专利名称：新的肽衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及凝血酶的新的竟争性抑制剂，它们的合成，含有这些化合物作为活性成分的药用组合物，以及应用这些化合物作为抗凝血剂以预防和治疗血栓栓塞疾病，如静脉血栓形成，肺栓塞，动脉血栓，特别如心肌梗塞和脑血栓，通常的过凝固状态和局部凝固状态，例如，成血管细胞和冠状旁通手术后的状态。
本发明还涉及这些化合物用作合成丝氨酸蛋白酶抑制剂起始物的新用途。本发明进一步涉及丝氨酸蛋白酶中的新的结构片断。
血液凝固是包括在止血(即防止从损坏血管中失血)和血栓形成(即通过血块使血管病理性的闭塞)中的关键过程。血液凝固是一系列复杂酶反应的结果，其中之一的最后步骤是前凝血酶酶原转化成活性的凝血酶。
凝血酶在血液凝固中扮演重要角色。它激活血小板，它把血纤维蛋白原转化成血纤维蛋白单体，该单体自发聚合成丝，且它激活ⅩⅢ因子，该因子依次联接不溶的血纤维单体和聚合体，凝血酶进一步激活在正反馈反应中的Ⅴ因子和Ⅷ因子。因此期望凝血酶抑制剂通过抑制血小板，血纤维蛋白单体的形成和血纤维蛋白的固定成为有效的抗凝血剂。通过抑制正反馈机制，期望可选择地早期抑制导致血液凝固和血栓形成的链过程。
Blomback等人在J.Clin，Lab.Invest 24，增刊107，59，(1969)中首先报导了基于环绕血纤维蛋白原Aα链分裂点的氨基酸序列的凝血酶抑制剂。他提出Phe-Val-Avg序列(P9-P2-P1，本文中参见P3-P2-P1序列)是最好的抑制剂。
在US 4，346，078(Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar R T，优先权日1980，10，7)和S.Bajusz等人的Peptides 1983，Walterde Gruyter δ Co，Berlin，pp 643-647中，描述了凝血酶抑制剂H-DPhe-Pro-Agm，一种在P1-位在氨基烷基胍的二肽基衍生物。
S.Bajusz等人还在J.Med.Chem.1990，33，1729-1735中和在Ep-A2-0，185，390(Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar R T)(优先权日84，12，21)中报道了用精氨酸醛取代鲱精胺提供了一种具有非常高效力的凝血酶抑制剂。
据推断这些凝血酶抑制剂活性增加的原因，可能是由于醛与Ser-OH在酶活性位点形成半缩醛的相互作用。可以想到的，在二肽衍生物H-DPhe-Pro-Agm中，由于它不具有在P1-位带有羰基的氨基酸衍生物，所以不具有相同类型的相互作用。
在凝血酶抑制剂领域的其它工作中，基于用亲电性酮代替在P1-位醛的丝氨酸蛋白酶的抑制剂包括在下述E.N.Shaw等人(研究公司)US-4，318，904(优先权日80.4.25)描述了氯-甲基酮类的肽，例如H-Dphe-Pro-Arg-CH2CL。
M.Szelke和D.M.Jones在EP-A1-0，118，280(优先权日83.3.4)中描述了衍生于血纤维蛋白源A2链的P3-P2′戊肽序例的化合物，其中裂开的P1-P1′肽键被-CO-CH2-部分取代，形成相应肽的酮电子等排物。
M.Kolb等人(Merrell-Dow)Ep-A2-0，195，212(优先权日85.2.4)描述了α酮肽基酯和酰胺。
B.Imperiali和R.H.Abeles，Biochemistry 1986.25.3760描述了肽基氟烷基酮。
D.Schirlin等人(Merrell-Dow)EP-A1-0，362，002(优先权日88.9.1)描述了氟烷基酰胺酮。
P.Bey等人，(Merrell-Dow)EP-A2-0，364，344(优先权日88.9.1)描述了α，β，δ-三酮类化合物。
Ueda等人，Biochem.j.1990，265，539还描述了肽基氟烷基酮。
A.D Kettner等人(Du Pont)EP-A2-0，293，881(优先权日87.6.5.和88.4.6.)曾经报道了基于精氨酸的C-末端硼酸衍生物和它的异硫脲鎓盐类似物的凝血酶抑制剂。
本发明的目的在于提供对目标酶具有竞争性抑制活性，即，引起可逆的抑制作用的新的和有效力的凝血酶抑制剂。进一步的目的是获得有口服生物效果和在其它丝氨酸蛋白酶存在下选择性抑制凝血酶的抑制剂。本发明更进一步的目的是在治疗剂量下的稳定性，特效性，和低毒性。
化合物本发明化合物涉及描述修饰的亚-位点P9，P2和P1的人体血纤蛋原Aα链的肽序列P9H-Ala-Asp-Ser-Gly-Glu-Gly-Asp-Phe-Leu-Ala-P2P1↓P1′P2′P3′-Glu-Gly-Gly-Gly-Val-Arg-Gly-Pro-Arg-Val-
根据本发明已经发现通式Ⅰ的化合物本身或生理适合盐的形式，包括立体异构体，是有效的凝血酶抑制剂。
其中A表示亚甲基，或A表示亚乙基且所得5-元环可以带或可以不带有一或二个氟原子，在4位的羟基或桥氧基，或可以是或可以不是不饱和的，或A表示-CH2-O-，-CH2-S-，-CH2-SO-，其中杂原子官能团在4位，或A表示n-亚丙基且所得的6-元环可以或不可以在5位带有一个氟原子，羟基或桥氧基，或在4或5位之一带有两个氟原子或在4位和5位是不饱和的，或在4位带有1到4碳原子的烷基基团，或A代表-CH2-O-CH2-，-CH2-S-CH2-，-CH2-SO-CH2-;
R1代表H，具有1到4个碳原子的烷基，具有2-3个碳原子的羟烷基或R11OOC-烷基-，其中烷基具有1到4个碳原子且R11是H或具有1到4个碳原子的烷基或具有2-3碳原子的亚烷基，其分子内键连于R1中羰基的α位，或R1表示R12OOC-1，4-苯基-CH2-，其中R12是H或具有1到4碳原子的烷基，或R1表示R13-NH-CO-烷基-，其中烷基具有1到4碳原子且可以用1到4碳原子的烷基在羰基α位取代且其中R13是H或具有1到4碳原子的烷基或-CH2COOR12其中R12如上述定义，或R1表示R12OOC-CH2-OOC-烷基，其中烷基具有1到4个碳原子且可以用1到4个碳原子的烷基在羰基的α位取代，且其中R12如上述定义，或R1表示CH3SO2-，或R1表示R12OCOCO-其中R12如上述定义，或R1表示-CH2PO(OR14)2，-CH2SO3H或-CH2-(5(1H)-四唑基)其中R14是，单独的每次出现，H，甲基或乙基;
R2表示H或具有1到4碳原子的烷基或R21OOC-烷基，其中烷基具有1到4碳原子且可以在羰基的α位被取代，且α取代基是R22-(CH2)P-，其中P＝0-2且R22是甲基，苯基，OH，COOR21，且R21是H或具有1到4碳原子的烷基;
m是0，1或2，R3表示环己基且R4表示H，或
m是1且R3表示环己基或苯基和且R4与R1一起形成亚乙基桥，或m是1中R3和R4各自表示环己基或苯基基团，R5表示H或具有1到4碳原子的烷基n是2到6的整数;且B表示-N(R6)-C(NH)-NH2，其中R6是H或甲基基团，或B表示-S-C(NH)-NH2，或-C(NH)-NH2，除非另外具有指明，烷基表示直链或支链烷基，具有1到4碳原子的烷基基团是甲基，乙基，n-丙基，i-丙基，n-丁基，i-丁基，s-丁基和t-丁基。不饱和意指碳碳双键，缩写例示于本详说明书的后面。
根据本发明优选的方面涉及式Ⅰ的化合物，其中R1表示R11OOC-烷基-，其中烷基具有1到4碳原子且R11是氢。在这些化合物中，其中A是亚乙基且R5是H或具有1到4碳原子的烷基，特别是那些R5是H的化合物是优选的。
在式Ⅰ化合物中，其中R3是环己基，m是1或2，特别的m是1且R4是H结构的化合物是另一个优选的亚类。
其它的优选的化合物组是其中A是n-亚丙基且所得6-元环可以在或可以不在4位带有1到4个碳原子的烷基，和R5是H或具有1到4碳原子的烷基，特别是那些其中R5是H的化合物。
根据本发明另一优选的方面是n是3的化合物。
在α-氨基酸P2-位具有S-构型的式Ⅰ化合物是优选的化合物，在α-氨基酸P3位还具有R-构型的那些化合物是特别优选的化合物。
本发明的优选化合物是实施例序号 化合物1 H-(R)Cha-Pro-Agm2 Me-(R)Cha-Pro-Agm3 HO-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Agm4 HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Agm5iPrOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Agm6 HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Agm7 HOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Agm8 HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Agm/a9 HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Agm/b10 HOOC-(RorS)CH(nPr)-(R)Cha-Pro-Agm/a11 HOOC-(RorS)CH(nPr)-(R)Cha-Pro-Agm/b12 HOOC-(RorS)CH(Ph)-(R)Cha-Pro-Agm/b13 HOOC-(R，S)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-Agm14 HOOC-(RorS)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-Agm/a15 HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Agm16 EtOOC-CO-(R)Cha-Pro-Agm17 (R，S)Bla-(R)Cha-Pro-Agm18 HOOC-(RorS)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-Agm/b19 H-(R)Cha-Pro-Nag20nBu-(R)Cha-Pro-Nag21 HO-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Nag22 HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag23 EtOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag24nPrOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag25tBuOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag26 HOOC-CH2-OOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag27 H2N-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Nag28 HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Nag29 (HOOC-CH2)2-(R)Cha-Pro-Nag30 HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Nag
31 HOOC-CH2-(nBu)(R)Cha-Pro-Nag32 HOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Nag33 HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Nag/a34 HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Nag/b35 EtOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Nag36 HOOC-(RorS)CH(nPr)-(R)Cha-Pro-Nag/a37 HOOC-(R)CH(CH2-OH)-(R)Cha-Pro-Nag38 HOOC-(R，S)CH(Ph)-(R)Cha-Pro-Nag39 HOOC-(S)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-Nag40 HOOC-(R)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-Nag41 HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Nag42 EtOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Nag43 HOOC-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Nag44 EtOOC-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Nag45 HOOC-CO-(R)Cha-Pro-Nag46 MeOOC-CO-(R)Cha-Pro-Nag47 (R，S)Bla-(R)Cha-Pro-Nag48 HOOC-(R，S)CH(CH2COOH)-(R)Cha-Pro-Nag49 MeOOC-(R，S)CH(CH2COOMe)-(R)Cha-Pro-Nag50 HOOC-Ph-4-CH2-(R)Cha-Pro-Nag51 (HO)2P(O)-CH2-(R)Cha-Pro-Nag52 EtO(HO)P(O)-CH2-(R)Cha-Pro-Nag53 (EtO)2P(O)-CH2-(R)Cha-Pro-Nag54 HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Mag55 H-(R，S)Pro(3-Ph)-Pro-Agm56 H-(R，S)Pro(3-(trans)Ch)-Pro-Agm57 HOOC-CH2-(R，S)Pro(3-(trans)Ph)-Pro-Agm58 HOOC-CH2-(R，S)Pro(3-(trans)Ph)-Pro-Nag59 HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Agm60 HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-(R，S)Pic-Agm61 HOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-Pic-Agm62 HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pic-Agm/a63 HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pic-Agm/b64 HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-Agm
65 H-(R)Cha-Pic-Nag66 Me-(R)Cha-(R，S)Pic-Nag67 HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag68 MeOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag69iPrOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag70 HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-(RorS)Pic-Nag/b71 HOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-(R，S)Pic-Nag72 HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-(RorS)Pic-Nag/c73 HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-(RorS)Pic-Nag/d74 HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-Nag75 HOOC-CH2-(R)Cha-(R，S)Mor-Agm76 HOOC-CH2-(R)Cha-(RorS)Mor-Nag77 H-(R)Cha-Aze-Nag78 HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Nag79 H-(R)Cha-Pro(5-(S)Me)-Nag80 HOOC-CH2-(R)Cha-Pro(5-(S)Me)-Nag81 HOOC-CH2-(R)Cha-(RorS)Pic(4，5-dehydro)-Nag/b82 HOOC-CH2-(R)Cha-Pic(4-(S)Me)-Nag83 HOOC-CH2-(R)Cha-(R)Pic(4-(R)Me)-Nag84 HOOC-CH2-(R)Cgl-Pic-Nag85 H-(R)Hoc-Pro-Nag86 HOOC-CH2-(R)Hoc-Pro-Nag87 HOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Nag88 HOOC-CH2-(R)Dph-Pic-Nag89 HOOC-CH2-(R)Dch-Pic-Nag90 HOOC-CH2-(R)Cha-Pro(5-(R，S)Me)-Nag91 H-(R)Cha-Pic(4-(R)Me)-Nag92 HOOC-CH2-(R)Cha-Pic(4-(R)Me)-Nag93 HOOC-CH2-(R)Cha-Pic(6-(S)Me)-Nag
在这些化合物中，实例例序号为4，6，9，22，30，34，59，63，67，73，80和82的的化合物特别优选，且下述的化合物最优选30 HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Nag34 HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Nag/b67 HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag在上述化合物表中，字母/a，/b，/c和/d意味着在表示“R或S”的碳原子上实质上是纯的立体异构体。每个化合物立体异构体的鉴别可以参见本文的实验部分。“R，S”表示立体异构体的混合物。
在本发明进一步的方面涉及将下式化合物
作为合成丝氨酸蛋白酶抑制剂，且特别是合成凝血酶抑制剂的起始物的新的用途。上式化合物可以如上述应用或两者择一的在胍基上具有在δ氮上的单保护基或在δ-氮上或γ，δ-氮上的双保护基，优选的保护基如苯甲氧羰基。去甲胍基丁胺衍生物的保护通过现有技术中保护胍基化合物的已知方法进行。本文中该化合物命名为“去甲胍基丁胺”或“Nag”。除此之外，该化合物曾经在GB 1，599，324(Henkel，优先权日1977.2.5.)中，公开用作头发漂白加速剂。可是下式的结构片断
不曾在先公开用作药用活性化合物的结构单元。
作为上述结构单元的“去甲胍基丁胺”片断表现为丝氨酸蛋白酶抑制剂，且特别是有价值的凝血酶抑制剂。
医疗和制药上的用途本发明进一步的方面涉及治疗人体成动物有机体需要抑制凝血酶的症状。本发明化合物特别期望用于动物，包括人治疗或预防在血液和组织中的血栓和过凝固状态。其进一步地期望用于没有凝固状态信号时，不需要的过量凝血酶状况。在治疗和/和或预防疾病状态时，本化合物具有用途，这些症状包括静脉血栓形成和肺栓塞，动脉血栓，如心肌梗塞，不稳定绞痛，中风引起的血栓形成和外周动脉血栓。进一步的，本化合物期望用于预防动脉粥样硬化症如冠心病，脑动脉疾病和外周动脉疾病，进一步的，本化合物期望在血栓形成疾病中与血栓溶解物一起应用，特别是在心肌梗塞中。进一步的，本化合物期望用于预防血栓形成。经皮的转移鲁米那血管病(PTCA)和冠状旁通手术后的再闭塞，进一步的，本化合物期望用于预防显微外科后的再血栓形成，进一步的，本化合物期望用于人造器定和贲门瓣连接的抗血凝剂的处理。进一步的，本化合物期望用于在血透析和散布肌内凝血的抗血凝剂处理。
进一步期望的用途是冲洗用于患者体内的导管和医疗设备，并用作抗凝血剂在体外保存血液，血浆和其它血液制品。
药用的制剂式Ⅰ的化合物通常通过口服，直肠，皮，鼻或肠胃外的途径，以含有活性成份的自由碱或适于药用无毒酸加成盐药用制剂的形式，在适于药用的剂量形式下给药，这些酸加成盐例如，盐酸盐，溴酸盐，乳酸盐，乙酸盐，柠檬酸盐，P-甲苯磺酸盐，三氟乙酸盐和类似物。
通过现有技术的已知方法可以制备固体，半固体或液体配方的剂量形式。通常在配方中由0.1到99%重量的活性成分组成，更具体的活性成分占0.1到50%重量的配方将用于肠胃外给药，且活性成分为0.2到75%重量的配方适于口服给药。
在对人的治疗处理中，本发明化合物每天适当的经口服给药剂量大约为0.001-100mg/kg体重，且肠胃外给药剂量为0.01-50mg/kg体重。
制备本发明进一步的目的是化合物的制备方式。式Ⅰ化合物的制备是通过N-末端保护的氨基酸或二肽或预先形成的N-末端烷基化保护的二肽与下式化合物连接H2N-(CH2)n-X其中n如式Ⅰ定义且X是未保护或保护的胍基或保护的氨基，或可变换成氨基的基团，其中氨基随后可转移成胍基。
通过下述的方法之一进行连接方法Ⅰ通过常规的肽连接方法，用保护或不保护氨基胍或在烷基链的末端带有保护或掩蔽氨基的直链烷基胺制备N-末端保护的二肽的连接物，采用的常规的肽连接方法示于下式
其中R3，R4，R5，n，m和A如式Ⅰ定义，R6是H或烷基，W1是氨基保护基如叔丁氧羰基和苯甲氧羰基且X是-NH-C(NH)NH2，-NH-C(NH)NH-W2，-N(W2)-C(NH)NH-W2，-NH-C(NW2)NH-W2或-NHW2，其中W2是氨基保护基如叔丁氧羰基或苯甲氧羰基，或X是掩蔽氨基如叠氮化物，以提供保护的肽。根据原来采用的X-基团，可以且下述任何的方法制备最终化合物除去保护基(当X＝-NH-C(NH)NH2，-N(W2)-C(NH)NH-W2，-NH-C(NW2)NH-W2或-NH-C(NH)NH-W2)或选择性地使W1-基去保护(例如当X＝-NH-C(NH)NH-W2，-N(W2)-C(NH)NH-W2，-NH-C(NW2)NH-W2，在这种情况下W2必须和W1正交)然后通过N-末端氮的烷基化作用和去保护或选择性地去保护/去掩蔽烷基氨基末端官能团(X＝NH-W2，在这种情况下W2必须和W1正交或X＝掩蔽的氨基基团，如叠氮化物)接着采用常规的方法通过胍化反应，得到游离的胺和去保护的W1-基团。
方法Ⅱ通过常规肽连接方法，用保护或不保护氨基胍或在烷基链的末端带有保护或掩蔽氨基的直链烷基胺制备N-末端保护的氨基酸的连接物，采用的常规的肽连接方法示于下式
其中W1，A，R5和X如上述定义，接着使W1-基团去保护并与N-末端的氨基酸以被保护的形式连接，得到描述于方法Ⅰ或Ⅲ中的被保护的多肽，依赖于用于连接程的N-末端氨基酸的氮上的选择的取代模式，然后根据方法Ⅰ或方法Ⅲ继续合成得到最终的肽。
方法Ⅲ
通过常规的连接方法连接预先形成的N-末端烷基化和被保护二肽，与保护或不保护的氨基胍或在链末端带有保护或掩蔽氨基的直链烷基胺，采用的常规的肽连接的方法示于下式
其中R2，R3，R4，R5，n，m，A和X如上述定义，除了R2不是H和W3是酰基保护基如三氟酰基。
根据原来采用的X-基团可以用下述的任何方法制备最终化合物保护基的去除(当X＝-NH-C(NH)NH2，NH-C(NH)NH-W2，-N(W2)-C(NH)NH-W2NH-C(NW2)NH-W2或NH-W2)，或末端烷基氨基官能团选择性的去保护/去掩蔽(X＝NH-W2，在这种情况下W2必须和W3正交或X＝掩蔽的氨基如叠氮化物)接着通过胍化反应将W3基团去保护。
图Ⅰ是实施例3-18，20-21，24-28，30-34，36-40，43-49，51-53，57-64和67-93的图解。
图Ⅱ是实施例55，56，65和66的图解。
图Ⅲ是实施例1和2的图解。
图Ⅳ是实施例19的图解。
图Ⅴ是实施例54的图解。
图Ⅵ是实施例22，23，29，35，41，42和50的图解。
一般的实验方法在BRUKER AC-P 300和BRUKER AM 500分光计上对1H NMR和13C NMR进行测定，前者操作1H题率为500.14MHz和13C频率为125.76MHZ且后者1H和13C的频率分别为300.13MHz和75.46MHz。
10-50mg样品溶解于0.6ml下述任一的溶剂中;CDCl3(同位素纯度＞99.8%Dr.Glaser AG Basel)，CD3OD(同位素纯度＞99.95%Dr.Glaser AG Basel)，或D2O(同位素纯度＞99.98%Dr.Glaser AG Basl;)。
在CDCl3和CD3OD中1H和13C的化学位移值与作为外标的四甲基甲硅烷相关。在D2O中1H的化学位移与3-(三甲基甲硅烷基)-d4-丙酸钠盐相关且在D2O中13C的化学位移参见相关的1，4-二噁烷(67.3ppm)，对照物均作为外标，在一些情况下会引起外标的标准与内标相比很小的区别位移，但是，在1H化学位移的区别小于0.02ppm中且在13c且小于0.1ppm。
含有脯氨酸残基的肽序列的1H NMR光谱中，经常存在两个记录响应，这是由于存在作用于环绕酰胺链旋转的构象，此时脯氨酸为肽链的N末端。上述构象命名为顺和反。在本化合物(R)CHa-Pro-和-(R)Cha-Pic序列中，由于一个构象是占优势的构象(＞90%)，时常出现顺-反平衡，在这些情况中只报道主要旋转异构体的化学位移。
在商品化的Merck Silicagel 60F254涂层的玻璃板或铝板上进行薄层色谱，用联合的UV-光观察。接着喷布通过混合372ml EtOH(95%)，13.8ml浓H2SO4，4.2ml的浓乙酸和10.2ml的P-甲氧基苯甲醛或磷钼酸试剂(5-10W.T%的EtOH溶液)制备的溶液，并加热。
在N2压下，在Merck Silicagel 60(40-63mm 230-400目)上进行闪色谱。
在Waters M-590仪器上进行反相高效液谱(在实施例表示为RPLC)，该设备上装有具有不同维的三反相Kromail 100，C8柱(EKa-Nobel)用于分析，(4.6mm×250mm)，半制备(1″×250mm)和制备(2″x500mm)色谱在266nm鉴定。
在Leybold-Heraens，model Lyovac GT 2，设备上进行冷冻。
保护方法Boc-(R)Cha-OH在H-(R)Cha-OH，21.55g(125.8mmol)的130ml 1M NaOH和65ml THF溶液中加入30g(137.5mmol)的(BoC)2O，并在室温下搅拌混合物4.5h。蒸发掉THF并追加150ml水。用EtOAc洗涤碱溶液相两次，然后用2M KHSO4酸化，并用3×150ml EtOAc提取。合并的有机相用水，盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂得到30.9g(90.5%)白色固体的标题化合物。
Z-(R)Cha-OH
采用描述于Bodanszky M.和Bodanszky A“The Practice of Peptide synthesis”，Springer-Verlag 1984，p.12，中的相同方法，用H-(R)Cha-OH作为起始物。
Boc-(Me)Phe-OH采用如Me-(R)Phe-OH的相同方法，在Me-(R)Phe-OH制备。
Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-OH在充分搅拌的2.0g(8，8mmol，1eq.)H-(R，S)Pro(3-反)Ph)-OH X HCl(如描述于J.Org.Chem.，55，P.270-75，1990和J.Org.Chem.，39，1710-1716，1974中的方法制备)的17.6ml 1N NaOH，12ml H2O和12ml THF的溶液中，在+5℃加入2.33g(Boc)2O(10.7mmol，1.2eq.)。使反应到达室温并连续搅拌另外的18小时。除去有机溶剂并在残留物中加入50ml H2O。用2×50ml的EtOAc洗涤碱性水相并用2M KHSO4酸化(PH大约1)。酸化的水相用4×75ml EtOAc提取且合并的有机相用1×40ml水，1×40ml盐水洗涤并干燥。蒸发溶剂得到2.0g(78%)的白色固体的纯产物。
1H-NMR(CDCl3，500MHz，两旋转异构体的混合物)δ1.4和1.5(2s，9H)，2.0-2.1(m，1H)，2.3-2.4(m，1H)，3.45-3.88(m，3H)，4.3和4.45(2d，1H)，7.2-7.4(m，5H)。
Boc-(R，S)Pro(3-Ph)-OH制备如上述，起始于顺/反H-(R，S)Pro(3-Ph)-OH的混合物。
Boc-(R)Dph-OH根据描述于K.Hsich等人J.Med.Chem.，32，p.898(1989)的方法，从H-(R)Dph-OH制备。
Boc-(R)Hop-OH采用所述的制备Boc-(R)Cha-OH的相同方法，从H-(R)Hop-OH制备。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.45(s，9H)，2.00(m，1H)，2.22(m，1H)，2.75(bt，2H)，4.36(bs，1H)，5.05(bs，1H)，7.15-7.33(m，5H)。
去保护方法(a)被保护的肽溶于EtOH(95%)中并在过量的TFA或HOAc(＞2eq.)存在下，在大气压力下用5%Pd/c充分氢化大约1-4h。过滤掉催化剂，蒸发溶剂，冷冻干燥后(H2O)分离出如白色粉末状的最终的肽(TFA或HOAc盐)。
(b)除了将EtOH/H20(ca∶5/1)用作溶剂外，与(a)中的相同。
(c)除了将MeOH用作溶剂，与(a)中的方法相同。
(d)除了将2M HCl用作酸得到HCl盐，与(a)中的方法相同。
(e)酯水解，列示于下述实施例EtOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x 2 HOAc(0.4mmol)溶于1.5mlMeOH中并在室温下加入1.2ml(1.2mmol)的1M NaOH。3h后蒸发除去甲醇并加入过量HOAc到残留物中，冷冻干燥混合物并用RPLC纯化(CH3CN/0.1M NH4OAc(70/30))。从水中冷冻干燥后，获得粉末纯产物，产率为73%。
t-丁基酯裂解，列示于下述实施例将t-丁基酯溶于过量的TFA中。在室温下搅拌2h后，蒸发TFA。在水-乙醇中用活性碳活化处理以提纯，接着从水中冷冻干燥得到所需的化合物。
起始物的制备H-Pic-OEtxHClL-哌可酸4.0g(0.031mmol)在100ml abs乙醇中浆化，通入HCl(g)，短暂地冒泡，直到获得澄清溶液。溶液在冰浴中冷却，用超过15min的时间滴加入17ml的亚硫酰氯。除去冰浴，使混合物回流2.5小时，除去溶剂，获得等量的产物的盐酸盐。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ1.33(t，3H)，1.8-2.1(m，5H)，2.3-2.5(m，1H)，3.1-3.3(m，1H)，3.5-3.7(m，1H)，4.14(dd，1H)，4.44(q，2H)。
H-Pic-OMexHCl用上述的H-PIC-OEt x HCl的相同方式制备，用MeOH代替了EtOH。
H-Aze-OEtxHCl如上述H-Pic-OEt x HCl的相同方法，从H-Aze-OH制备。
H-Pic(4-(S)Me-OEtxHCl如上述H-Pic-OEt x HCl的相同方法，从H-Pic(4-(R)Me)-OH(从Synthelec，Lund，Sweden购买到)制备。
H-(R)Pic(4-(R)Me)-OEtxHCl如上述H-PIC-OEt x HCl的相同方法，从H-Pic(4-(S)Me)-OH(从Synthelec，Lund，Sweden购买到)制备。
H-(R)Dph-OH
通过A.Evans等人，在JACS，112，4011(1990)中提供的一般方法制备。
H-(R，S)Pic(4.5-dehy dro)-OEt将H-(R，S)Pic(4.5-dehydro)-OH，3.05g(18.1mmol)(根据Burgstahler等人，J.Org.Chem，25，4.p.489-92(1960)的方法制备)，溶于75ml EtOH/HCl(饱和)中，将混合物回流5小时，蒸发溶剂并把残留物溶于水中，用氢氧化钠(水溶液)碱化并用乙酸乙酯提取三次。干燥(Na2SO4)，小心蒸发得到2.05g(71%)的标题产物。
1H-NMR CDCl3)δ1.28(t，3H)，1.88(bs，NH)2.2-2.4(m，2H)，3.45(bs，2H)，3.57(dd，1H)，4.21(q，2H)，5.68-5.82(m，2H)。
Boc-(R)Cgl-OH在5Mpa和甲醇中将Boc-(R)Pg-OH用5% Rh/Al2O3充分氢化。过滤并蒸发溶剂，得到不需要进一步提纯的标题产物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ0.9-1.7(m，20H)，4.0-4.2(m，1H)5.2(d，1H)。
Boc-(R)Dch-OHBoc-(R)Dph-OH，0.75g(2.2mmol)溶于25ml的MeOH中并加入催化量的5% Rh/Al2O3。将混合物在5Mpa，50℃氢化40h，过滤并蒸发得到0.72g(93%)的标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ0.92-2.0(m，32H)，它的1.45(bs，9H)，4.55(bd)和4.9(bd);两个旋光体结合的全部1H，5.7-6.1(宽，NH)。
H-(R)Pro(5-(S)Me)-OMe根据B.Gopalan等人，在J.Org.Chem.，51，2405，(1986)中提供的方法制备。
H-Mor-OH根据K.NaKa jima等人，Bull.Chem.Soc.Jpn.，51(5)，1577-78，1978和ibid 60，2963-2965，1987中的方法制备。
H-Mor-OEtxHCl如H-Pic-OEt x HCl的相同方式，从H-Mor-OH制备。
Boc-(R)Cha-OSuBoc-(R)Cha-OH(1 eq.)，HOSu(1.1eq)和DCC或CME-CDI(1.1 eq)溶于乙腈(大约2.5ml/mmol酸)中，并在室温下搅拌过夜。过滤掉在反应中形成的沉淀，蒸发掉溶剂并在真空干燥产物。(当CME-CDI用于反应中，残留物在蒸发掉CH3CN后，溶于EtOAc中，用水洗涤有机相并干燥。蒸发溶剂得到标题化合物)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3，2旋光异构体约1∶1比例)δ0.85-1.1(m，2H)，1.1-1.48(m，4H)，1.5-1.98(m，16H;它的1.55(bs，9H)，2.82(bs，4H)，4.72(bs，1H较多的旋光异构体)，4.85(bs，1H，较少的)。
Boc-(Me)(R)Cha-OSu(ⅰ)Boc-(Me)(R)Cha-OH11.9g(42.6mmol)Boc-(Me)(R)Phe-OH 150ml在MeOH中的溶液，在0.28Mpa用5% Rh/Al2O3充分氢化24h。过滤掉催化剂并蒸发溶剂，得到白色固体的产物(95%产率)，其不需要进一步提纯用于下面的步骤。
1H-NMR(500MHz，CDCl3，两个旋光异构体的混合物约1/1)。δ0.8-1.1(m，2H)，1.1-1.9(m，20H它的1.47和1.45(s，9H))，2.82和2.79(s，全部3H)，4.88和4.67(m，全部1H)。
(ⅱ)Boc-(Me)(R)Cha-OSu如所述的制备Boc-(R)Cha-OSu的相同方式，从Boc-(Me)(R)Cha-OH制备。
Boc-(R)Cha-Pro-OSu(ⅰ)Boc-(R)Cha-Pro-OHH-(S)Pro-OH(680mmol)溶于0.87M氢氧化钠(750ml)中，用20分钟滴加溶于DMF(375ml)中的Boc-(R)Cha-OSu(170mmol)。在室温下搅拌反应混合物20h。酸化混合物(2M KHSO4)并用乙酸乙酯提取三次。合并有机层用水洗涤三次用盐水洗涤一次。用硫酸钠充分干燥后并蒸发溶剂，把浆状油溶于二乙基醚中，蒸发溶剂最后真空干燥产物得到白色粉末状的Boc-(R)Cha-Pro-OH，其产率几乎等量。
1H-NMR(500MHz，CDCl3，较少旋光异构体10%)δ0.8-1.05(m，2H)，1.05-1-55(m，15H;它的1.5(bs，9H))，1.55-1.8(m，5m)，1.8-2.15(m，3H)，2.47(m，1H);3.48(m，1H)，3.89(m，1H)，4.55(m，2H)，5.6(m，1H);较少旋光异构体单峰2.27(m，1H)，3.58(m，1H)，4.33(m，1H)，5.0(m，1H)(ⅱ)Boc-(R)Cha-Por-OSu采用所述的制备Boc-(R)Cha-OSu-的相同方式，从Boc-(R)Cha-Por-OH制备。
1H-NMR(500MHz，CDCl3，2旋光异构体，5∶1比例)δ0.78-1.05(m，2H)，1.05-1.83(m，20H;它的1.43(bs，9H))，1.83-2.26(m，3H)，2.32(m，1H)，2.72-2.9(m，4H)，3.2(m，1H，较少的旋光体)，3.52(m，1H，较多的)，3.68(m，1H，较少的旋光异构体)，3.89(m，1H，较多的)，4.31(bq，1H，较少的旋光异构体)，4.56(bq，1H，较多的)，4.71(bt，1H，较多的旋光异构体)，4.93(bt，1H，较少的)，5.22(bd，1H，较多的旋光异构体)，5.44(bd，1H，较少的)。
Z-(R)Cha-Pro-OSu采用如Boc-(R)Cha-Por-OSu的相同方法，从Z-(R)Cha-OH制备。
Boc-(R)Cha-Pic-OSu(ⅰ)Boc-(R)Cha-Pic-OEt将Boc-(R)Cha-OH，6.3g(0.023mol)溶于150ml的CH2Cl2中。在冰浴中使溶液冷却加入6.3g(0.047mol)的N-羟苯甲三唑和11.2g(0.0265mol)的CME-CDI。15分钟后除去冰浴，在室温下搅拌反应混合物4h。蒸发除去溶剂残留物溶于150ml的DMF中并在冰浴中冷却。加入H-Pic-OEtxHCl，4.1g(0.021mol)通过加入N-甲基吗啉将PH调节至大约9。15min后除去冰浴，搅拌反应混合物3天。蒸发溶剂并把残留物溶于乙酸乙酯中，用稀KHSO4(aq)，NaHCO3(aq)和水洗涤，干燥有机层(Na2SO4)并蒸发得到7.7g(89%)的Boc-(R)Cha-Pic-OEt，它不必进一步提纯即可应用。1H-NMR(500MHz，CDCl3，2旋光异构体，3∶1比例)δ0.7-1.0(m，2H)，1.1-1.9(m，29H;它的1.28(t，3H))，1.45(bs，9H)，2.01(bd，1H，较多的旋光异构体)，2.31(bd，1H)，2.88(bt，1H，较少的)，3.30(bt，1H，较多的)，3.80(bd，1H，较多的)，4.15-4.3(m，2H)，4.5-4.7(m，2H较少的)，4.77(bq，1H，较多的)，4.90(bq，1H，较少的)，5.28(bd，1H，较多的)，5.33(bd，1H，较多的)。
(ⅱ)Boc-(R)Cha-Pic-OHBoc-(R)Cha-Pic-OEt，5.6g(0.014mol)，与100ml THF，100ml水和7g的LiOH混合。在室温下搅拌混合物过夜。蒸发TFH水溶液用KHSO4(aq)酸化异用乙酸乙酯提取三次。合并有机相用水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发得到4.9g(94%)的Boc-(R)Cha-Pic-OH，它不需要进一步提纯即可应用，化合物可从二异丙基醚/己烷中重结晶。
1H-NMR(500MHz，CDCl3，2旋光异构体，3.5∶1比例)δ0.8-1.1(m，2H)，1.1-2.1(m，27H;它的1.43(s，9H，较多的旋光异构构)，1.46(S，9H较少的))，2.33(bd，1H)，2.80(bt，1H，较少的)，3.33(bd，1H，较少的)，3.85(bd，1H，较多的)，4.57(bq，1H，较少的)，4.68(m，1H，较少的)，4.77(bd，1H，较多的)，5.03(bs，1H，较少的)，5.33(bd，1H，较多的)，5.56(m，1H，较多的)。
(ⅲ)Boc-(R)Cha-Pic-OSu将Boc-(R)Cha-Pic-OH(1g，2.6mmol)在室温下溶解于DMF(15ml)中，然后冷却到-18℃，在添加反应物的过程中保持该温度。加入羟基琥珀酸亚胺(0.60g 5.2mmol)并搅拌反应混合物几分钟直到结晶溶解。预先冷却的溶于DMF(10ml)中的二环己基(0.56g，2.7mmol)滴加入反应混合物。几分钟后，把在-18℃的反应混合物倒入20℃的水浴中2h，并伴随搅拌。蒸发溶剂，加入乙酸乙酯(40ml)并过滤掉沉淀的脲。有机相用一次水，二次0.3M KHSO4，二次稀NaHCO3，一次水，一次盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂，真空干燥产物，得到1.16g(93%)的产物。根据1H-NMR，产物含有二种立体异构体(异构体在Pic，S/R)，比例为95/5。
1H-NMR(300MHz CDCl3，较多的非对映体)δ0.7-2.0(m，27H;它的1.46(bs，9H)，2.29(bd，1H)，2.85(bs，4H)，3.40(m，1H)，4.5-4.8(m，1H)，5.1-5.4(m，1H)，5.70(bd.1H，较多的)。
Boc-(R)Cha-Mor-OSu采用如Boc-(R)Cha-Pic-OSu的相同方法从H-Mor-OEt x HCl制备，除了在形成OSu-酯中把CH3CN用作溶剂，代替DMF。
Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OSu采用如Boc-(R)Cha-Pro-OSu的相同方法，从Boc-(Me)-(R)Cha-OH制备。
Boc-(Me)(R)Cha-Pic-OSu采用如Boc-(R)Cha-Pic-OSu的相同方法，从Boc-(Me)(R)Cha-OH制备。
Boc-(R，S)Pro(3-Ph)-Pro-OSu采用如Boc-(R)Cha-Pro-OSu的相同方法，从Boc-(R，S)Pro(3-Ph)-OH制备。
Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-Pro-OSu(ⅰ)Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-Pro-OBn在室温下在1.0g的Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-OH(3.43mmol，1eq.)，1.04g的H-Pro-OBn x HCl(4.29mmol，1.25eq.)，0.04g的HOBt(0.24mmol，0.07eq.)的15ml DMF浆液中加入1.83g的CME-CDI(4.29mmol，1.25eq，)和0.525ml的NMM(4.73mmol，1.38eq.)搅拌附加的4天后蒸发掉溶剂，残留物用200ml EtOAc吸收，有机相用2×40ml的水，2×25ml的1M KHSO4，2×25ml的(M NaOH，2X25ml的H2O洗涤并干燥(MgSO4)。蒸发溶剂并通过闪色谱(CH2Cl2/MeOH，97/3)得到纯产物(44%产率)如计算1∶1对映体的混合物。
(ⅱ)Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-Pro-OH从在前步骤中得到的苯甲基酯，通过在大气压力下，用5%Pd/c在乙醇中充分氢化4小时而移去，过滤并蒸发得到纯产物，如计算为1∶1等量对映体的混合物。
1H-NMR(CDCl3，500MHz，二个非对映体每个由二个旋光异构体组成)δ1.3-2.4(m+4s来自Boc基，全部(4H)，2.5-2.9(m，全部1H)，3.2-3.9(M，全部5H)，4.3-4.65(m，全部2H)，7.2-7.5(m，5H)。
(ⅲ)Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-Pro-OSu根据所述的制备Boc-(R)Cha-OSu的方法，从Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-Pro-OH制备。
Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ch)-Pro-OSu(ⅰ)Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ch)-Pro-OH在0.34Mpa下，Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-Pro-OH用5%Rh/Al2O3在甲醇和少量的HOAr中充分氢化7天。过滤掉催化剂，蒸发溶剂并用闪色谱(CH2Cl2/MeOH，94/6)得到白色固体(非对映体的混合物)。
(ⅱ)Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ch)-Pro-OSu根据所述的制备Boc-(R)Cha-OSu的方法，从Boc-(R，S)Pro(3-(反)CH)-Pro-OH制备。
Boc-(R)Hoc-Pro-OH(ⅰ)Boc-(R)Hoc-OH将Boc-(R)Hop-OH，3.2g(11.46mmol)溶于甲醇(75ml)中。加入铑/活性铝氧化物(Rh/Al2O3)，0.5g，混合物在0.41Mpa的氢气压力下搅拌18h。催化剂通过硅藻土过滤掉并蒸发溶剂得到几乎等量的产物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.90(m，2H)，1.08-1.33(m，6H)，1.43(s，9H)，1.60-1.74(m，6H)，1.88(bs，1H)，4.27(bs，1H)。
(ⅱ)Boc-(R)Hoc-OSu采用所述的制备Boc-(R)Cha-OSu的方法，从Boc-(R)Hoc-OSu制备。
(ⅲ)Boc-(R)Hoc-Pro-OH采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pro-OH的方法，从Boc-(R)Hoc-OSu制备。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.80-0.94(m，2H)，1.05-1.36(m，7H)，1.36-1.48(bs，9H)，1.48-1.78(m，7H)，1.98-2.14(m，2H)，2.34(m，1H)，3.48(m，1H)，3.85(m，1H)，4.43(m，1H)，4.52(bd，1H)，5.26(bd，1H)，较少的旋转异构体的信号出现在δ1.92，2.25，3.58，4.20和4.93。
Boc-(R)Hoc-Pic-OH
(ⅰ)Boc-(R)Hoc-Pic-OMe采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-OEt的方法，从Boc-(R)Hoc-OH和H-Pic-OMe X HCl制备。
(ⅱ)Boc-(R)Hoc-Pic-OH采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-OH的方法，从Boc-(R)Hoc-Pic-OMe制备。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.82-0.97(m，2H)，1.10-1.36(m，7H)，1.36-1.50(bs，9H)，1.50-1.82(m，11H)，2.35(bd，1H)，3.28(bt.1H)，3.85(bd，1H)4，63(m，1H)，5.33(bs，1H)，5.44(bd，1H)，较少的旋转异构体的信号出现在δ1.88，2.80，4.25，4.55和4.97。
Boc-(R)Cha-Aze-OH采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-OH的相同方法，从H-Aze-OEt X HCl制备。
Boc-(R)Cha-Pic(4-(S)Me)-OH采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-OH的相同方法，除了用CH2Cl3作溶剂，从H-Pic(4-(S)Me)-OEt X HCl制备。
Boc-(R)Cha-(R)Pic(4-(S)Me)-OSu(ⅰ)Boc-(R)Cha-(R)Pic(4-(R)Me)-OEt采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-OEt的相同方法，从H-(R)Pic(4-(R)Me)-OEt X HCl制备。
(ⅱ)Boc-(R)Cha-(R)Pic(4-(R)Me)-OH采用去保护的(e)在上述的产物(ⅰ)上制备。
(ⅲ)Boc-(R)Cha-(R)Pic(4-(R)Me)OSu
采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-OSu的相同方法，从Boc-(R)Cha-(R)Pic(4-(S)Me)-OH制备。
Boc-(R)Cha-(R，S)Pic(4.5-去氢)-OH根据所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-OH的相同方法，从H-(R，S)Pic(4.5-去氢)-OEt制备。
Boc-(R)Cgl-Pic-OH(ⅰ)Boc-(R)Cgl-Pic-OMe特戊酰氯(1.000ml，8.1mmol)加入到Boc-(R)Cgl-OH(2.086g，8.1mmol)和三乙基胺(1.13ml，8.1mmol)的甲苯(25ml)和DMF(5ml)的溶液中。在冰浴的温度下随后加入H-Pic X HCl(1.46g，8.1mmol)和三乙基胺(1.13ml，8.1mmol)在DMF(20ml)中的混合物。使反应混合物缓慢升至室温且24h后用水稀释并用甲苯提取，用0.3M KHSO4，10% Na2CO3和盐水洗涤后，真空除去溶剂，得到2.52g(81%)元色油，它不需要进一步提纯即可使用。
1H-NMR(500MHz，CDCl3，2旋转异构体，5∶1比例)δ0.8-1.8(m，25H)，2.25(d，1H)，2.75(t，1H，较少的旋转异构体)，3.3(t，1H)，3.7(s，3H)，3.85(d，1H)，4.3(t，1H，较少的旋转异构体)，4.5-4.6(m，1H)，5.25(d，1H)，5.30(d，1H)。
(ⅱ)Boc-(R)Cgl-Pic-OH根据水解Boc-(R)Cgl-Pic-OEt的方法，用上述(ⅰ)的产物制备。产物用二-异丙基醚和己烷结晶。
1H-NMR(500MHz，CDCl3，2旋转异构体，5∶1比例)δ0.8-1.8(m，25H)，2.3(d，1H)，2.8(t，1H，较少的旋转异构体)，3.3(t，1H)，3.9(d，3H)，4.4(t，1H，较少的)，4.5-4.6(m，1H)，5.1(s，1H，较少的旋转异构体)，5.3(d，1H)，5.40(d，1H)。
Boc-(R)Dph-Pic-OH采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-OH的相同方法，从Boc-(R)Dph-OH制备。
Boc-(R)Dch-Pic-OH采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-OH的相同方法，从Boc-(R)Dch-OH制备。
Boc-(R)Cha-Pro-(5-(S)Me)-OH采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-OH的相同方法，从H-Pro(5-(S)Me)-OMe制备。
Boc-Nag(Z)(ⅰ)N-苯甲基氧羰基-O-甲基异脲在18℃对搅拌的浓NaOH水液(2.8L，50% W/W，19.1M，53mol)和水中，加入二份半硫酸O-甲基异脲酯(1.57kg，99% 9.0mol)。将反应混合物冷却至3-5℃，在冷却和剧烈搅拌下用超过20分钟的时间加入氯甲酸苯甲基酯(3.88kg，92% 20.9mol)。加入Z-Cl期间反应温度升至3到8℃，添加的漏斗用5升水冲洗，冲洗液加入到反应容器。在0-3℃搅拌反应混合物18h，过滤且结晶用冷水(3℃)洗涤，25℃真空干燥(10-20mbar)48h，得到白色结晶粉末状的3.78kg(89%)的标题化合物。
(ⅱ)Boc-Nag(Z)对Boc-NH-(CH2)3-NH2X HCl(根据Mattingly P.G.，Synthesis，367(1990)制备)(3.9kg，18.5mol)的异丙醇(24kg)的搅拌溶液，在60-70℃，用超过30分钟的时间按份加入KHCO3(4.2kg，42mol)，缓慢放出产生的CO2(g)。混合物搅拌另外的30分钟，然后用超过30分钟的时间按份加入N-苯甲氧羰基-O-甲基异脲(3.74kg，18.0mol)。在65-70℃搅拌反应混合物16h，冷却至20℃并过滤。沉淀用异-丙醇(10+5L)洗涤。在减压下浓缩合并的滤液。保持加热的表面不超过65-70℃。当大约蒸馏掉45升时，加入EtOAc(90L)。将反应混合物冷却至20-25℃，用水(10和5L和盐水(5L)洗涤，用Na2SO4(2kg)干燥。搅拌反应混合物后过滤，滤块用EtOAc(11和7L)洗涤，减压浓缩合并的滤液，保持加热的表面不超过40-50℃。当大约90升EtOA(蒸馏掉时，加入甲苯(25L)并继续蒸发，收集另外大约18升的未馏物后，在强烈搅拌下加入甲苯(20L)，并将所得混合物冷却至-1至0℃，温和搅拌过夜(17h)。过滤结晶的浆液，产物用冷却的甲苯洗涤(10和5L)，真空干燥(10-20mbar，40℃)24h，得到4.83kg(13.8mol，76%)的Boc-Nag(Z)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.41(s，9H)，1.6-1.7(m，2H)，3.0-3.3(m，4H)，4.8-5.0(bs，1H)，5.10(s，2H)，7.2-7.4(m，5H)。
Boc-Agm(Z)(ⅰ)Boc-Agm在室温下用5分钟的时间对14.95g(65.5mmol，1eq.)的硫酸胍丁基胺(Aldrich)，13.7ml的EtN3(98.25mmol，1.5eq)，165ml的水和165ml的THF的浆液加入21.5g(98.25mmol)，1.5eq.)的(Boc)2O。将混合物剧烈搅拌过夜，蒸发至干，并用2X 100ml的Et2O洗涤残留物，得到白色粉末状的Boc-Agm，它不需要进一步提纯用于以下的步骤。
(ⅱ)Boc-Agm(2)对冷却的(+5℃)，从以上步骤获得的粗Boc-Agm(大约65.5mmol)的180ml 4N NaOH和165ml的THF的浆液，用10分钟加入24ml(169mmol，2.5eq)氯甲酸苯甲基酯。在室温搅拌4h后，加入甲醇(150ml)，在室温下继续搅拌附加的20h。蒸发有机层，将200ml水加入残留物。碱性的水相用1 x 300ml和2 x 200ml的EtOAc提取，合并有机相用H2O(2 X 100ml)，盐水(1 x 100ml)洗涤并干燥(MgSO4)。蒸发溶剂用闪色谱(CH2Cl2/MeOH，采用97/3，95/5和9/1的分部梯度)得到14.63g(58%)白色粉末状的纯Boc-Agm(Z)。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ1.35-1.40(m，2H)，1.45(s，9H)，1.5-1.6(m，2H)，3.0-3.2(m，4H)，4.65(bs，1H)，5.1(s，2H)，7.25-7.40(m，5H)。
13H-NMR(CDCl3，75.5MHz)δ25.44，27.36，28.21，65.83，79.15，127.47，127.66，128.14，137.29，156.47，161.48，163.30。
Boc-NH-(CH2)3-N3根据Mattingly P.G，在Synethesis 1990，367中所述的方法制备。
Z-NH-(CH2)2-NH2对6g亚乙基二胺(0.1mol)和22ml三乙基胺在20ml氯仿中的冷却溶液，加入溶于5ml氯仿中的2.5g Z-OSu。使混合物升至室温并在搅拌下放置过夜。过滤，蒸发溶剂并用闪色谱(CH2Cl2/MeOH(NH3-饱和的)，95/5)得到0.9g(46%)的标题化合物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.27(s，2H)，2.85(t，2H)，3.24(q，2H)，5.14(s，2H)，7.22-7.40(m，5H)。
Agm x HCl通过在离子交换柱上把硫酸氢离子转化成氯化物，从Agm x H2SO4(Aldrich)制备。
H-Nag(Z)x 2HCl通过把HCl(e)通入Boc-Nag(Z)的EtOAc溶液，然后蒸发掉溶剂制备。
BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-Br对P-TsOH x H-Gly-OBn(5mmol)和三乙基胺(5mmol)的10ml CH2Cl2的溶液加入溶于10ml CH2Cl2和二环己基碳化二亚胺(5ml)中的2-溴乙酸(5mmol)混合物在室温下搅拌过夜并过滤，有机相用二次0.2M KHSO4，0.2M NaOH，盐水洗涤并干燥，蒸发并用闪色谱(CH2Cl2/MeOH，95/5)得到一定量的所需化合物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ＝3.89(s，2H)，4.05-4.11(d，2H)，5.19(s，2H)，7.06(bs，1H)，7.3-7.4(m，5H)。
BnOOC-CH2-OCO-CH2-Br2.8g(0.020mmol)溴乙酸，4.2g(0.020mmol)的溴乙酸苯甲基酯和2.0g(0.020mmol)的三乙胺在25ml EtOAc中的混合物回流3h。混合物用较多的EtOAc稀释并冷却。用稀HCl洗涤溶液，然后用NaHCO3(aq)且最后用水洗涤。干燥(Na2SO4)并蒸发，然后用闪色谱(庚烷/乙酸乙酯，75/25)得到标题化合物26%产率。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ3.95(s，2H)，4.75(s，2H)，5.23(s，2H)，7.35-7.45(m，5H)。
Bno-(CH2)3-OTf丙烷二醇单苯甲基醚(0.83g，5mmol)溶于干燥吡啶(0.6g，7mmol)和二氯甲烷(20ml)中，冷却至-15℃。将预冷却到-15℃的Triflic anhydride，用45分钟加入到搅拌的反应混合物中加入后使温度升至15℃。蒸发掉溶剂，产物-溶于己烷/乙酸乙酯4∶1(10ml)中，并用硅过滤。最后蒸发掉溶剂并使产物真空干燥得到0.95g(64%)的1-苯甲氧-3-氟甲烷磺酰丙烷。它可以直接使用(见实施例21)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ2.12(m，2H)，3.6(t，2H)，4.51(s，2H)，4.72(t，2H)，7.22-7.42(m，5H)。
BnO-(CH2)2-CHO通过Swern氧化作用(叙述在D.Swern等人，J.Org.Chem.，1978，2480-82)制备BnO-(CH2)3-OH。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.63(dt，2H)，3.80(t，2H)，4.51(s，2H)，7.30(m，5H)，9.76(bt，1H)。
Br-(S)CH(CH2OBn)-COOBn(ⅰ)Br-(S)CH(CH2OBn)-COOHO-苯甲基丝氨酸(3.9g，19mmol)的水溶液(10ml)加入到溴化钠(Wg，107mmol)水溶液(20ml)和硫酸(2g，20mmol)中。使反应混合物冷却到-10℃，并在剧烈搅拌下加入NaNO2(1.73g，25mmol)。在粘稠的混合物中再加入其它份的水，几分钟后，加入H2SO4(1g，10mmol)。在室温下搅拌混合物过夜，然后用EtOAc(100ml)提取两次。合并有机相用二次水和一次盐水洗涤并干燥(Nz2SO4)。蒸发溶剂得到3.7g(75%)的如黄色油状的标题化合物，它的纯度已足够直接用于以下步骤。
(ⅱ)Br-(S)CH(CH2OBn)-COOBn对上述(ⅰ)粗产物(2.6g，10mmol)的干燥苯(25ml)溶液，加入乙二酰氯(2.6g，20.5mmol)和分子筛(4A°，1g)。在室温和氩气条件下搅拌混合物18h。过泸除去分子筛并蒸发溶剂。浅黄色残留物溶于CH3CN(10ml)中并加入苯甲醇(1g，9.2mmol)。在室温搅拌混合物5h。蒸发溶剂，残留物溶于Et2O中。并用1M NaOH，水，盐水洗涤一次并干燥蒸发溶剂，然后用闪色谱(CH2Cl2/MeOH，95/5)得到1.8g(67)的所需化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ3.82(dd，1H)，3.99(dd，1H)，4.38(dd，1H)，4.56(s，2H)，5.23(s，2H)，7.23-7.46(m，5H)。
操作实施例实施例1H-(R)Cha-Pro-Agm x 2 HOAc(ⅰ)Boc-(R)Cha-Pfro-Agm x HOAcBoc-(R)Cha-Pro-OSu(1.7mmol)和二氢氯化胍基丁胺(2.0mmol，1.18eq)溶于DMF/H2O 95∶5(35ml)中。加入三乙胺调节PH大约为10，并在室温下搅拌溶液2天。蒸发溶液(5mm Hg/60℃)直到干，粗产物用RPLC(CH3CN/NH4oAc(0.1M)，38∶62)纯化。冷冻干燥后获得白色粉末状的所需化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3/DMSO-d65∶2，两个旋转异构体，9∶1δ(较多的旋转异构体)0.75-0.90(m，2H)，1.1-2.05(m，19H)，1.35(s，9H)2.98-3.14(m，4H)，3.37(q，1H)，3.76(m，1H)，4.20(m，1H)，4.33(dd，1H)，6.30(d，1H)，7.05-7.80(宽 m，5H)，8.67(宽 d，1H)。
改变较多的旋转异构体信号宽度，可以明确地观察到δ3.44(m，1H)，3.62(m，1H)，4.10(m，1H)，4.64(m，1H)，5.56(d，1H)，9.08(m，1H)。
(ⅱ)H-(R)Cha-Pro-Agm x 2 HOAc在室温下搅拌Boc-(R)Cha-Pro-Agm(0.2mmol)的TFA(2ml)溶液4.5h。蒸发溶剂，所剩下的油直接RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，25∶75)。反复冷冻干燥后获得如白色粉末的二乙酸盐。
1H-NMR(500.13MHz，D2O)δ0.80-0.95(m，2H)，1.00-1.21(m，3H)，1.32(m，1H)，1.40-1.78(m，12H)，1.83-2.00(m，2H)，1.90(s，乙酸酯)，2.20(m，1H)，3.06-3.14(m，4H)，3.50(m，1H)，3.67(m，1H)，4.20-4.30(m，2H)。
13C NMR(75.6MHz，D2O)胍δ157.4;羰基碳δ169.9，174.5。
实施例2Me-(R)Cha-Pro-Agm x 2 HOAc(ⅰ)Boc-(Me)(R)Cha-Pro-Agm对479.6mg(1mmol，1eq.)的Boc-(Me)(R)Cha-Pro-Osu和500ml的NMM的16ml DMF/H2O(15/1)的溶液中，在室温下，加入166.5mg(1.2mmol，1.2eq.)的Agm XHCl再搅拌反应混合物另外70hr.，蒸发溶剂，得到油状的粗产物。它不需要进一步提纯可用于以下步骤。
(ⅱ)Me-(R)Cha-Pro-Agm x 2 HOAc在室温，从上一步骤得到的粗油溶于10ml TFA/CH2Cl2(1∶4)。搅拌2小时25分钟后，蒸发溶剂并用RPLC纯化粗产物(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，35/65)，冷冻干燥后得到白色粉末状的所需产物。1H-NMR(500MHz，D2O)δ0.93-1.05(m，2H)，1.10-1.29(m，3H)，1.33-1.43(m，1H)，1.50-1.80(m，12H)，1.88-2.10(m，2H)，1.92(s，乙酸酯)，2.27-2.36(m，1H)，2.68(s，3H)，3.15-3.23(m，3H)，3.24-3.31(m，1H)，3.57-3.66(m，1H)，3.76-3.83(m，1H)，4.28(t，1H)，4.39(dd，1H)。
13C NMR(125.76MHz，D2O)胍δ157.24;羰基碳δ174.03，168.24。
实施例3HO-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Agm x 2 HCl(ⅰ)Boc-(R)Cha-Pro-Agm(Z)Boc-Agm(Z)(1eq)溶于TFA/CH2Cl2(1∶4，ca∶6ml/mmol)中，并在室温下搅拌大约2h。蒸发溶剂，产物与Boc-(R)Cha-Pro-OSu(1eq)一起溶于DMF(大约1ml/mmol)，用NMM调节PH到大约9，混合物在室温下搅拌20h。真空蒸发溶剂，粗产物溶于CH2Cl2中用水洗涤三次并用盐水洗一次。干燥后(硫酸钠)蒸发溶剂，产物用闪色谱提纯(CH2Cl2/MeOH)得到白色粉末状的Boc-(R)Cha-Pro-Agm(Z)。
(ⅱ)H-(R)-Cha-Pro-Agm(Z)
Boc-(R)Cha-Pro-Agm(Z)溶于TFA/CH2Cl(1∶4，大约6ml/mmol)，并在室温下搅拌2h。蒸发溶剂，产物溶于0.2M NaOH(20ml/mmol)并用二氯甲烷提取两次。合并有机层并用盐水洗涤，干燥(硫酸钠)蒸发溶剂，得到白色粉末状的H-(R)-Cha-Pro-Agm(Z)。
(ⅲ)BnO-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Agm(Z)将H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(1mmol)溶于甲醇(10ml)中。加入氯化三乙基铵(1mmol)，氰硼氢化钠(0.7mmol)然后加入BnO-(CH2)2-CHO(1.05mmol)，反应混合物在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂，粗产物溶于乙酸乙酯中，用水洗两次，盐水洗一次，用硫酸钠充分干燥。蒸发溶剂，粗产物用闪色谱提纯(EtOAc/MeOH)。
(ⅳ)HO-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Agm X 2 HCl通过在上述产物(ⅲ)上，采用去保护的方法(d)制备。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ0.72(m，较少的旋转异构体)，0.84(m，较少的旋转异构体)，0.87-1.03(m，2H)，1.03-1-26(m，3H)，1.28-1.40(bs，1H)，1.44-1.80(m，11H)，1.80-1.95(bs，3H)，1.95-2.10(bs，2H)，2.28(m，1H)，3.04(m，1H)，3.08-3.27(m，5H)，3.58(bs，1H)，3.67(bs，2H)，3.78(m，1H)，4.12(bd，较少的旋转异构体)，4.30(m，1H)，4.37(m，1H)。
13C NMR(125MHz，D2O)胍δ157.26;羰基碳δ174.06，168.36。
实施例4HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Agm x HOAcN-末端烷基化的一般方法。
在此叙述的方法是比较一般方法，且可以参见下述的实施例以及每个具体实施例中采用的烷基化试剂。
将被烷基化的肽(1eq)和烷基化试剂(1.1-1.2eq)溶于乙腈(大约10ml/mmol)中。加入碳酸钾(2.0-2.2eq)。在50-60℃搅拌反应混合物，直到起始产物消耗掉(TLC，通常1-5h)。过滤，蒸发溶剂并用闪色谱(CH2Cl2/MeOH，CH2Cl2/MeOH(NH3-饱和)或EtOAc/MeOH，大约9/1)提纯，蒸发掉溶剂得到烷基化的产物。
(ⅰ)BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Agm(Z)根据上述的方法，从H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)和Br-CH2COOBn制备。
(ⅱ)HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Agm x HOAc在上述的产物(ⅰ)上，采用去保护的方法(b)制备。
1H-NMR(300MHz，MeOD)δ0.9-1.1(m，2H)，1.1-2.3(m，19H)，1.95(s，乙酸酯)，3.1-3.2(m，4H)，3.2-3.65(m，3H)，3.85(m，1H)，4.0(bt，1H)，4.35(dd，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.55;羰基碳δ168.71，171.37和174.3。
实施例5ipr-OOC-CH2-(R)Cha-Pro-Agm x HOAc如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro-Agm-Agm(Z)(参见实施例3)和Br-CH2COOiPr烷基化，然后采用去保护的方法(b)得到标题化合物。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.85-1.05(m，2H)，1.1-1.35(m，9H;它的1.23(d，3H)，1.25(d，3H)，1.35-2.02(m，14H)1.92(s，乙酸酯)，2.08(m，1H)，2.2(m，1H)，3.07-3.45(m，6H)，3.55(m，1H)，3.7-3.8(m，2H)，4.3(dd，1H)，5.05(m，1H)。
13C NMR(125MHz，D2O)胍δ157.39;羰基碳δ171.10，172.76和174.44。
实施例6HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Agm x 2 TFA(ⅰ)Me-(R)Cha-Pro-Agm(Z)从Boc-(ME)(R)Cha-Pro-OSu制备，采用实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法。
(ⅱ)HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Agm x 2 TFA如实施例4中，采用(Me)-(R)Cha-Pro-Agm(Z)和Br-CH2COOBn烷基化，然后采用去保护方法(b)得到标题化合物。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ0.9-1.35(m，6H)，1.5-2.2(m，14H)，2.25-2.45(m，1H)，3.12(s，3H)，3.15-3.35(m，4H)，3.6-3.75(m，1H)，3.8-3.95(m，1H)，4.22(出现bs，2H)，4.45(m，1H)，4.6(bt，1H)。
13C NMR(75.47MHz，D2O)胍δ157.52;羰基碳δ173.86，168.79和167.38。
实施例7HOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Agm x HOAc
如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)和Br-CH(Me)COOBn烷基化，然后采用去保护方法(a)，得到两种对映体混合物的标题化合物。
实施例8HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Agm/a x HOAC采用RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，1/4)，通过分离实施例7形成的非对映体而得到。从柱的两个峰中最早出现的一个是本非对映体。
1H-NMR(500MHz，D2O;2旋转并构体大约5∶1比例)δ0.74(m，较少的旋转异构体)，1.01(m，2H)，1.10-1.33(m，3H)，1.48-1.88(m，15H;它的1.51(d，3H))，1.92-2.12(m，3H)1.96(s，乙酸酯)，2.30(m，1H)，3.20(m，3H)，3.38(m，1H)，3.47(q，较少的旋转异构体)，3.53-3.68(m，2H)，3.73(m，1H)，4.20(d，较少的旋转异构体)，4.33(m，1H)，4.38(m，1H)，4.51(d，较少的旋转异构体)。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ157.38;羰基碳δ174.11，173.45和168.64。
实施例9HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Agm/b x HOAC在实施例8的分离中，从柱中最先出现的峰之后的非对映体，是上述的标题化合物1H-NMR(500MHz，D2O，2旋光体大约9∶1比例)δ0.88(m，较少的旋转异构体)，1.05(m，2H)，1.12-1.33(m，3H)，1.42(bs，1H)，1.50-1.88(m，15H;它的1.55(d，3H))，1.93-2.13(m，3H)1.95(s，乙酸酯)，2.30(m，1H)，2.40(m，较少的旋转异构体)，3.22(t，2H)，3.28(t，2H)，3.64(m，1H)，3.70(q，1H)，3.98(t，较少的旋转异构体)，4.35(t，1H)，4.41(dd，H)。
实施例10HOOC-(RorS)CH(nPr)-(R)Cha-Pro-Agm/a x HOAc如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)和Br-CHn(Pr)COOEt烷基化，并用去保护方法(e)，然后用去保护方法(b)得到HOOC-(R，S)CH(nPr)-(R)Cha-Pro-Agm。用RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，1/4)分离非对映体并在蒸发掉溶剂后冷冻干燥(H2O)得到标题化合物。从柱中的两个峰中最早出现的是本非对映体。
1H-NMR(300MHz，MeOD)δ0.8-1.1(m，5H;它的0.92(t，3H)，1.1-2.1(m，22H)1.95(s，乙酸酯)，2.2(m，1H)，3.1-3.35(m，5H)，3.48(m，1H)，3.88(m，1H)，4.0(m，1H)，4.4(dd，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.50;羰基碳δ168.55和174.16。
实施例11HOOC-(RorS)CH(nPr)-(R)Cha-Pro-Agm/b x HOAc在实施例10分离中，从柱中出现第一个峰之后出现的非对映体是上述标题化合物。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.85-1.05(m，5H;它的0.95(t，3H)，1.1-2.08(m，22H)1.9(s，乙酸酯)，2.14(m，1H)，3.1-3.4(m，5H)，3.45(m，1H)，3.62(m，1H)，3.80(m，1H)，4.34(dd，1H)。
13C NMR(75MHz，D2O)胍δ157.53;羰基碳δ169.01和174.27。
实施例12HOOC-(RorS)CH(Ph)-(R)Cha-Pro-Agm/b x HOAc(ⅰ)tBuOOC-(RorS)CH(Ph)-(R)Cha-Pro-Agm(Z)将H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)(0.55mmol)，溴乙酸特丁基-(R，S)苯基酯(0.66mmol)，K2CO3(1.4mmol)在CH3CN(10ml)中的混合物在室温下搅拌28h并在60℃搅拌附加的5h。把非对映体的混合物(根据NMR大约3∶1)过滤并蒸发。所得的油直接用二次闪色谱(CH2Cl2/MeOH，92/8)提纯，得到二个非对映体的完全分离物(分别的，Rf＝0.36(较少的异构体)和0.27(较多的异构体))。
1H NMR of较多的异构体(500.13MHz，CDCl3)δ0.79(quart，1H)，0.90(quart，1H)，1.06-1.70(m，H)，1.37(s，9H)，1.85-2.03(m，3H)，2.20(m，1H)，3.10-3.24(m，3H)，3.25-3.38(m，2H)，3.42(m，1h)，3.53(m，1H)，4.30(s，1H)，4.49(dd，1H)，5.08(s，2H)，7.19-7.40(m，10H);在6.7-8.6位置观察到宽NH信号。
(ⅱ)HOOC-(RorS)CH(Ph)-(R)Cha-Pro-Agm/b x HOAc较多的异构体(50mmol)和苯硫基甲烷(0.5mmol)溶于TFA中，在室温下保持8小时。蒸发5h后(0.1mm Hg)，残留的油在RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)2∶3)后纯化后，经过蒸发溶剂和冷冻干燥得到标题化合物。
1H NMR(500.13MHz，MeOD)δ0.85-1.01(m，2H)，1.13-1.38(m，4H)，1.53-2.05(m，14H)1.92(s，乙酸酯)，2.18(m，1H)，3.08-3.26(m，3H)，3.32-3.45(m，2H)，3.64(m，1H)，3.93(t，1H)，4.37(dd，1H)4.43(s，1H)，7.28-7.50(m，5H)。
13C-NMR(125.6MHz，MeOD)胍δ158.7;羰基碳δ173.8，174.7，177.0。
实施例13HOOC-(R，S)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-Agm/b x HOAc如实施例4中采用H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)和Br-CH(CH2-CH2-Ph)COOEt烷基化，并用去保护方法(a)接着用去保护方法(e)得到HOOC-(R，S)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-Agm实施例14HOOC-(RorS)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-Agm/a x 2 TFA通过RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，2/3)和蒸发溶剂后冷冻干燥(H2O/TFA)，分离实施例13中获得的非对映体，得到标题化合物。从柱的两个峰中最早出现的非对映体是上述标题化合物。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.93-1.11(m，2H)，1.24(m，1H)，1.29-1.40(m，2H)，1.52-1.85(m，11H)，1.89-2.11(m，4H)，2.14-2.32(m，3H)，2.83(t，2H)，3.14(t，2H)，3.24(t，2H)，3.50(q，1H)，3.70(m，1H)，4.00(t，1H)，4.36-4.42(m，2H)，7.17-7.31(m，5H)。
13C-NMR(125MHz，MeOD)胍δ 158.66;羰基碳δ168.08，171.53，174.16。
实施例15HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Agm/b xHOAc(ⅰ)HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Agm(Z)将丙烯酰基苯甲基酯(1.1eq)和H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)(1eq)溶于乙醇(20m/mmol)中，在室温下搅拌20h。蒸发溶剂，粗产物用闪色谱纯化(CH2Cl2/MeOH(NH3-饱和)，95/5)。最后蒸发溶剂并真空干燥产物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.7-0.95(m，2H)，1.0-1.5(m，10H)，1.5-1.75(m，5H)，1.75-1.92(m，2H)，2.0(m，1H)，2.17(bs，1H)，2.45(m，2H)，2.63(m，1H)，2.79(m，1H)，2.94-3.25(m，4H)，3.33(m，2H)，3.52(bt，1H)，4.45(bd，1H)，4.95-5.12(m，4H)，7.13-7.4(m，10H)。
(ⅱ)HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Agm x HOAc在上述产物(ⅰ)上采用去保护的方法(a)制备。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ0.88(m，2H)，1.00-1.23(m，3H)，1.33(bs，1H)1.42-1.72(m，11H)，1.78-2.00(m，3H)1.94(s，乙酸酯)，2.18(m，1H)，2.52(m，2H)，3.03-3.20(m，6H)，3.50(m，1H)，3.72(m，1H)，4.23(mm，1H)4.30(m，1H)。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ157.25;羰基碳δ178.07，173.96，168.24。
实施例16EtOOC-CO-(R)Cha-Pro-Agm x HOAc(ⅰ)EtOOC-CO-(R)Cha-Pro-Agm(Z)对冷却(-10℃)的H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)(0.46g，0.89mmol)和NMM(199mg，1.97mmol)的10ml THF溶液，加入溶于3ml THF中的Cl-COCOOEt(134mg，0.98mmol)。将混合物保持在-10℃一小时，然后在室温下搅拌另外的1小时。蒸发溶剂，残留物溶于乙酸乙酯。有机相用水洗涤二次并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂，从EtOAc中结晶，得到0.275g(5%)的白色结晶状的标题化合物。
(ⅱ)EtOOC-CO-(R)Cha-Pro-Agm x HOAc在上述产物(ⅰ)上采用去保护方法(b)制备。
1H-NMR(300MHz，MeOD)δ0.9-2.25(m，24H;它的1.17(t，3H))，1.90(s，乙酸酯)，3.1-3.25(m，4H)，3.5-3.65(m，3H;它的3.59(q，2H))，3.88(m，1H)，4.35(m，1H)，4.69(dd，1H)。
13C-NMR(75.5MHz，MeOD)胍δ157.56;和羰基碳δ159.21，160.74，172.81，174.56。
实施例17
(R，S)Bla-(R)Cha-Pro-Agm x 2 TFA采用实例4中的方法，用H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)和α-溴丁内酯，接着用去保护的方法(a)得到两种非对映体混合物的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，D2O，非对映体的混合物大约1/1)δ0.93-1.06(m，2H)，1.09-1.30(m，3H)，1.37-1.49(m，1H)，1.50-1.87(m，11H)，1.89-2.10(m，3H)，2.24-2.36(m，1H)，2.44-2.56(m，1H)，2.72-2.85(m，1H)，3.10-3.30(m，4H)，3.56-3.65(m，1H)，3.75-3.84(m，1H)，4.2-5.0(m，5H部分被H-O-D信号掩蔽)。
13C-NMR(125.76MHz，D2O)胍δ157.34;(重叠峰);和羰基碳δ174.34，173.90，173.62，167.88，167.58(两个重叠峰)。
实施例18HOOC-(RorS)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-Agm/b x 2 TFA采用实施例14中的相同方法，通过处理实施例13中的非对映体，获得标题化合物。从柱中出现第一个峰后，出现本非对映体。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.95-1.06(m，2H)，1.14-1.40(m，4H)，1.48-1.84(m，11H)1.87-2.30(m，6H)，2.72-2.90(m，2H)，3.12-3.32(m，4H)，3.52(m，1H)，3.72(m，1H)，4.04(dd，1H)，4.27(t，1H)，4.37(dd，1H)，7.17-7.32(m，5H)。
13C-NMR(125MHz，MeOD)胍δ158.68;羰基碳δ168.14，171.46，174.03。
实施例19H-(R)Cha-Pro-Nag x 2 HOAc(ⅰ)Z-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)3-NH(Boc)对Z-(R)Cha-Pro-OSu(1mmol)的1ml DMF溶液，在0℃下加入溶于1ml DMF中的H2N-(CH2)3-NH(Boc)(参见起始产物的分离物)，并用NMM将PH调节至大约9。在室温下搅拌反应3天，然后将反应物倒入水中。水相用EtOAc提取四次，合并的有机相用二次0.3M KHSO4，0.2M NaOH，盐水洗涤并干燥。蒸发并用闪色谱(EtOAc/石油醚，4/1)得到产率59%的标题化合物。
(ⅱ)Z-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)3-NH2将Z-(R)Cha-Pro-NH(CH2)3-NH(Boc)(0.6mmol)溶解于CH2Cl2(8ml)。将TFA(2ml)加入到反应混合物中，搅拌1h。蒸发溶剂残留物溶于CH2Cl2中，用0.2M NaOH洗涤两次并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂得到胺，产率为93%。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.79-1.03(m，2H)，1.05-1.75(m，15H)，1.84-2.08(m，4H)，2.36(m，1H)，2.66(m，2H)，3.25(m，2H)，3.43(q，1H)，3.85(m，1H)，4.45(m，1H)，4.56(d，1H)，5.09(m，2H)，5.35(d，1H)，7.30-7.45(m，5H)。
(ⅲ)Z-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc将Z-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)3-NH2(0.55mmol，1eq)溶于DMF(2ml)中，用三乙胺把PH调节至8-9。加入溶于DMF(1ml)中的硝酸3.5-二甲基-1-吡唑基甲咪盐(0.55mmol)(1eq)并在室温下搅拌反应混合物三天。蒸发溶剂，冷冻干燥(H2O)粗产物并用RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，4/6)提纯，蒸发掉溶剂并冷冻后得到产率为93%的标题化合物。
(ⅳ)H-(R)Cha-Pro-Nag x 2 HOAc在上述的产物(ⅲ)上用去保护方法(a)制备。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ0.82-1.03(m，2H)，1.03-1.28(m，3H)，1.35(m，1H)，1.53-1.82(m，9H)，1.82-2.05(m，3H)，1.89(s，乙酸酯)，2.24(m，1H)，3.15(t，2H)，3.23(q，2H)，3.55(m，1H)，3.72(m，1H)，4.27-4.34(m，2H)。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ157.37;羰基碳δ169.81，174.52。
实施例20nBu-(R)Cha-Pro-Nag x 2 HOAc(ⅰ)H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)采用实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法，从Boc-(R)Cha-OSu制备。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.8-1.03(m，2H)，1.10-1.50(m，6H)，1.60-1.83(m，8H)，1.87-2.20(m，3H)，3.15(m，1H)，3.25(m，2H)，3.42(m，2H)，3.63(dd，1H)，3.70(m，1H)，4.36(bs，1H)，5.07(s，2H)，7.22-7.43(m，5H)。
(ⅱ)nBu-(R)-Cha-Pro-Nag-(Z)将H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(0.5g，1mmol)溶于10ml甲醇中，加入氯化三乙基铵(0.1g，1mmol)，氰基硼氢化钠(44mg，0.7mmol)然后加入丁醛，使反应混合物在室温下搅拌20h。蒸发溶剂，粗产物溶于乙酸乙酯中，用水洗涤二次，盐水洗涤一次并用硫酸钠充分干燥。蒸发溶剂粗产物用闪色谱纯化(EtOAc/EtOH/Et3N，88/10/2)，最后蒸发溶剂，真空干燥产物得到0.22g(40%)的nBu-(R)Cha-Pro-Nag(Z)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.82-1.0(m，5H;它的0.88(t，3H))，1.08-1.49(m，10H)，1.58-1.8(m，7H)，1.88-2.22(m，3H)，2.4(m，1H)，2.5(m，1H)，3.05(bs，1H)，3.3(m，1H)，3.4-3.53(m，3H)，3.73(m，1H)，4.42(bs，1H)，5.1(s，2H)，7.25-7.43(m，5H)。
(ⅲ)nBu-(R)Cha-Pro-Nag x 2 HOAc在上述产物(ⅱ)上，用去保护的方法(a)制备。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ0.94(t，2H)，1.10-1.31(m，3H)，1.38(m，3H)，1.55-1.88(m，11H)，1.88-2.15(m，3H)，1.95(s，乙酸酯)，2.34(m，1H)，2.95(m，1H)，3.08(m，1H)，3.24(t，2H)，3.30(m，2H)，3.66(m，1H)，3.82(m，1H)，4.32(t，1H)4.41(dd，1H)。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ157.40;羰基碳δ180.39，174.82，168.55。
实施例21HO-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA(ⅰ)BnO-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Nag(Z)将1-苯甲氧基3-氟甲烷磺酰丙烷(参见制备的起始物)(0.5g，1mmol)和H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)溶于四氢呋喃(10ml)中。把碳酸钾(0.28g，2mmol)加入到反应混合物中，在室温下搅拌二小时。蒸发溶剂粗产物用乙酸乙酯/水萃取。有机相用一次碳酸氢钠水溶液，一次水，和一次盐水洗涤。用硫酸钠充分干燥后，蒸发溶剂，粗产物用闪色谱提纯(CH2CH2/MeOH(NH3-饱和)，95∶5)，最后蒸发溶剂并真空干燥产物得到0.29g(45%)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.77-1.03(m，2H)，1.03-2.18(m，19H)，2.52(m，1H)，2.64(m，1H)，3.03(bs，1H)，3.1-3.6(m，7H)3.66(m，1H)，4.41(bs，1H)，4.46(s，2H)，5.08(s，2H)，7.2-7.4(m，5H)，7.55(m，1H)。
(ⅱ)HO-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA在上述产物(ⅰ)上，用去保护方法(a)制备。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ1.00(bs，2H)，1.10-1.32(m，3H)，1.40(bs，1H)，1.55-2.15(m，14H)，2.30(m，1H)，3.05-3.35(m，6H)，3.57-3.75(m，3H)，3.81(bs，1H)，4.35(bs，1H)，4.42(bs，1H)。
实施例22HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc(ⅰ)H-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)3-N3采用如H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)的相同方法制备，以Boc-(R)Cha-Pro-OSu和Boc-NH-(CH2)3-N3(代替Boc-Agm(Z))作为起始物。
(ⅱ)EtOOC-CH2-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)3-NH2x HOAc如实施例4中的方法，采用H-(R)-Cha-Pro-NH-CH2)3-N3和EtOOC-CH2-Br烷基化，然后用去保护方法(a)还原叠氮化物，得到标题化合物。
(ⅲ)EtOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc如实施例19(ⅲ)中制备Z-(R)Cha-Pro-Nag的相同方法，采用上述(ⅱ)的胺完成胍化反应。用RPLC(CH3CN/NH4OAC(0.1M)，3/7)纯化，蒸发溶剂并冷冻干燥(H2O)后，获得纯化的标题化合物。
(ⅳ)HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc在上述产物(ⅲ)上，采用去保护的方法(e)制备。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ0.99(m，2H)，1.09-1.30(m，3H)，1.44(m，1H)，1.59-2.09(m，12H)，1.92(s，乙酸酯)，2.29(m，1H)，3.20(t，2H)，3.28(m，2H)，3.52-3.63(m，3H)，3.76(m，1H)，4.38(dd，1H)4.42(t，1H)。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ157.43;羰基碳δ168.72，171.36，174.35。
实施例23EtOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc根据实施例22(ⅲ)制备。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ1.07(m，2H)，1.17-1.59(m，7H;它的1.38(t，3H))，1.60-2.24(m，12H)，2.04(s，乙酸酯)，2.39(m，1H)，3.31(t，2H)，3.39(m，2H)，3.63-3.90(m，4H)，4.12(t，1H)，4.36(q，2H)4.46(dd，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.73;羰基碳δ173.73，175.09，175.70。
实施例24iPrOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)和Br-CH2COOiP烷基化)，然后用去保护的方法(b)，得到标题化合物。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.85-1.05(m，2H)，1.1-2.15(m，22H;它的1.23(d，3H)，1.25(d，3H))，1.92(s，乙酸酯)，2.2(m，1H)，3.10-3.35(m，5H)，3.4(m，1H)，3.55(m，1H)，3.65-3.8(m，2H)，4.28(dd，1H)5.03(m，1H)。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ157.39;羰基碳δ170.40，172.00和174.50。
实施例25tBuOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)和Br-CH2COOtBu烷基化，然后用去保护的方法(b)，得到标题化合物。
1H-NMR(300MHz，MeOD)δ0.9-1.15(m，2H)，1.15-2.15(m，25H;它的1.55(bs，9H)，2.3(m，1H)，3.15-3.45(m，4H)，3.55(m，1H)，3.7-3.95(m，3H)，4.3-4.4(m，2H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.55;羰基碳δ166.55，168.13和174.33。
实施例26HOOC-CH2-OOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc(ⅰ)BnOOC-CH2-OOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag(Z)将H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)，0.20g(0.40mmol)，与0.115g(0.40mmol)的溴乙酸苯甲氧基羰基甲基酯，55mg的K2CO3(0.40mmol和5ml的CH3CN混合。在室温下搅拌混合物6小时。蒸发溶剂且粗产物用色谱(CH2Cl2/MeOH，9/1)纯化，蒸发掉溶剂后，得到0.20g(71%)的所需化合物。
(ⅱ)HOOC-CH2-OOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc在上述产物(ⅰ)上，用去保护方法(a)制备。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.85-1.1(m，2H)，1.1-1.6(m，8H)，1.6-2.15(m，10H)，1.99(s，乙酸酯)，2.23(m，1H)，3.1-3.4(m，4H)，3.45-3.65(m，4H)，3.7-3.9(m，3H)，4.34(m，1H)，4.48(dd，2H)。
13C-NMR(125MHz，MeOD)胍δ158.8;羰基碳δ176.1，175.2，174.9，173.1。
实施例27H2N-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)和Cl-CH2CONH2烷基化，反应中存在催化量的KI。然后用去保护方法(a)得到标题化合物。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ1.02(m，2H)，1.12-1.34(m，3H)，1.46(m，1H)，1.61-2.13(m，9H)，1.99(s，乙酸酯)，2.34(m，1H)，3.25(t，2H)，3.33(t，2H)，3.60-3.82(m，4H)，4.22(t，1H)，4.41(dd，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.5;羰基碳δ168.94，169.40，174.43。
实施例28HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)和Br-OH2CONHCH2COOBn(参见制备的起始产物)烷基化，然后用去保护方法(a)得到标题化合物。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ1.01(m，2H)，1.15-1.38(m，3H)，1.47(m，1H)，1.64-2.13(m，12H)，2.27(m，1H)，3.17-3.26(m，3H)，3.37(m，1H)，3.51(m，1H)，3.83(m，1H)，3.88(s，2H)，3.93-4.06(m，2H)，4.35-4.45(m，2H)。
13C-NMR(75MHz，MeOD)胍δ158.71;羰基碳δ166.94，168.35，172.44，174.17。
实施例29(HOOC-CH2)2-(R)Cha-Pro-Nag x 2 HOAc(ⅰ)(EtOOC-CH2)2-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)3-NH2x HOAc如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)3-N3(参见实施例22)和Br-CH2COOEt(10eq.用于完成二烷基化作用)烷基化，然后用去保护方法(a)得到标题化合物。
(ⅱ)(EtOOC-CH2)2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc
采用如实施例19(ⅲ)中制备Z-(R)Cha-Pro-Nag的相同方法，对上述胺完成胍化合应。用RPLC进行化合物的纯化(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，4∶6)。
(ⅲ)(HOOC-CH2)2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc根据去保护方法方法(e)，用二倍量的MaOH使酯基水解，用RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，2∶8)纯化后，蒸发掉溶剂并冷冻干燥(H2O)获得纯化的最终化合物。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ0.92-1.49(m，6H)，1.60-2.54(m，10H)，2.05(S，乙酸酯)，3.25-3.50(m，4H)，3.65-4.03(m，6H;它的3.95(s，4H))，4.49(m，1H)，4.71(m，1H;部分地被H-O-D峰掩蔽)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.64;羰基碳δ168.62，171.39，174.30。
实施例30HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA(ⅰ)Me-(R)Cha-Pro-Nag(Z)如实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法，从Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OSu和Boc-Nag(Z)制备。
(ⅱ)HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA如实施例4中，采用Me-(R)Cha-Pro-Nag(Z)和Br-CH2COOBn烷基化，然后用去保护方法(b)得到标题化合物。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ0.8-1.06(m，2H)，1.08-1.27(m，4H)，1.55-2.10(m，12H)，2.30(m，1H)，3.04(s，3H)，3.14-3.33(m，4H)，3.63(m，1H)，3.81(m，1H)，4.13(出现bs，2H)，4.38(br.dd，1H)，4.56(bt，1H)。
13C-NMR(125.76MHz，D2O)胍δ157.40;羰基碳δ174.05，168.83，167.44。
实施例31HOOC-CH2-(nBu)(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA如实施例4中，采用nBu-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)和Br-CH2COOBn烷基化，然后用去保护方法(a)得到标题化合物。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ0.78-0.88(m，3H)，0.88-1.02(m，2H)，1.02-1.23(m，4H)，1.23-1.38(m，2H)，1.45-1.84(m，11H)，1.84-2.10(m，3H)，2.24(m，1H)，3.05-3.18(m，3H)，3.18-3.38(m，3H)，3.57(m，1H)，3.77(m，1H)，4.05-4.25(m，2H)，4.32(m，1H)，4.50(m，1H)。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ159.17;羰基碳δ175.66，171.13，169.31。
实施例32HOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)和Br-CH(Me)COOBn烷基化，然后用去保护方法(a)，得到两种非对映体混合物的标题化合物。
实施例33
HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Nag/a x HOAc采用RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1m)，1/4)，分离实施例32中形成的非对映体，蒸发溶剂后获得，从柱中出现的两个峰中的第一个是本非对映体。
1H-NMR(300MHz，D2O2旋转异构体大约9∶1比例)δ0.78(m，较少的旋转异构体)，1.07(m，2H)，1.17-1.42(m，3H)，1.48-1.64(m，4H;它的1.56(d，3H)，1.64-1.95(m，9H)，1.95-2.20(m，3H)，2.00(s，乙酸酯)，2.37(m，1H)，3.28(t，2H)，3.38(t，2H)，3.53(m，较少的旋转异构体)，3.63(m，2H)，3.77(m，1H)，4.24(d，较少的旋转异构体)，4.35-4.50(m，2H)，4.60(d，较少的旋转异构体)。
实施例34HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Nag/b x HOAc采用描述于实施例33中的相同方法，通过实施例32形成的化合物获得标题化合物。从柱中出现的第二个峰是本对映体。
1H-NMR(300MHz，D2O2旋转异构体大约9∶1比例)δ0.95(m，较少的旋转异构体)，1.12(m，2H)，1.22-1.40(m，3H)，1.40-1.67(m，4H;它的1.60(d，3H))，1.67-2.00(m，9H)，2.00-2.25(m，3H)，2.03(s，乙酸酯)，2.40(m，1H)，3.25-3.48(m，4H)，3.66-3.84(m，2H)，3.93(m，1H)，4.38(m，1H)，4.50(m，1H)，4.93(m，较少的旋转异构体)。
13C-NMR(75.5MHz，D2O)δ157.42;羰基碳δ168.05，171.99，174.04。
实施例35EtOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA采用实施例22中的相同方法，在烷基化中用EtOOC-CH(Me)-Br代替Br-CH2-COOEt而制备。
1H-NMR(500MHz，MeOD，2非对映体大约2.5∶1比例和4旋转异构体)δ0.88-2.43(m，25H)，3.1-4.55(m，11H)。
13C-NMR(75MHz，MeOD)胍δ158.65;羰基碳δ174.33，170.66，168.20。
实施例36HOOC-(RorS)CH(nPr)-(R)Cha-Pro-Nag/a x HOAc如实施例4中，用H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)和Br-CH(nPr)COOEt烷基化，采用去保护方法(e)，然后用去保护方法(b)得到HOOC-(R，S)CH(nPr)-(R)Cha-Pro-Agm。通过用RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1m)，1/4)分离非对映体(从柱中出现的两个峰中的第一个是本非对映体)，蒸发溶剂后，冷冻干燥(H2O)获得标题化合物。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.85-1.05(m，5H;它的0.95(t，3H))，1.1-2.05(m，20H)，1.95(s，乙酸酯)，2.18(m，1H)，3.15-3.3(m，4H)，3.35(m，1H)，3.46(m，1H)，3.85(m，1H)，4.04(m，1H)，4.38(dd，1H)。
13C-NMR(125MHz，MeOD)胍δ158.73;羰基碳δ171.63，174.43和176.78。
实施例37HOOC-(R)CH(CH2-OH)-(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)和Br-(S)ch(ch2-OBn)-COOBn烷基化，然后用去保护方法(a)得到标题化合物。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ0.75-1.56(m，7H)，1.56-2.30(m，11H)，2.40(m，1H)，3.15-3.55(m，4H)，3.55-4.60(m，7H)。
实施例38HOOC-(R，S)CH(ph)-(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro-(Z)(参见实施例20)和Br-CH(ph)COOtBn烷基化，并用去保护方法(a)然后用去保护(f)。得到两种非对映体混合物的标题化合物。
1H-NMR(300MHz，MeOD)δ0.8-1.1(m，2H)，1.1-2.18(m，16H)，2.26(m，1H)，3.04-3.35(m，5H)，3.45(m，1H)，3.7(m，1H)，4.35(m，1H)，4.85(s，1H，一个异构体)，5.05(s，1H)，另一个异构体)，7.4-7.6(m，5H)，7.75(bt，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ158.68;羰基碳δ174.39，174.15和170.5，170.06和168.32，167.78。
实施例39HOOC-(S)CH(CH2CH2ph)-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc如实施例21中烷基化，采用H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)和Tfo-(R)CH(CH2CH2ph)-COOEt烷基化，并用去保护方法(e)，接着用去保方法(a)，得到标题化合物。
1H-NMR(300MHz，MeOD)δ0.77-1.05(m，2H)，1.05-1.35(m，5H)，1.35-2.16(m，14H)，1.88(s，乙酸酯，2.71(t，2H)，3.07-3.53(m，7H)，3.73(m，1H)，4.32(m，1H)，7.03-7.25(m，5H)。
13C-NMR(75MHz，MeOD)胍δ158.71;羰基碳δ174.15，177.31 182.61。
实施例40HOOC-(R)CH(CH2CH2ph)-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)和Br-CH(CH2CH2Ph)-COOEt烷基化，然后通过去保护方法(a)和(e)，得到HOOC-(R，S)CH(CH2-CH2-Ph)-(R)Cha-Pro-Nag。用RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，2/3)分离两种非对映体，蒸发掉溶剂后，冷冻干燥(H2O)获得标题化合物。
1H-NMR(300MHz，MeOD)δ0.97(m，2H)，1.10-1.41(m，3H)，1.43-2.30(m，16H)，1.96(s，乙酸酯)，2.70(m，2H)，3.06-3.26(m，3H)，3.28-3.66(m，3H)，3.84(m，1H)，4.14(bt，1H)，4.39(dd，1H)，7.11-7.28(m，5H)。
13C-NMR(75MHz，MeOD)胍δ158.66实施例41HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc
(ⅰ)EtOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)3-NH2如实施例15中所述，用H-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)3-N3代替H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)烷基化，然后用去保护方法(a)获得标题化合物。
(ⅱ)Et-OOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc采用实施19中所述的制备Z-(R)Cha-Pro-Nag的方法，胍化上述的胺得到标题化合物(ⅱ)。
(ⅲ)HOOC-CH2CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc在上述产物(ⅱ)上，采用去保护方法(e)制备。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ1.12(m，2H)，1.22-1.48(m，3H)，1.54(bs，1H)，1.70-2.37(m，12H)，2.14(s，乙酸酯)，2.53(m，1H)，2.70(bs，2H)，3.15(t，1H)，3.25-3.55(m，5H)，3.75(m，1H)，3.93(m，1H)，4.43(t，1H)，4.52(m，1H)。
实施例42EtOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc根据实施例41(ⅱ)制备。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ0.97(m，2H)，1.11-1.39(m，7H;它的1.30(t，3H))，1.50(t，2H)，1.62-1.76(m，5H)，1.76-2.14(m，5H)，1.93(s，乙酸酯)，2.29(m，1H)，2.62(t，2H)，2.77-2.94(m，2H)，3.23(t，2H)，3.32(t，2H)，3.60-3.87(m，3H)，4.20(q，2H)，4.36(dd，1H)。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ157.39;羰基碳δ182.05，175.13，175.02。
实施例43HOOC-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Nag x 2 HOAc(ⅰ)Et-OOC-CH＝CH-CH2-(R)Cha-Pro-Nag(Z)将H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)(1eq)和3-溴巴豆酸乙基酯(1.1eq)溶于乙腈(15ml/mmol)中。将碳酸钾加入到反应混合物中，在室温下搅拌2h。过滤后和蒸发溶剂，用闪色谱(CH2Cl2/MeOH)纯化粗产物。最后蒸发溶剂并真空干燥产物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.73-1.0(m，2H)，1.0-1.4(m，8H;它的1.33(t，3H))，1.43-2.15(m，12H)，2.96(bs，1H)，3.12(dd，1H)，3.16-3.48(m，6H)，3.56(m，1H)，4.15(q，2H)，4.35(bs，1H)，5.03(s，1H)，6.0(d，1H)，6.85(dt，1H)，7.05(bs，1H)，7.17-7.37(m，5H)，7.5(bs，1H)。
(ⅱ)EtOOC-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA在上述产物(ⅰ)上，用去保护方法(a)制备。
(ⅲ)HOOC-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Nag x 2 HOAc在上述产物(ⅱ)上，用去保护方法(e)制备。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ1.02(bs，2H)，1.08-1.32(m，3H)，1.42(bs，1H)，1.55-2.15(m，14H)，1.92(s，乙酸酯)，2.33(bs，3H)，3.00(bs，1H)，3.07(bs，1H)，3.18-3.40(m，4H)，3.62(bs，1H)，3.82(bs，1H)，4.33(bs，1H)，4.40(bs，1H)。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ157.42;羰基碳δ181.87，174.34，168.64。
实施例44EtOOC-(CH2)3-(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA根据实施例43(ⅱ)制备。
1H-NMR(300MHz，MeOD/D2O)δ0.63-1.30(m，9H;它的1.02(t，3H))，1.30-1.97(m，14H)，2.06(bs，1H)，2.28(m，2H)，2.72-3.20(m，6H)，3.36(m，1H)，3.60(m，1H)，3.94(m，2H)，4.06(m，1H)，4.17(m，1H)。
13C-NMR(75MHz，MeOD/D2O)胍δ158.10;羰基碳δ175.40，174.23，168.54。
实施例45HOOC-CO-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc(ⅰ)EtOOC-CO-(R)Cha-Pro-Nag(Z)将H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)，0.50g(0.97mmol)溶于0.54ml三乙基胺和8ml的CH2Cl2中。加入溶于2ml的CH2Cl2中的乙基草酰氯0.146g(1.07mmol)，此时温度升到22-28℃并在室温下搅拌反应2小时。有机相用水洗涤两次，干燥(Na2SO4并用闪色谱(EtOAc/EtOH(99%)，9/1)得到92mg(15%)的标题化合物。
(ⅱ)HOOC-CO-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc采用去保护方法(b)，然后用(e)得到标题化合物。
1H-NMR(300MHz，MeOD)δ0.88-1.14(m，2H)，1.15-1.5(m，4H)，1.5-2.3(m，13H)，1.9(s，乙酸酯)，3.1-3.43(m，4H)，3.6(m，1H)，4.05(m，1H)，4.43(dd，1H)，4.5(m，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.57;羰基碳δ165.94，173.95，174.85和181.22。
实施例46MeOOC-CO-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc(ⅰ)MeOOC-CO-(R)Cha-Pro-Nag(Z)通过在柱上EtOOC-CO-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例45)的酯基转移作用获得甲基酯，在内色谱中EtOAc/MeOH(9∶1)用作溶剂。产率55%(ⅱ)MeOOC-CO-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc在上述产物(ⅰ)上，用去保护方法(b)制备。
1H-NMR(300MHz，MeOD)δ0.9-1.1(m，2H)1.1-2.3(m，17H)，1.9(s，乙酸酯)，3.12-3.4(m，4H)，3.52-3.67(m，2H)，3.9(s，3H)，4.35(m，1H)，4.65(m，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.52;羰基碳δ159.11，161.20，173.17和174.90。
实施例47(R，S)Bla-(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)和α-溴丁内酯烷基化，然后用去保护方法(a)，得到两种非对映体混合物的标题化合物。
1H-NMR(300MHz，D2O，非对映体混合物)δ1.0-1.43(m，5H)，1.45-1.60(br.s，1H)，1.64-2.28(m，12H)，2.31-2.50(m，1H)，2.80-2.98(m，1H)，3.23-3.46(m，4H)，3.66-3.79(m，1H)，3.82-3.96(m，1H)，4.33-5.08(m，5H，部分被H-O-D信号掩蔽)。
实施例48HOOC-(R，S)CH(CH2COOH)-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc(ⅰ)BnOOC-(R，S)CH(CH2COOBn)-(R)Cha-Pro-Nag(Z)将H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)，0.21g(0.42mmol)，和0.12g(0.42mmol)的马来酸二苯甲基酯溶于10ml的CH3CN中。使混合物回流过夜，蒸发并用闪色谱(CH2Cl3/MeOH，94/6)提纯，蒸发溶剂得到所需化合物，产率22%。
(ⅱ)HOOC-(R，S)CH(CH2COOH)-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc在上述产物(ⅰ)上，用去保护方法(a)制备。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.9-2.4(m，19H)2.00(s，乙酸酯)，2.7-3.0(m，2H)，3.1-3.6(m，5H)，3.75-3.9(s，2H)，4.2-4.5(m，2H)。
实施例49MeOOC-(R，S)CH(CH2COOMe)-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc(ⅰ)MeOOC-(R，S)CH(CH2COOMe)-(R)Cha-Pro-Nag(Z)将H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例20)，0.21g(0.42mmol)，和0.24g(1.7mmol)的马来酸二甲基酯溶于15ml的MeOH中。混合物回流过夜，蒸发并用闪色谱(CH2Cl3/MeOH，9/1)提纯，蒸发溶剂得到所需化合物，产率45%。
(ⅱ)MeOOC-(R，S)CH(CH2COOMe)-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc在上述产物(ⅰ)上，用去保护方法(c)制备。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.85-1.1(m，2H)1.15-2.3(m，17H)，1.91(s，乙酸酯)，2.6-2.8(m，2H)，3.1-3.5(m，5H)，3.5-3.8(m，10H;它的4单3.66，3.68，3.71，3.73)，4.29(m，1H)。
实施例50HOOC-Ph-4-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA(ⅰ)tBuooc-Ph-4-CH2-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)3-NH3将H-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)3-N3(参见实施例22)，0.39g(1.1mmol)和0.33g(1.2mmol)P-溴甲基苯甲酸叔戊基丁基酯溶于10mlCH3CN中，加入0.19g(2.4mmol)的K2CO3。混合物回流过夜并蒸发。粗产物用闪色谱(CH2Cl2/MeOH，92∶8)提纯，得到0.50g(84%)的标题化合物。
(ⅱ)tBuooc-Ph-4-CH2-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)3-NH3在0℃对0.60g(1.8mmol)的双-苯硫基锡烷，0.20g(1.8mmol)的苯硫酚和0.18g(1.8mmol)的三乙基胺的50ml的CH2Cl2溶液中，加入0.50g(0.92mmol)的tBuooc-Ph-4-CH2-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)3-NH3。在0℃搅拌混合物30分钟，在室温下4h。然后用CH2Cl2棉释，并用碳酸氢钠水溶液洗涤，随后用2%H2O2洗涤3次。用稀HCl提取有机层。合并的酸化水相用EtOAc洗涤，随后用NaOH(aq)碱化。用乙酸乙酯提取水层两次，合并的有机层干燥(Na2SO4)并蒸发。用内色谱(CH2CL2/MeOH(NH3-饱和)，8∶2)提纯得到0.12g(26%)的标题化合物。
(ⅲ)Hooc-Ph-4-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x 2 TFA采用实施例19中所述的制备Z-(R)Cha-Pro-Nag的相同方法，胍化上述的胺，然后采用去保护的方法(f)，得到标题化合。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.9-1.5(m，7H)，1.4-1.9(m，9H)，1.95-2.1(m，2H)，2.16(m，1H)，2.32(m，1H)，3.2-3.3(m，3H)，3.41(戊，1H)，3.53(m，1H)，3.77(m，1H)，4.2-4.3(m，3H)，4.42(dd，1H)，7.15(d，2H)，8.10(d，2H)。
13C-NMR(125MHz，MeOD)胍δ160.8;羰基碳δ174.3，168.9，168.2。
实施例51(HO)2P(O)-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc将(EtO)2PO＝CH2-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例53)。60mg(92mmol)溶于3ml的CH3CN。加入0.15ml三甲基甲硅烷基溴化物，并将混合物放置在室温下21小时。蒸发后，NMR分析发现还存在一些酯。粗产物再溶于3ml的CH3CN中并加入0.15ml的三甲基甲硅烷基溴化物。5小时后，蒸发混合物，用RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，30∶70)，过滤，蒸发和冷冻后，得到最后的化合物，产率8%。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.8-1.1(m，2H)，1.15-1.4(m，4H)，1.5-1.9(m，10H)，1.9-2.1(m，4H)，1.96(s，乙酸酯)，2.20(m，1H)，2.95(m，1H)，3.0-3.2(m，3H)，3.4-3.5(m，2H)，4.09(m，1H)，4.39(bd，1H)，4.59(m，1H)。
13C-NMR(125MHz，MeOD)胍δ158.6羰基碳δ174.2，170.6。
实施例52EtO(HO)P(O)-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x 2 HOAc(ⅰ)(EtO)(HO)PO-CH2-(R)Cha-Pro-Nag(Z)。
将(EtO)2PO-CH2-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例53)，50mg(77mmol)溶于2ml EtOH和2ml 2M NaOH中。混合物搅拌过夜并蒸发。粗产物用RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，30∶70)纯化，过滤和蒸发溶剂后得到标题化合物。
(ⅱ)(EtO)2(HO)PO-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x 2 HOAc在上述产物(ⅰ)上，用去保护方法(c)制备。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.9-1.1(m，2H)，1.15-1.35(m，6H;它的1.28(t，3H))，1.35-1.5(m，2H)，1.5-1.6(m，1H)，1.65-1.8(m，6H)，1.9-2.1(m，3H)，1.95(s，乙酸酯)，2.19(m，1H)，2.80-3.0(m，2H)，3.1-3.25(m，2H)，3.27(m，1H)，3.36(m，1H)，3.48(m，1H)，3.9-4.05(m，4H)，4.36(bd，1H)。
13C-NMR(125MHz，MeOD)胍δ158.6羰基碳δ175.0，174.7实施例53(EtO)2P(O)-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc(ⅰ)(EtO)2PO-CH2-(R)Cha-Pro-Nag(Z)。
将H-(R)Cha-PRO-Nag(Z)(参见实施例20)，0.2g(0.40mmol)，溶于5ml THF中，加入0.11g(0.80mmol)的羰酸钾和0.12g(0.40mmol)三氟甲磺酰基磷酸二乙基酯。混合物在室温下搅拌2h，用水结束反应，用EtOAc提取水层三次。合并的有机层干燥(Na2SO4)并蒸发得到0.14g(53%)的标题化合物。
(ⅱ)(EtO)2PO-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc在上述产物(ⅰ)上，用去保护方法(c)制备。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.85-1.05(m，2H)，1.15-1.3(m，5H)，1.34(t，6H)，1.5-1.85(m，8H)，1.9-2.05(m，3H)，1.91(s，乙酸酯)，2.10(m，1H)，2.22(m，1H)，2.90(dd，1H)，3.05(dd，1H)，3.1-3.3(m，3H)，3.42(m，1H)，3.53(m，1H)，3.71(dd，1H)，3.82(m，1H)，4.1-4.2(m，4H)4.28(dd，1H)。
13C-NMR(125MHz，MeOD)胍δ158.7羰基碳δ176.1，175.1。
实施例54HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Mag x HOAc(ⅰ)H-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)2-NH(Z)从Boc-(R)Cha-Pro-OSu和H2N-(CH2)2-NH(Z)制备。采用实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法。
(ⅱ)EtOOC-CH2-(R)Cha-Pro-NH-(CH2)2-NH2x HOAc如实施例4中烷基化，然后通过去保护方法(a)，得到标题化合物。
(ⅲ)HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Nag x HOAc采用实施例19中所述的制备Z-(R)Cha-Pro-Nag的相同方法，胍化上述的胺，接着用去保护方法(e)，用RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，1/4)纯化合并冷冻干燥(H2O)得到标题化合物。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ0.90-1.18(m，2H)，1.19-1.43(m，3H)，1.52(m，6H)，1.63-2.20(m，10H)，2.06(s，乙酸酯)，2.31-2.47(m，1H)，3.44(m，2H)，3.50(m，2H)，3.60-3.75(m，3H)，3.85(m，1H)，4.46-4.54(m，2H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.82;羰基碳δ168.80，171.41，174.81。
实施例55H-(R，S)Pro(3-Ph)-Pro-Agm x 2 TFA从Boc-(R，S)Pro(3-Ph)-Pro-OSu(参见制备的起始物)制备，采用实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法，接着用去保护方法(b)。
1H-NMR(500MHz，D2O，具有未知相关立体化学的两种非对映体混合物)δ1.0-1.8(m，7H)，2.0-2.5(m，3H)，2.8-4.3(m，10H)，4.56(d，1H，较多的)，4.90(d，1H，较多的)，7.2-7.5(m，5H)。
13C-NMR(125.76MHz，D2O)胍δ157.36较少的和较多的);羰基碳δ174.1(较多的)，174.0(较少的)，167.8(较多的)，167.0(较少的)。
实施例56H-(R，S)Pro-(3-(反)Ch)-Pro-Agm x 2 TFA
从Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ch)-Pro-OSu(参见制备的起始物)制备。采实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法，接着用去保护方法(b)。
1H-NMR(500MHz，D2O，两种非对映体混合物，比例，1.8/1)δ0.95-1.32(m，5H)，1.35-1.46(m，1H)，1.50-1.92(m，10H)，1.93-2.15(m，4H)，2.23-2.43(m，2H)，3.15-3.30(m，4H)，3.35-3.50(m，2H)，3.57-3.68(m，1H)，3.74-3.82(m，1H)，4.34-4.41(m，1H)，4.51(d，1H，较少的)，4.48(d，1H，较多的)。
13C-NMR(125.76MHz，D2O)胍δ157.36较少的和较多的);羰基碳δ174.34(较多的)，174.07(较少的)，168.94(较少的和较多的)。
实施例57HOOC-CH2-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-Pro-Agm x 2 TFA(ⅰ)H-(R，S)Pro(3-(反)Ch)-Pro-Agm(Z)从Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-Pro-OSu(参见制备的起始物)制备。采用实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法。
(ⅱ)HOOC-CH2-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-Pro-Agm x 2 TFA如实施例4中，用Br-CH2COOBn烷基化，接着用去保护的方法(b)，得到二种非对映体混合物的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，MeOD，两种非对映体混合物，比例大约1.1/1)δ1.40-1.80(m，6H)，1.85-2.05(m，1H)，2.10-2.30(m，1H)，2.50-2.65(m，2H)，3.10-3.40(m，6H)，3.50-3.70(m，2H)，3.9-4.40(m，4H)，4.63(d，1H，较多的)，4.67(d，1H，较少的)7.30-7.60(m，5H)。
13C-NMR(125.76MHz，D2O)胍δ157.52所有异构体);羰基碳δ173.87，173.73，169.12，168.94，167.21，167.00。
实施例58HOOC-CH2-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-Pro-Nag x 2 TFA(ⅰ)H-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-Pro-Nag(Z)从Boc-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-Pro-OSu(参见制备的起始物)和Boc-Nag(Z)制备，采实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法。
(ⅱ)HOOC-CH2-(R，S)Pro(3-(反)Ph)-Pro-Nag x 2 TFA如实施例4中，用Br-CH2COOBn烷基化，接着用去保护的方法(b)，得到如两种非对映体混合物的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，MeOD，两种非对映体混合物，比例大约1.5/1)δ1.40-1.85(m，4H)，1.90-2.00(m，1H)，2.10-2.30(m，1H)，2.45-2.70(m，2H)，3.08-3.46(m，6H)，3.57-3.70(m，2H)，3.90-4.0(m，1H)，4.32-4.40(m，1H)，4.04和4.29(AB-四，2H，较多的)，4.16和4.37(AB-四，2H，较少的)，4.60(d，1H，较多的)，4.64(d，1H，较少的)，7.33-7.6(m，5H)。
13C-NMR(125.76MHz，D2O)胍δ157.48所有异构体);羰基碳δ173.90，173.71，169.01，168.94，167.07(所有异构体)。
实施例59HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Agm x 2 TFA(ⅰ)H-(R)ChA-Pic-Agm(Z)从BOC-(R)Cha-Pic-OSu(参见制备的起始物)制备，采用实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法。
(ⅱ)HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Agm x 2 TFA如实施例4中，采用Br-CH2COOBn烷基化，接着用去保护的方法(a)，得到标题化合物。
1H-NMR(300MHz，MeOD)δ1.02(m，2H)，1.13-2.00(m，20H)，2.24(bd，1H)，3.12-3.45(m，5H)，3.71(bd，1H)，3.87(s，2H)，4.65(bt，1H)，5.06(m，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.47;羰基碳δ169.42，170.03，172.71。
实施例60HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-(R，S)Pic-Agm x HOAc(ⅰ)Me-(R)Cha-(R，S)Pic-Agm(Z)从BOC-(Me)(R)Cha-Pic-OSu制备，采用实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法。
(ⅱ)HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-(R，S)Pic-Agm x HOAc如实施例4中，用Br-CH2COOBn烷基化，接着用去保护的方法(b)，得到标题化合物。
注释在合成中，某处出现Pic的差向异构表异构化。
1H-NMR是复合谱，由两个大约1∶1比例的非对映体和它的旋转异构体组成。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.75-2.15(几个m，20H)1.95(bs，乙酸酯)，2.2-2.7(6H，两个不清楚的信号，观察到的比例大约1∶1;它的2.35和2.55(s，3H))，3.0-3.5(m，6H)，3.9-4.17(m，2H;它的4.14(dd))，4.4-4.5(m，1H)，4.97-5.15(二个bdd，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.50;羰基碳δ169.65，170.01，170.54，172.67，172.89。
实施例61HOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-Pic-Agm x TFA如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pic-Agm(Z)(参见实施例59)和Br-CH(Me)COOBn烷基化，然后用去保护的(a)，得到两种非对映体混合物的标题化合物。
实施例62HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pic-Agm/a x 2 TFA采用RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，1/3)分离实施例61形成的非对映体，接着蒸发溶剂并从H2O/TFA中冷冻干燥而得到。柱中出现的二个峰的第一个是非对映体。
1H-NMR(300MHz，D2O，2旋转异构体大约5∶1比例)δ0.70(m，较少的旋转异构体)，0.75-1.0(m，2H)，1.0-1.28(m，3H)，1.28-1.83(m，20H;它的1.57(d，3H))，2.14(bd，1H)，2.92(t，较少的旋转异构体)，3.03-3.32(m，5H)，3.59(bd，1H)，3.85(q，较少的旋转异构体)，3.98(q，1H)，4.30-4.50(m，较少的旋转异构体)，4.54(m，1H)，4.95(s，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.39;δ172.26(2碳)，169.92。
实施例63HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pic-Agm/b x 2 TFA在实施例61形成的化合物上，采用实施例62所述的相同的方法，获得标题化合物。从柱中出现的第二个峰是本非对映体。
1H-NMR(500MHz，D2O，2旋转异构体大约5∶1比例)δ0.72(m，较少的旋转异构体)，0.82(m，较少的旋转异构体)，0.97(m，2H)，1.0-1.23(m，3H)，1.23-1.40(m，2H)，1.40-1.83(m，18H;它的1.63(d，3H))，2.11(d，1H)，2.17(d，较少的旋转异构体)，2.92(t，较少的旋转异构体)，3.05-3.25(m，4H)，3.29(t，1H)，3.74(d，1H)，4.02(q，1H)，4.34(d，较少的旋转异构体)，4.41(dd，较少的旋转异构体)，4.52(t，1H)，4.95(s，1H)。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ154.68;羰基碳δ169.81，169.60，167.36。
实施例64HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-Agm x 2 TFA采用实施例15中所述的制备HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Ag的相同方法，从H-(R)Cha-Pic-Agm(Z)制备，用1.2eq的丙烯酸苯甲基酯代替1.1eq。
1H-NMR(500MHz，D2O，2旋转异构体大约4∶1比例)δ0.70-0.90(m，较少的旋转异构体)，0.90-1.0(m，2H)，1.05-1.25(m，3H)，1.30-1.45(m，2H)，1.45-1.85(m，15H)，2.1(bd，1H)，2.2(bd，较少的旋转异构体)，2.75(t，2H)，2.95(t，较少的旋转异构体)，3.1-3.4(m，7H)，3.75(bd，1H)，4.55(t，1H)，4.95(m，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.48;羰基碳δ170.10，172.58，174.75。
实施例65H-(R)Cha-Pic-Nag x 2 TFA(ⅰ)Boc-(R)Cha-Pic-Nag(Z)(ⅰa)采用实施例3中所述的制备Boc-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法，以Boc-(R)Cha-Pic-OSu作为起始物制备。
(ⅰb)从Boc-(R)Cha-Pic-OH起始制备。
将二苯基磷酰基叠氮化物(0.432ml，2mmol)加入到-5℃的，Boc-(R)Cha-Pic-OH(765mg，2mmol)的搅拌溶液中。10分钟后，加入H-Nag(Z)x 2 HCl(600mg 2.1mmol，参见分离的起始物)的5ml DMF溶液和三乙基胺(615mg，4.4mmol)。保持反应混合物在冰浴中3h，然后在室温下12小时，此后，将其倒入水中。提取水相并真空蒸发溶剂1.18g(96%)得到如非对映体混合物(Pic上差向异构体)1.18g(96%)的产物，其比例为97∶3(RS/RF)。
(ⅰc)从Boc-(R)Cha-Pic-OH起始在-15℃下，将EDC氢氯化物(4.2g，21.9mmol)加入到Boc-(R)Cha-Pic-OH(8g，20.9mmol)，DMAP(10.6g，88mmol)和H-Nag-(Z) x HCl(6.3g，19.5mmol，参见制备的起始物)的乙腈溶液中，在16小时中，使反应混合物升至室温，真空除去溶液，残留物溶于乙酸乙酯中，用水，0.3M KHSO4，0.3M NaHCO3，水和盐水洗涤，接着通过干燥(Na2SO4)和蒸发溶剂得到如非对映体混合物(Pic上的差而异构体)的11.9g(92.5%)的产物，其比例为98/2(RS/RR)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.85-2.0(m，29H;它的1.40bs，9H))，2.46(bd，1H)，3.1-3.4(m，5H)，3.92(bd，1H)，4.53(bq，1H)，5.10(s，2H)，5.22(bs，1H)，5.29(bd，1H)，6.7-7.2(b，3H)，7.25-7.45(m，5H)。
13C-NMR(125MHz，CDCl3)胍δ156.9;羰基碳δ173.6，170.3，163.7，161.7。
(ⅱ)H-(R)Cha-Pic-Nag(Z)如实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法，以Boc-(R)Cha-Pic-Nag(Z)作为起始物制备。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.8-2.0(m，22H)，2.24(bd，1h)，3.1-3.4(m，5H)，3.72(bd，1H)，3.84(bq，1H)，5.05(bd，1H)，5.08(s，2H)，7.3-7.5(m，5H)。
(ⅲ)H-(R)Cha-Nag x 2 TFA在产物(ⅱ)上，采用去保护方法(a)制备。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.9-1.1(m，2H)，1.2-2.0(m，18H)，2.32(bd，1H)，3.20(t，2H)，3.30(t，2H)，3.36(m，1H)，3.69(bd，1H)，4.49(dd，1H)，5.05(bd，1H)。
13C-NMR(125MHz，MeOD)胍δ158.7;羰基碳δ172.7，171.4实施例66Me-(R)Cha-(R，S)Pic-Nag x 2 TFA(ⅰ)Me-(R)Cha-(R，S)Pic-Nag(Z)采用实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法，从BOC-(Me)(R)Cha-Pic-OSu和Boc-Nag(Z)起始制备。在合成中Pic出现差向异构表异构化，获得两个非对映体的混合物。
(ⅱ)Me-(R)Cha-(R，S)Pic-Nag x 2 TFA采用去保护方法(b)制备。
1H-NMR谱是复合的由两种比例大约为4∶1的非对映体组成和它的旋转异构体。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.8-1.08(m，2H)，1.15-2.4(几个m，19H)，2.6-2.75和2.9-2.95(几个s，3H)，3.1-3.6(几个m，5H)，3.75-4.1(几个m，1H)4.4-4.7(几个m，1H)，5.05-5.15(二dd，1H)。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ154.84;羰基碳δ167.60和169.99。
实施例67HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag(ⅰ)BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag(Z)如实施例4中采用H-(R)Cha-Pic-Nag(Z)(参见实施例65)和Br-CH2COOBn烷基化得到标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.8-1.0(m，2H)，1.1-1.7(m，19H)，1.79(bd，1H)，2.3-2.5(m，2H;它的2.38(bd，1H))，3.00(bt，1H)，3.1-3.4(m，5H;它的3.38(d，1H))3.58(d，1H)，3.67-3.7(m，2H)，5.06(dd，2H)，5.07(s，2H)，5.16(bs，1H)，6.7-7.1(b，1H)，7.15(bs，1H)，7.2-7.4(m，10H)。
13C-NMR(125MHz，CDCl3)胍和羰基碳δ176.0，173.6，170.8，163.8，161.7。
(ⅱa)HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag x 2 HCl采用去保护方法(a)接着用RPLC纯化，用CH3CN/0.1MNH4OAc，1/3作为洗脱剂，在40-50℃蒸发并冷冻干燥，得到标题化合物的乙酸酯。用20-倍的过量盐酸处理，蒸发并重新冷冻干燥得到所需化合物的二氢氯化物。
1H-NMR(500MHz，D2O，两种旋转异构体的混合物)δ0.7-2.0(m，20H)，2.17(bd，1H)，2.95(t，较少的旋转异构体)，3.17(t，2H)，3.25-3.35(m，3H)，3.72(bd，1H)，3.86(dd，较少的旋转异构体)，3.90(s，2H)，4.72(t，1H)，4.99(bs，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.4;羰基碳δ169.9，170.2，173.0。
(ⅱb)HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag x 2 HBr将BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag(Z)溶于iPr-OH/H2O(95/5)中，在大气压下，HBr(2.2eq)存在下用5% Pb/c充分氢化。过滤掉催化剂，蒸发溶剂，得到黄色油。(可选择的，氢化和过滤后可加入酸)，从iPr-OH(或EtOH)/EtOAc(1/1)结晶，得到如白色结晶粉末的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，D2O，两种旋转异构体的混合物)δ1.15-2.0(m，20H)，2.30(bd，1H)，3.30(m，2H)，3.40-3.50(m，3H)，3.85-3.90(m，1H)，3.95(出现s，2H)，4.75 4.85(m，1H，被H-O-D线部分掩蔽)，5.10(bs，1H)。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ157.6;羰基碳δ169.7，170.2，173.0。
实施例68MeOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag x 2 TFA在上通过iPrOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag(Z)(参见实施例69)的酯化转移作用，得到MeOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag(Z)的甲基酯，在内色谱期间，用CH2Cl2/MeOH作为洗脱剂。通过去保护方法(a)得到标题化合物。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.95-1.15(m，2H)，1.2-1.6(m，6H)，1.65-2.0(m，13H)，2.25(bd，1H)，3.21(t，2H)，3.30(t，2H)，3.37(m，1H)，3.71(m，1H)，3.83(s，3H)，3.97(dd，2H)，4.67(bt，1H)，5.05(bs，1H)。
13C-NMR(125MHz，MeOD)胍δ158.0;羰基碳δ173.0，171.1，168.3。
实施例69iPrOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag x 2 TFA如实施例4中所述采用H(R)Cha-Pic-Nag(Z)(参见实施例65)和Br-CH2-COOiPr烷基化，接着用去保护方法(a)得到标题化合物。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.95-1.1(m，2H)，1.15-1.16(m，12H;它的1.25(d，3H)，1.28(d，3H))，1.65-1.95(m，12H)，2.28(bd，1H)，3.21(t，2H)，3.30(t，2H)，3.36(m，1H)，3.93(dd，2H)，4.67(t，1H)，5.04(bs，1H)，5.11(戊，1H)。
13C-NMR(125MHz，MeOD)胍δ157.9;羰基碳δ173.1，171.0，168.3。
实施例70HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-(RorS)Pic-Nag/b x 2 TFA如实施例4中所述，采用Me(R)Cha-(R，S)Pic-Nag(Z)(参见室施例66)和Br-CH2-COOBn烷基化，通过去保护方法(b)得到HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-(R，S)Pic-Nag。用RPLC(CH3CN/NH4OAC，1∶3)分离两种非对映体，接着从H2O/TFA中冷冻干燥。从柱中出现的两个峰的最后一个是本非对映体。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.9-1.1(m，2H)，1.15-1.35(m，4H)，1.4-1.55(m，2H)，1.6-1.85(m，12H)，2.3(m，1H)，2.85(s，3H)，3.15-3.45(m，5H)，3.65(bs，2H)，4.0(m，1H)，4.65(m，1H)，5.08(dd，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.65;羰基碳δ169.86和172.48。
实施例71HOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-(R，S)Pic-Nag x 2 TFA如实施例4中所述，采用H-(R)Cha-Pic-Nag(Z)(参见实施例65)和Br-CH(Me)-COOBn烷基化，接着用去保护方法(a)得到标题化合物。
实施例72HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-(RorS)Pic-Nag/c x 2 TFA采用RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，1/4)分离实施例71中形成的非对映体，接着蒸发并从H2O/TFA中冷冻干燥而获得，从柱中出现的四个峰的第三个是本非对映体。
1H-NMR(300MHz，D2O，2旋转异构体大约5∶1比例)δ0.88(m，较少的旋转异构体)，0.98-1.63(m，7H)，1.63-2.02(m，16H;它的1.68(d，3H))，2.28(m，1H)，3.10(t，较少的旋转异构体)，3.25-3.50(m，5H;它的3.33(t，2H)和3.43(t，2H))，3.82(bd，1H)，4.02(q，1H)，4.55(d，较少的旋转异构体)，4.65(d，较少的旋转异构体)，4.72(m，1H)，5.10(m，1H)。
实施例73HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-(RorS)Pic-Nag/d x 2 TFA采用RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，1∶4)分离实施例71形成的非对映体，接着通过蒸发和用H2O/TFA中冷冻干燥获得，柱中的四个非对映体中，最后出现是本非对映体。
1H-NMR(500MHz，D2O，2旋转异构体大约5∶1比例)δ0.80(m，较少的旋转异构体)，0.90(m，较少的旋转异构体)，1.03(m，2H)，1.10-1.33(m，3H)，1.42(m，2H)，1.51-1.92(m，16H;它的1.57(d，3H))，2.18(d，1H)，2.24(d，较少的旋转异构体)，2.98(t，较少的旋转异构体)，3.21(t，2H)，3.28-3.40(m，5H;它的3.44(t，2H))，3.82(d，1H)，4.02(q，1H)，4.42(d，较少的旋转异构体)，4.50(t，较少的旋转异构体)，4.62(t，1H)，4.67(s，较少的旋转异构体)，5.03(s，1H)。
实施例74HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-Nag x 2 TFA从H-(R)Cha-Pic-Nag(Z)(参见实施例65)制备，采用实施例15中所述的制备HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-Agm的相同方法，用1.2eq的丙烯酸苯甲基酯代替1.1eq。
1H-NMR(500MHz，D2O，2旋转异构体大约4∶1比例)δ0.7-0.9(m，较少的旋转对映体)，0.9-1.0(m，2H)，1.05-1.3(m，3H)，1.3-1.45(m，2H)，1.05-1.8(m，13H)，2.10(d，较少的旋转异构体)，2.75(t，2h)，2.95(t，较少的旋转对映体)，3.15(t，2H)，3.2-3.35(m，5H)，3.75(d，1H)，4.55(t，1H)，4.95(m，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.57;羰基碳δ170.16，172.82，174.75。
实施例75HOOC-CH2-(R)Cha-(R，S)Mor-Agm x 2 TFA
(ⅰ)H-(R)Cha-Mor-Agm(Z)从Boc-(R)Cha-Mor-OSu(参见制备的起始物)制备，采用实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法。
(ⅱ)HOOC-CH2-(R)Cha-(R，S)Mor-Agm x 2 TFA如实施例4中，采用Br-CH2COOBn烷基化，接着用去保护的方法(b)得到标题化合物。在合成中，Mor的某些地方出现差而异构表异构化，且观察终产物是大约9∶1的两种非对映体的混合物1H-NMR(300MHz，MeOD)δ0.92-1.95(m，17H)，3.12-3.39(m，4H)，3.44-4.05(m，7H)，4.37(d，1H)，4.63(m，1H)，4.79(bd，1H)。
13C-NMR(75.47MHz，MeOD)胍δ158.63;羰基碳δ170.87，170.82，169.08其它的δ69.06，67.01(C-O-C)。
实施例76HOOC-CH2-(R)Cha-(RorS)Mor-Nag x 2 TFA(ⅰ)H-(R)Cha-Mor-Nag(Z)从Boc-(R)Cha-Mor-OSu(参见制备的起始物)制备和Boc-Nag(Z)制备，采用实施例3中所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)的相同方法。
(ⅱ)HOOC-CH2-(R)Cha-(RorS)Mor-Nag x 2 TFA如实施例4中所述，采用Br-CH2COOBn烷基化，接着用去保护的方法(b)得到标题化合物。
1H-NMR(300MHz，MeOD)δ0.92-1.13(m，2H)，1.15-1.42(m，3H)，1.50(br.s，1H)，1.62-1.95(m，9H)，3.14-3.40(m，4H)，3.46-4.13(m，7H)4.41(d，1H)，4.63(m，1H)，4.80(br.d，1H)。
13C-NMR(75.47MHz，MeOD)胍δ158.68;羰基碳δ171.19，170.90，169.46。其它的δ68.81，67.00(C-O-C)。
实施例77H-(R)Cha-Aze-Nag x 2 HOAc(ⅰ)Boc-(R)Cha-Aze-Nag(Z)根据实施例65(ⅰc)中所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-Nag(Z)的相同方法，从Boc-(R)Cha-Aze-OH制备。
(ⅱ)H-(R)Cha-Aze-Nag(Z)如所述制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)的相同方法制备。
(ⅲ)H-(R)Cha-Aze-Nag x 2 HOAc在上述产物(ⅱ)上，采用去保护方(a)制备。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ0.85-1.10(m，2h)，1.10-2.04(m，13H)，1.95(s，乙酸酯)，2.20-2.37(m，1H)，2.60-2.82(m，1H)，3.15-3.40(m，4H)，3.96-4.15(m，2H)，4.18-4.30(m，1H)，4.30-4.42(m，1H)，较少的旋转异构体的信号出现在δ0.70，3.90和5.10。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.39和羰基碳δ170.22和172.38。
实施例78
HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Nag x HOAc(ⅰ)BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Nag(Z)根据描述于实施例4中的方法，从H-(R)Cha-Aze-Nag(Z)(参见实施例77)制备。
(ⅱ)HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Nag x HOAc在上述产物(ⅰ)上，采用去保护(a)制备。
1H-NMR(500MHz，MeOD)δ0.90-1.10(m，2h)，1.15-2.00(m，13H)，1.95(s，乙酸酯)，2.20-2.30(m，1H)，2.58-2.70(m，1H)，3.17-3.30(m，4H)，3.35-3.50(m，2H)，3.55-3.68(m，1H)，4.10-4.20(m，1H)，4.30-4.38(m，1H)，4.65-4.77(m，1H)，较少的旋转异构体的信号出现在δ3.75，3.98，4.03和5.08。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.40和羰基碳δ169.16，171.92和172.13。
实施例79H-(R)Cha-Pro(5-(S)Me)-Nag x 2 HCl(ⅰ)Boc-(R)Cha-Pro(5-(S)Me)-Nag(Z)采用所述的联结Boc(R)Cha-OH和H-Pic-OEt x HCl(参见制备的起始物)的相同方法，用来完成(R)Cha-Pro(5-(S)Me)-OH和H-Nag(Z)x 2 HCl之间的联接。
(ⅱ)H-(R)Cha-Pro(5-(S)Me)-Nag(Z)采用所述的合成H-(R)-Cgl-Pic-Nag(Z)(参见实施例84(ⅱ))的相同方法。
(ⅲ)H-(R)Cha-Pro(5-(S)Me)-Nag x 2 HCl
在上述产物(ⅱ)上，采用去保护方法(d)制备。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ1.0-2.3(m，21H)，它的1.47(d，3H)，2.4-2.55(m，1H)，3.3-3.6(m，4H)，4.30(bt，1H)，4.38(dd，1H)，4.47(bt，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.6;羰基碳δ174.6，169.6。
实施例80HOOC-CH2-(R)Cha-Pro(5-(S)Me)-Nag x 2 HOAc如实施例4中，采用H-(R)Cha-Pro(5-(S)Me)-Nag(Z)(参见实施例79)和Br-CH2-COOBn烷基化，接着用去保护方法(a)得到标题化合物。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ0.9-1.9(m，19H);它的1.34(bd，3H)，1.93(s，乙酸酯)，2.0-2.2(m，3H)，2.34(m，1H)，3.1-3.5(m，7H)，3.97(m，1H)，4.20(m，1H)，4.31(bt，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.4。
实施例81HOOC-CH2-(R)Cha-(RorS)Pic(4，5-去氢)-Nag/b x HOAc(ⅰ)Boc-(R)Cha-(R，S)Pic(4，5-去氢)-Nag(Z)从Boc-(R)Cha-(R，S)Pic(4，5-去氢)-OH制备，采用所述的制备BOC-(R)Cha-Pic-Nag(Z)的相同方法(参见实施例65(ic))。
(ⅱ)H-(R)Cha-(R，S)Pic(4，5-去氢)-Nag(Z)采用所述的H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)的相同方法制备。
(ⅲ)BnOOC-CH2-(R)Cha-(R，S)Pic(4，5-去氢)-Nag(Z)根据实施例4所述的方法，从H-(R)Cha-(R，S)Pic(4，5-去氢)-Nag(Z)制备。
(ⅳ)HOOC-CH2-(R)Cha-(RorS)Pic(4，5-去氢)-Nag/b x 2 HOAc将356mg(0.539mmol)的BnOOC-CH2-(R)Cha-(R，S)Pic(4，5-去氢)-Nag(Z)，10.8mL三氟乙酸和3.4ml的混合物，在室温下搅拌3.5小时。加入水且混合物用CH2Cl2洗涤二次，蒸发溶剂得到HOOC-CH2-(R)Cha-(R，S)Pic(4，5-去氢)-Nag。通过RPLC(CH3CN/NH4OAc(0.1M)，3/7)分离非对映体，并在蒸发溶剂后，冷冻干燥(H2O)获得标题化合物，从柱中出现的两个峰的第二个是本非对映体。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ0.85-1.95(m，15H)，2.50-2.80(m，2H)，3.25(t，2H)，3.35(t，2H)，3.55(bs，2H)，3.85-4.6(m，3H)，4.92(较少)，5.30(d，1H)，5.85-6.1(m，2H)，13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.59;和羰基碳δ171.46，172.58，173.03。
实施例82HOOC-CH2-(R)Cha-Pic(4-(S)Me)-Nag x 2 HCl(ⅰ)Boc-(R)Cha-Pic(4-(S)Me)-Nag(Z)从Boc-(R)Cha-Pic(4-(S)Me)-OH制备，根据实施例65的方法(ic)，采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-Nag(Z)的相同方法制备。
(ⅱ)H-(R)Cha-Pic(4-(S)Me)-Nag(Z)
如所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)的相同方法制备。
(ⅲ)BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic(4-(S)Me)-Nag(Z)根据描述于实施例4中的方法，从H-(R)Cha-Pic(4-(S)Me)-Nag制备。
(ⅳ)HOOC-CH2-(R)Cha-Pic(4-(S)Me)-Nag x 2 HCl在上述产物(ⅲ)上，采用去保护方法(d)制备。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ0.95-2.05(m，22H;它的1.05(d，3H))，2.30-2.38(bd，1H)，3.28-3.36(m，2H)，3.36-3.50(m，3H)，3.85-3.95(m，1H)，3.98(s，2H)，4.70-4.90(m，1H;部分掩蔽在HOD信号的后面)，5.22-5.27(d，1H)，较少的旋转异构体的信号出现在δ0.93，3.13和4.57。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ157.58;羰基碳δ170.12，170.32和172.82。
实施例83HOOC-CH2-(R)Pic(4-(R)Me)-Nag x 2 HCl(ⅰ)Boc-(R)Cha-(R)Pic(4-(R)Me)-Nag(Z)从Boc-(R)Cha-(R)Pic(4-(R)Me)-OSu和Boc-Nag(Z)制备，采用如Boc-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)的相同方法制备。
(ⅱ)H-(R)Cha-(R)Pic(4-(R)Me)-Nag(Z)如所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)的相同方法制备。
(ⅲ)BnOOC-CH2-(R)Cha-(R)Pic(4-(R)Me)-Nag(Z)
根据描述于实施例4中的方法，从H-(R)Cha-(R)Pic(4-(R)Me)-Nag(Z)制备。
(ⅳ)HOOC-CH2-(R)Cha-(R)Pic(4-(R)Me)-Nag x 2 HCl在上述产物(ⅲ)上，采用去保护方法(d)制备。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ1.00-2.05(m，22H)，2.18-2.26(bd，1H)，3.28-3.36(m，2H)，3.36-3.55(m，3H)，3.85-4.05(m，3H)，4.70-4.90(m，1H;部分掩蔽在HOD信号的后面)，5.25-5.30(d，1H)，较少的旋转异构体的信号出现在δ2.40，2.90，4.10，4.42，4.55和5.23。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ157.56;和羰基碳δ169.69，169.84和173.20。
实施例84HOOC-CH2-(R)Cgl-Pic-Nag x 2 HCl(ⅰ)Boc-(R)Cgl-Pic-Nag(Z)从Boc-(R)Cgl-Pic-OH制备，根据实施例65的方法(ic)，如所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-Nag(Z)的相同方法制备。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ0.9-1.8(m，27H)，2.4(d，1H)，3.1-3.3(m，5H)，3.9(d，1H)，4.2(t，1H)，5.1(s，2H)，5.2(bd，2H)，6.7-7.4(m，9H)。
(ⅱ)H-(R)Cgl-Pic-Nag(Z)将氯化氢气体通入Boc-(R)Cgl-Pic-Nag(Z)(1.38g，2.22mmol)的乙酸乙酯溶液中。10分钟后蒸发溶剂，残留物溶于乙酸乙酯和10% Na2CO3中。分离有机相，用盐水洗涤并干燥(MgSO4)。蒸发溶剂得到1.02g(92%)的标题化合物。
1H-NMR(300MHz，MeOD)δ1.0-1.9(m，18H)，2.2-2.3(m，1H)，3.2-3.3(m，5H)，3.6(d，1H)，3.8-3.9(bd，1H)，4.2(t，1H)，4.7-4.8(bs，5H)，5.1(s，2H)，5.2(s，1H)，7.2-7.3(m，5H)。
(ⅲ)BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pic-Nag(Z)在-25℃，将苯甲基乙二醇三酯(291mg，0.98mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液，加入到H-(R)Cgl-Pic-Nag(Z)(0.52g，1.04mmol)和K2CO3(494mg，3.58mmol)的乙腈(5ml)和CH2Cl2(1ml)的搅拌混合物中，两个小时之间使温度升至室温，且5天后，用水稀释反应混合物，并用EtOAc和甲苯提取。干燥有机相(MgSO4)，浓缩溶液，得到319mg(47%)无色晶体。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ1.0-1.1(m，1H)，1.1-1.3(m，4H)，1.35-1.6(m，5H)，1.6-1.85(m，8H)，1.8-2.2(bs，1H)，2.23-2.5(m，2H)，2.9(t，1H)，3.1-3.5(m，6H)，3.6-3.7(m，2H)，5.0-5.1(m，4H)，5.2(s，1H)，6.5-7.4(m，13H)。
(ⅳ)HOOC-CH2-(R)Cgl-Pic-Nag x 2 HCl将BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pic-Nag(Z)(319mg，0.49mmol)溶于加热的异丙醇(50ml)和水(5ml)，并用10% Pd/c(228mg)充分氢化24h。过滤和蒸发溶剂后，接着溶于稀盐酸中并冷冻干燥，分离如白色粉末状的肽(223mg，91%)。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ1.1-2.1(m，18H)，2.3(d，1H)，3.3(t，2H)，3.4(t，3H)，3.85-4.05(m，3H)，4.6(d，1H)，5.15(s，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.43;羰基碳δ169.2，172.94。
实施例85H-(R)Hoc-Pro-Nag x 2 TFA(ⅰ)Boc-(R)Hoc-Pro-Nag(Z)从Boc-(R)Hoc-Pro-OH制备，根据实施例65(ic)中所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-Nag(Z)的相同方法。
(ⅱ)H-(R)Hoc-Pro-Nag(Z)如所述的制备H-(R)Cha-Pro-Agm(Z)(参见实施例3)的相同方法制备。
(ⅲ)H-(R)Hoc-Pro-Nag x TFA在产物(ⅱ)上，采用去保护方法(a)制备。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ0.90-1.05(m，2H)，1.16-1.48(m，6H)，1.48-1.84(m，6H)，1.84-2.24(m，6H)，2.40(m，1H)，3.25-3.45(m，4H)，3.74(m，1H)，3.85(m，1H)，4.42(m，1H)，4.51(m，1H)。
实施例86HOOC-CH2-(R)Hoc-Pro-Nag x HOAc(ⅰ)BnOOC-CH2-(R)Hoc-Pro-Nag(Z)根据实施例4中叙述的方法，从H-(R)Hoc-Pro-Nag(Z)(参见实施例85)制备。
(ⅱ)HOOC-CH2-(R)Hoc-Pro-Nag x HOAc
在上述产物(a)上，采用去保护方法(a)制备。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ0.76-0.97(m，2H)，1.00-1.37(m，6H)，1.50-2.12(m，12H)，1.89(s，乙酸酯)，2.27(m，1H)，3.10-3.33(m，4H)，3.41(bs，2H)，3.61(m，1H)，3.77(m，1H)，4.12(m，1H)，4.37(m，1H)。
13C-NMR(75MHz，D2O)胍δ157.4;羰基碳δ170.08，173.9，174.5。
实施例87HOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Nag x HOAc(ⅰ)Boc-(R)Hoc-Pic-Nag(Z)从Boc-(R)Hoc-Pic-OH制备，根据实施例65的方法(ic)，采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-Nag(Z)的相同方法制备。
(ⅱ)H-(R)Hoc-Pic-Nag(Z)采用所述的制备H-(R)Cha-Pro-Nag(Z)(参见实施例3)的相同方法制备。
(ⅲ)BnOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Nag(Z)根据如实施例4所述的方法制备。
(ⅳ)HOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Nag x HOAc在上述产物(ⅲ)上，用去保护方法(a)制备。
1H-NMR(300MHz，D2O)δ0.75-0.95(m，2H)，1.00-1.30(m，6H)，1.30-1.50(m，2H)，1.50-1.82(m，12H)，1.82-1.95(bs，乙酸酯)，2.23(bd，1H)，3.08-3.32(m，6H)，3.52(bs，2H)，3.77(bd，1H)，4.50(bs，1H)，5.00(bs，1H)。
实施例88HOOC-CH2-(R)Dph-Pic-Nag x 2 HCl(ⅰ)Boc-(R)Dph-Pic-Nag(Z)从Boc-(R)Dph-Pic-OH制备，采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-Nag(Z)(参见实施例65(ic))的相同方法。
(ⅱ)H-(R)Dph-Pic-Nag(Z)采用所述的制备H-(R)Cgl-Pic-Nag(Z)(参见实施例84(ⅱ))的相同方法制备。
(ⅲ)BnOOC-CH2-(R)Dph-Pic-Nag(Z)根据实施例4中所述的方法，从H-(R)Dph-Pic-Nag(Z)制备。
(ⅳ)HOOC-CH2-(R)Dph-Pic-Nag x 2 HCl在上述产物(ⅲ)上，用去保护方法(d)制备。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ0.46(m，1H)，1.2-1.35(m，2H)，1.45(m，1H)，1.53(m，1H)，1.89(戊，2H)，2.03(bd，1H)，3.24(bt，1H)，3.29(t，2H)，3.38(t，2H)，3.72(d，1H)，3.78(d，1H)，3.79(m，1H)，4.68(d，1H)，4.89(m，1H)，5.73(d，1H)，7.4-7.6(m，6H)，7.65(t，2H)，7.81(d，2H)。
实施例89HOOC-CH2-(R)Dph-Pic-Nag x HOAc(ⅰ)Boc-(R)Dch-Pic-Nag(Z)从Boc-(R)Dch-Pic-OH制备，采用所述的制备Boc-(R)Cha-Pic-Nag(Z)(参见实施例65(ic)中)的相同方法。
(ⅱ)H-(R)Dch-Pic-Nag(Z)采用所述的制备H-(R)Cgl-Pic-Nag(Z)(在实施例84(ⅱ)中)的相同方法制备。
(ⅲ)BnOOC-CH2-(R)Dch-Pic-Nag(Z)根据实施例4中所述的方法，从H-(R)Dch-Pic-Nag x HOAc制备。
(ⅳ)HOOC-CH2-(R)Dch-Pic-Nag x HOAc通过去保护作在上述(ⅲ)产物中制备。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ1.2-2.0(m，30H)，2.09(s，乙酸酯)，2.30(bd，1H)，3.32(t，2H)，3.4-3.5(m，3H)，3.65(d，1H)，3.70(d，1H)，3.86(bd，1H)，4.86(m，1H)，5.09(m，1H)。
13C-NMR(125MHz，D2O)胍δ159.4;羰基碳δ172.5，173.3，174.9。
实施例P1非肠道给药的溶液以下述成分制备溶液HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag x 2 HBr 5g注射用氯化钠 9g乙酸 3g注射水至1000ml将活性成分，氯化钠和乙酸溶于水中。用2M NaOH将PH调节至PH3-7。通过消毒的0.2μm滤器过滤溶液，并无菌地倒入消毒的安瓿瓶。
实施例P2
口服给药的片剂以下述成分制备1000片凝血酶抑制剂 100g乳糖 200g聚乙烯吡咯烷酮 30g微晶纤维素 30g硬脂酸镁 6g将活性成分和乳糖与聚乙烯吡咯烷酮的水溶液混合。干燥混合物并磨成颗粒。然后混合微晶纤维素，再混合硬酯酸镁。然后将混合物用压片机，压出1000片，每片含有100mg的活性成分。
生物学测定凝血酶的凝固时间和IC50TT将人体凝血酶(T 6769，Sigma Chem Co)PH 7.4的100μl的缓冲溶液，和100μl抑制剂溶液，温育一分钟。汇合入正常的人体血浆柠檬酸盐，100μl加入后，用自动设备(KC 10，Amelung)测定凝固时间。
按秒计算的凝固时间，相对抑制浓度绘图应用内推法测定LC50TT。
LC50TT是两倍于人体血浆凝血酶凝固时间的抑制剂浓度。pIC50TT是以mol/l为单位的IC50TT的-log 10。本发明中优选的化合物具有的pIC50TT在6.6-8.2之间。
测定活化部分凝血激活的时间(APTT)。
汇合正常人体血浆柠檬盐和由Stago制造的PTT Automated 5试剂。将抑制剂加入到血浆中(10μl抑制剂溶液对90μl血浆。并测定混合物的APTT，根据试剂生产者的建议，采用凝血分析仪KC10(Amelung)测定。按秒计的凝固时间，相对血浆的抑制剂浓度作图。应用内推法确定IC50APTT。
IC50APTT定义为两倍于活化部分凝血激活酶时间的血浆中的抑制剂浓度，pIC50APTT是以mol/l计的IC50APTT的-log 10。实验中显示的pIC50APTT在5.1-6.4之间的那些本发明化合物是优选的。
缩写词Agm＝胍基丁胺Agm(Z)＝四-N-苯甲氧羰基胍基丁胺AA1＝氨基酸1AA2＝氧基酸2Aze＝(S)-氮杂环丁烷-2-羧酸BLa＝α-取代的丁内酯Boc＝叔丁氧羰基Brine＝饱和的水/NaCl溶液Bu＝丁基Bn＝苯甲基Cgl＝(S)环己基甘氨酸Ch＝环己基Cha＝(S)-β-环己基丙氨酸CME-CDI＝N-甲-P-甲苯磺酰1-环己基-3-(2-吗啉代乙基)碳化二亚胺DCC＝二环己基碳化二亚胺Dch＝二环己基丙氨酸
DMAP＝N，N-二甲基氨基吡啶DMF＝二甲基甲酰胺DMSO＝二甲基亚砜Dph＝(S)-二苯基丙氨酸EDC＝氯化1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺Et＝乙基EtOAc＝乙酸乙酶HOAc＝乙酸HOBt＝N-羟基苯并三唑Hoc＝(S)＝碳环己基丙氨酸Hop＝(S)-高苯基丙氨酸HOSu＝N-羟琥珀酰亚胺Mag＝MiniagmatineMe＝甲基Mor＝(S)-吗啉基-2-羧酸Mpa＝mega pascalNag＝去甲胍基丁胺Nag(Z)＝δ-N-苯甲基氧羰基-去甲胍基丁胺NMM＝N-甲基吗啉Pgl＝(S)-苯基甘氨酸Ph＝苯基Phe＝(S)-苯基丙氨酸Pic＝(S)-甲基哌啶酸
Pr＝丙基Pro＝(S)-脯氨酸RPLC＝反相高效液相色谱Tf＝三氟甲基磺酰基TFA＝三氟乙酸THF＝四氢呋喃p-TsOH＝对-甲苯磺酸Val＝(S)-缬氨酸Z＝苯甲氧羰基词头n，s，i和t具有它们通常的意义正，异，仲和叔。
权利要求
1.通式Ⅰ的化合物
其中A表示亚甲基，或A表示亚乙基且所得的5-元环可以带或可以不带有一或二个氟原子，在4位的羟基或氧基，或可以是或可以不是不饱和的，或A表示杂原子官能团在4位的-CH2-O-，-CH2-S-，-CH2-SO-，或A表示n-亚丙基，且所得6-元环在5位可以带或可以不带有一个氟原子，羟基或氧基，在4或5位之一带有两个氟原子，或在4位和5位是不饱和的，或在4-位带有1到4碳原子烷基，或A表示-CH2-O-CH2-，-CH2-S-CH2-，-CH2-SO-CH2-；R1表示H，具有1到4碳原子的烷基，具有2-3碳原子的羟基烷基或R11OOC-烷基-，其中烷基具有1到4碳原子且R11是H或具有1-4碳原子的烷基或分子内连接在R1羰基的2位的具有2-3碳原子的亚烷基，或R1表示R12OOC-1，4-苯基CH2-，其中R12是H或具有1到4碳原子的烷基，或R1表示R13-NH-CO-烷基，其中烷基具有1到4碳原子且可以用1到4碳原子的烷基在羰基的α位取代，且其中R13是H或具有1到4碳原子的烷基或-CH2COOR12，其中R12定义如上述，或R1表示R12OOC-CH2-OOC-烷基，其中烷基具有1到4碳原子，且可以用具有1到4碳原的烷基在α位取代的羰基，且其中R12定义如上述，或R1表示CH3SO2-，或R1表示R12OCOCO-其中R12如上述定义，或R1表示-CH2PO(OR14)2，-CH2SO3H或CH2-(5-(IH)-四唑)，其中R14是，分别在每次出次H，甲基或乙基；R2表示H或具有1到4碳原子的烷基或R21OOC-烷基-，其中烷基具有1到4碳原子且可以在羰基的α位取代，且α取代基是R22-(CH2)p-基，其中P=0-2且R22是甲基，苯基，OH，COOR21，且R21是H或具有1到4碳原子的烷基；m是0，1或2，R3表环己基且R4表示H，或m是1且R3表示环已基或苯基，且R4与R1一起形成亚乙基桥，或m是1且R3和R4分别表示环己基或苯基；R5表示H或具有1到4碳原子的烷基；n是2到6的整数；且B表示-N(R6)-C(NH)-NH2，其中R6是H或甲基，或B表示-S-(CNH)-NH2，或-C(NH)-NH2，或者是上述化合物或是其生理上可接受盐形式以及其包括的立异构体，
2.根据权利要求1的化合物，其中R1表示R11-OOC-烷基-，其中烷基基团具有1到4碳原子，且R11是H。
3.根据权利要求2的化合物，其中A是亚乙基且R5是H或具有1到4碳原子的烷基。
4.根据权利要求2的化合物，其中A是n-亚丙基且所得的6-元环在4位可以带或可不带有1到4碳原子的烷基，且R5是H或具有1到4碳原子的烷基。
5.根据前述一个或多个权利要求的化合物，其中R3是环己基，m是1，2和R4是H。
6.根据前述一个或多个权利要求的化合物，其中n是3。
7.根据前述一个或多个权利要求的化合物，具有在P2位α-氨基酸上具有S-构象。
8.根据权利要求7的化合物，其中在P3位的α-氨基酸具有R-构象。
9.选自下述的化合物H-(R)Cha-Pro-AgmMe-(R)Cha-Pro-AgmHO-(CH2)3-(R)Cha-Pro-AgmiPrOOC-CH2-(R)Cha-Pro-AgmHOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-AgmHOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Agm/aHOOC-(RorS)CH(nPr)-(R)Cha-Pro-Agm/aHOOC-(RorS)CH(nPr)-(R)Cha-Pro-Agm/bHOOC-(RorS)CH(Ph)-(R)Cha-Pro-Agm/bHOOC-(R，S)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-AgmHOOC-(RorS)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-Agm/aHOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-AgmEtOOC-CO-(R)Cha-Pro-Agm(R，S)Bla-(R)Cha-Pro-AgmHOOC-(RorS)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-Agm/bH-(R)Cha-Pro-NagnBu-(R)Cha-Pro-NagHO-(CH2)3-(R)Cha-Pro-NagEtOOC-CH2-(R)Cha-Pro-NagiPrOOC-CH2-(R)Cha-Pro-NagtBuOOC-CH2-(R)Cha-Pro-NagHOOC-CH2-OOC-CH2-(R)Cha-Pro-NagH2N-CO-CH2-(R)Cha-Pro-NagHOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Nag(HOOC-CH2)2-(R)Cha-Pro-NagHOOC-CH2-(nBu)(R)Cha-Pro-NagHOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-NagHOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Nag/aEtOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-NagHOOC-(RorS)CH(nPr)-(R)Cha-Pro-Nag/aHOOC-(R)CH(CH2-OH)-(R)Cha-Pro-NagHOOC-(R，S)CH(Ph)-(R)Cha-Pro-NagHOOC-(S)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-NagHOOC-(R)CH(CH2CH2Ph)-(R)Cha-Pro-NagHOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-NagEtOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pro-NagHOOC-(CH2)3-(R)Cha-Pro-NagEtOOC-(CH2)3-(R)Cha-Pro-NagHOOC-CO-(R)Cha-Pro-NagMeOOC-CO-(R)Cha-Pro-Nag(R，S)Bla-(R)Cha-Pro-NagHOOC-(R，S)CH(CH2COOH)-(R)Cha-Pro-NagMeOOC-(R，S)CH(CH2COOMe)-(R)Cha-Pro-NagHOOC-Ph-4-CH2-(R)Cha-Pro-Nag(HO)2P(O)-CH2-(R)Cha-Pro-NagEtO(HO)P(O)-CH2-(R)Cha-Pro-Nag(EtO)2P(O)-CH2-(R)Cha-Pro-NagHOOC-CH2-(R)Cha-Pro-MagH-(R，S)Pro(3-Ph)-Pro-AgmH-(R，S)Pro(3-(trans)Ch)-Pro-AgmHOOC-CH2-(R，S)Pro(3-(trans)Ph)-Pro-AgmHOOC-CH2-(R，S)Pro(3-(trans)Ph)-Pro-NagHOOC-CH2-(Me)(R)Cha-(R，S)Pic-AgmHOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-Pic-AgmHOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pic-Agm/aHOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-AgmH-(R)Cha-Pic-NagMe-(R)Cha-(R，S)Pic-NagMeOOC-CH2-(R)Cha-Pic-NagiPrOOC-CH2-(R)Cha-Pic-NagHOOC-CH2-(Me)(R)Cha-(RorS)Pic-Nag/bHOOC-(R，S)CH(Me)-(R)Cha-(R，S)Pic-NagHOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-(RorS)Pic-Nag/cHOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Pic-NagHOOC-CH2-(R)Cha-(R，S)Mor-AgmHOOC-CH2-(R)Cha-(RorS)Mor-NagH-(R)Cha-Aze-NagHOOC-CH2-(R)Cha-Aze-NagH-(R)Cha-Pro(5-(S)Me)-NagHOOC-CH2-(R)Cha-(RorS)Pic(4，5-dehydro)-Nag/bHOOC-CH2-(R)Cha-(R)Pic(4-(R)Me)-NagHOOC-CH2-(R)Cgl-Pic-NagH-(R)Hoc-Pro-NagHOOC-CH2-(R)Hoc-Pro-NagHOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-NagHOOC-CH2-(R)Dph-Pic-NagHOOC-CH2-(R)Dch-Pic-NagHOOC-CH2-(R)Cha-Pro(5-(R，S)Me)-NagHOOC-CH2-(R)Cha-Pic(4-(R)Me)-NagH-(R)Cha-Pic(4-(R)Me)-NagHOOC-CH2-(R)Cha-Pic(6-(S)Me)-Nag或是上述化合物或是其生理上可接受的盐和其包括的立体异构体。
10.选自下述的化合物HOOC-CH 2 -(R)Cha-Pro-AgmHOOC-CH 2 -(Me)(R)Cha-Pro-AgmHOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Agm/bHOOC-CH 2 -(R)Cha-Pro-NagHOOC-CH 2 -(R)Cha-Pic-AgmHOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pic-Agm/bHOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-(RorS)Pic-Nag/dHOOC-CH 2 -(R)Cha-Pro(5-(S)Me)-NagHOOC-CH 2 -(R)Cha-Pic(4-(S)Me)-Nag或是其生理上适合的盐和其包括的立体异构体。
11.化合物HOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Nag本身或者是其生理上适合的盐和其包括的立体异构体。
12.化合物HOOC-(RorS)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Nag/b本身或者是生理上适合的盐和其包括的立体异构体。
13.化合物HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Nag本身或是其生理上适合的盐和其包括的立体异构体。
14.制备权利要求1-13任一化合物的方法，该方法包括将N-末端保护的氨基酸或二肽，或预先形成的N-末端烷基化的被保护的二肽与下式化合物相连接H2N-(CH2)n-X其中n是2到6的整数且X是未保护或被保护的胍基或保护的氨基，或可以转化成氨基的基团，其中的氨基随后可以转化成胍基，且如果需要，形成生理上适合的盐，且在有情况下其中所得反应物是立体异构体的混合物，如果需要分离单个的立体异构体，可任意地通过常规色谱或重结晶技术分离。
15.根据权利要求14的方法制备权利要求1-13任一权利要求中化合物的方法，其方法包括a)(方法Ⅰ)两者任一的保护或不保护氨基胍或在烷基的末端带有保护和掩蔽氨基的直链烷基胺和N-末端保护的二肽相连接，采用如下式所示的常规的肽连接方法
其中R3，R4，R5，n，m和A如式Ⅰ中定2，R6是H或烷基，W1是氨基保护基，如叔丁氧羰基和苯甲氧羰基且X是-NH-C(NH)NH2′-NH-C(NH)NH-W2-N(W2)-C(NH)NH-W2′-NH-C(NW2)-NHW2或-NH-W2′其中W2是氨基保护基，如叔丁氧羰基或苯甲氧羰基，或X是蔽掩的氨基如叠氮化合物，得到保护的肽，或b)(方法Ⅱ)连接N-末端保护的氨基酸，和两者择一的保护或未保护氨基胍或在烷基末端带有保护或掩蔽氨基的直链烷基胺，采用如下式的常规的肽连接方法
其中W1，A，R5和X如上述定义，接着将W1-基去保护并连接保护形式的N-末端氨基酸，或c)(方法Ⅲ)采用常规的肽连接方法连接预先形成的N-末端烷基化和保护的二肽，和两者择一的保护或未保护氨基胍或在烷基链末端带有保护或掩蔽氨基的直链烷基胺，采用如下式所述的常规的肽连接方法
其中R2，R3，R4，R5，n，m，A和X如上述定义，除了R2不是H且W3是如三氟酰基的酰基保护基，上述最终的化合物，以下述任一的方法制备，依赖于采用的原来的X-基除去保护基(当X＝-NH-C(NH)NH2，NH-C(NH)NH-W2，-N(W2)-C(NH)NH-W2，-NH-C(NW2)NH-W2)或选择性地去保护W1-基(例如当X＝-NH-C(NH)NH-W2，-N(W2)-C(NH)NH-W2，-NH-C(NW2)NH-W2，在这种情况下W2必须正交于W1)接着将N-末端氮烷基化并将末端烷基氨基功能团去保护或选择性地去保护/去掩蔽(X＝NH-W2，W2在这种情况下必须分别和W1和W3正交，或X＝掩蔽的氨基基团，如叠氮化物)接着采用常规的方法，游离胺进行胍化反应，并分别使W1-或W3-基团去保护，且如果需要可形成生理上适合的盐，且在一些情况下所得反应物是立体异构体的混合物，如果需要分离的单个异构体可住意地采用常规的色谱或重结晶技术分离。
16.下式化合物的的应用
或是以上述化合物或是以其盐形式，或是上述化合物或是具有两者择-的在δ-氮上单保护或在δ-氮或在γ，δ-氮双保护的胍基基团的化合物，可以作为合成丝氨酸蛋白酶的抑制剂的起始物，且特别是作为合成凝血酶抑制剂的起始物。
17.根据权利要求16的用途，其中的丝氨酸蛋白酶抑制剂是肽化合物。
18.下式结构的片断
作为药用活性的化合物结构单元。
19.根据权利要求18的结构片断，其中药用活性化合物是肽化合物。
20.根据权利要求1-13任一权利要求中的化合物用于医疗。
21.根据权利要求20的化合物用于抗凝血剂或抗血栓形成剂。
22.药用制剂，其包括有效量的如权利要求1-13概括的化合物与一或多种药用载体相结合。
23.根据权利要求22的药用制剂，用作抗凝血剂或抗血栓形成剂。
24.根据权利要求1-13的化合物用作制造抑制人体或动物有机体凝血酶抑制剂的药用制剂的有效成份的用途。
25.获得需要抑制凝血酶的人体或动物有机体的凝血酶抑制的方法，包括对所述的有机体给予有效量的任何权利要求1-13中的化合物。
26.预防和治疗人体或动物有机体血液和组织中血栓形成和过凝固状态的方法，包括对需要上述治疗或预防的宿主，给予有效量的任何权利要求1-13的化合物。
27.权利要求1-26和实际上描述的化合物，合成方法，药用制备物，用途和方法。
全文摘要
本发明涉及根据下式(I)的新的凝血酶抑制剂，它们的合成，含有作为活性成分的这些化合物的药用组合物，以及应用本化合物作为抗凝血剂预防和治疗血栓栓塞疾病的用途其中R
文档编号C12N15/00GK1076199SQ9211530
公开日1993年9月15日 申请日期1992年12月4日 优先权日1991年12月4日
发明者E·A·C·泰格-尼尔森, R·E·拜隆德 申请人:阿斯特拉公司