专利名称：：诊断方法
技术领域：
：本发明涉及对发展严重败血症的易感性诊断和预防。
背景技术：
：败血症是对感染的全身炎症反应，在严重情况下造成器官衰竭和死亡。它是发病和死亡的日益常见的原因，特别是在老年、无免疫应答和病危个体中。已报道败血症在非冠脉重病监护病房中是最常见的死亡原因(BoneRC等人；Chest.1992年6月;101(6):1644-55)。它以所有住院治疗的1%-2%发生并且死亡率范围从败血症的20%至严重败血症的40%至败血症性《木克(严重败血症的一个亚类)的〉60%(Leibovici;AnnInternMed1991;U4(8):703，Martin等人;NEnglJMed.2003年4月17日；348(16):1546-54)。败血症的临床定义为出现两种或更多种以下的状况，同时具有确认的或怀疑的感染(1)发烧(温度:^8。C)或体温过低(温度〈6。C);(2)心率〉90次每分钟；(3)呼吸率〉20次呼吸每分钟或PaC02<32mmHg;和(4)白细胞计数〉12(x109细胞/L)或<4(x109细胞/L)。已知状况(1)至(4)为SIRS(严重炎症反应综合征)标准(BoneRC等人；Chest.1992Jun;101(6):1644-55)并且被承认是诊断严重炎症的国际标准。表现出SIRS标准的两种或更多种而没有证实的或怀疑的感染的个体^f皮归类为具有非感染相关的SIRS。严重败血症的临床定义为如上定义的败血症，伴有败血症诱导的低血压、器官功能障碍或灌注异常。败血症诱导的低血压定义为收缩压〈90mmHg或从不存在其他低血压原因下的基线处降低<40mmHg。灌注异常可包括，但不限于灌注不足、乳酸性酸中毒、少尿或精神状况的急性改变。严重败血症包括作为亚类的败血症性休克状况。该状况由败血症诱导的低血压的存在而特别定义，尽管足够的体液复苏(Fluidresuscitation)连同存在灌注异常。接受收缩性药或血管加压药的个体可能在测量灌注异常时不是低血压。为了治疗严重败血症，在更严重的症状(低血压、器官功能异常或灌注不足)发作前诊断以建立充分的治疗对成功的结果是极其重要的(RiversE等人.NEnglJMed2001;345(19):1368-77)。例如，Kumar等人表明死亡与在进行第一次治疗前、败血症诱导的低血压发作后所经过的小时数相关(Kumar等人.CritCareMed2006;34(6):1589-96)。需要可靠的生物学或临床标志物以尽早确定个体是否处于发展严重败血症的危险而最小化在治疗建立前的延迟。发明概述肝素结合蛋白(HBP,CAP37,Azurocidin)是糖基化的、单链、带负电的37kDa无活性的丝氨酸蛋白酶同源物，显示与人中性粒细胞弹性蛋白酶44%的序列同一性。已发表了HBP的三维结构(Iversen等人NatStructBiol.1997年4月；4(4):265-8)。它包含在人中性粒细胞的嗜天青颗粒(azurofilicgranulae)中(Lindmark等人，JLeukocBiol1999;66(4):634-43)。它是多功能蛋白，已显示通过改变血管细胞骨架的Ca"+平衡而诱导血管渗漏(Gautam等人，NatureMedicine2001;7(10):1123-7)。与纤维蛋白原复合的A族链球菌(GAS)的M蛋白已显示通过刺激嗜中性粒细胞的B2-整联蛋白受体而诱导HBP的释放(Herwald等人，Cell2004;116(3):367画79)。LPS还可通过未知的机理诱导HBP释i史(Rasmussen等人，FEBSLett1996;390(1):10912)。HBP的序列是公开可用的(例如作为NCBI登录号NP—001691区域27..248)并在下面再现为序列识别号1。序列识别号15lgpcgrgpdfftrva:lfrdw工dgvlnnpgp先前还未对表现出一种或多种SIRS标准的个体中的HBP水平进行研究。本发明人首次表明，HBP水平在随后发展严重败血症的个体中增加。HBP水平在记录败血症诱导的低血压之前达12小时升高，但如果建立治疗则迅速降低。本发明人还首次表明，HBP/白细胞计数(WBC)比在随后发展严重败血症的个体中升高。因此根据本发明，提供了一种鉴定个体是否处于发展严重败血症的危险中的方法，该方法包括测量个体中的HBP并由此确定该个体是否处于发展严重败血症的危险中。本发明方法还可包括测量个体中的WBC或嗜中性粒细胞计数(NC)、分别计算HBP/WBC比或HBP/NC比并由此确定该个体是否处于发展严重败血症的危险中。因此，本发明方法可包括测量个体中的HBP并计算个体中的HBP/WBC水平或HBP/NC比，并由此确定该个体是否处于发展严重败血症的危险中。本发明还提供-用于检测HBP的试剂，用来确定个体是否处于发展严重败血症的危险中；-用于确定个体是否处于发展严重败血症的危险中的方法的测试试剂盒，所述测试试剂盒包括用于^r测个体中的HBP的试剂；-降低个体发展严重败血症的危险的方法，其包括(i)使用本发明方法确定个体是否处于发展严重败血症的危险中；和(ii)将治疗有效量的适于治疗感染的药剂和/或静脉注射液施用于在(i)中被鉴定为处于危险中的个体。图1显示在严重败血症组(n二51)、败血症组(『95)、感染而没有SIRS组(n=44)和SIRS而没有感染组(n=12)中的HBP浓度(图la)、HBP/WBC比(图lb)、CRP水平(图lc)、IL-6水平(图Id)和乳酸盐水平(图le)。在方框内的线中值；方框边缘四分位数(Q1、Q3);触须线数值范围；x和o:由患者数确定的超偏值。图la和图lb的直线分别表示HBP水平为20ng/ml的截断值和HBP/WBC比为2的截断值。图2显示HBP水平和/或HBP/WBC比、HBP水平、HBP/WBC比、乳酸盐、白细胞计数、CRP和IL-6的ROC曲线。从0,0至1,1的直线是参考线。连接产生对角线部分。图3显示在严重败血症组的每个个体(n-51)的HBP/WBC比(图3a)或HBP浓度(图3b),依据相对于最低测量的血压的时间(由在0小时处的箭头表示)从收集第一个血浆样品的时间作图。在图3a中的空心圓表示落在HBP/WBC比截断水平以下但得分在HBP浓度截断水平以上的患者。在图3b中的空心圓表示落在HBP浓度截断水平以下但得分在HBP/WBC比截断水平以上的患者。图4显示在取自16个患有严重败血症的患者的连续的血浆样品中经96小时的HBP/WBC比变化(图4a)和在耳又自7个患有败血症、感染而没有SIRS或没有感染的患者的连续血浆样品中经72小时的HBP/WBC比变化(图4b)。每条线表示单独的患者。发明详述梦錄本发明涉及鉴定受治疗者是否处于发展严重败血症的危险中的方法。因此本发明涉及个体对于严重败血症的易感性诊断。在测试下的个体通常被怀疑处于发展严重败血症的危险中。所述个体通常是哺乳动物。所述哺乳动物通常是人类或诸如马、母牛、羊、狗或猫的家养哺乳动物。所述个体优选人类。个体因为其具有证实的或怀疑的感染和/或显示出SIRS标准的一种或多种或者两种或更多种而可能被怀疑处于发展严重败血症的危险中。所述SIRS标准是(1)发烧(温度〉381:)或体温过低(温度<36匸)；(2)心率>90次每分钟；(3)呼吸率>20次呼吸每分钟或PaC02<32mmHg;和(4)白细胞计数>12(x109细胞/L)或<4(x109细胞/L)。证实的或怀疑的感染通常是细菌感染、寄生虫感染或真菌感染的一种或多种。细菌感染可由一种或多种革兰氏阴性的或革兰氏阳性的细菌引起。所述一种或多种革兰氏阴性的细菌可以选自大肠杆菌(&c/zen'c/^co//)、克雷伯氏菌属(AT/eZmW/a^;.)(通常为克雷伯氏肺炎菌(AT./"ew附ow/ae)或产商臾克雷4白菌(《.ox少toct/))、肠一干菌属(￡>tera6acferW/)(通常为阴沟肠杆菌(￡.c/oacae)或产气肠杆菌())、包特氏菌属(So^fete//")(通常为支气管败血性包特氏菌(5.6rawc/n'^p"c")、百日咳包特氏菌(5.pe^^&)或副百日咳包特氏菌(5.parapeWMM/s))、衣原体属(C/z/awj^z'a)(通常为砂目艮衣原体(C.frac/zomato))、军团菌属(丄eg/o"e〃a)(通常为嗜肺军团菌(Z.;wewwop/w7/"))、假单胞菌属()(通常为绿脓假单胞菌(Paerag/"osa))、支原体属(綺co//osma5p/.)(通常为月申炎支原体(Afp"gw附o"/ae))、；克感口耆血牙干菌(Z/ae附op/n7ws/"/7we"za)、津占质妙、雷氏菌)、奇异变形菌(户ra&ws脂'ra&fc)、鲍氏不动杆菌(J"'"eto6flCer6fifw顧,7)、嗜麦芽糖寡养单胞菌(5ye"o的//2蘭o"os1ma/to//n7/a)和月卤膜炎奈瑟氏球菌(7Ve/Men'amem>2g///<ies)(通常为血清组A、B、C、H、I、K、L、X、Y、Z、29E或W135)。所述一种或多种革兰氏阳性的细菌可以选自葡萄球菌属()(通常为金黄色葡萄球菌(S.aw船)或凝固酶阴性的葡萄球菌(5"to//^/ococc/))、链球菌属(5^^p/ococcwsw/.)(通常为月巿炎4连J求菌(51,/wewmow'ae)或酉良脓链球菌(S，oge腦))和肠球菌属(五她腦oc面卿.)(通常为屎肠球菌或粪肠球菌(E/aeca/^))。真菌感染可能由一种或多种选自以下的真菌引起白色念珠菌(C朋AV/aa/6/cara)、热带念珠菌(O"ofefefraj9/ca//s)、近平滑念珠菌(Ca"d油戶ra戸7冊i)、克柔念珠菌(Ca"c/油Arw化/)、光滑念珠菌(Ga"(i油g/a6rato)和烟曲霉(^4/er/g/〃MS/訓/gof加)。证实的或怀疑的感染可影响身体的任何部位。典型实例包括影响以下部位的感染肺；呼吸道；肝；肾；泌尿道；皮肤(表皮和皮下的)；心脏；胃；肠；血液；骨；关节或其任意组合。证实的或怀疑的感染可以是脑膜炎。感染可以通过本领域中公知的诊断实践而证实，例如取自个体的样品的微生物培养、取自个体的尿或其他体液样品的抗原测试(特别是对肺炎链球菌感染和军团菌属感染)或PCR分析(特别是对由诸如支原体、军团菌属、衣原体和百日咳包特氏菌的细菌感染引起的非典型肺炎)。新近开发了多重PCR技术，所述多重PCR技术能够同时测试多种细菌感染和真菌感染。感染可能因为存在一种或多种以下的一般症状而被怀疑高于38。C的发烧；寒战；疼痛；持续痛(ache)或触痛(tenderness);全身的疲劳感；盗汗；和伴有发红、发热、肿胀或疼痛或流出白色、淡黄色或淡绿色体液的伤口或切口。本发明可用于确定具有发展严重败血症的一种或多种另外的危险因子和/或一种或多种倾向的个体的易感性。增加发展严重败血症的易感性的危险因子通常包括增加感染易感性的任何因子。这些因子可包括削弱的免疫系统(即个体是无免疫应答的)、或住院治疗的患者中存在静脉内导管、手术伤口、外科引流或被称为褥疮溃疡或褥疮的皮肤受损部位。糖尿病个体更易于发展严重败血症。本发明的诊断方法可以与另一检测或遗传测试联合进行以改进风险预测。通常，个体不具有慢性炎性相关的疾病和/或不显示与这样的疾病特别相关的症状。这样的疾病的实例包括动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、哮喘、类风湿性关节炎、骨关节炎和诸如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征和炎性肠病的肠的炎性疾病。如果个体确实具有慢性炎性相关的疾病，他们另外具有如上定义的证实的或怀疑的感染和/或显示SIRS标准的9一种或多种或两种或更多种。通常，个体不具有严重败血症或不显示将导致严重败血症的诊断的症状。通常这样的症状包括败血症诱导的低血压、器官功能障碍或灌注异常。败血症诱导的低血压被定义为收缩压<90mmHg或从不存在其他低血压原因下的基线处降低〈40mmHg。灌注异常可包括，但不限于灌注不足、乳酸性酸中毒、少尿或精神状况的急性改变。严重败血症包括作为亚类的败血症性休克状况。该状况由败血症诱导的低血压的存在而特别定义，尽管足够的体液复苏连同存在灌注异常。接受收缩性药或血管加压药的个体可能在测量灌注异常时不是低血压。本发明涉及测量HBP在个体中的水平。通常通过确定HBP在取自个体的体液样品中的浓度而测量HBP水平。根据本发明，与基线水平或浓度相比增加的HBP水平指示个体对发展严重败血症是易感性的或个体处于发展严重败血症的危险中。基线水平通常为HBP在被怀疑处于发展严重败血症的危险中但没有随后发展严重败血症的个体中的水平。例如，本发明人已表明，当HBP水平是通过确定HBP在取自个体血浆样品中的浓度而测量时，发展非严重败血症的个体具有约8.5ng/ml的中值HBP浓度，具有证实的或怀疑的感染但显示一种或更少的SIRS标准的个体具有约6.5ng/ml的中值HBP浓度，以及在不存在感染的情况下显示两种或更多种SIRS标准的个体具有约9ng/ml的中值HBP浓度。对于所有被怀疑处于发展严重败血症的危险中但没有随后发展严重败血症的个体类型的中值HBP浓度为约8ng/ml。在本发明中，在取自个体的体液样品中伴随增加的发展严重败血症易感性或危险性的增加的HBP浓度通常为大于约15ng/ml或大于约16ng/ml、17ng/ml、18ng/ml、19ng/ml、20ng/ml、21ng/ml、22ng/ml、23ng/ml或24ng/ml。伴随增加的发展严重败血症的易感性或危险性的增加的HBP浓度优选大于约20ng/ml。根据本发明，伴随增加的发展严重败血症增加的易感性或危险性的HBP水平或浓度的增加相对于基线水平或浓度为至少2倍、2.5倍或3倍。伴随增加的发展严重败血症的易感性或危险性的HBP水平或浓度的增加相对于基线水平或浓度优选至少2.5倍，因此，重败血症的危险。根据本发明，相对于基线比增加的HBP/WBC比表明个体对发展严重败血症是易感性的或个体处于发展严重败血症的危险中。基线比通常为在被怀疑处于发展严重败血症的危险中但没有随后发展严重败血症的个体中的HBP/WBC比。当HBP在体液样品中的浓度是以ng/ml测量并且在血样中的WBC是以细胞数xlO"l测量时，本发明人已表明，例如，发展非严重败血症的个体具有约0.7:1的中值HBP/WBC比，具有证实的或怀疑的感染但显示一种或更少的SIRS标准的个体具有约0.85:1的中值HBP/WBC比，以及在不存在感染的情况下显示两种或更多种SIRS标准的个体具有约0.9:1的中值HBP/WBC比。对于所有被怀疑处于发展严重败血症的危险中但没有随后发展严重败血症的个体类型的中值HBP/WBC比为约0.75:1。在本发明中，当HBP在体液样品中的浓度是以ng/ml测量并且在血样中的WBC计数是以细胞数xl09/1测量时，伴随增加的发展严重败血症的易感性或危险性的增加的HBP/WBC比通常大于约1.4:1，或大于约1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2.0:1、2.1:1、2.2:1、2.3:1或2.4:1。伴随增加的发展严重败血症的易感性或危险性的增加的HBP/WBC比优选大于约2.0:1。根据本发明，伴随增加的发展严重败血症的易感性或危险性的HBP/WBC比的增加相对于基线比至少为1.5倍、2倍、2.5倍或3倍。伴随增加的发展严重败血症的易感性或危险性的HBP/WBC比的增加相对于基线比优选为至少2.5倍。本发明人已确定，在被怀疑处于发展严重败血症的危险中的个体中的平均嗜中性粒细胞计数(NC)为白细胞计数(WBC)的约80%。本发明还可评估HBP/NC比以确定发展严重败血症的危险。根据本发明，相对于基线比增加的HBP/NC比表明个体对发展严重败ii血症是易感性的或个体处于发展严重败血症的危险中。基线比通常为在不具有感染和/或不显示任何SIRS标准的个体中的HBP/NC比。当HBP在体液样品中的浓度是以ng/ml测量并且在血样中的NC计数以细胞数x109/1测量时，本发明人已表明，例如，发展非严重败血症的个体具有约0.55:1的中值HBP/NC比，具有证实的或怀疑的感染但显示一种或更少的SIRS标准的个体具有约0.65:1的中值HBP/NC比，以及在不存在感染的情况下显示两种或更多种SIRS标准的个体具有约0.7:1的中值HBP/NC比。对于所有被怀疑处于发展严重败血症的危险中但没有随后发展严重败血症的个体类型的中值HBP/NC比为约0.6:1。在本发明中，当HBP在体液样品中的浓度是以ng/ml测量并且在血样中的NC计数是以细胞数x109/1测量时，伴随增加的发展严重败血症的易感性或危险性的增加的HBP/NC比通常大于约l.l:l,或大于约1.2:1、1.3:1、1.4:1、1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1或1.9:1。伴随增加的发展严重败血症的易感性或危险性的增加的HBP/NC比优选大于约1.6:1。根据本发明，伴随增加的发展严重败血症的易感性或危险性的HBP/NC比的增加相对于基线比至少为1.5倍、2倍、2.5倍或3倍。伴随增加的发展严重败血症的易感性或危险性的HBP/NC比的增加相对于基线比优选为至少2.5倍。本发明通常在从个体获得的样品上体外进行。样品通常包含个体的体液。样品优选血液、血浆、血清、尿、脑脊液或关节液样品。样品最优选血液样品。通常在检测前例如通过离心而处理所述样品。样品通常还可在才企测前储存，优选地在-70。C以下储存。本领域中公知的标准方法可用于检测HBP水平。这些方法通常包括使用用于检测HBP的试剂。所述试剂通常与HBP特异性结合。所述试剂可以是对于HBP具有特异性的抗体。特异性应当理解为试剂或抗体与HBP结合而对任何其他的分子(特别是任何其他的蛋白)没有显著的交叉反应性。例如，对于HBP具有特异性的试剂或抗体将不显示与人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶显著的交叉反应性。可通过任何合适的方法评估交叉反应性。用于本发明方法中的抗体可以是能够结合至HBP的全抗体或其片段。抗体可以是单克隆的。这样的全抗体通常是通过本领域公知的任何合适的方法制成的抗体。例如，通过用HBP在合适的条件下免疫通常为兔或小鼠的哺乳动物并从例如所述哺乳动物的血清中分离抗体分子，可以获得多克隆的抗体。单克隆抗体可通过杂交瘤或重组体方法获得。杂交瘤方法涉及用HBP在合适的条件下免疫通常为兔或小鼠的哺乳动物、然后收获所述哺乳动物的脾细胞并将其与骨髓瘤细胞融合。然后，将融合的细胞的混合物稀释并且克隆从单个母细胞中生长。随后测试由不同克隆分泌的抗体与HBP结合的能力，并然后将最多产且稳定的克隆在培养基中生长为高容积。收集并纯化分泌的抗体。重组方法涉及将不同免疫球蛋白基因区段克隆入噬菌体或酵母以产生具有稍微不同的氨基酸序列的抗体库。可以选择产生结合至HBP的抗体的序列并且该序列被克隆至，例如，细菌细胞系用于生产。通常，抗体是哺乳动物抗体，诸如灵长类抗体、人类抗体、啮齿动物抗体(例如小鼠或大鼠)、兔抗体、绵羊抗体、猪抗体、马抗体或骆驼抗体。抗体可以是骆駝科动物抗体或鲨鱼抗体。抗体可以是纳米抗体(nanobody)。抗体可以是抗体的任何类或同种型，例如IgM，但优选IgG。可用于本方法的全抗体的片段包括抗原结合部位，例如Fab或F(ab)2片段。全抗体或片段可以与其他部分结合，所述其他部分例如可用于将2个或更多个片段或抗体连接在一起的连接体。这样的连接体可以是化学连接体或者可以与片段或全抗体的融合蛋白的形式存在。因此，连接体可用于将具有相同或不同结合特异性的全抗体或片段连接在一起，例如将能够结合相同或不同多态性的全抗体或片段连接在一起。抗体可以是能够结合至两种不同抗原的双特异性抗体，所述两种不同抗原通常为本文提及的任意两种多态性。抗体可以是通过将两种可变结构域背靠背连接而形成的部位的任何形式存在的情况下，则这些不同特异性通常为在不同位置或在不同蛋白上的多态性。在一个实施方案中，抗体是包括来自诸如人源化抗体的不同天然抗体的序列的嵌合抗体。评估HBP水平的方法通常包括用能够与HBP特异性结合的试剂或抗体^^妄触样品。这样的方法可包括浸渍片测定(dipstickassay)和酶if关免疫吸附测定(ELISA)。通常，浸渍片包括与HBP特异性结合的一种或多种抗体或蛋白。如果存在多于一种抗体，抗体优选地具有不同的非重叠的决定子以便它们可以同时结合至HBP。ELISA是需要分离试剂的非均匀的、固相测定。ELISA通常使用夹心技术或竟争技术而进行。夹心技术需要两种抗体。第一种特异性结合HBP并结合至固体支持体。第二种抗体结合至标志物，通常是酶偶联物。使用酶的底物量化HBP-抗体复合物并由此量化在样品中的HBP的量。抗原竟争性抑制测定通常也需要结合至支持体的HBP-特异性抗体。将HBP-酶偶联物加入待测定的样品(包含HBP)。HBP-酶偶联物与未标记的HBP之间的竟争抑制允许定量样品中的HBP的量。用于ELISA反应的固体支持体优选包含孔。本发明还使用不包含抗体的测量HBP的方法。高效液相色谱(HPLC)分离和荧光检测优选用作确定HBP水平的方法。可使用先前描述的HPLC设备和方法(TsikasD等人.JChromatogrBBiomedSciAppl1998;705:174-6)。通常基于尺寸或电荷进行HPLC期间的分离。在HPLC之前，通常将内源氨基酸和内标L-高精氨酸加入测定样品并且这些在CBA柱(Varian,HarborCity,CA)上被相提取。样品中的氨基酸优选用邻-苯二醛(OPA)衍生化。对于所有氨基酸，测定的准确度和精密度优选在质量控制样品内测定。可使用本领域中公知的标准方法测量个体中的白细胞计数或嗜中性粒细胞计数。这样的方法包括自动计数或手动计数。本发明还提供了诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包括用于测量个体中的HBP水平并从而确定该个体是否处于发展严重败血症的危险中的装置。试剂盒通常包括特异性结合HBP的一种或多种抗体。例如，试剂盒可包括单克隆抗体、多克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体或人源化抗体。抗体可以是完整的免疫球蛋白分子或其片段如Fab片段、F(ab，)2片段或Fv片段。如果存在多于一种抗体，抗体优选具有不同的非重叠的决定子以-使它们可同时结合至HBP。所述试剂盒可另外包括用于测量个体中WBC计数的装置。所述试剂盒可另外包括使上述方法的任一实施方案能够实施的一种或多种其他试剂或装置。这样的试剂或装置包括以下的一种或多种合适的緩沖液(水溶液)、从样品中分离HBP的装置、从个体中获得样品的装置(例如包括针的导管或装置)或可在其上进行定量反应的包括孔的支持体。试剂盒可以任选地包括使试剂盒能够用于本发明方法的说明书或关于本方法可对哪些个体实施的详细说明。甜中的个体的治疗。因此，用于降低发展严重败血症的危险的物质可用于制备用于治疗通过本发明方法鉴定为处于发展严重败血症的危险中的个体的药物。因此，通过本发明方法鉴定为处于发展严重败血症的危险中的个体的状况可通过施用这样的物质而被改善。从而，严重败血症可被预防。可用于降低发展严重败血症的危险的治疗有效量的物质可给予通过本发明方法鉴定为需要其的个体。适于降低发展严重败血症的危险的物质通常包括一种或多种抗生素和/或一种或多种静脉注射液。所述一种或多种抗生素通常为广谱抗生素。广谱抗生素通常选自一种或多种氨基糖苷类、头孢菌素类、氟喹诺酮类、林可酰胺类、大环内酯类、青霉素类、磺胺类药或四环素类。例如，合适的抗生素包括，但不限于，庆大霉素、卡那霉素、新霉素、链霉素、托普霉素、头孢唑啉、头孢氨苄、头孢匹林、头孢拉定、头孢呋辛、头孢克肟、头孢噻肟、头孢他啶、头孢唑肟、头孢曲松、环丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、克林霉素、阿奇霉素、克拉霉素、红霉素、阿莫西林、氨千西林、氨千西林-舒巴坦、氯唑西林、双氯西林、美洛西林、萘夫西林、苯唑西林、苄星青霉素G、青霉素G钾、普鲁卡因青霉素G、青霉素V钾、艰拉西林、替卡西林、替卡西林-克拉维酸钾、乙胺嘧啶-石黄胺多辛、磺胺嘧啶、磺胺异噁唑、磺胺曱噁唑、曱氧千啶-磺胺甲噁唑、金霉素、多西环素和四环素。根据本发明可用于降低发展严重败血症的危险的物质通常与药学上可接受的载体或稀释剂配制用于本发明中的施用。药物载体或稀释剂可以15是，例如，等渗溶液。例如，固体口服形式可包括连同活性物质的稀释剂，如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纤维素、玉米淀粉或马铃薯淀粉；润滑剂，如硅石、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁或硬脂酸钙和/或聚乙二醇；结合剂，例如淀粉、阿拉伯树胶、明胶、曱基纤维素、羧曱基纤维素或聚乙烯基吡咯烷酮；崩解剂，如淀粉、海藻酸、藻酸盐或羟基乙酸淀粉钠；沸腾复合剂；染料；增甜剂；湿润剂，如卯磷脂、聚山梨醇酯、硫酸月桂酯；和通常用于药物制剂的非毒性的且药理学上非活性的物质。这样的药物制剂可以已知的方式制备，例如通过混合过程、粒化过程、制片过程、包糖衣过程或薄膜包衣过程。用于口服施用的液态分散体可以是糖浆、乳液或悬浮液。糖浆可包含例如蔗糖或蔗糖与甘油和/或甘露醇和/或山梨醇作为载体。悬浮液和乳液可包含例如天然树胶、琼脂、藻酸钠、果胶、曱基纤维素、羧曱基纤维素或聚乙烯醇作为载体。用于肌肉内注射的悬浮液或溶液可包含连同活性物质的药学上可接受的载体，例如无菌水、橄榄油、油酸乙酯、诸如丙二醇的二醇，以及如果需要，合适量的利多卡因盐酸盐。用于静脉内施用或输注的溶液可包含例如无菌水作为载体，或者优选地，它们可以无菌的、含水的、等渗的盐溶液的形式。将用于预防严重败血症的治疗有效量的物质施用于根据本发明被鉴定的患者。例如抗生素的剂量可根据多种参数确定，特别是根据使用的物质；待治疗患者的年龄、体重和状况；施用途径；以及所需的治疗方案。此外，医师将能够对任何特定患者确定所需施用途径和剂量。根据特定抗生素的活性、待治疗的受治疗者的年龄、体重和状况以及施用的频率与途径，典型的日剂量为每kg体重乂人约0.1mg至50mg。优选地，日剂量水平为从5mg至2g。剂量可以单剂量提供或者可以多剂量提供，例如以诸如每日施用2剂、3剂或4剂的有规律的间隔服用。以下实施例举例说明了本发明实施例1.方法研究参与者2006年3月至2007年4月，具有临床上怀疑感染的202个成年患者被选入在瑞典隆德大学医院(LundUniversityHospital)的传染病医疗中心(InfectiousDiseaseClinic)的前瞻性研究。入选的标准为发烧〉38。C并且抗生素治疗少于24小时。在许可进入时记录抗生素治疗的持续时间、人口统计学、SIRS标准和收缩压(SBP)。分析C反应蛋白(CRP)、乳酸盐和WBC计数，并且用于后来分析HBP、IL-6水平的血浆样品在从许可进入的12小时内获得。在20个患者中，与记录SIRS标准和SBP平行获得达96小时的连续血浆样品。在出院后，记录最终的诊断和28天死亡率并且根据SIRS标准对患者分类(Bone等人，Chest1992;101(6):1644-55)。严重败血症(第一组)被定义为存在败血症并且SBP<90mmHg或在血样收集的24h内从基线处>40mmHg的SBP降低；败血症(第二组)被定义为显示出两种或更多种SIRS标准以及感染；非败血症(第三组)被定义为显示一种SIRS标准以及感染；和非感染(第四组)被定义为显示两种或更多种SIRS标准以及非感染的最终诊断。最终感染诊断为肺炎(n=61)、上呼吸道感染(n=35)、泌尿道感染(n=38)、表皮和皮下感染(n=29)、心内膜炎(n=4)、肠胃炎(n=12)或包括局部感染的其他感染(n=ll)。在35个患者(17%)中诊断出菌血症(17个革兰氏阴性和18个革兰氏阳性的细菌)。显示两种或更多种SIRS标准的非感染的诊断是肺栓子和系统性血管炎。将血样收集在4mL塑料的血浆柠檬酸盐管中、立即以3000rpm离心10min、等分并在-70。C下储存直到分析时。HBP、IL-6、CRP、乳酸盐、WBC和HBP/WBC比的分析通过夹心ELISA测定HBP的浓度(ng/ml),如在(Tapper等人；Blood2002;99(5):1785-93)中所述。血浆样品在PBS中稀释1/40并且以双份运行。如在(Rasmussen等人;FEBSLett1996;390(1):109-12)中所述生产并纯化重组体人HBP。如在(Lindmark等人；J.Leukoc.Biol1999;1766(4):634-43)中所述制备并纯化针对重组体HBP的小鼠单克隆抗体(2F23A)和兔抗血清(409A)并分别以1/3000和1/7000使用。来自Bio-RadLaboratories(Richmond,CA)的过氧化物酶偶联的山羊抗兔IgG以1/3000使用。通过用WBC(xl09细胞/L)除HBP浓度(ng/ml)计算HBP/WBC比。用市售的人IL-6试剂盒(Quantikine,R&DSystems,UK)测试IL-6,检测限3pg/mL。血浆样品被稀释1/40。在RocheHitachiModular-P上根据生产商的说明使用来自RocheDiagnostics(Mannheim,Germany)的试剂进行CRP和乳酸盐分析，除了用于乳酸盐分析的样品取自血浆柠檬酸盐管而不是草酸盐-氟化物管。才艮据生产商的说明(Sysmex)在SysmexXE2100中测量白细胞计数(WBC)。统计分析以中值、四分位数范围提供数据。使用曼-怀氏等级和检验(Mann-Whitneyranksumtest)进行显著性才企验。双尾p值<0.05被视为统计学上显著的。确定HBP、HBP/WBC比、CRP、WBC和IL-6的接受者工4乍对争^f正(Receiver-operatingcharacteristic)(ROC)曲纟戋(DeLong等人；Biometrics1988;44(3):837-45)和曲线下面积(AUC)。以95%置信区间(95%CI)报道AUC值。从交叉表计算敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。阳性似然比和阴性似然比也在表1中才艮道。2.结果研究的参与者的特征满足入选标准的202个患者包括在内。将患者分为以下4组51个患有严重败血症的患者(第一组)；95个患有败血症的患者(第二组)；44个非败血症的患者(第三组)和12个非感染的患者(第四组)。这4组的中值年龄和男性/女性比分别为62岁，31/20;57岁,42/53;44岁,15/29;和73岁，11/1。在第一组、第二组和第三组中分别有22个、11个和2个患者被发现菌血症。研究参与者中HBP水平和HBP/WBC比的分析许可进入时，与在第二组、第三组和第四组中分别为1/95、0/44和0/12患者相比，严重败血症组(p〈0.0001)(图la)的HBP水平显著较高，42/51患者超过20ng/ml的截断水平。此外，与其他组相比，严重败血症组的患者显示显著(pO.OOOl)较高的HBP/WBC比(图lb)。在严重败血症组的44/51患者中、在败血症组的2/95患者中、在非败血症组的0/44患者中和在非感染组的0/12患者中发现高于2.0的HBP/WBC比。此外，与在败血症组中的2/95患者和在另外2个组中的0个患者相比较，在严重败血症组中的47/51患者的血浆HBP水平>20ng/ml或HBP/WBC比>2.0(表1)。类似地，在严重败血症组中的CRP、IR-6和乳酸盐水平也显著较高(p=0.003，pO.OOOl,p〈0細l),尽管在组之间存在大量重叠(图lc至图le)。HBP水平和HBP/WBC比的预测值分析如在本研究中布i定25%的严重败血症患病率，与计算的CRP和IL-6的所有不同截断水平相比，以下变量显示在it断严重败血症中更好的特异性、^t感性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性似然比(PLR)和阴性似然比(NLR):-HBP水平>20ng/ml表明个体将发展严重败血症；或-HBP/WBC比>2.0表明个体将发展严重败血症；或-HBP水平〉20ng/ml或HBP/WBC比>2.0表明个体将发展严重败血症。这些发现在表la、表lb和表lc中概述并且由ROC曲线(图2)所支持。在表2中显示ROC曲线的统计学分析。HBP水平和HBP/WBC比在临床症状发作前预测严重败血症在严重败血症组的51个患者的20个患者中，在达到最j氐SBP之前，HBP值被提高，达12h(图3a和图3b)。在24h内，在11个患者中的HBP水平快速降低，所述患者用足够的抗生素和静脉注射液治疗并痊愈而没有并发症。然而，在患者持续循环系统不稳定的5个病例中，HBP水平保持升高，这些患者中的1个在入选日的28天内死亡(图4a)。在全部5个患者中，全部死于严重败血症组并且全部是在最后一次收集的升高的HBP样品之后1-4日内死亡。在患有败血症的6个患者中和具有非败血症的1个患者中，HBP水平保持低于20ng/ml，以上患者随后连续取样(图4b)。在严重败血症组中的20个患者在许可进入时具有增加的HBP水平或HBP/WBC比但是正常的SBP，表明这些指标能够在标准临床诊断成为可能之前预测严重败血症。这通过呈现3天发烧、腹泻和呕吐病史的70岁女性来示例说明。身体检查是不显著的，除了发烧38°C、脉搏率100但130mm/Hg的正常SBP,并且她住院时临时诊断为肠胃炎。她被给予1000ml静脉内晶体液。6小时后，她发展为SBP为70mm/Hg的严重低血压、呼吸窘迫，并^^皮立即转移至ICU，后来在ICU:^断出由于大肠杆菌败血症的具有弥漫性血管内凝血的ARDS(成人呼吸窘迫综合征)。在许可进入时，她的HBP水平为80ng/ml并且HBP/WBC比为4.2。表la:在诊断严重细菌性败血症中所测试的变量的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比变量截断敏感性特异性PPVNPVPLRNLR<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表lb:在诊断严重细菌性败血症中HBP的不同截断水平的敏感性和特异性^HBP截断特异性敏感性(ng/ml)>1595.188.2>1698,088.2>1798.684.3>1998.684.3>2099.382.4>2199.380.4>2299.378.4>2399.376.5>2499.374.5表lc:在诊断严重细菌性败血症中HBP/WBC比的不同截断水平的壽文感性和特#￥HBP/WBC特异性敏感性比截断1.487.192,21.595.088.21.795.586.31.896.386.31.998.086.32.098.6挑.32.98.684.32.298.681.42.398,678.42.49S.674.53.699.354.9表2:在诊断严重细菌性败血症中对所测试的变量的ROC曲线的分析测试结果曲线下^f示准渐近面积偏差显著性(a)(b)渐近95%置信区间下限上限HBP(ng/ml)HBP/WBC比HBP/WBC比或HBP水平(ng/ml).949細.017.022.019.000.000.000.920.905.988.993,923.997CRP(mg/ml),719.040.000,641.797IL6(pg/ml).789.038.000.714.863乳酸盐(mmo1/1).769.050.000697.841WBC计数.511.050.820.413.6082权利要求1.一种鉴定个体是否处于发展严重败血症的危险中的方法，所述方法包括测量所述个体的HBP并由此确定所述个体是否处于发展严重败血症的危险中。2.如权利要求1所述的方法，其中所述HBP是在取自所述个体的体液样品中测量的。3.如权利要求1或2所述的方法，其还包括测量所述个体的白细胞计数(WBC)或嗜中性粒细胞计数(NC)，分别计算HBP/WBC比或HBP/NC比，并由此确定所述个体是否处于发展严重败血症的危险中。4.如权利要求3所述的方法，其中所述WBC或NC是在取自所述个体的血样中测量的。5.如权利要求2所述的方法，其中确定所述个体是否处于发展严重败血症的危险中包括确定所述体液样品中的HBP浓度是否大于20ng/ml。6.如权利要求2所述的方法，其中所述体液样品中的HBP水平或浓度相对于HBP的基线水平或浓度增加至少2.5倍。7.如权利要求4所述的方法，其中，当所述体液样品中的HBP浓度是以ng/ml测量并且所述血样中的WBC是以细胞数xl09/1测量时，确定所述个体是否处于发展严重败血症的危险中包括确定HBP/WBC比是否大于2。8.如权利要求4所述的方法，其中所述血样中的HBP/WBC比或HBP/NC比分别相对于基线HBP/WBC比或HBP/NC比增加至少2.5倍。9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述个体被怀疑处于发展严重败血症的危险中。10.如权利要求9所述的方法，其中所述个体具有证实的或怀疑的感染和/或显示SIRS标准的一种或多种。11.如权利要求9所述的方法，其中所述个体具有证实的或怀疑的感染和/或显示SIRS标准的两种或多种。12.如权利要求10或11所述的方法，其中所述证实的或怀疑的感染影响肺；呼吸道；肝；肾；泌尿道；皮肤(表皮的和皮下的)；心脏；胃；肠；血液；骨；关节或其任意组合。13.如权利要求9至12中任一项所述的方法，其中所述个体是无免疫应答的患者；糖尿病患者；具有静脉内导管、手术伤口、外科引流或褥痴的住院治疗的患者；或其任意组合。14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述个体是哺乳动物。15.如权利要求14所述的方法，其中所述哺乳动物是人。16.—种用于检测HBP以用于确定个体是否处于发展严重败血症的危险中的试剂。17.如权利要求16所述的试剂，其中所述试剂包括HBP特异性抗体。18.—种降低个体发展严重败血症的危险的方法，其包括(i)使用根据权利要求1至15中任一项的方法确定个体是否处于发展严重败血症的危险中；和(ii)将治疗有效量的适于治疗感染的药剂和/或静脉注射液施用于在(i)中被鉴定为处于危险中的个体。19.如权利要求18所述的方法，其中所述适于治疗感染的药剂为抗生素。20.如权利要求19所述的方法，其中所述抗生素是广谱抗生素。21.如权利要求19所述的方法，其中所述抗生素是克林霉素。22.—种在用于确定个体是否处于发展严重败血症的危险中的方法中使用的测试试剂盒，所述测试试剂盒包括用于检测个体的HBP的试剂。23.如权利要求21所述的试剂盒，其另外包括用于测量个体的WBC的装置。全文摘要已证明HBP水平在随后发展严重败血症的个体中增加。因此，在个体中的HBP水平、HBP/WBC比或HBP/NC比可用于确定个体是否处于发展严重败血症的危险中。文档编号A61K39/00GK101687023SQ200880019915公开日2010年3月31日申请日期2008年6月12日优先权日2007年6月12日发明者L·博乔克,亚当·林德,波尔·艾克森,海科·赫沃尔德,贝蒂尔·克里斯汀森申请人:汉莎医药有限公司