一种用于治疗寒性黄水病的药物及其制备和检测方法

专利名称：一种用于治疗寒性黄水病的药物及其制备和检测方法
技术领域：
本发明涉及一种用于治疗寒性黄水病的药物，本发明还涉及该药物的 制备方法，属于医药领域。
背景技术：
在藏医药领域认为黄水是人机体的重要组成物质之一；人体饮食入胃， 经过消化与吸收后，其精华化生为血，血之糟粕归于胆腑成为胆汁，胆汁 之精华则又化为黄水；黄水存在于全身各处，在肌肤及关节处较多，其在 生理方面起着调节人体水液、润滑关节的重要作用。
虽然黄水对于人体具有健康机能有着重要的作用，但是黄水出现偏盛 也是一种病态，黄水偏盛和偏衰都会导致黄水病。藏医药理论认为，黄水 之本性既不属热，也不属寒，病变后为寒热两性俱全，所以发生血和希拉 所转化者与热相结合，成为热性黄水病，亦称黑黄水病；为巴达干和赫依 所转化者与寒相结合，成为寒性黄水病，亦称白黄水病。在临床上热性黄 水病多见于青年人、希拉型体质者和对血、希拉之某些条件尚不适应者； 寒性黄水病则多见于儿童与老年人、巴达干、赫依型体质者和对巴达干与 赫依之某些条件尚不适应者。
此外，病变之黄水亦能以合并、聚积等类型进而引起各种疾病、如白 癜风、牛皮癣、虫病、疥癣、痹病、白喉、炭疽、丹毒、疤疹、浮肿、水 肿等。黄水病变后，虽然散布于全身，显示其特有症状，但主要窜行皮肌 间、腹腔、关节等部位。黄水病发于皮肤易导致荨麻疹；发于关节则可引起关节炎。
黄水病不同于一般的皮肤湿渗、齊疮、疔邦等病变的渗出物，究其病 因相当于中医所说的是由于湿或者湿热。针对其发病机理，藏族民间医生 根据《藏医医决补遗释难》、《四部医典》两书中的记载，并结合实践经验 研制出了治疗寒性黄水病的经典藏医药验方——五根散(藏药名称为杂哇
阿巴)，该验方被收载于《卫生部颁药品标准》95年版藏药第一册280页， 其处方为西藏棱子齐100g、喜马拉雅紫茉莉100g、蒺藜100g、黄精100g、 天冬100g。多年来，由于五根散对于寒性黄水病的治疗疗效受到了一致认 同，所以一直以来都沿用上述处方，都没有对其进行任何进一步的改进研 咒。
对于上iii根散的制备方法， 一直都采用传统藏药五根散的制备工艺， 即首先对所有原料药材进行粗粉碎，之后过筛，混匀制成散剂；上述制备 工艺简单，只是对原料药材进行简单的粗粉碎。在上述传统的制备工艺中 并没有了解到对于原料药粒径与药物疗效之间的关系(即原料药粒径不能 太大也不能太小)，所以其制备得到的五才艮散的药物的粒径受到了一定的限 制，从而导致传统五根散的药物溶出度低、药物渗透能力差、生物利用度 低，无法充分发挥药物的作用，影响了疗效。
此外，在医药领域中，为了避免药物的仿制生产，要严格考察药物的 稳定性，就上述五根散的稳定性测试，现有技术中采用的是显微镜观察测 试方式；对于采用显微镜观察测试方式而言，五根散的标准形态为木薄 壁细胞纺缍形，壁稍厚，木化，壁孔明显，直径12~19^im;淀粉粒众多，单 粒圆形或椭圆形，脐点明显，呈点状或飞鸟状，直径4-10iam,复粒由2~ 8分粒组成；内果皮纤维成束，淡黄色，上下数层纵横交错排列，直径4-27pm,壁较厚，木化，紋孔稀少，孔沟不明显；大型粘液细胞中含草酸钓针 晶束，针晶长40 99jim;石细胞极多，澄黄色，长方形或长条形，直径 32- 88pim,壁厚10-37(im，紋孔细密，孑L沟细而短。通过上述显孩支4竟7见 察的手段实现了对五根散药物稳定性的检测，该检测方式只能实现在宏观上的观察，而事实上是否药物的本质发生变化，这种检测方式是无从得知 的。

发明内容
本发明所要解决的首要技术问题是治疗黄水病的藏药经典验方五根散 一直都局限于原配方中的原料药的重量份，进而对原五根散的配方进行进 一步发展，得到具有改进后重量份的原料药的用于治疗寒性黄水病的药物。
本发明所要解决的第二个技术问题是现有技术中五根散的制备工艺中 只是对原料药材进行粗粉碎，从而导致药物的有效溶出度低、渗透能力差、 生物利用度低，无法充分发挥药物作用的问题，进而提供一种可以提高药 物的渗透能力和生物利用度的用于治疗寒性黄水病的药物的制备方法，并 制备得到具有较高溶出度、渗透能力和生物利用度的治疗寒性黄水病的药 物。
本发明所要解决的第三个技术问题是现有技术中对五根散的稳定性质 量检测方法只能停留在对药物进行宏观^L测的层次上，并不能测试药物的 本质是否稳定，进而提供一种可以快速、稳定测定治疗寒性黄水病的药物 整体稳定性以及其原料药的专属性鉴别的质量检测方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供了 一种治疗寒性黄水病的药物，
包括如下重量份的原料药
西藏棱子芽50-150份、喜马拉雅紫茉莉50-150份、蒺藜50-150 f分、 黄精50-15Q份、天冬50-150份；所述药物的粒径为0.1 100jam。
其中，优选所述原料药的重量份为西藏棱子芹100份、喜马拉雅紫 茉莉100份、蒺藜100份、黄精100份、天冬100份。所述药物的粒径为 0.1-60,
最优选所述药物的#立径为l-40nm。
本发明还进一步公开了上述治疗寒性黄水病的药物的制备方法，其包括如下步骤
(1)精选西藏棱子芽、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜、黄精、天冬五味原料药，
除杂后，分别晾千或烘干； (2 )将上述五味原料药分别粉碎成粒径为0.1-100jim的超孩i细粉； (3 )按照上述原料药的配比将上述原料药进行充分混合； (4)对步骤(3)混合后的原料药进行包装或向上述原料药中再加入常规 辅料制备成任一口服制剂。
其中，所述辅料为甘露醇、羟丙曱基纤维素、蛋白糖、香橙粉、谷氨 酸钠和羧甲基淀粉钠。
所述辅料还可以为微晶纤维素、羧曱基淀粉钠、淀粉、可变性淀粉中 的一种或多种。添加上述辅料后需要首先进行制粒，再加入滑石粉进行压 片。
本发明在公开了所述用于治疗寒性黄水病的药物以及该药物制备方法 的基础上，又进一步公开了所述的治疗寒性黄水病药物的质量#全测方法， 其包括如下步骤
(1)取待测用于治疗寒性黄水病的药物样品20g,加氯仿50ml，加热 回流4小时，脱去脂溶性成分和部分游离皂戒元并进4亍过滤，将滤液弃去 后得到药渣；向所述药渣中加入浓度为2mol/L的盐酸50ml水解2小时， 弃去酸水液；将药渣用水洗至中性后烘千得到残渣；向所述残渣中加入氯 仿50ml，之后加热回流4小时，提出水解戒元并进4亍过滤，收集滤液，自 然挥至0.6 lml作为供试品溶液；
另取蒺藜对照药材2g，加氯仿50ml，加热回流4小时，脱去脂溶性成 分和部分游离皂戒元并进行过滤，将滤液弃去后得到药渣；向所述药渣中 加入浓度为2mol/L的盐酸50ml水解2小时，弃去酸水液；将药渣用水洗 至中性后烘干得到残渣；向所述残渣中加入氯仿50ml，之后加热回流4小 时，提出水解甙元并进行过滤，收集滤液，自然挥至0.6 lml制成对照药 材溶液；
再取缺蒺藜的阴性样品20g,加氯仿50ml，加热回流4小时，脱去脂溶性成分和部分游离皂甙元并进行过滤，将滤液弃去后4寻到药渣；向所述 药渣中加入浓度为2mol/L的盐酸50ml水解2小时，弃去酸水液；将药渣 用水洗至中性后烘干得到残渣；向所述残渣中加入氯仿50ml,之后加热回 流4小时，提出水解武元并进行过滤，收集滤液，自然挥至0.6 lml制成 阴性对照溶液；
按照薄层色谱法试验，取所述供试品溶液、对照药才才溶液和阴性对照 溶液各10^1，分别点于同一个以羧曱基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板 上，以体积比为5:2.5:1.5的环己烷-醋酸乙酯-氯仿溶液为展开剂，展开、取 出并晾干，喷以原料茴香酪、冰醋酸和硫酸的体积比为1:50:0.5的茴香醛 辟u酸溶液，在105。C下加热至斑点显色清晰，供试品色"i普中，在与对照药材 相应的位置上显相同的黄色斑点，且阴性对照无干扰；
(2)取待测用于治疗寒性黄水病的药物样品10g，向其中加入乙醇 30ml，经超声处理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，对滤液 进行收集，并挥去乙醇；向所述残渣中加入曱醇lml溶解作为供试品溶液；
另取西藏棱子齐对照药材2g，向其中加乙醇10ml，经超声处理30分 钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，对滤液进行收集，并挥去乙醇； 向所述残渣中加入曱醇lml溶解作为对照药材溶液；
再取缺西藏棱子芽的阴性样品10g，向其中加入乙醇30ml，经超声处 理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，对滤液进行收集，并挥 去乙醇；向所述残渣中加入曱醇lml溶解作为阴性对照溶液；
按照薄层色镨法试验，取所述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照 溶液各5^1，分别点于同一个以羧曱基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板 上，以体积比为8:1.8:0.2正己烷-醋酸乙酉旨-曱醇溶液为展开剂，展开、取出 并晾干，喷以质量百分含量为10%的磷钼酸试液，在105。C下加热至斑点 显色清晰，供试品色镨中，在与对照药材相应的位置上显相同的深紫色斑 点，且阴性对照无干扰；
(3)取待测用于治疗寒性黄水病的药物样品10g,向其中加入乙醇 30ml,经超声处理30分^^中后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，收集滤 液，挥去乙醇；向所述残渣中加甲醇lml溶解作为供试品溶液；另取喜马拉雅紫茉莉对照药材2g,向其中加乙醇10ml，向其中加入乙 醇30ml，经超声处理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，收 集滤液，挥去乙醇；向所述残渣中加曱醇lml溶解作为对照药材溶液；
再取缺喜马拉雅紫茉莉的阴性样品10g，，向其中加入乙醇30ml，经超 声处理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，收集滤液，挥去乙 醇；向所述残渣中加甲醇lml溶解作为阴性对照溶液；
按照薄层色谱法试验，所述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液 各5|11，分别点于同一个硅胶GF254薄层板上，以体积比为8:2:1.5正己烷-醋酸乙酯-曱醇为展开剂，展开、取出并晾干，置于波长为254nm的紫外灯 下检视，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上显相同的暗褐色斑点， 且阴性对照无干扰。
本发明所述的治疗寒性黄水病的药物，其原料药为西藏棱子芹50-150 份、喜马拉雅紫茉莉50-150份、蒺藜50-150份、黄精50-150份、天冬50-150 份；与《卫生部颁药品标准》中记载的五根散处方西藏棱子芽100g、喜马 拉雅紫茉莉100g、蒺藜100g、黄精100g、天冬100g相比，其进一步扩大 了用于治疗寒性黄水病的药物中原料药的可选范围，经过申请人多年的研 究发现，在本发明所述的原料药的重量份范围内，都可以实现归于寒性黄 水病的有效治疗。最为重要的是，本发明所述的用于治疗寒性黄水病的药 物克服了多年来藏药领域一直沿用传统五才艮散的配方，而没有对五根散配 方进行任何改进性研究的问题，其对传统五根散配方进行了进一步的研究， 丰富了治疗寒性黄水病的药物范畴。此外，申请人在上述扩展性研究中还 发现，所述用于治疗寒性黄水病的药物的粒径对于其药物的疗效有着至关 重要的关系，并经过多年的研究发现，只有药物粒径在0.1 100jam的上述 药物才可以实现对寒性黄水病有效的治疗，粒径太小(小于O.lpm)容易 由于粉碎后的药物表面积将原粉碎前的药物表面积增加争支大，导致药物的 吸湿性及化学活动性等亦相应地增加，药物更易吸潮变质，药物内部的挥 发性成分更易散失，从而影响了药物的药效；药物的粒径也不能太大(大 于100pm)，粒径太大会导致药物的有效溶出度降低，渗透能力差且生物利用度也很低，所以也不利于药物药效的发挥。
本发明所述的用于治疗寒性黄水病的药物的制备方法，其在精选原料 药的基础上，对原料药进行了超微粉碎，限制超微粉碎的粒径为
(U 100pm，之后对经超微粉碎后的原料进行灭菌等后续处理。该制备方法 摒弃了传统五根散制备方法中对原料药进行筒单粗粉碎的方法，通过进行 特定粒径的超微粉碎，保证了制备得到的药物可以更为充分地发挥其自身 的药效。在上述制备过程中，优选对经粉碎后的原料药混合物进行灭菌处 理的温度为18(TC，设置该温度一方面保证了对原料药混合物有效的灭菌， 另一方面不至于因为灭菌温度太高而影响原料药的药性发挥。对于本发明 所述的用于治疗寒性黄水病的药物可以4艮据需要设计成各种不同的剂型， 诸如片剂、悬浮剂、冲剂颗粒、胶嚢、水丸、蜜丸等，上迷剂型的变化不 会对药物的药效产生任何影响。
此外，本发明所述的治疗寒性黄水病药物的质量检测方法，目的在于 实现对药物稳定性测试的同时实现对药物中原料药的专属性鉴别。该质量 检测方法，采用待测样品、对照药材以及缺蒺藜、缺西藏棱子芽、缺喜马 拉雅紫茉莉的阴性对照溶液进行薄层测试，从而实现了对本发明所述的用 于治疗寒性黄水病药物的稳定性测试，同时也实现了对药物中蒺藜、西藏 棱子芽以及喜马拉雅紫茉莉的专属性鉴别。
本发明具有下述优点
1.本发明所述的用于治疗寒性黄水病的药物在传统藏药五才艮散的基础 上，对其进行了进一步的拓展性研究，扩大了用于治疗寒性黄水病的药物 中原料药的可选范围；并经过研究更深层次地发现药物粒径对治疗寒性黄 水病的药物药效的影响，只有药物粒径在O.l-lOOpm的上述药物才可以实 现对寒性黄水病有效的给药抗炎治疗，避免了粒径太小容易导致药物吸潮 变质，药物内部的挥发性成分更易散失，/人而影响了药物的药效；也避免 了药物的粒径太大导致药物的有效溶出度降低，渗透能力差且生物利用度也很低的问题；进一步推动了藏药领域对于治疗寒性黄7jc病的药物研究。
2. 本发明所述的用于治疗寒性黄水病的药物优选其粒径为0.1-60|Lim， 最优选粒径为l-40pm，设置上述粒径可以更好地提高药物的有效溶出度和 生物利用度。
3. 本发明所述的用于治疗寒性黄水病的药物通过^]"药物粒径的有效 选择，不需要添加任何化学合成的稳定剂，即可以全方位地提高药物的有
效溶出度以及生物利用度，使用安全。
4. 本发明所述的制备用于治疗寒性黄水病的药物的方法，将对药物中 原料药的粉碎限定其粒径为O.l-lOOpm，实现了对原料药的超微粉碎，使得 制备得到的用于治疗寒性黄水病的药物能够更好地发挥其药效；该方法简 单易行，容易产业化，具有广阔的市场前景。
5. 本发明所述的用于治疗寒性黄水病的药物的质量检测方法，摒弃了 只能在宏观上观察药物形状从而判断其稳定性的测试方式，采用理化测试 手段实现了对药物本质的稳定性测试，且在实现测定药物稳定性的同时也 实现了对药物专属性的鉴别，从而保证了对药物有效成分的准确、快速、 稳定、灵敏的检测，更加保证了药物的质量，实现了对药物质量的高可控 性。
具体实施方式
实施例l
精选西藏棱子芽、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜、黄精、天冬五味原料药， 除杂后分别晾干；将上述晾干后的原料药分别粉碎成粒4圣为l-40|im的超微 细粉；选取上述经粉碎后的西藏棱子芽50份、喜马拉雅紫茉莉50份、蒺 藜50份、黄精50份、天冬50份进行充分混合；之后对经混合后的原料药 进行密封包装，即得散剂。
实施例2
精选西藏棱子芽、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜、黄精、天冬五味原料药，除杂后，分别烘干；将上述经烘干后的原料药分别粉碎成粒径为l-10)iim的 超微细粉；选取上述经粉碎后的西藏棱子芽30份、喜马^立雅紫茉莉50份、 蒺藜60份、黄精80份、天冬IOO份进行充分混合，然后加入微晶纤维素 进行制粒，再加入滑石粉，混合均匀后压片，最后进4亍包装即可。
实施例3
精选西藏棱子芽、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜、黄精、天冬五味原料药， 除杂后，分别烘千；将上述经烘干后的原料药分别粉碎成粒径为10-30pim 的超微细粉；选取上述经粉碎后的西藏棱子芽80份、喜马拉雅紫茉莉100 份、蒺藜150份、黄精100份、天冬100份进行充分混合，混合均匀后制 成丸剂。
实施例4
精选西藏棱子芽、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜、黄精、天冬五味原料药， 除杂后，分别干燥；将上述干燥后的原料药分别粉碎成4立径为O.l-lpm的 超微细粉；选取上述经粉碎后的西藏棱子芽100份、喜马拉雅紫茉莉100 份、蒺藜150份、黄精100份、天冬IOO份进行充分混合，然后加入羧甲 基淀粉钠进行制粒，再加入滑石粉，混合均匀后压片，最后进行包装即可。
实施例5
精选西藏棱子芽、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜、黄精、天冬五味原料药， 除杂后，分别干燥；将上述干燥后的原料药分别粉碎成粒径为0.1-60pm的 超微细粉；选取上述经粉碎后的西藏棱子芽80份、喜马拉雅紫茉莉50份、 蒺藜150份、黄精50份、天冬80份进行充分混合，然后加入羧曱基淀粉 钠进行制粒，即得颗粒剂。
实施例6
精选西藏棱子芽、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜、黄精、天冬五味原料药， 除杂后，分别干燥；将上述干燥后的原料药分别粉碎成粒径为60-100pm的超微细粉；选取上述经粉碎后的西藏棱子齐50份、喜马拉雅紫果莉50份、 蒺藜100份、黄精100份、天冬100份进行充分混合，然后加入微晶纤维 素进行制粒，装入胶嚢，即得胶嚢剂。
实施例7
精选西藏棱子芽、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜、黄精、天冬五味原料药， 除杂后分别晾干；将上述晾干后的原料药分别粉碎成粒径为60-100jam的药 粉；选取上迷经粉碎后的西藏棱子芽100份、喜马拉雅紫茉莉100份、蒺 蓉100份、黄精100份、天冬100份进行充分混合；然后将混合后的药粉 装入胶嚢，即得胶嚢剂。
在上述实施例1-7中，加入的辅料除了微晶纤维素和羧甲基淀粉钠夕卜， 还可以向其中添加淀粉或者可变性淀粉，作为可以变换的实施方式，本发
明也可以加入微晶纤维素、羧曱基淀粉钠、淀粉或者可变性淀粉中的一种 或者多种作为制备本发明所述用于治疗寒性黄水病的药物中的辅料。
实施例8
精选西藏棱子芽、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜、黄精、天冬五味原料药， 除杂后，分别置于烘干机内于50。C下进行烘干；将上述经烘干后的原料药 分别粉碎成粒径为40-60pm的超微细粉；选取上述经爭分碎后的西藏棱子芽 80份、喜马拉雅紫茉莉80份、蒺藜80份、黄精80份、天冬80份进行充 分混合，并于180。C下进行灭菌处理；之后向经灭菌处理后的原料药混合物 中加入适量甘露醇、羟丙甲纤维素、蛋白糖、香橙粉、谷氨酸钠以及羧甲 基淀粉钠中的任一种并混匀，最后进行包装即可。
实施例9
精选西藏棱子齐、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜、黄精、天冬五味原料药， 除杂后，分别置于烘干机内于60。C下进行烘干；将上述经烘干后的原料药分别粉碎成粒径为10-40pm的超微细粉；选取上述经粉-争后的西藏棱子芽 100份、喜马拉雅紫茉莉100份、蒺藜100份、黄精100份、天冬100份进 行充分混合，并于180。C下进行灭菌处理；之后向经灭菌处理后的原料药混 合物中加入适量甘露醇、羟丙甲纤维素并混匀，最后进行包装即可。
实施例10
精选西藏棱子芽、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜、黄精、天冬五味原料药， 除杂后，分别置于烘干机内于80。C下进行烘干；将上述经烘千后的原料药 分别粉碎成粒径为60-100pm的超微细粉；选取上述经粉碎后的西藏棱子齐 150份、喜马拉雅紫茉莉150份、蒺藜150份、黄精150份、天冬150份进 行充分混合，并于180。C下进行灭菌处理；之后向经灭菌处理后的原料药混 合物中加入适量蛋白糖、香橙粉、谷氨酸钠以及羧曱基淀粉钠并混匀，最 后进行包装即可。
实施例11
精选西藏棱子芽、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜、黄精、天冬五味原料药， 除杂后，分别置于烘干机内于60。C下进行烘干；将上述经烘干后的原料药 分別粉碎成粒径为l-60pm的超微细粉；选取上述经4分碎后的西藏棱子芽 100份、喜马拉雅紫茉莉50份、蒺藜90份、黄精80份、天冬150份进行 充分混合，并于180。C下进行灭菌处理；之后向经灭菌处理后的原料药混合 物中加入适量甘露醇、轻丙甲纤维素、蛋白糖、香橙粉、谷氨酸钠以及羧 甲基淀粉钠并混匀，最后进4亍包装即可。
在上述实施例1-11中对原料药进行超微粉碎，之后采用的是 AccuSizer780 / APS检测仪对经粉碎后的原料药颗粒进行粒径检测。
实施例12
对上述实施例1-11中制备得到的用于治疗寒性黄水病的药物进行质量 -险测，4企测步骤如下
(1)取待测用于治疗寒性黄水病的药物样品20g，加氯仿50ml，加热回流4小时，脱去脂溶性成分和部分游离皂戒元并进行过滤，将滤液弃去
后得到药渣；向所述药渣中加入浓度为2mol/L的盐酸50ml水解2小时， 弃去酸水液；将药渣用水洗至中性后烘干得到残渣；向所述残渣中加入氯 仿50ml，之后加热回流4小时，提出水解戒元并进4亍过滤，收集滤液，自 然挥至lml作为供试品溶液；
另取蒺藜对照药材2g，加氯仿50ml，加热回流4小时，脱去脂溶性成 分和部分游离皂武元并进行过滤，将滤液弃去后得到药渣；向所述药渣中 加入浓度为2mol/L的盐酸50ml水解2小时，弃去酸水液；将药渣用水洗 至中性后烘干得到残渣；向所述残渣中加入氯仿50ml，之后加热回流4小 时，提出水解甙元并进行过滤，收集滤液，自然挥至lml制成对照药材溶 液；
再取缺蒺藜的阴性样品20g，加氯仿50ml，力口热回流4小时，脱去脂溶 性成分和部分游离皂式元并进行过滤，将滤液弃去后得到药渣；向所述药 渣中加入浓度为2mol/L的盐酸50ml水解2小时，弃去酸水液；将药渣用 水洗至中性后烘干得到残渣；向所述残渣中加入氯仿50ml，之后加热回流 4小时，提出水解戒元并进行过滤，收集滤液，自然挥至lml制成阴性对 照溶液；
按照薄层色谱法试验，取所述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照 溶液各10^1,分别点于同一个以羧曱基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板 上，以体积比为5:2,5:1.5的环己烷-醋酸乙酉旨-氯仿溶液为展开剂，展开、取 出并晾干，喷以原料茴香醛、水醋酸和硫酸的体积比为1:50:0.5的茴香醛 硫酸溶液，在105。C下加热至斑点显色清晰，供试品色语中，在与对照药材 相应的位置上显相同的黄色斑点，且阴性对照无千扰；
(2)取待测用于治疗寒性黄水病的药物^f品10g，向其中加入乙醇 30ml，经超声处理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，对滤液 进行收集，并挥去乙醇；向所述残渣中加入甲醇lml溶解作为供试品溶液；
另取西藏棱子芽对照药材2g，向其中加乙醇10ml，经超声处理30分 钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，对滤液进行收集，并挥去乙醇； 向所述残渣中加入曱醇lml溶解作为对照药材溶液；再取缺西藏棱子芽的阴性样品10g，向其中加入乙醇30ml，经超声处 理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，对滤液进行收集，并挥 去乙醇；向所述残渣中加入曱醇lml溶解作为阴性对照溶液；
按照薄层色谱法试验，取所述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照 溶液各5pl，分别点于同一个以羧曱基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板 上，以体积比为8:1.8:0.2正己烷-醋酸乙酉旨-曱醇溶液为展开剂，展开、取出 并晾干，喷以10%的磷钼酸试液，在105。C下加热至斑点显色清晰，供试 品色谱中，在与对照药材相应的位置上显相同的深紫色斑点，且阴性对照 无干扰；
(3)取待测用于治疗寒性黄水病的药物才羊品10g,向其中加入乙醇 30ml,经超声处理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，收集滤 液，挥去乙醇；向所述残渣中加曱醇lml溶解作为供试品溶液；
另取喜马拉雅紫茉莉对照药材2g,向其中加乙醇10ml，向其中加入乙 醇30ml，经超声处理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，收 集滤液，挥去乙醇；向所述残渣中加曱醇lml溶解作为对照药材溶液；
再取缺喜马拉雅紫茉莉的阴性样品lOg，，向其中加入乙醇30ml，经超 声处理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，收集滤液，挥去乙 醇；向所述残渣中加曱醇lml溶解作为阴性对照溶液；
按照薄层色语法试验，所述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液 各5j^1,分别点于同一个硅胶GF254薄层板上，以体积比为8:2:1.5正己烷-醋酸乙酯-甲醇为展开剂，展开、取出并晾干，置于波长为254nm的紫外灯 下检视，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上显相同的暗褐色斑点， 且阴性对照无干扰。
经上述方法检测后，检测结果显示上述制备得到的用于治疗寒性黄水病 的药物质量稳定。
溶出度测试U
本发明进一步对制备得到的用于治疗寒性黄水病的药物进行有效溶出 度的测定，该测定方法主要是通过测定待测药物样品中黄精多糖的含量来测定药物有效溶出度的，详细方法如下
取本发明用于治疗寒性黄水病的药物1.0g，精密称定，将其置于100ml 容量瓶中，并加入体积百分含量为0.9。/。的盐酸溶液，将其》文在37""C的水浴 中放置12h，略加振摇之后放冷，补加溶出介质至刻度。取少量样品液，经 微孔滤膜过滤，使用分光光度法测定并计算，此含量作为100%溶出的量。 测定结果为本发明所述的用于治疗寒性黄水病的药物中黄4青多糖的含量为 42.50%。
分光光度法测定黄精多糖含量
(1) 对照品溶液的制备精密称取经105。C干燥至恒重的无水葡萄糖 16.635mg，置于50ml量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度后摇匀即可(每lml 中含无水葡萄糖0.3327mg)。
(2) 线性关系的考察精密吸取对照品溶液Oml、 0.1 ml、 0.2ml、 0.3 ml、 0.4 ml、 0.5 ml、 0.6ml,分别置于10ml量瓶中，加水至刻度并摇匀。分 别精密量取上述各溶液2.0ml，置于具塞试管中，并分别^f青密加入4。/。苯酚溶 液1.0ml摇匀，然后迅速精密滴加^^危酸7.0ml，利用涡流混悬器对上述滴加 硫酸后的溶液快速混匀，置于40。C水浴中保温30min，取出后置于水水浴中 放置5min;另取蒸馏7JC2.0ml，与上述操作同法加入4%苯酚溶液和硫酸，以 此溶液作为空白对照。按照分光光度法2005年版《中国药典(一部)》附录 VB，在582nm波长处测定吸收度，以吸收度(Y)为纵坐标，无水葡萄糖含 量(X)为横坐标进行回归处理，得回归方程为
Y-0.0419X-0.0101, r=0.9997。 (3)供试品溶液的制备采用浆法，转速为100r/min，温度为(37.0士2)。C， 配制体积百分含量为0.9%的盐酸溶液作溶出介质，取900ml上述溶出介质各 6份；取传统五根散和本发明用于治疗寒性黄水病的药物适量，每组6份， 分别置于溶出介质中进行试验。在试验开始后5min、 10min、 15min、 20min、 30min、 40min、 50min、 60min和80min这九个时间点取溶液8ml，取出后立 即补充同温度新鲜介质8ml;精密吸取各时间点取样溶液lml,置于25ml量 瓶中，加水至刻度并摇匀；精密量取上述加水至25ml的溶液2ml，向其中加 入乙醇10ml并搅拌，之后对其进行离心处理；向经离心处理后的沉淀中加水10ml进行溶解，对经溶解后的沉淀精密量取2ml，置于具塞试管中，按照 标准曲线的制备项下操作，依照(2)线性关系的考察项下的内容依法测定 吸收度。
测定方法及结果精密吸取供试品溶液各2ml，同法测定吸收度，以100 %溶出量作参比，各时间点样品含量与其比较，计算累计溶出百分率，结果 见表l。
表l五根散制剂中总多糖累计溶出百分率(；土 SD, n = 6)
传统五根散本发明药物
时间(min)累计溶出(％)累计溶出(％)
12.18±1.5621.75 ±1.43
1027.28 ±1.5836.85 ±2.01
1538.18±1.5454.05 ±1.05
2050.87 ±2.0763.34 ±1.59
3063.22 ±2.1580.55 ±1.95
4076.58 士1.7889.93 ±1.52
5080.77 ±1.9495.18 ±1.92
6081.44 ±2,2597.98 ±2.45
8083.81 ±2.4398.86 ±2.37
上述溶出度测试表征是以前述实施例1中制备得到的治疗寒性黄水病 的药物作为待测试品得到的测试数据。
由上述数据可知，本发明所述的用于治疗寒性黄水病的药物，对其原 料药材进行特定粒径范围的超微粉碎，粉碎后破壁率大大提高，与溶媒的
接触面更大，扩散面也更大，药物的扩散速度也更快；另外，随着药材粉 末的微细化，粒度变小，比表面积增大，渗透压升高，增大了和溶出介质 间的有效接触面积，加快固体药物的溶解、释放，使得原料药有效成分的 溶出速率加快，从而提高了生物利用度，以达到更佳临床疗效的目的。
抗炎药理测试本发明所述的用于治疗寒性黄水病的药物，其具有较好的抗炎效果，
药理实验如下
对其进行抗炎药理实验时所使用的药剂为弗氏完全佐剂、硫化钡
(A.R)、五根散以及本发明制备得到的用于治疗寒性黄水病的药物。所采 用的仪器包括电子天平和双足平衡痛觉测试仪。
实验体为SD大鼠，体重220 ±20 g， 4月龄雌鼠(该实验体由兰州大 学动物实验室提供)。
经热痛觉测试选择上述70只雌鼠，随机分为7组，分别设置为空白组、 模型组、五根散组、给药组I ( 0.1-60 nm粒径低剂量)、给药组II (0.1-100 ja m粒径)、给药组III ( 0.1-60 ja m粒径高剂量)、给药组IV (1-40 ju m粒径)。 将大鼠左膝关节脱毛后注射弗氏完全佐剂造模，造模12h后，空白组和模 型组灌服等体积生理盐水，五根散组和给药组分别按照表1中剂量灌胃， 给药6h后采用双足平衡痛觉测试仪测试。
测得双足Am值，SPSS11.5软件方差分析显示，模型组与其他各组均 有极显著性差异(PO.Ol),说明造模成功，且五根散组、给药组I、给药组 II 、给药组m与给药组iv均有抗炎作用。给药组I和五根散组之间无统计 学差异，和给药组n之间具有显著性差异(po.05),和给药组m、 iv间均具
有极显著性差异(PO.01);给药组III和给药组II、 IV间均具有显著性差异 (P<0.05)，和给药组I及模型组有极显著性差异(PO.Ol)。实验结果说明给
药组I的抗炎作用和传统五根散组的效果接近；给药组in的抗炎作用明显 优于传统剂型五根散和给药组I (po.oi)，且优于给药组n(po.05)。给药
组ii的抗炎效果介于给药组i和给药组iii之间；给药组iv的作用效果优于
给药组m(po.05)，明显优于五根散组、给药组i和给药组n(p〈0.01)。结
果如表2。
表2大鼠双足平衡痛觉测试厶m值 ￥1 给药量 一 厶m
n-10_(g/kg)_;士SD (g)_
空白组 1 模型组 -
传统五根散组 0.4 给药组I 0.23
-1.97±10.26AA"** 60.20 ±8.90"** 40.94 ±9.88AA"
40. 02±7.73AA"给药组II 0.4 给药组III 0.4 给药组IV_
(与模型组比较AP0.05， AAPO.01;与给药组I比较^P0.05， **P<0.01;与给药组ni比较女P0.05, ★★PO.01)
从上述试验数据可知，五根散组所使用的剂量大于所述给药组I中的
剂量，但是其大鼠双足平衡痛觉测试Am值却大于所述给药组I的Am值。 这就说明本发明所述的用于治疗寒性黄水病药物，使用给药组I中的剂量 即可以实现传统五根散组中更大剂量的相同的药效。通过多次试验表明， 本发明所述的用于治疗寒性黄水病的经超孩t粉碎后的药物实现与传统五根 散药物相同的药效，其所需要的剂量仅为传统五根散剂量的57.5%。
虽然本发明已经通过上述具体实施方式
对其进行了详细阐述，但是， 本专业普通技术人员应该明白，在此基础上所做出的未超出权利要求保护 范围的任何形式和细节的变化，均属于本发明所要保护的范围。
30.22 ±10.08AA * 21.01 ±9.93,* 11.31 ±5.98AA"*
权利要求
1、一种治疗寒性黄水病的药物，包括如下重量份的原料药西藏棱子芹50-150份、喜马拉雅紫茉莉50-150份、蒺藜50-150份、黄精50-150份、天冬50-150份；其特征在于，所述药物的粒径为0.1～100μm。
2、 根据权利要求1所述的治疗寒性黄水病的药物，其特征在于，所述药 物的4立径为0.1-60|im。
3、 根据权利要求1所述的治疗寒性黄水病的药物，其特征在于，所述药 物的粒径为l-40jim。
4、 根据权利要求1所迷的治疗寒性黄水病的药物，其特征在于，所述原 料药的重量份为西藏棱子齐100份、喜马拉雅紫茉莉100份、蒺藜100份、黄精100 份、天冬100份。
5、 权利要求1或4所述的治疗寒性黄水病的药物的制备方法，其包括如 下步骤(1) 精选西藏棱子芽、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜、黄精、天冬五味原料药， 除杂后，分别晾干或烘干；(2) 将上述五味原料药分别粉碎成粒径为O.l-lOOjim的超^[敖细粉； (3 )按照上述原料药的配比将上述原料药进行充分混合；(4)将步骤(3)混合后的原料药进行包装或向上述原料药中再加入常规 辅料制备成任一 口服制剂。
6、 根据权利要求5所述的制备方法，所述辅料为甘露醇、羟丙甲基纤维 素、蛋白糖、香橙粉、谷氨酸钠和羧曱基淀粉钠。
7、 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述辅料为微晶纤维 素、羧曱基淀粉钠、淀粉、可变性淀粉中的一种或多种。
8、 根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在添加所述辅料后制 粒，再加入滑石粉进行压片。
9、 一种权利要求1至4任一所述的治疗寒性黄水病药物的质量检测方法，其包括如下步骤(1)取待测用于治疗寒性黄水病的药物样品20g,加氯仿50ml，加热 回流4小时，脱去脂溶性成分和部分游离皂甙元并进行过滤，将滤液弃去 后得到药渣；向所述药渣中加入浓度为2mol/L的盐酸50ml水解2小时， 弃去酸水液；将药渣用水洗至中性后烘干得到残渣；向所述残渣中加入氯 仿50ml，之后加热回流4小时，提出水解戒元并进4亍过滤，收集滤液，自 然挥至0.6 lml作为供试品溶液；另取蒺藜对照药材2g，加氯仿50ml，加热回流4小时，脱去脂溶性成 分和部分游离皂戒元并进行过滤，将滤液弃去后得到药渣；向所述药渣中 加入浓度为2mol/L的盐酸50ml水解2小时，弃去酸水液；将药渣用水洗 至中性后烘干得到残渣；向所述残渣中加入氯仿50ml，之后加热回流4小 时，提出水解武元并进行过滤，收集滤液，自然挥至0.6 lml制成对照药 材溶液；再取缺蒺藜的阴性样品20g,加氯仿50ml，加热回流4小时，脱去脂溶 性成分和部分游离皂武元并进行过滤，将滤液弃去后得到药渣；向所述药 渣中加入浓度为2mol/L的盐酸50ml水解2小时，弃去酸水液；将药渣用 水洗至中性后烘干得到残渣；向所述残渣中加入氯仿50ml,之后加热回流 4小时，提出水解甙元并进行过滤，收集滤液，自然挥至0.6~ lml制成阴 性对照溶液；按照薄层色语法试验，取所述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照 溶液各10nl，分别点于同一个以羧曱基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板 上，以体积比为5:2.5:1.5的环己烷-醋酸乙酯-氯仿溶液为展开剂，展开、取 出并晾干，喷以原料茴香醛、冰醋酸和硫酸的体积比为1:50:0.5的茴香醛 硫酸溶液，在105。C下加热至斑点显色清晰，供试品色"i普中，在与对照药材 相应的位置上显相同的黄色斑点，且阴性对照无干扰；(2)取待测用于治疗寒性黄水病的药物样品10g,向其中加入乙醇 30ml,经超声处理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，对滤液 进行收集，并挥去乙醇；向所述残渣中加入甲醇lml溶解作为供试品溶液；另取西藏棱子芽对照药材2g,向其中加乙醇10ml，经超声处理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，对滤液进行收集，并挥去乙醇； 向所述残淦中加入甲醇lml溶解作为对照药材溶液；再取缺西藏棱子芽的阴性样品10g，向其中加入乙醇30ml，经超声处 理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，对滤液进行收集，并挥 去乙醇；向所述残渣中加入曱醇lml溶解作为阴性对照、溶液；按照薄层色语法试验，取所述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照 溶液各5^1，分别点于同一个以羧曱基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板 上，以体积比为8:1.8:0.2正己烷-醋酸乙酯-曱醇溶液为展开剂，展开、取出 并晾干，喷以质量百分含量为10%的磷钼酸试液，在105。C下加热至斑点 显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上显相同的深紫色斑 点，且阴性对照无干扰；(3)取待测用于治疗寒性黄水病的药物样品10g,向其中加入乙醇 30ml，经超声处理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，收集滤 液，挥去乙醇；向所述残渣中加曱醇lml溶解作为供试品溶液；另取喜马拉雅紫茉莉对照药材2g，向其中加乙醇10ml，向其中加入乙 醇30ml,经超声处理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，收 集滤液，挥去乙醇；向所述残渣中加曱醇lml溶解作为对照药材溶液；再取缺喜马拉雅紫茉莉的阴性样品10g,，向其中加入乙醇30ml，经超 声处理30分钟后进行过滤；过滤后将滤液和残渣分离，收集滤液，挥去乙 醇；向所述残渣中加曱醇lml溶解作为阴性对照溶液；按照薄层色谱法试验，所述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液 各5ji1,分别点于同一个硅胶GF254薄层板上，以体积比为8:2:1.5正己烷-醋酸乙酯-曱醇为展开剂，展开、取出并晾干，置于波长为254nm的紫外灯 下检视，供试品色语中，在与对照药材相应的位置上显相同的暗褐色斑点， 且阴性对照无干扰。
全文摘要
本发明公开了一种治疗寒性黄水病的药物，包括如下重量份的原料药西藏棱子芹50-150份、喜马拉雅紫茉莉50-150份、蒺藜50-150份、黄精50-150份、天冬50-150份；所述药物的粒径为0.1～100μm。本发明所述的药物具有较高的药物有效溶出度、药物渗透能力和生物利用度，具有较好的药效。本发明还进一步公开了上述用于治疗寒性黄水病药物的制备方法以及其专用的质量检测方法，使用该质量检测方法有效地实现了在控制药物稳定性的同时有效鉴别药物中药物原料药的专属性。
文档编号A61P19/00GK101584809SQ20091015807
公开日2009年11月25日 申请日期2009年7月20日 优先权日2009年7月20日
发明者张国霞, 张樱山, 波 李, 陈丽娟 申请人:甘肃奇正藏药有限公司