未
物(特别是派立辛A、 B、 C)或混合物具有增智和防治血管性痴呆作 用。

发明内容
本发明提供了含有派立辛衍生物(特别是派立辛A、 B、 C)的天 麻植物提取物或者派立辛单体化合物或混合物在制备防治血管性痴呆 等疾病的药物中的用途。其中该提取物中派立辛衍生物总含量为35% 以上，优选派立辛衍生物总含量为50%以上的提取物。所述派立辛衍 生物可以为派立辛衍生物中任意单体，特别是派立辛A、 B、 C，也可 以为派立辛衍生物中任意多种单体化合物的混合物。
现通药效学实验结果表明，天麻有效部位各剂量组可以不同程度地 提高拟血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力，减轻模型大鼠的神经病理损 伤。其可能的作用环节包括①有效谦导脑损伤修复过程中神经元生长 相关蛋白的合成，抑制星形胶质细胞的过度增殖，促进脑缺血损伤后神 经元突起再生。②调控退化的谷氨酸神经元的突触活性，重建脑内 Glu/GABA学习记忆调节系统稳态③改善脑内胆碱能系统的功能④抗脂 质过氧化，激活抗自由基氧化酶S0D活性，加快脑组织自由基的清除速 率，减少自由基代谢产物MDA的堆积，与目前一线的阳性对照药多奈哌 齐比较，药效优于多奈哌齐。表明派立辛衍生物的单体化合物或混合 物以及含有派立辛衍生物(特别是派立辛A、 B、 C)的植物提取物具 有防治血管性痴呆作用。
所述"单体"定义为单一化合物。
本发明还提供了一种含有派立辛衍生物的天麻植物提取物，该提 取物中派立辛衍生物总含量为35%以上，优选派立辛衍生物总含量为 50%以上，更优选派立辛衍生物总含量为50%-95%,优选所述派立辛衍生物为派立辛A、 B、 C。
本发明还提供了 一种制备含有派立辛衍生物植物天麻提取物的方 法，其中提取物中派立辛衍生物总含量为35%以上，优选派立辛衍生物 总含量为50%以上，更优选派立辛衍生物总含量为50%-95%，优选所述 派立辛f汙生物为派立辛A、 B、 C。
通过我们对分离纯化工艺的研究，发现通过独特的提取、精制工 艺是可以得到富含派立辛衍生物的天麻植物提取物。
本发明还提供了含有天麻植物提取物的药物组合物及其制剂以及 所述天麻植物提取物在保健品和制药领域中的应用，特别是在制备血管 性痴呆疾病的保健品和药物中的应用，所述天麻植物提取物中派立辛衍 生物总含量为35%以上，优选派立辛衍生物总含量为50%以上，更优选 派立辛衍生物总含量为50%-95%，优选所述派立辛衍生物为派立辛A、 B、 C。其中百分比％未经特别说明，均为重量百分比％。
本发明所指派立辛衍生物结构通式如下
R40
其中，R2和R3各自独立地选自、 ' 0GIU
H2C、 /"OH H2C、 ^OMe
等；
R4选自氢、Cl-C6烷基(优选甲基，乙基，丙基，乙丙基，丁基，
异丁基)，Cl-C6烷基苯基(优选千基)，对羟基节基，或
H2C、 ^"OH H2C~4 i>~OMe
等；
Glu表示P-D-吡喃葡萄糖基，Me表示甲基。
本发明制备所述天麻植物提取物的工艺方法如下 1，提取方法将植物天麻(块茎)粉碎，然后用20-100% (其中优选50-95% )Cl-C6烷基醇的水溶液作为溶剂在0*C-溶剂回流的温 度(优选室温至溶剂回流的温度)下提取，提取液经常压或减压浓缩 得浸膏；其中所述C1-C6烷基醇优选为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇 或它们组成的混合溶剂，其中更优选甲醇、乙醇。
2.精制方法
将浸膏用色谱方法精制、纯化，用洗脱溶剂洗脱，收集富含派立 辛A、 B、 C类化合物的流份，浓缩，过滤，干燥，检测并收集富含派 立辛衍生物的植物提取物。
其中所述用于精制、纯化的色谱方法为大孔吸附树脂色谱、正相 硅胶和反相硅胶色谱，或者它们的组合，或者将提取得到的浸膏混合 于硅胶或硅藻土中，晾干后用洗脱溶剂进行回流洗脱；所述洗脱溶剂 为水，C1-C6烷基醇，如甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇等，卤代烃， 如二氯甲烷、氯仿(三氯甲烷)等，醚类溶剂，如乙醚、甲基叔 丁醚等，酮类溶剂，如丙酮、2-丁酮等，酯类溶剂，如乙酸乙酯、 甲酸乙酯等，以及由上述溶剂组成的混合溶剂，其中优选的洗脱溶剂 为氯仿(三氯甲烷)、乙酸乙酯、乙醇、甲醇和水中的一种或数种混 合溶剂。所述精制方法中，当用苯乙烯型大孔吸附树脂精制时，洗脱 溶剂优选为水和10-75%的乙醇或甲醇水溶液；当用反相硅胶色谱精 制时，洗脱溶剂优选为水和10-50%的乙醇或甲醇水溶液；当用正相 硅胶精制时，洗脱溶剂优选为三氯甲烷或乙酸乙酯和90-100%乙醇水 溶液或甲醇组成的混合溶剂，它们的比例优选为10:1-2:1。
其中所述制备方法中，富含派立辛A、 B、 C类化合物的流份是通 过薄层层析(TLC)、紫外(UV)、高压液相色镨(HPLC)等方法检测 的，其中优选HPLC检测方法。
优选本发明得到的天麻植物提取物中派立辛衍生物的总含量是通 过HPLC方法检测的。优选用高效液相外标法测定，以派立辛A作标准， 计算其中派立辛类化合物的总含量。按照上述方法得到的天麻植物提取物中派立辛衍生物总含量为
25%以上，优选派立辛衍生物总含量为50%以上，更优选派立辛衍生物 总含量为50%-95%，优选所述派立辛衍生物为派立辛A、 B、 C。
按照上述方法得到的含有派立辛衍生物的天麻植物提取物具有益 智、增强记忆的作用。
本发明介绍的制备方法是提供具有高含量派立辛衍生物的天麻植 物提取物制备方法中的一种，并不意味着只有通过上述方法得到的高含 量派立辛衍生物的天麻植物提取物才能用作制备防治血管性痴呆等疾 病的药物。可以想见，本领域技术人员用其他方法获得的富含派立辛衍 生物的天麻植物提取物也会具有同样的药物作用。
用以上提取和精制方法制备中药天麻中的植物提取物，其中有效 成分-派立辛衍生物在植物提取物中的含量可高达50%以上。其中大孔 吸附树脂法精制更适合于工业化生产。
利用本发明方法得到的植物提取物可以与药物上可接受的载体一起 制成药物制剂，例如注射剂、片剂、胶嚢、口服液或滴丸等。利用本 发明方法得到的植物提取物制备所需药物的各种剂型时，可以按照药学 领域的常规生产方法制备。优选本发明的这类药物制剂可以被口服、肠 胃外给药。优选制剂是口服或静脉内给药的。
本发明組合物的无菌可注射形式可以是水性或油性混悬剂。这些 混悬剂可以按照本领域已知的技术、利用适合的分散或润湿剂和悬浮 剂加以配制。无菌的可注射制剂还可以是在无毒的肠胃外可接受的稀 释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂或混悬剂，例如在1， 3-丁二醇中的 溶液。可以采用的可接受的载体和溶剂有水、林格氏溶液和等渗的氯 化钠溶液。另外，无菌的不挥发油也经常被用作溶剂或悬浮介质。为 此，可以采用任何温和的不挥发油，包括合成的单-或二-甘油酯。脂 肪酸、例如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，它们是天然的 药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，尤其是它们的聚氧乙基化形式。这些油溶液剂或混悬剂还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，例 如羧甲基纤维素或相似的分散剂，它们普遍用于配制药学上可接受的 剂型，包括乳剂和混悬剂。出于制剂的目的，还可以使用其他常用的 表面活性剂，例如吐温类、司盘类，和其他乳化剂或生物利用度增强 剂，它们普遍用在药学上可接受的固体、液体或其他剂型的制造中。
本发明药物组合物可以按任意口服可接受的剂型口服给药，包括但 不限于胶嚢剂、片剂、水性混悬剂或溶液剂。在口用片剂的情况下，常 用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还加入润滑剂，例如硬脂酸镁。就 按胶嚢剂型口服给药而言，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。 当口用需要水性混悬剂时，活性成分是与乳化和悬浮剂联用的。如果需 要的话，还可以加入某些甜味剂、矫味剂或着色剂。
如果必要的话， 一旦患者的条件有所改善，可以给以本发明化合物、 组合物或组合的维持剂量。随后，可以根据症状减少给药的剂量或频率 或者剂量与频率至已改善的条件得以保留的水平，当症状已经减轻至所 需水平，应当停止治疗。不过， 一旦疾病症状有任何复发，患者可能需 要在长期基础上接受间歇性治疗。
本发明的药物制剂中还可以包含其他用于治疗血管性痴呆病的活 性剂或与其他治疗血管性痴呆的药物一起或顺序给药。
还应当理解的是，任意特定患者的具体剂量和治疗制度将依赖于多 种因素，包括所采用的具体提取物的活性、年龄、体重、 一般健康状况、 性别、饮食、给药时间、排泄速率、药物组合、主治医师的判断和所治 疗的特定疾病的严重性。
具体实施例方式
下面的制备实施例和实验实施例可进一步i兌明本发明，但不以任 何方式限制本发明。
实施例1:1. 提取中药天麻药材1绍，粉碎后加入50%乙醇浸泡提取3次， 每次24小时。合并提取液，回收乙醇并浓缩至稠浸膏，加入蒸馏水加 热溶解，冷却至室温，静置24小时，离心甩滤，得澄清滤液。
2. 精制上述滤液通过经处理的HPD-IOO型大孔吸附树脂，用水 和10%、 20。/0、 30%、 40%、 50%、 75%的乙醇梯度洗脱，HPLC检测， 收集富含派立辛类化合物的流份，合并，减压浓缩，喷雾干燥即得植 物提取物4. 48g。经过高效液相色谱法测定，其中派立辛类化合物含量 为51.8%。
实施例2:
1. 提取中药天麻药材lkg，粉碎后加入50%乙醇，50。C温浸泡 提取3次，每次6小时。合并提取液，回收乙醇并浓缩至稠浸膏，加 入蒸馏水加热溶解，冷却至室温，静置24小时，离心甩滤，得澄清滤 液。
2. 精制上述滤液通过经处理的HP-20型大孔吸附树脂，用水和 10%、 20%、 30%、 40%、 50%、 75%的乙醇梯度洗脱，HPLC检测， 收集富含派立辛类化合物的流份，合并，减压浓缩，喷雾干燥即得植 物提取物4.42g。经过高效液相色i普法测定，其中派立辛类化合物含量 为52. 60/。。
实施例3:
1. 提取中药天麻药材lkg,粉碎后加入50%乙醇浸泡过夜后， 加热回流提取3次，每次3. O小时。合并提取液，回收乙醇并浓缩至 稠浸膏，加入蒸馏水加热溶解，冷却至室温，静置24小时，离心甩滤， 得澄清滤液。
2. 精制上述滤液通过经处理的HP-20型大孔吸附树脂，用水、 10%、 20%、 30%、 40%、 50%和75%浓度的曱醇依次梯度洗，HPLC 检测，收集富含派立辛类化合物的流份，合并，减压浓缩，喷雾干燥即得植物提取物4. 68g。经过高效液相色谱法测定，其中派立辛类化合 物含量为54. 4%。
实施例4:
1. 提取中药天麻药材lkg，粉碎后加入75%乙醇，室温浸提3 次，每次24. 0小时。合并提取液，回收乙醇并浓缩至稠浸膏，加入蒸 馏水加热溶解，冷却至室温，静置24小时，离心甩滤，得澄清滤液。 减压浓缩得浓缩液。
2. 精制浓缩液通过反相硅胶柱(C-18)，用水和10°/。醇溶液洗 脱后，再用50%浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含派立辛类化 合物的流份，合并，减压浓缩，干燥得植物提取物2. 18g。经过高效 液相色谱法测定，其中派立辛类化合物含量为66. 2%。
实施例5:
1. 提取中药天麻药材1 kg，粉碎后，加入75%乙醇浸泡过夜后， 75。C加热浸提3次，每次6. O小时。合并提取液，回收乙醇并浓缩至 稠浸膏。
2. 精制浸膏硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)色镨柱，氯 仿-甲醇(9:1)洗脱后，再用氯仿-甲醇(5:1)洗脱，HPLC检测，收 集富含派立辛类化合物的流份，合并，减压浓缩，干燥得植物提取物 4. 51g。经过高效液相色谱法测定，其中派立辛类化合物含量为50. 3%。
实施例6:
1. 提取，冲药天麻药材1 kg ，粉碎后，加入75°/ 乙醇浸泡过夜后, 加热回流提取3次，每次3. O小时。合并提取液，回收乙醇并浓缩至 稠浸膏。
2. 精制浸膏硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)柱，乙酸乙 酯-95%乙醇(10: 1 )洗脱后，再用乙酸乙酯-95%乙醇(3: 1 )和乙酸乙
12酯-95%乙醇(2:1)依次洗脱，HPLC检测，收集富含派立辛类化合物 的流份，合并，减压浓缩，干燥得植物提取物4. 88g。经过高效液相 色谱法测定，其中派立辛类化合物含量为56.0%。
实施例7:
1. 提取中药天麻药材lkg，粉碎后加入95。/。乙醇室温浸提3次， 每次24. 0小时。合并提取液，回收乙醇并浓缩至稠浸膏，加入蒸馏水 加热溶解，冷却至室温，静置24小时，离心甩滤，得澄清滤液。减压 浓缩得浓缩液。
2. 精制'.浓缩液通过反相硅胶(C-18)柱，水和10%乙醇溶液洗脱 后，再用50%浓度的醇溶液洗脱，HPLC检测，收集富含派立辛类化合 物的流份，合并，减压浓缩，干燥得植物提取物1.69g。经过高效液 相色谱法测定，其中派立辛类化合物含量为60. 9%。
实施例8:
1. 提取中药天麻药材lkg,粉碎后，加入95%乙醇，75。C温浸 提取3次，每次8. 0小时。合并提取液，回收乙醇并浓缩至稠浸膏。
2. 精制浸膏硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)柱，氯仿-甲醇(9:1)洗脱后，再用氯仿-甲醇(5:1)洗脱，HPLC检测，收集 富含派立辛类化合物的流份，合并，减压浓缩，千燥得植物提取物 1.22g。经过高效液相色谱法测定，其中派立辛类化合物含量为55， 1%。
实施例9:
1. 提取中药天麻药材1 kg，粉碎后，力jr入95。/。乙醇浸泡过夜后r 加热回流提取3次，每次4. 0小时。合并提取液，回收乙醇并浓缩至 稠浸膏。
2. 精制浸膏硅胶拌样，通过正相硅胶(100-200目)柱，乙酸乙 酯-95%乙醇(10:1)洗脱后，再用乙酸乙酯-95%乙醇(5:1)和乙酸乙酯-95%乙醇(3:1)洗脱，HPLC检测，收集富含派立辛类化合物的流 份，合并，减压浓缩，干燥得植物提取物1. 86g。经过高效液相色谱 法测定，其中派立辛类化合物含量为55.8%。
实验实施例
天麻植物提取物对于拟血管痴呆大鼠空间学习记忆能力的影响
下文中采用的缩写"clb"是指派立辛A、 B、 C和/或其衍生物含 量大于50%的天麻提取物。
学习记忆能力的观察与评价是痴呆的临床与实验研究中不可缺少 的 一项重要指标，本实验为了能客观地评价药物对模型动物的学习记忆 能力，特地选用国际上常用于检测动物学习记忆能力的水迷宫。其检测 的是大鼠在多次的训练中，学会寻找固定位置的隐蔽平台，形成稳定的 空间位置认知，这种空间认知是是一种以异我为参照点的参考认知，所 形成的记忆是一种空间参考记忆。从信息的加工和提取方式来看，这种 空间参考记忆进入意识系统，其储存的机制主要涉及边缘系统(如海马) 以及大脑皮层有关脑区，应该属于陈述性记忆，而临床健忘和痴呆的病 人，正是陈述性记忆首先受损而且比较突出。所以从检测的记忆属性来 说，运用Morris水迷宫来进行防治此类疾病有效药物的筛选研究是比 较恰当的。
1. 实验材料
实验药品为制备实施例1中所获得的样品(clb)，代号1210-A。 实验动物清洁级SD大白鼠，雄性，体重190一210g ，由北京维通
利华实验动物技术有限公司供给，合格证号为scxk (京)2002-0003。实验
条件下自然々大食，适应环境三天后进行实验。
仪器 Morris水迷宫DMS-2系统由中国科学院药物研究所提供
2. 实验方法
2. 1拟血管痴呆大鼠模型制备雄性SD大鼠，体重190一210g， 10%水合氯醛腹腔注射麻醉，仰卧固 定，颈前部去毛消毒后沿正中切开，分离双侧颈总动脉，双重丝线结扎后 切断，缝合伤口 。假手术组仅游离双侧颈总动脉，各组大鼠同条件词养。
2. 2实验动物分组
动物随机分为假手术组(11=1())、模型组(n-15)、 1210-A小剂量组 (n=15)、 1210-A大剂量组(n-15)、 1210 - A中剂量组(n=15)、阳性药 多奈哌齐组(n-15)、阳性药尼莫地平组(n-15)。
2. 3给药
术后24小时给药，1210-A小剂量组大鼠按0. 8mg/kg、 1210-A 大剂量组大鼠按7. 5mg/kg、 1210 - A中剂量组大鼠按2. 5mg/kg灌胃给 药；阳性药多奈哌齐组按0. 58mg/kg、尼莫地平组按9mg/kg灌胃给药。 假手术组及模型组动物灌胃给等容量生理盐水。连续给药40天，从第 42天起进行Morris水迷宫训练。
Morris水迷宫主要由圆形水池和自动摄象及电脑分析系统组成，通 过迷宫上方的摄像系统对大鼠在迷宫中的探索过程进行全程拍摄，如大 鼠的运动轨迹、运动时间、运动距离、运动方式等，避免了人为因素的 影响。平台放在西南象限(第m象限)正中距池壁22cm处，测试前将 水注入池中，水深30cm(即水面高出平台表面lcm，使大鼠不能见到站 台)，水温控制在20—2rC之间，室温25*C。实验时要求各种实验条件 保持不变。整个实验过程分为隐藏平合获得实验(hidden-platform acquisition training)和空间搜索实验(probetrial testing)两部分。
实验实施例1:对拟血管痴呆大鼠定位航行试验逃避潜伏期的影响 结果见表1 。各组大鼠经过、狰泳剩练寻找平台的时间越来越短，第1 、 2天各组动物逃避潜伏期未见明显差异，从第3天游泳训练开始模型组 大鼠逃避潜伏期较假手术组明显延长(P<0. 05),说明模型大鼠存在明 显的空间学习记忆障碍；1210 - A各剂量组大鼠逃避潜伏期均较模型组 大鼠有不同程度减少，特别是小剂量组在游泳3、 4天明显比模型组缩
15短(P<0. 05);阳性药尼莫地平在游泳第4天也明显比模型组缩短 (P<0. 05)。
表l.药物对拟血管痴呆大鼠Morris水迷宫逃避潜伏期的影响((x ± s)
組别 _搜索平台潜伏期时间/s
第1曰第2曰第3曰第4曰
假手术组79.99 ±19. 8851.55 ±27. 0325.08 ±16. 59*14. 11 ± 7. 75*
模型84.52 ± 12. 6869.90 ± 18. 1948. 31 ± 22. 4641. 15 ±25. 05
1210 - a大85.48 ± 15. 6567.26 ± 22. 5545. 33± 19. 4829. 48 ± 17. 49
mo - a中73.13 ±27.1155.76 ± 24. 7237. 80 ±19. 5325. 29 ±12. 59*
1210 - a小84.38 ± 13. 9063.55 ± 18. 8330. 06 ±14. 55*17. 27 ±9. 40*
多奈哌齐80.11 ± 20. 8651. 21 ±23. 7135. 80 ± 19. 4044. 27 ±27. 28
尼莫地平86.64 ± 9. 6668. 64 ±24. 6337. 88 ±15. 3623. 75 ±11. 37*
注与模型组比较*P<0.05
实验实施例2:对拟血管痴呆大鼠定位航行试验游泳路径的影响 结果见表2。经过游泳训练各组动物寻找平台所游的路径越来越短， 各组大鼠第l、 2天游泳训练的路径未见明显差异，但从第3天游泳训练开 始，模型组大鼠的游泳路径与假手术组比较明显延长(P<0. 05); 1210 - A各剂量组游泳路径均较模型组大鼠有不同程度减少，特别是小剂量 组在游泳3、 4天明显比模型组缩短(P<0，05)。表2.药物对拟血管痴呆大鼠Morris水迷宫游泳训练游泳路径的影响(x土s)
組别 _搜索平台路径/cm_
第1曰第2曰第3曰第4曰
假手术组994. 86 ± 224. 45849. 69 ± 498, 53357. 13 ± 275. 97*250. 23 ± 134. 24
模型1007. 243 ± 164. 55953. 63 ± 375. 18791. 25 ±311.06586. 75 ± 356. 44
1210-A大1148. 25 ± 273. 52929. 80 ± 273. 79721.18±321.95435. 74 ± 242. 45
1210-A中994.37 ± 387.08809. 74 ± 375. 74541. 52 ± 347. 27393. 0± 223. 66
mo - A小1010.831±316.59935. 84 ± 267. 74472. 46 ± 209. 31*276, 74 ± 140. 11*
多奈哌齐1169. 31 ± 357. 16835. 99 ± 503. 39728. 24 ± 525. 27750. 11 ± 596. 93
尼莫地平1112. 201 ± 202. 04956. 10 ± 373. 71492. 18 ± 204.71316.63±161.73
注与模型組比较*P<0.05
实验实施例3:对拟血管痴呆大鼠Morris水迷宫空间探索能力的影响 空间探索试验通过记录撤除迷宫中平台后各组大鼠在原平台象限 运动的时间、路径以及准确穿过原平台所在位置的次数来反映大鼠经过 前10次游泳训练对平台的空间记忆能力。若动物确实对平台在水迷宫 的空间位置形成了较强的记忆，再次被放入迷宫中时，会在原平台所在范 围附近有目的地寻找平台。本次实验结果显示，经过训练后，各组大鼠 在平台象限游泳时间与总游泳时间的比值(tP/tT)及平台象限的游泳距 离占总游泳距离的比值(dP/dT)没有明显差异。但模型组大鼠和假手术组 相比准确穿越原平台所在位置的次数明显减少(P<0.05)，说明空间记忆 能力受到损害。1210 - A各组大鼠准确穿越厚平台所在位置的次数比模 型组均有不同程度的提高，特别是小剂量组差异明显(P0.05)。表3.1210-A对拟血管痴呆大鼠Morris水迷宫空间探索能力的影响(x±s)
組别ntP/tT (%)dP/dT (%)穿环次数(次)
假手术组927. 77 ±6. 6329. 93 ±4. 67*1.22 ±0.67*
模型1122. 65 ±9. 6621. 04 ±9. 260. 55 ±0.82*
1210-A大1327. 31 ± 11. 4825. 37 ±11. 480. 85 ± 0. 80
1210-A中1223. 67 ±9. 3923. 67 ±9. 390. 83 ±0. 72
1210-A小1326. 31 ± 7. 4724. 83 ±8. 911. 23± 1. 09*
多奈哌齐922. 75 ±8. 4622. 75 ± 8. 460. 22 ± 0. 44
尼莫地平1025.81±12.6725. 81 ± 12. 670. 84 ± 0. 81
注与模型组比较*P<0.05 。
权利要求
1.一种天麻植物提取物在制备防治血管性痴呆疾病的药物中的用途，其中所述植物提取物中派立辛衍生物总合量为35％以上，所述衍生物可以为一种派立辛衍生物的单体化合物，也可以为派立辛衍生物中任意多种化合物的混合物；所述派立辛衍生物结构通式如下其中，R1，R2和R3各自独立地选自 id="icf0002" file="A2008101324040002C2.tif" wi="35" he="10" top= "93" left = "152" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/> id="icf0003" file="A2008101324040002C3.tif" wi="65" he="10" top= "104" left = "19" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/>等；R4选自氢、C1-C6烷基(优选甲基，乙基，丙基，乙丙基，丁基，异丁基)，C1-C6烷基苯基(优选苄基)，对羟基苄基，或 id="icf0004" file="A2008101324040002C4.tif" wi="34" he="10" top= "126" left = "154" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/> id="icf0005" file="A2008101324040002C5.tif" wi="65" he="10" top= "137" left = "19" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/>等；Glu表示β-D-吡喃葡萄糖基，Me表示甲基。
2. 根据权利要求1的用途，其中所述派立辛衍生物总含量为50% 以上。
3. 根据权利要求1的用途，其中所述派立辛衍生物总含量为 50%-95%。
4. 根据权利要求1-3任一项的用途，其中所述派立辛衍生物为派 立亲A、 B、或C，其中派立辛(parishin) A、 B、 C的结构式如下<formula>formula see original document page 3</formula>
5.派立辛衍生物在制备血管性痴呆疾病的药物中的用途，所述衍生 物可以为一种派立辛衍生物的单体化合物，也可以为派立辛衍生物中任 意多种化合物的混合物；所述派立辛衍生物结构通式如下<formula>formula see original document page 3</formula>其中，R2和R3各自独立地选自 <formula>formula see original document page 3</formula>R4选自氢、Cl-C6烷基(优选甲基，乙基，丙基，乙丙基，丁基，异丁基)，C1-C6烷基苯基(优选千基)，对羟基千基，或 。1 # Glu表示p-D-吡喃葡萄糖基，Me表示曱基。
6.根据权利要求5的用途，其中所述派立辛衍生物为派立辛A、 B、 或C，其中派立辛(parishin) A、 B、 C的结构式如下<formula>formula see original document page 3</formula>
全文摘要
本发明涉及含有派立辛衍生物的天麻植物提取物在制备用于防治血管性痴呆等疾病的药物的用途。本发明还涉及从植物天麻(Gastrodiaelata Blume)中提取、精制植物提取物的制备方法，其中有效成分为派立辛衍生物，特别是派立辛A，B，C。其中采用醇提取，提取物经色谱方法精制、纯化，得到派立辛衍生物含量在35％，特别是50％以上的植物提取物。本发明的药物剂型优选包括注射剂、片剂、胶囊、软胶囊、口服液或滴丸等。
文档编号A61K36/88GK101628086SQ20081013240
公开日2010年1月20日 申请日期2008年7月15日 优先权日2008年7月15日
发明者晔 刘, 猛 张, 珂 王, 石建功, 赵立敏, 陈明霞 申请人:北京科莱博医药开发有限责任公司