专利名称：一种稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统及其制备方法
技术领域：
一种稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统及其制备方法，通过超声波、高压均质或微 流化技术将白蛋白结合在阿霉素脂质囊胞上，可以显著提高脂质囊胞的稳定性以及提高 药物在脂质囊胞中的包封率，尤其是可以提高阿霉素的治疗效果。
背景技术：
恶性肿瘤(癌症)是我国仅次于心血管疾病死亡率占第二的疾病，化疗是治疗恶性 肿瘤的重要手段之一，阿霉素类药物在恶性肿瘤的治疗上有着重要的应用价值。由于恶 性肿瘤的发病率居高不下，以吡柔比星为代表的新的阿霉素制剂在肿瘤等疾病的治疗上 受到新的肯定，今后几年中阿霉素类药物的仍将会在肿瘤治疗药物中占据一席之地。由 于新型高效抗肿瘤治疗药物在很长一段时间内难有突破，而阿霉素类药物由于抗肿瘤谱 广，疗效明确，无论在用量还是金额上都将继续占有着举足轻重的地位。由于整个肿瘤 药物领域竞争相对缓和，市场成长空间大，利润较高，这为新的阿霉素类制剂占领市场 创造了良好的发展空间。
目前市售的阿霉素类药物有多柔比星、表柔比星、阿柔比星、吡柔比星和伊达比星 等，其中表柔比星和吡柔比星作为阿霉素类抗肿瘤药物的代表，在抗肿瘤药物市场中占 有举足轻重的地位。据肿瘤科大夫反应，阿霉素类盐酸盐抗肿瘤药物在临床使用时具有 很强的刺激性，如果能从制剂上改善该类药物的刺激性，作为一线用药的该品种具有更 好的市场前景，必能带来良好的经济效益。
脂质囊胞是利用磷脂双分子层内嵌入胆固醇所形成的囊泡包裹药物分子而形成的制 剂，磷脂是构成脂质囊胞的主要化学成分，其中最具有代表性的是卵磷脂。卵磷脂主要 来自蛋黄和大豆，制备成本低，性质稳定，属于中性磷脂。磷脂酰胆碱是形成许多细胞 膜的主要成分，也是制备脂质囊胞的主要原料，胆固醇也是脂质囊胞另一个重要组成成 分，它是许多天然生物膜的重要成分，本身并不形成膜结构，但是能够以1:1甚至2:1 的摩尔比插入磷脂膜中。加入胆固醇可以改变脂膜的相变温度，从而影响膜的通透性和 流动性。因此胆固醇具有稳定磷脂双分子膜的作用。 .
按脂质囊胞的结构和粒径分类，可以分为单室脂质囊胞、多室脂质囊胞和多相脂 质囊胞，按脂质囊胞电荷性可以分为中性脂质囊胞、负电性脂质囊胞、正电性脂质囊胞。
药物包裹于脂质囊胞内，可降低在组织中扩散而缓慢向血液中释放药物，从而延长药 物作用时间，脂质囊胞能选择性地分布于某些组织和器官，增加药物对淋巴系统的定向性, 提高药物在耙部位的治疗浓度。尤其对抗癌药物,能使之选择性地杀伤癌细胞或抑制癌细 胞，对正常组织、细胞的毒性明显降低或无损害作用。对脂质囊胞表面性质进行改变,如 粒径大小、表面电荷、组织特异性抗体等，可提高药物对靶区的选择性，从而也降低了毒 性，减少了不良反应。
由于细胞膜上有白蛋白受体GP60，在Gp60与白蛋白结合后，激活胞膜穴样内凹，进 行细胞转运，由肿瘤细胞分泌的富含半光氨酸酸性分泌性蛋白，存在于多种恶性肿瘤组 织间质中，和病人的预后有直接关系，它和GP60同源，能和白蛋白结合，利用其与白蛋 白结合的特性，使表面镶嵌有白蛋白的脂质囊胞相对富集在肿瘤间质中，通过膜融合和 转运释放药物到肿瘤细胞内，使肿瘤细胞内的药物局部浓度增高，从而增加肿瘤细胞的 疗效。
通过文献检索到白蛋白微球以及脂质体的制备方法和相关的研究，而脂质囊胞镶嵌 白蛋白提高阿霉素脂质囊胞疗效以及载药量和包封率的研究还没有发现。
本发明的阿霉素白蛋白脂质载药系统不仅有效的实现了肿瘤药物在肿瘤细胞周围的 富集，提高抗肿瘤的效果，更有意义的是可以有效克服脂质囊胞包封率低，容易渗漏的 缺陷，本发明采用的工艺可以实现工业化生产制成临床使用的产品，具有非常重要的现 实价值。
发明内容
本发明公开了一种稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统及其制备方法，^特征在于将 白蛋白结合在阿霉素脂质囊胞上，可以显著提高脂质囊胞的稳定性以及提高药物在脂质 囊胞中的包封率，其中白蛋白脂质载药系统中包含具有阿霉素、磷脂、甾醇和白蛋白， 其制备方法为采用薄膜分散法结合PH梯度法将药物包裹在磷脂与甾醇形成的脂质囊胞 中，再在体系中加入白蛋白溶液，用挤压过滤法或高压均化法制成可注射的结合了白蛋 白的脂质载药系统，也可以将白蛋白和药物同时加入溶入有机溶剂的磷脂、甾醇中形成 前体脂质囊胞，再用缓冲盐溶液水化后用挤压过滤法或高压均化法制成可注射的结合了 白蛋白的脂质载药系统。
本发明稳定的白蛋白脂质载药系统，其中各组分质量百分比如下
阿霉素药物0. 01-10%、磷脂0. 1-60%、甾醇0. 01-20%、白蛋白0. 1-90% 优选各组分质量百分比如下
阿霉素药物0. 01—10%、磷脂3-60%、甾醇1-20%、白蛋白0. 1—90%
本发明稳定的阿霉素药物白蛋白脂质载药系统，还可以包含冻干支持剂，选自小分 子氨基酸、多糖或多元醇，具体包括20种天然氨基酸、海藻糖、蔗糖、乳'糖、麦芽糖、 甘露醇、山梨醇中的一种或任意组合，所述的用量以重量计为2%-50%。
本发明稳定的阿霉素药物白蛋白脂质载药系统，还包含PH调节剂，选自盐酸、磷酸、
柠檬酸或其碱金属钠盐、草酸或其金属纳盐、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、冰醋酸或 其碱金属盐。
本发明稳定的阿霉素药物白蛋白脂质载药系统，还可以进一步包含稳定剂，选自小
分子氨基酸或PEG200、 400、 600，吐温80、泊洛沙姆(poloxamer)、脱氧胆酸钠中的一 种或其任意混合物，所述的用量以重量计为0.2%-5%，其中氨基酸具体选自20种常用氨 基酸，比如20种a -氨基酸
非极性氨基酸丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、 甲硫氨酸(8种)； '
极性、不带电荷氨基酸丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰 胺、酪氨酸(7种)；
酸性氨基酸天门冬氨酸、谷氨酸(2种)； 碱性氨基酸精氨酸、赖氨酸、组氨酸(3种)
本发明稳定的阿霉素药物白蛋白脂质载药系统，还可以包括抗氧化剂，选自维生素E、 维生素c、亚硫酸盐类、乙二胺四乙酸及其衍生物、盐酸半胱氨酸中的一种或一种以上的
混合物。
本发明稳定的阿霉素药物白蛋白脂质载药系统，还可以包括渗透压调剂剂，选自葡
萄糖、氯化钠、甘油、山梨醇中的一种或任意组合，所述的用量以重量计为0.2%-5%。
本发明稳定的阿霉素药物白蛋白脂质载药系统，有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、 乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮等低沸点溶剂。
本发明稳定的阿霉素药物白蛋白脂质载药系统，各组分中磷脂选自天然或合成磷脂， 比如卵磷脂(大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二月桂酰磷脂、二肉豆蔻酰磷脂、二棕榈酰磷 脂或二硬脂酰磷脂等)、磷脂酰乙醇胺(二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇 胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺等)磷脂酰丝氨酸(二月桂酰磷脂 酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸或二硬脂酰磷脂酰丝氨酸 等)、磷脂酸、磷脂酰甘油(二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷 脂酰甘油或二硬脂酰磷脂酰甘油等)、磷脂酰肌醇(二月桂酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷
脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇或二硬脂酰磷脂酰肌醇等)、溶血卵磷脂、鞘磷脂、蛋黄 卵磷脂、大豆卵磷脂、羟基卵磷脂、氢化磷脂以及经过PEG修饰过的磷脂中的一种或一 种以上的混合物；甾醇选自胆甾醇及其衍生物，具体包括胆固醇、聚乙二醇丁二醇胆固 醇醚(优选短链聚乙二醇)、胆固醇半琥珀酸酯、麦角固醇、羊毛甾醇中的一种或一种以 上的混合物；白蛋白选自动物白蛋白(比如卵白蛋白、血清白蛋白、乳白蛋白或肌肉白 蛋白)和植物白蛋白，优选动物血清白蛋白、人血清白蛋白以及通过基因工程生产的人 血清白蛋白中的一种。
本发明稳定的阿霉素药物白蛋白脂质载药系统得制备方法，具体制备方法有两种， 第一种包括以下步骤
第一步选择旋转蒸发法将药物、磷脂与甾醇用有机溶剂溶解，通过薄膜分散法形 成的脂质囊胞体系，用缓冲盐溶液超声溶解，通过超声波、高压均质或微流化技术使脂
质囊胞形成比较均匀的颗粒，粒径大小在50nm-1000nm; .
第二步在脂质囊胞体系体系中加入白蛋白溶液，通过超声波、高压均质或微流化 技术形成可注射的结合了白蛋白的脂质载药系统，粒径大小在20rai-1000nm，过滤罐装即 得；
第三步如果制备冷冻干燥制剂，在体系中加入适量冻干支持剂，冻干即得。 第二种制备方法包括以下步骤
第一步将白蛋白和药物加入溶入有机溶剂的磷脂与甾醇中，减压蒸发除去有机溶 剂后加入缓冲盐溶液，通过超声波、高压均质或微流化技术使脂质囊胞形成比较均匀的
颗粒，粒径大小在20nm-1000nm，过滤罐装即得；
第二步如果制备冷冻干燥制剂，在体系中加入适量冻干支持剂，冻干即得； 如果要制备产品，环境、热源、无菌等需要按照大生产的要求完成。
本发明稳定的阿霉素药物白蛋白脂质载药系统，注射液或冻干复溶后溶液的ra范围
为5.0-7.0。
具体实施例
实施例l:吡柔比星白蛋白脂质结合物
取吡柔比星30mg，蛋黄卵磷脂2.5g、氢化卵磷脂0.5g、聚乙二醇丁二醇胆固醇醚 0. lg、色氨酸0.2g、白蛋白0.5g，加入50ml氯仿/乙醇搅拌使吡柔比星、蛋黄卵磷脂、 氢化卵磷脂、胆固醇溶解，用旋转蒸发器减压蒸馏除去氯仿/乙醇，加入蔗糖3g、葡萄糖 2g， PH4柠檬酸缓冲盐至总体积为50ml，超声溶解，用1^20)3调节溶液PH为7. 5， 40°C 保温30分钟，用挤压过滤法或高压均匀机均质至粒度为50-200nm，过0. 22的滤膜罐装 密封即得。
如果制备冷冻干燥制剂，在上述液体中加入5% (重量百分比)甘露醇冻干即得。 如果要制备产品，环境、热源、无菌等需要按照大生产的要求完成。
实施例2:表柔比星白蛋白脂质结合物
取表柔比星50mg，蛋黄卵磷脂lg、聚乙二醇丁二醇胆固醇醚0.3g、白蛋白3.0g， 加入50ml无水乙醇中搅拌使表柔比星、蛋黄卵磷脂、胆固醇溶解，用旋转蒸发器减压蒸 馏除去乙醇，加入蔗糖5g，盐酸半胱氨酸0.02g、 PH6-7柠檬酸缓冲盐至总体积为100ml， 高压均匀机均质至粒度为50-200咖，过0. 22的滤膜罐装密封即得。
如果制备冷冻干燥制剂，在上述液体中加入体系重量比2-3%的甘露醇作为冻干保护 剂，冻干即得。
如果要制备产品，环境、热源、无菌等需要按照大生产的要求完成。
实施例3:阿柔比星白蛋白脂质结合物
取阿柔比星150mg，蛋黄卵磷脂3g、胆固醇lg、白蛋白0.7g，加入50ml二氯甲烷 搅拌使阿柔比星、蛋黄卵磷脂、胆固醇溶解，用旋转蒸发器减压蒸馏除去；氯甲烷，加 入蔗糖5克，ra6-7柠檬酸缓冲盐至总体积为100ml，高压均匀机均质至粒度为30-200nm， 过O. 22的滤膜罐装密封即得。
如果制备冷冻干燥制剂，在上述液体中加入体系重量比2-3%的蔗糖按常规工艺冻干 即得。
如果要制备产品，环境、热源、无菌等需要按照大生产的要求完成。
实施例4:伊达比星白蛋白脂质结合物
取伊达比星100mg，蛋黄卵磷脂2.5g、胆固醇0.8g、白蛋白0.6g，加入50ml乙醇
搅拌使伊达比星、蛋黄卵磷脂、胆固醇溶解，用旋转蒸发器减压蒸馏除去氯仿，加入蔗 糖5克，P朋-7拧檬酸缓冲盐至总体积为100ml，高压均匀机均质至粒度为30-200rai，过 0.22的滤膜罐装密封即得。
如果制备冷冻干燥制剂，在上述液体中加入体系重量比2-3%的甘露醇按常规工艺冻 干即得。
如果要制备产品，环境、热源、无菌等需要按照大生产的要求完成。
实施例5:多柔比星白蛋白脂质结合物
取多柔比星50mg，蛋黄卵磷脂2.5g、氢化卵磷脂0.5g、胆固醇0.8g、白蛋白0.5g， 加入50ml乙醇搅拌使多柔比星、蛋黄卵磷脂、氢化卵磷脂、胆固醇溶解，用旋转蒸发器 减压蒸馏除去乙醇，加入蔗糖3g、葡萄糖2g， PH4柠檬酸缓冲盐至总体积为50ml，超声 溶解，用Na2C(U周节溶液PH为7. 5， 40。C保温30分钟，用挤压过滤法或高压均匀机均质 至粒度为50-200nm，过0. 22的滤膜罐装密封即得。
如果制备冷冻干燥制剂，在上述液体中加入5% (重量百分比)甘露醇冻干即得。
如果要制备产品，环境、热源、无菌等需要按照大生产的要求完成。'
权利要求
1、一种稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统及其制备方法，其特征在于将阿霉素药物结合在白蛋白脂质囊胞上，可以显著提高阿霉素药物脂质囊胞的稳定性以及提高了药物在脂质囊胞中的包封率，其中阿霉素白蛋白脂质载药系统中包含具有活性的阿霉素药物、磷脂、甾醇和白蛋白，其制备方法为用常规制各脂质囊胞的方法先将药物包裹在磷脂与甾醇形成的脂质囊胞中，再在体系中加入白蛋白溶液，用挤压过滤法或高压均化法制成可注射的结合了阿霉素的白蛋白脂质载药系统，也可以将阿霉素药物和白蛋白同时加入溶入有机溶剂的磷脂、甾醇中形成前体脂质囊胞，再用缓冲盐溶液水化后用挤压过滤法或高压均化法制成可注射的结合了白蛋白的阿霉素脂质载药系统。
2、 根据权利要求l中稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统，其中各组分质量百分比如下阿霉素药物O. 01-20%、磷脂O. 1-60%、甾醇0.01-20%、白蛋白0.01-90% 。
3、 根据权利要求1中稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统，还包含冻干支持剂，冻干支持剂 选自小分子氨基酸、多糖或多元醇，具体包括20种天然氨基酸、海藻糖、蔗糖、乳糖、麦 芽糖、甘露醇、山梨醇中的一种或任意组合，所述的用量以重量计为2%-50%。
4、 根据权利要求l中稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统，还包含PH调节剂，选自盐酸、磷 酸、柠檬酸或其碱金属钠盐、草酸或其金属纳盐、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、冰醋酸或 其碱金属盐。
5、 根据权利要求1中稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统，还可以进一步包含稳定剂，选自 小分子氨基酸或PEG200、 400、 600，吐温80、泊洛沙姆(poloxamer)、脱氧胆酸钠中的一种 或其任意混合物，所述的用量以重量计为0.2%-5%;还可以包括渗透压调剂剂，选自葡萄糖、 氯化钠、甘油、山梨醇中的一种或任意组合，所述的用量以重量计为0.2%-5%。。
6、 根据权利要求1中稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统，还可以包括抗氧化剂，选自维生 素E、维生素C、亚硫酸盐类、乙二胺四乙酸及其衍生物、盐酸半胱氨酸中的一种或一种以 上的混合物。
7、 根据权利要求1中稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统，有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲 垸、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮等低沸点溶剂。
8、 根据权利要求1中稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统，各组分中磷脂选自天然或合成磷 脂中的一种或一种以上的混合物；甾醇选自胆甾醇及其衍生物，具体包括胆固醇、聚乙二醇 丁二醇胆固醇醚、胆固醇半琥珀酸酯、麦角固醇、羊毛甾醇中的一种或一种以上的混合物； 白蛋白选自动物血清白蛋白、人血清白蛋白以及通过基因工程生产的人血清白蛋白中的一 种。
9、 根据权利要求1中稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统得制备方法，具体包括以下两种方 法第一种制备方法包括以下步骤第一步根据阿霉素药物的特点用旋转蒸发法先将药物包裹在磷脂与甾醇形成的脂质囊 胞体系，加入缓冲盐溶液通过超声波、高压均质或微流化技术使脂质囊胞形成比较均匀的颗粒，粒径大小在100nm-1000nm;第二步在脂质囊胞体系体系中加入白蛋白溶液，通过超声波、高压均质或微流化技术 形成可注射的阿霉素白蛋白脂质载药系统，粒径大小在20nm-1000nm，过滤罐装即得。第三步如果制备冷冻干燥制剂，在体系中加入适量冻干支持剂，冻千即得；第二种制备方法包括以下步骤第一步将阿霉素药物和白蛋白加入溶入有机溶剂的磷脂与甾醇中，减压蒸发除去有机溶剂后加入缓冲盐溶液，通过超声波、高压均质或微流化技术使脂质囊胞形成比较均匀的颗粒，粒径大小在20nm-1000nm，过滤罐装即得；第二步如果制备冷冻干燥制剂，在体系中加入适量冻干支持剂，冻干即得。如果要制备产品，环境、热源、无菌等需要按照大生产的要求完成。
10、 根据权利要求l中稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统的应用，为非肠道给药，其中具有活性的药物，包括多柔比星、表柔比星、阿柔比星、吡柔比星和伊达比星。
全文摘要
一种稳定的阿霉素白蛋白脂质载药系统及其制备方法，通过超声波、高压均质或微流化技术将阿霉素药物结合在白蛋白脂质囊胞上，可以显著提高阿霉素药物脂质囊胞的疗效、稳定性以及提高了药物在脂质囊胞中的包封率。
文档编号A61P35/00GK101361746SQ20081014734
公开日2009年2月11日 申请日期2008年8月11日 优先权日2008年8月11日
发明者张文芳 申请人:张文芳