加样回收率试验结果
[0110]
[0111] 9、样品测定
[0112] 取不同批次良附丸，按照本发明的方法进行样品处理和成分定量测定，结果见表 3〇
[0113] 表3良附丸含量测定结果
[0114]
[0115] 实施例3本发明检测方法的筛选试验
[0116] 1、检测波长的筛选
[0117] 在以下色谱条件下，比较 235nm、242nm、254nm、266nm、280nm 波长.
[0118] 色谱柱：Phenomenex C18 色谱柱（4. 6mmX 250mm，5 μ m);
[0119] 流动相：甲醇-水；
[0120] 体积流量：1. OmL/min ;
[0121] 柱温：30°C;
[0122] 梯度洗脱程序：
[0124] 结果如图8-12所示。
[0125] 结果显示，在242nm下，各待测成分均有较大紫外吸收，故选择242nm作为检测波 长。
[0126] 2、流动相和梯度洗脱程序的筛选
[0127] 分别考察了甲醇-水，甲醇-0. 2%磷酸，乙腈-0. 2%磷酸等多个种流动相及梯度 洗脱程序，条件分别如下：
[0128] 条件 1:
[0129]
[0146] 结果如图13-21所示。
[0147] 结果显示，条件4,即本发明的流动相和梯度洗脱程序的分离效果最佳。而条件3 虽然分离效果好，但山柰素和高良姜素重合在一起。
[0148] 3、供试品溶液制备方法的筛选
[0149] ①提取溶媒种类的考察：
[0150] 分别精密称取良附丸粉末lg，置于锥形瓶中，分别加入甲醇、乙醇25mL，称定质 量，超声处理（功率250W，频率40kHz) 30min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇 匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜（〇.45μπι)滤过，即得。结果如表4所示：
[0151] 表4不同提取溶剂测定结果
[0153] 结果表明，甲醇和乙醇均能有效提取良附丸粉末中的各成分。其中，甲醇提取总成 分含量较乙醇高，故优选甲醇作为提取溶媒。
[0154] ②提取溶媒浓度的考察：
[0155] 分别精密称取良附丸粉末lg，置于锥形瓶中，分别加入50%、70%甲醇、甲醇各 25mL，称定质量，超声处理（功率250W，频率40kHz) 30min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减 失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜（0.45 μπι)滤过，即得。结果如表5所示：
[0156] 表5不同浓度甲醇测定结果
[0158] 结果表明，50-100%的甲醇均能有效提取良附丸粉末中的各成分。其中，随着甲醇 增大，总成分含量逐渐提高，故优选100%甲醇作为提取溶媒。
[0159] ③提取方法考察：
[0160] 分别精密称取良附丸粉末lg，置于锥形瓶中，加入甲醇各25mL，称定质量，分别超 声、回流处理30min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，用微 孔滤膜（〇. 45 μ m)滤过，即得。结果如表6所示：
[0161] 表6不同提取方法测定结果
[0162]
[0163] 结果表明，回流和超声提取均能有效提取良附丸粉末中的各成分。
[0164] 回流提取较超声法总成分含量稍偏高，但考虑到回流法操作较复杂，系统误差较 大，故优选超声法。
[0165] ④提取时间考察：
[0166] 分别精密称取良附丸粉末lg，置于锥形瓶中，分别加入50%、70%甲醇、甲醇各 25mL，称定质量，超声处理（功率250W，频率40kHz) 30min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减 失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜（0.45 μπι)滤过，即得。结果如表7所示。
[0167] 表7不同提取时间测定结果
[0169] 结果表明，提取时间对总成分含量影响不大，考虑时间成本，选择超声30min。
[0170] 综上所述，本发明的HPLC检测方法，可以同时测定良附类制剂中的多种成分。该 方法专属性强、信息反映全面，简便、快速、精确，测定结果准确可靠，从而可以有效监控良 附类制剂的质量，提高了药物的安全性。
【主权项】
1. 一种良附类制剂的HPLC检测方法，其特征在于：它是同时测定良附类制剂中高良姜 素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮5种成分含量的HPLC方法，包括以下步骤： ⑴高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮标准曲线的建立： a、 对照品洛液的制备： 取高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮对照品，混合，加甲醇配制成混合 对照品溶液； b、 对照品溶液的测定： 取不同进样量的混合对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，梯度洗脱，测定各色谱峰 峰面积，得到高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮的标准曲线； 色谱条件如下： 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填料； 检测波长：242nm; 流动相：甲醇-〇. 2%磷酸水溶液； 梯度洗脱程序：9 (2)待测样品中的高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α_香附酮含量测定： c、 供试品溶液的制备： 取待测良附类制剂或其粉末，加入提取溶媒，称定重量，超声或回流提取，放冷，再称 定重量，用甲醇补足减失的质量，过滤，取滤液作为供试品溶液；所述提取溶媒选自乙醇或 50% -100% 甲醇； d、 供试品溶液的测定： 取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，以步骤b相同的色谱条件检测，根据步骤（1)的 标准曲线得到待测样品中高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮的含量。2. 根据权利要求1所述的HPLC检测方法，其特征在于：步骤a中，所述对照品溶液中， 每lmL溶液含高良姜素0. 254mg、山柰素0. 032mg、香附稀酮0. 051mg、圆柚酮0. 005mg和 α-香附酬 〇. 〇21mg。3. 根据权利要求2所述的HPLC检测方法，其特征在于：步骤b中，所述不同进样量的 混合对照品溶液分别为2、4、6、8、10μL。4. 根据权利要求1所述的HPLC检测方法，其特征在于：所述步骤c中，所述提取溶媒 选自100%甲醇。5. 根据权利要求1所述的HPLC检测方法，其特征在于：所述步骤c中，提取溶媒与良 附类制剂或其粉末的体积重量比为25:lmL/g。6. 根据权利要求1-5任一项所述的HPLC检测方法，其特征在于：所述色谱柱的长度为 250mm，内径为4. 6mm，填料的粒径为5μm〇7. 根据权利要求6所述的HPLC检测方法，其特征在于：所述色谱柱为PhenomenexC18 色谱柱。8. 根据权利要求1-5任一项所述的HPLC检测方法，其特征在于：所述色谱条件的柱温 为 30°C。9. 根据权利要求1-5任一项所述的HPLC检测方法，其特征在于：所述色谱条件的体积 流量为 1. 0mL/min〇10. 根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：所述良附类制剂包括良附丸、 良附滴丸或良附软胶囊。
【专利摘要】本发明公开了一种良附类制剂的HPLC检测方法，它是同时测定良附类制剂中高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮5种成分含量的HPLC方法，包括以下步骤：(1)高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮标准曲线的建立：(2)待测样品中的高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮含量测定。本发明的HPLC检测方法，可以同时测定良附类制剂中的多种成分。该方法专属性强、信息反映全面，简便、快速、精确，测定结果准确可靠，从而可以有效监控良附类制剂的质量，提高了药物的安全性。
【IPC分类】G01N30/02, G01N30/06
【公开号】CN105301123
【申请号】CN201510491099
【发明人】卢君蓉, 李文兵, 王世宇, 傅超美, 傅舒, 季宁平, 严鑫
【申请人】成都中医药大学
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年8月11日