专利名称：：一种复方脑得生有效成分的纯化方法
技术领域：
：本发明涉及药物纯化领域，具体涉及一种复方脑得生有效成分的纯化方法。
背景技术：
：复方脑得生是有效中药复方，1979年经黑龙江省卫生厅批准生产脑得生丸和脑得生片中成药品种，1995年被列入中国药典，2000年和2005年再版中国药典均连续收载，由三七78g、川芎78g、红花91g、葛根261g、山楂(去核)157g五味药组成，具有活血化瘀，疏通经络，醒脑开窍的功效，用于脑动脉硬化，缺血性脑中风及脑出血后遗症等疾患，疗效显著。脑得生各药味的药理作用主要有脑得生复方中各药味均具有活血化瘀的功效。现代药理研究表明三七总皂苷和黄酮类成分对中枢神经系统有抑制和镇痛作用；对心血管系统有抗心律失常、扩张冠脉、增加冠脉流量、抗实验性心肌缺血等作用；对血液系统有止血和抑制血小板聚集作用；还有降血脂，抗氧化，抗衰老，增强免疫力等作用。川芎中的川芎嗪和阿魏酸等成分对心脑血管系统有扩张冠脉、增加冠脉流量、降低心肌耗氧量、增加脑血流量、改善软脑微循环和流态、调理慢性微循环障碍等作用；对血液系统有抑制血小板聚集作用；对中枢系统有镇静作用；还有抗放射等作用。红花黄素及黄酮类成份对心血管系统有轻度兴奋心脏、增加冠脉和心肌营养性血流量、抗实验性心肌缺血、改善微循环等作用；对血液系统有抑制血小板聚集和增强纤维蛋白溶解能力；还可降血脂，提高缺氧耐受力等。葛根总黄酮和葛根素有明显的扩张冠脉、抗心肌缺血和心律失常、抑制血小板聚集、降血压、降血糖等作用。山楂对心血管系统有增加心肌收縮力和心输出量、降压、降血脂等作用。目前脑得生各制剂中各药均全部或部分以生药粉入药，提取出来杂质太多，制成的剂型还会存在药效相对较低，服用剂量较大，进而增加病人负担，起效慢等不足。不符合中药现代化的要求，不利于中医药事业的发展，影响中药复方新药的研究和走向国际化的进程。
发明内容本发明的目的在于根据现有技术的不足，提供一种杂质少、药效好的复方脑得生有效成分的纯化方法。本发明目的通过以下技术方案予以实现—种复方脑得生有效成分的纯化方法，包括如下步骤(1)将复方脑得生原材料分为按质量份数计的两部分，第一部分是三七78、葛根261、山楂157和川芎78;第二部分是红花91;(2)向第一部分中加入乙醇提取，经抽滤浓縮后，得到第一部分的浓縮液；第二部分用水提取，经水浴、抽滤后，得到红花提取液；(3)将上述两部分分别过聚酰胺树脂和大孔吸附树脂进行吸附、洗脱、分离纯化；(4)收集两部分洗脱液，合并、水浴浓縮，抽真空减压干燥，得到脑得生有效成分的干浸膏。作为一种优选方案，上述纯化方法包括如下步骤(1)将复方脑得生原材料分为按质量份数计的两部分，第一部分是三七78、葛根261、山楂157和川芎78;第二部分是红花91;(2)向第一部分中加入420倍质量的乙醇提取广4次，每隔3090rnin—次，将抽滤、合并提取液、浓縮后，得到第一部分的浓縮液；第二部分中加入620倍质量的水，408(TC水浴23次，每隔2040rnin—次，抽滤、合并提取液，得到红花提取液；(3)第一部分浓縮液加水定容至含0.090.11g/ml生药量的水溶液，得到第一部分提取物；第二部分红花提取液经减压浓縮定容至含0.060.08g/ml生药量的溶液，得到红花提取物；(4)将上述两部分提取物分别过聚酰胺树脂和大孔吸附树脂进行吸附洗脱，第一部分提取物过树脂的吸附洗脱条件是调上样药液pH至110，以0.25ml/min的流速吸附，洗脱流速为广10ml/min，水洗体积为210倍树脂柱体积，洗脱用乙醇的浓度为1(T95wt%;第二部分红花提取物过树脂的吸附洗脱条件是调上样药液pH至广IO，以0.210ml/min的流速吸附，洗脱流速为18ml/min，水洗体积为210倍树脂柱体积，洗脱用乙醇的浓度为1095wt%;(5)收集两部分乙醇洗脱液，合并，减压回收乙醇，309(rC水浴浓縮，抽真空减压干燥，得到脑得生有效成分的干浸膏。上述步骤(2)中，优选为向第一部分中加入10倍质量的浓度为70wt^的乙醇水浴回流提取2次，每隔60min—次，经抽滤、合并提取液、浓縮后，得到第一部分的浓縮液；第二部分中加入14倍质量的水于6(TC水浴温浸2次，每隔30min—次，抽滤、合并提取液，得到红花提取液。上述步骤(4)中，第一部分优选用AB-8、HP20、D101或D4020大孔吸附树脂进行吸附纯化，红花部分优选用HPD-100、HP20、D101或AB-8大孔吸附树脂进行吸附纯化。其中，第一部分提取物的吸附洗脱条件优选为调上样药液pH至25，以lml/min流速吸附，洗脱流速为23ml/min，水洗体积为4倍树脂柱体积，洗脱用的乙醇浓度为70wt%;第二部分红花提取物吸附洗脱条件优选为调上样药液pH至15，以lml/min流速吸附，洗脱流速为23ml/min，水洗体积为6倍树脂柱体积，洗脱用乙醇的浓度为30wt%。上述步骤(5)中，所述水浴的温度优选45°C。本发明在纯化方法的筛选中，将两部分提取物均分别过聚酰胺树脂(包括80100目、3060目和1430目)、大孔吸附树月旨(包括D101、D101B、DM130、HP20、S_8、D4020、NKA-9、HPD-IOO、AB_8、XDA-1、XDA_5、H_20、H-60和LSA-40)、离子交换树月旨(包括阴离子和阳离子)、环氧树脂、聚酯树脂、天然树脂、酮醛树脂、酚醛树脂、脱色树脂、氨基树脂等进行吸附洗脱，以便筛选出最佳的纯化树脂。与现有技术相比，本发明具有如下有益效果(1)本发明纯化方法的有效转移率高本发明针对药物药效成分性质，将复方脑得生分为两部分提取，这样可以充分的提取出各组分的有效成分，使工艺综合提取率达到最高；(2)提取物有效部位纯度高本发明通过将提取物经过筛选出的大孔吸附树脂的吸附纯化，除去了大量的糖类和鞣质等非药用部位，且能使有效成分的回收率升高，得到纯度更高的复方脑得生的有效部位；(3)本发明将提取液、洗脱液通过减压浓縮，便于控制温度且可减少浓縮时间，降低了药物中有效成分的损失；(4)本发明将有效部位稠膏采用抽真空减压干燥，可以明显縮短活性成分的受热时间，减少了成分的损失，与传统鼓风干燥箱相比，抽真空减压干燥法得到的干浸膏疏松，干燥粉末较稳定均一，便于后续的加工；(5)本发明纯化方法采用的AB-8、HP20、DlOl、D4020和HPD-100大孔树脂进行分离纯化，该两种树脂的价格较低，安全性高，降低了纯化成本。图1是红花水洗体积曲线。具体实施例方式以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。实施例l第一部分的提取工艺实验使用乙醇回流提取法进行实验，采用L9(34)正交实验法考察乙醇回流提取第一部分乙醇用量(药材质量的倍数)、乙醇浓度、提取时间、提取次数等因素的工艺参数，并采用紫外-可见分光光度法对提取物中总黄酮和总皂苷的含量进行测定，同时用高效液相法测定葛根素、阿魏酸、人参皂苷Rbl、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rl的含量，并以此为指标进行比较分析。结果见表1表6。表l第一部分提取工艺因素水平表^\JABCD水平^\(乙醇浓度)(溶剂倍数)(提取时间rain)(提取次数)15083022601060237012903表2测定结果四药合提权重综合比较试验号三七三种皂苷之和阿魏酸葛根素总黄酮综合评分(mg/gH七)(mg/g川茑)(mg/g葛根)(mg/g山楂)(三七*0.4、川芎*0.3、山楂—总黄酮*0.2、葛根素*0.1)6164.74750.719228.3513116.259152.2017265.70780.7228.1946129.152455.1488364.27990.715727.8938129.859354.6892462.05560.822827.8904160.851559.9963565.91340.701428.4156143.359358.1256668.93830.740929.2074141.968859.1002767.15820.728929.0213149.830459.9538870.68810.750227.5329150.168161.2808970.11790.749329.2142144.349960.0636表3第一部分提取工艺正交试验结果试验号ABCD四药综合含量1111152.20172122255.14883133354.68924212359.9963223158.12566231259.1002313259.95388321361.28089332160.0636均值l54.013257,383957.527656.7970均值259.074058.185158.402958.0676均值360.432757.951057.589558.6554极差6.41950.56710.87531.2232表4第一部分方差分析因素偏差平方和自由度F比F临界显著性(P)A68.66772.000067.442619承B1.01822扁0l扁O19C1.43162.00001.406119D5.41402扁05.317319正交试验结果表明(表3、表4):影响因素最大的是乙醇浓度，提取时间、提取次数、加溶剂量无明显影响，从直观分析可看出其影响大小排序C>A>B>D，即提取时间和乙醇浓度影响较大，加溶剂量和提取次数影响相对较小，由此得出第一部分提取优选工艺为A3B2C2D2，即10倍量的70%乙醇回流提取两次，60min/次。但乙醇浓度是最后一个水平效果最好，又对提取工艺中有效成分的提取率有显著性影响，故需对乙醇浓度这个因素再做一次单因素考察试验以确定出最佳工艺。(2)称取第一部分两份处方比例药材，按(1)筛选好的工艺提取一份10倍量70X乙醇提取两次，60min/次；另一份10倍量80%乙醇提取两次，60min/次。测定结果见表5。表5醇提测定结果综合比较<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>结果可以看出70%醇提效果要优于80%醇提，提取率要高。所以最后确定的最佳提取工艺为10倍量70X乙醇提取两次，60min/次。(3)提取工艺验证试验称取过20目筛的四味药材粗粉(三七78份、葛根261份、山楂157份、川弯78份)三份，按照优选提取工艺进行验证试验，验证试验结果如表6。表6第一部分提取验证测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>提取效果理想，优于正交设计各次实验结果。验证试验结果表明优选的提取工艺稳定可行。实施例2第二部分的提取工艺实验(1)使用水浴温浸提取方法进行实验，采用L9(34)正交实验法考察水浴温浸提取第二部分加水量(药材质量的倍数)、提取温度、温浸时间、浸提次数等因素的工艺参数，并采用高效液相法测定羟基红花黄色素A的含量，并以此为指标进行比较分析。结果见表表7红花提取工艺因素水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表8红花提取工艺正交试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表9方差分析<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>正交试验结果表明(表8、表9):加水量、提取时间、提取温度对红花的水提取工艺中羟A的提取率都有显著性影响，从直观分析可看出其影响大小排序C>A>B，即提取时间和加水量影响较大，提取温度和次数影响相对较小，得出红花药材的水提取优选工艺为AMZ(^Dt综上所述，选定最合适的工艺条件为加入14倍量水，60。C水浴温浸2次，30min/次。(2)提取工艺验证试验称取过20目筛的第二部分红花药材粗粉(91份)三份，按照优选提取工艺进行验证试验，测定羟基红花黄色素A含量，三批样品羟基红花黄色素A含量(mg/g红花)分别为9.2460、9.3895、9.4737，平均9.3697mg/g，提取效果理想，优于正交设计各次实验结果。验证试验结果表明优选的提取工艺稳定可行。实施例3第一部分的树脂纯化工艺实验用前述优选提取条件提取得到的提取液进行如下实验(i)树脂的筛选对已处理好的26种树脂柱聚酰胺树脂(包括80100目、3060目、1430目)、大孔吸附树月旨(包括DlOl、D101B、DM130、HP20、S_8、D4020、NKA_9、HPD-IOO、AB_8、XDA-l、XDA-5、H-20、H-60、LSA-40)、离子交换树脂(包括阴离子和阳离子)、环氧树脂、聚酯树脂、天然树脂、酮醛树脂、酚醛树脂、脱色树脂、氨基树脂等，精密吸取26份第一部分提取液适量上柱，吸附过夜，然后依次用蒸馏水、70%乙醇洗脱，收集各部分洗脱液，26份样品均完全平行处理(上样速度lml/min、洗脱速度2ml/min)。各洗脱液均测定指标性成分，并计算各洗脱率，综合评分结果可知AB-8(或HP20、DlOl、D4020)型大孔树脂吸附量大、洗脱率高，故采用AB-8型(或HP20、DlOl、D4020)大孔树脂分离纯化第一部分(以AB-8型为代表)。确定为最佳纯化树脂。[ooes](2)上样浓度的考察取第一部分上柱液配成5种不同浓度的溶液(浓度分别为0.046,0.092，0.138，0.184，0.230g/ml)，取同体积的量分别通过已进行前处理过的AB-8树脂柱(1.8cmX30cm)，控制流速进行动态吸附，充分吸附后依次用蒸馏水、70%乙醇洗脱，收集同量的各部分洗脱液进行测定。结果上样浓度分别为0.046，0.092，0.138，0.184，0.230g/ml时，综合评分吸附率分别为94.27%，97.86%，96.77%，94.28%，92.81%，可见上样浓度以0.092g/ml为宜。实际在0.0900.110g/ml均可。(3)吸附流速的考察取浓度为0.092g/ml提取液通过已进行前处理过的4根AB_8树脂柱(1.8cmX30cm)，分别以1、2、3、4ml/min的流速进行动态吸附，充分吸附后依次同步用蒸馏水、70%乙醇洗脱，收集同量的各部分洗脱液进行测定。结果综合评分吸附率分别为98.32%，98.01%，97.21%，96.44%，可见吸附流速以lml/min为宜。(4)上样液pH值的考察取浓度为0.092g/ml样品液5份(原样品液的pH值为4)，用稀盐酸或lwt%NaOH将其中4份样品液的pH值分别调为2、6、8、10后，均以lml/min的流速进行动态吸附，充分吸附后依次同步用蒸馏水、70%乙醇洗脱，收集同量的各部分洗脱液进行测定。结果pH值为2、4、6、8、10时，综合评分吸附率分别为97.52%，98.57%，90.49%，84.40%，60.98%。可见用样品液pH值为4时(原样品液)，洗脱率最大。(5)水洗体积的确定取5倍树脂柱体积浓度为0.092g/ml的样品液以lml/min的流速通过AB-8树脂柱，充分吸附，蒸馏水洗，收集水洗液，1个柱体积为一份，流出液时时以molish反应来检测，反应呈阴性时即停止水洗，此时收集4倍树脂柱体积，故确定水洗量为4倍树脂柱体积。(6)洗脱溶媒的考察按上述所确定的吸附条件进行动态吸附后，树脂柱先用4BV蒸馏水洗去未吸附成分，再分别以10%，30%，50%，70%，90%乙醇液同流速洗脱至树脂柱上无明显颜色时结束洗柱，收集同量的洗脱液，测定其中各成分的含量，经权重综合评分计算得的洗脱率分别为17.38%，36.59%，65.78%，82.12%，79.13%，结果可见70%乙醇为最佳洗脱剂。(7)洗脱速度的考察按上述所确定的吸附条件进行动态吸附后，以同量70%乙醇为洗脱剂，洗脱流速分别为1、2、3、4ml/min。收集乙醇洗脱液，测定其中各指标成分的含量，经权重综合评分计算得的洗脱率分别为69.27%，73.68%，66.41%，67.39%。结果可见，洗脱流速为2ml/min时，洗脱效果最好。(8)纯化工艺验证实验称取过20目筛的四味药材粗粉(三七78份、葛根261份、山楂157份、川芎78份)三份，按照优选提取工艺进行提取，提取液按上述确定的吸附、洗脱条件分别进行上柱、吸附和洗脱。并分别收集洗脱液，测定洗脱液中各成分的含量。纯化验证试验结果如表io。表IO测定结果四药合提权重综合比较<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>结果证明，经AB-8大孔树脂处理后的各指标成分洗脱率平均为80.37%，具有良好的重现性。实施例4第二部分的树脂纯化工艺实验用前述优选提取条件提取得到的红花提取液进行如下实验(1)树脂的筛选对已处理好的26种树脂柱聚酰胺树脂(包括80100目、3060目、1430目)、大孔吸附树月旨(包括DIOI、D101B、DM130、HP20、S_8、D4020、NKA_9、HPD-IOO、AB_8、XDA-l、XDA-5、H-20、H-60、LSA-40)、离子交换树脂(包括阴离子和阳离子)、环氧树脂、聚酯树脂、天然树脂、酮醛树脂、酚醛树脂、脱色树脂、氨基树脂等，精密吸取26份红花提取液适量上柱，吸附过夜，然后依次用蒸馏水、50%乙醇洗脱，收集各部分洗脱液，17份样品均完全平行处理(上样速度lml/min、洗脱速度2ml/min)。各洗脱液均用高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A的含量，并计算洗脱率，结果可知HPD-100型(或HP20、D101、AB-8)大孔树脂吸附量大、洗脱率高，故采用HPD-100型(或HP20、D101、AB-8)树脂分离纯化红花中羟基红花黄色素A(以HPD-100型为代表)。(2)上样浓度的考察取第二部分红花提取液配成5种不同浓度的溶液(分别为0.025，0.050，0.075，0.100，0.125g/ml)，取同体积的量分别通过已进行前处理过的HPD-100树脂柱(1.8cmX30cm)，控制流速进行动态吸附，充分吸附后依次用蒸馏水、50%乙醇洗脱，收集同量的各部分洗脱液进行含量测定。结果上样浓度分别为0.025，0.050，0.075，0.100，0.125g/ml时，羟基红花黄色素A的吸附率分别为82.00%，82.49%，84.46%，82.54%，81.05%，可见上样浓度以0.075g/ml为宜。实际在0.0600.080g/ml均可。(3)吸附流速的考察取浓度为0.075g/ml红花样品液通过已进行前处理过的4根HPD-100树脂柱(1.8cmX30cm)，分别以1、2、3、4ml/min的流速进行动态吸附，充分吸附后依次同步用蒸馏水、50%乙醇洗脱，收集同量的各部分洗脱液进行含量测定。结果上样流速分别为1、2、3、4ml/min时，羟基红花黄色素A吸附率分别为59.02%，57.94%，52.02%，50.89%。可见，吸附流速以lml/min为宜。(4)上样液pH值的考察取浓度为15.6mg/ml红花样品液5份(原样品液的pH值为3)，用稀盐酸或lwt%NaOH将其中4份样品液的pH值分别调为1、5、7、9后，均以lml/min的流速进行动态吸附，充分吸附后依次同步用蒸馏水、50wt^乙醇洗脱，收集同量的各部分洗脱液进行含量测定。结果pH值为1、3、5、7、9时，羟基红花黄色素A洗脱率分别为35.41%，62.33%，53.87%，50.45%，26.40%。可见用红花样品液pH值为3时(原样品液)，洗脱率最大。(5)水洗体积的确定按以上所确定的吸附条件，取红花样品液上柱，进行动态吸附，用水洗脱，按1树脂体积/份收集水洗脱液，共收集9份。测定每份中羟基红花黄色素A的含量，以洗脱体积份数为横坐标，羟基红花黄色素A的含量为纵坐标作图，见图l，从结果图可见，洗脱到67倍树脂体积时未吸附成分已基本洗尽，为了减少洗脱用水，縮短洗脱时间，因此选择6倍树脂体积为洗脱用水量。(6)洗脱溶媒的考察按上述所确定的吸附条件进行动态吸附后，树脂柱先用6倍树脂体积蒸馏水洗去未吸附成分，再分别以10%，30%，50%，70%，90%乙醇液洗脱至树脂柱上无明显黄色时结束洗柱。测定其中羟A的含量，计算羟基红花黄色素A的洗脱率分别为81.70%，98.98%，94.10%，92.60%，73.70%，结果可见30wt%乙醇为最佳洗脱剂。(7)洗脱速度的考察按上述所确定的吸附条件进行动态吸附后，以同量30%乙醇为洗脱剂，洗脱流速分别为1、2、3、4ml/min。收集乙醇洗脱液，测定其中羟基红花黄色素A的含量，计算羟基红花黄色素A的洗脱率分别为54.48%，58.91%，61.59%，59.43%。可见，洗脱流速为3ml/min时，洗脱效果最好。(8)纯化工艺验证实验称取过20目筛的红花药材粗粉(91份)三份，按照优选提取工艺进行提取，提取液按上述确定的吸附、洗脱条件分别进行上柱、吸附和洗脱。并分别收集洗脱液，测定洗脱液中羟基红花黄色A的含量。计算羟基红花黄色素A的洗脱率分别为89.62X，86.41X，90.92%。结果证明，经HPD-100大孔树脂处理后的羟基红花黄色素A洗脱率平均为88.98%，具有良好的重现性。权利要求一种复方脑得生有效成分的纯化方法，其特征在于所述纯化方法包括如下步骤(1)将复方脑得生原材料分为按质量份数计的两部分，第一部分是三七78、葛根261、山楂157和川芎78；第二部分是红花91；(2)向第一部分中加入乙醇提取，得到第一部分的浓缩液；第二部分用水提取，得到红花提取液；(3)将上述两部分分别过树脂进行吸附、洗脱、分离纯化；(4)收集两部分洗脱液，合并、水浴浓缩，抽真空减压干燥，得到脑得生有效成分的干浸膏。2.根据权利要求1所述的复方脑得生有效成分的纯化方法，其特征在于所述方法包括如下步骤(1)将复方脑得生原材料分为按质量份数计的两部分，第一部分是三七78、葛根261、山楂157和川芎78;第二部分是红花91;(2)向第一部分中加入420倍质量的乙醇提取广4次，每隔3090rnin—次，经抽滤、合并提取液、浓縮后，得到第一部分的浓縮液；第二部分中加入620倍质量的水，408(rC水浴23次，每隔2040rnin—次，抽滤、合并提取液，得到红花提取液；(3)第一部分浓縮液加水定容至含O.090.11g/ml生药量的水溶液，得到第一部分提取物；第二部分红花提取液经减压浓縮定容至含0.060.08g/ml生药量的溶液，得到红花提取物；(4)将上述两部分提取物分别过聚酰胺树脂和大孔吸附树脂进行吸附洗脱，第一部分提取物过树脂的吸附洗脱条件是调上样药液pH至110，以0.25ml/min的流速吸附，洗脱流速为110ml/min，水洗体积为210倍树脂柱体积，洗脱用乙醇的浓度为1095wt%;第二部分红花提取物过树脂的吸附洗脱条件是调上样药液pH至广IO，以0.210ml/min的流速吸附，洗脱流速为18ml/min，水洗体积为210倍树脂柱体积，洗脱用乙醇的浓度为1095wt%;(5)收集两部分乙醇洗脱液，合并，减压回收乙醇，309(rC水浴浓縮，抽真空减压干燥，得到脑得生有效成分的干浸膏。3.根据权利要求2所述的复方脑得生有效成分的纯化方法，其特征在于步骤(2)中，加入第一部分10倍质量的浓度为70wt^的乙醇水浴回流提取2次，每隔60min—次；加入红花14倍质量的水于6(TC水浴温浸2次，每隔30min—次。4.根据权利要求3所述的复方脑得生有效成分的纯化方法，其特征在于步骤(4)中，所述第一部分用AB-8、HP20、D101或D4020大孔吸附树脂进行吸附纯化，红花部分用HPD-100、HP20、D101或AB-8大孔吸附树脂进行吸附纯化。5.根据权利要求4所述的复方脑得生有效成分的纯化方法，其特征在于步骤(4)中，第一部分提取物的吸附洗脱条件是调上样药液pH至25，以lml/min流速吸附，洗脱流速为23ml/min，水洗体积为4倍树脂柱体积，洗脱用的乙醇浓度为70wt%。6.根据权利要求5所述的复方脑得生有效成分的纯化方法，其特征在于步骤(4)中，红花提取物的吸附洗脱条件是调上样药液pH至15，以lml/min流速吸附，洗脱流速为23ml/min，水洗体积为6倍树脂柱体积，洗脱用乙醇的浓度为30wt%。7.根据权利要求6所述的复方脑得生有效成分的纯化方法，其特征在于步骤(5)中，所述水浴的温度是45t:,全文摘要本发明公开了一种复方脑得生有效成分的纯化方法。该方法是先将复方脑得生原材料分为两部分进行筛选，第一部分是三七、葛根、山楂和川芎，第二部分是红花。两个部分经提取、浓缩、抽滤、浓缩、经树脂吸附洗脱后，进行提取纯化得到两个部分的纯化洗脱液，经合并、减压、浓缩、干燥，得到复方脑得生有效成分。本发明复方脑得生有效成分的纯化方法可以有效去除非药效部分杂质并保证收得率，使有效成分含量相对提高，还提高了药物的疗效，具有很高的使用价值。文档编号A61P9/10GK101791340SQ200910214230公开日2010年8月4日申请日期2009年12月25日优先权日2009年12月25日发明者李明丽,李淑贤,梁生旺,王俊永,王淑美,胡旭光申请人:广东药学院