一种前列金丹胶囊的分析方法

专利名称：：一种前列金丹胶囊的分析方法一种前列金丹胶囊的分析方法
技术领域：
：本发明属于中药
技术领域：
，具体涉及一种前列金丹胶囊的分析方法。
背景技术：
：前列金丹胶囊解毒利湿，通淋化瘀。用于慢性前列腺炎属湿热挟瘀证，症见小便频急、尿后余沥、尿后滴白、尿道涩痛、少腹疼痛、会阴不适、腰骶疼痛、阴囊潮湿、睾丸疼痛。前列金丹胶囊的处方是丹参594.4克赤芍208.5克泽兰104.7克杉t仁69.8克红花69.8克延胡索69.8克金银花35克败酱草69.8克茯苓35克泽泻35克大枣35克王不留行173.6克前列金丹胶囊为硬胶囊，内容物为黄棕色至棕色粉末；气微腥，味微苦。临床前动物试验研究结果提示该产品可抑制角叉菜胶致大鼠足跖部的炎性反应和疼痛反应，抑制棉球致大鼠肉芽肿。前列金丹胶囊的制法为以上十二味，延胡索粉碎成细粉。丹参、桃仁、红花、金银花、泽兰加6倍量乙醇回流提取2小时，滤过，滤液减压浓縮至相对密度为1.24(60°C)的清膏，备用；药渣与赤芍、王不留行、败酱草、泽泻、茯苓、大枣加水煎煮两次，第一次加10倍量水煎煮2小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮至相对密度为1.20(60°C)的清膏，与上述清膏合并，加入延胡索细粉，混匀，减压干燥，粉碎，加淀粉调整总量至350克，制粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。本发明涉及的药材和辅料包括1.丹参本品为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎。春秋二季采挖，除去泥沙，干燥。.本品应符合《中国药典》2000年版一部57页丹参项下有关规定。2.赤芍本品为毛茛科植物芍药PaeonialactifloraPall.的干燥根。春、秋二季采挖，除去根茎、须根及泥沙，晒干。本品应符合《中国药典》2000年版一部125页赤芍项下有关规定。3.泽兰本品唇形科植物地瓜儿苗Lyc叩uslucidusTurcz.及毛叶地瓜儿苗LycopuslucidusTurcz.var.hirtusRegel的干燥地上部分。本品应符合《中国药典》2000年版一部第183页泽兰项下的各项规定4.桃仁本品为蔷薇科植物桃Prunuspersica(L.)Batsch的干燥成熟种子，果实成熟后采收，除去果肉及核壳，取出种子，晒干。本品应符合《中国药典》2000年版一部226页桃仁项下有关规定。5.红花本品为菊科植物红花CarthamustinctoriusL.的干燥花。夏季花由黄变红时采摘，阴干或晒干。本品应符合《中国药典》2000年版一部119页红花项下有关规定。6.延胡索本品为罂粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang的干燥块茎。夏初茎叶枯萎时采挖，除去须根，洗净，置沸水中煮至恰无白心时，取出，晒干。本品应符合《中国药典》2000年版一部第108页延胡索项下的有关规定。7.金银花本品为忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花。夏初花开放前采收，干燥。本品应符合《中国药典》2000年版一部177页金银花下有关规定。8.败酱草本品为败酱科植物黄花败酱PatriniascabiosaefoliaFisch或白花败酱Patriniavillosajuss的干燥全草。夏季化开前采挖，晒至半干，扎成束，阴干。本品应符合《中国药典》1977年版败酱草项下的各项规定。9.茯苓本品为多孔菌科真菌茯苓Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核。本品应符合《中国药典》2000年版一部193页茯苓项下有关的各项规定。10.泽泻本品为泽泻科植物泽泻Alismaorientalis(Sam.)Juz印.的干燥块茎。冬季茎叶开始枯萎时采挖，洗净，干燥，除去须根及粗皮。本品应符合《中国药典》2000年版一部184页泽泻项下有关规定。11.大枣本品为十字花科植物菘蓝IsatisindigoticaFort.的干燥叶。夏秋二季分23次采收，除去杂质，晒干。本品应符合《中国药典》2000年版一部第17页大枣项下的有关规定。12.王不留行本品为石竹科植物麦蓝菜Vaccariasegelalis(Neck.)Garcke的干燥成熟种子。夏季芒种前后，割取全株晒干，打下种子，取净杂质，晒干。本品应符合《中国药典》2000年版一部40页王不留行项下有关规定。13.淀粉本品应符合《中国药典》2000年版二部780页淀粉项下有关的各项规定。中药复方药物的检测，经常复杂而不够稳定的分析方法，检测费时、费力、费钱，基于这些问题，也需要能够提供一种或者一类简便快捷的分析方法来确定药品的真伪。同时对于生产车间药品成品的检验，也需要确立其分析方法，来保证药品的质量。
发明内容本发明的目的在于提供一种前列金丹胶囊的分析方法。本发明前列金丹胶囊的分析方法简便易行，方便快捷，能迅速简练地鉴别药品的真伪，是一种适于基层和药物检测机构推广的分析方法。通过本发明分析方法的实施，能够对以往药品的鉴定方法给予修订，提高药品质量控制的特异性。具体而言，本发明的前列金丹胶囊的分析方法，采用以下方法取本品内容物1克，研细，加70%乙醇50毫升，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸至近干，加稀盐酸15毫升使溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20毫升，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙醇制成每1毫升含1毫克的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10微升、对照品溶液4微升，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。上述方法还可以进一步分析取本品内容物l克，研细，加正丁醇50毫升，超声处理15分钟，放置1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5微升，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以7氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:i:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。上述方法还可以进一步分析取本品内容物l克，研细，加氨水8毫升湿润，密塞，放置30分钟，再加入乙醇50毫升，时时振摇，密塞，放置6小时，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿2毫升使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加氯仿制成每1毫升含1毫克的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10微升，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，置氨蒸气中饱和15分钟，再以石油醚(60一90。C)-醋酸乙酯(20:17)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。上述方法还可以进一步分析取本品内容物l克，研细，力口70%乙醇50毫升，超声处理15分钟，放置4小时，滤过，滤液蒸至近干，加稀盐酸15毫升使溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20毫升，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加乙醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液与对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8:1:1)展开，取出，晾干后喷二硝基苯肼试液，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。上述方法还可以进一步分析取本品内容物l克，研细，加正丁醇50毫升，超声处理15分钟，放置1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:1:0.5)展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。上述方法还可以进一步分析取本品内容物1克，研细，加正丁醇50毫升，超声处理15分钟，放置1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:i:0.5)展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在100。c加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。上述方法还可以进一步以下色谱方法分析色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；甲醇-水(80:20)为流动相；检测波长为270nm，理论板数按丹参酮nA峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备精密称取丹参酮IIA对照品15毫克，置25毫升棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2毫升，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，每1毫升中含丹参酮IIA48微克，即得；供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，研细，取1克，精密称定，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇20毫升，超声提取20分钟(250W，40kHz)，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45微米)滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10微升，注入液相色谱仪，测定，即得。上述分析方法中所述每粒前列金丹胶囊含丹参以丹参酮IIA计，不少于0.36毫克。以上对于当前前列金丹胶囊的产品标准的修订，本发明中为了描述清晰，对其摸索过程进行了简要说明鉴别l原儿茶醛的鉴别参考原标准，对制剂中的原儿茶醛进行鉴别。样品制备如下取本品内容物l克，研细，力Q70%乙醇50毫升，超声处理15分钟，放置4小时，滤过，滤液蒸至近干，加稀盐酸15毫升使溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20毫升，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加乙醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液与对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8:1:1)展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液，放置10分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；但是色带较深，影响阳性结果的判断。改进的分析方法方法，改变流程和显色系统。具体方法如下取本品内容物l克，研细，加70%乙醇50毫升，超声处理15分钟，放置4小时，滤过，滤液蒸至近干，加稀盐酸15毫升使溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20毫升，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加乙醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液与对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8:1:1)展开，取出，晾干后喷二硝基苯肼试液，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阳性结果明显、清晰。空白溶液的制备是按处方中药味比例，自配不含丹参的群药，按制备工艺制成空白制剂，再按正文供试品溶液制备方法制成空白溶液。结果表明，薄层色谱斑点清晰，重现性好，空白无干扰。鉴别2芍药苷的鉴别参考原标准，对制剂中的芍药苷进行鉴别。样品制备如下取本品内容物1克，研细，加正丁醇50毫升，超声处理15分钟，放置1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:1:0.5)展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阳性结果明显、清晰。空白溶液的制备是按处方中药味比例，自配不含赤芍的群药，按制备工艺制成空白制剂，再按正文供试品溶液制备方法制成空白溶液。结果表明，薄层色谱斑点清晰，重现性好，空白无干扰。鉴别3延胡索乙素的鉴别参考原标准，对制剂中的延胡索乙素进行鉴别。样品制备如下取本品内容物l克，研细，加8毫升氨水湿润，密塞，放置30分钟，再加入乙醇50亳升，时时振摇，密塞，放置6小时，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿2毫升使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加氯仿制成每1毫升含1毫克的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液，分别点于同一的硅胶G薄层板上，置氨蒸气中饱和15分钟，再以石油醚-醋酸乙酯(20:17)展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阳性结果明显、清晰。空白溶液的制备是按处方中药味比例，自配不含延胡索的群药，按制备工艺制成空白制剂，再按正文供试品溶液制备方法制成空白溶液。结果表明，薄层色谱斑点清晰，重现性好，空白无干扰。鉴别4泽兰的特征鉴别参考文献，对泽兰进行鉴别。样品制备如下取本品内容物l克，研细，加甲10醇水浴回流提取，滤液浓縮，作为供试品溶液。另取泽兰对照药材0.5克，同法制备对照药材溶液。取供试品溶液与对照药材溶液分别点硅胶G板，以石油醚(60_90°C)—乙醇(8:10)展开，紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中色带较深，无法对其进行结果判定。根据文献查阅，泽兰中含有熊果酸，对制剂中的熊果酸进行鉴别。样品制备如下取本品内容物l克，研细，加丙酮水浴回流提取，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作为对照品溶液。取供试品液与对照品液分别点硅胶G板，以环己烷一氯仿一醋酸乙酉旨-—甲酸(20:5:8:0.1)展开凉干后喷以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加热至斑点显色清晰。供试品色谱色带深，在与对照品相应的位置上的斑点有干扰。改变样品制备方法，取本品内容物l克，研细，加乙醚回流提取，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液。取新制备的样品与对照品分别点硅胶G板，以环己烷一氯仿一醋酸乙酯一甲酸(20:5:8:0.1)展开凉干后喷以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加热至斑点显色清晰。供试品色谱在与对照品相应的位置上的斑点还有干扰，故放弃鉴别泽兰与熊果酸。鉴别5桃仁的鉴别参考中国药典2000年版一部160页苦杏仁鉴别方法对制剂中的苦杏仁苷进行鉴别。结果样品色谱，在与对照品色谱相应的位置上，没有明显的对应斑点。加大样品的点样量，阳性结果依然不明显，因而放弃。参考文献，改变样品的制备方法取本品的内容物2克，加甲醇超声提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，乙醚提取，乙醚液挥干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液。桃仁对照药材溶液的制备桃仁药材水煎煮，滤过，滤液加乙醇使含醇量达70%，滤过，滤液蒸干，残渣水溶解，乙醚提取，乙醚液挥干，残渣加甲醇使溶解，作为对照药材溶液。取两份溶液，点硅胶G板后以石油醚(60-卯'C)一氯仿一甲醇(10:3:2.5)展开，用10%的硫酸乙醇显色，结果阳性结果不明显，因而放弃。鉴别6红花的鉴别参照中国药典2000年版一部119页红花鉴别项下方法对制剂中的红花进行鉴别试验，试验结果提示，供试品色谱中未见与对照药材相应位置的红色素斑点。参考文献，样品液制备取本品的内容物2克，加乙醚超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇溶解，点样。同法制备对照药材溶液。取两份溶液，点硅胶G板后以苯一冰醋酸一甲醇(35:1:1)展开，用10%硫酸乙醇显色，结果阳性结果不明显，因而放弃。鉴别7金银花的鉴别参照中国药典2000年版一部177页金银花鉴别项下方法对制剂中的绿原酸进行鉴别试验，试验结果提示，供试品色谱中未见与绿原酸相应位置的对应斑点。参考文献，样品液制备取本品的内容物2克，加乙醚超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇溶解，点样。同法制备对照药材溶液。取两份溶液，点硅胶G板后以苯一醋酸乙酯(3:1)展开，用茴香醛一硫酸的乙醇溶液显色，结果阳性结果不明显，因而放弃。鉴别8茯苓的鉴别参考文献，对茯苓的脂溶性成分进行研究。样品液的制备取本品的内容物2克，加甲醇超声提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用乙醚提取，挥干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液。同法制成对照药材溶液。取两份溶液，点于硅胶G板上，分别以石油醚(60-9(TC)—丙酮一醋酸乙酯(84:15:1)与环己垸一醋酸乙酯(9:1)展开，晾干后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，没有对应的斑点，阳性结果不明显，因而放弃。鉴别9泽泻的鉴别参考文献，样品液制备取本品的内容物2克，加乙醚超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇溶解，点样。同法制备对照药材溶液。取两份溶液，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(24::8:1)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加热数分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，无对应的斑点。又采用甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:2:0.7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-30%硫酸(9:11)液，加热至斑点显色清晰。结果阳性结果依然不明显，因而放弃。鉴别io大枣的鉴别参照中国药典2000年版一部17页大枣鉴别方法对制剂中的齐敦果酸进行鉴别试验，试验结果提示，结果供试品色谱在与对照品色谱相应位置上无斑点。可能是因为齐墩果酸为脂溶性成分，水煎煮未能提取出来，无法对其进行鉴别，，因而放弃。鉴别ll王不留行的鉴别参照中国药典2000年版一部40页王不留行鉴别方法对制剂中的王不留行进行鉴别试验，结果供试品色谱在与对照药材色谱相应位置上无对应的斑点，因而放弃。本发明采用快速简便的一种或多种薄层色谱法或者液相色谱法，能够各自独立或者组合起来进行前列金丹胶囊剂的分析检测，为该类药物的安全和有效的使用提供了有力保障。图1参酮IIA在0.275微克1.375微克范围内线性关系图具体实施方式下面实施例进一步描述本发明，但所述实施例仅用于说明本发明而不是限制本发明。以下实施例均取10个批号的前列金丹胶囊剂，批号分别为030803、030804、030805、030901、030902、030903、030904、041210、041211、041212。实施例1-前列金丹胶囊的常规检测检査本品为胶囊剂，应符合中国药典2000年版一部附录IL胶囊剂项下的有关规定。根据药典规定，对本品十批样品的水分，装量差异、崩解时限、微生物限度进行了检査，水分不超过9.0%，装量差异、崩解时限、微生物限度均在合格范围。试验及结果如下。水分取本品内容物，照水分测定法(中国药典2000年版一部附录KH)测定，结见表l。由结果可知，本品符合中国药典2000年版一部附录IL胶囊剂项下关规定，水分含量小于9.0%。装量差异取供试品10粒，分别精密称定重量，倾出内容物(不得损失囊壳)，硬胶囊囊壳用小刷拭净，分别精密称定囊壳重量，求出每粒内容物的装量，结果见表2，符合中国药典2000年版一部附录IL胶囊剂项下的规定。崩解时限照崩解时限检査法(中国药典2000年版一部附录XEA)检査，符合中国药典的规定，结果见表2。.微生物限度照微生物限度检査法(中国药典2000年版一部附录XinC)检査，符合中国药典的规定。测定结果见表2。表l十批样品检测结果表水分(不得过9.0%)装量差异崩解时限(分钟)微生物限度0308035.9〈±10%16符合规定0308046.8〈±10%19符合规定030805〈土10%17符合规定0309016.6〈±10%20符合规定0309025.0〈±10%18符合规定0309036.9〈±10%15符合规定0309045.7〈±10%17符合规定0412106.2〈±10%16符合规定0412115.7〈土10%19符合规定0412125.3〈±10%18符合规定上述试验表明，本品的水分含量、装量差异、崩解时限和微生物限度均符合要求。重金属及砷盐检查1、重金属检査照中国药典2000年版一部附录LXE(附录第50页)重金属检查方法二操作(1)标准铅溶液的制备精密称取在105'C干燥恒重的硝酸铅0.1603克，置IOOO毫升量瓶中，加硝酸5毫升，水50毫升，溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，即得标准铅贮备液。临用前，精密量取前贮备液10毫升，置100毫升量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。(每1毫升相当于10微克的铅)(2)供试检液制备取坩埚1只，精密称取本品内容物1克，电炉上缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸1.0毫升，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5毫升，蒸干，放冷，马弗炉中50060(TC炽灼使完全灰化，放冷加盐酸2毫升，置水浴上蒸干后加水15毫升，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2毫升，微热溶解后，滤去残渣，用IO毫升水洗，滤液移置纳氏比色管中，加水稀释至25毫升即得。(3)比色供试检液、阳性对照液、空白对照液的3支纳氏比色管中分别加硫化钠试剂1滴，混合，放置5~10分钟，摇匀比色，检液颜色低于阳性对照液(<10ppm)。结果见表3，结果表明，十批样品重金属含量均小于10ppm，故未列入正文。2、砷盐检査照中国药典2000年版一部附录IXF.砷盐检査法第一法(古蔡氏法)(1)标准砷溶液制备称取三氧化二砷0.130克，置1000毫升量瓶中，加20%氢氧化钠溶液5毫升溶解后，用适量稀硫酸中和，再加稀硫酸10毫升，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10毫升，置1000毫升量瓶中，加稀硫酸10毫升，用水稀释至刻度，摇匀，即得(每l毫升相当于l微克的砷)。(2)供试检液制备取坩埚1只，精密称取本品内容物1克，电炉上缓缓炽灼至完全炭化，加硝酸5毫升温润，电炉上再炽灼，将坩埚置马弗炉上再炽灼，将坩埚置马弗炉中在50060(TC完全炭化成灰色粉末，放冷，加3毫升盐酸，水浴上加热溶解，作为供试检液。(3)砷斑制备将供试检液、阳性对照液，空白液分别移置测砷器中，再分别加碘化钾试液5毫升，酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加无砷锌粒2克，254(TC放置，取出溴化汞试纸，观察砷斑颜色，结果溶液砷斑颜色浅于标准砷颜色(<2ppm)。结果见表2。结果表明，十批样品砷盐含量均小于2，故未列入正文。表2重金属、砷盐检査试验结果表批号重金属(ppm)石申盐(ppm)030803<10<2030804<10<2030805<10<2030901<10<2030902<10<2030903<10<2030904<10<2041210<10<2041211<10<2041212<10<2实施例2-前列金丹胶囊的色谱检测1含量测定丹参为本制剂中的君药，《中国药典》2000年版丹参药材项下对丹参中丹参酮IIA的含量进行测定。原制剂中亦对制剂中的丹参酮IIA的含量进行测定。因此本制剂测定丹参酮IIA的含量，以控制制剂的质量。1测定条件测定条件的考察:色谱条件岛津LC-2010高效液相色谱仪，色谱柱为岛津ODS柱(4.6X150mm，5pm)，流速为1.0毫升/min。(1)检测波长的选择对丹参酮IIA对照品溶液作光谱图测定，在270nm左右处有一吸收峰，参照药典以及原标准，确定检测波长为270nm。(2)流动相的选择参照药典以及原标准分别以甲醇一水(80:20)与甲醇一水(75:25)为流动相分别进样测定。试验结果表明，以甲醇一水(80:20)为流动相时，样品分离度较好，出峰时间比甲醇一水(75:25)早，因此选定甲醇一水(80:20)为流动相2方法学考察①提取方法的选择参考原标准、药典及文献，设计以下样品的处理方法，对样品中的丹参酮IIA进行提取方法的选择。取030803批样品内容物5克，研细，备用。方法1:取本品内容物细粉1克，精密称定，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇20毫升，摇匀，浸泡放置12小时，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45微米)滤过，取续滤液，即得。方法2:取本品内容物细粉1克，精密称定，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇20毫升，摇匀，超声处理20分钟(250W，40kHz)，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45微米)滤过，取续滤液，即得。方法3:取本品内容物细粉l克，精密称定，精密加甲醇25毫升，称定重量，回流提取20分钟，放冷，称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45微米)滤过，取续滤液，即得。分别取三份样品液10pl进样测定，结果见下表。表3提取方法的选择结果表提取方法方法l方法2方法3丹参酮IIA含量(A/g)394312394488393947试验结果表明，三种方法的提取效率基本相当，但以方法2(超声提取)最为节省时间，操作最简单，因此选择用甲醇超声提取的方法对丹参酮IIA进行提取。(A为样品峰面积，g为取样量)②提取时间的选择试验中考査了不同超声时间对样品中丹参酮IIA提取率的影响，取20030803批样品内容物5克，研细，取1克三份，精密称定，分别加入甲醇20毫升，分别超声处理(250W,50kHz)10、20、30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过微孔滤膜(0.45pm)测定，结果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>由实验结果可知，超声20分钟丹参酮IIA已基本提取完全，因此确定样品超声提取20分钟。最终确定样品的处理方法为取本品装量差异项下的内容物，研细，取1克，精密称定，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇20毫升，超声提取20分钟(250W，40kHz)，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45微米)滤过，取续滤液，即得。3对照品来源丹参酮IIA对照品购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用(批号110766-200314)。4标准曲线的制备精密称取丹参酮IIA对照品13.75毫克，置50毫升棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取l、2、3、4、5毫升，置10毫升量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；分别吸取上述对照品溶液各10微升进样，测定峰面积，以丹参酮IIA量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，计算回归方程得y=707603x-515.1，r=1.00。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>结果表明丹参酮IIA在0.275微克L375微克范围内线性关系良好。具体内容见说明书附图15精密度试验取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1毫升含61微克的溶液，作为对照品溶液，连续进样5次，测定峰面积，见表6。表6精密度试验测定结果表序号12345峰面积(A)390902389023387279390239388084结果表明，峰面积平均峰面积为389105.4，RSD=0.38%,表明仪器的精密度良好。6稳定性试验取样品(批号030803)，按正文中含量测定项下方法制备供试品溶液，每隔一定时间进样一次，测定峰面积，考察样品稳定性，结果见表7。表7稳定性试验考察结果表进样时间(h)01248峰面积(A)408522404072404302403320401023测定结果表明峰面积平均值为404247.8，RSD=0.67%，表明供试品溶液在8小时稳定。7重现性试验取样品(批号030803)5份，按正文含量测定项下方法制备样品，并测定峰面积，计算含量，结果见表8。表8重现性试验测定结果表序号123451.401.411.441.411.41测定结果表明，样品的平均值为1.414毫克/克，RSD=1.07%,试验重现性良好。188加样回收试验取本品5份(批号030803)，已知含量1.414毫克/克，每份0.5克，精密称定，置25毫升棕色量瓶中，精密加入丹参酮IIA对照品溶液(0.1251毫克/毫升)5毫升，加入甲醇15毫升，超声处理20分钟(250W,40kHz)，放冷，加甲醇至刻度，摇勾，过微孔滤膜(0.45nm)，测定峰面积，计算，结果见表9。表9回收率试验测定结果表序号取样量(克)样品含量慮克)对照品加入量(毫克)实测总量(毫克)回收率(%)RSD%10.50170.70940.62551.321597.8620.50120.70870.62551.309596.0530.50050.70770.62551.331199.6697.7561.4240.50410,71280.62551.318796.8750.50220.71010.62551.325298.349空白试验按处方比例，不加丹参药材，制得缺丹参药材的模拟制剂，精密称定重量，按正文中含量测定项下供试品溶液的制备方法制备样品，测定，在丹参酮IIA峰位处无吸收。见附页。10含量测定取本品的中试样品，按正文中含量测定项下供试品溶液的制备方法制备样品，测定，按正文含量测定项下方法进行测定，测定其丹参酮IU含量，结果见表IO。表10含量测定结果表批次Xi(毫克/粒)X2(毫克/粒)T(毫克/粒)0308030.4930.5010.500308040.4090.4150.410308050.5760.5790.58030卯10.4130.4160.410309020.4960.4960.500309030.5720.5740.57190309040.6540.6550.650412100.4760.4830.480412110.4980.5050.500412120.5230.5160.52根据十批样品含量测定结果，规定本品每粒含丹参以丹参酮IIA(C19H1803)计，不得少于5.0毫克。丹参酮IIA(C19H1803)转移率按30%计(工艺研究表明，丹参酮HA转移率为3135。/。，均大于30%，结合工业大生产考虑，丹参酮IIA转移率定为30%)，则成品丹参酮IIA的含量最低限度应是(药材含量乂药材量乂转移率+成品数)0.20%X594.4克乂30%+1000粒=0.36毫克/粒。故定每粒制剂含丹参酮IIA不得少于O.36毫克。权利要求1.一种前列金丹胶囊的分析方法，其特征在于采用以下方法分析取本品内容物1克，研细，加70％乙醇50毫升，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸至近干，加稀盐酸15毫升使溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20毫升，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙醇制成每1毫升含1毫克的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10微升、对照品溶液4微升，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2.根据权利要求1所述分析方法，其特征在于采用以下方法分析取本品内容物l克，研细，加正丁醇50毫升，超声处理15分钟，放置1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5微升，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:1:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。3.根据权利要求3所述分析方法，其特征在于采用以下方法分析取本品内容物l克，研细，加氨水8毫升湿润，密塞，放置30分钟，再加入乙醇50亳升，时时振摇，密塞，放置6小时，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿2毫升使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加氯仿制成每1毫升含1毫克的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10微升，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，置氨蒸气中饱和15分钟，再以石油醚(60一90。C)-醋酸乙酯(20:17)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。4.根据权利要求1所述分析方法，其特征在于采用以下方法分析上述方法还可以进一步分析取本品内容物l克，研细，加70%乙醇50毫升，超声处理15分钟，放置4小时，滤过，滤液蒸至近干，加稀盐酸15毫升使溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20毫升，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加乙醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作为对照品溶液，吸取供试品溶液与对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8:1:1)展开，取出，晾干后喷二硝基苯肼试液，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。5.根据权利要求l所述分析方法，其特征在于采用以下方法分析取本品内容物1克，研细，加正丁醇50毫升，超声处理15分钟，放置1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:1:0.5)展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。6.根据权利要求1所述分析方法，其特征在于采用以下方法分析取本品内容物1克，研细，加正丁醇50毫升，超声处理15分钟，放置1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2毫升使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1毫升含1毫克的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:1:0.5)展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。7.根据权利要求1-6任意一项所述分析方法，其特征在于采用以下色谱方法分析色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；甲醇-水(80:20)为流动相；检测波长为270nm，理论板数按丹参酮IIA峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备精密称取丹参酮IIA对照品15毫克，置25毫升棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2毫升，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，每1毫升中含丹参酮IIA48微克，即得；供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，研细，取1克，精密称定，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇20毫升，超声提取20分钟(250W，40kHz)，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45微米)滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10微升，注入液相色谱仪，测定，即得。8.根据权利要求7所述分析方法，其特征在于所述每粒前列金丹胶囊含丹参以丹参酮IIA计，不少于0.36毫克。全文摘要本发明属于中药
技术领域：
，具体公开了一种前列金丹胶囊的分析方法，通过本发明的实施，可以保证前列金丹胶囊产品质量的稳定性和检测的重现性。文档编号A61K36/884GK101658599SQ20091016258公开日2010年3月3日申请日期2009年8月4日优先权日2009年8月4日发明者杨文龙申请人:杨文龙