专利名称：从构树叶中提取一种黄酮类物质在制备抗皮肤真菌感染药物的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，特别一种从构树叶中提取一种黄酮类物质在制备抗 皮肤真菌感染药物的应用。
二背景技术：
构树叶来源于桑科构属植物构树(Broussonetia papyrifera (Ll)Vent .)的叶
片，构树叶又名构叶、谷树叶，性味甘、凉，功效清热凉血，收敛利湿。 通常用于鼻衄、吐血、崩漏、肠炎、痢疾、白浊、湿疹，历代本草及民间用药 均表明其具有治疗皮肤病，如皮癣、湿痒、癣疮等功效，《本草纲目》云"去 风湿肿胀……，癣疮"，皮肤真菌感染是一种常见病症，有人研究发现，构树叶 乙醇提取物具有抗真菌感染的作用，提示构树叶中的生物碱、苷类及苷元、萜 类等极性较强的物质具有抗菌活性，随着菌株的变异和耐药性的增强，加之化 学药物本身的副作用，使化学药物的应用受到了限制，从而使众多学者对中草 药抗真菌进行了大量研究，但至今未见有从构树叶中提取黄酮类物质用于制备 抗皮肤真菌感染药物的报导。构树在我国分布十分广泛，药材来源充足，那么 能否从构树叶中提取用于研制出新的抗皮肤真菌感染的药物呢？如能成功，不 但可以充分利用资源，减少皮肤病患者的痛苦，还可以创造出更大经济效益和 社会效益。
三
发明内容
针对上述情况，本发明之目的就是提供一种从构树叶中提取一种黄酮类物 质在制备抗皮肤真菌感染药物的应用，可有效用于制备抗皮肤真菌感染的药物， 解决抗皮肤真菌感染的药物问题，其解决的技术方案是，取构树叶，粉碎，打
成粗粉，加入10-8倍量构树叶粗粉重量体积的质量浓度为70%的乙醇，加热回 流提取2次，每次两小时，合并两次的提取液，减压浓縮，回收溶剂至无醇味， 所得浓縮液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位，回收 正丁醇，得构树叶黄酮类浸膏，即得抗皮肤真菌感染的黄酮类物质，得率为0.2%， 将其溶于适量水中并加入吐温-80溶解均匀，每200g构树叶粗粉提取的黄酮类物质中加吐温-80 3g溶解，得溶解液，使溶解液每毫升含2g黄酮类物质，作为 药液，药液经10(TC， 45min灭菌，然后4"C保存，备用；所说的重量体积是指 固体物质(构树叶)用g，液体(乙醇)用ml，如构树叶IO倍量重量体积的乙 醇，即lg构树叶加10ml乙醇，以此类同。本发明方法简便，所得黄酮类物质 纯度高达95%，稳定性好，有效用于制备抗皮肤真菌感染的药物，开辟了构树 叶制备药物的新领域，是中医药学上的一大创新，造福于人类。
具体实施例方式
以下结合实际情况对本发明的具体实施方式
作详细说明。 在具体实施中，本发明可取粉碎后的构树叶粗粉200g，加入10倍量构树叶 粗粉重量体积的质量浓度为70M的乙醇2000ml，加热回流提取两小时，备用； 再取构树叶粗粉加8倍量构树叶粗粉重量体积的质量浓度为70%的乙醇1600ml， 加热回流提取两小时，合并两次的提取液，减压浓縮，回收溶剂至无醇味，所 得提取的浓縮液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位， 回收正丁醇，得构树叶黄酮类浸膏，将其溶于适量水中并加入吐温-80 3g，溶解 至100ml，得溶解液，使溶解液成为每毫升含2g黄酮类物质的药液，药液经100 °C， 45min灭菌，4"C保存，备用。
本发明的黄酮类物质有效用于制备抗皮肤真菌感染的药物，并为试验所证 明，有关试验资料如下
经以下对比试验，结果表明，本发明对各种真菌抑制作用比较稳定
1、 药物培养基的制作将本发明药液2ml加入8ml沙氏琼脂培养基(蛋白 胨10g,水1000毫升,琼脂15g,葡萄糖40g)中混匀，使成为终浓度为400 mg/ml的 药物培养基,分装大试管并作等倍稀释，即第一管至第八管依次为400mg/ml,200 mg/ml， 100mg/ml, 50mg/ml, 25 mg/ml，12.5mg/ml, 6.25 mg/ml, 3.125 mg/ml的浓度。
2、 对照药液的制备取硝酸咪康唑软膏(每克含硝酸咪康唑20毫克)10g， 溶于适量水中并加入数滴吐温-80增溶，最后定容至100ml，使硝酸咪康唑浓度 为0.2g/ml。 100°C， 45min灭菌后低温保存。3、 对照培养基的制作硝酸咪康唑培养基浓度为含硝酸咪康唑20mg/ml; 另设不含任何抗菌成分的空白对照培养基。
4、 供试菌种红色毛癣菌(Trichophyton rubmm)、克柔氏念珠菌(Candidiasis kmsei)、紧密着色霉菌(Fonsecaea compactum)、 石膏样毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes)、 皮炎着色霉菌(Exophiala dermatitides)、 申克氏孢子丝菌
(Sporothrix schenckii)、烟熏色曲霉菌(Aspergillus flimigatus)、白色念珠菌 (Candidiasis albicans)、 新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、 热带念珠菌 (Candidiasis tropicalis)。
取各培养基试管，分为本发明黄酮类物质组、对照组、空白组，放入高压 灭菌锅中进行灭菌，灭菌后必须在37t:下恒温培养24h，确定无菌生长，方可 使用，用斜面接种法接种相应菌种，置2Sr培养箱中培养，5天后观察，以肉 眼未见菌落生长的最低浓度为该部位的最小抑菌浓度(MIC)，通过观察，构树 叶不同溶剂提取物黄酮类物质的抑菌效果如下
构树叶黄酮浸膏的最低抑菌浓度(mg/ml)
白色念烟熏色 珠菌 曲霉菌红色毛 癣菌皮炎着 色霉菌石膏样 毛癣菌新型隐 球菌申克氏 抱子丝 菌热带念 珠菌克柔氏 念珠菌紧密着 色霉菌
黄酮组— —50■400—200400400200
空白组
对照组20 202020202020202020
"一"表示不能完全抑制真菌生长
构树叶黄酮浸膏对致病真菌的抑制作用
白色念 烟熏色 珠菌 曲霉菌红色毛 癣菌皮炎着 色霉菌石膏样 毛癣菌新型隐 球菌申克氏 孢子丝 菌热带念 珠菌克柔氏 念珠菌紧密着 色霉菌
黄酮组+++ ++一一—++————
空白组+++ +++十+++++++十+++十十十+十十++++++
对照组
+++表示菌落生长旺盛；++表示菌落明显，但不如空白组旺盛；+表示有零 星或少量菌落存在； 一表示真菌被抑制。并经多次试验(20次以上)，并对不同 皮肤真菌感染试验，均取得了相同或类似的结果，表明本发明抗皮肤真菌感染 性能稳定、可靠，有临床意义。
5综上所述，构树叶黄酮类提取物对多种皮肤病致病真菌都有抑制作用。通
过以上试验，经计算黄酮类提取物对10种致病真菌MIC值的标准差为173.85， 表明构树叶中黄酮类化合物不但抗菌谱较广，而且对各种真菌抑制作用比较稳 定，故其抑制皮肤病致病真菌效果较为理想，由于其来源于天然植物成分，毒 副作用相对较小，具有开发成为广谱抗菌药物的潜力。
权利要求
1、一种从构树叶中提取一种黄酮类物质，其特征在于，所说的该黄酮类物质是由构树叶，粉碎，打成粗粉，加入10-8倍量构树叶粗粉重量体积的质量浓度为70％的乙醇，加热回流提取2次，每次两小时，合并两次的提取液，减压浓缩，回收溶剂至无醇味，所得浓缩液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位，回收正丁醇，得构树叶黄酮类浸膏，即得抗皮肤真菌感染的黄酮类物质，得率为0.2％，将其溶于适量水中并加入吐温-80溶解均匀，每200g构树叶粗粉提取的黄酮类物质中加吐温-803g溶解，得溶解液，溶解液每毫升含2g黄酮类物质。
2、 根据权利要求1所述的从构树叶中提取一种黄酮类物质，其特征在于， 所说的该黄酮类物质是由构树叶粗粉200g，加入IO倍量构树叶粗粉重量体积的 质量浓度为7(P/。的乙醇2000ml，加热回流提取两小时，备用；再取构树叶粗粉 加8倍量构树叶粗粉重量体积的质量浓度为70%的乙醇1600ml，加热回流提取 两小时，合并两次的提取液，减压浓縮，回收溶剂至无醇味，所得提取的浓縮 液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位，回收正丁醇， 得构树叶黄酮类浸膏，将其溶于适量水中并加入吐温-80 3g，溶解至100ml，得 溶解液，溶解液每毫升含2g黄酮类物质。
3、 权利要求1或2所述的从构树叶中提取一种黄酮类物质，在于制备抗皮 肤真菌感染药物的应用。
全文摘要
本发明涉及从构树叶中提取一种黄酮类物质在制备抗皮肤真菌感染药物的应用，可有效用于制备抗皮肤真菌感染的药物，解决抗皮肤真菌感染的药物问题，其解决的技术方案是，取构树叶，粉碎，打成粗粉，加入乙醇，加热回流提取提取液，减压浓缩，回收溶剂至无醇味，所得浓缩液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位，回收正丁醇，得构树叶黄酮类浸膏，即得抗皮肤真菌感染的黄酮类物质，得率为0.2％，将其溶于适量水中并加入吐温-80溶解均匀，得溶解液，溶解液每毫升含2g黄酮类物质，本发明方法简便，所得黄酮类物质纯度高，稳定性好，有效用于制备抗皮肤真菌感染的药物，是中医药学上的一大创新，造福于人类。
文档编号A61K36/185GK101439093SQ20081023159
公开日2009年5月27日 申请日期2008年12月31日 优先权日2008年12月31日
发明者璨 崔, 陈随清, 魏雅磊 申请人:河南中医学院