固体甜菜色素组合物和方法

专利名称：：固体甜菜色素组合物和方法
技术领域：
：本发明的
技术领域：
为营养组合物其方法，尤其是其涉及具有基本上完全溶解性的高浓缩的自由流动的干甜菜色素(betalain)组合物。
背景技术：
：长期以来红甜菜(redbeets)为多种营养素(特别是糖和甜菜碱(betaine))的常见的来源。其它获自红甜菜的有用的化合物包括甜菜色素，该甜菜色素代表红色至紫色的(3-花青苷(例如，苋色素、异苋色素等)和通常黄色的甜菜黄素(例如，仙人掌黄素)的化学不同的组，其可用作药物和食物着色剂和作为抗氧化剂。已知制备甜菜色素制剂的多种方式，且通常从粉碎的甜菜根或根皮(rootpeelings)开始。其它已知的材料来源包括根细碎悬浮液培养物、仙人掌果和选择的高等真菌。当从甜菜汁或根浸渍物(rootmacerates)制备甜菜色素时，制剂通常具有的甜菜色素含量为等于或小于1wt。/。且通常包含大量的糖和其它成分。例如，WO98/26792描述了多种从根浆制备甜菜色素提取物的方法，其进一步使用交联的葡聚糖色谱法加工。或者如US2003/0036565所述冻干的甜菜可用作原料，然后将其研磨、溶剂提取和进行交联的葡聚糖色谱法以得到不同的甜菜色素级分。通常已知的使用喷雾干燥甜菜汁浓缩物的方法将产生包含约0.4wt。/。甜菜色素的粉末。因此，尽管大多数这些方法概念上是简单的，但甜菜色素的浓度通常低于1wt%。而且，存在大量非-甜菜色素材料且需要进一步纯化或其它加工以去除。在其它已知方法中(例如，美国专利4,238,518或英国专利1559275)，使用离子交换色谱法制备稳定的倍他尼定提取物，其中在其它化合物中，甜菜黄素被去除以产生浓缩的色素制剂，然后将该制剂脱水，再溶解，并与稳定剂结合以形成热稳定的色素粉末。该方法有利地制备相对浓的干燥形式的甜菜色素，然而，该方法去除了明显部分的甜菜黄素和某些P-花青苷。类似的，Garin等人在美国专利4,409,254中描述了一种方法，其中甜菜根提取物使用非离子树脂在非常低的pH进行色镨法以得到浓缩的洗出液，该洗出液浓缩为甜菜香和其它吸附的固体。这些浓缩的液体可包含4.5wt%甜菜苷且可被干燥至甜菜苷含量为约25wt%。不幸的是，这些制剂通常是吸湿的，快速凝块，且易于相对快的变质。为减少甜菜色素制剂的糖含量，vonElbe等人在美国专利4,027,042描述了一种方法，其中甜菜汁或甜菜浆进行酵母发酵以减少蔗糖浓度。尽管该方法产生浓缩的色素制剂并成功去除蔗糖，但生成了其它发酵副产物，其为未鉴别的且占最终产物的25wt%(或更多)。不幸的是，目前已知的甜菜色素制剂的混合和储存受非-甜菜色素成分的不利影响。例如，从冻干的甜菜汁制备的甜菜色素通常是凝块的和高度吸湿的。因此，这些制剂非常难以称出和等分(aliquot)，尤其是当分配相对少量时。更差的是，大多数目前已知的干甜菜色素制剂被限制为甜菜色素浓度约1wt%(总甜菜色素)，且几乎所有通过提取或其它方式增加甜菜色素浓度的尝试也导致增加吸湿性和凝块。在其它已知的制剂中，且特别是在那些具有相对高甜菜色素含量的制剂中，在没有稳定剂的情况下非-甜菜色素成分通常将导致稳定性的明显损失。而且，经常不考虑甜菜色素含量，非-甜菜色素成分通常与甜菜色素完全溶解于水性介质中的抗性相关。因此，尽管固体甜菜色素制剂的许多组合物和方法在现有技术中是已知的，但所有或几乎所有都有缺点。因此，仍然需要提供用于固体甜菜色素制剂的改善的组合物和方法。
发明内容本发明涉及固体、自由流动且容易溶解的甜菜色素制剂，其中甜菜色素浓度相对较高。最优选地，该总甜菜色素浓度为至少2wt%,更优选地，至少5wt%,还更优选至少10wt%，且最优选至少20wt%，且甜菜色素与糖的比例为至少0.3，更优选至少1.0,且最优选至少2.0。本发明主题的甜菜色素制剂将以高浓度(通常至少90%-98%,50-100mg/ml)快速且基本上完全溶于水。在本发明主题的优选方面中，在甜菜色素制剂中化学上不同(chemicallydistinct)的甜菜色素具有近天然的组成(nearnaturalcomposition)和/或具有的浓度为至少10-20wt%。在其它优选方面，甜菜色素与糖的比例为0.5至4.0,且最优选至少1.0。尽管不限于本发明主题，本文预期的制剂将具有含量小于15wt。/。的残余水。特别预期的固体组合物为自由流动的，其特征为将所述组合物粉碎为合适的尺寸，以使至少90%的组合物穿过30目筛，且更典型甚至穿过60目筛。出人意料地，即使当组合物储存在环境条件，预期的组合物的流动性也长期保持。因此，在某些方面自由流动的的特征为，在将组合物粉碎成使至少90%的组合物穿过60目筛的合适尺寸后，能够使得在75。F和50%相对湿度储存至少2周后，至少50%、更典型至少80%的组合物流过60目筛。因此，目前可配制或混合营养补充剂，其在小于1000mg的日剂量中提供20至500mg的总甜菜色素。从不同的观点看，预期固体颗粒组合物包含至少5.0wt。/。的量的甜菜色素近天然的提取物，和营养可接受的载体，其中载体的存在量为等于或小于组合物的98.0wt%,且其中至少95wt。/。的组合物以至少50mg/ml的浓度在小于2分钟内溶解于水中。在这些组合物中，甜菜色素的浓度优选为至少10.0至20.0wt%,该营养可接受的载体为多糖，且该组合物为自由流动的。或者该载体的存在量为10wt。/。至40wt%，且甜菜色素近天然的提取物的存在量为至少8.0wt%。进一步通常优选预期的组合物中的颗粒尺寸适于使至少90%的组合物穿过60目筛，且配制该组合物以使在75。F和50°/。相对湿度储存至少2周后至少50%的组合物流过60目筛。因此，预期的组合物可配制为营养补充剂，该营养补充剂被配制为能在小于1000mg的日剂量中提供20至500mg的总甜菜色素。在其它考虑的方面中，制备营养补充剂的方法包括将预期的组合物与营养可接受的载体混合以形成补充剂的步骤，和提供以下信息的步骤当给予受试者时，该甜菜色素在人受试者中有效减少血清甘油三酯浓度，抑制NF-kB，和/或在人受试者中刺激SIRT。在其它优选方面，该甜菜色素在补充6剂中存在的浓度能有效减少LDL胆固醇的氧化，增加HDL胆固醇，和/或减少LDL胆固醇，每推荐的日摄取量的补充剂中的甜菜色素的最典型的量为5mg至200mg。本发明的不同目的、特征、方面和优点将从以下发明优选实施方案的详细描述变得更明显。附图筒述图1为描述用本发明主题的一个示例组合物治疗的人志愿者的所选血清参数的图。图2A为描述使用本发明主题的示例组合物的体外NF-kB的浓度-依赖性抑制的图。图2B为描述使用本发明主题的示例组合物的体外SIRT的浓度-依赖性刺激的图。图2C为描述用本发明主题的两种示例组合物处理的人血清的ORAC值的浓度-依赖性变化的图。发明详述本发明者发现了多种干燥的(即，非-液体)甜菜色素组合物可从甜菜汁或其它液体状的含甜菜色素的介质通过首先在某种疏水改性树脂上浓缩该甜菜色素而制备。出人意料地，该改性树脂似乎去除大部分(significantfraction)的非-甜菜色素成分，该非-甜菜色素成分可导致凝块，不稳定性，和/或对完全溶于水性溶剂的抗性。如此得到的组合物显示显著高浓度的(例如,大于20wt。/。)甜菜色素，且该甜菜色素的化学稳定性显著增加，同时可形成自由流动的粉末，该粉末长时间保持流动性，即使当储存在环境条件时。而且，即使以高浓度，根据本发明主题的甜菜色素组合物将快速且基本上完全溶解于水性溶剂。应尤其理解，就本发明者所知，在这以前已知的甜菜色素组合物没有得到上述优点，因为这些组合物通常具有较低的甜菜色素含量(通常低于1wt。/。)和显著的化学不稳定性，或当浓度相对高时，不能被粉末化和/或保持为具有自由流动特征的干粉末。几乎不变地，已知具有相对高甜菜色素含量的甜菜色素组合物将快速凝块且不能快速溶解，因此阻止了干甜菜色素组合物以少量和可控量进行可测的分布。在本发明主题的一个方面中，发明者发现了可制备自由流动的固体甜菜色素组合物，其包含多种化学上不同的(chemicallydistinct)甜菜色素，其总甜菜色素浓度为至少2.0wt。/。且甜菜色素与糖的比例为至少0.3。这些组合物为固体组合物，当溶于水时至少90wt°/。(更典型至少95%,且最典型至少98%)溶解，且浓度至少为50-100mg/ml。本文^f吏用的术语"自由流动的"是指在环境温度和湿度(75。F和50%相对湿度)储存24小时后，大量分离的和单独的颗粒中的至少90。/。将在散粒物容器(bulkcontainer)中保持分离和单独状态。因此，自由流动的小颗粒粉末可从容器以连续的流倒出，其中在相同的时间间隔内以基本上相同的质量从容器离开。相反，非自由流动的材料将会凝块在一起以形成尺寸和重量不定的聚集物，因此不能以连续的流从容器倒出，不能在相同的时间间隔内以基本上相同的质量从容器离开。在根据本发明主题更典型的实例中，该干甜菜色素组合物的总甜菜色素浓度为至少4.0wt%,更典型至少10.0wt%,还更典型至少15.0wt%,且最典型至少20.0wt%。应注意根据本发明主题的甜菜色素制剂的化学组合物为包含多种化学上不同的甜菜色素的复合组合物。因此，该复合制剂将包含甜菜黄素和P-花青苷。最优选地，本文提供的甜菜色素制剂具有近天然的组成(即，相对于天然组成，初始存在于红甜菜中的单一(3-花青苷或(3-甜菜黄素被浓缩或减少不多于30%[且更典型不多于15-20%])。甜菜色素和复合组合物的分析可按照Corke等人(JChromatogrSci.2005Oct;43(9):454-60)或Pourrat等人(JournalofFoodScience53(1)，294—295)的描述而进行。因此，典型制剂将包含至少10,更典型至少20,且最典型至少25个化学上不同的甜菜色素。根据使用的具体源材料和溶剂，应注意在预期的组合物中甜菜色素与糖的比例至少为0.3，更典型至少0.5，还更典型至少1.0,且最典型至少2.0。从不同的观点看，最优选的制剂将具有的甜菜色素与糖的比例为1.0至5.0，且还更典型2.5至4.5。关于预期的组合物中的剩余糖，应认识到化学性质会改变且这取决于原料和后处理(work-up)。然而，最典型的剩余可包括单糖、寡糖、和/或多糖、糖醇和果胶。因此，应理解当要减少寡糖、和/或多糖浓度时，可使用酶或发酵过程以获得这种减少。或者或此外，残余单糖可使用各种现有技术已知的方式去除，包括超滤、分子筛、和/或酶转化。关于预期的组合物的残余水含量，通常优选该水含量足够低以使产物以粉末或粉碎的形式自由流动。因此，认为多种干燥方法是合适的且包括风干、冻干、转鼓式干燥等。通常，该残余水含量等于或小于20wt%，更典型等于或小于15wt%，且最典型等于或小于10wt%。而且，应注意^f艮据干燥的具体方式，预期的组合物可被粉碎或研磨形成粉末化的产物，其易于混合(compounded),混合(mixed)或分配。该粉碎的形式将优选具有相似大小的颗粒，且尤其优选至少60%，且更典型至少80%的颗粒在最长的方向上测量的尺寸变化小于20%。例如，优选的组合物可被加工以使至少50%(且更优选60%，70%,80%，90%,甚至更多)的组合物流过18目，更优选30目，且最优选60目筛(US筛目，该数字表示筛号)。因此，特别预期的加工包括切削、研磨和碾磨。另一方面，且尤其当干燥方法包括喷雾干燥时，预期这样制造的产品将具有的平均粒度为20-800微米，更典型50-500微米，且最典型100-300微米。应尤其理解根据本发明主题的组合物和方法出人意料地可制得甜菜色素组合物，其具有且长时间保持自由流动的特征，即使当这些复合组合物储存在环境条件。尽管不希望与任何理论或假说相结合，本发明者预期在甜菜色素提取物的制备中使用特殊疏水改性的色谱支持体可去除大多数、或甚至所有导致以下不利作用的化合物凝块、高残余水含量、吸湿性、缺乏化学稳定性和其它与已知复合甜菜色素组合物、尤其是浓的(例如，至少2wt%,更典型至少10wt。/。)甜菜色素组合物相关的不利作用。在多种不产生理想产物参数的疏水改性中，某些疏水改性出人意料地产生理想的产物参数。这些改性包括其中改性基团具有通常为平面构型的多个环且其中至少一个环具有芳香性(最优选苯醌基或苯醌结构(benzoquinoidstructure),其中一个氧原子被基团替换，环的tt电子可移位至该基团)的那些改性。显著地，似乎固定在树脂(例如，有机聚合物或二氧化硅)上的密切相关的其它疏水结构不能提供具有理想参数的产物。再次，尽管不限于本发明主题，本发明者预期甜菜色素将通过"7t键堆积(pi-stacking)"与改性树脂联结，同时使不希望的化合物穿过。在本发明主题的其它方面，该疏水改性基(hydrophicmodification)与树脂(二氧化爿逸或苯乙烯，需要时恰当的活化[例如，对二氧化硅使用，氨基丙基硅烷，或氯曱基化的或酸酐活化的苯乙烯])共价偶联，优选通过长度等于至少3个碳-碳键的连接部分偶联。例如，且使用这种疏水改性的色谦支持体，如下所述制备的组合物可在受控的环境条件(75。F和50。/。相对湿度)长期储存，可储存至少2天，更典型储存2天至2周，且最典型储存2周至2个月(且甚至更长)，且不损失自由流动的特征和产生明显的降解。该组合物的甜菜色素含量通常为2-5wt%，更典型5-10wt%,且最典型10-40wt%。显著地，即使经过长期储存，至少60-70%，更典型至少80%，且最典型至少90%将流过相同的筛网过滤器。而且，如此制备的甜菜色素组合物的溶解度(至少90%的甜菜色素组合物，更典型至少92%,还更典型至少95%)显示出众的水溶性，通常至少为0.1mg/ml至1mg/ml，更典型至少1mg/ml至10mg/ml，还更典型至少10mg/ml至50mg/ml，且最典型至少50mg/ml至100mg/ml，甚至更高。在另一实例中，本发明者还发现可制备甜菜色素组合物，其为包含浓度至少为2.0wt%(且更典型至少5wt。/。)的甜菜色素的近天然的提取物的颗粒组合物，其中甜菜色素与浓度等于或小于98.0wt%(且更典型小于95wt%)的载体物理结合(associatedwith),其中该组合物为固体组合物，其当溶于水中时至少90wt。/。(且更典型至少95wt。/。)溶解。通常，该制剂为自由流动的且当储存在环境条件时保持自由流动的特征至少2周。关于优选甜菜色素浓度和甜菜色素制剂的化学复合特性，进行如上相同的考虑。在特别优选的方面，该载体为相对高重量百分比的营养上和/或药物可接受的载体。最典型(但不必然)，该载体为可溶的载体且存在的浓度为10wt。/。至40wt%,且甜菜色素的近天然的提取物存在的浓度为至少8.0wt%。例如，该载体可为(基于)营养可接受的水溶性糖，且最典型多糖。其它载体可为不溶的和有机的(例如，改性淀粉)或无机的(例如，二氧化硅)。在这些制剂中，通常优选该甜菜色素制剂源自混合物、浆液或悬浮液，然后将该混合物、浆液或悬浮液喷雾干燥形成最终自由流动的产物。类似于上述制剂，通常优选组合物的残余水含量小于20wt%(更典型小于15wt%，且还更典型小于10wt%),且配制该制剂以4吏在75。F和50%相对湿度储存至少2天后，至少50%的组合物流过60目筛。然而，更优选地，至少60%、70%、80%或甚至90%和更多将流过该目筛(其可更细)。类似的，且尤其当甜菜色素浓度高于5wt。/。时，通常优选在储存多于2天后保持上述流动特性，包括储存时间为2天至2周，且最优选储存时间为2周至2个月(和甚至更长)。因此，颗粒组合物的颗粒通常具有的尺寸适于使至少90%的组合物穿过60目筛，且配制该组合物以使在75。F和50%相对湿度储存至少2周后至少50%(且更典型至少60%，70%,80%或甚至90%和更高)的组合物流过60目筛(提供US标准筛目尺寸，例如，在ASTME-l1-1987)。不考虑具体制剂，本发明者进一步发现根据本发明主题的组合物当给予人时具有不同的明显、理想和至今未知的生理活性。在其它作用之中，本发明者发现根据本发明主题的组合物降低血清甘油三酯水平，增加HDL/LDL胆固醇的比例，降低oxLDL浓度，和/或使血糖降低和正常化(禁食和在葡萄糖激发下)。而且，根据本发明主题的组合物还明显且以浓度依赖方式抑制NF-kB活性(体外)。在其它观察的作用中，预期的甜菜色素组合物还明显增加SIRT(NAD-依赖性脱乙酰酶Sir2[沉默信息调节因子(silentinformationregulator)2]的哺乳动物同源物(homologue))表达。最显著J也，得到SIRT刺激的浓度比使用白藜,醇得到相当的SIRT刺激的浓度低几个数量级。因此，预期的组合物可用于预防和/或治疗多种病症，特别是与以下相关的病症升高的血清甘油三酯水平、降低HDL/LDL胆固醇水平、LDL胆固醇的氧化、增加的血糖、降低的葡萄糖耐量，和/或线粒体功能障碍。其它对血症、冠状动脉疾病、代谢综合症、肥胖症和由于衰老的退化作用。尽管不限于本发明主题，本发明者发现甜菜色素组合物当以较低剂量向人志愿者给药时(例如，每天3次100mg组合物，其中甜菜色素含量约30wt%)明显抑制血流中的CETP活性。因此，可给予预期的化合物以控制HDL颗粒的尺寸和增加血清HDL浓度。在其它考虑的方面，其它营养和/或药物物质可与甜菜色素制剂组合,且尤其包括积极影响血糖和血脂至少之一的那些。现有技术中已知有许多这些物质，认为所有这些都适合在此使用。然而，尤其优选的其它物质包括促胰岛素物质、维生素、矿物、和其它^:物提取物和制剂(例如，幼芽(sprout)提取物，咖啡豆提取物等)。例如，4-羟基异亮氨酸或含铬的组合物可与预期的甜菜色素组合物组合，其中该4-羟基异亮氨酸可为合成的，或更优选地，从种子提取物(例如，葫芦巴种子)分离或富集，且其中所述^^优选在水溶性复合基质中。因此，帮助人受试者降低其血清甘油三酯浓度的方法可包括提供包含有效降低血清甘油三酯浓度的浓度的甜菜色素(或甜菜色素混合物)的组合物的步骤。该组合物最优选进一步在人受试者中减少LDL胆固醇的氧化、增加HDL胆固醇和/或降低LDL胆固醇。在尤其优选的方法中，该甜菜色素的存在量为每个推荐日剂量5mg至200mg。因此，可预期包含可食用成分和与该可食用成分相关的说明书的试剂盒、营养补充剂和食物产品，该可食用成分优选包含本文预期的组合物，该说明书向人告知口服该食物制品可刺激SIRT、抑制NF-kB、降低总血清甘油三酯浓度和/或在人受试者中减少LDL胆固醇的氧化。当需要时，自检测试剂盒或说明书也可与产品结合以使使用者检测各种生理参数(例如，oxLDL,HDL，LDL,总胆固醇，氧化应激，甘油三酯，血糖等)。尽管预期的制品可配制为多种方式，通常优选该制品被配制为片剂、胶囊、预备混合(ready-to-mix)的制剂或糖衣丸。其它制剂也包括油性输注液，软凝胶，胶嚢的包衣和液体酊剂。最优选地，预期的甜菜色素组合物被配制为营养补充剂以提供在推荐曰剂量中20至500mg的总甜菜色素，且当补充剂为胶嚢、片剂、糖衣丸或其它致密形式时，可在总量小于1000mg中给予20至500mg总甜菜色素。而且，预期的组合物可包括本文公开的甜菜色素组合物与至少一种其它营养有益成分组合。例如，且当适当时，促胰岛素剂(例如，4-OH-leu)的存在量为每个推荐的日剂量20mg至500mg。其它成分包括化学明确的化合物(例如，维生素、辅助因子、矿物、可溶的和不可溶的纤维、增加合成代谢或分解代谢的物质)，也包括化学复合混合物且尤其是植物提取物。在其它预期的提取物中，咖啡豆制剂在此尤其优选。实施例示例的提取方法方案1:用总甜菜色素含量为约0.6wt。/。(干基准(drybasis))的商业可得12的甜菜汁(约65白利氏糖度(brix);获自SVZIntemational)开始进行提取。过滤该汁以去除颗粒物且不用进一步修饰将该滤液用于色i普法。柱子用疏水改性的二氧化硅树脂(ResinHSI-564，从VDFFutureceuticals商购；Momence，IL60954)填充，且将过滤的汁以每小时1-50柱床体积通过柱，负载为l-20柱床体积。弃去通过的部分，且使用稍碱性pH的緩和緩冲液(例如，0.1-0.2M乙酸铵水溶液，pH为8.2至8.4，温度为110。F，或0.1-0.2M碳酸铵水溶液，pH为7.0至9.0，相同温度)从树脂洗脱甜菜色素。将所得的洗出液冻干而不用进一步修饰得到干燥产物。对产物定量分析显示总甜菜色素含量为约15wt%，总糖含量为6wt。/。，且残余水含量为约8wt%。然后使用转动叶片研磨机研磨干燥产物以形成穿过60目筛的粉末产物。最显著地，多于90%，且更典型多于95%的自由流动的干燥产物在小于2分钟内以0.1mg/ml至10mg/ml的浓度溶解，更典型以10mg/ml至50mg/ml的浓度溶解，且更典型以50mg/ml至100mg/ml的浓度溶解(且在一些情况下甚至更高，如100mg/ml至200ml/ml)。还更显著地，该产物在75。F和50%相对湿度储存至少2周后是稳定的，其组成、自由流动性或其它参数没有任何可观察到的变化，且不聚集成更大的颗粒或凝块。事实上，在规定条件储存2周(和更长)后，基本上相同量(>90%)的干粉末穿过相同目尺寸的目筛。方案2:用总甜菜色素含量为约0.6wt。/。(干基准)的商业可得的甜菜汁(约65白利氏糖度(brix);获自SVZInternational)开始进行提取。过滤该汁以去除颗粒物且不用进一步修饰将该滤液用于色语法。柱子用疏水改性的苯乙烯树脂(ResinHST-226,从VDFFutureceuticals商购)填充，且将过滤的汁以每小时1-50柱床体积通过柱，负载为l-20柱床体积。弃去通过的部分，且使用稍i咸性pH的緩和緩沖液(例如，0.1-0.2M乙酸铵水溶液，pH为8.2至8.4，温度为110。F,或0.1-0.2M碳酸铵水溶液，pH为7.0至9.0，相同温度)从树脂洗脱甜菜色素。不像上述一样进行干燥，将所得洗出液与作为载体的水溶性多糖(例如，至约30wt。/。麦芽糖糊精终浓度)混合并喷雾干燥至干燥产物，该干燥产物具有约10wt%甜菜色素和45wt%总糖含量，且残余水含量为约5wt%。喷雾干燥产物的平均粒度为约150微米(通过60目筛)，且多于卯％(且更典型多于95%)的自由流动的干燥产物在小于2分4f^内以下列浓度;容解0.1mg/ml至10mg/ml，更典型浓度为10mg/ml至50mg/ml,且更典型的浓度为50mg/ml至100mg/ml(且在一些情况下更高，如100mg/ml至200ml/ml)。如上所述，该产物在75。F和50%相对湿度储存至少2周后是稳定的，且在组成、自由流动性或其它参数方面没有任何可观察到的变化，且不聚集成较大的颗粒或凝块。再次，在规定条件储存2周(和更长)后，基本上相同量的(>90%)干粉末穿过相同筛目尺寸的筛。甜菜色素制剂的分析将多种商业可得的含甜菜色素的制剂(对比例1至对比例4)用于分析甜菜色素浓度、糖浓度和吸湿性，且结果示于下表。没有测定对比例的吸湿性，因为它们太易凝块或为液体。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>量。糖含量wt。/。按照AOAC方法982.14所述的HPLC测定。吸湿性通过将样品置于温度为25。C的32%(饱和氯化镁)、52%(硝酸镁)和93%(硝酸钾)的相对湿度室中而测定，且随后如FCCMP.l.l所述在样品平tf72小时后抬r测wt。/。水分。本发明实施例根据上述方案1制备且当制备时和在52%相对湿度储存时为自由流动的粉末。该产物的平均残余水含量为10.6%。当然，应理解可使用其它膜过滤和其它分离步骤(或使用更浓的原料)以进一步浓缩组合物。人志愿者的试验对人志愿者进行了两种独立的治疗，分别为4个和3个个体。每个志愿者接受100mg总剂量(含约30mg总甜菜色素)的浓缩的甜菜色素组合物，一天三次，连续三天。没有不利作用报道。血清中标记物分析包括HDL、LDL、TC、甘油三酯、葡萄糖和oxLDL。图1描述了结果(GLC代表血糖个体7为140/124(之前/之后)，个体4:138/126(之前/之后)；TRG代表总甘油三酉旨:个体7:339/238(之前/之后)，个体4，342/260(之前/之后)，个体>650/580(之前/之后)，个体3:463/317(之前/之后))。因此，一天3次给予100mg根据本发明主题的组合物显示显著的作用，主要作用于甘油三酯但也作用于血糖。具有约30wt。/。总甜菜色素的预期的组合物的体外作用图2A描述使用根据本发明主题的组合物的浓度依赖性体外抑制Nf-kB的示例结果。在此，HL-60细胞用10ng/mLTNF-a刺激以增加Nf-kB的活性，并用于建立基线值。添加类似于上述方案1制备的甜菜色素组合物(由培养基中的甜菜色素wt。/。表示)导致以剂量依赖的方式强且显著的抑制TFN-a-诱导的Nf-kB活化。Nf-kB活性水平通过CaymanInc.的Elisa试剂盒测试，且细胞培养按照已知方案进行。图2B描述使用根据本发明主题的组合物的浓度依赖性体外刺激SIRT的示例结果。更具体地，SIRT1表达如上述实验在用相同组合物处理的HT-29细胞中监测HT-29细胞在培养基中用组合物处理4小时，然后进行在SIRT活性实验，该实验使用用于SIRT的商业可得的荧光底物(获自Biomol，Inc.)。该实验方案基本按照检测试剂盒中提供的方案进行。明显地是，根据本发明主题的组合物显示强且显著的作用。事实上，以下结果证实了在一定浓度的强刺激效应，该浓度仅为通过白藜芦醇刺激的浓度的2.2%。图2C描述示例数据，其显示通过预期的组合物处理，人血清中ORAC(氧自由基吸收能力)值强且显著增加。再次，该ORAC的增加为浓度依赖性的且将ORAC中的RBE增加与作为对照的Trolox(6-羟基-2,5，7,8-四曱基色满-2-羧酸)相比。<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>权利要求1.固体组合物，其包含多种化学上不同的甜菜色素，总甜菜色素浓度为至少2.0wt％，且甜菜色素与糖的比例至少为0.3，其中所述组合物为自由流动的固体，当该固体溶于水时至少90％的固体以至少50mg/ml的浓度溶解。2.权利要求1的组合物，其中自由流动的特征为将所述组合物粉碎为合适的尺寸，以使至少90%的组合物穿过30目筛。3.权利要求1的组合物，其中自由流动的特征为将所述组合物粉碎为合适的尺寸，以使至少90%的组合物穿过60目筛。4.权利要求1的组合物，其中自由流动的特征为，在将组合物粉碎成使至少90%的组合物穿过60目筛的合适尺寸后，能够使得在75。F和50%相对湿度储存至少2周后，至少50°/。的组合物流过60目筛。5.权利要求1的组合物，其中自由流动的特征为，在将组合物粉碎成使至少90%的组合物穿过60目筛的合适尺寸后，能够使得在75。F和50%相对湿度储存至少2周后，至少80%的组合物流过60目筛。6.权利要求1的组合物，其中所述化学上不同的甜菜色素具有近天然的组成。7.权利要求1的组合物，其中甜菜色素的浓度为至少10.0wt%。8.权利要求1的组合物，其中甜菜色素与糖的比例最少为1.0。9.权利要求1的组合物，其中该组合物被配制为营养补充剂，且其中该补充剂被配制为能在小于1000mg的日剂量中提供20至500mg的总甜菜色素。10.固体颗粒组合物，其包含至少5.0wt。/。的甜菜色素的近天然的提取物，和营养可接受的载体，其中所述载体的存在量为等于或小于组合物的95.0wt%，且其中至少95wt。/o的组合物在小于2分钟内以浓度至少为50mg/ml溶于水。11.权利要求IO的组合物，其中甜菜色素的浓度为至少10.0wt%，其中所述营养可接受的载体为多糖，且其中所述组合物为自由流动的。12.权利要求10的组合物，其中甜菜色素的浓度为至少20.0wt%,其中所述营养可接受的载体为多糖，且其中是组合物为自由流动的。13.权利要求10的组合物，其中所述载体的存在量为10wt。/。至40wt0/。，且其中甜菜色素的近天然的提取物的存在量为至少8.0wt%。14.权利要求11的组合物，其中所述颗粒的尺寸适于使至少90%的组合物穿过60目筛，且其中配制该组合物以使在75°F和50%相对湿度储存至少2周后至少50%的组合物流过60目筛。15.权利要求IO的组合物，其中该组合物被配制为营养补充剂，且其中该补充剂被配制为能在小于1000mg的日剂量中提供20至500mg的总甜菜色素。16.制备营养补充剂的方法，包括将权利要求1或权利要求10的组合物与营养可接受的载体混合以形成补充剂；和提供以下信息当给予受试者时该甜菜色素在人受试者中对至少以下之一有效(a)降低血清甘油三酯浓度，(b)抑制NF-kB，和(c)在人受试者中刺激SIRT。17.权利要求16的方法，其中配制该组合物以使在75。F和50%相对湿度储存至少2周后至少50%的组合物流过60目筛。18.权利要求16的方法，其中配制该组合物以使在75。F和50%相对湿度储存至少2周后至少80%的组合物流过60目筛。19.权利要求16的方法，其中甜菜色素在补充剂中存在的浓度对以下至少之一有效(a)降低LDL胆固醇的氧化，(b)增加HDL胆固醇，和(c)减少LDL胆固醇。20.权利要求16的方法，其中每推荐的日摄取量的补充剂中甜菜色素的存在量为5mg至200mg。全文摘要本发明提供了固体、自由流动的且基本上完全可溶的制剂，其具有高甜菜色素含量。最典型地，该制剂的甜菜色素性质为近天然的且包含的甜菜色素的量为10-40wt％。因为本发明主题的制剂长时间保持化学稳定性和流动性，应注意目前该甜菜色素制剂以少量和测定的量混合。而且，显示出甜菜色素的新的生物活性，且尤其包括明显诱导SIRT和减少血清甘油三酯。文档编号A61K36/00GK101678056SQ200880010241公开日2010年3月24日申请日期2008年1月31日优先权日2007年1月31日发明者兹比格纽·皮特兹科斯基,韦恩·C·思雷舍申请人:Vdf未来制剂公司