一种托匹司他有关物质的分析方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，涉及一种药物的分析检测方法，特别是对托匹司他及 其有关物质测定的方法。
【背景技术】
[0002] 托匹司他，英文名称为Topiroxostat，化学名称为4-[5-(吡啶-4-基）-1Η-1，2， 4-三唑-3-基]吡啶-2-甲腈，分子式为C13H8N6,分子量为248. 24, CAS号为577778-58-6， 化学结构式如下：
[0004] 托匹司他由日本富士药品株式会社研制，于2013年6月在日本批准上市。托匹司 他是一种治疗痛风及高尿酸血症的药物，通过抑制黄嘌呤氧化还原酶，抑制尿酸的生成。新 药或仿制药研发，杂质是影响产品的关键质量属性。杂质的结构、理化性质和毒性情况复杂 因此有关物质检查研究常常是药品研发中的难点之一。药品在临床使用中产生的不良反应 除了与主成分的药理活性有关外，与药品中存在的杂质也有很大关系。为保证临床用药的 安全性，需要严格控制药品中的杂质。经检索，目前未见托匹司他及其有关物质分析方法的 相关专利或公开文献报道。根据其工艺、化合物的性质、破坏性试验等条件来建立一种托匹 司他及其有关物质的分析方法具有重要意义。
[0005] 日本株式会社富士药品申请专利（CN1561340B)，在其公开的工艺中，回流反应时 间长，杂质含量高，不利于原料药质量的控制，主要为2-氰基异烟酰肼的氰基不稳定、缩合 产物的水解产生杂质E所致。工艺路线为专利CN1826335A的改进路线，在强酸性催化剂下， 托匹司他降解杂质E和杂质H的含量增高，而杂质E和杂质H与托匹司他结构相似，较难分 离。
[0006] 托匹司他为三唑环，强酸及强碱也易开环，导致杂质B的含量增加。同时，托匹司 他含有吡啶环，也可以进一步被氧化形成氮氧化物杂质，即为杂质F，在一定程度上影响托 匹司他的质量控制，也需建立有效的分析方法实行严格控制。
[0007] 除此之外，制备托匹司他工艺杂质也包括起始物料、中间体的残留及反应副产物 等。因此开发一种托匹司他及其有关物质的分析方法，该方法能保证起始物料、中间体、工 艺杂质及降解杂质有效分开、灵敏度高，具有重要意义。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于构建一种托匹司他有关物质的分析方法，该方法应专属性好， 能将可能的降解杂质、可能残留的起始原料及中间体与主成分有效分开，且灵敏度高，可应 用于托匹司他的杂质控制。主流制备托匹司他合成工艺如下：
[0009] 工艺路线一：
[0013] 本发明人针对上述托匹司他合成工艺（工艺路线一、工艺路线二）以及降解情况， 优先鉴定了 8个杂质，分别为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H， 杂质化学结构及控制标准如下：
[0016] 本发明对色谱条件进行了筛选，能够将8个杂质有效分离，建立了有关物质分析 方法，将分析周期控制在40min，主成分与各有关物质之间，各有关物质之间均能达到基线 分离，达到了上述发明的目的。
[0017] 本发明通过以下技术方案实现：
[0018] -种托匹司他有关物质的分析方法，其特征在于：
[0019] 采用反相高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检 测器，采用梯度洗脱程序，A相为磷酸氢二钠缓冲溶液，磷酸氢二钠摩尔浓度为0. 002mol/ L，并用磷酸调节pH值为3. 4, B相为乙腈，梯度选脱程序为0~30min，B相比例从10%变 为50%，30~31min，B相比例从50%变为10%，31~40min，B相比例为10%。
[0020] 1.如所述的分析方法，其特征在于检测波长为260nm~280nm，优选条件为275nm。
[0021] 2.如所述的分析方法，其特征在于流速为0. 8~I. 2ml/min，优选条件为1.0 ml/ min〇
[0022] 3.如所述的分析方法，其特征在于进样量为10~30 μ 1，优选条件为20 μ 1。
[0023] 4.如所述的分析方法，其特征在于缓冲溶液中磷酸氢二钠摩尔浓度为0. 002mol/ L，pH值的优选条件为3. 4。
[0024] 5.如所述的分析方法，其特征在于样品配制方法为：称取适量托匹司他，用甲醇 溶解并稀释，配制成含托匹司他浓度为〇. 1~〇. 2mg/ml的溶液，优选条件为0. 2mg/ml。
[0025] 色谱方法的方法学验证
[0026] 1.有关物质专属性试验
[0027] 分别配制托匹司他供试品溶液及各有关物质对照品溶液、托匹司他与各有关物质 的混合溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。托匹司他与各杂质分离度结果结果见下 表，图谱见图1 :
[0029] 结果显示：托匹司他各有关物质和主成分之间，各有关物质之间都能达到良好分 离。
[0030] 2.破坏试验
[0031] 精密称取托匹司他适量，在强碱、强酸、高温、光照、氧化等条件下分别对其进行破 坏试验，进样并记录色谱图，统计被破坏出的杂质情况，破坏试验杂质变化情况结果见下 表，
[0032] 图谱见图2~7:
[0033]
[0034] 结论：托匹司他在酸性、高温和光照条件下比较稳定；在碱性和氧化条件下不稳 定，在碱性条件下主要降解产生杂质E，氧化条件主要降解产生杂质E和杂质F ;各降解条件 下主峰与相邻色谱峰均能完全分离；主峰纯度相似度均大于阈值。
[0035] 3.检测限、定量限试验
[0036] 采用信噪比法测定托匹司他及其各有关物质的检测限和定量限。分别配制托匹司 他及其各有关物质的贮备液，稀释至一定浓度并进样，计算峰高与噪声的比值（信噪比）， 其信噪比约为10的样品检测量即为定量限，信噪比约为3的样品检测量即为检测限，定量 限与检测限试验结果见下表：
[0037]
[0039] 结论：各杂质定量限均符合测定要求，方法灵敏度较高。
[0040] 4.线性试验
[0041] 精密称取托匹司他及各有关物质，用甲醇溶解并稀释，配制成不同浓度的溶液分 别进样并记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得到托匹司他及其各有关物质的 线性回归方程，杂质A线性试验结果见下表：
[0043] 杂质B线性试验结果见下表：
[0044]
[0046] 杂质C线性试验结果见下表：
[0048] 杂质D线性试验结果见下表：
[0049]
[0060] 托匹司他线性试验结果见下表：
[0062] 结论：杂质A在0· 052~5. 249 μ g/ml浓度范围内，杂质B在0· 053~5. 295 μ g/ ml浓度范围内，杂质C在0. 018~1. 810 μ g/ml浓度范围内，杂质D在0. 061~6. 138 μ g/ ml浓度范围内，杂质E在0. 020~1. 964 μ g/ml浓度范围内，杂质F在0. 020~1. 970 μ g/ ml浓度范围内，杂质G在0. 119~11. 936 μ g/ml浓度范围内，杂质H在0. 019~1. 901 μ g/ ml浓度范围内，托匹司他在0. 024~2. 413 μ g/ml浓度范围内，线性关系良好。
[0063] 5.准确度试验
[0064] 精密称取托匹司他适量，用甲醇溶解并稀释，配制成含托匹司他浓度约为0. 2mg/ ml的溶液9份，三份为一组，分别向各组加入适量有关物质，使得三组中各有关物质的浓度 分别为〇. 1 μ g/ml (相当于供试品溶液浓度0. 05% )、0. 2 μ g/ml (相当于供试品溶液浓度 0. 1% )、0. 3 μ g/ml (相当于供试品溶液浓度0. 15% )。进样并记录色谱图，计算回收率，准 确度试验结果见下表：
[0067] 结论：本方法准确度良好。
【附图说明】
[0068] 图1 :托匹司他有关物质专属性混合色谱图。
[0069] 图2 :托匹司他有关物质未破坏色谱图。
[0070] 图3 :托匹司他有关物质酸破坏色谱图。
[0071] 图4 :托匹司他有关物质碱破坏色谱图。
[0072] 图5 :托匹司他有关物质氧化破坏色谱图。
[0073] 图6 :托匹司他有关物质高温破坏色谱图。
[0074] 图7 :托匹司他有关物质光照破坏色谱图。
【具体实施方式】
[0075] 以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施例的范围
[0076] 实施例三批托匹司他原料药有关物质的测定
[0077] 精密称取3批托匹司他各约20mg，分别置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻 度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液Iml置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度， 摇匀，再精密量取Iml置IOml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
[0078] 色谱条件：使用岛津20A高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱填料为十八烷 基硅烷键合硅胶（规格为250_^4.6111111，5以111);以缓冲溶液（磷酸氢二钠摩尔浓度为 0. 002mol/L，并用磷酸调节pH值至3. 4)为流动相A，乙腈为流动相B ;梯度洗脱程序为0~ 30111；[11，乙腈比例从10%变为50%，30~31111；[11，乙腈比例从50%变为10%，31~40111；[11，乙 腈比例为10% ;检测波长为275nm ;流速为1.0 ml/min。
[0079] 精密量取对照溶液和供试品溶液各20 μ 1，分别注入液相色谱仪中，进样并记录色 谱图，按加校正因子的自身对照法计算各有关物质的含量，三批托匹司他原料药有关物质 的测定结果见下表：
【主权项】
1. 一种托匹司他有关物质的分析方法，其特征在于： 采用反相高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器， 采用梯度洗脱程序，A相为磷酸氢二钠缓冲溶液，磷酸氢二钠摩尔浓度为0. 002mol/L，并用 磷酸调节pH值为3. 4,B相为乙腈，梯度选脱程序为0~30min，B相比例从10 %变为50%， 30~31min，B相比例从50%变为10%，31~40min，B相比例为10%。2. 如权利要求1所述的分析方法，其特征在于检测波长为260nm~280nm，优选条件为 275nm〇3. 如权利要求1-2所述的分析方法，其特征在于流速为0. 8~1. 2ml/min，优选条件为 1. 0ml/min〇4. 如权利要求1-3所述的分析方法，其特征在于进样量为10~30μ1，优选条件为 20μ1〇5. 如权利要求1-4所述的分析方法，其特征在于缓冲溶液中磷酸氢二钠摩尔浓度为 0· 002mol/L，pH值的优选条件为3. 4〇6. 如权利要求1-5所述的分析方法，其特征在于样品配制方法为：称取适量托匹司他， 用甲醇溶解并稀释，配制成含托匹司他浓度为〇. 1~〇. 2mg/ml的溶液，优选条件为0. 2mg/ ml〇
【专利摘要】本发明公开了一种托匹司他有关物质的分析方法。该方法采用高效液相色谱法对托匹司他的有关物质进行了测定。该方法经过方法学验证，专属性强，灵敏度高，重复性好，准确度高，能够有效控制托匹司他原料药有关物质。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105301126
【申请号】CN201510649224
【发明人】陈雪飞, 高莹, 郭琼颖
【申请人】大道隆达（北京）医药科技发展有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年10月10日