一种枸橼酸莫沙必利有关物质的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物检测领域，具体涉及一种枸橼酸莫沙必利有关物质的检测方法。
【背景技术】
[0002] 枸橼酸莫沙必利（Mosapride Citrate,商品名为Gasmotin)是由大日本制药株式 会社开发的新型胃动力药物，它是强效选择性5-HT4受体激动剂，临床用于治疗慢性胃炎、 功能性消化不良、反流性食管炎及手术伴随的一系列胃肠道症状的缓解。其于1998年12 月首次在日本上市，中文化学名称：4-氨基-5-氯-2-乙氧基-N- {[4- (4-氟苄基）-2-吗 啉基]甲基}苯甲酰胺枸橼酸盐；分子式=C21H25ClFN 3O3 · C6H8O7 · 2H20,分子量：650. 05,其 结构式为：
[0004] 莫沙必利是强效选择性5-HT4受体激动剂，通过兴奋肌间神经丛的5-HT4受体，刺 激神经末梢乙酰胆碱释放，从而增强胃肠运动，但不影响胃酸分泌。其与类似结构的胃动力 药物相比，副作用大大减少，其与中枢神经原突触膜上的多巴胺D 2, α ρδ-ΗΤΙ，和5-HT2受 体无亲和力，因而没有这些受体阻滞所引起的锥体外系综合征。与其同为苯甲酰胺类胃动 力药物的西沙必利（cisapride)在高敏病人中可出现Q-T间期延长或导致尖端扭转性室 性心动过速，但莫沙必利没有与西沙必利相似的导致尖端扭转性室性心动过速的电生理特 性。同时，其选择性作用于上消化道，对结肠运动无影响，可减少由于结肠运动亢进导致的 腹痛、排便次数增加、腹泻和软便等副作用，另外，电生理研究表明，其无延长离体心室肌和 蒲氏纤维动作电位时程的作用，安全性更好。目前，国内已有多家企业申报和生产该药品。
[0005] 药物的杂质是指药物中存在的无治疗作用或者影响药物的稳定性、疗效，甚至对 人体的健康有害的物质，在药物生产过程中，杂质的主要来源包括两个方面：1、由于所用原 料不纯或者原料反应过程中反应未完全，以及反应的中间产物、反应的副产物等造成药品 原料中杂质的存在；2、由于原料生产过程中反应的溶媒、催化剂等溶剂的残留所造成的药 物的杂质。而药物的杂质与药品安全性的关系是一个受很多因素影响的复杂的关系，通常 药物中的杂质大多具有潜在的生物活性，有的甚至与药物相互作用从而影响药物的效能和 安全性，严重的可能产生毒性作用。药物中的所有杂质都会不同程度地影响药物的稳定性 和安全性，因此在药物的研究、生产、贮存和临床应用等方面，必须保持药物的纯度，降低药 物的杂质，这样才能保证药物的有效性和安全性，药物中的杂质是影响药物纯度的主要因 素，如药物中含有超过限量的杂质，就有可能使理化常数变动，外观性状产生变异，并影响 药物的稳定性；杂质增多也必然使药物的含量偏低或活性降低，毒副作用显著增加。因此， 药物的有关物质检查是控制药物纯度，保证药物质量的一项重要指标。
[0006] 因为不同药物的性质、生产方式和工艺条件不同，引入杂质也随着药物的不同而 不同，由于特殊杂质多种多样，所以检查方法和检测条件也千差万别，目前常用的有关物质 检查方法有：①物理分析法：根据药物与杂质在嗅、味、挥发性、颜色、溶解性及旋光性等方 面的差异，利用灰度检查、旋光度检查等方法检测有关物质是否符合杂质限量规定。②化学 反应法：一般包括容量分析法、重量分析法、比色法和比浊法等方法。③化学分析法：常用 的有紫外分光光度法、毛细管区带电泳法（CzE)、高效毛细管电泳法（HPCE)等。④色谱法： 包括薄层色谱层析法（TLC)、液相色谱法（PLC)、高效液相色谱法（HPLC)、超高效液相色谱 法（UPLC)、气相色谱法（GC)等。其中色谱法是目前最常用也是最有效的药物有关分析方 法，具有灵敏度高、准确性好、简单、易行、快速高效等特点，越来越多的被各国药典用于控 制药物的有关物质，而色谱法中TLC通常只能作为一种半定量方法，同时由于灵敏度受操 作条件影响较大，所以有时难以满足快速、准确分析的需要。而高效液相色谱法（HPLC)作 为一种比较成熟的方法因其分离效能高、专属性强和检测灵敏等特点已被广泛应用于药物 的杂质检查中。
[0007] 目前对于枸橼酸莫沙必利的高效液相色谱检测方法有一定报道，但是其仅能检测 出部分杂质，存在杂质检测不全的现象，且部分杂质分离度不高，无法实现准确检测。因此 寻求一种能够有效分离且尽可能多的检出莫沙必利中有关物质，对于枸橼酸莫沙必利的进 一步质量控制具有十分重要的意义。
【发明内容】
[0008] 为解决上述技术问题，本发明提供一种分离度好、检出有关物质多、检测效率高的 枸橼酸莫沙必利有关物质的检测方法，其包含以下步骤：
[0009] 取枸橼酸莫沙必利供试品溶液进样，按照液相色谱条件进行检测，其中所述高效 液相色谱测定条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为体积比为75 :25 的磷酸二氢钠溶液/乙腈的混合溶液，流动相B为体积比为20:80磷酸二氢钠溶液/乙腈 的混合溶液，采用梯度洗脱。
[0010] 本发明所提供枸橼酸莫沙必利有关物质的检测方法，其中所述梯度洗脱程序为：
[0012] 本发明所提供枸橼酸莫沙必利有关物质的检测方法，其中所述高效液相色谱测定 条件中，磷酸二氢钠溶液的浓度为〇· 001-0. lmol/L，优选为0· 01-0. 05mol/L，进一步优选 为 0·01mol/L。
[0013] 本发明所提供枸橼酸莫沙必利有关物质的检测方法，其中所述高效液相色谱测定 条件中，磷酸二氢钠溶液的pH值为2. 0-6. 0,优选为3. 5 ;磷酸二氢钠溶液的pH调节试剂优 选为H3P04 ;
[0014] 本发明所提供枸橼酸莫沙必利有关物质的检测方法，其中所述高效液相色谱测 定条件中，检测波长为210~360nm，优选为220nm;柱温：15-40°c，优选为35°C ;流速： 0· 5-1. 5ml/min,优选为 lml/min〇
[0015] 本发明所提供枸橼酸莫沙必利有关物质的检测方法，其中所述高效液相色谱测 定条件中，流动相A、B中还含有三乙胺，所述三乙胺的体积浓度为0.01 % -1%，优选为 0. 1% -0. 3%，进一步优选为 0. 1%。
[0016] 本发明所提供枸橼酸莫沙必利有关物质的检测方法，其中所述供试品溶液的制备 方法为，取适量枸橼酸莫沙必利，精密称定，加流动相B溶解并稀释制成每1ml约含Img的 溶液即得。
[0017] 本发明进一步提供一种枸橼酸莫沙必利有关物质的检测方法，其包含以下步骤：
[0018] (a)供试品溶液的制备：
[0019] 取适量枸橼酸莫沙必利，精密称定，加流动相B溶解并稀释制成每1ml约含Img的 溶液即得；(b)色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相A 为体积比为75 :25的磷酸二氢钠溶液/乙腈的混合溶液，流动相B为体积比为20:80的磷 酸二氢钠溶液/乙腈的混合溶液，柱温为350°C,流速为lml/min,检测波长为220nm,所述梯 度洗脱程序为：
[0021 ] 其中，所述流动相A和流动相B中的磷酸二氢钠溶液中含有体积浓度为0. 1 %的三 乙胺，并用磷酸调PH值至3. 5。
[0022] (c)测定：吸取供试品溶液注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定。
[0023] 本发明中述梯度洗脱程序为：
[0024] 0-30min时，流动相A为100 %，流动相B为0 % ;
[0025] 30-100min时，流动相A从100 %到20 %，流动相B从0 %到80 %。
[0026] 本申请发明人详细考察了枸橼酸莫沙必利有关物质检测时的高效液相色谱检测 条件，当采用磷酸二氢钠溶液：乙腈体积比为75 :25的混合溶液为流动相A，磷酸二氢钠 溶液：乙腈体积比为20:80的混合溶液为流动相B，且采用上述梯度洗脱条件时，磷酸二 氢钠溶液浓度大于〇. IM或小于0.0 OlM时，梯度洗脱基线波动较大，当磷酸二氢钠溶液为 0. 001-0.1 M时，基线较为平稳，当磷酸二氢钠溶液为0. 01-0. 03M时，基线较更加平稳，且 峰形较好，当磷酸二氢钠溶液浓度为〇. OlM时，峰形优异，分离度最好；对磷酸二氢钠溶液 的PH值进行考察发现，当PH大于6. 0时，峰形不对称，当PH小于2. 0时，色谱柱耐受性 差、柱效下降，峰形不对称PH为2. 0-6. 0时，峰形较好，PH为3. 5时，峰形最为对称；当向流 动相中加入三乙胺〇. 01 %~1 %时，能够有效改善检测拖尾的现象，其中当三乙胺浓度为 0. 1% -0. 3 %时，效果较优，当三乙胺浓度为0.1 %时，改善拖尾效果最好。通过考察二极管 阵列检测器（DAD检测器检测）检测枸橼酸莫沙必利有关物质的吸收