专利名称：一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域,具体涉及一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸
的组合物，以及该组合物在制备用于治疗血管性或外伤性中枢神经系统损伤和帕金森氏病 的药物中的用途。
2背景技术：
神经节苷脂(Gangliosides)是含唾液酸的糖神经鞘脂，存在于哺乳类动物细胞 膜，神经系统中含量尤其丰富,是神经细胞膜的组成成分，在神经发生、生长、分化过程中起 必不可少的作用，对于损伤后的神经修复也非常重要，具有促进神经再生、神经轴突生长和 突触形成、恢复神经支配功能；改善神经传导、促进脑电活动及其它神经电生理指标的恢 复；保护细胞膜、促进细胞膜各种酶活性恢复等作用。 单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)是重要的神经节苷脂之一，在中枢神经系统病 变的治疗中起重要作用。GM1除具有上述神经节苷脂的共同作用外，还可以通过维持中枢神 经细胞膜上的Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性，起到维持细胞内外离子平衡、减轻 神经细胞水肿、防止细胞内Ca"积聚的作用;GM1可以对抗兴奋性氨基酸的神经毒性作用， 减少自由基对神经细胞的损害等。因此,单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)能促进各种原 因引起的中枢神经系统损伤后的神经重塑与功能恢复，对血管性或外伤性中枢神经系统损 伤及帕金森氏病等具有较好的疗效。 神经节苷脂分子亲水端与疏水端长度相近、极易在水中形成稳定的胶束状态，不 利于注射制剂的制备。专利W09317691是将单唾液酸四己糖神经节苷脂制成钠盐,注射液 制剂用磷酸盐做缓冲液,氯化钠做等渗调节剂，有效的解决了单唾液酸四己糖神经节苷脂 在水中形成胶束状状态、药品制剂困难的问题。然而该处方的钠盐影响单唾液酸四己糖神 经节苷脂生物膜及血脑屏障通透性，从而脑部血药浓度低，并且无法长时间维持在治疗浓 度以上，大大降低了临床使用疗效。因此急需寻找一种新的、能够提高单唾液酸四己糖神经 节苷脂钠过生物膜及血脑屏障率、临床使用疗效高的方法。 谷氨酸作为脑组织唯-能被氧化的氨基酸，其体内的产物谷酰胺可作为脑组织的 能量物质，改善维持大脑机能。谷氨酸作为神经中枢及大脑皮质的补剂，对于治疗脑震荡或 神经损伤、癫痫以及对弱智儿童均有一定疗效。因此我们选用单唾液酸四己糖神经节苷脂 钠与谷氨酸制备组合物进行研究，大量实验结果显示，在一定配比下，组合物中谷氨酸除了 含有上述作用外，还显示出增加GM1脑靶向性的作用，有效地促进了单唾液酸四己糖神经 节苷脂钠的血脑屏障通透性；同时，谷氨酸还起到使GM1稳定的作用。
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发明内容
本发明的目的是提供一种具有良好的血脑屏障通透性和临床疗效的单唾液酸四 己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物。 本发明的另一目的是提供一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物的制备方法。 本发明的还一目的是提供本发明单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合 物在制备用于治疗血管性或外伤性中枢神经系统损伤和帕金森氏病的药物中的用途。
本发明的技术方案如下--种含有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物，其特征在于，单唾液
酸四己糖神经节苷脂钠和谷氨酸之间的重量比在5 : i到60 : i之间。
所述的含有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物,其特征在于，单唾
液酸四己糖神经节苷脂钠和谷氨酸之间的重量比在io : i到4() : i之间。 所述的含有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物，其特征在于，单唾
液酸四己糖神经节苷脂钠和谷氨酸之间的重量比在15 : i到30 : i之间。 所述的含有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物,其特征在于，单唾
液酸四己糖神经节苷脂钠和谷氨酸之间的重量比为2() : i。 所述的含有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物，其特征在于，所述 的含有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物为注射液制剂。 所述的注射液，其中辅料为等渗调节剂或pH调节剂,常用的渗透压调节剂包括氯 化钠、葡萄糖、氯化钾、氯化镁、氯化钙、山梨醇等，优选氯化钠；常用的pH值调节剂包括醋 酸_醋酸钠、乳酸、枸橼酸_枸櫞酸钠、磷酸二氢钠_磷酸氢二钠等，优选磷酸二氢钠_磷酸 氢二钠。 所述的注射液，其特征在于，所述的pH调节剂为磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和氢氧 化钠。 所述的注射液，其特征在于，所述的pH范围在7. 0 8. 0之间。 所述的注射液制剂的制备方法，其特征在于，按处方精密称定单唾液酸四己糖神
经节苷脂钠、谷氨酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠，取注射用水,加入称好的单唾液酸
四己糖神经节苷脂钠，缓慢搅拌至全溶，然后依次加入称好的谷氨酸、磷酸氢二钠、磷酸二
氢钠、氯化钠，搅拌，此时药液的pH值在7. 0 8. 0之间，定容,用0. 22 u m微孔滤膜过滤，
灌装，熔封，灭菌，冷却，贴签，包装，即得单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物
注射液。 本发明单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物，药物组分的配比是经过 发明人进行大量摸索总结得出的，各组分配比都具有较好疗效。 1、单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物，具有更好的生物过膜及血脑 屏障通透速率，极大的提高了使用疗效。 2、单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物的注射液制剂稳定性更好。
3、单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物在组织中具有长效作用，其注 射液制剂可以减少给药次数。 以下通过药理研究实验例进一步阐述本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物的有益效果，但不应将此理解为本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与
谷氨酸的组合物仅具有下列有益效果。 叙合縣'发日月会日雄 力綱應 供试品单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物的注射液制剂(2()mg/ 支)， 自制，制备方法见实施例。 对照品施捷因注射液(20mg/支)，市购，TRB药厂生产。 [國](一)脑脊液中药物浓度的测定 取新西兰家兔35只，体重约2. 5kg，雌雄不限，随机分成7组，即施捷因注射液组 (简称A组)和本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物注射液组(简称 B组)。静脉注射给药，于给药后不同时间抽取0. 2mL脑脊液进行实验，取样时间分别为注 射药物后的3()niin、lh、2h、4h、8h。取脑脊液0. 1mL加适量溶剂混悬15niin，以10()()()r/min 离心lmin，取上层清液20u L进样，用高效液相色谱测定。结果见表1。
表1脑脊液中药物浓度的测定
组别组合物配比 (GMl:谷氨酸)30 mki1 h浓度(幽) 2h4h8h
A组——0.2340.3460.7380.8320.521
10: 1.0.2280.4480.7410.8390.769
15: 10.336,0.451*0.756'0.851*0.837*
B组20: 10.443*0.657*0.868*1.159*0.989*
25: 1.0.238*0.453'0.761*0.947*0.741'
30: 10.438*0.353*0.657*0.852*0.653*
40: 1.0.2260.3880.7490.8480.539 注与A组相比较*p < 0. 01 。 实验结果和结论由表1实验结果可见，本发明单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与 谷氨酸的组合物注射液制剂通过血脑屏障的药物量比施捷因注射液制剂有明显提高,说明 本发明单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物注射液制剂透过血脑屏障的药物 量明显增加,提高了脑组织中的血药浓度，因而提高了治疗效果；实验数据还表明，本发明 单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物注射液制剂给药后，耙组织的药物浓度升 高快速且稳定,在组织中具有长效作用，因而本发明单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨 酸的组合物注射液制剂可以减少给药次数。同时，相同给药剂量下,GM1与谷氨酸重量配比
在io : l到40 : l范围内的脑部药物量高于施捷因，并且GMi与谷氨酸重量配比在i5 : i 到30 : l的范围内的效果均明显(p〈0.01)的优于施捷因。(二)稳定性考察 将施捷因注射液制剂(简称A组)和本发明单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷 氨酸的组合物注射液制剂(简称B组)分别置于小瓶内，密封。于冰箱(3 5°C )、室温 (20 25°C )和37°C (RH 75% )的环境中放置，于0、3、6和12个月观察药物的外观。结 果见表2。 表2稳定性实验结果
时间(月)
放置条件 观测 0 3 6 12
指标A组 B组 A组 B组 A组 B组 A组 B组 实验结果与讨论在各种温度和时间下，本发明单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与 谷氨酸的组合物颜色未见显著变化，不同条件下的物质再分散性保持良好,无聚合现象发 生，说明本发明单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物的稳定性很好,相对于施 捷因制剂更加稳定，更适合长期储存，更适应于工业大生产。
(三)对帕金森氏症(PD)的治疗作用
1 、选择性偏侧大鼠PD模型制备 (1)手术准备成熟健康Wist.ar大白鼠，雌雄不限，体重150 200g。动物在室 温下笼中常规喂养，术前不禁食。6-羟多巴胺(6-0HDA， Sigma chemical Co.产品)溶于 0.02%的抗坏血酸液中配成0.2%的溶液，低温(-20°C )冰箱中密封避光保存备用。阿朴 吗啡(AP()，Sig-chemical Co.产品)用双蒸水配成0. 01 %溶液备用，以上溶液要求严格无 菌。 (2)模型制作动物用0. 3%戊巴比妥钠10mL/kg腹腔注射麻醉后，固定在立体定 位仪上(江湾I型C)。无菌条件下，正中切开大鼠颅顶部皮肤,剥离骨膜，暴露前囟(十字 缝)、人字缝。用鼠颅骨钻于手术要求部位钻一直径为5mra的颅骨孔，确定右侧黑质部坐标 位置。用10 i！ L微量进样器(上海计量仪器厂生产)分两次将6-0HM按下列坐标位置注 入右侧黑质部，建立右侧选择性大鼠PD动物模型。B坐标系统外耳道连线(耳杆尖中心连 线)低于上门齿板上缘5mm,即水平0平面。第一次注射4iiL，针尖斜面朝嘴侧,坐标为，前 図后(Posterior bregma, P:B) 3. ()mra，正中线右侧(Median right lateral.亂)2. 5mra，硬脑 膜腹侧(Ventral dural， VD) 8. 6mm。第二次注射3 y L，针尖斜面朝尾侧，坐标为PB2. 4mm， MRL 2. 7mm， VD8. 6mm。注射速度1 u l/min,每次注射完毕留针10min，然后以1. 0mm/min速 度缓慢拔针(约10min)。手术完毕,用医用明胶海绵堵塞颅骨孔，缝合切口，放回笼中喂养。
(3) AP()诱发动物旋转行为观察造模术后14d，动物腹腔注射0. 01 % A:P() l(ML/kg 诱发大鼠旋转行为(逆时针方向)，验证6-0HDA对中脑黑质M能神经元的损伤效应。旋转 速度达到6r/min (①35cm/r)视为成功PD选择性偏侧模型，注射APO lOmin开始记录，共记 录30min。 2、动物分组及处理 实验动物分为正常对照组、PD组、单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合 物注射液制剂治疗组(简称C组)，每组16只。按实验设计要求，于实验完毕时，记录APO 诱发的旋转行为变化后，断头处死动物,快速取脑，在冰盘中分离右侧纹状体。测MCa (线粒 体钙)的标本加入0. 5N盐酸硝化24h，离心后取上清液0. 2mL，加入1 % La-C130. 8mL混匀，
3~5 'C
20-25 。C
37 。C (RH 75%)
透 透 透
fe明！s明fe明
无无无
色明色明有浊
无透无透略浑
色明色明色明
无透无透无透
色明色明有浊
无透无透略浑
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色明色明色明
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无透无透无透
色 色 色
颜颜 颜
6用PE-503型原子吸光光度计测钙浓度；另一份测定CaM(钙调素)的标本先称湿重，然后用 EDTA(乙二胺四乙酸)缓冲液(10mg/mg)匀浆，测定。正常对照组除不行手术外，其余处理 方法同上。 实验结果与讨论 表3正常对照组、PD组和C组右侧纹状体MCa、 CaM的含量
n正常对照组 PD组C组
MCa《吗/mg Pr) 87.26 15.23 9.32*B
CaMOimol/kg wt) 822.29 40.31 29.46*#注与正常对照组比较*P < 0. 01;与PD组比较，< 0. 01。由表3实验结果可见，本发明单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物注射液制剂大大降低了 PD组右侧纹状体MCa、 CaM的含量,对PD具有明显的治疗作用。具体实施例方式以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。实施例本发明单唾液酸四R糖神经节苷脂钠与谷氡酸的织合物许射液制剂的制备1、处方处方1单唾液酸四己糖神经节苷脂钠iog谷氨酸lg磷酸氢二钠0. 94g磷酸二氢钠0. 15g氯化钠6. 8g0. lraol/L氢氧化钠适量注射用水加至lOOOmL共制备500支处方2单唾液酸四己糖神经节苷脂钠10g谷氨酸0. 5g
磷酸&二钠1. 12g磷酸二氢钠0. 18g氯化钠7. Og0. lmol/L氢氧化钠适JiC注射用水加至lOOOmL
共制备500支处方3单唾液酸四己糖神经节苷脂钠20g谷氨酸3g磷酸氢二钠2. 38g磷酸二氢钠0. 38g氯化钠16. 0g() lraol/L氢氧化钠适量注射用水加至2000mL 共制备 处方4 单唾液酸四己糖神经节苷脂钠 谷氨酸 磷酸氢二钠 磷酸二氢钠 氯化钠 0. lmol/L氢氧化钠 注射用水加至 _ 共制备 处方5 单唾液酸四己糖神经节苷脂钠 谷氨酸 磷酸氢二钠磷酸二氢钠 氯化钠 0. 1nio:l/'L氢氧化钠 注射用水加至共制备1000支处方6单唾液酸四己糖神经节苷脂钠10g谷氨酸0.6g磷酸氢二钠1. 52g磷酸二氢钠() 25g氯化钠8. 0g0. lmol/L氢氧化钠适量注射用水加至lOOOmL
1000支
10. 0g
0. 8g
1. 18g 0. 18g 8. 0g 适量 lOOOmL
500支
20g 4g
2. 18g 0. 35g 20. Og
适量 2000mL
共制备 处方7
单唾液酸四己糖神经节苷脂钠
谷氨酸
磷酸氢二钠
磷酸二氢钠
氯化钠
0. lmol,ZL氢氧化钠 注射用水加至
共制备
2()g 0. 5g
3. 14g 0. 57g 25. ()g
适量
500支
2000mL
1000支 2、制备工艺 1)按处方精密称定单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、谷氨酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢 钠、氯化钠； 2)取60°C (±5°C )注射用水约l-80()mL，加入称好的单唾液酸四己糖神经节苷脂 钠，缓慢搅拌至全溶； 3)依次加入称好的谷氨酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠，搅拌溶解。此时药液 的pH值约7. 5 ; 4)放至室温，再用注射用水定容至2()(X)mL ;
5)用0. 22 " m微孔滤膜过滤，
6)检测透明度；
7)检测含量； 8)在通过GMP认证的水针灌装车间取上述溶液灌装于2mL的安瓿中；
9)熔封； 10) 12(TC流通蒸气灭菌30分钟； 11)检漏； 12)灯检； 13)成品全检； 14)贴签; 15)包装入库。
权利要求
一种含有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物，其特征在于，单唾液酸四己糖神经节苷脂钠和谷氨酸之间的重量比在5∶1到60∶1之间。
2. 如权利要求i所述的含有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物，其特征在于，单唾液酸四己糖神经节苷脂钠和谷氨酸之间的重量比在io : i到40 : i之间。
3. 如权利要求2所述的含有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物，其特征在于，单唾液酸四己糖神经节苷脂钠和谷氨酸之间的重量比在15 : l到30 : i之间。
4. 如权利要求3所述的含有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物，其特征在于，单唾液酸四己糖神经节苷脂钠和谷氨酸之间的重量比为20 : i。
5. 如权利要求1 4所述的含有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物，其特征在于，所述的含有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物为注射液制剂。
6. 如权利要求5所述的注射液，其中辅料为等渗调节剂或pH调节剂。
7. 如权利要求6所述的注射液,其特征在于，所述的pH调节剂为磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和氢氧化钠。
8. 如权利要求6所述的注射液，其特征在于，所述的pH范围在7. 0 8. 0之间。
9. 如权利要求5所述注射液制剂的制备方法，其特征在于，按处方精密称定单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、谷氨酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠，取注射用水,加入称好的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠，缓慢搅拌至全溶，然后依次加入称好的谷氨酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠，搅拌，此时药液的PH值在7. 0 8. 0之间，定容，用0. 22"m微孔滤膜过滤，灌装，熔封，灭菌，冷却，贴签，包装，即得单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物注射液。
10. 如权利要求1 4任意一项权利要求所述的含有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物，在制备治疗血管性或外伤性中枢神经系统损伤和帕金森氏病的药物中的应用。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物，还提供了该组合物注射液制剂的制备方法，以及在制备用于治疗血管性或外伤性中枢神经系统损伤和帕金森氏病的药物中的用途。
文档编号A61P25/16GK101732331SQ20091000847
公开日2010年6月16日 申请日期2009年2月3日 优先权日2008年11月20日
发明者孟宪慧, 贾中新, 车冯升, 郭维城, 霍彩霞 申请人:北京四环制药有限公司;海南四环医药有限公司