专利名称：：胸腺5肽的新用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种胸腺肽，尤其是涉及一种胸腺5肽的新用途。
背景技术：
：胸腺肽的临床应用始于20世纪70年代中期，其最主要的贡献是对胸腺依赖性疾病的治疗，它对于维持原发性免疫缺陷病，自身免疫疾病和癌症患者的免疫反应性，剌激其特异性淋巴细胞的活性起着主要作用，因此广泛应用于治疗系统性红斑狼疮、白塞氏综合征、类风湿性关节炎、重症感染、支气管哮喘、急慢性肝炎和肿瘤等疾病。另外，由于人类的老化明显地反映胸腺组织的萎縮和功能的衰竭，胸腺肽可以推迟一些老年性疾病的出现，因此应用胸腺肽抗衰老也有着极其广阔的前景([l]GoldsteinAL，GaraciE.CombinationTher即iess[M].NewYork:springer,1993:39-48;[2]刘治军，吕俊玲，田国涛，等.胸腺肽研究进展及临床应用[J].首都医药，2003，10(10):40;[3]BelaB，BelaBJ，StuartE，etal.Reviewofthymichormonesincancerdiagnosisandtreament[J].IntJI匪nopharma，2000，22(4):261)。随着研究的深入，人们已经将研究重点转向胸腺素中的单一肽，以期发现更有效的临床治疗药物。"胸腺5肽"(TP-5)是由精氨酸、赖氨酸、天门冬氨酸、缬氨酸及酪氨酸5种氨基酸组成，其结构如下H2N-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH，化学名称N-[N-[Na-[Na-L_精氨酰-L-赖氨酰]-L-a-天门冬氨酰]-L-缬氨酰]-L-酪氨酰。结构式Arg-Lys-Asp-Val-Tyr，分子式C30H49N909。TP-5具有免疫双向调节功能，具有诱导和促进T淋巴细胞及其亚群分化、成熟和活化的功能，调节T淋巴细胞的比例，使CD4+/CD8+趋于正常；调节和增强人体细胞免疫功能的作用，能促使有丝分裂原激活后的外周血中的T淋巴细胞成熟，增加T细胞在各种抗原或致有丝分裂原激活后各种淋巴因子(如a、Y干扰素、白介素2和白介素3)的分泌，增加T细胞上淋巴因子受体的水平。它同时通过对T辅助细胞的激活作用来增强淋巴细胞反应。此外可能影响NK前体细胞的趋化，该前体细胞在暴露于干扰素后变得更有细胞毒性，有利于发挥其治疗作用。目前已经有人应用胸腺5肽治疗伴免疫功能低下的II型糖尿病患者。I型糖尿病的重要原因与自身免疫疾病密切相关，其中主要是因为胰岛13细胞受到自身免疫细胞的攻击，造成抗原暴露，引起免疫系统进一步的反应，使得胰岛P细胞大量损失，正常胰岛素的分泌受到影响，血糖升高，形成糖尿病症状。STZ(链脲佐菌素)在I型糖尿病模型制备中已经得到广泛应用，大鼠在50mg/kg—次性注射情况下并可以造模成功，而小鼠则在相同剂量经过5次连续注射后基本达到造模目的，目前认为STZ的作用机理是通过使机体产生过量的NO，攻击破坏胰岛13细胞，引起胰岛细胞抗原暴露，激活机体免疫机制，大量巨噬细胞进入胰岛细胞从而加剧胰岛细胞的损伤，最后造成胰岛素分泌减少，引起血糖增高，诱发糖尿病。诱导的小鼠胸腺萎縮，肾脏明显肿大，并且血清抗氧化能力显著下降([4]刘长青，宋立江，蒋东升，等-链脲佐菌素稳定性对小鼠糖尿病模型的影响.实用预防医学，2008，15(3):896-897;[5]吴清洪，顾为望，袁进.链脲佐菌素诱导建立I型糖尿病大鼠模型.动物医学进展，2006，27(8):114-116)。近年来，糖尿病的病因和发病机理研究表明氧化应激与糖尿病的发生和发展密切相关([6]曹文彬等.抗氧化微量营养素防治糖尿病的研究进展.长春中医药大学学报，2006，22(2):73-74)，为了防止糖尿病的发生发展，人们对一些具有防治糖尿病作用的天然抗氧化物进行了系统的研究，发现它们通过表达不同的机制与作用环节打断氧化侵袭引致胰岛P细胞损害的恶性循环，从而为天然抗氧化治疗糖尿病提供了一个新的策略。至今未见有关胸腺5肽在调节血糖和保护胰岛的功能的相关报道。
发明内容本发明的目的在于提供一种胸腺5肽的新用途。通过动物实验证实，胸腺5肽能够明显增强小鼠的糖耐量作用，并且能够明显抵抗STZ诱导小鼠糖尿病的发生。组织切片发现，TP-5对于保护胰岛细胞结构有重要作用，因此胸腺5肽可用于维持正常糖代谢，保护胰岛细胞结构和功能，可用于制备预防糖尿病药物。通过动物体内实验证明，TP-5具有很好的抵抗STZ诱导的糖尿病的发生，表现出很好的抵抗糖尿病诱发因素的影响，并且具备增强糖耐量作用的功能，电镜超微结构结果证明，TP-5在保护胸腺结构和胰岛结构方面效果明显，并且在胰岛分泌方面也有促进作用，具体表现为胸腺细胞结构紧密，线粒体结构清晰，嵴状结构明显，而对照组胸腺结构出现排列不整齐，细胞凋亡现象明显，线粒体结构模糊，嵴状结构出现脱落，胰岛结构发现对照组圆形分泌颗粒致密颗粒出现空泡，而用药组致密颗粒多，空泡现象不明显。结果证明，TP-5在抵抗糖尿病的发生中具有重要保护作用，为今后开发糖尿病基因工程潜在药物奠定基础。图1为皮下注射TP-5对小鼠抵抗STZ诱导糖尿病的作用(TP-5与STZ同时注射)。图2为皮下注射TP-5对AUC的效果。图3为皮下注射TP-5对糖耐量的影响。图4为TP-5处理组胸腺电镜图。图5为TP-5处理组胸腺电镜图。图6为对照组胸腺电镜图。图7为对照组胸腺电镜图。图8为对照组胰岛电镜图。图9为TP-5处理组胰岛电镜图。具体实施例方式以下实施例将结合附图对本发明作进一步的说明。实施例所采用的材料与方法说明如下。实验取材和主要生物试剂如下试验动物为C57BL/6小鼠，(20±2)g，6-7周龄，雄性，SPF级，小鼠60只，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证号SCXK(沪)200320003。昆明鼠，雄性SPF级，由厦门大学动物研究中心提供。单笼喂养，室温1825t:，相对温度50%80%，每日光照12h，自由摄食、饮水。链脲佐菌素(str印tozotocinSTZ，SIGMA.USA)，批号053K1569;拧檬酸(成都鸿鹤化工试剂厂)，批号20040821。血糖检测仪为强生公司Llifscan产品及配套检测试纸。以下给出2个实施例。实施例1将20只C57BL/6小鼠平均分为2组，每组10只，1组皮下途径给TP_5，一组以相同体积柠檬酸缓冲液作为对照组。给药的同时腹腔注射STZ，每天一次，按50mg/kg剂量，连续4天，自注射STZ后，第5，20和30天尾静脉测血糖。结果见表1以及图1、49。表1皮下注射TP-5对小鼠抵抗STZ诱导糖尿病的作用(TP_5与STZ同时注射)(C57BL/6小鼠)项目注射STZ后各个时间段血糖值mmol/L5d20d30dcontrol9.36±2.2520.52±5.2816息3.56TP-5(10ng/只)8.42±0.879.38±0.87**11.06±2.57**:与对照组相比，P<0.05，差异显著；**:与对照组相比，P<0.01差异极显著。实施例2将20只昆明小鼠平均分为2组，每组10只，1组皮下途径给TP-5，一组以相同体积柠檬酸缓冲液作为对照组。连续14天，第14天进行糖耐量实验。结果见表2以及图2和3。表2皮下注射TP-5对增强小鼠糖耐量作用的效果(昆明小鼠)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>*:与对照组相比，P<0.05，差异显著；**与对照组相比，差异极显著。糖耐量实验按以下公式计算AUC=0.25X(BSvalueat0hour+4XBSvalueat0.5hours+3XBSvalueat2hours)。本实验所有数据通过SPSS(version13.0，SPSSInc.)软件进行分析处理。胸腺5肽由海南中和药业股份有限公司提供，lmg/瓶，选择昆明小鼠和C57BL/6小鼠为实验动物，皮下注射途径给药，验证该药的生理功能。TP-5的一种新功能的实验方法包括以下步骤1)通过皮下注射途径将胸腺5肽按10iig/只剂量给药；2)每隔5天称小鼠体重；3)14天后测小鼠空腹血糖及进行糖耐量实验；4)TP-5皮下注射的同时，小鼠经腹腔注射STZ，每天一次，按50mg/kg剂量，连续4天，自注射STZ后，在第5天，20天和30天测血糖。权利要求胸腺5肽用于制备预防糖尿病药物。全文摘要胸腺5肽的新用途，涉及一种胸腺肽。提供一种胸腺5肽的新用途。通过动物实验证实，胸腺5肽能够明显增强小鼠的糖耐量作用，并且能够明显抵抗STZ诱导小鼠糖尿病的发生。组织切片发现，TP-5对于保护胰岛细胞结构有重要作用，因此胸腺5肽可用于维持正常糖代谢，保护胰岛细胞结构和功能，可用于制备预防糖尿病药物。文档编号A61K38/08GK101693104SQ20091011261公开日2010年4月14日申请日期2009年10月1日优先权日2009年10月1日发明者周克夫,王世媛,韩伟申请人:厦门大学;厦门伯赛基因转录技术有限公司;