专利名称：：一种杜仲总生物碱的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种杜仲总生物碱的应用。
背景技术：
：失眠是临床多发疾病，病因复杂，易反复发作。目前国内外治疗常用的西医西药镇静催眠药都有一定的副作用和依赖性。中医药的镇静催眠作用成为近年来研究的一个热点。杜仲(EucommiaulmoidesOliv.)，落叶乔木，属松科松属植物；小枝光滑，黄褐色或较淡，具片状髓，皮、枝及叶均含胶质；单叶互生，椭圆形或卵形，先端渐尖，基部广楔形，边缘有锯齿，幼叶上面疏被柔毛，下面毛较密，老叶上面光滑，下面叶脉处疏被毛；花单性，雌雄异株，与叶同时开放，或先叶开放，生于一年生枝基部苞片的腋内，有花柄，无花被；雄花有雄蕊610枚，雌花有一裸露而延长的子房，子房1室，顶端有2叉状花柱；翅果卵状长椭圆形而扁，先端下凹，内有种子l粒；花期45月；果期9月。杜仲是我国名贵的滋补中药材，现代医学证明杜仲具有调节血压、降低血糖、调节血脂、抗菌消炎、抑制肿瘤细胞生长、滋阴补肾、强壮筋骨、延缓衰老等多种功效。经过广泛系统研究证明，杜仲含有三萜类化合物，黄酮类化合物，木质素类化合物，生物碱及多糖类成分。近年来，已有研究表明杜仲皮及其籽、叶、花都有镇静催眠作用，但杜仲中的具体活性成分和作用机理还不清楚，到目前为止尚未见到有杜仲功能成分有效部位药物提取及其在镇静催眠领域应用的信息。
发明内容本发明的目的是提供一种杜仲总生物碱在镇静催眠领域中的应用。为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是杜仲总生物碱在制备具有镇静作用的组合物中的应用。杜仲总生物碱在制备具有催眠作用的组合物中的应用。杜仲总生物碱在制备用于治疗失眠、焦虑或者惊厥的组合物中的应用。所述的组合物包括药物组合物，食品组合物或者保健品组合物。所述的药物组合物的组成包括杜仲总生物碱和药物可接受的载体，其中杜仲总生物碱为药物活性成分，其在药物制剂组合物中占重量百分比为l99%。所述的杜仲总生物碱是从杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花和\或杜仲全株中提取分离纯化而成。所述的杜仲总生物碱包括杜仲脂溶性生物碱和杜仲水溶性生物碱。本发明从植物杜仲中提取分离纯化得到杜仲总生物碱，并对其进行在镇静催眠领域应用的研究，结果表明杜仲总生物碱具有显著的镇静催眠作用和抗惊厥作用，为研制开发具有催眠镇静作用的新型保健食品和新药的天然活性物质，可用于治疗失眠、焦虑或者惊厥等神经系统疾病，且无副作用和精神依赖性。本发明的杜仲总生物碱采用如下方法制备一、醇提取法(1)杜仲脂溶性生物碱和水溶性生物碱的提取将杜仲叶、皮、雄花或全株粉碎后用810倍量的95%(W/W)乙醇回流提取，将乙醇提取液减压浓縮至无乙醇，得乙醇提取物；将乙醇提取物用2%(W/W)盐酸或2%(W/W)硫酸溶解，除去酸水不溶物，酸水液用浓氨水或5%(W/W)碳酸钠或1%(W/W)氢氧化钠中和至pH为810，即产生沉淀，除去沉淀后用氯仿或乙醚或苯萃取，将萃取液减压浓縮回收溶剂即得杜仲脂溶性生物碱；将萃取后的碱水液pH调至6.57，用正丁醇萃取，减压蒸馏浓縮得到水溶性生物碱。(2)杜仲脂溶性生物碱盐的制备将杜仲脂溶性生物碱溶于氯仿，在氯仿溶液中滴加浓盐酸或冰醋酸或2mol/L的硫酸产生沉淀，继续滴加至不再产生沉淀，过滤得沉淀，用适量丙酮洗去多余的酸，即得杜仲脂溶性生物碱盐酸盐或醋酸盐或硫酸盐。二、酸水提取法(l)杜仲脂溶性生物碱和水溶性生物碱的提取将杜仲叶、皮、雄花或全株粉碎后用810倍量2%(W/W)盐酸或2%(W/W)硫酸浸泡或渗滤，滤出酸水液，酸水液用浓氨水或5%(W/W)碳酸钠或1%(W/W)氢氧化钠中和至pH810，产生沉淀，过滤得沉淀，将沉淀干燥后用适量乙醇或氯仿回流提取，过滤除去不溶物，滤液减压蒸干即得纯化的杜仲脂溶性生物碱；将提取脂溶性生物碱后的碱水液pH调至6.57，用正丁醇萃取，将萃取液减压蒸馏浓縮得到水溶性生物碱。(2)杜仲脂溶性生物碱盐的制备将杜仲脂溶性生物碱溶于氯仿，于氯仿溶液中滴加浓盐酸或冰醋酸或2mol/L硫酸产生沉淀，继续滴加至不再产生沉淀，过滤得沉淀，用适量丙酮洗去多余的酸，即得杜仲脂溶性生物碱盐酸盐或醋酸盐或硫酸盐。三、总生物碱提取和检识将杜仲叶、皮、雄花或者全株粉碎，石油醚处理后真空干燥。样品用5倍体积的1.5%(W/W)盐酸水溶液(pH=23)，多次浸泡，依次2天、1天、12小时、6小时，酸水液用氯仿萃取，回收酸水液经氢氧化钠调pH至1011，碱水液用氯仿多次萃取，减压蒸馏浓縮萃取液，得杜仲脂溶性生物碱，将其溶于氯仿，再滴加浓盐酸产生沉淀，继续滴加至不再产生沉淀，过滤得沉淀，将沉淀用适量丙酮洗涤除去多余的酸，即得杜仲脂溶性生物碱盐酸盐；将提取杜仲脂溶性生物碱后的碱水液pH调至6.57，用正丁醇浸泡碱水液24小时，然后萃取3次，减压蒸馏浓縮得到杜仲水溶性生物碱。将杜仲水溶性生物碱和杜仲脂溶性生物碱混合得到杜仲总生物碱。杜仲总生物碱样品经碘化铋钾试剂实验，碘--碘化钾试剂实验和硅钨酸试剂实验均呈阳性反应，证明其为生物碱类化合物。本发明为了提高脂溶性生物碱在水中的溶解度以便制成水溶性的产品，故将其制成盐，其与水溶性生物碱合并作为杜仲总生物碱应用。本发明的杜仲总生物碱，可以作为药物活性成分，制成具有镇静催眠作用的药物原料及常规的药用剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、注射剂或者其它在药剂学上可接受的任何剂型，用于治疗神经性疾病如失眠、焦虑或者惊厥；还可以作为添加剂，添加到各种饮料和食品中，制成具有镇静催眠作用的饮品、食品或者保健品。本发明的优点在于提供了从植物杜仲中分离得到的杜仲提取物，其原料来源于中国丰富的特有药用植物——杜仲，采用的提取分离工艺简单易行，质量可控，而且杜仲提取物的镇静作用显著，效果明显，对从中药中寻找新的镇静催眠药物有促进作用，对杜仲资源的综合利用和杜仲产业的发展壮大具有重要意义。具体实施例方式实施例1杜仲总生物碱的催眠镇静活性研究1、材料与设备1.1主要材料与试剂杜仲取自XX市XX县的杜仲种植基地；戊巴比妥钠，Sigma公司上海分装产品；尼可刹米、0.9%氯化钠溶液、地西泮，上海试一化学试剂有限公司。1.2主要仪器与设备GJ-1型光电计数仪，天津医疗器械修配厂。1.3试验动物昆明种小白鼠，普通级，2030g(雄性)，河南科技大学动物实验中心提供。2、试验方法2.1对小鼠自主活动的影响动物分组实验前将小鼠放入GJ-1型光电计数仪的活动箱内，开动记录仪记录5min内活动次数，选择自主活动数150次左右的正常小鼠。然后根据自主活动次数将小鼠随机分配到各实验组，实验前各组小鼠的自主活动数无显著性差异。实验分组昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只(1)阴性对照组；(2)总生物碱大剂量组；(3)总生物碱中剂量组；(4)总生物碱小剂量组；(5)阳性对照地西泮组。各组小鼠分别放入GJ-1型光电计数仪的活动箱内，然后开动记录仪记录5min内活动次数。阴性对照组灌胃给予生理盐水，阳性对照组按照5mg/kg的体积腹腔注射给予0.30%地西泮。杜仲总生物碱大、中、小各组灌胃量分别为1g/kg.Bw、0.5g/kg.Bw和0.33g/kg.Bw，根据小鼠体重灌胃给予，每日2次，连续3天，于末次给药30min后，测定小鼠自主活动次数。同时对小鼠状态进行观察，记录小鼠镇静率、30min内的入睡百分率。其中以小鼠静卧15秒以上为药物有镇静效果，以翻正反射消失lmin以上者为入睡。2.2对阈下剂量戊巴比妥钠镇静作用的影响戊巴比妥钠阈剂量实验取40只小鼠，随机分四组，每组10只分别腹腔注射戊巴比妥钠，剂量分别为25mg/kg.Bw、30mg/kg.Bw、35mg/kg.Bw、40mg/kg.Bw，记录小鼠的30min内的入睡率。阈下剂量实验取50只小鼠，随机均分为五组，分组和给药剂量同2.1。每天2次，给药3天。各组均于末次给药60min后按照小鼠体重注射阈下剂量戊巴比妥钠(25mg/kg.Bw)，记录30min内的入睡百分率、睡眠潜伏期和睡眠时间。以翻正反射消失lmin以上者为入睡，以注射戊巴比妥钠到翻正反射消失为睡眠潜伏期，以翻正反射消失到翻正反射恢复为睡眠时间。2.3对阈上剂量戊巴比妥钠镇静作用的影响方法同2.2试验，区别在于末次给药60min后，各组小鼠腹腔注射阈上剂量的戊巴比妥钠(40mg/kg.Bw)，记录睡眠潜伏期和睡眠时间。2.4抗惊厥作用方法同2.2试验，区别在于末次给药60min后按照小鼠体重注射各组小鼠均按照腹腔注射125mg/kg.Bw，给药后观察两个小时，记录小鼠惊厥潜伏期和惊厥小鼠的数量(以小鼠出现全身强直性惊厥为指标)。2.5统计学分析采用统计学软件SPSS11.0进行数据的统计学分析，杜仲总生物碱不同剂量组灌胃处理后引起的小鼠镇静作用采用单因素方差分析。药物组与对照组的差异显著性分析采用成对样本t检验。3、结果与分析3.1杜仲总生物碱对小鼠自主活动的影响_表l杜仲总生物碱对小鼠自主活动的影响_组别剂量(g/kg.Bw)动物数(只)活动次数(/5min)镇静率(％)入睡率(％)11035±9**A10090杜仲总生物碱0.51056±11*100800.331063±14*10050阴性对照生理盐水组一10157±3400阳性对照地西泮组0.0051089±26*1000结果如表l所示试验表明杜仲总生物碱能使90%的小鼠入睡，与阴性7对照组相比，显著降低小鼠的自主活动次数(PO.Ol)，镇静催眠效果优于市售安定地西泮。杜仲总生物碱的直接镇静催眠作用与剂量显著相关(p-0.035)，且随剂量的增加，镇静催眠作用增强。3.2杜仲总生物碱对阈下剂量戊巴比妥钠镇静催眠作用的影响戊巴比妥钠阈剂量确定试验中，不同剂量25mg/kg.Bw、30mg/kg.Bw、35mg/kg.Bw、40mg/kg.Bw，小鼠30min内的入睡率分别为10%、50%、90%、100%，根据实验结果，确定戊巴比妥钠阈下剂量为25mg/kg，阈上剂量为40mg/kg.Bw。表2杜仲总生物碱对阈下剂量戊巴比妥钠作用后小鼠睡眠的影响组别实验只数入睡只数入睡率(％)睡眠潜伏期(min)睡眠时间(min)总生物碱大剂量组1010907.83±3.3821.31±3.46总生物碱中剂量组1099011.83±6.3814.45士4.80总生物碱小剂量组1066013.71±6.9412.80±3.61阴性对照戊巴比妥钠1011010.508.00阳性对照地西泮101010012.42±5.9520.18±10.35如表2所示杜仲总生物碱与阈下剂量戊巴比妥钠有良好的协同作用，与阴性对照组相比，能明显的增加小鼠入睡率，縮短入睡潜伏期，延长睡眠时间。杜仲总牛物碱大、中、小三个剂量组的药效均能够达到与地西泮相近的药效。3.3杜仲总生物碱对阈上剂量戊巴比妥钠镇静催眠作用的影响表3杜仲总生物碱对阈上剂量戊巴比妥钠作用后小鼠睡眠的影响组别实验只数入睡只数入睡率(％)睡眠潜伏期(min)睡眠时间(min)总生物辆JU剂量组10101002.31±0.48*64.39±12,92**总生物碱中剂量组10101003.08±0.50*58.65±15.22**总生物碱小剂量i且10101004.26士0.3351547.71±8.34**A阴'&^照成巴比101010013.48±7.3315.95±謹阳'〖叙寸照地西泮10101005.67±2.08*66.40土1.61"如表3所示与阴性对照组相比，大、中、小剂量的杜仲总生物碱均能显著縮短阈上剂量戊巴比妥钠作用后小鼠的入睡潜伏期(P<0.05)，极显著的延长小鼠睡眠时间(P<0.01)。3.4杜仲总生物碱抗惊厥作用实验表4杜仲总生物碱对小鼠惊厥的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>如表4所示杜仲总生物碱可以有效的降低尼可刹米对小鼠的惊厥率，大剂量组杜仲总生物碱能够显著延长小鼠惊厥潜伏期(P<0.01)。作用效果与地西泮组相近，无统计学差异。综合上述四个实验的结果表明，本发明提出的杜仲总生物碱提取物能够显著抑制小鼠的自主活动，与戊巴比妥钠良好的协同作用，具有显著的镇静、催眠和抗惊厥的作用。实施例2保健药茶的制备杜仲总生物碱3克加入50千克茶叶(从红茶、绿茶和花茶中选择一种)，混合均匀，转入粉碎机使物料的颗粒度15-30目，添加复合甜味剂47千克，调匀后装入专用纸质泡袋，外套铝塑复合袋，封口，每袋5-8克，制成袋泡镇静催眠保健茶。实施例3保健冲剂的制备取提取分离得到的杜仲总生物碱，与适量果汁粉剂、糖等辅剂混合，过12目筛，75。C烘干，封装成袋，制成具有镇静催眠作用的各种冲剂，每袋含生物碱100毫克。实施例4口服液的制备取提取分离得到的杜仲总生物碱，加蒸馏水溶解并稀释至500毫升，加入0.05%苯甲酸，亦可加入适量调味剂，分装于5毫升或10毫升的小瓶中，压盖，即得。每瓶含总生物碱50-100毫克，用于治疗失眠、焦虑、惊厥等神经性疾病。实施例5口服药剂的制备用杜仲总生物碱加淀粉800克、糖粉200克、滑石粉20克，硬脂酸镁lwtn/c)，拌匀干燥60-80。C，制成颗粒，胶丸或片剂1000粒，每粒含原料药100毫克，用于治疗失眠、焦虑、惊厥等神经性疾病。实施例6胶囊剂的制备取提取分离得到的杜仲总生物碱，加入药用辅料淀粉和糊精适量，混匀，加70%乙醇做润湿剂，制粒，烘干，整粒，加入硬脂酸镁或滑石粉作润滑剂，混匀，装入胶囊，制成每粒含总生物碱150毫克的胶囊剂，用于治疗失眠、焦虑、惊厥等神经性疾病。实施例7注射剂的制备取提取分离得到的杜仲总生物碱，加注射用水900毫升、苯甲醇20毫升，用IO磅压力半小时热处理，冷冻24小时后，过滤，再加吐温-80IO毫升、用注射用水将总溶液加至1000毫升，搅匀、过滤，澄明，灌封，流通蒸气100°C，l小时灭菌，即制成生物碱注射剂，制成每250ml含总生物碱300毫克的静脉注射液，用于治疗失眠、焦虑、惊厥等神经性疾病。实施例8滴丸的制备取聚乙二醇6000(PEG6000)50克，加热到IOO"C熔融，加入提取分离得到的杜仲总生物碱，搅拌制备均匀的熔融液，恒温条件下将熔融液倾至滴丸机贮液缸中，滴液至液体石蜡中，冷却成形，洗去液体石蜡，干燥，即得。每粒滴丸重约30毫克，含总生物碱2.5毫克，用于治疗失眠、焦虑、惊厥等神经性疾病。实施例9分散片的制备取提取分离得到的杜仲总生物碱，加入磷酸二氢钙20克，乳糖5克，甘露醇15克，交联聚乙吡咯垸酮10克，硬脂酸镁0.3克，分别过80目筛，混匀，用70%(W/V)乙醇制软材，20目筛制粒，干燥，14目筛整粒，压片即得，片重约600毫克，每片含总生物碱50毫克，用于治疗失眠、焦虑、惊厥等神经性疾病。实施例IO口嚼片制备取提取分离得到的杜仲总生物碱，加入磷酸二氢钙5克，乳糖5克，甘露醇15克，硬脂酸镁0.3克，分别过80目筛，混匀，用70%(W/V)乙醇制软材，20目筛制粒，干燥，14目筛整粒，压片即得，片重约300毫克，每片含总生物碱50毫克，用于治疗失眠、焦虑、惊厥等神经性疾病。10权利要求1、杜仲总生物碱在制备具有镇静作用的组合物中的应用。2、杜仲总生物碱在制备具有催眠作用的组合物中的应用。3、杜仲总生物碱在制备用于治疗失眠、焦虑或者惊厥的组合物中的应用。4、根据权利要求l-3任一所述的应用，其特征在于所述的组合物包括药物组合物，食品组合物或者保健品组合物。5、根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述的药物组合物的组成包括杜仲总生物碱和药物可接受的载体，其中杜仲总生物碱为药物活性成分，其在药物制剂组合物中占重量百分比为199%。6、根据权利要求l-3任一所述的应用，其特征在于所述的杜仲总生物碱是从杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花和\或杜仲全株中提取分离纯化而成。7、根据权利要求l-3任一所述的应用，其特征在于所述的杜仲总生物碱包括杜仲脂溶性生物碱和杜仲水溶性生物碱。全文摘要本发明公开了一种杜仲总生物碱在制备具有镇静催眠作用的组合物中的应用，还公开了杜仲总生物碱在制备用于治疗失眠、焦虑或者惊厥的组合物中的应用，该杜仲总生物碱是从杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花和\或杜仲全株中经提取分离纯化而成。本发明从植物杜仲中提取分离纯化得到杜仲总生物碱，并对其进行在镇静催眠领域应用的研究，结果表明杜仲总生物碱具有显著的镇静催眠作用和抗惊厥作用，是研制开发具有催眠镇静作用的新型保健食品和新药的天然活性物质，可用于治疗失眠、焦虑或者惊厥等神经系统疾病，且无副作用和精神依赖性。文档编号A61P25/22GK101554397SQ20091006479公开日2009年10月14日申请日期2009年5月6日优先权日2009年5月6日发明者向进乐,朱文学,欣李,琳杜,樊金玲,白喜婷,磊罗,肖海芳申请人:河南科技大学