专利名称：毛蕊异黄酮在制备抗血管性痴呆的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及毛蕊异黄酮的应用，具体地说，涉及毛蕊异黄酮在制备抗血管性痴呆的药物中的应用。
背景技术：
血管性痴呆(Vascular Dementia, VD)是指因各种脑血管疾病引起的脑功能障碍而产生的获得性智能损害综合症。以记忆、认知功能缺损为主，可伴有言语、运动、视空间及人格障碍为主要临床表现的ー组神智异常症候群。在各种脑血管疾病中，缺血性脑病的发病率最高，也是血管性痴呆最主要的致病因素。研究表明，脑缺血引起的迟发性神经元损伤以细胞凋亡为主，而大脑海马区神经元凋亡与学习记忆密切相关，是导致学习、记忆障碍的重要因素，这也是目前研究血管性痴呆的 热点之一。多数学者认为，凋亡的发生既是凋亡相关基因表达的结果，又受许多内外因素的调节。可能与以下几个因素有夫①缺血缺氧本身激活了凋亡发生基因；②脑缺血再灌注后产生大量自由基对神经细胞造成严重损伤的同时，也诱导了凋亡的发生Ca2+超载激活一系列钙依赖性酶促反应，促进了凋亡的发生。目前，血管性痴呆的治疗以改善血管功能、控制痴呆症状为主要治疗目的。常用的治疗药物包括①胞ニ磷胆碱，促进葡萄糖吸收、代谢，继发扩张脑血管，改善脑细胞营养代谢；②氢化麦角碱，直接扩张大脑血管；③金刚烷胺，促进多巴胺释放，抑制其重摄取；
④高泛酸钙，促进葡萄糖的脑内吸收和代谢，増加脑组织内5-羟色胺浓度和脑血流量； 卵磷脂，属于こ酰胆碱前体药物，増加こ酰胆碱系统的功能毒扁豆碱，属于胆碱脂酶抑制剂，増加こ酰胆碱系统的功能 ’⑦神经肽，属于神经营养药物，提高老年人认识、记忆能力·’⑧甲硫达嗪，控制血管性痴呆患者急躁和过激行为；⑨利他林，改善血管性痴呆患者抑郁症状；⑩安定，改善血管性痴呆患者焦虑症状。毛蕊异黄酮，提取于豆科草本植物膜荚黄苗[Astragalus membranaceus(Fisch. ) Bge.]、内蒙負民[Astragalus membranaceus (Fiscn.) Bge. ver. Mongholicus(Bge.) Hsiao]的根。C16H12O5,分子量:284. 26，CAS 登录号=20575-57-9,英文名称/-hydroxy-3-(3_hydroxy-4- methoxyphenyl)-4H-chromen-4-one, InChI= I/C16H1205/cl- 20-14-5-2 -9(6-13 (14)18)12—8—2卜15-7—10 (17)3-4-11(15)16 (12)19/h2-8，17-18H, 1H3。我们研究发现，毛蕊异黄酮可以有效抑制血管性痴呆大鼠大脑基底动脉及大脑海马区椎体细胞形态学改变，提高大脑基底动脉内皮依赖性舒张反应，增强血管性痴呆大鼠的认知、学习和记忆能力，明显减轻血管性痴呆症状。治疗效果优于麦角新碱、胞ニ磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、卵磷脂。
发明内容
本发明的目的在于提供毛蕊异黄酮在制备抗血管性痴呆的药物方面的新用途。具体地说，本发明涉及毛蕊异黄酮在制备抗血管性痴呆的药物中的应用。
其中，所述血管性痴呆，其特征在于，因各种脑血管疾病引起的脑功能障碍而产生的获得性智能损害综合症，以记忆、认知功能缺损为主，可伴有言语、运动、视空间及人格障碍为主要临床表现的ー组神智异常症候群。本发明所述毛蕊异黄酮提取于豆科草本植物膜荚黄芪[Astragalusmembranaceus (Fisch. ) Bge.]、内蒙黄运[Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge.ver. Mongholicus (Bge. ) Hsiao]的丰R0本发明所述药物是指以毛蕊异黄酮为主要活性成分，与可药用载体制成的医疗上可接受的制剂，如片剂、丸剂或胶囊剂等。本发明所述药物，其服用量以毛蕊异黄酮计成人，2(T25mg/次，3次/日；儿童，
O.2^0. 25mg/kg 次，3次/日，即可达到抑制血管性痴呆临床症状的效果，特别地，孕妇等特殊人群服用时需遵医嘱。本发明所述毛蕊异黄酮可以直接通过市售得到，也可以通过植物提取得到。本发明通过大鼠跳台试验、大鼠避暗试验证明了天然产物毛蕊异黄酮可以有效增强血管性痴呆大鼠的认知、学习、记忆能力，治疗效果优于麦角新碱、胞ニ磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、卵磷脂。本发明通过离体血管环试验证明了天然产物毛蕊异黄酮可以増加血管性痴呆大鼠大脑基底动脉内皮依赖性舒张反应。本发明通过光镜观察发现，血管性痴呆大鼠大脑基底动脉血管内膜出现明显断裂痕迹，内膜皱褶增多，脂质于内皮下沉积；血管内膜下平滑肌层细胞排列紊乱，肌层出现明 显断裂、融合现象，延续性较差，肌细胞间纤维组织增生；肌层下纤维结缔组织疏松，肌层与结缔组织界限不清楚。天然产物毛蕊异黄酮明显抑制血管性痴呆大鼠大脑基底动脉血管内膜的形态学变化。本发明通过电镜观察发现，血管性痴呆大鼠大脑基底动脉血管内皮细胞膜出现破裂现象，平滑肌细胞延伸入内皮细胞胞浆；内皮基膜断裂，断裂处有大量胶原纤维组织增生；内皮细胞内高尔基体增多，线粒体肿胀、嵴融合或缺失。天然产物毛蕊异黄酮明显抑制血管性痴呆大鼠大脑基底动脉血管内皮细胞形态学变化。本发明通过光镜观察发现，血管性痴呆大鼠大脑海马区三层锥体细胞排列紊乱、锥体细胞肿胀、炎细胞浸润、星形胶质细胞增生、部分锥体细胞胞体变小或呈三角形、顶树突延长、核固缩和破裂、胞浆嗜伊红色、基质疏松伴微空泡形成、血管周围有红细胞渗出等形态学改变。天然产物毛蕊异黄酮明显抑制血管性痴呆大鼠大脑海马区锥体细胞的形态学变化。本发明通过电镜观察发现，血管性痴呆大鼠大脑海马区锥体细胞胞核固缩、染色质聚集、异染色质增多、核周高电子密度团块出现、线粒体嵴融合等形态学改变。天然产物毛蕊异黄酮明显抑制血管性痴呆大鼠大脑海马区锥体细胞的形态学变化。本发明的有益效果在干
I、本发明提供了天然产物毛蕊异黄酮的新用途，其对血管性痴呆症状有很好的抑制作用。毛蕊异黄酮可以有效抑制血管性痴呆大鼠大脑基底动脉及大脑海马区皮层椎体细胞形态学改变，提高大脑基底动脉内皮依赖性舒张反应，增强血管性痴呆大鼠的认知、学习和记忆能力，明显减轻血管性痴呆症状。治疗效果优于氢化麦角碱、胞ニ磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、卵磷脂。
2、本发明采用的毛蕊异黄酮提取来自纯天然原料，化学结构和分子量明确，质量可控，符合国际市场第三代中药产品的要求，有广阔的市场前景。如果研究成功，将提高我国传统中药的国际地位，对保障人类健康及提高老年人生活质量做出贡献。
图I 毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验潜伏期的影响(
i ±s)(与血管性痴呆模型组比较，*P〈0. 05 ;与高剂量毛蕊异黄酮组比较，#<0. 05)。试验
结果显示，毛蕊异黄酮明显提高血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验潜伏期，并且具有显著的剂量依赖性；与氢化麦角碱、胞ニ磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、卵磷脂对照组比较，有明显差异(P < O. 05)。
图2毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验错误次数的影响Gi 土s)(与血管性痴呆模型组比较，*P〈0.05 ;与高剂量毛蕊异黄酮组比较，#〈0.05)。试验结果显示，毛蕊异黄酮明显減少血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验错误次数，并且具有显著的剂量依赖性；与氢化麦角碱、胞ニ磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、卵磷脂对照组比较，有明显差异(P< O. 05)。图3 毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠大脑基底动脉内皮依赖性舒张反应的影响(与血管性痴呆模型组比较，*p〈0. 05 ;与氢化麦角碱组比较，#<0. 05)。试验结果显示，毛蕊异黄酮明显增加血管性痴呆大鼠大脑基底动脉内皮依赖性舒张反应；与氢化麦角碱对照组比较，有明显差异(P < O. 05)。图4 毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠大脑基底动脉内膜形态学的影响(光镜400X )。血管性痴呆大鼠大脑基底动脉血管内膜出现明显断裂痕迹，内膜皱褶增多，脂质于内皮下沉积；血管内膜下平滑肌层细胞排列紊乱，肌层出现明显断裂、融合现象，延续性较差，肌细胞间纤维组织增生；肌层下纤维结缔组织疏松，肌层与结缔组织界限不清楚。天然产物毛蕊异黄酮明显抑制血管性痴呆大鼠大脑基底动脉血管内膜的形态学变化。图5 毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠大脑基底动脉内膜形态学的影响(电镜8000X )。血管性痴呆大鼠大脑基底动脉血管内皮细胞膜出现破裂现象，平滑肌细胞延伸入内皮细胞胞浆；内皮基膜断裂，断裂处有大量胶原纤维组织增生；内皮细胞内高尔基体增多，线粒体肿胀、嵴融合或缺失。天然产物毛蕊异黄酮明显抑制血管性痴呆大鼠大脑基底动脉血管内皮细胞形态学变化。图6 毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠大脑海马区锥体细胞形态学的影响(光镜400X)。血管性痴呆大鼠大脑海马区三层锥体细胞排列紊乱；部分锥体细胞肿胀，并有炎细胞浸润，星形胶质细胞增生；部分锥体细胞胞体变小或呈三角形，顶树突延长，有核固缩和破裂现象，胞浆呈均匀嗜伊红色；部分锥体细胞胞核变浅，基质疏松伴微空泡形成；血管周围有红细胞渗出，个别可见小血管增生。天然产物毛蕊异黄酮明显抑制血管性痴呆大鼠大脑海区锥体细胞形态学变化。图7 毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠大脑海马区锥体细胞形态学的影响(电镜8000X)。血管性痴呆大鼠大脑海马区锥体细胞胞核固缩，染色质聚集成团、边集，异染色质增多，核周可见高电子密度团块；线粒体肿胀，有嵴融合并出现空泡变性。毛蕊异黄酮明显抑制血管性痴呆大鼠大脑海区锥体细胞形态学变化。
具体实施例方式以下通过实施例及试验例来进ー步阐述本发明的毛蕊异黄酮的新用途及其有益效果，但不用来限制本发明的范围。试验例I :检测毛蕊异黄酮对大鼠跳台、避暗试验的影响。I、药物毛蕊异黄酮(上海科兴商贸有限公司)、氢化麦角碱(上海华太药业股份有限公司)、胞ニ磷胆碱(苏州天马精细化学品股份有限公司)、高泛酸钙(上海佳伦生物科技有限公司)、金刚烷胺(石家庄市三和药业有限公司)、卵磷脂(广州邦利生物科技有限公司)。2、仪器大鼠跳台记录系统(淮北正华生物仪器设备有限公司)、大鼠避暗仪(淮北正华生物仪器设备有限公司)。 3、动物Sprague-Dawley (SD)大鼠,6周龄、雄性、18(T220g、清洁级(河南省实验动物中心)。4、实验分组分组 ①空白对照组健康SD大鼠20只，每天清晨空腹三蒸水灌胃(灌胃容量为10ml/kg)，连续灌胃8周 级血管性痴呆模型组2V0法制备血管性痴呆大鼠模型20只低剂量毛蕊异黄酮组血管性痴呆模型大鼠20只，每天清晨空腹毛蕊异黄酮溶液灌胃(灌胃浓度O. 5mg/kg，灌胃容量为10ml/kg)给药，连续灌胃8周；④中剂量毛蕊异黄酮组血管性痴呆模型大鼠20只，每天清晨空腹毛蕊异黄酮溶液灌胃(灌胃浓度1.0mg/kg，灌胃容量为10ml/kg)给药，连续灌胃8周； 高剂量毛蕊异黄酮组血管性痴呆模型大鼠20只，每天清晨空腹毛蕊异黄酮溶液灌胃(灌胃浓度2. Omg/kg,灌胃容量为IOml/kg)给药，连续灌胃8周； 氢化麦角碱组血管性痴呆模型大鼠20只，每天清晨空腹氢化麦角碱溶液灌胃(灌胃浓度2. Omg/kg，灌胃容量为10ml/kg)给药，连续灌胃8周 ’⑦胞ニ磷胆碱组血管性痴呆模型大鼠20只，每天清晨空腹胞ニ磷胆碱溶液灌胃(灌胃浓度I. Omg/kg，灌胃容量为10ml/kg)给药，连续灌胃8周；⑧高泛酸钙组血管性痴呆模型大鼠20只，每天清晨空腹高泛酸钙溶液灌胃(灌胃浓度2mg/kg，灌胃容量为10ml/kg)给药，连续灌胃8周金刚烷胺组血管性痴呆模型大鼠20只，每天清晨空腹金刚烷胺溶液灌胃(灌胃浓度O. 5mg/kg，灌胃容量为10ml/kg)给药，连续灌胃8周；⑩卵磷脂组血管性痴呆模型大鼠20只，每天清晨空腹卵磷脂溶液灌胃(灌胃浓度O. 2mg/kg,灌胃容量为10ml/kg)给药，连续灌胃8周。5、实验内容大鼠跳台试验、大鼠避暗试验。6、统计学方法所有数据以均数土标准差Ge 士 S)表示。组间差异比较用ANOVA及Newman-Student多重比较；t检验分析，由SPSS 13. O统计软件完成,双侧P < O. 05认为差异有显著性。7、结果
7. I 毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠跳台试验的影响试验结果显示，毛蕊异黄酮明显提高血管性痴呆大鼠跳台试验潜伏期、減少错误次数，并且具有显著的剂量依赖性；与氢化麦角碱、胞ニ磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、卵磷脂对照组比较，存在明显的差异(P<0.05)。(结果见表I)注与血管性痴呆模型组比较，*Ρ〈0. 05 ;与高剂量毛蕊异黄酮组比较，#<0. 05。7. 2 毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠避暗试验的影响试验结果显示，毛蕊异黄酮明显提高血管性痴呆大鼠避暗试验潜伏期，減少错误次数，并且具有显著的剂量依赖性；与氢化麦角碱、胞ニ磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、卵磷脂对照组比较，存在明显的差异(P<0.05)。(结果见表2)
表2毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠避暗试验的影响(土 s)注与血管性痴呆模型组比较，*Ρ〈0. 05 ;与高剂量毛蕊异黄酮组比较，#<0. 05。7. 3 毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验潜伏期的影响试验结果显示，毛蕊异黄酮明显提高血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验潜伏期，并且具有显著的剂量依赖性；与氢化麦角碱、胞ニ磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、卵磷脂对照组比较，存在明显的差异(P < 0.05)。(结果见图I)
7.4 毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验错误次数的影响试验结果显示，毛蕊异黄酮明显減少血管性痴呆大鼠跳台、避暗试验错误次数，并且具有显著的剂量依赖性；与氢化麦角碱、胞ニ磷胆碱、高泛酸钙、金刚烷胺、卵磷脂对照组比较，存在明显的差异(P < 0.05)。(结果见图2)
试验例2 :检测毛蕊异黄酮对大鼠大脑基底动脉依赖性舒张反应的影响。I、药物毛蕊异黄酮(上海科兴商贸有限公司)。2、仪器RM6240B/C生物信号采集处理系统(淮北正华生物仪器设备有限公司)。3、动物SD大鼠，6周龄、雄性、18(T220g、清洁级(河南省实验动物中心)。4、实验分组分组 ①正常对照组健康SD大鼠20只，每天清晨空腹三蒸水灌胃(灌胃容量为10ml/kg)，连续灌胃8周 级血管性痴呆模型组2V0法制备血管性痴呆大鼠模型20只毛蕊异黄酮组血管性痴呆模型大鼠20只，每天清晨空腹毛蕊异黄酮溶液灌胃(灌胃浓度2. Omg/kg，灌胃容量为10ml/kg)给药，连续灌胃8周氢化麦角碱组血管性痴呆模型大鼠20只，每天清晨空腹氢化麦角碱溶液灌胃(灌胃浓度2. Omg/kg，灌胃容量为10ml/kg)给药，连续灌胃8周。5、实验内容内皮依赖性舒张反应检测。6、结果
毛蕊异黄酮(2. Omg/kg)明显增加血管性痴呆大鼠大脑基底动脉内皮依赖性舒张反应，与血管性痴呆模型组比较，存在明显差异(P < O. 05);与氢化麦角碱组比较，存在明显差异(P < O. 05)。说明毛蕊异黄酮能够明显抑制血管性痴呆大鼠的血管功能減退，效果优于氢化麦角喊。(结果见图3)
试验例3 :检测毛蕊异黄酮对大鼠大脑基底动脉内皮细胞形态学影响。I、药物毛蕊异黄酮(上海科兴商贸有限公司)。2、仪器=TSlOOO尼康显微镜，HT7700日立透射电子显。3、动物SD大鼠，6周龄、雄性、18(T220g、清洁级(河南省实验动物中心)。4、实验分组分组 ①正常对照组健康SD大鼠20只，每天清晨空腹三蒸水灌胃(灌胃容量为10ml/kg)，连续灌胃8周 级血管性痴呆模型组2V0法制备血管性痴呆大鼠模型20只毛蕊异黄酮组血管性痴呆模型大鼠20只，每天清晨空腹毛蕊异黄酮溶液灌胃(灌胃浓度2. Omg/kg，灌胃容量为10ml/kg)给药，连续灌胃8周；
5、实验内容光镜及电镜下形态学观察。6、结果
6.I毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠大脑基底动脉内膜形态学的影响(光镜400X)。血管性痴呆大鼠大脑基底动脉血管内膜出现明显断裂痕迹，内膜皱褶增多，脂质于内皮下沉积；血管内膜下平滑肌层细胞排列紊乱，肌层出现明显断裂、融合现象，延续性较差，肌细胞间纤维组织增生；肌层下纤维结缔组织疏松，肌层与结缔组织界限不清楚。天然产物毛蕊异黄酮明显抑制血管性痴呆大鼠大脑基底动脉血管内膜的形态学变化。(结果见图4)
6.2 毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠大脑基底动脉内膜形态学的影响(电镜8000X )。血管性痴呆大鼠大脑基底动脉血管内皮细胞膜出现破裂现象，平滑肌细胞延伸入内皮细胞胞浆；内皮基膜断裂，断裂处有大量胶原纤维组织增生；内皮细胞内高尔基体增多，线粒体肿胀、嵴融合或缺失。天然产物毛蕊异黄酮明显抑制血管性痴呆大鼠大脑基底动脉血管内皮细胞形态学变化。(结果见图5)
试验例4 :检测毛蕊异黄酮对大鼠海马区锥体细胞形态学影响。I、药物毛蕊异黄酮(上海科兴商贸有限公司)。2、仪器=TSlOOO尼康显微镜，HT7700日立透射电子显。3、动物SD大鼠，6周龄、雄性、18(T220g、清洁级(河南省实验动物中心)。4、实验分组分组(I)正常对照组健康SD大鼠20只，每天清晨空腹三蒸水灌胃(灌胃容量为10ml/kg)，连续灌胃8周；(2)血管性痴呆模型组2V0法制备血管性痴呆大鼠模型20只；(3)毛蕊异黄酮组血管性痴呆模型大鼠20只，每天清晨空腹毛蕊异黄酮溶液灌胃(灌胃浓度2. Omg/kg，灌胃容量为10ml/kg)给药，连续灌胃8周；
5、实验内容光镜及电镜下形态学观察。6、结果
6.I毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠大脑海马区锥体细胞形态学的影响(光镜400X)。血管性痴呆大鼠大脑海马区三层锥体细胞排列紊乱；部分锥体细胞肿胀，并有炎细胞浸润，星形胶质细胞增生；部分锥体细胞胞体变小或呈三角形，顶树突延长，有核固缩和破裂现象，胞浆呈均匀嗜伊红色；部分锥体细胞胞核变浅，基质疏松伴微空泡形成；血管周围有红细胞渗出，个别可见小血管增生。天然产物毛蕊异黄酮明显抑制血管性痴呆大鼠大脑海区锥体细胞形态学变化。(结果见图6)
6.2 毛蕊异黄酮对血管性痴呆大鼠大脑海马区锥体细胞形态学的影响(电镜8000X)。血管性痴大鼠大脑海马区锥体细胞胞核固缩，染色质聚集成团、边集，异染色质增多，核周可见高电子密度团块；线粒体肿胀，有嵴融合并出现空泡变性。毛蕊异黄酮明显抑制血管性痴呆大鼠大脑海区锥体细胞形态学变化。(结果见图7)。
权利要求
1.毛蕊异黄酮在制备抗血管性痴呆的药物中的应用。
2.根据权利要求I所述的毛蕊异黄酮，其特征在干，提取于豆科草本植物膜荚黄芪[Astragalus membranaceus (Fisch. ノ Bge.]、内蒙^' 民[Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge. ver. Mongholicus (Bge.) Hsiao]的ネB。
3.根据权利要求I所述的毛蕊异黄酮，其特征在于，分子式=C16H12O5，分子量284.26，CAS 登录号20575-57_9，英文名称7-hydroxy-3-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)-4H_chromen-4-one， InChI= l/C16H1205/cl-20-14-5-2_9(6-13(14)18)12-8-21-15-7-10(17)3-4-ll(15)16(12)19/h2-8，17-18H，1H3，分子结构式
4.根据权利要求I所述的血管性痴呆，其特征在干，因各种脑血管疾病引起的脑功能障碍而产生的获得性智能损害综合症，以记忆、认知功能缺损为主，可伴有言语、运动、视空间及人格障碍为主要临床表现的ー组神智异常症候群。
全文摘要
本发明提供了天然产物毛蕊异黄酮在制备抗血管性痴呆的药物中的应用。本发明经动物试验验证，毛蕊异黄酮可以有效抑制血管性痴呆大鼠大脑基底动脉内膜及大脑海马区椎体细胞形态学改变，提高大脑基底动脉内皮依赖性舒张反应，增强血管性痴呆大鼠的认知、学习和记忆能力，明显减轻血管性痴呆症状。
文档编号A61P25/28GK102657641SQ20121015581
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月20日 优先权日2012年5月20日
发明者尹雅玲, 律海峡, 李鹏, 王倩倩, 贾岩龙, 马丽娟, 高利洁, 高建辉 申请人:新乡医学院