专利名称：：元胡止痛胶囊的质量控制方法
技术领域：
：本发明涉及一种元胡止痛胶囊的质量控制方法，属于药物制剂的质量控制
技术领域：
。
背景技术：
：元胡止痛胶囊收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第8册，由元胡、白芷两味药组成。方中元胡为君药，元胡又名延胡索，为罂栗科紫堇属植物元胡的干燥块茎，其辛温通散、入肝、脾、心经、又入血分，是行气、活血、镇静、止痛、解痉之良药，本药再加醋制，能增强止痛功效。近代研究证明，元胡中可分离出15种生物碱，其中延胡索甲素、乙素、丑素、癸素均有镇痛作用。药理实验表明，延胡索乙素的镇痛作用最强，并且延胡索乙素在主要成分中的含量最高。白芷为伞形科当归属植物白芷或杭白芷的干燥根，为一常用中药。白芷具有除风散湿、通窍止痛、消肿排脓等功效，用于感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、牙痛、疮痈肿痛等症。白芷中主要含有香豆素类和挥发油两类有效成分，现代药理实验表明，白芷中所含的呋喃香豆素具有平喘、降压、抗菌、解痉、活化交感系激素等多种药理作用。白芷中总香豆素类为其镇痛的主要成分，其中又以欧前胡素和异欧前胡素为最重要的两种活性成分，欧前胡素和异欧前胡素的止痛效果已被充分肯定。延胡索、白芷均属辛温之品，有理气止痛之功效，两药配伍，更能增强行气止痛作用。用此两种药材制备的元胡止痛胶囊具有理气、活血、止痛之功效，对于气滞血淤的胃痛、肋痛、头痛及月经痛等有较好的疗效，为理想的中药镇痛剂。元胡止痛胶囊是以醋制元胡445g、白芷223g为原料药材制得的半浸膏胶囊，其制备方法为取白芷166g，粉碎成细粉；剩余的白芷与元胡粉碎成粗粉，用60%乙醇作溶剂，将粗粉浸渍24小时后进行渗漉，收集渗漉液为生药的8倍量，回收乙醇并浓縮成稠膏状，加入上述白芷细粉，混匀，干燥，粉碎，过筛，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。在原质量控制方法中，元胡止痛胶囊的质量标准只有胶囊常规检査项，仅针对药材做定性鉴别，无含量测定指标，胶囊中有效成份的含量不能得到保证，为了保证药物应有的临床疗效，有必要对元胡止痛胶囊中的有效成份进行定量检测。
发明内容本发明的主要目的是提供一种元胡止痛胶囊的质量控制方法，在原有胶囊药材的性状鉴别基础上，增加含量测定方法及相应的含量指标，使元胡止痛胶囊的质量控制更为准确有效，从而更有利于确保其临床疗效的发挥。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是元胡止痛胶囊的质量控制方法，在传统质量控制方法中的检査项目及对元胡、白芷定性鉴别基础上，增加采用薄层色谱法对延胡索乙素(C21H2304N)进行含量测定及相应的含量指标，相关条件及操作方法如下取元胡止痛胶囊样品20粒的内容物，研细，精密称定2g(M样)，置于索氏提取器中，加甲醇90-110mL，加热回流至提取液近无色，提取液蒸干，残渣加10%醋酸溶液8-12mL溶解，滤过，残渣及滤器用10。/。醋酸溶液10mL洗涤，洗液并入滤液中；滤液用乙醚萃取2次，萃取时乙醚与醋酸的体积比为2:23，合并乙醚液；挥干乙醚，残渣用10。/。醋酸溶液5mL溶解，溶液加浓氨溶液调PH值至89，用乙醚萃取4次，萃取时乙醚用量分别为25mL、25mL、20mL、20mL;合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇lmL使溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取105r干燥至恒重的延胡索乙素对照品，加甲醇制成每lmL含O.15g延胡索乙素的溶液25mL，作为对照品溶液(M对)。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液4yL与8yL，对照品溶液2yL与4yL，分别交叉点于同一硅胶G板上，以正已烷-醋酸乙酯-氨水(6:4:0.2，体积比)为展开剂，展开，取出，凉干，碘熏10分钟，取出，稍挥去碘，在10(TC烘15分钟，取出，照色谱法(中国药典2005—部附录，薄层扫描法)进行扫描，波长入3=345皿，入^307nm，测量供试品吸收度积分值(A样)与对照品吸收度(A对)，按公式[A样XM对+25X(4+2)]+[A对XM样+5X(8+4)]计算，即得元胡止痛胶囊内容物中延胡索乙素的含量。元胡止痛胶囊内容物中含延胡索按延胡索乙素计算，每粒不得少于20yg。元胡止痛胶囊由元胡和白芷两味药组成，方中元胡为君药，元胡中含有的生物碱延胡索甲素、乙素、丑素、癸素均有镇痛作用，其中延胡索乙素的镇痛作用最强，并且在主要成分中的含量最高。因此，通过逐一分析比较及探索性的试验研究，本发明拟对元胡浸膏中的主要有效成分延胡索乙素进行含量测定。首先选用高效液相色谱法对元胡止痛胶囊内容物中延胡索乙素的含量进行检测。高效液相色谱法的实验条件为(1)色谱条件C18柱；(2)流动相甲醇-水-10%乙酸(68:32:2，体积比)用15。/。氨水调节流动相的pH值至4.8;(3)对照品精密称取延胡索对照品2mg置2ml量瓶中，加乙醇溶解定溶作为对照品；(4)供试品液取元胡止痛胶囊样品10粒，精密称取内容物lg，加甲醇适量，超声30分钟后，定容至50mL作为供试品；(5)检测波4长285nm。将供试品注入液相色谱仪(Waters-600，美国沃特斯公司)中进行分析，实验结果表明，在上述试验条件下，延胡索乙素色谱峰与其它色谱峰不能分离。在上述流动相不能成功分离的情况下，发明人又对流动相的极性、酸度进行了改变，流动相的改变情况见表l。表l.高效液相色谱流动相的考察次数1234甲醇-水-10%乙酸60:40:255:45:250:50:250:50:2用15。/。氨水调节PHPH=4.8PH=4.8PH=5.6PH=3.0^在上述流动相条件下，将供试品注入高效液相色谱仪进行分析，试验结果表明供试品中延胡索乙素色谱峰依然与其它峰的分离效果不好。在高效液相色谱法无法有效使延胡索乙素分离的情况下，发明人通过大量文献分析及试验研究，最终确定了以双波长薄层扫描法对元胡止痛胶囊中主要有效成分延胡索乙素进行含量测定。为了尽可能准确地测定出延胡索乙素在元胡止痛胶囊中的含量，从而更精确的控制药物质量，保证药物的临床疗效，发明人对药物的前处理方法及色谱条件等进行了大量的试验研究及对比分析，现将一些主要的研究情况略举如下1、所用的仪器及试剂CS-9000双波长薄层扫描仪(日本岛津公司)，XY-1自动点样台硅胶G薄层预制板(10x20cm)。对照品延胡索乙素，由中国药品生物品检定所提供。元胡止痛胶囊样品由四川美大康药业股份有限公司提供，批号为000201。水为重蒸馏水，试剂均为分析纯。2、供试品的制备取元胡止痛胶囊样品20粒的内容物，研细，精密称定2g(M样)，置于索氏提取器中，加甲醇100mL，加热回流至提取液近无色，提取液蒸干，残渣加10。/。醋酸溶液10mL溶解，滤过，残渣及滤器用10。/。醋酸溶液10mL洗涤，洗液并入滤液中；滤液用乙醚萃取2次，萃取时乙醚与醋酸的体积比为2:23，合并乙醚液；挥干乙醚，残渣用10。/。醋酸溶液5mL溶解，溶液加浓氨溶液调pH值至89，用乙醚萃取4次，乙醚用量分别为25mL、25mL、20mL、20mL;合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇lmL使溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。在制备供试品溶液的过程中，元胡止痛胶囊内容物置于索氏提取器中，用甲醇提取，提5取液液蒸干后残渣加10%醋酸溶解，内容物中所含的延胡索乙素等生物碱及水溶性杂质均溶解于醋酸中，该醋酸溶液用乙醚萃取，由于生物碱在乙醚中的溶解度大于在醋酸中的溶解度，因此，延胡索乙素等生物碱转移至乙醚中。挥干乙醚，残渣用醋酸溶解，并用浓氨溶液调节溶液PH值至碱性，再用乙醚萃取，延胡索乙素在碱性条件下的乙醚中的溶解度增加，因此，延胡索乙素转移至乙醚溶液中。挥干乙醚，残渣加甲醇溶解即可制得供试品溶液。3、对照品的制备取105。C干燥至恒重的延胡索乙素对照品，加甲醇制成每lmL含O.15mg的溶液，作为对照品溶液。4、测定条件的选择(1)薄层层析条件的选择在确定展开剂时，发明人分别以正已烷-氯仿-甲醇(7.5:4:1，体积比)(药典元胡止痛片鉴别(1)项下薄层色谱鉴别的展开剂条件)、正已烷-醋酸乙酯-氨水(6:4:0.2，体积比)为展开剂，进行试验研究，结果后者分离度较好、斑点呈圆点状、RF值适中、阴性对照在同一位置无干扰，而前者阴性对照在同一位置有干扰，见表2。因而选用正已烷-醋酸乙酯-氨水(6:4:0.2，体积比)为展开剂。表2.展开剂的考察展开系统薄层板展开情况正已烷-氯仿-甲醇分离度较好，斑点呈圆点状，RF值适中，但阴性对7.5:4:1照在同一位置有干扰。正已烷-醋乙酯-氨水分离度较好，斑点呈圆点状，RF值适中，阴性对照6:4:0.2在同一位置无干扰。(2)检测波长的选取照薄层色谱法(中国药典2000年一部附录37页)试验，吸取供试品溶液4uL与8uL，对照品溶液2uL与4uL，分别点于同一硅胶G板上，以正已烷-醋酸乙酯-氨水(6:4:0.2，体积比)为展开剂，展开，取出，凉干，碘熏10分钟，取出稍挥去碘，在10(TC烘15分钟，取出，在200500nm波长范围内扫描，结果延胡索乙素对照品与供试品在305310nm范围内有最小吸收，在342348nm范围内有最大吸收。故测定波长入s=345nm，参比波长入^307nm;扫描方式反射式锯齿扫描线性参数SX二3;狭缝0.7X0.9，灵敏度XI。5、线性关系的考察精密称取延胡索乙素对照品l.59mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，分别吸6取此溶液l.O、2.0、3.0、4.0、6.0yL点于硅胶G薄层板上，展开，晾干，碘熏10分钟，取出稍挥去碘，在10(TC烘15分钟，取出，扫描测定，测定波长入3=345皿，参比波长入1=307皿;扫描方式反射式锯齿扫描，结果见表3。表3.线性关系考察<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>方程为Y二48871.6X-1959.5(r=0.9991)，上述结果表明，延胡索乙素在l-6yL范围内有良好的线性关系。由于标准曲线未过原点，故采用外标两点法计算延胡索乙素的含量。6、稳定性考察将延胡索乙素对照品与供试品，点于硅胶G薄层板上，按上述方法展开，显色，取出，立即冷吹风吹干，用玻璃板盖住，每隔30分钟扫描一次，共测定5次，对照品与供试品峰面积结果见表4。表4.对照品与供试品峰面积测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>以上结果表明，斑点显色放置10分钟后，在2小时后内稳定。7、精密度考察(1)仪器精密度试验将延胡索乙素供试品，点于硅胶G薄层板上，按上述方法展开，显色，取出，对同一斑点连续扫描5次，供试品峰面积结果见表5。表5.仪器精密度试验结果峰面积值RSD(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>(2)板上精密度试验在同一板上点相同浓度的延胡索乙素(0.115mg/ml)对照品5点，展开，显色，扫描测定，结果见表6。表6.板上精密度试验结果扫描次数峰面积RSD(%)111271.18211012.223.4311695.44411813.97由表5、表6可见，仪器精密度RSD为O.42%;板上精密度RSD为O.97%，表明精密度良好。8、加样回收试验取已知含量的样品(批号为000201，含量75.6ul/g)5份，每份中分别加入延胡索乙素对照品溶液(0.148mg/ml)l.Oml，按供试品的处理方法操作，吸取此液、对照品液，点样，展开，显色后进行扫描测定，按下式计算回收率。回收率(％)=((测出延胡索乙素的量-样品中延胡索乙素的量)+加入延胡索乙素的量}X100%。加样回收试验结果见表7:表7.加样回收试验结果序号称样量样品中延胡索加入延胡索乙测出延胡索乙回收率平均回收RSD(%)乙素量(ug)素量(ug)素量(ug)(%)率(％)15.1742391.2148525.697.425.1983393.0148524.897.035.3214395.5148519.795.696.31.0345.1645390.4148511.395.055.0858384.5148514.696.6^经过三年的生产和留样稳定性试验表明该制剂质量稳定，留样产品的延胡索乙素的含量均一稳定，证明经此发明质量控制方法可行，能有效保证药物质量的稳定。与现有技术相比，本发明的有益效果是本发明在元胡止痛胶囊原质量标准定性鉴别的基础上，增加了延胡索乙素的含量测定方法及相应的含量指标，使元胡止痛胶囊的质量控制更为准确有效，从而更有利于确保其临床疗效的发挥；并且该含量测定方法操作简单，结果8准确，精密度、稳定性、重现性等良好。具体实施例方式下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。实施例l本实施例为采用本发明方法对6批元胡止痛胶囊(批号020301、020302、020304、020305、020306，均由四川美大康药业股份有限公司提供)进行延胡索乙素含量测定，具体方法如下(1)取元胡止痛胶囊10粒的内容物，研细，置索氏提取器中，加甲醇100mL，加热回流至提取液无色，提取液蒸干，残渣加10%醋酸溶液分两次溶解，滤过，滤液加浓氨溶液调pH值至89，用乙醚提取四次(25、25、20、20mL)，合并乙醚液，蒸干，残渣加lmL甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材lg，同上制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各23yL，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-氨水(6:4:0.2，体积比)为展开剂展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，挥尽薄层板上吸附的碘后，置紫外灯(365nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点。(2)取元胡止痛胶囊10粒的内容物，研碎，加石油醚(609CTC)20mL超声处理20分钟，滤过，滤液挥石油醚至约lmL，作为供试品溶液。另取白芷对照药材O.lg，加石油醚(60-90°C)lmL，浸渍30分钟，时时振摇，静置，上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5yL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-9CTC)-乙醚(3:2，体积比)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm及254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应原位置上，显相同颜色的荧光斑点。(3)取元胡止痛胶囊样品20粒的内容物，研细，精密称定2g(M样)，置于索氏提取器中，加甲醇100mL，加热回流至提取液近无色，提取液蒸干，残渣加10。/。醋酸溶液10mL溶解，滤过，残渣及滤器用10。/。醋酸溶液10mL洗涤，洗液并入滤液中；滤液用乙醚萃取2次，萃取时乙醚与醋酸的体积比为2:23，合并乙醚液；挥干乙醚，残渣用10。/。醋酸溶液5mL溶解，溶液加浓氨溶液调pH值至89，用乙醚萃取4次，乙醚用量分别为25mL、25mL、20mL、20mL;合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇lmL使溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，9作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每lml含O.15mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液4uL与8uL，对照品溶液2uL与4uL，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-氨水(6:4:0.2，体积比)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏约10分钟，取出，稍挥去碘，在10(TC烘15分钟，取出，放冷，照薄层色谱法(中国药典一部附录VIB薄层扫描法)进行扫描，波长入s=345nm，入r=307nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得元胡止痛胶囊内容物中延胡索乙素的含量，结果见表8。本品每粒含延胡索乙素(C21H2504N)计，不得少于20yg。表8.元胡止痛胶囊内容物中延胡索乙素的含量测定结果批号020301020302020303020304020305020306延胡索乙素的量(yg/粒)23.624.525.291.288.687.4020304、020305、020306三批测定结果，含延胡索乙素的量为87.491.2yg/粒，020301、020302、020304，结果为23.625.2yg/粒。又用上述含量检测方法对四批不同产地的药材进行含量测定结果为0.008%、0.009%、0.010%、0.012%，差异很大。以延胡索乙素不低于O.008%为限，故本品理论值为35.6yg/粒，以本工艺延胡索乙素的转移率为70。/。计算为25yg/粒，由于目前测定批次有限，限度暂定为20-200yg/粒。权利要求1.元胡止痛胶囊的质量控制方法，包括对元胡、白芷定性鉴别，其特征在于还采用薄层色谱法对延胡索乙素进行含量测定，相关条件及操作方法如下取元胡止痛胶囊样品20粒的内容物，研细，精密称定2g，置于索氏提取器中，加甲醇90-110mL，加热回流至提取液近无色，提取液蒸干，残渣加10％醋酸溶液8-12mL溶解，滤过，残渣及滤器用10％醋酸溶液10mL洗涤，洗液并入滤液中；滤液用乙醚萃取2次，萃取时乙醚与醋酸的体积比为2∶2～3，合并乙醚液；挥干乙醚，残渣用10％醋酸溶液5mL溶解，溶液加浓氨溶液调PH值至8～9，用乙醚萃取4次，乙醚用量分别为25mL、25mL、20mL、20mL；合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取105℃干燥至恒重的延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1mL含0.15g延胡索乙素的溶液25mL，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液4μL与8μL，对照品溶液2μL与4μL，分别交叉点于同一硅胶G板上，以体积比为6∶4∶0.2的正己烷-醋酸乙酯-氨水为展开剂，展开，取出，凉干，碘熏10分钟，取出，挥去碘，在100℃烘15分钟，取出，照色谱法进行扫描，波长λs＝345nm，λR＝307nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度，计算，即得元胡止痛胶囊内容物中延胡索乙素的含量。2.根据权利要求l所述的元胡止痛胶囊的质量控制方法，其特征在于:所述元胡止痛胶囊内容物中延胡索乙素的含量为20-200yg/粒。全文摘要本发明公开了一种元胡止痛胶囊的质量控制方法，属于药物制剂的质量控制
技术领域：
。本发明的元胡止痛胶囊的质量控制方法在现有胶囊药材的性状鉴别基础上，采用薄层色谱法对延胡索乙素进行含量测定，精密吸取供试品、对照品溶液，点于同一硅胶G板上，以正己烷-醋酸乙酯-氨水(6∶4∶0.2，体积比)为展开剂，展开，显色，取出，照色谱法进行扫描，波长λs＝345nm，λR＝307nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度，计算，即得元胡止痛胶囊内容物中延胡索乙素的含量。本发明的质量控制方法操作简单，结果准确，精密度、稳定性、重现性良好，使元胡止痛胶囊的质量控制更为准确有效，从而更有利于确保其临床疗效的发挥。文档编号A61K36/66GK101491592SQ20081030638公开日2009年7月29日申请日期2008年12月19日优先权日2008年12月19日发明者彦李,钟昌珍申请人:四川美大康药业股份有限公司