专利名称：新型中药制剂的开发与评价的制作方法
新型中药制剂的开发与评价技术领域中药制剂的制作和评价背景技术人参是中医药品中常用品种，对抗疲劳，增强免疫力，壮阳等效果显著， 但是其药理作用的分子解释还有待确定。人参成份复杂，不同传统炮制工艺会产生不同药 效，为有效成分的识别和定量带来很大困难。目前人参药理学的研究分两个方面(1)药效 的描述和解释；( 有效成分的鉴定。其中第二个方面依赖于第一个方面的成果。对人参 药效的研究，主要以活体实验为主，使用整体实验动物或离体的细胞，观察生物和化学指标 的变化，所使用的人参样品多为提取混合物或单一的纯化合物。这些实验的缺陷主要是使 用间接的指标进行测量，而且缺少正反面的对照药品进行平行试验，所以不同实验数据之 间很难进行比较和归纳。对有效成分的研究，目前包括两个方面主要成分的鉴定；主要代 谢产物的鉴定。从人参特有的主要成分人参皂甙解析出了几十个不同化学结构，而不同品 种的人参和炮制工艺产生新的成分和成分配比。主要代谢产物研究发现，人参皂甙的肠胃 吸收率很低(< 4% )，而且主要代谢产物成分单一(例如化合物K)，不能圆满解释不同人 参制剂之间众多不同的药效。而具备确凿实验数据的有效成分的研究屈指可数，比方具雌 激素样作用，与若干细胞膜受体和离子通道作用等。但这些研究中使用的化合物大多浓度 很高，以致很难在人体中实现。根据目前积累的实验数据，可以推测，人参所含的真正有效 成分还有待进一步确定。这些成分应具备以下特点(1)与药物靶位结合具高亲和力。由 于人参主要成分皂甙的吸收率很低，所以少量被吸收的物质浓度很低，其药理作用应该是 通过高亲和力作用位点来实现。(2)化学结构不稳定。由于炮制方法的改变，人参药效也发 生变化。这暗示其中的有效成分稳定性差。(3)同时存在的结构相近成分药效可能相反。遵循上述推测，我们探讨使用计算机辅助运算的方法来寻找人参有效成分。该计 算方法应用牛顿力学，借助PAULING原子半径和实验电离常数，运算大分子内部非共价键 相互作用。目前蛋白质结构通过X光衍射晶体和高分辨率核磁共振被普遍解析，包括大量 结构蛋白和调节因子，这些结构信息放在公共数据库中。另外，关于人参皂甙的结构也被解 析和发表。这些工作基础为计算机辅助运算，寻找高亲和力结合位点提供可能。计算机模 拟对接结果初步表明，部分人参皂甙可能与若干细胞核受体产生高亲和力结合作用，激活 或抑制这些受体的生物活性，从而产生相反的药效。这些进展不仅丰富了我们对人参作用 的理解，而且对这些核受体的生理功能研究提供新的方向。参考文献1. Williams S et al (2003)X-ray crystal structure of the liver X receptor beta ligand binding domain !regulation by a histidine-tryptophan switch. Journal of Biological Chemistry 278(29) :27138-27143.2. Farnegardh M et al(2003)The three-dimensional structure of the liver X receptor beta reveals a flexible ligand-binding pocket that can accommodate fundamentalIy different ligands.Journal of Biological Chemistry 278 (40) 3881-3888.3.Svensson S et al (2003)Crystal structure of the heterodimericcomplex of LXRalpha and RXRbeta ligand—binding domains in a fully agonistic conformation. EMBO Journal 22(18) :4625-46334.莫儿泰尼等O007)作为L)(R调节剂的化合物和组合物。中华人民共和国发明 专利申请公布说明书，申请号200580004674. 85.廖述宗等000 肝脏X受体激动剂。中华人民共和国发明专利申请公布说明 书，申请号(^813426. 56.廖述宗等Q004)类固醇衍生物。中华人民共和国发明专利申请公布说明书，申 请号 02807008. 97.廖述宗等Q002)类固醇衍生物。中华人民共和国发明专利申请公布说明书，申 请号 00806958. 18. Huang TH et al(2005)A novel LXR-a activator identified from the natural product Gynostemma pentaphyllum. Biochemical Pharmacology 70:1298—1308·9. Lee PS et al (2006) Physicochemical characteristics and bioavailability of a novel intestinal metabolite of ginseng saponin(IH901) complexed with beta-cyclodextrin. International Journal of Pharmaceuticals 316 29-3610. Cai BX et al (2009) Ginsenoside Rbl Suppresses Ultraviolet Radiation-Induced Apoptosis by Inducing DNA Repair. Biol. Pharm. Bull. 32(5) 837-84111.Bennett J et al LXR agonists for the treatment of atherosclerosis recent highlights. Annual Reports in Medicinal Chemistry Volume 43, Chapter7, 103-11712. Peng D et al (2008)Antiatherosclerotic effects of a novel synthetic tissue-selective steroidal liver X receptor agonist in low-density lipoprotein receptor-deficient mice. Journal of Pharmacol. Exp. Ther. 327(2) :332-34213. Wojcicka G et al(2007)Liver X receptors (LXRs). Part I :structure, function, regulation of activity, and role in lipid metabolism. Postepy Hig Med Dosw 61 :736-75914. Jamroz-Wisniewska A et al(2007)Liver X receptors (LXRs). Part II: non-lipid effects, role in pathology, and therapeutic implications. Postepy Hig Med Dosw 61 :760-78515.Zelcer N et al (2006)Liver X receptors as integrators of metabolic and inflammatory signaling. Journal of Clinical Investigation 116 (3) :607-614.16.艾正琳等Q005)肝X受体的研究进展。世界华人消化杂志13(16) =2013-201517.郑辉等Q001)新型LXRs配体——环氧胆烷酸甲酯一类物的化学合成。第三 军医大学学报23 (9) =1091-109318.郑辉等Q001)新型LXRs亚型选择性配体的设计合成。重庆师范学院学报(自 然科学版)18(3) :19-2119. Song C et al(2000)Cholestenoic acid is a naturally occurring ligandfor liver X receptor alpha. Endocrinology 141 (11) :4180-418420. Song C et al (2000)Selective activation of liver X receptor alpha by 6alpha-hydroxy bile acids and analogs. Steroids 65 :423-42721.Schultz JR et al(2000)Role of LXRs in control of lipogenesis. Genes & Development 14 :2831-283822.Spencer TA et al (2001)Pharmacophore analysis of the nuclear oxysterol receptor LXRalpha. Journal of Medicinal Chemistry 44 :886-89723.Lehmann JM et al (1997)Activation of the nuclear receptor LXR by oxysterols define a new hormone response pathway. Journal of Biological Chemistry 272(6) :3137-314024. Willy PJ et al(1995)LXR, a nuclear receptor that defines a distinct retinoid response pathway. Genes & Development 9 :1033-104525. Song C et al (1994)Ubiquitous receptor :a receptor that modulates gene activation by retinoic acid and thyroid hormone receptors. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 91(23),10809-1081326. Shinar DM et al (1994)NER, a new member of the gene family encoding the human steroid hormone nuclear receptor. Gene 147(2) :273-27627.Apfel R et al(1994)A novel orphan receptor specific for a subset of thyroid hormone-responsive elements and its interaction with the retinoid/ thyroid hormone receptor subfamily. Molecular and Cellular Biology 14(10) 7025-7035发明内容细胞核受体L)(R是人体49个细胞核受体中的重要成员，对胆固醇和脂 肪代谢起不可替代的调节作用。调节LXR的生物活性对心脑血管阻塞，非胰岛素依赖性高 血糖，免疫功能紊乱，中枢神经功能衰退等病症可能有治疗作用。使用计算机模拟对接技术 和体外培养人体细胞的生物活性测定方法，我们开发出一类针对细胞核受体LXR的新型中 药制剂。该类制剂具有成分简单，成本低廉，制作方便等特点。初步使用小鼠进行的急性毒 理学分析未发现明显的不良反应。
具体实施例方式举例1.使用食用酒北京二锅头酒(酒精度56% )2500毫升，加入100克药用级氢氧化钠 固体，搅拌溶解，再加入100克绞股蓝总皂甙提取物(总皂甙含量> 98% )(西安天一生物 技术有限公司)，加热溶解。溶液冷却至室温后，缓慢滴加30%过氧化氢水溶液300毫升， 溶液室温静置M小时，过滤白色沉淀，收集上清液，再滴加30%过氧化氢水溶液100毫升， 溶液室温静置48小时，过滤溶液，收集上清。上清液用2N的稀盐酸溶液中和至pH7，40-50 摄氏度减压蒸馏除去乙醇，溶液内出现油状固体。收集不溶物，干燥后粉碎收集固体，获64 克绞股蓝总皂甙衍生物。举例2.加热溶解羟丙基乙型环糊精，获得40%水溶液，按比例加入绞股蓝总皂甙衍生物(环糊精皂甙衍生物=4 1)，加热溶解，并加热浓缩，70摄氏度抽风干燥除去水分，固体 粉碎后得环糊精包合物。可以用该包合物制成口服液，硬胶囊，片剂等口服剂型。也可以用 该包合物制成静脉注射液。该产品可以用于上调L)(R受体生物活性。举例3.七十摄氏度加热40毫升去离子水，加入250毫克卡波940，搅拌溶解。绞股蓝总皂 甙衍生物250毫克溶解在3毫升无水乙醇和1毫升甘油溶液中，并加入上述溶液中。在搅 拌条件下，向70摄氏度溶液中依次加入2毫升丙二醇，0. 5毫升吐温80，0. 5克硬脂酸，100 毫克维生素B3，60毫克维生素B6，120毫克熊果苷，360毫克左旋维生素C，30毫克辅酶Q， 0. 3毫升水溶性氮酮，水溶性复合抗菌剂，滴加三乙醇胺至pH中性，滴加少量迷迭香油，冷 却后得到水溶性护肤胶。该护肤胶可以促进皮肤脂类代谢，抗皱。举例4.使用计算机模拟分子对接方法(AutodoCk4. 0软件)(美国加州Scripps Institute)对人参皂甙及类似物与细胞核受体L)(R相互作用进行了初步探索。(LXRalpha 配体结构域晶体结构为IUHL ；LXRbeta结构为1P8D，美国PDB数据库)计算机模拟分子对接方法计算部分三萜皂甙类化合物与L)(R受体相互作用的结
合强度(化合物结构见说明书附图
)
权利要求
1.使用体外培养的人体细胞对细胞核受体肝脏X受体(LXR)进行生物转录活性测定， 来确定中药制剂的药效。
2.使用含氢氧化钠，乙醇和过氧化氢的水溶液制备天然三萜类提取物的衍生物的方 法，来提高中药制剂的药用价值。
3.权限2中水溶液中氢氧化钠含量范围为-20%，乙醇含量范围为10-80%，过氧 化氢含量范围为1-10%。
4.权限3中水溶液中氢氧化钠含量为4%，乙醇含量为50%，过氧化氢含量为4%。
5.权限1-4中三萜类提取物的含量与相应的氢氧化钠含量一致。
6.权限5中三萜类化合物包括人参提取物，绞股蓝提取物，灵芝提取物，黄芪提取物， 和其他补气类中药提取物。
7.权限2中的药用价值，包括调节L)(R生物活性的药效，比如减少动脉内壁的胆固醇积 累，调节免疫系统，改善中枢神经系统，改善非胰岛素依赖型糖尿病的病症。
全文摘要
细胞核受体LXR是人体49个细胞核受体中的重要成员，对胆固醇和脂肪代谢起不可替代的调节作用。调节LXR的生物活性对心脑血管阻塞，非胰岛素依赖性高血糖，免疫功能紊乱，中枢神经功能衰退等病症可能有治疗作用。使用计算机模拟对接技术和体外培养人体细胞的生物活性测定方法，我们开发出一类针对细胞核受体LXR的新型中药制剂。该类制剂具有成分简单，成本低廉，制作方便等特点。初步使用小鼠进行的急性毒理学分析未发现明显的不良反应。
文档编号A61K36/258GK102071246SQ20091016962
公开日2011年5月25日 申请日期2009年8月27日 优先权日2009年8月27日
发明者余昊, 宋青, 廖述宗, 王璐, 谢元翼 申请人:北京科技大学