一种良附类制剂的hplc检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物质量控制方法技术领域，具体涉及一种良附类制剂的质量检测方 法。
【背景技术】
[0002] 良附丸首载于清?谢元庆之《良方集腋》，是由高良姜、醋香附两味中药等份、粉碎、 混合而制成的水泛丸，为治疗寒凝气滞胃脘疼痛的代表制剂，在中医临床应用已有近千年 的历史。作为典型的中药复方传统制剂，良附丸药味组成固定，制备工艺简单，临床疗效显 著，极具开发的潜力。
[0003] 作为一种中药复方制剂，良附丸具有多成分、多靶点、多层次、整体作用的特点，但 中国药典2010年版一部中仅测定了 α -香附酮的含量，对于良附丸中的其他成分并没有进 行检测。
[0004] 因此，目前需要一种能全面反映良附类制剂质量的检测方法。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种良附类制剂的HPLC检测方法，它是同时测定良附类制剂中高 良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α -香附酮5种成分含量的HPLC方法，包括以下步骤：
[0006] (1)高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α -香附酮标准曲线的建立：
[0007] a、对照品溶液的制备：
[0008] 取高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮对照品，混合，加甲醇配制成 混合对照品溶液；
[0009] b、对照品溶液的测定：
[0010] 取不同进样量的混合对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，梯度洗脱，测定各色 谱峰峰面积，得到高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮的标准曲线；
[0011] 色谱条件如下：
[0012] 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填料；
[0013] 检测波长：242nm;
[0014] 流动相：甲醇-0. 2 %磷酸水溶液；
[0015] 梯度洗脱程序：
[0017] ⑵待测样品中的高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α -香附酮含量测定：
[0018] c、供试品溶液的制备：
[0019] 取待测良附类制剂或其粉末，加入提取溶媒，称定重量，超声或回流提取，放冷，再 称定重量，用甲醇补足减失的质量，过滤，取滤液作为供试品溶液；所述提取溶媒选自乙醇 或50% -100%甲醇，优选100%甲醇；
[0020] d、供试品溶液的测定：
[0021] 取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，以步骤b相同的色谱条件检测，根据步骤 (1)的标准曲线得到待测样品中高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮的含量。
[0022] 进一步优选地，步骤a中，所述对照品溶液中，每ImL溶液含高良姜素0. 254mg、山 柰素0. 032mg、香附稀酮0. 051mg、圆柚酮0. 005mg和α -香附酮〇. 〇21mg。更进一步优选 地，步骤b中，所述不同进样量的混合对照品溶液分别为2、4、6、8、10yL。
[0023] 进一步优选地，所述步骤c中，提取溶媒与良附类制剂或其粉末的体积重量比为 25:lmL/g 〇
[0024] 进一步优选地，所述色谱柱的长度为250mm，内径为4. 6mm，填料的粒径为5 μ m。更 进一步优选地，所述色谱柱为Phenomenex C18色谱柱
[0025] 进一步优选地，所述色谱条件的柱温为30°C。
[0026] 进一步优选地，所述色谱条件的体积流量为1.0 mL/min。
[0027] 进一步优选地，所述良附类制剂包括良附丸、良附滴丸或良附软胶囊。
[0028] 本发明的HPLC检测方法，可以同时测定良附类制剂中的多种成分。该方法专属性 强、信息反映全面，简便、快速、精确，测定结果准确可靠，从而可以有效监控良附类制剂的 质量，提高了药物的安全性。
[0029] 发明人通过研究发现，α -香附酮、香附烯酮、圆柚酮均是醋香附的含量较高且药 效显著的特征活性成分，可以作为醋香附的指标成分。
[0030] 在高良姜中，其活性成分较多，包括原儿茶酸、槲皮素、山柰素（kaempferide)、山 柰酸（kaempferol)、高良姜素（galangin)、姜黄素和大黄素等，通常，高良姜素是高良姜 的特征性成分且其含量较高，可以作为高良姜的指标成分；发明人意外地发现，山柰素含量 实际上远高于山柰酚，在特定条件下，以山柰素作为附加的指标成分来控制含有高良姜的 制剂的质量显然更为合适。
[0031] 但是，软件ChemBioDraw Ultra (12. 0版）分子模拟显不，高良姜素 LogP (疏水常 数）为1. 13,山柰素 LogP为1，两者极性相当，理论上极难通过HPLC将两者分离。因此，分 离高良姜素和山柰素是发明人需要攻克的一大难点，需要反复试验来摸索出合适的色谱条 件。在色谱条件的摸索过程中，需要使用正确的山柰素对照品。
[0032] 已有文献报道（Y Otake 等，Oxidation of the flavonoids galangin and kaempferide by human liver microsomes and CYP1A1,CYP1A2, and CYP2C9， Drug Metabolism and Disposition，30(2) : 103-105)，高良姜素（galangin)、山柰素 (kaempferide)和山柰酸（kaempferol)的结构式如下所示：
[0033]
[0034] 然而，发明人发现，中国食品药品检定研究院（即原中国药品生物制品检定所，简 称中检所）将山柰（奈）素和山柰酚视为同一物质，其目前在售的两个批次标准品说明书 分别如图1和图2所不。
[0035] 截止目前，通过中检所官网显示的信息，中检所提供的"山柰素"依然是山柰酚 kaempferol 而非山柰素 kaempferide。
[0036] 在山柰素对照品不正确的情况下，现有技术对高良姜成分的分离测定就难免出现 偏差，例如：
[0037] 在《HPLC法测定高良姜中高良姜素和山柰素的含量》（李智勇等，中华中医药杂 志，2010年9月第25卷第9期，第1368-1370页）和《RP-HPLC法同时测定高良姜中槲皮素 等4种黄酮的含量》（刘原作等，沈阳药科大学学报，2014年1月第31卷第1期，第13-20 页）中，"山柰素对照品"均来自于中检所，这个对照品实际上是山柰酚。因此，其测定的并 非作者所认为的山柰素含量，而是山柰酚的含量，其实验结果显示，山柰酚含量极低。
[0038] 发明人通过软件ChemBioDraw Ultra (12. 0版）模拟出山柰酚的LogP为0· 74,其 极性远大于相同软件模拟下的高良姜素（模拟LogP为1. 13)。上述文献采用的均为反相色 谱，在保留时间方面，理论上极性大的山柰酚应当远早于高良姜素出峰，而上述文献的色谱 图正是符合上述理论的推导。
[0039] 因此，上述文献的作者的确是将山柰酚误认为了山柰素，从另一方面看，山柰酚如 此低的含量，的确也不适合在良附类制剂的质量控制体系中，作为指标成分。
[0040] 本发明筛选到了正确的指标成分，同时采用了合适的色谱条件，不仅可以将高良 姜素和山柰素完全分离开来，还进一步准确测定了高良姜素的含量，同时还将它们与醋香 附中的指标成分：香附烯酮、圆柚酮和Ct -香附酮一一分离，可以准确而全面的反映良附丸 的整体质量，取得了良好的监测效果。
[0041] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0042] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
【附图说明】
[0043] 图1为中检所110861-201310批标准品说明书。
[0044] 图2为中检所110861-2