专利名称：辅助抗肿瘤药物、中药合剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及抗肿瘤药物领域，尤其是一种辅助抗肿瘤药物、中药合剂及其制备方法。
背景技术：
目前全球肿瘤疾病状况日趋严重，中国现状更加严峻和突出。世界肿瘤患者人数4000万，年增肿瘤患者1030万，年死亡人数630万；我国肿瘤患者450万，年增肿瘤患者220万，年死亡人数170万。虽然我国肿瘤患者虽仅占全球的11. 2%，但年癌症死亡人数却占全球的27. 0%，可见我国肿瘤患者死亡率之高。而且，我国年癌症死亡人数占肿瘤患者总数和年新增肿瘤患者的比例，也分别高出世界平均值的22和16个百分点，这说明我国肿瘤患者还未得到有效治疗，主要原因就是进口肿瘤治疗药物价格昂贵，大多数国民尚无经济能力支付。进入21世纪，我国迫切需要从祖国医药中开发出高效低廉的抗肿瘤药物，使患者得到及时有效救治，惠及千千万万中低收入阶层肿瘤患者。目前抗肿瘤中成药分为两大类一为治疗类抗肿瘤中成药，如鸦胆子油、榄香烯、复方红豆杉胶囊、蟾酥注射液等；另一为辅助类抗肿瘤中成药,如参芪扶正、香菇多糖、人参多糖注射液等。它们都被广泛应用于临床，是肺癌、胃癌、肝癌等恶性肿瘤的治疗和辅助治疗药品，极受市场欢迎。然而，由于癌症细胞存在变异性和耐药性，因此市场永远都在呼唤疗效更优、品质更好的抗肿瘤新药面市，以满足一线医务工作者的临床需要和肿瘤患者的治疗需要。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种具有升高白细胞、提高免疫力等作用的辅助抗肿瘤药物，以及由此开发出的中药合剂——抗毒升白合剂及其制备方法。为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案辅助抗肿瘤药物，包含以下重量份的原料黄芪100 150克、人参20 50克、鸡血藤50 100克、淫羊藿60 100克、丹参30 50克、当归40 80克、阿胶10 15克。上述辅助抗肿瘤药物包含以下重量份的原料黄芪120克、人参30克、鸡血藤80克、淫羊藿80克、丹参30克、当归50克、阿胶15克。上述辅助抗肿瘤药物制成的中药合剂。上述中药合剂的制备方法先将黄芪、人参、鸡血藤、淫羊藿、丹参、当归6味药分别干燥后打粉，过40目筛，然后将过筛后的药粉混合；混合后的药粉与水按重量比1:10
I 12混合，浸泡20 30分钟，煮沸提取两次，每次100 150分钟，过滤，将两次提取滤液合并，将滤液浓缩至比重为I. 05 I. 10 ;浓缩液中加入I. 5 2. 5倍体积的95%的乙醇，静置24小时，再次滤除沉淀，滤液加热至沸，热融阿胶，浓缩至1000毫升即得中药合剂。干燥的温度为46 70°C，干燥的时间为3 7小时。中药合剂灌装至100毫升合剂瓶中，封口包装。
本发明的抗毒升白合剂起辅助抗肿瘤、升高白细胞、扶正、祛邪、减毒之功效，对于肿瘤免疫低下等症有较好的疗效。使用方法肿瘤病患者使用时先将合剂瓶盖旋开，然后倒取20毫升合剂口服。发明人在长期的整理方剂和医疗实践中，利用民间治疗经验和验方，进行反复比较和试验，挖掘了本发明组分独特、疗效显著的辅助抗肿瘤药物，它由黄芪、人参、鸡血藤、淫羊藿、当归、丹参和阿胶等名贵中药组成，有扶正、祛邪、减毒、增效作用，达到阴中求阳、阳中求阴、阴阳双补功效。各中药原料在中国药典中记载如下黄苗豆科植物蒙古黄苗 Astragalus membranaceus (Fisch. )Bge. var.monghoicus (Bge) Hsiao 或膜荚黄苗 Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge.的干燥根。人参五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根。鸡血藤豆科植物密花豆Sptholobus suberectus Dunn的干燥藤莖。 淫羊藿小檗科植物淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim.)、箭叶淫羊藿(Epimedium sagittatum Maxim.)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim.)、或車月鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai )的干燥叶。当归伞形科植物当归 Angelica sinensis (Oliv. ) Diels 的根。丹参双子叶植物唇形科鼠尾草属植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。阿胶马科动物驴Equus asinus L.及其他驴皮经煎煮浓缩制成的固体胶。使用该组方经现代制剂技术研制成了方便服用的口服制剂——抗毒升白合剂，药理研究表明其安全可靠且疗效显著，具有升高白细胞、提高免疫力等作用，可作为辅助抗肿瘤方剂。与现有其他肿瘤疾病常用剂型相比，抗毒升白合剂具有以下优点<1>合剂经口服给药，可提高制剂的生物利用度，发挥治疗全身的功效；<2> 口服形式给药起效快速、疗效显著，未见不良反应，且携带使用方便，患者顺应性好；<3>合剂制备工艺简单，原材料来源广泛，适宜大批量工业化生产。
图I是抗毒升白合剂作用人肝癌细胞H印G-2和BEL-7404曲线图(24小时)。图2是抗毒升白合剂作用人肝癌细胞H印G-2和BEL-7404曲线图(48小时)。图3是抗毒升白合剂作用人肝癌细胞H印G-2和BEL-7404曲线图(72小时)。图中I人肝癌细胞H印G-2是，2是人肝癌细胞BEL-7404。
具体实施例方式一、抗毒升白合剂的制备实施例I原料黄芪100克、人参20克、鸡血藤80克、淫羊藿80克、丹参30克、当归50克、阿胶15克。制备方法先将黄芪、人参、鸡血藤、淫羊藿、丹参、当归6味药分别干燥(46 70°C,3小时)后打粉,过40目筛,然后将过筛后的药粉混合；混合后的药粉与水按重量比I 10混合，浸泡30分钟，煮沸提取两次，每次100分钟，过滤，将两次提取滤液合并，将滤液浓缩至比重为I. 05 ;浓缩液中加入2倍体积的95%的乙醇，静置24小时，再次滤除沉淀，滤液加热至沸，热融阿胶，浓缩至1000毫升，灌装至100毫升合剂瓶中，封口包装。实施例2原料黄芪150克、人参50克、鸡血藤100克、淫羊藿100克、丹参50克、当归80克、阿胶15克。制备方法先将黄芪、人参、鸡血藤、淫羊藿、丹参、当归6味药分别干燥(46 70°C, 5小时)后打粉,过40目筛,然后将过筛后的药粉混合；混合后的药粉与水按重量比I 12混合，浸泡30分钟，煮沸提取两次，每次120分钟，过滤，将两次提取滤液合并，将滤液 浓缩至比重为I. 05 ;浓缩液中加入I. 5倍体积的95%的乙醇，静置24小时，再次滤除沉淀，滤液加热至沸，热融阿胶，浓缩至1000毫升，灌装至100毫升合剂瓶中，封口包装。实施例3原料黄芪120克、人参30克、鸡血藤80克、淫羊藿80克、丹参30克、当归50克、阿胶15克。制备方法先将黄芪、人参、鸡血藤、淫羊藿、丹参、当归6味药分别干燥(46 70°C, 7小时)后打粉,过40目筛,然后将过筛后的药粉混合；混合后的药粉与水按重量比I 10混合，浸泡30分钟，煮沸提取两次，每次150分钟，过滤，将两次提取滤液合并，将滤液浓缩至比重为I. 05 ;浓缩液中加入2. 5倍体积的95%的乙醇，静置24小时，再次滤除沉淀，滤液加热至沸，热融阿胶，浓缩至1000毫升，灌装至100毫升合剂瓶中，封口包装。实施例4原料黄芪120克、人参40克、鸡血藤60克、淫羊藿60克、丹参40克、当归40克、阿胶12克。制备方法先将黄芪、人参、鸡血藤、淫羊藿、丹参、当归6味药分别干燥(46 70°C,6小时)后打粉,过40目筛,然后将过筛后的药粉混合；混合后的药粉与水按重量比I 10混合，浸泡20分钟，煮沸提取两次，每次130分钟，过滤，将两次提取滤液合并，将滤液浓缩至比重为I. 02 ;浓缩液中加入2倍体积的95%的乙醇，静置24小时，再次滤除沉淀，滤液加热至沸，热融阿胶，浓缩至1000毫升，灌装至100毫升合剂瓶中，封口包装。实施例5原料黄芪140克、人参20克、鸡血藤80克、淫羊藿80克、丹参30克、当归60克、阿胶10克。制备方法先将黄芪、人参、鸡血藤、淫羊藿、丹参、当归6味药分别干燥(46 70°C,4小时)后打粉,过40目筛,然后将过筛后的药粉混合；混合后的药粉与水按重量比I 10混合，浸泡30分钟，煮沸提取两次，每次120分钟，过滤，将两次提取滤液合并，将滤液浓缩至比重为I. 10 ;浓缩液中加入2倍体积的95%的乙醇，静置24小时，再次滤除沉淀，滤液加热至沸，热融阿胶，浓缩至1000毫升，灌装至100毫升合剂瓶中，封口包装。实施例6原料黄芪120克、人参30克、鸡血藤50克、淫羊藿70克、丹参40克、当归70克、阿胶12克。
制备方法先将黄芪、人参、鸡血藤、淫羊藿、丹参、当归6味药分别干燥(46 70°C,4小时)后打粉,过40目筛,然后将过筛后的药粉混合；混合后的药粉与水按重量比I 10混合，浸泡30分钟，煮沸提取两次，每次110分钟，过滤，将两次提取滤液合并，将滤液浓缩至比重为I. 08 ;浓缩液中加入2倍体积的95%的乙醇，静置24小时，再次滤除沉淀，滤液加热至沸，热融阿胶，浓缩至1000毫升，灌装至100毫升合剂瓶中，封口包装。采用实施例I至6的抗毒升白合剂做相关药学实验研究，由于实验结果大体相近，故列举实施例3的实验结果为据论述如下二、抗毒升白合剂毒理学研究采用一日最大给药量法进行测定。
实验表明抗毒升白合剂一日最大给药量相当于生药材4. Sg，根据国家药品监督管理局1999年《中药新药药理毒理研究的技术要求》的有关规定以及毒理学研究的一般原贝U，单次给药量大于20g/kg体重而实验动物不出现死亡者，可以认为该药是安全的。实验证实，该制剂的最大耐受量大于240g/kg体重，从而证明该制剂属于较安全的制剂。实验结果表明，抗毒升白合剂急性毒性很小，通过灌胃给药无法测出LD5tlt5 —天两次灌胃给予小鼠抗毒升白合剂浓缩液，给药后，抗毒升白合剂组与对照组(生理盐水)小鼠精神状态均无异常，各组小鼠活动正常。连续观察7天，小鼠毛色光洁、二便正常，鼻、眼、口腔无异常分泌物，未出现不良情况，也未有小鼠死亡。给药组体重增长正常，与对照组相比无明显差异，且未发现因抗毒升白合剂蓄积而对动物产生毒性反应。肝脏病理切片显示，肝细胞排列成条索状，胞浆红染，核均质蓝染，肝窦均匀，静脉圆形，完整，与对照组相比无明显病理变化。三、抗毒升白合剂药效学研究(一)抗毒升白合剂体外抗肿瘤活性研究采用MTT法评价抗毒升白合剂的细胞毒作用，根据现有的实验条件等因素选择了Bele-7404、H印G-2两种人肝癌肿瘤细胞进行初步的研究，结果如图I至图3。在倒置相差显微镜下观察各组细胞形态，结果表明，经抗毒升白合剂作用后各组细胞均有不同程度的态改变，可导致细胞的坏死或凋亡，证实了其对肿瘤细胞增殖的抑制作用。在优化的实验条件下，采用顺钼做阳性对照，通过对人肝癌细胞H印G2和BEL7404细胞的MTT实验，结果显示抗毒升白合剂能够使显著抑制体外培养的BEL7404和H印G2细胞株，与阴性对照组比两者各浓度组均有非常显著性差异(P〈0. 05)，且在此浓度范围内细胞毒作用呈现剂量依赖性；进一步通过比较相同剂量对两种细胞的抑制率，得出抗毒升白合剂对人肝癌细胞Bele7404较为敏感，即抗毒升白合剂抗肿瘤具有一定的选择性。(二)抗毒升白合剂体内抗肿瘤研究I.小鼠S180肉瘤模型实验I. I实验材料I. I. I 药物抗毒升白合剂浓缩液广西药用植物园中药制剂中心提供。注射用环磷酰胺山西普德药业有限公司批号04100902I. I. 2动物及瘤株KM小鼠SPF级，体重18 22g，^性。广西医科大学实验动物中心提供，合格证号26-2010A004。小鼠S180细胞株购于中科院上海细胞库。I. 2实验方法I. 2. I造模方法 无菌条件下，选取饲养7天的腹部明显膨隆的S180移植瘤小鼠，腹部皮肤消毒，用一次性无菌注射器抽取腹水，放入无菌烧杯，I 3加入生理盐水，反复冲打，水平振摇以充分混匀，于显微镜下细胞计数，并用生理盐水稀释细胞浓度至I X 107/mL,每只小鼠左侧腋下皮下接种瘤细胞混悬液0. 2mL。从抽取腹水开始，到移植完最后一只小鼠的时间控制在2小时内。I. 2. 2分组方法次日，将接瘤小鼠随机分为模型组，环磷酰胺组，抗毒升白合剂高、中、低剂量组，环磷酰胺抗毒升白联用组，每组15只，并取同批正常小鼠15只做为正常对照组。I. 2. 3给药方法每日固定时间段，小鼠给药，连续15天。给药方法及计量如下正常对照组每日灌胃给予生理盐水，0. 4 mL/20g体重模型组每日灌胃给予生理盐水，0. 4 mL/20g环磷酰胺组腹腔注射环磷酰胺，20mg/kg,连续7天抗毒升白高剂量组每日灌胃给予抗毒升白浓缩液，0. 4 mL/20g (相当于生药材
0.8g/20g)抗毒升白中剂量组每日灌胃给予抗毒升白浓缩液稀释液，0. 4 mL/20g (相当于生药材 0. 6g/20g)抗毒升白低剂量组每日灌胃给予抗毒升白浓缩液稀释液，0.4 mL/20g (相当于生药材 0. 4g/20g)联合用药用组腹腔注射注射环磷酰胺，10mg/kg，连续7天，每日灌胃给与抗毒升白合剂中剂量。以上各组均在相同条件下饲养，自由觅食饮水。I. 2. 4记录及取材方法记录小鼠的活动状况及体重，动物荷瘤第16天，游标卡尺测量瘤体长径(a)宽径(b)。后将小鼠处死取胸腺、脾脏、肝脏、剥离瘤体，胸腺、脾脏、瘤体称重。后将脾脏、肝脏、瘤体置10%福尔马林中固定，制作病理切片。肿瘤体积=a*b2/2。肿瘤抑制率(%) = [1_ (平均试验组瘤重/平均对照组瘤重)]X 100%。胸腺指数=胸腺平均重量(mg)/平均体重(g)；脾脏指数=脾脏平均重量(mg)/平均体重(g)。荷瘤小鼠肿瘤、肝脏、脾脏组织切片及HE染色方法。I. 2. 5切片制作方法荷瘤小鼠死亡后经解剖，获取肿瘤、肝脏、脾脏的组织标本，甲醛浸泡固定，经石蜡包埋切片。切片经过二甲苯I、II、III梯度脱蜡，然后放入100%、95%、90%、80%、70%梯度乙醇液中，每次均为5分钟，再放入蒸馏水中水化3min。切片放入苏木精中染色约30min，自来水冲洗约15min。将处理过的切片放入I %的盐酸乙醇液(盐酸I份+70%乙醇100份)中褪色，约30s后见切片见红，颜色较浅即可。再放入自来水中使其恢复蓝色，在低倍镜下见细胞核呈蓝色、结构清晰；细胞质或结缔组织纤维成分无色为标准。然后放入蒸馏水中漂洗一次。切片置入50%、70%、80%乙醇中各51^11脱水。0. 5%伊红乙醇液对比染色5min,切片放入95%乙醇中洗去多余的红色,然后放入无水一寸中5min。最后用吸水纸吸去多余的乙醇。处理后的切片放入二甲苯一乙醇等量混合液中约5min，然后放入纯二甲苯
1、11中各51^11。中性树胶封片。HE染色后于X400高倍镜下观察并拍照。I. 2. 6统计方法
采用SPSS18.0统计软件，实验指标计量资料组间比较应用成组T检验，以P〈0. 05为显著性差异。I. 3实验结果I. 3. I各组小鼠一般状况观察模型对照组小鼠接种后第3天开始出现黄豆样隆起。小鼠饮食、饮水量减少，被毛疏松，精神较差，呆卧少动。抗毒升白合剂高剂量组小鼠体重较其他各组增长均快，被毛有些疏松，行动较迟缓。接种后第四天开始出现轻微蓬隆。抗毒升白合剂中剂量组小鼠体重增长速度适中，饮食运动均良好，被毛顺滑，有光泽。接种后第三天开始出现轻微蓬隆。抗毒升白合剂小剂量组小鼠体重增长较空白对照组不明显，饮食行动尚可，被毛较顺滑。接种后第三天开始出现轻微蓬隆。。阳性对照药小鼠服用CTX后，呆卧少动，被毛疏松，精神差，饮食减少，与对空白比较体重增加缓慢，腋下荷瘤目测体积明显小于对照组。I. 3. 2各组抑瘤率比较表I 各组小鼠瘤重及抑瘤率的比较
权利要求
1.一种辅助抗肿瘤药物，其特征在于包含以下重量份的原料黄芪100 150克、人参.20 50克、鸡血藤50 100克、淫羊藿60 100克、丹参30 50克、当归40 80克、阿胶10 15克。
2.根据权利要求I所述的辅助抗肿瘤药物，其特征在于包含以下重量份的原料黄芪.120克、人参30克、鸡血藤80克、淫羊藿80克、丹参30克、当归50克、阿胶15克。
3.根据权利要求I或2任一所述辅助抗肿瘤药物制成的中药合剂。
4.根据权利要求3所述中药合剂的制备方法，其特征在于先将黄芪、人参、鸡血藤、淫羊藿、丹参、当归6味药分别干燥后打粉，过40目筛，然后将过筛后的药粉混合；混合后的药粉与水按重量比1:10 1:12混合，浸泡20 30分钟，煮沸提取两次，每次100 150分钟，过滤，将两次提取滤液合并，将滤液浓缩至比重为I. 05 I. 10 ;浓缩液中加入I. 5 2. 5倍体积的95%的乙醇，静置24小时，再次滤除沉淀，滤液加热至沸，热融阿胶，浓缩至1000毫升即得中药合剂。
5.根据权利要求4所述中药合剂的制备方法，其特征在于所述干燥的温度为46 .70°C，干燥的时间为3 7小时。
6.根据权利要求5所述中药合剂的制备方法，其特征在于所述中药合剂灌装至100毫升合剂瓶中，封口包装。
全文摘要
本发明公开了一种辅助抗肿瘤药物，它由黄芪、人参、鸡血藤、淫羊藿、当归、丹参和阿胶等名贵中药按一定配比组成，有扶正、祛邪、减毒、增效作用，达到阴中求阳、阳中求阴、阴阳双补功效。使用该组方经现代制剂技术研制成了方便服用的口服制剂——抗毒升白合剂，药理研究表明其安全可靠且疗效显著，具有升高白细胞、提高免疫力等作用，可作为辅助抗肿瘤方剂用于肿瘤免疫低下等症。
文档编号A61P35/00GK102641331SQ20121015508
公开日2012年8月22日 申请日期2012年5月18日 优先权日2012年5月18日
发明者周小雷, 王硕, 缪剑华, 苏杭, 袁经权, 韦范 申请人:广西壮族自治区药用植物园